Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Исследования по стандартизации плодов шиповника и лекарственных форм на его основе

ДИССЕРТАЦИЯ
Исследования по стандартизации плодов шиповника и лекарственных форм на его основе - диссертация, тема по фармакологии
АВТОРЕФЕРАТ
Исследования по стандартизации плодов шиповника и лекарственных форм на его основе - тема автореферата по фармакологии
Сергунова, Екатерина Вячеславовна Москва 2002 г.
Ученая степень
кандидата фармацевтических наук
ВАК РФ
15.00.02
 
 

Автореферат диссертации по фармакологии на тему Исследования по стандартизации плодов шиповника и лекарственных форм на его основе

п

На правах рукописи

СЕРГУНОВА

Екатерина Вячеславовна

Исследования по стандартизации плодов шиповника и лекарственных форм на его основе

15.00.02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Москва - 2002

Работа выполнена в Московской медицинской академии им. И.М. Сеченова Министерства Здравоохранения Российской Федерации

ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ: доктор фармацевтических наук, профессор Д.А. Муравьева, доктор фармацевтических наук, ТА. Сокольская.

ВЕДУЩАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ: Институт Государственного контроля лекарственных средств НЦ ЭГКЛС МЗ РФ.

Защита состоится ч/^_У> 2002 г в/5 часов на заседании

Диссертационного Совета Д. 20! овской медицинской академии им.

И.М. Сеченова по адресу: 121019, Москва, Никитский бульвар, д. 13.

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке ММ А им. И.М.Сеченова по адресу: 119992, Москва, Зубовская пл., д. 1.

НАУЧНЫЙ РУКОВОДИТЕЛЬ: доктор фармацевтических наук, профессор И.А. Самылина

г 0

Автореферат разослан «

Ученый секретарь Диссертационного Совета Д 208.040.09, кандидат фармацевтических наук, доцент

Н.П. Садчикова

Р £8А. /// гии/ъоС/^-^у С

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. Лекарственное растительное сырье является одним из источников получения лекарственных средств. Расширение ассортимента лекарственных препаратов из лекарственного растительного сырья и повышение интереса к фитотерапии в целом связано с доступностью, отсутствием токсичности, низкой частотой побочных эффектов растительного сырья. Развивается направление использования лекарственного растительного сырья, как природного источника ценных биологически активных веществ, в качестве добавки к нище.

Плоды шиповника за счёт богатого химического состава и разнообразной биологической активности широко применяются в медицинской практике. Из плодов шиповника получают препараты с комплексом гидрофильных и липофильиых биологически активных веществ: на производстве - препараты „Холосас" и „Каротолин", сироп, экстракт. Плоды шиповника поступают в аптеку для безрецептурного отпуска в виде фасованного сырья для приготовления водных извлечений, входят в состав сборов, из которых в домашних условиях готовят отвары.

Однако вопросы стандартизации по комплексу биологически активных веществ рассмотрены недостаточно, нормативная документация предусматривает стандартизацию растительного сырья только по содержанию аскорбиновой кислоты. В этой связи, является актуальной задачей изучение комплекса биологически активных веществ плодов шиповника с целью использования данных о химическом составе для совершенствования вопросов стандартизации растительного сырья и лекарственных форм на его основе.

Цель настоящего исследования заключается в проведении углублённых комплексных исследований по стандартизации плодов шиповника и лекарственных форм на его основе.

Постановка задач и выбор средств для их решения: Для осуществления поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

- изучить литературные данные по вопросам химического состава, биологической активности плодов шиповника; использования методов

анализа кислоты аскорбиновой в лекарственном растительном сырье; стандартизации лекарственных форм на основе растительного сырья; использования плодов шиповника в качестве пищевой добавки;

- провести сравнительный качественный диализ плодов шиповника, отваров и экстракта на содержание основных групп биологически активных веществ;

- провести оценку существующих методик количественного определения кислоты аскорбиновой в плодах шиповника и лекарственных формах;

- провести сравнительное изучение содержания биологически активных веществ в плодах и экстракте шиповника;

- изучить возможность стандартизации сборов с плодами шиповника по показателям „Содержание кислоты аскорбиновой" и „Содержание органических кислот" для оценки их качества;

- разработать качественные и количественные характеристики водных извлечений из плодов шиповника и экстракта шиповника. Оценить возможность использования экстракта шиповника как концентрата;

- изучить возможность получения пищевого продукта, обогащенного экстрактом шиповника.

Решение задач осуществлялось путём обобщения данных литературы и проведения экспериментальных исследований.

Научная новизна. Для стандартизации плодов шиповника и лекарственных форм на его основе с использованием комплекса методов (ВЭЖХ, ТСХ, атомно-абсорбционная спектроскопия, тетраметрические, спектрофотометрия, использование аминокислотного анализатора) определено содержание и идентифицированы кислота аскорбиновая, рутин, кверцетин, галловая, хлорогеновая, кофейная, бензойная кислоты, лимонная и яблочная кислоты, полисахариды, сахароза, глюкоза, манноза, фруктоза, свободные и связанные аминокислоты, макро- и микроэлементы в пледах шиповника и экстракте шиповника. Даны подробные качественные и количественные характеристики фенолкарбоновых кислот, органических кислот, Сахаров, аминокислот для плодов шиповника и экстракта шиповника.

В процессе исследований в сравнительном аспекте титриметрического, йодометрического, спектрофотометрического и ВЭЖХ методов показана

равноценная возможность их использования для анализа кислоты аскорбиновой в плодах шиповника и лекарственных форм на его основе. Наиболее оптимальными для анализа являются метод 13ЭЖХ и титриметрический.

Проведено изучение отвара плодов шиповника с использованием физико-химических методов. Даны качественные характеристики, определено содержание действующих веществ. В результате исследовании экстракта шиповника показано, что он может быть использован для получения водного раствора, не уступающего по качеству отвару, приготовленному непосредственно из плодов.

Показана возможность использования показателей „Содержание аскорбиновой кислоты" и „Содержание органических кислот" для стандартизации сборов с плодами шиповника и оценки качества получаемых из споров водных извлечений.

Разработана рецептура и получены экспериментальные образцы кондитерского изделия (помадные конфеты) с экстрактом шиповника. Рецептуры витаминизированных кондитерских изделий и технологические инструкции для их производства защищены патентом №2160011 „Способ производства сахаристых кондитерских изделий" от 06.04.2000 г.

Практическая значимость работы. На основании проведенных исследований апробированы и внедрены:

- в лаборатории ОАО „Красногорсклекередства" методики количественного определения аскорбиновой кислоты и органических кислот в сырье и отваре шиповника, сборах с плодами шиповника („Арфазетин", „Бруснивер", „Брусиивер-Т") и отварах из них, а также в чайных напитках „Мальвовый" и „Витаминный", выпускаемых ОАО „Красногорсклекередства";

- на ЗАО „ККФ" технология производства помадных конфет с экстрактом шиповника.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 9 научных работ.

На защиту выносится:

- результаты изучения состава и определения содержания биологически активных веществ (аскорбиновой и органических кислот, полисахаридов, флавоноидов, фенолкарбоновых кислот, микроэлементов, аминокислот) в плодах и экстракте шиповника;

- результаты определения содержания биологически активных веществ в растительных сборах с плодами шиповника;

- данные по изучению водных извлечений из плодов и экстракта шиповника;

- результаты исследований по разработке пищевого продукта, обогащенного аскорбиновой кислотой.

Апробация диссертации. Основные положения диссертации доложены на международном семинаре „Сырьё кондитерских изделий - 2000" (Москва, 2000 г), на II конференции молодых учёных России „Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины (Москва, 2001 г).

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтической науки. Диссертационная работа выполнена в соответствии с тематикой и планом НИР кафедры фармакогнозии ММА им. И.М. Сеченова по теме: „Фармакогностическое изучение лекарственного растительного сырья, лекарственных сборов, лекарственных форм из сырья и разработка методов их стандартизации с учётом влияния антропогенных факторов" (код темы 0407093).

Объём и структура диссертации. Работа изложена на 150 страницах машинописного текста, содержит 32 таблицы и 27 рисункоз.

Работа состоит из введения, обзора литературы, пяти экспериментальных глав, библиографии из 149 наименований, из которых 16 на иностранных языках.

Во введении раскрыта актуальность темы, определены цель и задачи исследования, сформулированы научная новизна и практическая значимость работы.

В первой главе на основании данных литературы рассмотрены сведения о ботанико-морфологической характеристике видов шиповника; химическом составе, фармакологической активности и медицинском применении плодов шиповника; методах анализа кислоты аскорбиновой в растительном сырье; вопросах стандартизации водных извлечений и сухих экстрактов, получаемых из растительного сырья; использование лекарственных растений в пищевой промышленности.

Вторая глава посвящена изучению состава гидрофильной фракции плодов шиповника.

В третьей главе излагаются результаты исследований по анализу растительных сборов с плодами шиповника и отваров, приготовленных из них.

В четвёртой главе приводятся результаты исследований экстракта шиповника сухого: технология получения экстракта, углублённое изучение качественного состава и количественная оценка водорастворимых биологически активных веществ экстракта шиповника сухого.

В пятой главе рассмотрены результаты исследования водных извлечений из плодов шиповника и экстракта шиповника сухого по установлению характеристик подлинности и доброкачественности, сравнительной оценки.

Шестая глава посвящена исследованиям по разработке пищевого продукта, обогащенного кислотой аскорбиновой.

Результаты, полученные при проведении исследований, обработаны статистически и представлены в таблицах и на рисунках, которые приводятся в тексте работы. В приложение включены акты о внедрении материалов диссертации.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ '

Объекты и методы исследования. Объектами исследования служили: промышленные образцы плодов шиповника (ЗАО „Техмедсервис''), опытный образец экстракта шиповника сухого; восемь разрешенных к медицинскому применению сборов, содержащих от 10 до 70% плодов шиповника; водные извлечения из плодов шиповника, сборов и экстракта шиповника; опытный образец пищевого продукта - помадные конфеты, содержащие экстракт шиповника. Водные извлечения из сырья и сборов готовили в соответствии с методикой ГФ XI, вып. 2, с. 147.

