Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Получение сухих экстрактов из растений и создание на их основе препаратов и биологически активных добавок

п о ид

2 2 АПР 2002

На правах рукописи

Давыдова Валентина Николаевна

ПОЛУЧЕНИЕ СУХИХ ЭКСТРАКТОВ ИЗ РАСТЕНИЙ И СОЗДАНИЕ НА ИХ ОСНОВЕ ПРЕПАРАТОВ И БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИЙНЫХ ДОБАВОК.

15.00.02 - фармацевтическая химия и фармакогнозия

15.00.01 —технология лекарств и организация фармацевтического дела

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора фармацевтических наук

Москва - 2002 г

Диссертационная работа выполнена во Всероссийском исследовательском институте лекарственных и ароматических (ВИЛАР) РАСХН

Научный консультант:

доктор фармацевтических наук, профессор В.И.Глызин Официальные оппоненты:

доктор фармацевтических наук, профессор Т.Д.Даргаева доктор фармацевтических наук, профессор Л.И.Бабаскина доктор фармацевтических наук К.С.Гузев

Ведущая организация:

Институт государственного контроля лекарственных средств научного центра экспертизы и государственного контроля лекарственных средств МЗ РФ, г. Москва.

Защита состоится 8 апреля 2002 г. в 1400 часов

на заседании диссертационного совета Д 006.070.01

I < /___

ьи Всериссийскша~(НИИ) лекарственных и ароматических растений РАСХН по адресу: 113216, г. Москва, ул. Грина, 7.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВИЛАР по адресу: 113216, г. Москва, ул. Грина, 7.

Автореферат разослан марта 2002 г.

Ученый секретарь диссертационного совета Д 006.070.01 кандидат сельскохозяйственных наук М.В.Кирцова

научно-растений

У

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы

В последние годы наблюдается значительное снижение показателей уровня здоровья и рост заболеваемости населения вследствие ряда объективных причин, среди которых важное значение имеют ухудшение экологической обстановки, интенсификация ритма жизни, снижение социальной защищенности широких слоев населения. В следствие все возрастающего эко-лого-социального прессинга отмечается существенное снижение резистентности организма, связанное с ослаблением детоксикационных, иммунных и других адаптационно-приспособительных его механизмов. В этих условиях, важное значение приобретают профилактические мероприятия, направленные на повышение неспецифической сопротивляемости организма. Одним из методов достижения этого состояния является применение тонизирующих, общеукрепляющих и иммунномодулирующих лекарственных средств и биологически активных добавок (БАД), обладающих адаптогенной активностью и повышающих резистентность организма к широкому спектру агрессивных факторов окружающей среды. В связи с этим, в настоящее время значительно вырос интерес к лекарственным растениям. Наряду с синтетическими препаратами в плане отечественного источника тонизирующих, иммунномодулирующих средств наибольший интерес представляют экстракты из эхинацеи пурпурной, элеутерококка колючего и женьшеня лекарственного.

В связи с этим является актуальной разработка лекарственных и пара-фармацевтических средств, обладающих адаптогенной активностью и благоприятно влияющих на иммунную систему организма.

За последние годы в индустриально развитых странах медико-социальное значение приобретают болезни обмена веществ, в особенности сахарный диабет. Одним из перспективных направлений в области разработки лекарственных средств является создание фитопрепаратов для лечения и профилактики сахарного диабета. Более активное использование фитопре-

паратов как самостоятельно, так и в сочетании с препаратами инсулина или синтетическими сахароснижающими средствами в зависимости от тяжести и характера заболеваний будет способствовать применению лекарствосбере-гающих технологий в клинической практике. Природные биологически активные вещества растений эволюционно более близки организму человека, чем синтетические, легко включаются в обменные процессы и практически не имеют побочных эффектов, а многие из них являются предшественниками физиологически активных веществ (гормонов, медиаторов). Исследования последних лет показали, что целебные свойства лекарственных растений зависят от гармоничного взаимодействия всех активных веществ, которые обладают в своей совокупности более широким действием, чем в отдельности.

В связи с этим весьма перспективными являются исследования по переводу сборов и отдельных растений, используемых в виде настоев и отваров, в суммарные препараты - экстракты, так как более широкое использование их ограничивается несовершенством лекарственной формы.

Суммируя вышеизложенное можно заключить, что создание лекарственных средств и биологически активных добавок своевременно и актуально и соответствует социальному заказу клинической медицины. В особенности БАД предлагаются лицам, находящимся в "третьем состоянии" - состоянии на грани болезни и здоровья, лицам с ослабленным здоровьем и перенесшим тяжелые заболевания, пожилым и престарелым, населению, проживающему в регионах с неблагоприятными климато-географическими условиями, а также широким слоям населения с целью повышения сопротивляемости организма, предупреждения утомления при физических и умственных нагрузках и повышения работоспособности.

Целью настоящих исследований является теоретическое и экспериментальное обоснование способов получения сухих экстрактов, обладающих адаптогенным, иммунномодулирующим, противовоспалительным действием

и корригирующим обмен веществ, а также разработка лекарственных средств и биологически активных добавок на их основе.

Для достижения указанной цели необходимо было решить следующие основные задачи:

- изучить закономерности экстрагирования действующих веществ из индивидуального сырья и многокомпонентной растительной композиции (РК);

- провести качественную и количественную оценку экстрактов на присутствие и содержание основных действующих веществ;

- теоретически и экспериментально обосновать рациональность состава многокомпонентной растительной композиции "Рецепт-1" (РК) для получения сухого экстракта;

- разработать научно-методические основы технологии получения сухих экстрактов адаптогенного, иммунномодулирующего, противовоспалительного действия и для коррекции обмена веществ на базе растений и растительной композиции (РК);

- провести исследование по разработке рационального состава и технологии гранул, предназначенных для использования при диабете и острых воспалительных процессах и разработать технологии получения 5 сиропов на основе сухих экстрактов;

- разработать нормативные документы (ФС, ТУ, технологические инструкции (ТИ) и опытно-промышленные регламенты (ОПР) на указанные средства.

Научная новизна

В процессе создания средств широкого спектра действия из лекарственных растений и многокомпонентной растительной композиции теоретически обоснован и экспериментально подтвержден способ получения сухих экстрактов, включающий в себя основные стадии: экстрагирование, упаривание, очистку и сушку. С учетом химического состава исходного растительного сырья подобраны оптимальные параметры технологических процессов,

характерные для каждого объекта. Выявлены закономерности экстрагирования БАВ из сырья, имеющего различное анатомическое строение; при этом доказана возможность получения сухих экстрактов при совместном присутствии такого сырья.

Базируясь на теоретических основах теории сушки термолабильных веществ, экспериментально отработан щадящий режим сушки экстрактов методом распыления.

В соответствии с результатами фармакологического скрининга доказана возможность создания сухих экстрактов, обладающих адаптогенным, им-мунномодулирующим и сахароснижающим действием.

