Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.01) на тему:Исследование комплекса биологически активных веществ различных видов шиповника и создание лекарственных препаратов на основе безотходной технологии

сз

На правах рукописи

МУХАМЕДЖАНОВА ДИЛБАР МАХМУДОВНА

ИССЛЕДОВАНИЕ КОМПЛЕКСА БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ

ВЕЩЕСТВ РАЗЛИЧНЫХ ВИДОВ ШИПОВНИКА И СОЗДАНИЕ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ПРЕПАРАТОВ НА ОСНОВЕ БЕЗОТХОДНОЙ ТЕХНОЛОГИИ

Специальности 15.00.01 - технология лекарств и организация фармацевтического дела

15.00.02 - фармацевтическая химия и фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора фармацевтических наук

Москва - 1996

Работа выполнена в научно-исследовательском институте фармации Министерства здравоохранения и медицинской промышленности Российской Федерации

НАУЧНЫЕ КОНСУЛЬТАНТЫ: Доктор фармацевтических наук, профессор,

академик МАИ М.Т.Алюшин Доктор фармацевтических наук, профессор, член-корр. МАИ Д.М.Попов

ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ:

Доктор фармацевтических наук, профессор

Д.А. Муравьева Доктор фармацевтических наук, профессор,

член-корр.РАО В.А. Попков Доктор фармацевтических наук, профессор А.И.Артемье'в '

ВЕДУЩАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ:

Ярославская государственная медицинская академия

Защита состоится " ^ " Я Н В О Р Я 1996 г в часов на заседании Диссертационного Совета Д 074.28.01 при научно-исследовательском институте фармации по адресу: 117418, Москва, ул. Красикова,34

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Научно - исследовательского института фармации

Автореферат разослан "_______"_ 1995 г.

Ученый секретарь Диссертационного совета Д.074.28.01. канд. фармац. наук, ст. научи.

сотрудник Л. М. Боброва

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. В арсенале лекарственных средств, применяемых в медицинской практике, важное место принадлежит препаратам растительного происхождения, т.к. они обладают широким спектром биологического действия, что позволяет использовать их для профилактики и лечения многих заболеваний. При этом необходимо обеспечить рациональное использование природных ресурсов, создать и внедрить безотходные, экологически чистые технологии производства лекарственных препаратов из растительного сырья.

Однако в настоящее время аптечная сеть, химико-фармацевтическая промышленность не удовлетворяет свои потребности в сырье многих, в том числе и дикорастущих лекарственных растений. Одной из причин этого является отсутствие сведений о размещении продуктивных зарослей лекарственных растений и их запасах.

В связи с этим важное значение имеет изучение географического распространения, биологической и хозяйственной продуктивности отдельных видов лекарственных растений и охрана их зарослей. Отсутствие таких данных сильно мешает организации заготовки лекарственного растительного сырья.

Одним из ценнейших промышленно-полезных растений Горно-Бадахшанской Автономной Области (ГБАО) являются плоды видов Rosa L., семейства Rosaceae. Плоды шиповника издавна применяются для получения витаминных препаратов во многих странах мира.

В то же время ГБАО располагает значительными возможностями для получения препаратов шиповника.

До настоящего времени на многие виды лекарственного растительного сырья не разработаны современные методы стандартизации, недостаточно полно изучен их химический состав, не установлено какими веществами обуславливается терапевтический эффект.

В связи с этим возникает вопрос о разработке современных методов определения основных действующих веществ лекарственных растений.

Значительным недостатком фитопроизводства издавна является высокий процент отходов и, как следствие, высокая себестоимость большинства фитопрепаратов. Примеры комплексного использования лекарственного растительного сырья, к сожалению, не многочисленны.

Совершенствование технологических процессов существующих и разрабатываемых фитопроизводств с целью уменьшения затрат и увеличения выпуска лекарственных препаратов на основе лекарственного растительного сырья является важным направлением в достижении удовлетворения спроса населения в препаратах растительного происхождения.

В этой связи значительный интерес представляет исследование и разработка технологии экстракции биологически активных веществ из лекарственного растительного сырья сжиженными газами с рециркуляцией последних в замкнутой системе.

На основании вышеизложенного изучение растений как источников лекарственных средств, создание современных технологий фитопроиз-водства с использованием современных методов стандартизации, охватывающих как лекарственное растительное сырье, так и получаемые на его основе лекарственные препараты, является весьма актуальной задачей. Разработка научно-обоснованных методов стандартизации плодов шиповника и получение на их основе экстракта шиповника сухого ( гидрофильная фракция) и СОг -экстракта плодов шиповника (липофильная фракция ) позволит расширить имеющийся арсенал эффективных лечебно-профилактических средств.

Цель и задачи исследования. Целью работы являлось теоретическое обоснование возможности расширения сырьевой базы для получения кислоты аскорбиновой, флавоноидов, липидов, элементов и аминокислот на основе фармакогностического изучения некоторых видов семейства Rosaceae, разработка безотходной технологии стандартизации лекарственных форм лечебно-профилактического действия.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

- определить ресурсно-сырьевой потенциал плодов видов шиповника наиболее перспективных для практического использования, провести картирование зарослей, предложить систему рационального использования видов Rosa L.

- определить биологические, эксплуатационные и возможные объемы заготовок плодов шиповника, пригодных для промышленной эксплуатации;

- изучить влияние некоторых эколого-метереологических факторов на содержание биологически активных веществ в плодах шиповника, с целью оценки качества сырья;

- разработать методики стандартизации плодов шиповника по гидрофильной и липофильной фракциям;

- исследовать кинетические закономерности процесса экстрагирования биологически активных веществ;

- провести комплексные исследования, развивающие научные основы производства витаминных и других биологически активных веществ на основе СО2 -технологий;

- разработать показатели качества экстракта шиповника сухого, СО2 -экстракта и их лекарственных форм, необходимые для определения сроков годности;

- подготовить регламенты производства экстракта шиповника сухого, СО2 -экстракта и их лекарственных форм;

- обобщить полученные данные и разработать проект ВФС на плоды шиповника (ведомость изменений), экстракт шиповника сухой, СОг -экстракт шиповника, гранулы, глюкозные помадки, таблетки и суппозитории с экстрактом шиповника сухого и капсулы с СОг -экстрактом шиповника сухого.

Научная новизна. На основании комплексного ресурсоведческого обследования видов плодов Rosa L. в Горно-Бадахшанской Автономной Области предложен методологический подход, заключающийся в "сквозной" стандартизации, обеспечивающий унификацию методов оценки качества на этапе сырье-лекарственный препарат.

Учитывая комплексный характер использования плодов шиповника подобраны условия (время реакции,количество реактива, определения предела концентрации) проведения реакции кислоты аскорбиновой с желтым фосфорномолибденовым гетерокомплексом, флавоноидов с алюминия хлоридом в уксусно-уротропиновом буферном растворе (количество реагентов, взятых для анализа, температуры и время проведения реакции), которые положены в основу разработки унифицированных методик определения флавоноидов и кислоты аскорбиновой на всех стадиях производства сырье - готовый продукт - шрот. В зависимости от высокой светочувствительности каротиноидов и токоферолов с исполь-

зованием метода ВЭЖХ разработана методика количественного определения БАВ с УФ-детектором переменной длиной волны.

В процессе экспедиционного исследования проведен ботанико-географический анализ, подтвердивший предположение о дифференциации видового состава плодов Rosa L на три подрода с преобладающим влиянием в Калайхумбском районе видов секции Canina, в Ванчском -секции Luteae, Рушанском, Шугнанском и Ишкашимском - секций Leucanthae и Cinnamomeae; разработаны методические подходы к специализации районов региона на заготовку растительного сырья, включающий определение биологических особенностей вида, эксплуатационных запасов и объема возможной ежегодной заготовки сырья, природно-экологических особенностей территории, сезонной динамики биологически активных веществ, картирования промысловых зарослей.

С использованием физико-химических методов (фотоколориметрии, СФК, ВЭЖХ) установлена закономерность увеличения кислоты аскорбиновой лишь до верхних границ массового распространения данного вида шиповника, флавоноидов в различных частях плодов и элементов от высоты произрастания над уровнем моря.

С целью существенного повышения эффективности фармацевтического производства, разработаны методические подходы на основе применения диоксида углерода в различных фазовых состояниях (докритической и сверхкритической), позволяющие осуществлять высокоинтенсивную безотходную щадящую переработку лекарственного растительного сырья получать сбалансированную по составу готовое лекарственное средство. В процессе исследования определены кинетические закономерности процесса экстрагирования (скорость извлечения биологически активных веществ), и экстракционные свойства диоксида углерода (Р до 40 МПа, Т не более 45° С), позволяющие последовательно извлекать ( фракционировать) ценные биологически активные вещества из растительного сырья изменением давления и температуры.

С учетом физико-химических свойств отходов СО2 -экстракции (термолабильность, влажность) разработаны технологические приемы переработки шрота шиповника, заключающегося в исключении стадии сушки и измельченности, в ступенчатом воздействии полярным растворителем - водой, температуре экстракции не выше 50° С, измельченности сырья не менее 1 мм, продолжительности не более 45 мин и кратности

экстракции - три, что позволяет получить препарат с высокой фармакологической активностью и стабильным составом.

Комплексом методов (ВЭЖХ, спектрофотометрии, ТСХ, энергодисперсионной и атомно-абсорбционной спектроскопии с использованием аминокислотного анализатора) определено содержание водо- и жирорастворимых витаминов, флавоноидов, аминокислот и элементов ¡жирных кислот в исходном сырье, липофильной и гидрофильной фракциях и готовых лекарственных форм плодов шиповника.

Методом сравнительного анализа данных полученных определением фотоколориметрии и ВЭЖХ, установлено, что повышение выхода комплекса биологически активных веществ из сырья плодов шиповника способствует увеличению иммуномодулирующей активности готового продукта, которая осуществляется за счет подбора температуры экстракции, способа сушки, времени экстракции, соотношения сырье-экстрагент.

На основе разработанных методических подходов с учетом физико-химических свойств экстракта шиповника сухого использовали технологический прием, отличающийся от традиционного - способом дробного введения субстанции в лекарственные формы гранулы, помадки, таблетки; изучением влияния различных комбинаций вспомогательных веществ на технологические свойства капсулируемой массы, с учетом динамической вязкости СОг-экстракта.