Сухой экстракт из плодов шиповника получали на производственно-экспериментальном заводе „Биохиммаш". Определение содержания аскорбиновой и органических кислот, флавоноидов проводили по методикам, описанным в частных статьях на лекарственное растительное сырье и лекарственные препараты (ГФ XI). Кроме того, использоватась методика определения содержания аскорбиновой кислоты,'согласно ФС 42-3285-96 „Экстракт шиповника сухой".

Анализ кислоты аскорбиновой в пищевом продукте осуществляли согласно „Руководству по методам анализа качества и безопасности пищеиых продуктов".

Хроматографическое изучение проводили методом тонкослойной (ТСХ) и высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Для хроматографирования аскорбиновой кислоты и флавоноидов использовали

s

пластинки „Силуфол" (Чехия) 15x15 см и системы растворителей соответственно: этилацетат - ледяная уксусная кислота (8:2), н-бутанол - уксусная кислота - вода (4:1:5).

Анализ аскорбиновой кислоты и фенольных соединений осуществляли с помощью ВЭЖХ. Хроматографирование проводили на приборе фирмы Perkin Elmar, оснащенном насосом высокого давления и спсктрофотометрическим детектором, используя колонку из нержавеющей стали длинной 150 мм с адсорбентом „Hypersil С is" с диаметром частиц 5 мкм (фенольные соединения) и длинной 250 мм с адсорбентом „Separon SG X RP-S" с диаметром частиц 3 мкм (аскорбиновая кислота).

Анализ Сахаров и органических кислот проводили методом ВЭЖХ на жидкостном хроматографе фирмы Varian с рефрактометрическим детектором, используя колонку длинной 150 мм с внутренним диаметром 4 мм, заполненную силикагелем с химически привитой аминофазой.

Определение состава и содержания свободных и связанных аминокислот проводили на аминокислотном анализаторе „Hitachi", модель 835.

Изучение элементного состава плодов и экстракта шиповника проводили на поляризующем зеемановском атомно-абсорбционном спектрофотометре „Hitachi" модель 180-80, по стандартным аналитическим программам этой фирмы.

Статистическую обработку результатов исследований проводили в соответствии с требованиями ГФ XI, вып. 1, с. 199-221 с использованием критерия Стьюдента.

Изучение состава гидрофильной фракции плодов шиповника.

Использование плодов шиповника в официналыюй медицине в виде отвара потребовало изучения состава гидрофильной фракции растительного сырья.

Качественный анализ. Качественное обнаружение аскорбиновой кислоты и флавоноидов проводили с использованием тонкослойной хроматографии (ТСХ). Для проведения анализа готовили водные и водно-спиртовые извлечения из сырья в соотношении 1:10. В ходе хроматографического анализа с достоверными образцами обнаружены зоны адсорбции аскорбиновой кислоты (Rf=0,60), рутина (Rf=0,72), кверцетина (Rf=0,90).

Кроме того, методом ВЭЖХ, наряду с аскорбиновой кислотой, подтверждено присутствие четырех фенолкарбоновых кислот (галловой, хлорогеновой, кофейной и бензойной), органических кислот (лимонной, яблочной), глюкозы, сахарозы, маннозы, фруктозы, полисахаридов (рис. 1,2).

Сравнительный анализ методов количественного определения кислоты аскорбиновой в плодах шиповника.

Для определения содержания кислоты аскорбиновой в плодах шиповника различными методами использовали сырье одной серии. Анализ проводили

1) титримсгричсски, согласно методике ГФ XI издания, статья „Плоды шиповника";

2) спекгрофотометрически, согласно ФС 42-3285-96 „Экстракт шиповника сухой";

3) методом йодомстрического титрования по методике ГФ XI, вып. 2, общая статья „Определение содержания аскорбиновой кислоты"; 4) методом ВЭЖХ, согласно методике ГФ XI издания, статья „Плоды шиповника", изменение №4.

Проведенный сравнительный анализ методов количественного определения (табл. 1) показывает возможность их использования для анализа кислоты аскорбиновой в плодах шиповника, вследствие сопоставимости результатов.

Таблица 1.

Содержание кислоты аскорбиновой вп.тодах шиповника, определённое различными методами.

Метод количественного определения Содержание кислоты аскорбиновой,%

1. Титримегрия (фармакопейная методика) 0,31±0,02

2. Иодометрия 0,31±0,02

3. Спектрофотометрия 0,28±0,02

4. ВЭЖХ 0,304±0,012

Для последующих исследований нами были использованы метод ВЭЖХ как наиболее точный и воспроизводимый ' (табл. 2) и титрование 2,6-дихлорфенолиндофенолятом натрия (фармакопейный метод для растительного сырья).

пи Э'Н

^М И II 1111 |11)Ц1111| ИМ 1111 II 1.1 II14 II II II 11111 И И III ПН 1П1111 |Ц| I II II

Я » « Л Й Л Л пип

Хроматограмма аскорбиновой кислоты плодов шиповника.

Хроматограмма спиртового извлечения из плодов шиповника. 1 - галловая кислота; 2 - хлорогеновая кислота; 3 - кофейная кислота; 4 - бензойная кислота; 5 - рутин; 6 - квсрцетин.

5

Хроматограмма спиртового извлечения из экстракта шиповника. 1 - галловая кислота; 2 - хлорогеновая кислота; 3 - кофейная кислота; 4 - бензойная кислота;''5 - рутин; 6 - кверцетин.

Хроматограмма органических кислот и Сахаров в плодах шиповника. 1 - полисахариды; 2 - лимонная кислота; 3 - яблочная кислота; 4 - сахароза; 5 - глюкоза; б - манноза; 7 - фруктоза.

Хроматограмма органических кислот и Сахаров экстракта шиповника. 1 - полисахариды; 2 - лимонная кислота; 3 - яблочная кислота; 4 - сахароза; 5 - глюкоза; 6 - манноза; 7 - фруктоза.

Таблица 2.

Метрологические характеристики методик количественного определения аскорбиновой кислоты в плодах шиповника.

Г 1 х в 1 Эх" | Р,% | и(р,0 1 Дх ±Е,%

Титрование 2,6-дихлорфенолиндофенолятом ¡атрия

4 I 0,31 0,018 | 0,008 | 95 | 2,78 1 0,02 6,5

Спектрофотометрия

4 ! 0,2В 0,023 | 0,009 | 95 | 2,78 | 0,02 7,2

Иодометрия

4 1 0,31 0,019 | 0,008 | 95 [ 2,78 1 0,02 6,5

ВЭЖХ

4 | 0,304 0,009 | 0,004 | 95 | 2,78 | 0,012 3,95

Количественная оценка водорастворимых

БАВ в плодах шиповника. Результаты хроматографического анализа показали присутствие в плодах шиповника фснольных соединений (флавоноиды, фенолкарбоновые кислоты), органических кислот, Сахаров.

Изучение содержания БАВ в плодах шиповника проводили методом ВЭЖХ с

использованием стандартных образцов. Данные приведены в таблице 3.

Таблица 3.

Содержание БАВ в плодах и экстракте шиповника.

Название группы БАВ Содержание БАВ, %

Плоды Экстракт

Аскорбиновая кислота 0,304±0,012 1,98±0,04

Флавоноиды 0,142±0,06 0,44±0,016

Фенолкарбоновые кислоты, мг % 1,39±0,07 3,32±0,15

Органические кислоты 4,36±0,16 7,2±0,2

Сахароза 0,10±0,003 0,45±0,01

Глюкоза 0,45±0,02 2,64±0,04

Манноза 0,32±0,004 2,5±0,05

Фруктоза 1,(Ш),04 6,2±0,1

Полисахариды 11,46±0,14 19,6±0,61

Изучение состава гидрофильной фракции растительного сырья показало, что плоды шиповника представляют природный источник фенольных соединений, аскорбиновой и органических кислот, Сахаров. Полученные данные свидетельствуют

о преобладании в плодах шиповника полисахаридов, органических и аскорбиновой кислот.

Изучение аминокислотного и микроэпементного состава плодов шиповника.

В плодах шиповника определяли содержание аминокислот и макро- и микроэлементов, которые участвуют в регуляции обменных процессов, работе систем и органов, усиливая биологические свойства растительного сырья.

Аминокислотный состав плодов шиповника определяли с использованием внутреннего стандарта до и после гидролиза. Колориметрическое измерение окрашенных комплексов, образующихся в результате реакции с ниигидрином, проводили при длине волны 570 нм. Для количественной оценки определяли (автоматически) площади пиков идентифицированных аминокислот. В плодах шиповника идентифицировано 16 свободных и 18 связанных аминокислот, в том числе незаменимых (рис. 3), суммарное содержание которых составило 0,86±0,04 % и ] ,21 ±0,06 % соответственно (табл. 5).

Элементный анализ проводили с использованием поляризующего зеемановского агомно-абсорбционного спектрофотометра. Содержание натрия и калия определяли плазменно-эмиссионным методом, содержание других металлов -методом плазменной атомной абсорбции с атомизацией пробы в воздушно-ацетиленовом пламени. Проведенные исследования показали, что плоды шиповника содержат 13 элементов, среди которых присутствуют микроэлементы (железо, цинк, кобальт), регулирующие работу органов и систем организма человека (табл. 6).

Анализ растительных сборов с плодами шиповника.