Основываясь на принципах составления рецептур в традиционной медицине на основе различных комбинаций сухих экстрактов, предложены рецептуры и разработаны технологии производства гранул и сиропов.

Рациональность рецептур подтверждена сведениями о клинической эффективности.

Подтверждено присутствие БАВ в сухих экстрактах и готовых формах с помощью современных физико-химических методов анализа. Разработаны методики сквозной стандартизации сухих экстрактов и готовых форм из них.

С учетом вклада доминирующих БАВ разработаны методики качественного и количественного анализа элеутерозида В в сухом экстракте элеутерококка и суммы панаксозидов в сухом экстракте женьшеня методом ВЭЖХ; суммы производных оксикоричных кислот в пересчете на цикорие-вую кислоту в экстракте эхинацеи; содержание аскорбиновой кислоты в сухом экстракте и сиропе шиповника; суммы дубильных веществ в пересчете на галловую кислоту в сухом экстракте и сиропах с экстрактом зеленого чая; суммы фенольных соединений в гранулах и сиропе, рекомендуемых при острых воспалительных процессах; суммы флавоноидов в сухом экстракте из сбора "Рецепт-1» и гранулах при диабете.

Приоритеты проведенных исследований и способы их получения защищены 15 авторскими свидетельствами и патентами.

Практическая значимость

На основании проведенных исследований разработаны и утверждены:

- ВФС 42-2090-92 на экстракт элеутерококка сухой утв. ФК МЗ РФ;

-ОПР на производство сухого экстракта элеутерококка № 39-22-116.

- ОПР на производство сухого экстракта шиповника № 57-17-181.

- ТИ на производство сухого экстракта женьшеня

- ТИ на производство сухого экстракта «Рецепт-1»

На основании проведенных исследований на НД получены удостоверения МЗ РФ и внедрены:

- БАД экстракт зеленого чая сухой РУ № 000828.Р.643.04.99 от 6.04.99

- Сырье для производства БАД экстракт женьшеня сухой РУ № 001615.Р.643.04.2000 от 12.04.00

- БАД сухой суммарный экстракт из смеси растительного сырья «Ре-цепт-1» РУ № 0010000.Р.643.07.99 от 19.07.99

- БАД сироп шиповника РУ№ 001050 Р.643.07.99 от 29.07.1999

- БАД сироп при простуде РУ № 0082 Р.643.08.99 от 31.08.1999 г.

- БАД сироп зеленого чая с шиповником РУ№ 000894.Р.643.05.99 от 27.05.99

- БАД сироп зеленого чая РУ № 000894 Р.643.05.99 от 27.05.1999

- БАД гранулы от простуды РУ № 001081 Р.643.08.99 от 31.08.1999

- БАД гранулы при диабете РУ № 001965.Р.643.09.2000 от 25.09.2000

Связь задач исследования с проблемным планом.

Работа выполнена в соответствии с планом научных исследований Всероссийского научно-исследовательского института лекарственных и ароматических растений № гос. регистрации 01860074455.

Апробация работы

Материалы диссертации доложены и обсуждены на съездах, конгрессах/научно-практических конференциях (Москва - 1991, 1992, 1994, 1995, 2000,2002; Санкт-Петербург - 2000; Томск - 1989; Харьков - 1990).

Публикации

По материалам диссертации опубликованы 37 научных работ, из них получено 15 авторских свидетельств на изобретения и патенты.

Основные положения, выносимые на защиту:

- научно-методические основы создания и стандартизации сухих экстрактов адаптогенного и иммунномодулирующего действия, корригирующего содержание сахара в крови на основе индивидуального сырья и растительной композиции;

- результаты теоретических, экспериментальных и клинических исследований по обоснованию разработки состава чая «Рецепт-1», гранул, сиропов, рекомендованных для профилактики и комплексной терапии сахарного диабета, сезонных простудных заболеваний и в качестве укрепляющих средств;

- результаты исследований по определению показателей подлинности, качественного и количественного определения БАВ в сухих экстрактах и готовых формах!

Объём и структура диссертации

Диссертационная работа изложена на 237 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы (глава), собственных исследований (5 глав), заключения, выводов, списка литературы, который включает 367 источников, в том числе 85 на иностранных языках, приложений. Работа иллюстрирована 41 таблицами, 17 рисунками и схемами.

В приложении представлены материалы по внедрению: регистрационные удостоверения, титульные листы опытно-промышленных регламентов и ВФС, авторские свидетельства и патенты.

Во введении раскрыта актуальность темы, сформулированы цель и задачи исследования.

В главе 1 на основании данных литературы приведены сведения о лекарственных растениях, применяемых в научной и народной медицине, в качестве иммунномодуляторов, адаптогенов, а также современные аспекты технологии и стандартизации моно- и многокомпонентных лекарственных средств растительного происхождения.

Глава 2 содержит результаты по подбору рационального состава растительной композиции (РК) для коррекции болезней обмена веществ - чая «Рецепт-1». Приводятся результаты клинического изучения. Изложены подходы к созданию схемы получения сухого экстракта из РК. Приведены результаты расчета соотношения размера частиц при измельчении сырья различного морфологического состава РК, а также результаты исследований по подбору основных технологических факторов получения сухого экстракта «Рецепт-1» и методы его стандартизации.

Глава 3 посвящена разработке технологий производства сухих экстрактов адаптогенного, иммунностимулирующего, тонизирующего действия и методов их стандартизации. Приведены результаты выбора основных параметров экстракции (тип экстрагента, время, температура, соотношение сы-рье-экстрагент), способов и режимов сушки получения сухих экстрактов элеутерококка, эхинацеи, женьшеня.

Представлены результаты фармакологических испытаний.

Глава 4 содержит экспериментальные данные по разработке способов получения сухих экстрактов из плодов шиповника и побегов зеленого чая.

Научно обоснован и экспериментально подтвержден способ сушки распылением термолабильных веществ сухого экстракта плодов шиповника. Приведена стандартизация сухих экстрактов с использованием современных методов анализа.

В главе 5 приведены сведения по разработке рецептур, технологий получения и стандартизации гранул, рекомендуемых для применения при сахарном диабете и сезонных простудных заболеваниях. Установлены параметры безопасности. Приведены результаты клинических испытаний.

Глава 6 включает результаты по подбору состава сиропов на основе сухих экстрактов, разработку технологии и методику стандартизации сиропов шиповника, женьшеня, при «простуде», зеленого чая и зеленого чая с шиповником. Результаты экспериментов обработаны статистически, обобщены в таблицах, проиллюстрированы графиками и рисунками.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы исследования

Материалами служили лекарственное растительное сырье, отвечающее требованиям нормативной документации: корневища с корнями элеутерококка, корни женьшеня, трава эхинацеи, плоды шиповника, листья березы и побеги зеленого чая, створки плодов фасоли, побеги черники, корни лопуха, а также полученные экстракты и лекарственные формы.

Сырье приобретено на Красногорском заводе по переработке лекарственного сырья, трава эхинацеи пурпурной - на ЗОС Самарской области.