На основании проведенных исследований разработаны ВФС, лабораторные, технологические, опытно-промышленные регламенты и методические рекомендации плодов шиповника, субстанций и на их основе лекарственные формы.

Разработаны и защищены 5 патентами способы получения экстракта шиповника сухого, СОг-экстракта, способа комплексной переработки витаминосодержащего лекарственного растительного сырья и на их основе "Витаминного средства" и "Способа получения лечебно-профилактического средства", перспективные в плане создания лечебно-профилактических средств.

Практическая значимость работы. На основании проведенных исследований разработаны и внедрены:

- номенклатура дикорастущих видов шиповника, рекомендуемых для промышленной заготовки, - сведения о биологических, эксплуатационных запасах и возможных ежегодных объемах заготовок плодов шипов-

пика, карты- схемы размещения ресурсов этих видов по районам ГБАО (акт от 18.09.1989 г. Союзлекраспром);

- предложения по организации приписных угодий с шиповником гунт-ским на территории Шугнанского и Ишкашимского районов (акт от 10.10. 1992 г. Памирского биологического института);

- определение ресурсов шиповника создало реальные условия для развития витаминной промышленности Горно-Бадахшанской автономной области (Статья "Шиновники" Атласа лекарственных растений СССР,'" 1989 г.):

- методика количественного определения кислоты аскорбиновой в плодах шиповника (проект ведомости изменения N1 к ГФ XI изд., вып.2. ст.38 на " Плоды шиповника". Принято фармакопейным комитетом, письмо N 29-251/122 от 04.07.95 г);

- технология получения экстракта шиповника сухого разрешен для медицинского применения Фармакологическим комитетом МЗ РФ (ВФС 42-2594-93 Патент N1769429 Опытно-промышленный регламент (ОПР), утвержден НПО ВИЛ АР от 11.06 1992 г. Принят АООТ "Московская фармацевтическая фабрика", договор от 29.09. 1993 г);

- состав и технология гранул экстракта шиповника сухого и параметры контроля его качества (ВФС 42-2194-93; Опытно-промышленный регламент "Разработка технологии гранул экстракта шиповника сухого" утвержден НПО ВИЛАР от 23.06 1992 г, Акт апробации от 25.02 1989 г, принят для промышленного освоения АООТ "Московская фармацевтическая фабрика", договор от 29.09 1993 г);

- состав и технология таблеток "Розаскор" (Разрешен к медицинскому применению решением Фармакологического комитета МЗ республики Таджикистан, ВФС 010/94);

- технология получения глюкозной помадки с экстрактом шиповника сухого (Лабораторный регламент на производство глюкозной помадки с экстрактом шиповника сухого утвержден от 10.03 1994.Г., положительное решение на выдачу патента 94025418 );

- технология СО: - экстракта (субстанции) из плодов шиповника сухого, а также параметры контроля их качества,( патент РФ 93052263. ВФС 008/94 утвержден МЗ республики Таджикистан; технологический регламент "Технология получения СОг-экстракта шиповника сухого" утверж-

ден ЦНИИ "Буревестник" г.Нижний - Новгород, акт апробации от 01.02 1995. г.);

- состав и технология капсул СО^- экстракта шиповника сухого, а также параметры контроля их качества (ВФС N 009/94 утверждены МЗ республики Таджикистан, технологический регламент "Технология получения капсул с COi -экстрактом" апробирован на Нижегородском ХФЗ, акт апробации от 17.07 1995 г).

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на республиканских научных конференциях, международных симпозиумах (г.Черновцы, 1989 г.; Москва 1989 г; 1990; 1991; 1992; 1993; 1994; 1995; Киев,1992; Пятигорск; 1993; Душанбе,1992; Дели, 1994; Анталия,1995.

• Публикации. По материалам исследования опубликовано 39 работ, 5 патентов, в которых нашло отражение ее основное содержание.

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в соответствии с тематикой и планом научно-исследовательского института фармации (N государственной регистрации 0192.017260) и межведомственного совета по фармации N 47 АМН РФ.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 469 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, 6 глав собственных исследований, выводов, библиографического указателя и приложений. Работа иллюстрирована 78 таблицами, 29 рисунками и 16 схемами.

Библиографический указатель включает 509 источников, из них 118 иностранных.

НА ЗАЩИТУ ВЫНОСЯТСЯ:

- результаты по ресурсоведческой оценке дикорастущих видов плодов шиповника в Горно-Бадахшанской автономной области;

- рекомендации по заготовке плодов шиповника в зависимости от степени их зрелости;

- рекомендации по организации приписных угодий с шиповником гунтским и рациональному режиму их эксплуатации в Горно-Бадахшанской автономной области;

- научно-методические основы создания и стандартизации фитоэкс-тракционных препаратов на примере иммуномодулирующего, противовоспалительного, репаративных средств;

- результаты фитохимических исследований исходного сырья, субстанции и готовых лекарственных форм;

- результаты теоретических, экспериментальных исследований по обоснованию безотходной технологии и способов получения субстанции и готовых лекарственных форм, применяемых как лечебно-профилактическое средство;

- состав и технология получения гранул, таблеток, глюкозных помадок, суппозиториев с экстрактом шиповника сухого; капсул с СОг -экстрактом шиповника.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Во введении показана актуальность, научная новизна и практическая значимость работы, сформулированы цель и задачи исследований.

В обзоре литературы кратко освещены современное состояние теории и практики технологии экстрактов из растительного сырья, приведены сведения о химическом составе и применении в народной медицине плодов видов Rosa L., дана сравнительная оценка методов экстракции и рассмотрены факторы, влияющие на них. Нами исследовались наиболее распространенные классы природных биологически активных соединений: витамины,полифенолы, аминокислоты, элементы и липиды. При выборе объекта для углубленного изучения исходили из следующего: достаточно высокого содержания в объекте биологически активных веществ; обеспеченности сырьевой базы; возможность комплексной переработки растительного сырья по безотходной технологии.

Объекты и методы исследования.

В настоящей работе использованы плоды шиповника виды Rosa L.: R.beggeriana, R.huntica, R.nanothamnus, R.fedtschencoana, R.korshinskiana, R.canina, R.achburensis, R.ovczinnikovii, R.webbiana, R.popovii, R.divina, R.piptocalix, R.corymbifera, произрастающие на Западном Памире и R.cinnamomea, R.canina - в Подмосковье, а также сырье, получаемое от промышленных партий с АООТ "Московская фармацевтическая фабрика".

В качестве вспомогательных веществ применялись: сахар молочный, сахар рафинад, метилцеллюлоза (ТУ 6-01-717-72,марки 16), крахмал,

кальция стеарат,сироп глгокозный, вода дистиллированная, диоксид углерода; основообразующие лекарственных форм - вазелиновое масло, нипагин,глицерин, сорбит, желатин, твердый жир, масло какао, суппа-рин-М , Witepsol Н15 и другие в соответствии с НТД, всего около 25 наименований. Кроме того брали вспомогательные упаковочные материалы- 10 наименований, стандартные образцы жирных кислот,бета-каротина, альфа-токоферола, реактивы и растворители.

Для обеспечения высокого качества выпускаемых препаратов первостепенное значение имеет определение действующих веществ как в сырье, так и в готовой продукции. В результате фармакологических исследований было установлено, что иммуномодулирующая активность шиповника и его фитопрепаратов обусловлена комплексом веществ, включающих кислоту аскорбиновую, флавоноиды и сумму каротиноидов и токоферолов. При этом целесообразно проводить стандартизацию для липофиль-ной фракции по сумме каротиноидов в пересчете на бета-каротин, а гидрофильной фракции - кислоте аскорбиновой - содержащимся в значительном количестве в сырье, обладающим высокой активностью.

Для количественного определения кислоты аскорбиновой, разработана методика фотоколориметриического определения, основанная на окислении кислоты аскорбиновой с желтым фосфорно-молибденовым гетеро-комплексом. позволяющий определять малые количества кислоты аскорбиновой с достаточной точностью и воспроизводимостью.

В дальнейшем этот метод был использован при разработке унифицированных методик количественного определения кислоты аскорбиновой в сырье, препаратах и шроте плодов шиповника.

При снятии спектра поглощения продуктов реакции кислоты аскорбиновой с желтым фосфорномолибденовым гетерокомплексом на регистрирующем спекторофотометре DU-7 "BEK.MAN" (США) было установлено, что максимум поглощения наблюдается при длине волны 720 нм (рис.1).

1.®0

ОирЬ^ Пае ГЗкпд 1е I

ГигсИоп

[»5)

Ьгп » fil.il

8.ЙЯ

/

/

\ /

/

\ •У

Спектры поглощения 1.000

4Ю

«6.0 55г. О 628 0

7Й.0

085 г .823

5(ШЕ

«ОТ 5сап

ИМ. в 788 -ТС-

х ж

7|ЬЛ О.Ш

зев

336.8 та* цее.а «в

продуктов реакции кислоты ас- продуктов реакции рутина с корбиновой с желтым фосфорно- алюминия хлоридом молибденовым гетерокомплексом Рис.1 Рис.2

Разработанная унифицированная методика была апробирована на 3 образцах сырья и препаратов шиповника. Полученные результаты представлены в табл.1.

Из табл. 1 видно, что относительная ошибка определения при доверительной вероятности 0,95 не превышает ±4,99%.

Аналогичные результаты были получены при анализе таблеток и суппозиториев с экстрактом шмповника. Относительная ошибка определения при доверительной вероятности 0,95 для таблеток не превышает ±3,73%, дня суппозиториев - ±3,33%

Для количественного определения флавоноидов в плодах и экстракте шиповника сухом использован спектрофотометрический метод после проведения реакции комплесообразования с хлоридом алюминия, который вызывает батохромный сдвиг длинноволновой полосы поглощения флавоноидов с 330/350 до 390/410 пм (рис.2).

В качестве стандартного вещества выбран рутин, дифференциальный спектр поглощения которого с хлоридом алюминия в предлагаемых

условиях совпадает с дифференциальным спектром поглощения флаво-ноидовшиповника.