Плоды шиповника включены в состав многих сборов. Анализ нормативной документации (НД) на сборы показывает, что их стандартизация проводится по эфирным маслам, экстрактивным веществам, либо вообще отсутствует. Кроме того, не учитывается лекарственная форма, получаемая из сбора (настой, отвар). В связи с этим, целесообразно проводить стандартизацию сборов по водорастворимым компонентам, например аскорбиновой и органическим кислотам. Данные показатели могут представлять интерес для сборов, в состав которых входит лекарственное

ли

I

10 40 за 40 СО 7в «I М яж

Хроматограмма аминокислотного состава гидрофильной фракции плодов шиповника.

Хроматограмма аминокислотного состава экстракта шиповника сухого.

растительное сырье, стандартизуемое по содержанию аскорбиновой и органических кислот (плоды шиповника, рябины). Следует учитывать, что названные соединения широко распространены в других видах лекарственного растительного сырья (цветки гибискуса, ромашки, трава зверобоя, плоды черники и др.).

Количественную оценку аскорбиновой и органических кислот в сборах проводили по фармакопейным методикам определения этих БАВ в плодах шиповника. Параллельно определяли содержание БАВ в отварах из сборов. Результаты исследования приведены в таблице 4.

Полученные результаты показывают возможность использования для стандартизации сборов с плодами шиповника показателей „Содержание органических кислот" и „Содержание аскорбиновой кислоты".

Таблица 4.

Содержание аскорбиновой и органических кислот в сборах с плодами шиповника и отварах из них.

Название сбора Содержание, %

Плоды шиповника в сборе Аскорбиновая кислота Органические кислоты

Сбор Отвар Сбор Отвар

цветки гибискуса плоды шиповника 60 0,57±0,02 0,035±0,002 7,1±0,33 0,17±0,02

цветки гибискуса плоды шиповника 70 0,59±0,03 0,032±0,001 7,24±0,2 0,19±0,01

Витаминный №2 - плоды рябины - плоды шиповника 50 0,51 ±0,03 0,025±0,001 7,4±0,6 0,28±0,04

Витаминный №1 - плоды черной смородины - плоды шиповника 50 0,50±0,01 0,017±0,001 6,28±0,16 0,12±0,01

„Бруснивер" 40 0,35±0,02 0,012±0,001 4,0±0,2 0,1б±0,02

„Ролекрамин" 25 0,24±0,01 0,009±0,001 3,80±0,14 0,14±0,015

„Арфазетип" 15 0,09±0,005 — 3,10±0,13 0,125±0,013

„Мирфазин" 7,14 0,05±0,003 — 2,80±0,07 0,12±0,013

Исследование экстракта шиповника сухого (ЭШС).

Отработку технологии получения сухого экстракта в опытно-промышленных условиях проводили на оборудовании производственно-экспериментального завода „Биохиммаш".

ЭШС был получен экстракцией измельченного (1 мм) растительного материала водой, подкисленной 1 % раствором хлористоводородной кислоты, при температуре 45±5 °С, в течение трех часов.

Полученный ЭШС представляет собой порошок светло-коричневого цвета со специфическим запахом и слабо кислым вкусом, хорошо растворимый в горячей воде (при температуре 40°С) в соотношении 1:5, 1:10, плохо растворим в 50 и 70% этаноле, практически не растворим в 96% этаноле, хлороформе, этилацетате, ацетоне, эфире; насыпная масса при свободном падении - 0,44 г/см3, при уплотнении - 0,70 г/см3; сыпучесть - 1,80 г/с; угол естественного откоса - 40°; потеря в массе при высушивании не более 4,5%.

В ходе хроматографического анализа (ТСХ) со стандартными образцами в ЭШС обнаружены аскорбиновая кислота (1^=0.60), рутии (ЯГ=0,72) и кверцетин (К1=0,90). Результаты качественной хроматографии были подтверждены при анализе аскорбиновой кислотьги флавонондов методом ВЭЖХ. Кроме того, данным методом показано присутствие в ЭШС: галловрй, хлорогеновой, кофейной, бензойной кислот, полисахаридов, глюкозы, сахарозы, маннозы, фруктозы, лимонной и яблочной кислот (рис. 1, 2).

При проведении количественной оценки идентифицированных БАВ в ЭШС (табл. 3) определено содержание аскорбиновой кислоты, флавоноидов (рутина и кверцетина), фенолкарбоновых кислот, органических кислот (лимонной и яблочной), полисахаридов, глюкозы, сахарозы, маннозы и фруктозы.

Изучение аминокислотного и микроэлементного состава ЭШС.

Аминокислоты являются водорастворимыми соединениями, следовательно, будут переходить в экстракт шиповника. Присутствие в плодах шиповника свободных и связанных аминокислот позволило нам провести исследование качественного состава и количественное определение аминокислот в ЭШС. Аминокислотный анализ определяли аналогично анализу плодов шиповника. В ходе

исследований было установлено, что содержание аминокислот до гидролиза в ЭШС составило 1,02±0,06 %, среди которых преобладали аспарагиновая и глютаминовая кислоты. После гидролиза содержание аминокислот увеличилось до 2,61 ±0,14 % (табл. 5).

Определение минерального состава ЭШС проводили аналогично анализу растительного сырья. Исследования показали, что преобладающими макроэлементами в ЭШС являются магний, калий, кальций, микроэлементами -цинк, железо, марганец, что благоприятно будет сказываться на фармакологических свойствах ЭШС (табл. 6).

Таблица 5.

Содержание аминокислот в плодах и экстракте шиповника

Название аминокислоты Содержание аминокислот, %

Плоды Экстракт

До гидролиза После гидролиза До гидролиза После гидролиза

Аспарагиновая кислота 0,21 0,35 0,30 0,56

Треонин 0,05 0,07 0,06 0,12

Серии 0,06 0,09 0,08 0,17

Глютаминовая кислота 0,20 0,24 0,20 0,37

Пролин 0,09 0,10 0,09 0,15

Глицин 0,05 0,06 0,05 0,11

Алании 0,06 0,07 0,05 0,11

Цистеин 0,04 0,05 0,04 0,09

Валин 0,01 0,02 0,02 0,03

Метионин 0,04 0,05 0,04 0,07

Изолейцин 0,006 0,008 0,007 0,014

Лейцин 0,012 0,019 0,016 0,037

Тирозин 0,008 0,013 0,01 0,02

Фенилаланин 0,009 0,012 0,011 0,595

Лизин 0,024 0,031 0,026 0,05

Гистидин 0,005 0,007 0,006 0,012

Триптофан Следы 0,017 0,014 0,031

Аргенин Следы 0,025 0,021 0,045

Сумма 0,86 1,21 1,02 2,61

Таблица 6.

Минеральный состав плодов и экстракта шиповника

Элемент Содержание элементов в мг/кг Элемент Содержание элементов в мг/кг

Плоды Экстракт Плоды Экстракт

Калий 14550 29890 Цинк 0,27 200

Кальций 5775 5304 Никель 0,12 3,64

Магний 1730 10207 Хром 0,04 1,69

Натрий 26 ИЗ Медь 1,18 9,68

Железо 53 663 Свинец 0,05 1,91

Марганец 0,22 10,8 Кадмий 0,006 0,048

Кобальт- 0,97 0,193 Зола, % 3,55 7,80

Данные проведенных исследований свидетельствуют, что все БАВ, содержащиеся в плодах шиповника, переходят в сухой экстракт, следовательно, ЭШС можно рассматривать как комплексный растительный препарат с ценным набором БАВ, хорошо растворимых в воде.

Исследование водных извлечений из плодов и экстракта шиповника.

Из цельных плодов шиповника согласно инструкции по применению должны готовить настой (соотношение сырья и экстрагента 1:20).

Настой представляет собой жидкость светло-коричневого цвета, слабокислого вкуса, без запаха, с рН=5,0.

Отвар из измельченных плодов шиповника, приготовленный фармакопейным способом, представлял собой жидкость коричневого цвета, кислого вкуса, со слабым неспецифическим запахом и рН=4,0.

Из экстракта шиповника готовили водный раствор в соотношении 1:100. Проведенный анализ' показал, что отвар из плодов шиповника и водный раствор ЭШС имеют схожие органолептические показатели.

Определено содержание аскорбиновой кислоты, которое составило в отваре -0,01б±0,001%, настое - 0,006±0,0005%, водном растворе ЭШС - 0,017±0,0009%.

Нами установлено, что по органолепгическим показателям настои и отвары практически не отличаются, а но содержанию основного действующего вещества

настой значительно уступает отвару. Поэтому для практического применения можно рекомендовать отвар и водный раствор экстракта-концентрата.

Фармакологическая активность водных извлечений обусловлена не только аскорбиновой кислотой. Лечебный эффект также оказывают соединения, обладающие Р-витаминными свойствами. Поэтому мы сочли целесообразным провести анализ содержания фенольных соединений в отваре из плодов шиповника и водном растворе ЭШС (табл. 7).

Как видно из таблицы, в отваре из плодов шиповника и водном растворе ЭШС идентифицированы рутин, кверцетин, фенолкарбоновые кнелоты, проведена количественная оценка БАВ.

Таблица 7

Содержание фенольных соединений в исследусмьгх отварах.

Наименование вещества Содержание в образце, мг/100 мл

Отвар Водный раствор

1.рутин 4,53±0,21 5,83±0,22

2. кверцетин 1,1±0,04 1,07±0,05

3. галловая кислота 0,085±0,004 0,115±0,005

4. хлорогеновая кислота 0,091±0,0035 0,156±0,006

5. кофейная кислота 0,072±0,004 0,119±0,005

6. бензойная кислота •0,018±0,0008 0,027±0,001

Результаты проведенных исследований показали, что ЭШС может быть использован как концентрат для получения водного раствора шиповника, равноценного по содержанию действующих веществ и органолептическим показателям отвару, приготовленному непосредственно из плодов шиповника.

Исследование по разработке пищевого продукта, обогащенного аскорбиновой кислотой.