В работе использовали реактивы, растворители, стандарты, отвечающие требованиям соответствующей нормативной документации. Электронные спектры соединений, исследуемых растворов в УФ и видимой областях, записывали на приборах СФ-26 (Россия), UV-VIS (Германия) и Hitachi (Япония) в кюветах с толщиной поглощающего слоя 1см.

При разработке методик количественного определения были использованы хроматографически чистые стандарты ГСО сирингина, PCO рутина, панаксозида Rbi, цикориевой, галловой, аскорбиновой кислот.

При разработке регламентов на сухие экстракты использованы технологические оборудование ПЭЗ ВИЛАР и ИРЕА-Пензмаш: экстрактор, вакуум-выпарной аппарат, сушильные установки и т.д.

Разработку методик качественного и количественного анализа действующих веществ в сырье и готовых продуктах проводили с использованием метода высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) «Мили-хром» (Россия), «Waters» (США) и спектрофотометров.

ОБЩИЕ ПРИНЦИПЫ ТЕХНОЛОГИИ И СТАНДАРТИЗАЦИИ СУХИХ ЭКСТРАКТОВ.

Разработка сухого экстракта на основе сбора "Рецепт-1".

Обоснование подбора композиции сбора.

На основании литературы о химическом составе фармакологических свойствах в качестве объекта исследования выбран сбор из четырех видов лекарственного растительного сырья: створки плодов' фасоли, побеги черннники обыкновенной, листья березы, корни лопуха.Доля каждого растительного сырья - компонента и рациональность их сочетания определялась с учетом механизмов развития болезней обмена веществ.

В предложенном сборе рекомендовано использование створок плодов фасоли в качестве компонента, улучшающего обмен веществ. Створки плодов фасоли содержат аминокислоты, витамины, минеральные соли, органические кислоты, микроэлементы, полисахариды.Отвар фасоли (1:10) в эксперименте на животных уменьшает содержание сахара в крови на моделях экспериментальной гипергликемии. Эти данные подтверждены клиническими наблюдениями у больных сахарным диабетом.

В состав сбора также рекомендованы побеги черники. В листьях содержатся: дубильные вещества, гликозиды (миртиллин и неомиртиллин до 2%), флавоноиды, витамины, Установлено, что неомиртиллин уменьшает содержание сахара в крови. Флавоноиды обусловливают спазмолитический и капилляроукрепляющий эффекты, поэтому, препараты из листьев черники обыкновенной обладают сахароснижающим действием, показаны при сахарном диабете.

Листья березы, входящие в состав сбора, содержат, дубильные вещества, сапонины, флавоноиды, витамины, органические кислоты и фитонциды. Настой листьев березы обладает мочегонным, противовоспалительным свойствами, улучшает обмен веществ. Препараты из березы показаны при заболеваниях мочевыводящих путей и легко кислом диатезе, выводят из организма шлаки (соли) и поэтому назначаются при нарушении водно-солевого обмена.

В корнях лопуха большого найдены полисахариды (инулин до 45%), протеины, дубильные вещества. Препараты лопуха обладают мочегонным, желчегонным действием. За счет высокого содержания инулина отвар корня лопуха улучшает инсулинообразующее действие поджелудочной железы.

Такой состав прописи, кроме воздействия на основные патогенные механизмы заболевания (нарушение углеводного обмена), поможет провести фармакологическую регуляцию в целом поврежденной функциональной системы. В результате был предложен сбор следующего состава, условно названный «Рецепт-1»:

Створок плодов фасоли - 20%

(ВФС 42-2878-97)

Клинические испытания, проведенные в эндокринологическом научном центре РАМН, показали, что лечение отваром сбора «Рецепт-1» приводит к улучшению метаболизма глюкозы и стабилизации течения сахарного диабета. С целью более рационального использования сырья и получения по-

(ФС 42-2942-93) Побегов черники (ФС 42-2948-93)

- 40%

Листьев березы (ВФС 42-2487-95) Корней лопуха

- 20%

- 20%

стоянного стандартизованного состава БАВ в готовой форме, была поставлена задача получения суммарного сухого экстракта из сбора «Рецепт-1». Разработка технологии получения сухого экстракта из сбора "Рецепт-1".

Основными управляемыми факторами, влияющими на скорость и полноту высвобождения биологически активных веществ, являются тип экстра-гента, соотношение сырьё-экстрагент, температура экстракции, степень измельчения, продолжительность экстрагирования и гидродинамические усло-вия.При выборе оптимальных условий экстракции использован метод математического планирования эксперимента, позволивший при минимальном количестве экспериментов в многофакторном процессе (каковым является процесс экстракции) получить статически обоснованные решения.В качестве параметра оптимизации использовался выход экстрактивных веществ от содержания их в сырье.

В качестве экстрагента была использована вода, так как сухой экстракт «Рецепт-1» был разработан вместо отвара.

В результате экспериментальных исследований установлена зависимость полноты экстракции БАВ от степени измельчения при совместном экстрагировании сырья различного морфологического состава. Она составила для побегов черники, створок фасоли, листьев березы - 3-5 мм, для корня лопуха 0,5-1 мм. Такая дисперсность сырья помогает одновременному высвобождению БАВ из всех видов сырья и не снижает их дренажирующие свойства. Результаты эксперимента по выбору соотношения фаз, кратности экстракции, времени и температурном режиме приведены в таблице № 1.

Как видно из результатов экспериментальных исследований наиболее оптимальным режимом процесса экстракции является следующее соотношение фаз сырьё: экстрагент 1:15, количество экстракций 3, время экстракции 2 часа, температура экстракции 60°С.

Таблица № 1

План оптимизации экстракции и результаты эксперимента.

№ Уровни факторов Факторы Выход

п/п соотноше- число экс- продолжи- температу- Экстрак-

ние фаз тракции тельность ра, °С тивных ве-

экстракции, ществ, %

час

1. 1:10 3 2 20 56,3

2. 1:15 2 2 20 48,6

3. 1:10 2 2 60 82,3

4. 1:15 3 2 60 95,8

5. 1:10 3 1 20 31Д

6. 1:15 2 1 20 30,6

7. 1:10 2 1 60 58,4

8. 1:15 3 1 60 86,5

В ходе разработки ОПР проводилась корректировка в технологическом процессе, с учетом объема загружаемого сырья и содержания БАВ в готовом продукте. В результате определены следующие основные стадии технологического процесса: измельчение сырья, экстракция измельченной смеси горячей водой при температуре 60+5°С при перемешивании и троекратном контакте фаз по 2, 1,5 и 1 часу соответственно; упариванием под вакуумом, очистка от балластных веществ сепарированием и сушка методом распыления.

Сушка осуществлялось на распылительной сушилке фирмы «Ангид-ро». Опыты показали, что при высушивании экстракта получается продукт, обладающий сыпучими свойствами. Отработка оптимального режима сушки осуществлялось в диапазоне изменения температур теплоносителя на входе в сушилку от 160 до 240°С.