Таблица 1

Результаты количественного определения кислоты аскорбиновой с ис-_ пользованием метода добавок кислоты аскорбиновой_

N образца Найдено кислоты аскорбиновой, Введено кислоты аскорбиновой, Найдено суммарное содержание Метрологическая характеристика

г/100 г кислоты аскорбиновой, г/100 найдено кислоты аскорбиновой, "х Эх Дх- А

Плоды шиповника

1 2,3148 0,6000 2,8998 0,5850 0,007 0,018 ±3,10%

2 4,3100 1,6000 5,8900 175800 0,021 0,095 ±3,47%

3 4,6349 3,0000 7,7449 3,1100 0,036 0,024 ±3,06%

Экстракт шиповника сухой

1 11,0754 3,0000 14,0100 2,9346 0,055 0,143 ±4,86%

2 10,6349 3,5000 14,0582 3,4332 0,051 0,131 ±3,80%

3 10,0800 3,0000 13,0019 2,9219 0,025 0,065 ±2,20%

Гранулы экстракта шиповника сухого

1 1,9774 0,5000 2,4799 0,5026 0,007 0,017 ±3,32%

2 2,4718 0,5500 3,0288 0,5537 0,010 0,025 ±4,43%

3 2,4425 0,5500 2,9881 0,5447 0,011 0,027 ±4,99%

Глюкозные помадки с экстрактом шиповника сухого

1 1,3148 0,6000 1,9215 0,5800 0,007 0,018 ±3,10%

2 1,0754 0,5000 1,5811 0,5088 0,037 0,094 ±3,27%

3 1,6349 0,5000 2,1270 0,4921 0,050 0,129 ±3,78%

Полученные результаты были использованы при разработке методики определения флавоноидов в плодах и экстракте шиповника.

Для определения чувствительности методики был использован метод добавок рутина стандартного образца. Результаты представлены в табл.2

Таблица 2

Результаты количественного определения флавоноидов с исльзованием ___метода добавок рутина_

N образца Взято ру- Найдено Найдено

тина, флавоно- флавоно- Метрологическая характеистика

идов идов и рутина

г г/100 г сырья Г/100 Г сырья X Sx Ах А

Плоды шиповника

1 0,2500 0,3864 0,6224 0,2303 0,0050 0,0131 ±5,61

2 0,2500 0,1279 0,3801 0,2516 0,0050 0,0141 ±5,14

3 0,2000 0,2046 0,3723 0,1827 0,0012 0,0031 ±1,69

4 0,2050 0,5341 0,7417 0,2044 0,0024 0,0061 ±3,04

5 0,3000 0,1136 0:4047 0,2908 0.0006 0,0016 ±0,55

Экстракт шиповника сухой

1 0,2500 0,5230 0,7722 0,2491 0,0025 0,0064 ±2,58

2 0,2000 0,4870 0,7062 0,2155 0,0040 0,0103 ±4,77

3 0,2500 0,5250 0,7723 0,2473 0,0033 0,0085 ±3,44

Как видно из таблицы 2 получены удовлетворительные результаты. Относительная ошибка определения при доверительной вероятности 0,95 не превышала в сырье ±5,61%, в экстракте шиповника - ±4,77%.

Сумму каротиноидов и токоферолов в сырье, СОг -экстракте и капсулах с СО2 -экстрактом определяли методом ВЭЖХ на жидкостном хроматографе SP 8000 фирмы "Spectra-phisics" (США) при следующих условиях: колонка 250x4 мм, заполненная сорбентом ("Lichrosorb Si 60") фирмы "Merk" (ФРГ) с размером частиц 10 мкм и предколонка 30 х 2мм, заполненная сорбентом "Copell ODS" фирмы "Watman" (США) с размером частиц 37-53 мкм. В качестве подвижной фазы использовали 6% (по объему) раствор бутилацетата в октане. Скорость потока подвижной фазы 1,5 мл/мин. Температура колонки - комнатная.

Время удерживания бета-каротина составляло 3.9-4.1 минут, альфа-токоферола - соответственно - 8.2 мин (рис.3).

ВЭЖХ хроматограммы 1

12

Время, мин

1 .альфа-токоферола 2.бета-каротина

Рис.3

Детектирование витамина Е осуществляли при длине волны 292±2 нм, а каротиноидов - 452±2 нм. Чувствительность детектора составляет 0.1 единицу оптической плотности на всю шкалу. Использовали УФ-детектор с переменной длиной волны БР- 770 фирмы Брейга-рЬуз^з (США). Режим работы был построен таким образом, что сначала при автоматическом переключении длины волны проводили анализ образцов на содержание токоферолов при 292 нм, а затем после ручного переключения детектора на 452 нм проводили анализ этих же образцов на содержание каротиноидов.

Относительная ошибка определения при доверительной вероятности 0,95 не превышает ±6%.

Результаты представлены в таблице 3.

Количественное определение элементов в плодах и почве проводили но методикам, разработанным в почвенном институте им. В.В. Докучаева ВАСХНИЛ на энергодисперсионном рентген-флуоресцентном анализаторе модели ТЭФА-6111 фирмы ОРТЕКС (США). Количественное опре-

о

4

3

деление элементов в препаратах проводили атомно-абсорбционным методом пламенный вариант (спектрофотометр ААБ-З, фирма Карл Цейс Йена,ГДР).

Таблица 3

Результаты количественного определения суммы каротиноидов

Найдено суммы каротиноидов

в сырье мг % в СОг-экстракте (токароле) N серии в капсулах СОг экстракта

N серии мг% взято в расчете на 1 капсулу, мг найдено в расчете на 1 капсулу, мг

81,03 1 640,01 1 1,71 1,69

2 570,00 2 1,68 1,66

3 610,14 3 1,73 1,69

4 620,27 4 1,65 1,60

5 615,30 5 1,60 1,55

Метрологическая характеристика

X Sx Дх А% X Sx Дх А %

611,14 11,49336 31,95155 ±5,2 1,638 0,02755 0,07659 ±4,67

Методика определения свободных аминокислот выполнена на автоматическом анализаторе фирмы LC 7000 (Biotronic, ФРГ) с автоматическим обсчетом результатов. Аминокислотный состав представлен на рис.4 Условия: колонка 0,5 х 35 см; Durum D - С6А; температура элюации 50° С, элюент 0,2-1,2 н Na-цитратный буфер pH 3,2-6,45;

Анализ СОг -экстракта осуществляли газохроматографически на газовом хроматографе "Хром-5" с пламенно-ионизационным детектором для определения, присутствующих в препарате, жирных кислот в виде метиловых эфиров (рис.5).

Физико-химические показатели экстракта шиповника сухого и лекарственные формы на его основе (остаточная влажность, насыпная масса, сыпучесть, распадаемость, прочность, истираемость); СОг-экстракта и капсул (ПЧ, КЧ, показатель преломления, плотность и другие характеристики определяли соответственно требованиям ГФ XI издания. Скорость высвобождения действующих веществ из гранул, таблеток и др. изучали на приборе для определения скорости растворения действующих веществ (тип "Вращающаяся корзинка" ТУ 67-7-298-978).

Хроматограмма аминокислотного состава гидрофильной фракции плодов шиповника гунтского

1 .-аргини 2.-аммиак

3.-лизин

4.-ГИСТИДИН

20 40 60

5.-фенилаланин 9.-метнонин

6.-тирозин Ю.-валин

во

I З.-цистеин 14,-пролин

100 /время, мин/

17. -треонин

18,-

аспаргиновая к-та

7.-лейцин

11 .-аланин

15.-глютамино-вая к-та

8.-изолейцин 12,-глициновая 1б.-серин к-та

Рис.4

Хроматограмма метиловых эфиров кислот

16:0

'1°

3

14:0- миристиновая; 16:С- пальмитиновая; 16:1- пальмитоолеи-новая; 18:0- стеариновая; 18:1- олеиновая; 18:2- лшолевая

Рис. 5

1Е:1

ОПРЕДЕЛЕНИЕ РЕСУРСОВ ПЛОДОВ ВИДОВ ROSA L.

ПРОИЗРАСТАЮЩИХ В ГОРНО-БАДАХШАНСКОЙ АВТОНОМНОЙ ОБЛАСТИ

Богатство флоры Памира, наличие на его территории большого количества официнальных видов лекарственных растений и значительные ин-тродукционные возможности в различных его регионах позволяют широко использовать растительные ресурсы Горно-Бадахшанской автономной области в лечебных целях.

В 1985 г. Памирский биологический институт АН Таджикистана по заданию Всесоюзного объединения "Союзлекраспром" приступил к определению ресурсов шиповника на территории Горно-Бадахшанской Автономной Области (ГБАО).

Многочисленность видов шиповника, образование межвидовых гибридных форм схожесть анатомических и морфологических признаков, затрудняет ресурсоведческий анализ данного рода.

Установлено, что между химическим составом видов шиповника и их систематическим положением имеется определенная зависимость: прослеживается корреляция морфолого-биохимической связи на уровне подродов и секций. Существенное межвидовое различие по составу витаминов является главенствующим фактором в систематике данного рода с учетом морфологических и анатомических признаков.

На основании современной методологии ресурсоведения и научного прогнозирования проведена качественная и количественная оценка обследованной территории, которые предусматривают определение биологических, эксплуатационных запасов и объема возможной ежегодной заготовки.

При проведении специализации территории по заготовке растительного сырья были выявлены места промысловых запасов видов сырья, составлены карты-схемы их распрост-—ранения, изучены природно-экологические особенности территории.

Были изучены запасы плодов видов Rosa L., произрастающие в пяти административных районах ГБАО (Шугнанском, Ишкашимском, Ру-шанском, Ванчском и Калай-Хумбском).

При выявлении зарослей и определении запасов плодов шиповника мы пользовались приемами определения на конкретных зарослях (Методика .., 1986).

Результаты полевых измерений, обработанные статистически (Крылова И.Л., Шретер А.И. ,1971) и по ГФ XI, представлены в таблице 4.

Определено, что на обследованной территории общая площадь зарослей составляет 256,9 га, эксплуатационный запас воздушно-сухого сырья - 189,0 т, а объем возможных ежегодных заготовок воздушно-сухого сырья - 95,0 т. Наибольшие запасы сырья высоковитаминных видов шиповника сконцентрированы в Шугнанском, Ишкашимском и Ру-шанском районах ГБАО. Общая площадь зарослей шиповников в этих районах составляет 172 га, эксплуатационный запас сырья 141 т и объем возможной ежегодной заготовки - 70,5 т. Из промысловых видов шиповника ГБАО наибольшее значение имеет шиповник гунтский, общая площадь зарослей которого составляет 193,3 га, а эксплуатационный запас сырья 158 т, объем возможных заготовок 79,0 т.