Получение и выпуск, сегодня, продуктов питания с введенными в них пищевыми добавками растительного происхождения позволило нам совместно с кафедрой технологии кондитерского производства МГУПП провести исследования по созданию пищевого продукта, обогащенного экстрактом шиповника.

Для введения экстракта в качестве пищевой добавки выбраны кондитерские изделия. Разработана рецептура, получены экспериментальные образцы помадных конфет с ЭШС. В готовом продукте определяли влажность, содержание восстанавливающих Сахаров, органолептические показатели. Полученные помадные конфеты отвечали требованиям ГОСТа 4570-93 „Конфеты".

При расчёте рецептуры содержание кислоты аскорбиновой, вводимой с ЭШС, в одной единице продукции должно составлять 16 мг/100 г помадной массы (ЭШС вводили в количестве 8,0 % от массы всех рецептурных компонентов). Содержание кислоты аскорбиновой в помадных конфетах с ЭШС определяли методом ВЭЖХ и титриметрически (табл. 8).

I

Таким образом, предложенный способ получения помадных конфет обеспечивает сохранение кислоты аскорбиновой в течение установленного срока хранения.

Впервые разработанные нами рецептуры витаминизированных кондитерских изделий и технологические инструкции для их производства защищены патентом РФ №2160011 „Способ производства сахаристых кондитерских изделий" от 06.04.2000 г.

Способ производства сахаристых кондитерских изделий предусматривает смешивание компонентов, обозначенных рецептурой, с введением в смесь порошка шиповника в количестве 6-10 % от общей их массы, полученного экстракцией измельченного сырья водой, с последующей его сушкой. Способ отличается тем, что при использовании данной добавки для таких изделий как карамель, или помадные корпуса конфет, или фруктовые корпуса конфет смесь компонентов массы изделий охлаждают до температуры 50-60 °С.

Таблица 8.

Показатели качества помадных конфет с ЭШС.

Наименование показателя Значения показателей качества помады, содержащей ЭШС в количестве, %

6 7 8 9 10

Влажность, % 8,0±0,03 8,1±0,02 8,2±0,02 7,9±0,03 8,1±0,02

Содержание редуцирующих веществ, % 7,99±0,02 7,99±0,02 8,0±0,01 8,0±0,02 8,1 ±0,02

Оргаиолептические показатели Поверхность конфет при 1=20°С Гладкая, розовая, блестящая, не липкая.

Цвет Светло-коричневый Коричневый

Консистенция Мягкая, в изломе однородная Твёрдая, в изломе однородная

Вкус и аромат Сладкий вкус шиповника выражен незначительно Сладкий, присутствует привкус шиповника Кисло-сладкий вкус и аромат соответствуют вкусу шиповника Кисло-сладкий, ярко выраженный вкус и аромат шиповника Кислый, ярко выраженный вкус и аромат шиповника

Содержание кислоты аскорбиновой,% Не определяли 0,017±0,001 Не определяли

ВЫВОДЫ

1. Для определения подлинности и доброкачественности проведено углублённое изучение химического состава плодов шиповника и экстракта шиповника сухого. Хроматографическими методами подтверждено присутствие в плодах шиповника и экстракте шиповника кислоты аскорбиновой, фенолкарбоновых кислот (галловой, хлорогеновой, кофейной

и бензойной), лимонной и яблочной кислот, сахарозы, глюкозы, маннозы, фруктозы, полисахаридов, аминокислот, минеральных веществ.

2. Проведён сравнительный анализ методов количественного определения кислоты аскорбиновой (титрование раствором 2,6-дихлорфенолиндофенолята натрия, йодометрия, спектрофотометрия, ВЭЖХ) в плодах шиповника. Показана равноценная возможность их использования при стандартизации растительного сырья.

3. Проведено определение содержания биологически активных веществ в плодах и экстракте шиповника для установления их норм: аскорбиновой кислоты - 0,304*0.012%, 1,98*0.04%: фенольных соединений - 0.142*0,006%. 0,44±0,016%; органических кислот - 4,36*0,16%, 7,2*0,2%; полисахаридов -11,46*0,14%, 19,6*0,61%; глюкозы - 0,45*0,02%, 2,64*0,04%; сахарозы -0,10*0,003%, 0,45*0,01%; маннозы - 0,32*0,004%, 2,5*0,05%; фруктозы -1,0±0,04%о, 6,2*0,1%; аминокислот - свободных и связанных 0,86*0,04% и 1,21*0,06%, 1,02*0,06%) и 2,61*0,14% соответственно.

4. Определено содержание в отваре из плодов шиповника и водном растворе . экстракта шиповника: аскорбиновой кислоты - 16,0±0,9 мг %, 17,0*0,9 мг %;

фенольных соединений - 5,9*0,27 мг %, 7,33*0,29 мг %.

5. Установлено, что по своим органолептическим, качественным характеристикам и содержанию основных групп действующих веществ отвар из плодов шиповника и водный раствор экстракта шиповника сухого равноценны. Экстракт шиповника сухой предложено использовать в виде концентрата.

6. Определено содержание аскорбиновой и органических кислот в восьми официнальных сборах с плодами шиповника. Установлено, что показатели „Содержание аскорбиновой кислоты" и „Содержание органических кислот" могут быть использованы для оценки качества сборов и отваров, получаемых из сборов.

7. С целью стандартизации дополнены характеристики подлинности и показатели качества для плодов, отвара и экстракта шиповника, основанные на изучении состава и содержания биологически активных веществ.

8. Разработана рецептура и способ получения пищевого продукта с экстрактом шиповника сухим. Определены физико-химические показатели и содержание основных групп биологически активных веществ (кислота аскорбиновая, фенольпые соединения) в готовом продукте.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ:

1. Сергунова Е.В., Самылина И.А., Мухамеджанова Д.М. Определение содержания биологически активных веществ в плодах шиповника, экстракте шиповника сухом и пищевом продукте, обогащенном экстрактом шиповника сухим // Фармация на современном этапе -проблемы и достижения: Научные труды НИИ Фармации. - М. - 2000. - т. XXXIX. - ч. 2. - с. 269-271.

2. Сергунова Е.В., Самылина И.А. Изучение вопросов получения и контроль качества пищевого продукта с экстрактом шиповника сухим // Актуальные проблемы теории и практики фармации: Сб. науч. ст. -Барнаул: Изд-во Алт. ун-та, 2000 - с. 128-131.

3. Изучение возможности стандартизации сухих экстрактов из лекарственных сборов. Д.М. Мухамеджанова, И.А. Самылина, A.A. Сорокина, И.В. Лобанова, Е.В. Сергунова, A.A. Маркарян. // Тез. докл. Международной конференции „Фармация в XXI веке: инновации и традиции" 7-8 апреля 1999 г., С.-Петербург. - С.-П.: СПХФА, 1999. -с. 173-174.

4. Сергунова Е.В., Самылина И.А., Сорокина A.A. Лекарственное растительное сырьё - биологически активная добавка в кондитерских изделиях // Тез. докл. Международного семинара „Шоколад - 99" 1-3 июня 1999 г., Москва.: МГУПП, 1999. - с. 11-12.

5. Сергунова Е.В., Самылина H.A., Сорокина A.A. Изучение возможности использования экстракта шиповника для получения нового лекарственного средства // Тез. докл. Международной конференции „Фундаментальные науки и прогресс клинической

медицины" 24-28 апреля 20001 г., Москва.: ММА им. И.М.Сеченова, 2001.-с. 238-239.

6. Сергунова Е.В. Лекарственные растения как источник ценных биологически активных веществ в пищевых продуктах // Тез. докл. Международного семинара „Сырьё кондитерских изделий - 2000" 29 мая-3 июня 2000, Москва.: МГУПП, 2000. - с. 43-44.

7. Сергунова Е.В. Производство помадных конфет с повышенным содержанием витамина С // Тез. докл. конференции "Проблемы повышения конкурентоспособности кондитерских изделий" 19 октября 2000 г., Москва.: МГУПП, 2000.-е. 23-25.

8. Сергунова Е.В., Самылина И.А., Сорокина A.A. Разработка пищевого продукта, обогащенного аскорбиновой кислотой./ - Фармация, 2001.-№2.-с. 35-36.

9. Сергунова Е.В., Самылина И.Л., Сорокина A.A. Количественное определение аскорбиновой кислоты в растительных сборах с плодами шиповника. // Материалы научно-практ. конференции, посвящен. 35-летию фармацевтического факультета: „Достижения, проблемы, перспективы фармацевтической науки". - Курск, 2001. -с. 150-151.