Сыпучесть сухого экстракта почти во всех опытах превышала 1,0%, но она снижалась при влажности превышавшей 6,0%, поэтому снижение температуры на выходе из сушилки меньше 70°С нежелательно, так как это увеличивает отложение на стенках. Повышение температуры на выходе из сушилки выше 80°С нежелательно, так как термолабильные вещества, входящие в состав суммарного сухого экстракта, могут подвергаться разрушению.

В результате проведённых экспериментов были- определены следующие оптимальные параметры сушки: температура на входе 180-190°С; температура на выходе 75-80°С; производительность сушилки по исходному продукту - 2,2 л/час при концентрации исходного извлечения 12-15%.

По разработанной технологии получен сухой экстрак! в виде аморфного порошка бурого, светло-коричневого, коричневого цвета, гигроскопичен, комкуется, с ароматным, приятным запахом, сыпучесть 1,9 г/сек, угол естественного откоса 44°, объемная плотность при свободном падении - 0,2 г/см3.

На основании полученных результатов оформлена технологическая инструкция по производству сухого экстракта из смеси растительного сырья «Рецепт-1» и получено РУ МЗРФ на БАД.

Установление показателей качества сухого экстракта "Рецепт-1".

Учитывая химический состав соотношение компонентов и способ получения сухого экстракта стандартизацию проводили по содержанию суммы флавоноидов. Реакцию на присутствие флавоноидов определяли с помощью пробы Синода, при этом испытываемый раствор должен приобрести красное окрашивание. Наличие фенольных соединений подтверждают по реакции с натрия фосфорномолибдатом по зеленой окраске и хроматографией в тонком слое сорбента.

Исходя из этого, нами разработана методика количественного определения суммы флавоноидов в сухом экстракте в пересчете на рутин. Для этого установлены оптимальная навеска препарата, длина волны, время образова-

ния стабильного комплекса. В результате предложена следующая методика анализа:

Спектр извлечения сухого экстракта в области 340-500 нм имеет максимум поглощения при 408+2 нм, подчиняется закону Ламберта-Бугера-Бера (рис.1).

УФ-спектр поглощения экстракта «Рецепт-1»

Рис. 1.

Относительная ошибка определения суммы флавоноидов в пересчете на рутин в сухом экстракте составляет 6,81% с 95% вероятностью.

С использование разработанной методики проанализированы 5 серий готового продукта, полученных в условиях производства. Результаты опытов с добавками рутина свидетельствуют об отсутствии систематической ошибки. Данные показаны в таблице 2.

Таблица.2

Результаты опытов с добавками рутина

Количество Добавле- Должно Найдено, Абсолют- Относи-

флавоноидов в но рути- быть, мг мг ная тельная

0,5 г экстракта, на, мг ошибка ошибка

мг

11,24 3,40 14,64 14,70 +0,06 +0,42

11,24 5,70 16,94 17,00 +0,06 +0,35

11,24 7,82 19,06 19,00 -0,06 -0,31

РАЗРАБОТКА ТЕХНОЛОГИИ ПОЛУЧЕНИЯ И МЕТОДИК СТАНДАРТИЗАЦИИ СУХИХ ЭКСТРАКТОВ ЭЛЕУТЕРОКОККА, ЖЕНЬШЕНЯ И ЭХИНАЦЕИ

Перспективным направлением в области создания фитопрепаратов и БАД является производство сухих экстрактов, используемых в виде растворимых чаев и служащих основой для получения различных лекарственных форм, содержащих стандартизационный набор биологически активных веществ в их естественной композиции.

В этой связи нами разработаны сухие экстракты, элеутерококка, женьшеня, эхинацеи.

Разработка технологии получения сухого экстракта элеутерококка.

Экстракт элеутерококка сухой получают из корней и корневищ элеутерококка колючего - Eleutherococcus senticosus (Rupr. et Maxim) Maxim сем. Araliaceae, отвечающего требованиям ФС 42-2725-90 и изм. № 1 от 24.02.92 г

Экстракт элеутерококка сухой разрабатывался в ВИЛАРе с целью получения более эффективного лечебного препарата по сравнению с применяющимся жидким экстрактом элеутерококка (40% этиловый спирт). Элеутерококк колючий относится к немногочисленным лекарственным растениям, отличающимся адаптогенными свойствами. Адаптогенность повышается неспецифическим путем вследствие приспособляемости организма к повы-

шенной нагрузке и улучшению сопротивляемости организма к напряжению, не снимаемому каким-либо другим способом.

При экспериментальном исследовании, проведенном в отделе фармакологии ВИЛАР (экстрагент 24% этиловый спирт и вода) установлено, что экстракт элеутерококка сухой обладает выраженным адаптогенным (стресс-протективным), стимулирующим и тонизирующим действием. Так, изучение влияния препарата на ЦНС в эксперименте на кроликах показало, что введение препарата повышает возбудимость коры головного мозга без заметного ослабления процесса внутреннего торможения. Стимулирующее влияние препарата установлено в тестах с коразолом и стрихнином на модели спонтанной двигательной активности мышей в актографе. Антинаркотическое действие препарата проявлялось в уменьшении длительности снотворного эффекта хлоралгидрата у белых мышей. На модели форсированного плавания мышей экстракт элеутерококка сухой проявлял стресспротективное действие, увеличивая длительность плавательной активности живот-ных.Изучение острой токсичности препарата показало, что его можно отнести к классу безвредных веществ.Фармакологическая активность сухого экстракта элеутерококка полученного экстракцией водой и 24% этиловым спиртом примерно одинакова, но превышает активность жидкого экстракта эле-утерококка.Использование воды в качестве экстракта затрудняло фильтрацию и увеличивало энергетические затраты на стадии выпарки экстрагента, поэтому в качестве экстрагента был выбран 24% этиловый спирт.

При отработке стадии экстракции сырья был использован метод математического планирования эксперимента. В качестве параметра оптимизации был использован выход экстрактивных веществ (%) от содержания их в сырье. Рассматривалось влияние 6 факторов, варьируемых на двух уровнях и 3 факторов на четырех уровнях. Это размер частиц сырья 1 мм и стандартное дробленое сырье по ФС 42-2725-90, температура экстракции 20° и 50°С, время экстракции 1 и 2 часа, количество экстракций от 1 до 4, соотношение фаз

1:8, 1:10,1:15,1:20. Так как используемое сырье представляет собой достаточно твердые корни с корневищами, была введена дополнительная стадия - набухание сырья. Время набухания сырья варьировалось от 30 до 120минут.

Результаты приведены в таблице 3, в качестве экстрагента был использован 24% этиловый спирт.