Заросли этого вида шиповника являются самыми продуктивными в пределах обследованных территорий, средняя урожайность сырья на зарослях шиповника гунтского составляет 85,9± 2,3 г/м, максимальная -171,2 ± 2,6 г/м, что значительно превышает продуктивность других промысловых видов шиповников Западного Памира (табл.5).

Результаты ресурсоведческих исследований использованы в "Атласе ареала и ресурсов лекарственных растений СССР" в разделе " Шиповни-ки ".

С помощью разработанных физико-химических методик установлено, что содержание кислоты аскорбиновой в плодах шиповника гунтского составляет от 5 до 12,8%, ш. Беггера - от 5 до 7% и гибридизированных форм до 18,2% (табл.6). Высокое содержание флавоноидов (0,534% ) отмечено в шиповнике гунтском, произрастающем в долине р. Шахдара на высоте 3400 м над ур. м., самое низкое (0,128) - в ш. акбурийском, произрастающем в Калай-Хумбском районе на высоте 1800 м над ур. м.

В результате проведенных исследований определена зависимость содержание флавоноидов в сырье шиповника, от высоты произрастания над уровнем моря. Показано, что различные виды шиповника Западного Памира по сравнению с шиповником, произрастающим в Подмосковье, имеют более высокое содержание флавоноидов. Установлено, что содержание флавоноидов в различных частях плода шиповника различно.

Наибольшее содержание флавоноидов наблюдается в волосках, наименьшее в семенах.

Таблица 4.

Эксплуатационные запасы плодов видов Rosa L Горно-Бадахшанской автономной области (п = 5)__

Администра тивные районы Вид Общая площадь зарослей, га Средняя урожайность воздушно сухого сырья, г/м2 Эксплуатационный запас воздушно сухого сырья, т Объем возм. ежегодн. загот. возд. сухого сырья, т

Шугнанский R. huntica 132,0 85,9+2,3 108,0 54,0

Ишкашим-ский тот же 40.0 85,9+2,3 33,0 16,5

Рушанский R.beggeriana 25,0 52,6+1,4 12,0 6,0

R.huntica 15,0 85,9+2,3 12,0 6,0

Ванчский R.beggeriana 8,1 52,9+1,6 4,0 2,0

R.huntica 6,3 85,9+2,3 5,0 2,5

Калай -Хумбский R.achburensis 30,5 52,6+1,4 15,0 7,5

Всего 256,9 189,0 94,5

Таблица 5

Урожайность плодов видов Rosa L. на Западном Памире

Вид Урожайность воздушно-сухих плодов, r/м

мин. макс. средняя

R. achburensis Chrshan. 18,0 + 2,3 90,5+8,3 52,6 + 1,4

R.beggeriana Shrenc. 31,9 + 2,9 89,2 + 9,0 52,9 + 1,6

R.huntica Chrshan. 28,6 + 4,3 171,2 + 2,6 85,9 + 2,3

Для определения оптимальных сроков заготовки сырья исследовались динамика накопления БАВ в плодах шиповника. Образцы .собранные в разные фазы зрелости плодов, анализировали на содержание кислоты аскорбиновой и каротшгоидов.

Установлено, что на разных стадиях развития плодов шиповника накапливается различное количество витамина, причем интенсивность накопления его и сам характер этого процесса зависят от ряда условий. Количество витамина С находится в прямой зависимости от степени зрелости плодов, причем у разных видов накопление кислоты аскорбиновой идет различно. Например, у видов, относящихся к секциям Сашпае и РтртеШРэНае, максимальное количество кислоты аскорбиновой накапливается в плодах на стадии технической спелости. По мере окончательного созревания идет плавное снижение ее содержания - не более десятых долей процента.

В общем же у секций Саптае и РтртеШГоНае различия в содержании витамина С у зеленых и зрелых плодов невелико, так как у низковитаминных видов в процессе созревания плодов кислоты аскорбиновой изменяется сравнительно мало.

По иному проходит процесс накопления у активных видов, обладающих высоким содержанием кислоты аскорбиновой. У секции Р1рЮса1ух максимальное количество кислоты аскорбиновой накапливается в полностью зреющих плодах. Это редкое явление среди шиповни-ков и больше не повторяется среди других секций этого рода. Наоборот, среди видов секции Р1а1уасапШи5 наибольшее количество кислоты аскорбиновой содержится у плодов на стадии технической спелости причем накопление его идет скачкообразно, без плавной кривой, характерной для мало активных видов секций Сашпае и РшртеШ{ЬНае .

Установлено, что плоды шиповника гунтского богаче всех остальных кислотой аскорбиновой, но беднее каротиноидами. Наибольшее количество витамина С было в образцах, собранных на высоте 2300-3100 м, где оно достигает 17,80 %, в то время как каротиноидов здесь меньше - 47,75. Наибольшее количество каротиноидов (60,35 мг%) отмечается у экземпляров с наименьшим количеством кислоты аскорбиновой (9,03%) на высоте 2100 м. Здесь же были собраны образцы с большим количеством витамина С-11,94%.

При сопоставлении содержания марганца в плодах шиповника гунтского и ш. Беггера установлено, что даже при равном его содержании в почве 531 мкг/г -542 мкг/г) большую избирательность в его накоплении проявляет шиповник гунтский. В плодах шиповника гунтского содержится 35 мкг/г марганца, а в шиповнике Беггера всего 14 мкг/г. В то же

время плоды шиповника гунтского и ш. Беггера богаты такими важными элементами, как медь, марганец, цинк.

Изучение естественных запасов дикорастущих видов плодов шиповника в течение (1987-92 гг.) на конкретных зарослях Баджу-Дара, свидетельствует о сокращении естественных запасов за 6 лет на 17 %. Ежегодное уменьшение сырья составляет 2,8-3,0%.

Проведенная работа и наблюдения являются началом, дающим толчок к крайней необходимости изучения восстанавливаемости шиповников ГБАО.

РАЗРАБОТКА БЕЗОТХОДНОЙ ТЕХНОЛОГИИ ПРОИЗВОДСТВА ПРЕПАРАТОВ ШИПОВНИКА И ИХ СТАНДАРТИЗАЦИЯ

Приведены данные массообмена в системах твердое тело-жидкость, твердое тело-газ с критериальными уравнениями. Описаны нетрадиционные методы обработки лекарственного растительного сырья (экстракция диоксидом углерода, комбинированное измельчение, применение периодического сброса давления). Все перечисленные методы нашли применение при разработке безотходной технологии плодов шиповника, с учетом структуры растительного сырья, производительности аппаратуры, выхода биологически активных веществ.

Основная задача исследования экстракции растительного сырья сжиженными газами - определение времени истощения сырья до нужного предела и выявление зависимости этого времени от условий осуществления процесса экстрагирования.

Эффективность процесса экстрагирования зависит от строения и структуры растительной ткани, форм связи веществ, а также от температурных, гидродинамических условий.

При выборе способа измельчения сырья необходимо учитывать не только размер частиц , но и степень разрушенности растительной ткани, установление которой имеет важное практическое значение, а новизна используемого растворителя обуславливает теоретическую значимость. С целыо определения минимального времени необходимого для смыва извлекаемых веществ, находящихся на поверхности измельченного сырья, плоды шиповника экстрагировали с различной продолжительностью процесса: 1; 2; 3; 4; 5; 7 и 10 мин. Результаты эксперимента приведены на рис.6 и 7.

Предварительно, было определено количество извлекаемых веществ, содержащихся в сырье, которое составило: 5,60%.

Из анализа кинетических зависимостей выхода извлекаемых веществ видно, что извлекаемые вещества, находящиеся на поверхности измельченного сырья, практически переходят в растворитель в течение 1 минуты экстрагирования. В течение последующего времени процесс экстракции осуществляется из неразрушенной растительной ткани за счет молекулярной диффузии, что подтверждается графической зависимостью (рис.7), имеющей вид прямой линии. Установлено, что степень разрушенности растительной ткани плодов шиповника, измельченного комбинированным способом оказалась наиболее высокой и составила 92,95%. При последующем изучении кинетических закономерностей процесса экстрагирования сжиженным газом показана зависимость изменения содержания извлекаемых веществ в сырье от продолжительности экстрагирования (рис.8) и выделены два периода процесса экстрагирования.

В период период быстрой экстракции, продолжительность которого составляет 5-10 мин, извлекается от 85 до 96% веществ содержащихся в сырье. Этот период характеризуется извлечением веществ, находящихся на поверхности измельченного сырья. Второй период, продолжительность которого составляет 35-40 мин. характеризуется извлечением веществ содержащихся в микрокапиллярах и внутри неразрушенных клеток. За время второго периода извлекается 5-10 % содержащихся в сырье.

Для описания процесса экстрагирования определены коэффициенты уравнения: коэффициент вымывания "В - 0,9279, угловой коэффициент "К" - 0,0537 и коэффициент диффузии - 1,4750).

Данные, отражающие зависимость выхода извлекаемых веществ от влажности сырья, представлены на рис.9.На основании экспериментальных данных установлено, что увеличение содержания влаги в сырье отрицательно влияет на ход технологического процесса. При увеличением содержания влаги более 10% приводит к образованию плотных по структуре лепестков и экстрагирование веществ из такого сырья затруднительно.

С целью интенсификации процесса экстрагирования диоксидом углерода, предложен способ, характеризующийся тем, что сброс давления

Зависимость изменения содержания Зависимость выхода извлекаемых извлекаемых веществ от времени веществ от времени

экстракции

90

80 70

ъи 50 40

ЕО 20 10 5

10 15 20 25 30 35 40 45 50

продолжительность экстрагирования, мин

Рис.6

100 90

ВО 70

60

2 3 4 5 6 7 В 9

продолжительность экстрагирования, мин

Рис.7

Зависимость изменения выхода извлекаемых веществ от времени

Зависимость изменения выхода

извлекаемых веществ от влажное! 100

О 5 10 1 5 20 25 30 35 40 45

продолжительность экстрагирования, мин Рис.8

95 90

85

75 70

60 55

\

V

\

ч

0 2 4 С 8 10 12 14

Влажность сырья. %

Рис.9

I

осуществляется до определенного предела остаточного давления в пределах от 1 до 10 МПа. На основании экспериментальных данных установлено, что применение периодического сброса давления увеличивает выход конечного продукта в 1,5 раза и снижает продолжительность экстракции примерно в два раза. Установленные технологические параметры экстракции данного сырья позволили в последующем разработать способ комплексной переработки плодов шиповника с получением двух фракций: липофильной и гидрофильной. Этот принцип был использован при получении каротин-токоферолового и аскофлавоноидного комплекса, которые обладают способностью блокировать образование свободных радикалов и синглетного кислорода в процессе перекисного окисления липидов и белковых структур, т.е. выступать в роли уникальных природных антиоксидантов.