 
 

Оглавление диссертации Сергунова, Екатерина Вячеславовна :: 2002 :: Москва

Введение

Глава 1 Обзор литературы

1 1 Ботанико-морфологическая характеристика представителей рода Rosa L

1 2 Химический состав и фармакологическая активность плодов шиповника

1 3 Применение и лекарственные препараты плодов шиповника

I 4 Методы анализа кислоты аскорбиновой в лекарственном растительном сырье (ЛРС)

1 5 Современное состояние получения и стандартизации настоев и отваров

1 6 Современное состояние получения и стандартизации сухих экстрактов Номенклатура

1 7 Использование лекарственных растений в пищевой промышленности

1 7 1 Использование плодов шиповника в пищевой промышленности

1 8 Выводы из литературного обзора 41 Экспериментальная часть 43 Объекты и методы исследования

Глава 2 Изучение состава гидрофильной фракции плодов шиповника

2 1 Качественный анализ 46 2 2 Сравнительный анализ методов количественного определения кислоты аскорбиновой в плодах шиповника

2 2 1 Количественное определение кислоты аскорбиновой титриметрическим методом

2 2 2 Определение содержания кислоты аскорбиновой методом спектрофотометрии

2 2 3 Количественный анализ кислоты аскорбиновой методом йодометрии

2 2 4 Анализ кислоты аскорбиновой в плодах шиповника методом ВЭЖХ

2 3 Анализ плодов шиповника на содержание фенольных соединений

2 3 1 Определение содержания суммы флавоноидов спектрофото^етрическим методом

2 3 2 Количественное определение флавоноидов и фенолкарбоновых кислот методом ВЭЖХ

2 4 Анализ органических кислот и Сахаров в плодах шиповника

2 4 1 Идентификация и количественное определение органических кислот и Сахаров методом ВЭЖХ

2 4 2 Определение содержания органических кислот титриметрическим методом

2 5 Анализ плодов шиповника на содержание аминокислот

2 6 Определение минерального состава плодов шиповника

Глава 3 Анализ растительных сборов с плодами шиповника

3 1 Определение содержания кислоты аскорбиновой в сборах и отварах

3 2 Определение содержания органических кислот в сборах и отварах

Глава 4 Исследование экстракта шиповника сухого (ЭШС)

4 I Качественный анализ экстракта шиповника сухого

4 2 Определение содержания кислоты аскорбиновой в экстракте шиповника сухом 8В

4 2 1 Анализ кислоты аскорбиновой в ЭШС с титриметрическим методом

4 2 2 Определение содержания кислоты аскорбиновой в ЭШС методом ВЭЖХ

4 3 Анализ экстракта шиповника сухого на содержание фенольных соединений

4 3 1 Определение содержания суммы флавоноидов в ЭШС спектрофотометрическим методом

4 3 2 Количественное определение флавоноидов и фенолкарбоновых кислот методом ВЭЖХ

4 4 Анализ органических кислот и Сахаров в экстракте шиповника сухом

4 4 1 Идентификация и количественное определение Сахаров и органических кислот методом ВЭЖХ

4 4 2 Определение содержания органических кислот титриметрическим методом

4 5 Анализ экстракта шиповника сухого на содержание аминокислот

4 6 Определение золы и минерального состава экстракта шиповника сухого

Глава 5 Исследование водных извлечений из плодов экстракта шиповника

5 1 Установление характеристик подлинности отвара из плодов шиповника

5 2 Определение качественных характеристик водного раствора ЭШС

5 3 Определение содержания кислоты аскорбиновой в отваре из плодов шиповника и растворе ЭШС

5 3 1 Титриметрический метод определения содержания кислоты аскорбиновой в отваре и растворе 1 (

5 3 2 Анализ содержания кислоты аскорбиновой в отваре и растворе методом ВЭЖХ

5 4 Определение содержания флавоноидов и фенолкарбоновых кислот в отваре из плодов шиповника и растворе ЭШС 115 5 4 1 Определение содержания флавоноидов в отваре спектрофотометрическим методом

5 4 2 Определение содержания фенолкарбоновых кислот, рутина и кверцетина в отваре и растворе методом ВЭЖХ

Глава 6 Исследование по разрабогке пищевого продукта, обогащенного кислотой аскорбиновой

6 I Разработка рецептуры и получение помадных конфет с

6 2 Определение физико-химических показателей помадных конфег с ЭШС

6 3 Анализ помадных конфет с ЭШС на содержание биологически активных веществ

6 3 1 Определение содержания кислоты аскорбиновой в сахарной помаде с ЭШС

6 3 11 Титриметрический метод определения содержания кислоты аскорбиновой

6 3 12 Количественное определение кислоты аскорбиновой методом ВЭЖХ в помадных конфетах с ЭШС

6 3 2 Определение содержания фенольных соединений в сахарной помаде с ЭШС

 
 

Введение диссертации по теме "Фармацевтическая химия и фармакогнозия", Сергунова, Екатерина Вячеславовна, автореферат

Актуальность темы. Лекарственное растительное сырьё является одним из источников получения лекарственных средств. Расширение ассортимента лекарственных препаратов из лекарственного растительного сырья и повышение интереса к фитотерапии в целом связано с доступностью, отсутствием токсичности, низкой частотой побочных эффектов растительного сырья. Развивается направление использования лекарственного растительного сырья, как природного источника ценных биологически активных веществ, в качестве добавки к пище.

Плоды шиповника за счёт богатого химического состава и разнообразной биологической активности широко применяются в медицинской практике. Из плодов шиповника получают препараты с комплексом гидрофильных и липофильных биологически активных веществ: на производстве - препараты „Холосас" и „Каротолин", сироп, экстракт. Плоды шиповника поступают в аптеку для безрецетурного отпуска в виде фасованного сырья для приготовления водных извлечений, входят в состав сборов, из которых в домашних условиях готовят отвары.

Однако вопросы стандартизации по комплексу биологически активных веществ рассмотрены недостаточно, нормативная документация предусматривает стандартизацию растительного сырья только по содержанию аскорбиновой кислоты. В этой связи, является актуальной задачей изучение комплекса биологически активных веществ плодов шиповника с целью использования данных о химическом составе для совершенствования вопросов стандартизации растительного сырья и лекарственных форм на его основе.

Цель настоящего исследования заключается в проведении у| тублённых комплексных исследований по стандартизации плодов шиповника и лекарственных форм на его основе.

Постановка задач и выбор средств для их решения:

Для осуществления поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

- изучить литературные данные по вопросам химического состава, биологической активности плодов шиповника; использования методов анализа кислоты аскорбиновой в лекарственном растительном сырье; стандартизации лекарственных форм на основе растительного сырья; использования плодов шиповника в качестве пищевой добавки;

- провести сравнительный качественный анализ плодов шиповника, отваров и экстракта на содержание основных групп биологически активных веществ;

- провести оценку существующих методик количественного определения кислоты аскорбиновой в плодах шиповника и лекарственных формах;

- провести сравнительное изучение содержания биологически активных веществ в плодах и экстракте шиповника;

- изучить возможность стандартизации сборов с плодами шиповника по показателям „Содержание кислоты аскорбиновой" и „Содержание органических кислот" для оценки их качества;

- разработать качественные и количественные характеристики водных извлечений из плодов шиповника и экстракта шиповника. Оценить возможность использования экстракта шиповника как концентрата;

- изучить возможность получения пищевого продукта, обогащенного экстрактом шиповника.

Решение задач осуществлялось путём обобщения данных литературы и проведения экспериментальных исследований.

Научная новизна. Для стандартизации плодов шиповника и лекарственных форм на его основе с использованием комплекса методов (ВЭЖХ, ТСХ, атомно-абсорбционная спектроскопия, титриметрические, спектрофотометрия, использование аминокислотного анализатора) к определено содержание и идентифицированы кислота аскорбиновая, рутин, кверцетин, галловая, хлорогеновая, кофейная, бензойная кислоты, лимонная и яблочная кислоты, полисахариды, сахароза, глюкоза, манноза, фруктоза, свободные и связанные аминокислоты, макро- и микроэлементы в плодах шиповника и экстракте шиповника. Даны подробные качественные и количественные характеристики фенолкарбоновых кислот, органических кислот, Сахаров, аминокислот для плодов шиповника и экстракта шиповника.

В процессе исследований в сравнительном аспекте титриметрического, йодометрического, спектрофотометрического и ВЭЖХ методов показана равноценная возможность их использования для анализа кислоты аскорбиновой в плодах шиповника и лекарственных форм на его основе. Наиболее оптимальными для анализа являются метод ВЭЖХ и титриметрический.

Проведено изучение отвара плодов шиповника с использованием физико-химических методов. Даны качественные характеристики, определено содержание действующих веществ. В результате исследований экстракта шиповника показано, что он может быть использован для получения водного раствора, не уступающего по качеству отвару, приготовленному непосредственно из плодов.

Показана возможность использования показателей „Содержание аскорбиновой кислоты" и „Содержание органических кислот" для стандартизации сборов с плодами шиповника и оценки качества получаемых из сборов водных извлечений.

Разработана рецептура и получены экспериментальные образцы кондитерского изделия (помадные конфеты) с экстрактом шиповника. Рецептуры витаминизированных кондитерских изделий и технологические инструкции для их производства защищены патентом №2160011 „Способ производства сахаристых кондитерских изделий" от 06.04.2000 г.

Практическая значимость работы. На основании проведенных исследований апробированы и внедрены:

- в лаборатории ОАО „Красногорсклексредства" методики количественного определения аскорбиновой кислоты и органических кислот в сырье и отваре шиповника, сборах с плодами шиповника („Арфазетин", „Бруснивер", „Бруснивер-Т") и отварах из них, а также в чайных напитках „Мальвовый" и „Витаминный", выпускаемых ОАО „Красногорсклексредства";

- на ЗАО „ККФ" технология производства помадных конфет с экстрактом шиповника.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 9 научных работ. На защиту выносится:

- результаты изучения состава и определения содержания биологически активных веществ (аскорбиновой и органических кислот, полисахаридов, флавоноидов, фенолкарбоновых кислот, микроэлементов, аминокислот) в плодах и экстракте шиповника;

- результаты определения содержания биологически активных веществ в растительных сборах с плодами шиповника;

- данные по изучению водных извлечений из плодов и экстракта шиповиика;

- результаты исследований по разработке пищевого продукта, обогащенного аскорбиновой кислотой.

Апробация диссертации. Основные положения диссертации доложены на международном семинаре „Сырьё кондитерских изделий - 2000" (Москва, 2000 г), на II конференции молодых учёных России „Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины (Москва, 2001г).

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтической науки. Диссертационная работа выполнена в соответствии с тематикой и планом НИР кафедры фармакогнозии ММА им. И.М. Сеченова по теме: „Фармакогностическое изучение лекарственного растительного сырья, лекарственных сборов, лекарственных форм из сырья и разработка методов их стандартизации с учётом влияния антропогенных факторов" (код темы 0407093).

Объём и структура диссертации. Работа изложена на 150 страницах машинописного текста, содержит 32 таблицы и 27 рисунков.