Таблица 3

Оптимизация процесса твердовазной экстракцн элеутерококка

J4s и/п Число Экстракции Дисперсность сырья, мм Т, Время экстракций, час Время набух. Соотношение фаз Выход экстр, в-в Содержание элеуте-рози- да В, %

1 г 3 4

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12

1 1 1 50 1 - - - 30 1:8 58,1 0,55

2 2 яробл 50 1 I - - 45 1:10 58,3 0,61

3 3 1 20 1 1 1 - 60 1:15 68,4 0,52

4 4 дробл 20 1 1 2 2 120 1:20 66,2 0,83

5 4 1 50 2 1 2 1 45 1:15 93,8 0,92

6 3 дробл 50 2 1 1 - 30 1:20 79,4 0,87

7 2 1 20 2 1 - - 120 1:8 37,2 0,34

8 1 дробл 20 2 - - - 60 1:10 35,5 0,38

9 2 1 50 1 2 - - 60 1:20 84,5 0,94

10 1 дробл 50 1 - - - 120 1:15 543 0,52

И 4 1 20 1 2 1 1 30 1:10 67,1 0,78

12 3 дробл 20 1 2 2 - 45 1:8 52,3 0,50

13 3 1 50 2 2 2 - 120 1:10 92,2 0,91

14 4 дробл 50 2 2 1 2 60 1:5 57,4 0,68

15 1 1 20 2 ■ - - 45 1:20 32,7 0,34

16 2 дробл 20 2 г - 30 1:15 49,3 0,47

По результатам исследований можно определить интенсивность влияния различных факторов на выход экстрактивных веществ. Так увеличение температуры от 20 до 50°С и использование более мелкоизмельченного сырья ведет к возрастанию выхода экстрактивных веществ. При выборе количества растворителя различия значимы между всеми уровнями этого фактора, кроме уровней соответствующих соотношениями фаз 1:15, 1:20. Максимальный выход достигается при соотношении 1:20, разница незначительная, но экстрагента при соотношении 1:15 используется намного меньше, поэтому выбрано соотношение 1:15. Для числа экстракций максимальный выход соответствует трем экстракциям.

На основании экспериментальных данных, проведенных в лабораторных условиях с использованием методов математического планирования, установлены следующие оптимальные условия экстракции сырья: степень измельчения - 1 мм, температура - 50°С, число экстракций - 3, время каждой экстрации - 1 час, время набухания - 120 минут, соотношение фаз 1:15.

При разработке ОПР в условиях ПЭЗ ВИЛАР было увеличено время экстракции взамен стадии набухания сырья.

Способ получения сухого экстракта элеутерококка включает основные стадии технологического процесса: измельчение сырья, экстрагирование^ упаривание экстракта, сепарирование, сушку, распыление. В результате был получен сухой экстракт со следующими технологическими показателями: насыпная масса при свободном падении 0,40г/см3, насыпная масса при уплотнении 0,66г/см\ сыпучесть сухого экстракта 2,03 г/сек. угол естественного откоса 36°.

Стандартизация сухого экстракта элеутерококка.

На основании данных литературы и собственными химическими исследованиями в сырье и сухом экстракте подтверждено наличие различных биологически активных веществ: тритерпеновых сапонинов, полисахаридов, витаминов, органических кислот, аминокислот и др.

Для разработки качественной реакции на подлинность использована общеизвестная методика, где спиртовое извлечение препарата с 1% раствором железа окисного хлорида дает желто-зеленое окрашивание при наличии-веществ фенольной природы.

Ультрафиолетовый спектр 0,01% раствора экстракта элеутерококка сухого в 30% спирте в области от 220 до 400 нм должен иметь максимум поглощения или перегибы при (284±4 нм) и при (325+3 нм).

Методом ВЭЖХ проводится соотнесение времен удерживания пика раствора ГСО элеутерозида В и анализируемого экстракта на хроматограмме.

В случае использования для анализа "Милихром" 4 мкл раствора Б, приготовленного для количественного определения, вводят в жидкостной хроматограф "Милихром" с УФ-детектором 1=266 нм, диапазон чувствительности 0,8. Хроматографируют на колонке КАХ 2 (2 х 64 мм, сталь), "Separon" С 18 (Tebeok), ЧССР, 5 мкм, эффективность 4500 т.т. Элюент вода - ацетонитрил - уксусная кислота (85:15:0,5). Скорость потока 100 мкл/мин. Скорость движения бумажной ленты 180 мм/ч. 2 мкл раствора А ГСО сирингина (элеутерозида В) хроматографируют как описано выше. Определяют время выхода сирингина (элеутерозида В) и идентифицируют его пик на хроматограмме анализируемого экстракта (рис.2).

В случае использования для анализа прибора "Waters" 50 мкл раствора Б, приготовленного для количественного определения, вводят в жидкостной хроматограф с УФ-детектором А.=266 нм. Хроматографируют на колонке "Silasorb" С 18 (4 х 250 мм) 10 мк. Элюент вода - ацетонитрил - уксусная кислота (86:14:0,5). Скорость потока 0,6 мл/мин. Скорость бумажной ленты 5 мм/мин. Чувствительность потока 0,2. Для идентификации пика элеутерозида В: 50 мкл раствора Б ГСО элеутерозида В хроматографируют как описано выше. Идентификацию элеутерозида В проводят по времени его выхода, а его количественное содержание судят по площади пика на хроматограмме в анализируемом экстракте (рис.3).

Хроматограмма ВЭЖХ на приборе «Милихром»

а) ГОС сирингина (элеутерозида В)

б) раствора экстракта элеутерококка сухого, элеутерозид в пик 1.

Рис.2

Метрологические данные представлены в таблице 4.

Таблица 4.

Метрологические характеристики методики количественного определения элеутерозида В в сухом экстракте элеутерококка колючего на приборе "Милихром"

N Г X Б Р% Дх Е%

6 ' 5 0,53 0,00054 0,0231 95 2,57 0,059 ±11.05

Хроматограмма ВЭЖХ на приборе "\Vaters"

ЧН

и1-

а) смеси ГСО сирингина (элеутерозида В) - пик 1 (7 мин.) и (элеутерозида О) - пик 2 (23 мин.)

б) экстракта элеутерококка сухого

элеутерозид В - пик 1 элеутерозид Б - пик 6 Рис.3

Относительная ошибка методики количественного определения элеутерозида В в сухом экстракте элеутерококка колючего с 95% вероятностью составляет ±11.05%. Отсутствие математической ошибки доказано с использованием метода добавок (табл. 5.).

Таблица 5.

Результаты количественного определения в препарате с использованием метода добавок

Содержание Добавлено Расчитанное Найдено эле- Отклонение

элеутерозида элеутерозида содержание утерозида В,

В в пробе В - стандар- элеутерози- мг/мл

экстракта, мг та, мг да, мг/мл

0,0812 0,2 0,1406 0,1605 +0,0199

0,0812 0,4 0,1604 0,1668 -0,0064

0,0812 0,6 0,1703 0,1777 +0,0073

Представленные в таблице результаты показывают, что разница между рассчитанными и полученными методом ВЭЖХ данными не превышает ошибку единичного определения методики, что подтверждает достоверность проведенных анализов. С помощью разработанной методики было проанализировано 7 серий экстракта, полученных в условиях ПЭЗ ВИЛАР.

Установлено нижнее предельное содержание элеутерозида В не менее 0,3%. Срок годности 2 года.

Клиническими испытаниями подтвержден адаптогенный эффект полученного продукта в виде таблеток сухого экстракта элеутерококка.