По классической схеме водорастворимые БАВ выделяют из плодов шиповника путем экстракции исходного сырья водой, с последующим экстрагированием масла из полученных отходов хлористым метиленом. Недостатком существующего способа являются: многостадийность и длительность технологического процесса, низкий выход БАВ и использование в качестве экстрагента -хлористого метилена может привести к накоплению последнего в целевом продукте, что особенно нежелательно для лекарственных препаратов. Использование диоксида углерода при сверхкритических параметрах допускает проведение процесса экстракции при низких температурах, что особенно важно при разделении термолабильных соединений.

Варьирование основных параметров экстракции- температуры, давления, продолжительности, характера и степени измельчения экстрагируемого лекарственного растительного сырья - позволяет вести экстракционный процесс так, чтобы получить целевой продукт необходимого состава. На основе изучения кинетических закономерностей процесса экстрагирования, локализации и фракционного состава экстракта разработана оригинальная технологическая схема - с целью получения липофильной фракции - диоксидом углерода из плодов шиповника и гидрофильной фракции - водой из углекислотного шрота шиповника, которая позволяет извлекать биологически активные вещества в возможно большем объеме при сохранении их природной комбинации, защищенная патентом.

Нами исследовано влияние ряда факторов на выход биологически активных веществ ( измельченность сырья не менее 0,1 мм, давление до 40 МПа, температуры не более 45° С). Оптимальные параметры процесса экстрагирования были положены в основу первой серии балансовых загрузок, на основании которого была разработана технологическая схема получения СОг-экстракта из плодов шиповника. Способ получения СОг-экстракта, запатентован. Основные стадии технологического процесса ИЗМЕЛЬЧЕНИЕ /измельченное сырье/.....>

ЭКСТРАКЦИЯ /получение готового продукта и регенерация

растворителя /......>

ФАСОВКА И УПАКОВКА

Полученная липофильная фракция представляет собой маслообразную жидкость оранжево-красного цвета, условно названную каротин-токоферольный комплекс (КТК).

Показано, что содержание КТК зависит от вида шиповника и колеблется от 4-6%. КТК практически нерастворим в воде, растворим в смесях гексан-96% спирт, хлороформе, петролейном эфире. Физико-химические показатели КТК представлены в таблице 6.

Таблица 6.

Физико-химические показатели СО2 - экстракта плодов шиповника

Мп/п Наименование показателя Величины Ед.измерения

1. Плотность 0,936- 0,940 г/см3

2. Показатель преломления 1,4753-1,4760

3. Кислотное число не более 9,8 мгКОН/г

4. Эфирное число 169,4-170,9

5. Число омыления 160,5-164,8 мгКОН/г

6. Динамическая вязкость 0,06 П.с

7. Содержание каро-тиноидов не менее 500 мг%

8. Содержание токоферолов не менее 90 мг%

Фракционный состав связанных липидов исследовали модифицированным методом ТСХ с количественной оценкой по методике (см.диссертацию). Как видно из данных представленных в таблице в составе связанных липидов обнаружены следующие группы липидов: фосфолипи-ды.стерины, свободные жирные кислоты, пигменты, ди -,моно-, и триг-лицериды. В результате проведенного анализа в КТК идентифицировано

и количественно определены жирные кислоты: олеиновая, линолевая, линоленовая, стеариновая и пальмитиновая. Данные отдельных фракций КТК представлены в таблице 7.

Таблица 7.

_Фракционный состав связанных липидов КТК_

Содержание фракций липидов Массовая доля в комплексе,%

Воска 2,0

Фосфолипиды 2,40

Стеролы 0,15

Моноглицериды 0.90

Диглицериды 4,40

Триглицериды 80,7

Свободные жирные кислоты: 4,0

из них насыщенные, 34

ненасыщенные 66

Связанные жирные кислоты: 20,0

из них насыщенные, 1

ненасыщенные 99

Элементный состав КТК представлен железом 31,8-34,9 мкг/г, никелем 3,1-4,18 мкг/г, хромом 4,98-5,52 мкг/г, селеном 0,05-0,09 мкг/г.1

Установлено, что технология получения КТК обеспечивает полноценный переход из исходного сырья каротиноидов, токоферолов, жирных кислот, элементов, противовоспалительную, репаративную, иммуномо-дулирующую, антимутагенную активность.

Лечебно-профилактическое средство -КТК запатентовано. Для определения качества препарата КТК использованы разработанные методики качественного и количественного определения и методики описанные в ГФ.Х1 издания.

Проведено исследование по установлению сроков годности пяти серий КТК, регламентируемых ВФС 008/94. Результаты исследований субстанции КТК при хранении показали их стабильность в течение 2 лет (время наблюдения).

1 элемент селен обнаружен в плодах шиповника превосходного, а другие виды Rosa L. содержат его в следовых количествах

Разработаны ВФС и технологический регламент на КТК.

НД утверждена Министерством здравоохранения Таджикистана.

В Нижегородском ЦНИИ "Буревестник" проведена апробация технологического регламента на производство субстанции КТК. В настоящее время технология производства КТК принята для промышленного освоения.

Разработка способа получения сухого экстракта шиповника

Предварительное использование флюидной экстракции позволяет удалить кутикулярный слой с поверхности плодового сырья, при этом снижается ограничение по массопереносу, скорость экстракции существенно увеличивается. Слабое поверхностное натяжение облегчает проницаемость через поры и их смачиваемость жидкими экстрагентами, что важно при проведении процесса экстракции биологически активных веществ из клеточной матрицы.

Преимущество предлагаемой технологической схемы в том, что можно гибко трансформировать выполнение тех или других функций и процессов, так из отхода (шрота) СОг-экстракции можно получать экстракты жидкие, сухие, используя в качестве экстрагента дистиллированную воду.

В связи с задачами исследования были проведены по разработке безотходной технологии получения сухого экстракта из шрота, исходя из комплексной переработки сырья, которая обеспечивала бы наиболее полный переход действующих веществ из сырья и стабильность готового продукта. Способ запатентован.

Технологическая схема получения сухого экстракта шиповника предусматривает стадии твердофазной экстракции, упаривания и сушки сгущенного экстракта, обладающая рядом преимуществ перед сиропом шиповника, настоем и холосасом.

Фитохимическими и фармакологическими исследованиями сухих экстрактов, полученных водой и этиловым спиртом различной концентрации установлено, что оптимальным экстрагентом является вода.

Изучали динамику экстракции сырья размером частиц 0,3, 0,5 и 1 мм. Экстрагирование проводили на кипящей водяной бане с обратным холодильником. Соотношение между сырьем и экстрагентом во всех опытах составило 1:20. Экстракцию сырья проводили в течение 1,5 часа. Каждое извлечение анализировали на содержание кислоты аскорбиновой,флавоноидов, аминокислот и элементов.

В результате исследований было установлено, что оптимальными условиями твердофазной экстракции являются следующие факторы: экс-трагент - вода, его соотношение к количеству сырья 1:(12-20), температурный режим не более 60° С, измельчение - до 1 мм, дробное экстрагирование - 2 часа.

Для изучения влияния способов и режима сушки на содержание биологически активных веществ, физико-химические и технологические свойства сухого экстракта шиповника были изучены процессы сушки в вакуум-сушильном шкафу (ВСШ), распылительной (РС) и сублимационной сушилках (СС), которые наиболее часто используются в химико-фармацевтической промышленности для сушки водных извлечений.

В результате этих исследований было установлено, что оптимальными по физико-химическим, технологическим свойствам и по содержанию кислоты аскорбиновой, флавоноидов и выходу готового продукта обладают экстракты в следующей последовательности: РС; ВПС; СС (табл.8).

Фармакологическими исследованиями была подтверждена высокая стимулирующая активность экстракта высушенного в РС (на 10б лимфоцитов) 29,3+6,1 и (на всю культуру) 174±23,5.

Как видно из таблицы 8 способ сушки значительно влияет на влагопо-глощающую способность сухого экстракта шиповника. При этом установлено, что экстракт , полученный в СС более гигроскопичен, чем субстанция , полученная методами ВПС И РС.

Оптимальные параметры процесса экстрагирования были положены в основу первой серии балансовых загрузок, на основании которой разработана технологическая схема получения сухого экстракта шиповника (рис. 10)

Экстракт плодов шиповника сухой представляет аморфный светло-коричневый порошок с остаточной влажностью 3,5 -4,8%, хорошо растворимый в горячей воде. Он содержит от 12 до 12,8 % кислоты аскорбиновой, 0,5 % флавоноидов и элементы: марганец 78-95, медь 4858, цинк 34-39 мкг/г = мг/кг. Насыпная масса экстракта при свободном падении составляет 0,44 -0,55 г/см, при уплотнении 0,.66-0,76 г/см, сыпучесть 1,51.8 г/с, угол естественного откоса 36-40° С. Потеря в массе при высушивании 100-105° С не превышает 5%.

Изучение стабильности сухого экстракта в естественных условиях ( по внешнему виду и по качественному и количественному содержанию кис-

лоты аскорбиновой не менее 5 %) показал, что при ограничении доступа влаги его можно хранить более 2 лет.

Таблица 8

Показатели качества экстракта шиповника сухого, полученного различ-_ными методами сушки ( п = 5)_

Показатели Способы сушки

ВПС РС СС

Внешний вид экстракта желто - коричневая масса светло - коричневый порошок розовый порошок

Влажность , % 4,30 4,40 4,55

Объемная плотность, г/см3 0,63 0,70 0,80

Сыпучесть, г/см3 2,60 1,80 2,64

Угол естественного откоса, град. 33,0 40,0 34,0

Насыпная масса, г/см 0,48 0,44 0,60

Содерж. действующих веществ, %

кислота аскорбиновая а) метод фотометрический в) -"- ВЭЖХ

12,60 12,79 12,02

12,00 12,80 10,70

флавоноиды 0,290 0,306 0,253

Разработана НД (ВФС 42-2195-93 и опытно-промышленный) на экстракт шиповника сухой, которые утверждены МЗ РФ и соответственно НПО "ВИЛАР".

На АООТ"Московская фармацевтическая фабрика" апробирована и принята для промышленного освоения технология производства экстракта шиповника сухого.