Работа состоит из введения, обзора литературы, пяти экспериментальных глав, библиографии из 149 наименований, из которых 16 на иностранных языках.

Во введении раскрыта актуальность темы, определены цель и задачи исследования, сформулированы научная новизна и практическая значимость работы.

В первой главе на основании данных литера!уры рассмотрены сведения о ботанико-морфологической характеристике видов шиповника; химическом составе, фармакологической активности и медицинском применении плодов шиповника, методах анализа кислоты аскорбиновой в растительном сырье; вопросах стандартизации водных извлечений и сухих экстрактов, получаемых из растительного сырья; использование лекарственных растений в пищевой промышленности

Вторая глава посвящена изучению состава гидрофильной фракции плодов шиповника.

В третьей главе излагаются результаты исследований по анализу растительных сборов с плодами шиповника и отваров, приготовленных из них.

В четвёртой главе приводятся результаты исследований экстракта шиповника сухого: технология получения экстракта, углублённое изучение качественного состава и количественная оценка водорастворимых биологически активных веществ экстракта шиповника сухого.

В пятой главе рассмотрены результаты исследования водных извлечений из плодов шиповника и экстракта шиповника сухого по установлению характеристик подлинности и доброкачественности, сравнигельной оценки

Шестая глава посвящена исследованиям по разработке пищевого продукта, обогащенного кислотой аскорбиновой

 
 

Заключение диссертационного исследования на тему "Исследования по стандартизации плодов шиповника и лекарственных форм на его основе"

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1. Для определения подлинности и доброкачественности проведено углублённое изучение химического состава плодов шиповника и экстракта шиповника сухого. Хроматографическими методами подтверждено присутствие в плодах шиповника и экстракте шиповника кислоты аскорбиновой, фенолкарбоновых кислот (галловой, хлорогеновой, кофейной и бензойной), лимонной и яблочной кислот, сахарозы, глюкозы, маннозы, фруктозы, полисахаридов, аминокислот, минеральных веществ.

2. Проведён сравнительный анализ методов количественного определения кислоты аскорбиновой (титрование раствором 2,6-дихлорфенолиндофенолята натрия, йодометрия, спектрофотометрия, ВЭЖХ) в плодах шиповника. Показана равноценная возможность их использования при стандартизации растительного сырья.

3. Проведено определение содержания биологически активных веществ в плодах и экстракте шиповника для установления их норм: аскорбиновой кислоты - 0,304±0,012%, 1,98*0,04%; фенольных соединений - 0,142*0,006%, 0,44*0,016%; органических кислот -4,36*0,16%, 7,2*0,2%; полисахаридов - 11,46*0,14%, 19,6*0,61%; глюкозы - 0,45±0,02%, 2,64±0,04%; сахарозы - 0,10*0,003%, 0.45*0,01%; маннозы - 0.32*0.004%. 2,5*0,05%; фруктозы - 1,0*0,04%, 6,2*0,1%; аминокислот - свободных и связанных 0,86*0,04% и 1,21*0,06%, 1,02*0,06% и 2,61*0,14% соответственно.

4. Определено содержание в отваре из плодов шиповника и водном растворе экстракта шиповника: аскорбиновой кислоты - 16,0*0,9 мг %, 17,0*0,9 мг %; фенольных соединений - 5,9*0,27 мг %, 7,33*0,29 мг %.

5. Установлено, что по своим органолептическим, качественным характеристикам и содержанию основных групп действующих веществ отвар из плодов шиповника и водный раствор экстракта шиповника сухого равноценны. Экстракт шиповника сухой предложено использовать в виде концентрата.

6. Определено содержание аскорбиновой и органических кислот в восьми официнальных сборах с плодами шиповника. Установлено, что показатели „Содержание аскорбиновой кислоты" и „Содержание органических кислот" могут быть использованы для оценки качества сборов и отваров, получаемых из сборов.

7. С целью стандартизации дополнены характеристики подлинности и показатели качества для плодов, отвара и экстракта шиповника, основанные на изучении состава и содержания биологически активных веществ.

8. Разработана рецептура и способ получения пищевого продукта с экстрактом шиповника сухим. Определены физико-химические показатели и содержание основных групп биологически активных веществ (кислота аскорбиновая, фенольные соединения) в готовом продукте.

 
 

Список использованной литературы по фармакологии, диссертация 2002 года, Сергунова, Екатерина Вячеславовна

1. Акопов И.Э. Важнейшие лекарственные растения и их применение. М.: Медицина. 1986. - 235 с.

2. Аксенова Э.Н. Фармацевтический анализ препаратов из группы водорастворимых витаминов современными физико-химическими методами: Автореф. дис. канд. фарм. наук. М., 1969. - 23 с.

3. Анализ водорастворимых витаминов В|, Вг, Вб, С и никотинамида в драже „Гексавит" методом ВЭЖХ. / C.B. Ульянова, А.Н. Изавлинский, С.Н. Морев и др./. Фармация, 1993. - №3. - С. 50-51.

4. Анализ и стандартизация водорастворимых витаминов. / А.И. Лутцева, Л.Г. Маслов, Н.С. Евтушенко, В.И. Середенко. Фармация, 1998. - № 5. -С. 22 - 29.

5. Анализ качества некоторых водорастворимых витаминов методом дифференциальной сканирующей колориметрии. / M Ш.Львова, А.Н.Щавлинский и др. /. Фармация, 1998. - №3. - С. 26-29.

6. Аникина Е.В. Физико-химическая характеристика экстрактов из некоторых видов лекарственных растений как пищевых добавок. Раст. ресурсы, 1996.-№4.-С. 30-36.

7. Ахрем A.A., Кузнецова А.И. Тонкослойная хроматография. М.: Наука. 1964,- 176 с.

8. Беленький Б.Г. Об определении содержания кислоты аскорбиновой в крови по Тильмансу//Лабораторное дело, 1957, №6. - С. 7-11.

9. Беликов В.В., Шрайбер М.С. Методы анализа флавоноидных соединений // Фармация.-1970.- №1.-С.68-72.

10. Ю.Боссэ Г.Г. Витаминоносные растения СССР и их пищевое использование. М., 1943.- 105 с.

11. Ботанико-фармакогностический словарь / К.Ф. Блинова, H.A. Борисова, Г.Б. Гортинский и др.: Под. ред. К.Ф. Блиновой, Г.П. Яковлева. М.: Высш. шк., 1990, - 272 с.

12. Браженко A.B. Разработка состава, технологии и биофармацевтическое исследование мягких лекарственных форм с препаратами плодов шиповника: Дис. кап \ фарм. наук. Уфа, 1989, - 168 с.

13. Букин В.Н. Витамины. 2-е изд., доп. М.; Л.: Кн. Изд-во, 1941. 472 с.

14. Вадова В.А., Бейдер Т.Н., Янишевская М.В. Динамика накопления витамина С в плодах шиповника // Витамины в теории и практике. Л.; М., 1941 а.-С. 170-176.

15. Вадова В.А., Меньшиков В.Н., Янишевская М.В. Об изменчивости химического состава шиповника//Там же, 1941 б.-С. 165-169.

16. Вадова В.А., Плинер В.А. Витамины С и Р в плодах шиповника // Витамины в теории и практике. Л., М., 1953. с.119-121.

17. Васильев A.B. Фотоэлектроколориметрическое определение аскорбиновой кислоты в растительных продуктах // Сан-гиг. методы исследований: Тез. 11-ой научн. практ конф.-Пермь, 1987, С.39-41.

18. Васильев И.Б. Разработка технологии и норм качества жидких и сухих экстрактов листьев брусники: Автореф. дис. канд. фарм. наук. М., 1997. -21с.

19. Волгарев М.Н., Тутельян В.А. Питание и здоровье населения России. // Биологически активные добавки нутрицевтики и их использование с профилактической и лечебной целью: III Международный симпозиум, 2526 ноября, 1997 г. Тюмень, 1997, - 135 с.

20. Ворошилов В.Н. Род Rosa L. Роза или шиповник. М.: наука, 1979. С. 324327.

21. Георгиевский В.П. Физико-химические методы в стандартизации сырья и фотохимических препаратов // Новые лекарственные препараты израстений Сибири и Дальнего Востока: Тез. докл. Всесоюзн. конф. Томск, 1986.-С. 38-40.

22. Головкина М.Т., Новотельное Н.В., Седова В.В. Лейкоантоцианы плодов шиповника и их синергизм с аскорбиновой кислотой // Фенольные соединения и их биологические функции. М., 1968. с. 189-195.

23. Государственная Фармакопея СССР, Изд-во 8-е. М.: Медгиз, 1952. -822 с.

24. Государственная Фармакопея СССР, Изд-во 9-е. М.: Медгиз, 1961.-909 с.

25. Государственная Фармакопея СССР, Изд-во 10-е. М: Медицина, 1968. -1078 с.

26. Государственная Фармакопея СССР: вып. 2. Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье / МЗ СССР. 11-е изд., доп. - М.: Медицина, 1989, - 400 е., ил.

27. Государственная Фармакопея СССР XI издания, вып. 2. ст. 39 "Плоды рябины", изменение № 4 от 1999 г.

28. Государственный реестр лекарственных средств, разрешённых к медицинскому применению. М., 1998. 1004 с.

29. ГОСТ „Плоды шиповника" 1994-76. М., изд-во стандартов, 1980. с. 180186.

30. Гусева А.П. Применение в тибетской медицине забайкальских растений // вопросы фармакогнозии, Л., 1961.-вып. 1.-е. 363-367.

31. Даргаева Т.Д. Теоретическое и экспериментальное обоснование технологии и стандартизации многокомпонентных растительных лекарственных препаратов, применяемых при заболеваниях пищеварительной системы: Дис . доктора фарм. наук. -М., 1994.-267 с.