Разработанные методики включены в ВФС и ОПР. Разработка технологии получения и стандартизация сухого экстракта женьшеня.

Разработка способа получения сухого экстракта женьшеня.

При выборе экстрагента были использованы вода, этиловый спирт 30%, 70%. В полученных извлечениях определяли содержание экстрактивных веществ. Наиболее высокие результаты получены при экстракции водой и 30% этиловым спиртом. По результатам этих исследований и с целью экономии ресурсов при выпарке был выбран в качестве экстрагента 30% этиловый спирт.

При последующем изучении процесса экстракции показано, что с увеличением температуры экстрагента повышается выход экстрактивных веществ, также сокращается время экстракции. Но повышение температуры экстракции выше 60°С приводит только к дополнительным энергозатратам, не повышая значительно выход экстрактивных и действующих веществ.

Равновесная концентрация в системе при 20°С достигается за 2 часа, при 40°С - за 1,5 часа, а при 80°С - за 0,5-1 час. С целью определения продолжительности и кратности числа экстракций изучено время достижения равновесной концентрации в системе сырье-экстрагенте, кратность экстракции 3.

Способ получения экстракта женьшеня сухого включает основные стадии технологического процесса: измельчение сырья до 1-3 мм, получение водно-спиртового экстракта (3 контакта фаз), фильтрования, упаривания водного экстракта, сепарирования и сушки.

Стандартизация сухого экстракта женьшеня.

Методом храмотографии в тонком слое сорбента разработана методика качественного анализа суммы панаксозидов. На основании этого установлено наличие не менее 4 зон синевато-фиолетового цвета в области 0,24-0,82, которые отнесены к тритерпеновым гликозидам.

Наряду с этим разработана методика количественного определения панаксозидов в сухом экстракте женьшеня.

Наилучшее разделение панаксозидов достигается при использовании элюентной системы ацетонитрил - вода (30:70) скорость элюирования - 1,3 мл/мин, длина волны детектирования - 203 нм, чувствительность детектора -0,1.

Относительная ошибка методики количественного определения суммы панаксозидов в сухом экстракте не превышает ±3,67%. В сухом экстракте должно быть не менее 1,0% панаксозидов в пересчете на панаксозид RbL Ус-танавлен срок годности 2 года.

Разработка сухого экстракта эхинацеи и его стандартизация

Сухой экстракт эхинацеи получают из травы эхинацеи пурпурной -Echinacea purpurea (L.) Moench., семейства астровых - Asteraceae.

Качество сырья регламентируется требованиями ВФС 42-2371-94.

Сухой экстракт имеет название эстифан.

В ходе технологических и химических исследований установлены оптимальные параметры экстракции по экстрактивным веществам и сумме действующих веществ. Наиболее оптимальными параметрами оказались: экстра-гент - 24% спирт; соотношение сырье - экстрагент - 1:10; степень измельчения - 3 мм; температура экстракции -50 +50°С; кратность - 3; время экстракции - 2 часа, упарка под вакуумом; сушка - методом распыления Гтемперя-турный режим сушки на входе 200°С,на выходе 80-85°С); очистка сепарированием. Полученные результаты легли в основу опытно-промышленного регламента.

При разработке сухих экстрактов обращено внимание на сохранность БАВ в процессе сушки. Для сухих экстрактов технологическими характеристиками в эксперименте служили сыпучесть, насыпная масса, угол откоса, а также влажность и содержание действующих веществ.

В ходе исследований нами изучено влияние способа сушки на качество конечного продукта экстрактов эхинацеи, шиповника. Опыты проведены с

использованием распылительной сушилки "Ангидро", Дания и отечественный РЦ1,0-1,2НК.

Сушка экстракта эхинацеи.

Сушка экстракта эхинацеи осуществлялась на сушилке фирмы "Ангидро", Дания. Первоначальные опыты показали, что при высушивании эхинацеи получается продукт, обладающий сыпучими свойствами.

Отработка оптимального режима сушки осуществлялась в диапазоне изменения температур теплоносителя на входе в сушилку до 240°С.

В таблице 8 приведены основные данные по сушке эхинацеи, в таблице 9 данные по качеству высушенного продукта.

На основании данных по испаренной влаге (таблица 8) анализировалась интенсивность сушки.

Типичные температурные режимы: ТВХ=160°С Твых = 70-80°С Твх = 200°С Твцх = 80-90°С Твх = 240°С Твых= 88-90°С

Анализ проведенных опытов по сушке эхинацеи позволяет сделать следующие выводы.

Увеличение концентрации (в исследованных пределах) до 30% положительно оказывается на производительности по сухому, приводя к росту собранного готового продукта и относительному возрастанию выгрузки из циклона (опыты 4 и 5, 6 и 7).

Несмотря на то, что в опытах абсолютная величина отложений существенна, они сыпучи и легко сметаются. Поэтому в промышленной длительной технологии они будут осыпаться самостоятельно или при легком обстукивании.

Сыпучесть порошка практически во всех опытах превышает 1,0, что является удовлетворительным показателем для эхинацеи.

Таблица 8

Экспериментальные данные по сушке экстракта эхинацеи

Наименова- Раз- Дата проведения, номер опыта

ние парамет- мер- 17.0 1 17.01 23.01 27.01 28.01 30.0 1 30.01 31.01 31.01 31.01 31 01

ров ность 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 и

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13

Время ч 0,84 0,67 0,41 0,29 0,124 0,27 0,42 0,51 0,51 0,4 0,34

- на входе в сушилку 160 200 • 200 240 240 200 200 200 160 180 200

- на выходе из сушилки ,'С 80 90 8085 90 90 8590 90 90 70 80 90

Количество исходного раствора г 100 0 1046 115 0 130 0 500 600 1020 1030 1135 1110 1160

- в исходном продукте Гр.су хого 137,7 1440 3910 403,0 149,0 179,0 184,0 138,0 201jO 200,0 2470

- с сухом продукте Гр.су хого 125, 9 132,9 276, 4 254, 9 126,8 159, 6 138,9 122,4 164,2 1663 211,3

5. Концентрация исходно-го продукта % 13,8 13,8 34,0 23,8 29,9 29,9 18,0 13,3 18,0 18,0 21,3

6. Количество высушенного продукта: - суммарное г 131 138 287 282 132 167 147 128 172 174 218

- из циклона 122 129 72 82 42 125 76 64 95 97 72

- в виде отложений на су-пгилке о 9 -90- -47— -7i- -64- - ~f7- bt46

7. Влажность высушенного продукта: %

-средняя 3,87 3,71 3,7 4,93 3,92 4,41 5,47 4,41 4,52 4,29 3,07

- из циклона 4,04 3,86 5,5 6,39 6,29 4,81 6,73 5,98 5,67 5,48 4,76

- в виде отложений со стен 1,6 1,6 3,1 4,33 2,82 3,22 4,13 2,84 3,1 2,79 2,23

8. Процент уловленного продукта % 91,5 92,3 70,7 63,2 84,9 89,1 75,7 89,0 80,4 83,3 85,5

Производит.