Решением Фармакологического комитета МЗ Российской Федерации экстракт шиповника сухой (ЭШС) разрешен к медицинскому применению.

.Технологическая схема производства сухого экстракта шиповника2

Рис.10

ТЕХНОЛОГИЯ ПОЛУЧЕНИЯ ТАБЛЕТОК "РОЗАСКОР" На основе фармакологических исследований установлено, что ЭШС обладает иммуномодулирующей активностью. Несмотря на широкий спектр действия сухого экстракта из шрота шиповника, он неудобен при дозировке,применении и транспортировке. Исходя из этого, необходимо создание рациональной лекарственной формы.

Целью этого этапа работы явилась разработка оптимальной технологии получения твердой лекарственной формы в виде таблеток из ЭШС.

г в документе внедрения дополнительно к "Леи схеме покачан пооперационный контроль

Выбор вспомогательных веществ был продиктован физико-химическими и технологическими свойствами ЭШС.

При разном соотношении наполнителей с ЭШС, экспериментально подобрано оптимальное соотношение компонентов, которое позволило, получить таблетки от светло-коричневого до темно-коричневого с вкраплениями под условным названием "Розаскор".

На основе фармакологических исследований установлено, что профилактическая доза субстанции равна 0,1 г. Средняя масса таблеток составляет 0,6 г. Оценку качества таблеток проводили по показателям механической прочности и времени распадаемости таблеток. Получение таблеток осуществляли методом влажной грануляции.

На основании комплекса проведенных исследований разработана технология таблеток следующего состава:

Экстракта шиповника сухой - 0,100 г Сахара молочного - 0,300 г Пудры сахарной - 0,100 г Крахмала картофельного - 0,094 г Кальция стеарата - 0,006 г Оценка высвобождения кислоты аскорбиновой из таблеток "Розаскор" показала, что 97,8-99,3% активного вещества от дозы переходит в раствор через 30 мин.

Изучение стабильности таблеток по их распадаемости, подлинности и количественному содержанию кислоты аскорбиновой показали, что они сохраняют свою стабильность в течение 1.6 года (время наблюдения) при температуре 20±2° С в банках оранжевого стекла, укупоренных пластмассовыми крышками.

Разработана НД (ВФС и лабораторный регламент) на таблетки "Розаскор", которые утверждены Министерством здравоохранения Республики Таджикистан.

Способ получения таблеток апробирован в лаборатории ФПП НИИ Фармации и рекомендован для промышленного освоения технологии производства таблеток "Розаскор" на ПО "Таджикфарминдустрия".

РАЗРАБОТКА ТЕХНОЛОГИИ ПОЛУЧЕНИЯ ГЛЮКОЗНЫХ ПОМАДОК С ЭШС Помадки - твердая лекарственная форма для внутреннего применения.

Для решения поставленной цели исследованы возможности создания основы для персралыюй лекарственной формы - глюкозной помадки с экстрактом шиповника сухого (ГПЭШС). Состав ГПЭШС запатентован.

При разработке ГПЭШС были проведены исследования по сравнительному изучению кинетики высвобождения действующих веществ из 4 различных рецептур. Данные опытов показали, что все изученные рецептуры в зависимости от скорости уменьшения высвобождения кислоты аскорбиновой можно расположить в следующем порядке: рецептура N4 рецептура N3 - рецептура N1 - рецептура N2 соответственно 99%, 84%, 79%, 56%.

Учитывая, что приготовление ГПЭШС на данной основе не предусматривает их последующей стерилизации, были проведены испытания ее на микробиологическую чистоту. Комплекс проведенных исследований показал,что наиболее оптимальной основой для ГПЭШС является жировая основа, а оптимальной биологически активной концентрацией -7% концентрация (табл.9)

Таблица 9

Сравнительные данные антимикробной активности различной концент-

рации экстракта шиповника сухого в помадной основе

п/п Концентрация экстракта в рецептуре, Диаметр зон задержки роста тест-микробов, мм

рецегътуры % Staph. Aureus АТСЕ 25923 E.coli АТСЕ 25922 Ps. Aeruginosa ANCT 27853 Вас. Subnilis АТСЕ 27828

4 3 13,1 ±0,2 15,2 ± 0,2 15,6 ±0,2 14.0±0.007

5 15,2 + 0,3 16,6 ±0,4 15,8+0,008 17,2±0,1

7 19,1+0,1 17,4 ±0,4 20,4 ±0,3 20,2±0,2

9 20,0± 0,2 17,6±0,3 20,2 + 0,4 20,0±0,4

3 3 13,2 ± 0,3 13,4+0,5 13,2 ± 0,3 13,4+0,2

5 15,2 ±0,2 15,6+0,2 15,6 ±0,4 14,6±0,2

7 20,2 + 0,1 16,4±0,2 15,8 ±0,2 18,8±0,08

9 20,8+0,03 18,8±0,1 16,4 ±0,5 18,4±0,1

Следует отметить, что основы, содержащие малое количество экстракта шиповника сухого и ССЪ-эксгракта были нестабильны и затвердевали.

Технологическая схема производства глюкозной помадки с экстрактом

шиповника сухого

Пар-> Приготовление Готовый

глюкозного сиропа глюкозный

сироп(РВ»94 -96.5)

v

Контрольное фильтрование глюкозного сиропа

I

Пар-> Уваривание глюкозно! ■ > сиропа

v

Охлаждающая -> Охлаждение

вода

Кристаллизация

1

Приготов- Приготовление

ление до--Ь помадной массы

бавок .1

Формование (отлипса)

I

Клерование Орана

Выстойка

Упаковка

Пар-» Готовая помадка

Вод-> РИС.11

Разработанная ГПЭШС состоит из экстракта шиповника, СОг-экстракта, жира кондитерского твердого и сиропа глюкозного. На основании проведенных технологических, физико-химических и микробиологических исследований была разработана технологическая схема изготовления ГПЭШС, как иммуномодулирующее средство

Изучение острой токсичности на белых мышах и крысах показало, что ГПЭШС относится к безвредным веществам.

ГПЭШС - это твердая лекарственная форма от светло-коричневого цвета до темно-коричневого с распадаемостью от 820-900 сек, с содержа-

нием кислоты аскорбиновой не менее 1,30%. Результаты изучения доброкачественности ГПЭШС при хранении показали его стабильность 12 мес (время наблюдения).

В НПО "Крахмалопродукты" апробирован лабораторный регламент на ГПЭШС.

РАЗРАБОТКА ТЕХНОЛОГИИ ПОЛУЧЕНИЯ ГРАНУЛ С ЭШС

Гранулы по сравнению с порошком имеют ряд преимуществ: хорошую сыпучесть, способность поддаваться более точному объемному дозированию и сохранять равномерный состав смеси, не расслаиваться на составные части. Кроме того, гранулы имеют более привлекательный и приятный товарный вид, меньшую гигроскопичность, не пылят или пылят незначительно и меньше раздражают дыхательные пути.

При разработке гранул в результате исследований в качестве наполнителей выбрана лактоза и сахароза в соотношениях с экстрактом шиповника сухим 4,5:1 и 1,5:1 соответственно. В качестве связующего средства подобран 5% раствор метилцеллюлозы.

В результате разработаны состав и технология гранул экстракта шиповника сухого. Предложена влажная грануляция с дробным добавлением экстракта сухого рассчитанными количествами: сначала 30%, потом 70%. В результате проведенных исследований разработана технологическая схема изготовления гранул (рис. 12).

Основные технологические показатели гранул представлены в табл. 10.

Таблица 10

Основные показатели качества гранул экстракта шиповника сухого

N образца Влажность, % Гранулометрический состав, мм Сыпучесть г/с Объемная масса г/см3 Распада-емость сек

+3 -3+2 -2+1 -1+0.5 -0.5 +0.2 -0.2

1 3,50 1,22 30,70 31,20 26,00 8,61 2,07 8,40 0,55 300

2 3,60 1,15 33,70 35,00 22,65 6,80 1,70 10,00 0,65 360

3 3,00 0,80 26,20 34,90 25,50 11,80 1,40 10,10 0,67 360

4 3,60 0,30 31,60 35,65 23,65 7,15 1,75 9,20 0,70 280

5 3,50 1,20 37,60 34,10 12,30 13,60 0,20 9,10 0,59 260

Гранулы представляют собой крупинки круглой цилиндрической или неправильной формы, светло-коричневого цвета, специфического запаха и кислого вкуса, с распадаемостью от 260 до 360 с. Гранулы содержат 1,7-

2,7% кислоты аскорбиновой и элементы: марганец 41-48, цинк-23-25 и медь 11-15 мкг/г-мг/кг.

Исследовано растворение действующих веществ из гранул в опытах in vitro на приборе "Вращающаяся корзинка"

Технологическая схема изготовления гранул с экстрактом шиповника сухого

Бшецшваине н просеивание сыры>

Приготовление увлажнителя

•[ВР1. [Подготовка агрья |-{Потери j

Смешивание и увлажнение компонагтов

Блажное гранулирование

ТП I 3

Введшие so влажные гранулы 70% экстр иста шииовнкка

TII 1. Приготовление •

гранул

/

[ В лап ]

oie- ]

!__I

[Гранулы, яспольдуеыь1спгцрегюерацю<_) |УМО t 1 {Фасовка гранул |-

У МО I.

1УМО 1.2 I Упаковка бачох " }-'

Фасовка и упаковка гранул

Потерн

Рис.12

Установлено, что растворение действующих веществ из гранул происходит через 15 мин. При этом в растворяющую среду переходит не менее 99,73%.

Фармакологические исследования гранул, проведенные в отделе побочного действия лекарств НПО "ВИЛАР", показали выраженную им-муномодулирующую активность.

При изучении острой токсичности гранул шиповника, установлено, что по классу токсичности можно отнести к относительно безвредным лекарственным средствам.

Изучены технологические и физико-химические свойства гранул. Установлены основные показатели их качества. Результаты исследований гранул при хранении показали их стабильность в течение 2 года (время наблюдения).

Разработаны ВФС и опытно-промышленный регламент на гранулы. НД утверждена Министерством здравоохранения Российской Федерации. Решением Фармакологического комитета МЗ РФ гранулы экстракта шиповника сухого разрешены к медицинскому применению.

На ПЭЗ НПО "ВИЛАР" проведена апробация опытно-промышленного регламента на производство гранул экстракта шиповника сухого.

В настоящее время технология производства гранул принята для промышленного освоения АООТ "Московская фармацевтическая фабрика".