32. Долгая М.М., Алыбина А.Ю. Пищевые добавки и их использование в производстве продуктов питания. / Пищевые и кормовые ресурсы: проблемы и перспективы. М., 1987. вып. 10. - И1 с.

33. Дубонина Н.К. Применение аскорбиновой кислоты у больных атеросклерозом // Труды Саратовского гос. мед. института, 1959. т. 42. -с. 145-148.

34. Евдокимов П.К., Шарипов Ш.Н. Интенсификация получения водных извлечений из травы горицвета весеннего и туркестанского // Фармация. -1989, -т. 38.- №6. -С. 30-35.

35. Ермакова В.А. Фармакогностическое изучение и стандартизация сборов, брикетов и растительных порошков: Дисс. доктора фарм. наук. М., 1999.-т. 1.-313 с.

36. Ермакова В.А., Самылина И.А., Баландина И.А. Вопросы стандартизации лекарственного растительного сырья. / Сборник „Лекарственные растения ботанического сада", Материалы тезисов науч. конф. М.: медицина, 1996, - Юс.

37. Игнатьев Б.Д. Шиповник и его использование, Новосибирск: Наука, 1946. -322с.

38. Изучение витаминных растений Сибири и их использование. Вып. 1 / Под ред. Игнатьева Б.Д. Новосибирск: Наука, 1948. 158 с.

39. Изучение и применение лечебно-профилактических препаратов на основе природных биологически активных веществ. / Под ред. В.Г. Беспалова, В.В. Некрасовой. СПб.: Эскулап, 2000, - 468 с.

40. Использование физико-химических методов в анализе поливитаминных препаратов, содержащих водорастворимые витамины В|, В2, В6, С и никотинамид. / C.B. Ульянова, А.И. Щавлинский, С.Н. Морев и др. /. -Фармация, 1993,-№3.-С. 60-62.

41. Исследование в области технологии комплексной переработки плодов шиповника. / Л.О. Шнайдман, М.Е. Гоголева, B.C. Афанасьева // Материалы совещания по витаминам из природного сырья Куйбышев, 1964.-С. 127-132.

42. Йорданов Д., Николов П., Бойчинов А. Фитотерапия. 2-е изд., София, 1970. 342 с.

43. Казарина Т.М. Растения целители. - Смоленск: Русич, 1996, - 608 с.

44. Карасев К.Г. Действие витаминных настоев шиповника на желудочную секрецию // Изучение витаминных растений Сибири и их использование. Новосибирск, 1948.-вып. 1.-С. 57-81.

45. Кемертелидзе Э.П., Георгиевский В.П. Физико-химические методы анализа некоторых биологически активных веществ растительного происхождения. Тбилиси, 1976. - 224 с.к

46. Кирхнер Ю. Тонкослойная хроматография. В 2-х т. Т. 1-2. Пер. с англ. -М.: Химия, 1981. т. 1 - 616 е., т. 2 - 535 с.

47. Клышев Л.К., Бандюкова В.А., Алюкина Л.С. Флавоноиды растений. -Алма-Ата; Наука, 1978. 220 с.

48. Ковалев В.Г. Нейроактивные аминокислоты и регуляция кровообращения //Труды Волгоградского мед. института 1977. - т. 30. - вып. 3. - С. 13-16.

49. Ковалева Н.Г. Лечение растениями. М.: Медицина, 1972. 351 с.

50. Колошилова А.И., Глушанков Е.П. Витамины (химия, биохимия, физиологическая роль). Л.: Медицина, 1976, 248 с.

51. Кортиков В.Н., Кортиков A.B. Лекарственные растения. М.: Рольф, Айрис - пресс, 1998, - 768 с.

52. Коршун М.О., Гельман Н.Е. Новые методы элементного микроанализа М., Л.: Госхимиздат, 1949. 119 с.

53. Крылов Г.В. Травы жизни и их использование. Новосибирск, 1972.-448 с.

54. Кущинская И.Н. Исследование биологически активных веществ плодов шиповника и технология их комплексной переработки на витаминные препараты: Автореф. дис . канд.техн.наук,М., 1965.- 18с.

55. Лагерь A.A. Фитотерапия. М.: Медицина, 1988. - 324 с.

56. Лапин Л.Н., Владимиров Г.Е. Колориметрическое определение аскорбиновой кислоты // Биохимия. 1945. - №10. - С. 14-16.

57. Лекарственные растения: справочное пособие / Н.И. Гринкевич, И.А. Баландина, В.А. Ермакова и др., под ред. Н.И. Гринкевич. М.: Высшая школа, 1991.- 398 е., ил.

58. Лекарственные растения: Растения целители / Под ред. А.Ф. Гаммерман. - Изд-во 2-е. М., 1976. - 389 с.

59. Лобанова И.В., Сорокина A.A., Самылина И.А. Стандартизация сбора и сухого экстракта „Мирфазин": III Международный съезд „Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения". Материалы съезда: СПб. 1999. С. 129-132.

60. Ловкова М.Я. Почему растения лечат. -М.: Медицина, 1989.-312 с.

61. Лукманова К.А., Рябчук В.А., Салиханова Н.Х., Аминокислотный и минеральный состав фитопрепарата люцерны // Фармация. 2000. - №1. -С. 25-27.

62. Лукьянчикова Г.И., Тираспольская С.Г., Лукьянчиков М.С. УФ-спектрофотометрия в анализе лекарственных смесей, содержащих рутин и кислоту аскорбиновую // Фармация. 1985. - №6. - С. 60-61.

63. Лутцева А.И., Маслов Л.Г. Методы контроля и стандартизации лекарственных препаратов, содержащих водорастворимые витамины. -Хим. фарм. журнал. 1999. - №9. - С. 32-37.

64. Махлаюк В.П. Лекарственные растения в народной медицине. М.: Нива России, 1992.-477 е., ил.

65. Медведева Л.Л., Рыжова Л.В., Аникина Е.В. Перспективы разработки продуктов питания с использованием экстрактов лекарственных растений // Вопросы питания. 1995. - №3. - С. 31-34.

66. Мельникова З.А., Мельникова И.Б., Попова В.Б. Лекарственные растения в каждом доме. М.: Адонис, 1993. - 263 с.

67. Миназова Г.И. Разработка и стандартизация многокомпонентного сбора „Гепафит": Дис . канд. фарм. наук. -М., 1997.-289 с.

68. Минина С.А., Шигарова Л.В., Чижиков Д.В. Оптимизация процесса гранулирования сухого экстракта женьшеня // Хим. фарм. журнал. 1996, -№10. -С. 28-31.к

69. Можеренков В.П., Агафонов В.В. Аскорбиновая кислота в лечение глазных болезней // Офтальмолог. Журнал. 1980. - №2. - С. 117-119.

70. Морозкина Т.С., Стрельников A.B. Избирательное влияние комплекса витаминов Е, А, С на антиоксидантную защиту опухолевых и нормальных тканей // Вопросы химии, -1991. -т. 37. №6. - С. 59-61.

71. Мухамеджанова Д.М. Исследование комплекса биологически активных веществ различных видов шиповника и создание лекарственных препаратов на основе безотходной технологии: Дис. доктора фарм. наук. -М., 1995.-469 с.

72. Мухамеджанова Д.М., Шашкина М.Я. Пищевые диетические композиции с фотокомпонентами И Материалы международной научно-технич. конференции „Прикладная биотехнология на пороге XXI века: М. 1995,22 с.

73. Нагаслаева J1.A., Глызин В.И., Даргаева Т.Д. Разработка способа получения сухого экстракта толокнянки и его стандартизация: Материалы съезда: СПб. 1999.-С. 136-139.

74. Никуличев Д.Б., Арзамасцев А.П. ВЭЖХ в анализе кристаллической кислоты аскорбиновой // Тез. докл. Всероссийск. научно-практ. конф. молодых ученых, Куйбышев, 1988.-С. 130-131

75. Ноздрюхина Л.Р. Биологическая роль микроэлементов а организме животных и человека. М., 1986, 184 с.

76. Павловец Н.М., Новотельное Н.В., Головкина М.Т Исследования содержания флавоноидов в экстрактах плодов шиповника // II Всесоюз. симпоз. по фенол, соединениям: Тез. докл. Алма-Ата, 1970, 68 с.

77. Пайбердин М.В. Шиповник. М.: Гослесбумиздат, 1963, 156 с.

78. Панков Ю.А Ресурсоведческое исследование шиповника (Rosa L.) Дальнего Востока: Автореф. дис . канд. биол. наук. Новосибирск, 1978, -17 с.

79. Панков Ю.А. Дикорастущие розы (шиповники) Дальнего Востока и их использование / АН СССР. Владивосток, 1987 - 127 е.: ил.

80. Панков Ю.А., Гладченко В.П. Содержание и динамика накопления аскорбиновой кислоты у видов шиповника Дальнего Востока // Растит, ресурсы, 1975.-т. 11.-вып. З.-С. 394-398.

81. Паносян В.М. Динамика содержания железа, кремния, цинка, марганца в крови при язвенной болезни желудка // Биолог, роль микроэлементов и их применение в медицине, Л.: Наука, 1970, - т.2, - С. 229-234.

82. Петряев Е.Д. Лекарственные растения Забайкалья, Чита, 1952, 142 с.

83. Плинер В.А. Динамика накопления витаминов Р и С в плодах шиповника (R. Cinnamomea L.) в процессе вегетации и изучение содержания этих витаминов в плодах различных видов шиповника // Учен. зап. Ленингр. ун-та, сер. биол., 1950.- вып. 23.-С. 69-73.

84. Полинг Л. О роли витамина С // Экспресс-информация из серии Хим.-фарм. пром. ММП, 1972.-С. 21-22.

85. Попов А.И. Лекарственные растения в народной медицине. Киев РИМП: „София", 1993.-220 с.