- по исходно-му продукту кг/ч 1,19 1,56 2,8 4,48 4,03 2,22 2,42 2,02 2,23 2,78 3,41

- по испарен-ной влаге 1,02 1,34 2,1 3,36 2,78 1,53 1,96 1,74 1,*81 2,26 2,66

- по сухому продукту 0,17 0,22 0,7 1,12 1,25 0,69 0,48 0,28 0,42 0,52 0,75

Сыпучесть снижается при влажности > 6,0%; поэтому снижение температуры на выходе из сушилки ниже 70°С или разбавление экстракта водой ниже 18% нежелательно.

Вместе с тем, производительность по испаренной влаге при увеличении концентрации экстракта несколько падает, что связано с загрублением распыла из-за возрастания вязкости. По-видимому получение высококачественного продукта будет компромиссом между содержанием действующего вещества и сыпучестью. С этой точки зрения опыты 10 и 11 вероятно приближаются к наиболее рациональным режимам.

Таблица 9

Экспериментальные данные по химическому анализу сухого экстракта эхинацеи.

Технологические характеристики.

Номер Содержание Сыпучесть, г/с Угол откола, ° Массы (масса

опыта суммы производных ОКК, % с уплотнением - масса без уплотнения)

1 8,15 1,89 39 19

2 8,15 1,71 45 20

3 8,99 1,90 44 20

4 8,87 2,36 44 19

5 8,36 1,90 45 -

6 8,97 2,10 44 27,4

7 7,52 0,65 42 -20

8 7,33 1,03 40 20,7

9 9,14 0,96 30 -

10 9,05 1,07 32 25

11 9,05 1,17 42 19

Сыпучесть должна быть не менее 1,0, угол откоса: чем выше, тем технологичней.

Зависимость содержания действующего вещества в эхинацеи от температуры теплоносителя на выходе из сушилки

9,0 8,0 7,0 6,0

0

На рис.4 приведен ориентировочный график изменения величины действующего вещества в высушенной эхинацеи в зависимости от температуры теплоносителя на входе в нее от 160 до 200°С и при входе от 70 до 90°С.

Наибольшая величина действующего качала имеет место при более низкой температуре теплоносителя на выходе из сушилки, т.е. при наиболее "мягком" режиме. В то же время, как видно из таблицы 8 изменения Т1 от 160°С до 200°С практически не влияет на величину действующего вещества (опыты 9,10,11).

80 1 85 ' 90 '

Температура теплоносителя на выходе из сушилки, °С

Рис. 4

Для получения сухого продукта, имеющего большую величину действующего начала, необходимо, чтобы температура теплоносителя на выходе из сушилки не превышала 80°С.

Для промышленной эксплуатации может быть рекомендован следую-

щий режим сушки на РЦ1,0-1,2НК: Температура теплоносителя, °С

на входе в сушилку - 200-240

на выходе из сушилки - 75-85

Число оборотов диска, об/мин - 50000

Давление сжатого воздуха на форсунку, атм - 4,0

Производительность по испаренной влаге, кг/ч ' - 3,0-3,5

Производительность сушилки при данном режиме скорректирована с учетом большего количества воздуха в сушилке РЦ1,0-1,2, а также более низкой температуры теплоносителя на выходе из сушилки при принятых параметрах распылителей.

При промышленной эксплуатации будет уточнена величина отложений продукта на стенках сушилки; по нашему мнению относительное количество отложений будет невелико, т.е. их сыпучесть будет соответствовать периодическому удалению со стен и конуса. В процессе эксплуатации через каждые 15-20 мин целесообразно постукивание слегка деревянным молотком.

Для определения подлинности данного препарата предложена общая реакция на фенольные соединения с раствором железа окисного хлорида, который дает зеленое окрашивание с соединениями, имеющими две фенольные гидроксильные группы в орто-положении. В данном случае эта реакция указывает на наличие производных кофейной кислоты. УФ-спектр раствора Б, приготовленного для количественного определения в области от 250 до 360 мм должен иметь максимум поглощения при (382±2) нм и перегиб при (300310) нм, что характерно для оксикоричных кислот.

Метод количественного определения суммы производных оксикорич-ных кислот в препарате эстифан основан на определении оптической плотности подкисленного водного раствора в точке максимума поглощения при длине волны 328 нм аналогично методу количественного определения этих соединений в траве эхинацеи пурпурной. Содержание цикориевой (дикофео-илвинной) кислоты в сумме производных оксикоричных кислот достигает 7,0%. Остальная часть суммы представлена кофеоилвинной, кофеоилферуло-илвинной, ферулоилвинной и кумароилвинной кислотами. Все эти соединения содержат один и тот же хромофор - коричную кислоту, который характеризуется высоким удельным показателем поглощения в области УФ-спектра 320-330 нм. В спектре основного компонента - цикориевой кислоты имеется максимум поглощения при 328±2 нм, где находится и максимум поглощения суммы производных оксикоричных кислот. Это дает возможность определять с помощью спектрофотометрии количественное содержание суммы производных оксикоричных кислот в препарате в пересчете на цикориевую кислоту, используя в формуле расчета удельный показатель поглощения цикориевой кислоты.

Содержание суммы производных оксикоричных кислот в препарате было оценино методами ВЭЖХ и СФ-метрии. Относительная ошибка определения суммы оксикоричных кислот составляет ±2,64%.

РАЗРАБОТКА СУХИХ ЭКСТРАКТОВ ИЗ ПОБЕГОВ ЗЕЛЕНОГО ЧАЯ И ПЛОДОВ ШИПОВНИКА

Технология получения и стандартизация сухого экстракта зеленого чая

Сырьё для получения сухого экстракта зеленого чая служат молодые побеги и лист чайного куста - Thea Sinensis L.

В процессе обработки чайных побегов (завяливания, скручивания, ферментации, сушки и др.) в них под влиянием окислительных ферментов из галловой кислоты образуются водорастворимые пигменты буро-красного цвета, а при окислении катехинов - медно - красного.

При производстве зеленого чая ферменты инактивируются нагреванием, поэтому все фенольные соединения остаются в нативном состоянии.

Сухой экстракт зеленого чая получали из побегов чайного куста, не подвергшихся ферментации. Стандартизацию сухого экстракта проводили по содержанию суммы дубильных веществ в пересчете на галловую кислоту.

Зеленый чай обладает Р - витаминной- активностью, способствует уменьшению хрупкости и проницаемости капилляров.

Как известно, дубильные веществ из растений не в полной мере экстрагируются холодной водой, на их выход значительное влияние оказывают температура и время экстракции.

В результате экспериментальных исследований подобраны оптимальные условия экстракции БАВ из зеленого чая: температура экстракции -70±5°С, кратность экстракции - 3, время первой экстракции - 60 мин, второй и третьей 30 мин. Установлено соотношение сырье-экстрагент 1:10.