СОЗДАНИЕ И ИССЛЕДОВАНИЕ СУППОЗИТОРИЕВ С ЭКСТРАКТОМ ШИПОВНИКА СУХОГО

Из ректальных лекарственных форм наиболее распространенным являются суппозитории, обеспечивающие точность дозирования лекарственных веществ и регулируемую скорость их доставки в системный кровоток.

Целью настоящего исследования явилось изучение возможности применения экстракта шиповника сухого в форме суппозиториев.

Для получения суппозиториев в настоящей работе использовали 4 основы, разрешенные к медицинскому применению: "Суппорин-М", твердый жир, масло какао и Witepsol Н15.

Доза препарата ЭШС на один суппозиторий (0,2 г) выбрана по рекомендации врачей-педиатров.

В лабораторных условиях суппозитории готовили методом выливания в пластмассовые формы, масса суппозитория составила 1.2 г. ЭШС вводили в расплавленные основы по типу суспензии.

Результаты исследования приведены в таблице 11, из которой видно, что экстракт шиповника сухой, введенный в основы, не оказывает заметного влияния на изменение изучаемых показателей. По физико-химическим и структурно-механическим показателям суппозитории с ЭШС, приготовленные на липофильных основах, отвечают требованиям ГФ XI издания и соответствующих ГОСТов.

Исследованиями установлено, что из суппозиториев на основе \Vitepsol и "Суппорин-М" , процент высвобождения препарата (ко 2-му часу) составил 99,75 и 79,91% соответственно.

Полученные результаты исследований свидетельствуют о том, что во всех суппозиторных основах (кроме твердого жира, где количество снижается с 0,0059 до 0,0055) изменения содержания препарата незначительны. Наблюдения продолжаются.

Таблица 11

Физико-химические и структурно-механические показатели суппозито-

риев с экстрактом шиповника сухого на липофильных основах

Показатель Суппозиторные основы

"Суппо*рин-М" | Твердый жир | Масло какао | \Укерзо1Н15

Цвет светло-коричневые,равномерно окрашенные без вкраплений

Твердость при 20° С не менее 550г/см 1200 1400 1000 4100

Время полной деформации, мин 6,15 5,48 5,12 6,30

Температура плавления, °С 35,6 34,7 35,8 36,6

Температура затвердевания,°С 24,5 26,5 24,6 27,9

Перекисное число 0,052 0,245 0.0654 0,0061

Кислотное число 0,51 0,38 0,79 2,24

Йодное число 62,03 10,71 35,43 0,58

СОЗДАНИЕ ДОЗИРОВАННОЙ ЛЕКАРСТВЕННОЙ ФОРМЫ ПРЕПАРАТА СО2 -ЭКСТРАКТА ШИПОВНИКА Получение капсул с С02-экстрактом шиповника

Изученное стимулирующее, противовоспалительное, противоязвенное, антимутагенное влияние жирорастворимых биологически активных веществ, содержащих каротиноиды, токоферолы, жирные кислоты (Патент N 93052263), на течение репаративных процессов явилось предпосылкой для создания дозированной лекарственной формы С02-экстракта шиповника для внутреннего применения как лечебно-профилактическое сред-

ство. Так как ССЬ-экстракт представляет собой маслообразную жидкость, дозирование его может происходить только путем инкапсулирования.

Метод погружения использовали при предварительных испытаний, с помощью которой подобран состав желатиновой массы, принципиально решен вопрос о возможности получения мягких желатиновых капсул с ССЬ-экстрактом без наполнителей. После анализа полученных в лабораторных условиях капсул с СО:-экстрактом и после 12 месячного хранения их было достоверно установлено, соответствие НТД, проекту ВФС на капсулы.

Затем мягкие желатиновые капсулы (МЖК) с ССЬ-экстрактом получали ротационно-матричным методом, являющимся вариантом метода прессования и апробировали на промышленной установке типа БЭС-! поточной автоматической линии типа "Лейнер" (Англия) ГХФЗ. Предварительными исследованиями содержание желатина в составе желатиновой массы было увеличено до 37%, так как этого требовали особенности метода и установки.

Основные показатели качества капсул с С02-экстрактом ротационно-матричным методом представлены в таблице 12.

Таблица 12

Результаты оценки качества опытных серий мягких желатиновых кап-

сул СОг-экстракта,полученных методом прессования (п=5)

п/п серии Показатели качества капсул

содержание каро-тиноидов (в пересчете на (5-каротии), мг ПЧ, % иода кч, мг КОН/г распадае-мость, мин. средняя масса капсул, г масса содержимого капсул, г

I 1,51 0,0738 ±0,007 8,91 ±0,04 11,1±0,5 0,3558 ±0.0033 0,2768 ±0.0039

2 1,47 0,0721 ±0,004 9,23 ±0,03 9,9 ±0,3 0,3698 ±0,0024 0,2857 ±0,0037

При использовании желатиновой массы с добавлением сорбита в качестве дополнительного пластификатора (состав 2) наблюдается заметное повышение ПЧ препарата КТК в МЖК уже через 6 месяцев хране-

ния. Величина ПЧ через 6 месяцев хранения превышают максимально допустимое для препарата значение (0,1 - в % йода) на 0,04 единицы, а через 12 месяцев на 0,12.

Полученные капсулы имеют цвет от оранжевого до красного, овальной формы с ровным горизонтальным швом, упругие, оболочка прозрачная, без механических и воздушных включений и натеков.

Технологическая схема производства МЖК препарата КТК методом прессования (ротационно-матричным) представлена на рис 13.

Мягкие желатиновые капсулы препарата КТК контролировали по основным показателям для данной лекарственной формы и для препарата КТК в соответствии с требованиями ГФ XI изд. и НТД на препарат КТК.

Технологическая схема производства мягких желатиновых капсул препарата КТК методом прессования

Глицерин Мипагин

£тП-1 | "Изготовление желатиновой маастд"

|ТГ1-1-1 |Приготовление раствора консервантов в воде

|ТП-1. 2 ¡Приготовление водно-глицериновой смеси .3 "[Изготовление желатиновой массы_

4ТП-1.4 |Фильтрация желатиновой массы в термостате Жолатиновая масса

Препарат токарол

(¡.з^лшшоз нлгло

I"Изготовление капсул"

ТИ-2.1 1 Капсулирование на автомате б5С-1 фирмы "Ьез.п

Капсулы

И'чопрсшиловый спирт

"Сушка, браковка, промывка и окончательная сушка капсул"__

--П'ГС-З.! [Обработка капсул охлажденным воздухом

(Сушка капсул в барабанной сушилке -^ТП-ЗМ {Первичная браковка капсул

•[ТГЬЗ.5 {вторичная браковка капсул

-с

Промывка капсул в промывочной машине барабанного типа _

-|ГП-3.7 )Окончательная сушка капсул а сушильном шкафу

Коидииионные капсулы

тара д.'М упаковки и фасовки I

|"Фасовка и упаковка капсул"

Рис. 13

ВЫВОДЫ

1. На основе комплекса химических, фармакологических, технологических исследований обоснованы принципы и реализованы пути создания лечебных и профилактических средств, содержащих суммарные препараты аскофлавоноидов и каротин-токоферольного комплекса. Совокупность полученных результатов может служить общим методическим подходом для создания новых лекарственных средств растительного происхождения.

2. Разработана унифицированная методика фотоколориметрического определения кислоты аскорбиновой в сырье, сухом экстракте шиповника, гранулах, таблетках, глюкозных помадках, суппозиториях с сухим экстрактом шиповника, основанная на взаимодействии кислоты аскорбиновой с желтым фосфорно-молибденовым гетерокомплексом. Максимум поглощения наблюдается при длине волны 720 нм, подчиняемость закону Бугера-Ламберта-Бера соблюдается в пределах концентрации от 0,0005 до 0,0030%, чувствительность 0,005 мг/мл кислоты аскорбиновой. Относительная ошибка определения при доверительной вероятности не превышает ±6%;

3.Разработана методика количественного определения флавоноидов в сырье и сухом экстракте шиповника по реакции комплексообразования с алюминия хлоридом, который вызывает батохромный сдвиг длинноволновой полосы поглощения флавоноидов с 330/350 до 390/410 нм. линейная зависимость оптической плотности от концентрации наблюдается в пределах 0,0002-0,0020%). Наименьшее определяемое количество рутина 0,002 мг/мл. Относительная ошибка определения не превышает ±6%.

4. Подобраны условия и разработаны методики количественного определения каротиноидов и токоферолов высокоэффективной жидкостной хроматографией в сырье, СОг-экстракте и капсулах с СОг-экстрактом. Линейная зависимость площадей пиков и концетрации токоферола соблюдается в пределах 0,2 до 1,0 мкг/мл, бета-каротина - 0,10,5 мкг/мл. Наименьшее определяемое количество бета-каротина 0,1 мкг/мл; для альфа-токоферола 0,2 мг/мл. Ошибка определения не превышает ±6%.

5. Установлено количественное содержание кислоты аскорбиновой, флавоноидов, каротиноидов и токоферолов в плодах шиповника гунт-

ского, Беггера, Федченко, Коржинского и карликового и их гибридизи-рованных форм от 5,33 до 17,80%, содержание флавоноидов зависит от высоты произрастания над уровнем моря и колеблется от 0,128-до 0,534, каротиноидов от 45,75 мг% до 100,02 мг%.

Впервые изучен аминокислотный состав плодов шиповника. Показано наличие широкого спектра свободных аминокислот, что позволяет считать сырье шиповника перспективным источником аминокислот. Показано, что что плоды шиповника гунтского и Беггера богаты такими важными элементами как марганец, медь и цинк.

6. Впервые проведены ресурсоведческие исследования ГБАО: определена урожайность, биологический, эксплуатационный запасы и возможный объем заготовок плодов различных видов Rosa L. для каждого административного района и в целом для области. Составлены карты-схемы распространения зарослей, имеющих промышленное значение.

7. Теоретически и экспериментально обоснованы технологические параметры, кинетические закономерности и влияние основных факторов на процесс экстрагирования липофильных веществ диоксидом углерода из плодов и гидрофильной фракции из шрота шиповника -водой. В результате получен СО:-экстракт (КТК) из плодов и экстракт шиповника сухой.