86. Попов Д.М., Никуличев Д.Б., Мухамеджанова Д.М. Сравнительная оценка фотоколориметрического и ВЭЖХ методов определения кислоты аскорбиновой в плодах шиповника // сб. науч. тр. НИИФ. М., 1992. - т. XXX.-С. 53-59.

87. Поповская Е.М. К вопросу об образовании и продвижении аскорбиновой кислоты в растениях//Биохимия, 1950,-т. 15.-вып. 1.-С. 13-24.

88. Приступа Е.А. Разработка унифицированных методик контроля качества и технологии приготовления препаратов из сырья, содержащего кислоту аскорбиновую: Дис . канд. фарм. наук.-М., 1995. 145 с.

89. Прозоровская Л.Л. Шиповник как источник провитамина А // Витамины. Л., 1957. вып. 2. - С. 231-234.

90. Разработка показателей качества настоя цветков боярышника. / И.А. Самылина, Т.Л. Киселёва, О.В. Евдокимова /. Хим.-фарм. Ж., 1990. - № 1. -С. 52-54.

91. Растительные ресурсы СССР: цветковые растения, их химический состав, использование; семейства Нус1га§еасеае Haloragaceae. Л.: Наука, 1987. -326 с.

92. Рожков М.И. Шиповник витаминная культура. М., Пищепромиздат, 1948.-35 с.

93. Розанова М.А. Влияние климатических и почвенных условий на содержание аскорбиновой кислоты в растениях // Новое в науке и технике витаминов, 1946 а, вып. 1.-С. 96-101.

94. Розанова М.А. Динамика накопления аскорбиновой кислоты в листьях и плодах активных и неактивных видов шиповника // Докл. АН СССР, 1946 б. т. 53. - №7. - С. 637-639.

95. Российский Д.М. Отечественные лекарственные растения и их врачебное применение, М., 1944. 120 с.

96. Руководство по методам анализа качества к безопасности пищевых продуктов // Под ред. И.М. Скурихина, В.А. Тутельяна. М.: Брандес, Медицина, 1998.-340 с.

97. Савинов В.Т. Поливитаминные экстракты из шиповника. Уфа, 1943. -30 с.

98. Саплева В.Т. К вопросу об экстракционно-фотометрическом определении аскорбиновой кислоты // Материалы конф. молодых учёных I ММИим. И.М.Сеченова. -М., 1981.-ч. 1.-С. 119-121.

99. Сергиевская Л.П. Полезные растения Бурятии // Краевед, сб./ Бурят-Монгол. фил. Географ, о-ва СССР, Улан-Удэ, 1958. вып. 3. - С. 75-98.

100. Совершенствование анализа и технологии приготовления настоев шиповника, крапивы и рябины обыкновенной. / Е.А. Приступа, Д.М. Попов, Д.М.Мухамеджанова, Н.И. Минникова /. Фармация, 1994. - №2. -С. 31-34.

101. Соколов С.Я., Замотаев И.П. Справочник по лекарственным растениям. -М.: Медицина, 1990.-510 с.

102. Сорокина A.A. Изучение вопросов стандартизации водных извлечений // Мат. 11 межд. съезда „Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения", С -Пб., 1998. -С. 34-38.

103. Справочник Российских производителей, имеющих федеральные лицензии на производство лекарственных средств. М., 2000. 761 с.

104. Супрунов Н.И., Панков Ю.А. Розы (шиповник) Дальнего Востока // Лекарственные средства Дальнего Востока, 1972. вып. 11. - С. 226-229.

105. Суханов Б.П. Биологически активные добавки к пище - новая группа оздоравливающих и профилактических средств современной медицины // Питание XXI века: медико-биологические аспекты, пути оптимизации: Межд. симпоз. Владивосток: Дальнаука, 1999. - 204 с.

106. Сухие экстракты из растений основа создания современных лекарственных форм. / С.М. Николаев и др. // Физико-биохимические аспекты изучения лекарственных растений: Мат. межд. совещ., Новосибирск, 1998.-С. 142-143.

107. Теселкин Ю.О., Бабенкова И.В., Руленко И.А. Взаимодействие дигидрокверцетииа с ионами двухвалентного железа. // „Биоантиоксидант", Труды межд. симпоз. Тюмень, 1997. - С. 22-24.

108. Турова А.Д., Гладких A.C. Биологическая активность полисахаридов растительного происхождения. М, 1965. 89 с.

109. Турова А.Д., Сапожникова Э.Н. Лекарственные растения СССР и их применение. 3-е изд., до и перераб. - М.: Медицина, 1982. - 304 е., ил.

110. Тутельян В.А. Биологически активные добавки к пище // межд. симпоз. „Питание и здоровье": Сб. тез. М., 1996. - С. 160-164.

111. Удельнова Т.Н., Торгин С.Г., Ягодин В.А. Микроэлементы, экология и здоровье человека // Успехи совр. Биологии. 1990. - вып. 2. - 279 с.

112. Фармакопейная статья ФС 42-3265-96. Экстракт шиповника сухой.

113. Федерова B.C. Влияние географических условий и внешней среды на накопление витамина С в некоторых дикорастущих растениях // Докл. АН СССР, 1946. т. 53. - №4. - С. 365-368.

114. Хайдов Ц., Меньшикова Т.А. Лекарственные растения в монгольской медицине. Улан-Батор, 1978.-192 с.

115. Харжановский В.Г. Род Rosa L. // Флора УРСР. Киев: Наук, думка, 1954.-T.6.-280C.

116. Хржановский В.Г. Розы. Филогения и систематика. Опыт и перспективы использования. М.: Сов. Наука, 1958, 497 е.: ил.

117. Цап М.Л. Спектрофотометрический метод определения малых количеств аскорбиновой кислоты в водных растворах // Биохимия. 1956. -Т.5.-С. 534-537.

118. Чирков П.С. Лекарственные растения. М.: Лесная промышленность.1992.-384 е.: ил.

119. Швец О.В., Хасина М.А. Перспективы использования солодки уральской у лиц, проживающих в условиях малых доз радиации // Питание

120. XXI века: медико-биологические аспекты, пути оптимизации: Межд. симпоз. Владивосток: Дальнаука, 1999. 204 с.

121. Шилов П.И., Яковлев Т.Г. Основы клинической витаминологии. Л.: Медицина, 1974. - 344 с.

122. Шнайдман Л.О., Кущинская И.Н. Идентификация флавоновых и катехиновых веществ плодов шиповника // Мед. пром-сть СССР, 1965. -№2.-С. 14-17.

123. Шнякина Г.П., Малыгина Э.П. Витамины и фенольные соединения в плодах дальневосточных видов шиповника // Растит, ресурсы, 1975. т. 11 -вып. 3. - С. 390-394.

124. Юдина Т.П., Иванова О.И. Использование растительных экстрактов для создания пищевых эмульсий //Питание XXI века: медико-биологические аспекты, пути оптимизации: Межд. симпоз. Владивосток: Дальнаука, 1999. 204 с.

125. Юзепчук С.В. Роза (Шиповник) ROSA L. // Флора СССР. М.; Л.: Изд-во АН СССР, 1941.-т. 10.-С. 431-506.

126. Apak Resat. Spectrophotometric determination of ascorbic acid in pharmaceutical prodact // Anal. Lett. 1992. V 22. - № 2. - p. 469-478.

127. Benson J.R. Some recend advances in amino acid analysis // Instrumentation in amino acid sequence analysis. London, New York, S.-Francisco, 1975, - p. 1-40.

128. Dolbeare F.A. Some inflammatory properties ascorbic acid // Proc Soc. exp. Biol. and. Med. 1972. - V. 139. - №2. - p. 540-543.

129. Farre-Berrone M., Lessourd B. Immunite et vitamines // Immumolog. Med. -1989. Vol. 6. - №3. - p. 149-153.

130. Geissman T.A. Chemistry of flavonoid compounds. Oxford: Pergamon Puss, 1962.-662 p.

131. Handa S.S., Shawla A.S. Hypoglycaemic plants a revier // Fitotherapia. -1989. Vol. 9. - №3. - p. 195-224.

132. High perfomance liquid chromatography method for quantitative and qualitative determination of ascorbic acid mixture / Neugebaur M., El-Sadek M. et al. // Indian j. Rharm. Sci. 1990. - Vol. 52. - №4. - p. 182-185.

133. Hughes Davi Emlyn. Titrometric determitation of ascorbic acid with 2,6-dichlorphenol indophenyl in commercial liquid diets // J. Pharm. Sci. 1983. -Vol. 72.-p. 126-129.

134. Manneli D. Colorimetric determination of ascorbic acid // Mikrochemic. -1970.-Vol. 35.-p. 29-34.

135. Marborne J.B., Mabry T.J. The flavonoids. New York: Charmon and Hall, 1975,- 1200 p.

136. Maridonneau-Parini J., Braguet P. Flavonoids as antioxidants // Pharmacol. Res. Commun. 1986. - Vol. 18. - p. 61-72.

137. Parezewski A. Aplication of the potenciometric complexemetric titration of ferrym (III) in determination of microgramme amounts of ascorbic acid // Acta pol. pharm. 1987. - V. 44 - №5. - p. 442-445.

138. Three methods for assay of ascorbic acid dosage forms using bromine // Sci. pharm. 1982. - V. 50. - №1. - p. 11-16.

139. Verma Krishna K., Palod Sandhya. Determination of ascorbic acid in fruits and pharmaceuticals by titration with thallium (III) // Mikrochim. Acta. 1983. -Vol. 2.-№5,6.-p. 361-367.

140. Vitamins, nutrition and cancer / Ed. K.N. Prasad. Basel. New York: Karger, 1984.-307 p.

141. Wagner H. Immunostimulants from higher plants // Biological active natural products /Ed. by K. Hostettman, P.J. Lea. Oxford, 1987.-p. 127-141.