8. Изучены физико-химические показатели токарола и сухого экстракта шиповника. В результате идентифицированы и количественно определены жирные кислоты (пальмитиновая, стеариновая, олеиновая, линоле-вая), каротиноиды (бета-каротин), токоферолы (альфа-токоферол) в то-кароле; кислота аскорбиновая, флавоноиды, элементы и аминокислоты в сухом экстракте. Показана зависимость иммуномодулирующей активности сухого экстракта шиповника от содержания кислоты аскорбиновой.

9. Разработана схема комплексной переработки плодов шиповника по безотходной технологии, что позволило не только расширить сырьевую базу, но и повысить экономичность способа получения токарола и сухого экстракта, которые защищены патентами. На основе системного подхода сырье-лекарственное средство разработаны показатели качества плодов шиповника. CCh-экстракта, сухого экстракта и включены в проекты фармакопейные статьи, которые утверждены ФК.

10. Разработаны научно-методические основы создания и стандартизации лекарственных форм с экстрактом шиповника сухого иммуномоду-

лирующего действия: гранулы 0,2; таблетки 0,1; помадки и суппозитории 0,2. Разработаны лабораторные и ОПР регламенты получения препаратов с экстрактом шиповника. Утвержден комплект необходимой для промышленного выпуска научно-технической документации на сухой экстракт шиповника и гранулы осуществлен их разовый выпуск на АООТ "Московская фармацевтическая фабрика"

11. На основании физико-химических характеристик (Юг-экстракта шиповника, изучения влияния различных комбинаций вспомогательных веществ на технологические свойства капсулируемой массы, с учетом динамической вязкости СОг-экстракта, создана и исследована пероральная лекарственная форма препарата СОг-экстракта- мягкие желатиновые капсулы по 0,3 г, стабильные в течение 1 года (время наблюдения). Расширен спектр биологической активности: впервые выявлены иммуномо-дулирующий, антимутагенный эффекты. Составлен и апробирован на промышленной установке лабораторный регламент на получение капсул с СО2 -экстрактом.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Мухамеджанова Д.М., Юсупов Д., Акназаров O.A. Распространение и запасы некоторых видов шиповника долины реки Шах-Дара Горно-Бадахшанской Автономной области// Депонир. в ВИНИТИ 18. 05.88. N 3940-В 88,- Юс.

2. Мухамеджанова Д.М., Сергеев А.О. Химия и биология водорастворимых экстрактов памирского шиповника//Материалы всесоюзной конференция "Химия пищевых добавок. Тез. докл. - Черновцы, 1989. - С. 196

3. Мухамеджанова Д.М., Кочкарева Т.Ф. О новом местонахождении шиповника превосходного (Rosa divina) на Западном Памире //Изв. АН. Тадж.ССР Отд.биол.наук.-Душанбе,1989. -N 4(117).- С.88-89.

4. Муха-меджанова Д.М. Распространение высоковитаминных шипов-пиков на Западном Памире// Труды IX конференции молодых ученых НПО"ВИЛР" Москва, 1989.Деп. в ВИНИТИ 11.03.90. N 1312-В 90.С.102-103.

5. Мухамеджанова Д.М., Попов Д.М., Дюкова В.В. Создание сухой лекарственной формы// Тезисы докл. конф. молодых ученых. Деп. в ВИНИТИ N Д-19770 от 14.05.90,- С. 28-30.

6. Мухамеджанова Д.М., Гринкевич Н.И., Кочкарева Т.Ф Распространение и запасы плодов видов Rosa L. на Западном Памире //Растит, ресурсы,- 1991,-1.71.- Вып. 1.-С.78-82

7. Мухамеджанова Д.М. Лиофильное высушивание водорастворимого вещества, полученного из плодов шиповника гунтского// Материалы республ. научн.-практ. конференции. Тез. докл. - Душанбе, 1991. С. 167168.

8. Возможность корреляции иммунного статуса препаратом из плодов шиповника/Белошапко A.A., Ешотина Е.Ю., Мухамеджанова Д.М. /Матер, научн. конф."Актуальность проблемы лекарственной токсиколо-гии.Москва, 1990.-С. 128

9. Некоторые данные о биологической активности сухого экстракта из плодов шиповника / Шкаренков A.A., Енютина Е.Ю., Мухамеджанова Д.М. и др.//Всесоюзн.конф. посвященная 50-летию ВИЛАР. Тез. докл,-Москва, 1991.-С .87

10. Перспективы создания иммуностимуляторов растительного происхождения/ Белошапко A.A., Енютина Е.Ю., Мухамеджанова Д.М и др //I-й Российский национальный конгресс "Человек и лекарство" Тез.докл. Москва, 1992. - С.203

11. Доклиническая оценка безопасности фитопрепаратов / Белошапко A.A., Шкаренков A.A., Енютина Е.Ю., Мухаммеджанова Д.М.//1-Й Российский национальный конгресс "Человек и лекарство" Тез.докл. Москва, 1992,-С.203

12. Контроль качества настоев и отваров, содержащих флавоноиды/ Мухамеджанова Д.М., Аносова О.Г., Попов Д.М.идр. /"Проблемы фармации, подготовки и использования провизорских кадров (материалы республ. научн.конф. по фармации и фармакологии).- Пятигорск, 1993,-С.134-135

13. Мухамеджанова Д.М., Гринкевич., Орлова Л.И. Фармакогностиче-ское изучение основных видов шиповника Горно-Бадахшанской Автономной ОбластиУ/Фармация. - 1990.-№ 3. - С. 13-15

14. Мухамеджанова Д.М, Попов Д., Юсупов Д. и др. Содержание фла-воноидов в различных видах Rosa L., произрастающих на Западном Памире//Химия природ, соединений.-1992.-NI.- С.42-45

15. Сравнительная оценка фотоколориметрического и ВЭЖХ методов определения кислоты аскорбиновой в плодах шиповника / Никули-

чев Д.H., Мухамеджанова Д.М., Попов Д.М.//Научные труды НИИФ. 1992.-Т.39.-С.43-46

16. Мухамеджанова Д.М. Окультуривание естественных зарослей шиповника на Западном Памире// "Проблемы селевых и оползневых явлений освоения и использования новых земель в горных районах: Тез.докл. республик, семинара. -Душанбе, - 1993,- С.102-103

17. Мухамеджанова Д.М., Шкаренков A.A. Влияние сухого экстракта шиповника на организм лабораторных животных// Известия АН республики Таджикистан. - 1993.- №2.-С.56-58

18. Получение и исследование каротин- токоферолового комплекса из плодов шиповника /Алюшин М.Т.,Мухамеджанова Д.М., Попов Д.М// Сучасш проблеми фармашкТезидоповщей республшшско) науково-npaKTUHHoi конференцп-Харшв,- 1994,- С.48-49

19. Мухамеджанова Д.М., Шишкина ИЛ., Жучков В.M и др. Ан-тиоксидантные и антимутагенные свойства каротин-токоферолового комплекса //3-й Международный симпозиум'Экология человека: Проблемы и состояние лечебно-профилактического питания" Тез. докл. -Москва, 1994,- С. 141-142

20. Разработка лечебно-профилактических средств растительного происхождения и изучение их антимутагенной активности/ Голубева З.Ф., Седова И.П, Мухамеджанова Д.М. и др.// 3-й Международный симпози-ум"Экология человека: Проблемы и состояние лечебно-профилактического питания" Тез. докл.-Москва,1994.-С.139-140

21. Совершенствование анализа и технологии настоев и отваров, содержащих флавоноиды /Аносова О.Г, Мухамеджанова Д.М., Попов Д.М. и др.//Фармация. -1994.-N 1,- С.30-34

22. Совершенствование анализа и технологии изготовления настоев шиповника, крапивы и рябины обыкновенной/ Попов Д.М., Приступа Е.В., Мухамеджанова Д.М. //Фармация. -1994,- N 1.- С.31-34

23. Мухамеджанова Д.М., Алюшин М.Т., Шишкина И.Я., Попов Д.М. Безотходная технология комплексной переработки плодов шиповника /Конгресс "Традиционная медицина и питание: теоретические и практические аспекты." Тез.докл.- Москва, 1994,- С. 185

24. Разработка технологии и стандартизации бета-каротина в желатиновых капсулах /Шишкина И.Я., Соколова М.А., Мухамеджанова Д.М.

и др.//Тез.докл.П-й Российский национальный конгресс "Человек и лекарство" . - Москва, 1995.- С.ЗЗ.

25. Разработка новых фитопрепаратов для повышения естественной резистентности организма на основе экстрактов из плодов шиповника/ Мухамеджанова Д.М., Шишкина И.Я., Тракман Ю.Г и др//. Там же. С.240-241

26. Мухамеджанова Д.М., Алюшин М.Т., Попов Д.М. Создание и исследование новой лекарственной формы с СО2 -экстрактом шиповни-ка//Российская национальная конференция "Формирование приоритетов лекарственной политики ".Москва, 1995,- С.73-74.

27. Мухамеджанова Д.М., Шишкина И.Я. Пищевые диетические композиции с фитокомпонентами//Материалы международной научно-технической конференции "Прикладная биотехнология на пороге XXI века". Москва, 1995.-С.22

28. Мухамеджанова Д.М., Шишкина И.Я. Липоидные компоненты из плодов шиповника.// Современные аспекты изучения лекарственных растений. Научные труды НИИФ . Москва, 1995. Т.34.-С.102-104

29. Мухамеджанова Д.М. Шиповник -природный концентрат витаминов. Фитотерапия: Новости медицины и фармации яринвест медикал. Москва,-1994.-N 5-6.

30. Целебные дары шиповника /Алюшин М.Т., Попов Д.М., Мухамеджанова Д.М. Фармацевтический вестник. - 1995. - №2(19)

31. Мухамеджанова Д.М., Лебеденко В.Я. Исследование микрокапсу-лирования экстракта шиповника сухого и свойства микрокапсул //Известия АН республики Таджикистан. 1995,- №1(101)- С.86-88

32. Мухамеджанова Д.М. Динамика накопления витамина С в плодах

шиповника// Конференция молодых ученых. Тез. докладов. Курган-

Тюбе, 1991,-С.76

33. Способ получения средства, обладающего витаминной активностью/ Мухамеджанова Д.М., Попов Д.М., Сергеева А.О и др./ Патент N 1769429, 1992.

34. Способ получения биологически активной добавки из шиповника (Rosa L.) для косметических целей/ Глызин В.И., Мухамеджанова Д.М., Давыдова В.Н., Маяцкая И.В./ ПатентЫ 5020064, 1993 г.