Как известно, размер частиц сырья обусловливает полноту и скорость перехода в раствор экстрагируемых веществ. Было установлено, что выход суммы дубильных веществ максимален при измельчении сырья до размеров частиц в пределах 1 - 3 мм.

Количество полученного сухого экстракта зеленого чая в немалой степени определяется технологическими параметрами сушки. Для сушки экстракта зеленого чая была использована распылительная сушка фирмы «Ан-гидро». Температура теплоносителя на входе в сушку менялась от 140 до 250°С, на выходе от 70 до 100°С.

В готовом продукте контролировалось содержание дубильных веществ в пересчете на галловую кислоту. Методом спектрофотометрии разработаны показатели качества для сухого экстракта зеленого чая, которые включены в ТУ. Содержание суммы дубильных веществ должно быть не менее 20%, относительная ошибка определения не превышает +5,46%. Отсутствие систе-

матической ошибки подтверждено анализом с помощью метода добавок галловой кислоты.

Разработка технологии производства сухого экстракта из плодов шиповника и его стандартизация.

Препараты из плодов шиповника обладают разнообразной фармакологической активностью, зависящей главным образом от содержания в растении комплекса витаминов. Плоды шиповника и лечебные препараты из них значительно повышают окислительно-востановительные процессы в организме, так как аскорбиновая кислота и продукты её окисления участвуют в окислительном дезаминировании ароматических аминокислот, активируют ряд ферментных систем, стабилизируют содержание адреналина, стимулируют сопротивляемость организма к вредным воздействиям внешней среды, инфекции и другим неблагоприятным факторам. Плоды шиповника, кроме того, усиливают регенерацию тканей, синтез гормонов, благоприятно влияют на углеводный обмен, проницаемость сосудов. Они обладают также противовоспалительными, желчегонными и диуретическими свойствами.

Разработка условий экстракции и режима сушки сухого экстракта шиповника

Нами разработан способ получения сухого экстракта шиповника, он включает в себя традиционные стадии производства сухих экстрактов: измельчение плодов шиповника, экстракцию сырья, упаривание и сушку методом распыления.

Контроль производства осуществляется по выходу экстрактивных веществ и аскорбиновой кислоты.

Учитывая термолабильность аскорбиновой кислоты, особое внимание было уделено температурным режимам экстракции и сушки.

На основании экспериментальных данных, экстрагентом, обеспечивающим максимальный выход экстрактивных веществ и аскорбиновой кислоты была установлена горячая вода, соотношение фаз сырье: экстрагент

1:10, температура экстракции 50+.5°С, а кратность экстракции - 3 (2 часа, 1,5 часа, 1час 15 мин).

Для улучшения технологических свойств и сохранения БАВ в лекарственное сухом экстракте, нами проводились исследование по отработке режимов сушки экстрактов шиповника с применением 2 типов сушилок, как в случае эхинацеи. Рекомендован режим сушки для эксплуатации сушилок РЦ1,0-1,2НК с получением максимальной доли сыпучего продукта. Температура теплоносителя °С на входе - 140-160, на выходе - 70-75, число оборотов диска об/мин. - 50000, давление сжатого воздуха на форсунку - 4,0, производительность по испаренной влаге, кг/ч - 1,1-1,8.

Для контроля качества готового продукта на основании проведенных исследований нами разработаны 2 качественные реакции: 1 на аскорбиновую кислоту 2 на присутствие флавоноидов.

Количественная оценка содержания аскорбиновой кислоты в водном извлечении основывается на реакции аскорбиновой кислоты с аммонием мо-либдатом и измерении оптической плотности с помощью спектрофотометре при длине волны 720нм.

В сухом экстракте шиповника должно быть аскорбиновой кислоты не менее 5%. Относительная ошибка методики количественного определения кислоты аскорбиновой составляет ±4,43%. Установлен срок годности 2 года.

Разработка технологии получения гранул на основе сухих экстрактов и установление показателей качества для них

Гранулы, рекомендованные при сахарном диабете С учетом механизма развитие сахарного диабета, принципов формирования многокомпонентных прописей, результатов клинических испытаний была подобрана композиция для разработки гранул, предназначенных для профилактики и лечения сахарного диабета.

Гранулы должны иметь следующий состав в расчете на одну дозу: Сухого суммарного экстракта из смеси растительного

сырья "Рецепт-1" (ТУ 9191-009-18684507-99) Экстракта женьшеня сухого (ТУ 9191-015-18684507-99) Экстракта шиповника сухого (ФС 42-3285-96) Кислоты лимонной (ГОСТ 908-76) Аспартама

Поливинилпирролидона низкомолекулярного медицинского - 0,020 г (ФС 42-1194-78)

Лактозы -1,105 г

(ОСТ 49-63-85)

Технологическая схема получения препарата состоит из следующих операций: просеивание, смешивание компонентов, влажное гранулирование, сушка гранул, сухое гранулирование. Выбор вспомогательных веществ при разработке гранул, рекомендуемых при диабете, и технологии проводился с учетом контроля качества лекарственной формы (точность дозирования, рас-падаемость), которые позволяют получить гранулы, соответствующие требованиям ГФ XI, вып. 2, стр. 139.

Выбор наполнителей проводили на основании получения удовлетворительных характеристик гранулятов. На основании проведенных исследований в качестве наполнителей выбраны молочный сахар. Введение молочного сахара в состав гранул целесообразно в связи с тем, что лекарственное вещество гигроскопично. Лимонная кислота введена в гранулы в качестве корригирующего вспомогательного вещества. Увлажнение осуществляется 5% раствором поливинилпирролидона низкомолекулярного.

- 0,200 г

- 0,020 г -0,100 г

- 0,050 г

- 0,005 г

Количество более мелких и более крупных гранул не превышает 5%. Гранулометрический состав определяли путем просеивания гранулята через набор сит. Экспериментально установлено, что оптимальной остаточной влажностью гранулята является 3,0-4,5%, которую определяли на приборе "КЕТТ", Япония.

Экстракты сухие, входящие в состав гранул, содержат различные группы биологически активных веществ, которые подтверждены экспериментальными исследованиями.

Количественное определения методики суммы проведения методом СФ-метрии, как в случае анализа сухого экстракта полученного на основе сбора «Рецепт-1». Содержание суммы флавоноидов в гранулах должно быть не менее 0,25%. Относительная ошибка методики количественного определения суммы флавоноидов не превышает ±4,05%. Срок годности 2 года.

Клиническое изучение «Гранул при диабете» подтвердило их сахарос-нижающее действие.

Изготовление гранул от «простуды» и их стандартизация В профилактических целях предложены лекарственные растения с целью оздоровления среды обитания человека и животных, а также для профилактики «простудных» заболеваний и повышения неспецифической резистентности организма.

Для изготовления гранул от «простуды» разработан состав, обеспечивающий противовоспалительный, иммуномодулирующий и улучшающий обмен веществ и предназначенной для профилактики «простудных» заболеваний.

Состав гранул на одну дозу:

Эстифана (экстракта эхинацеи пурпурного сухого) - 0,100 г

(ВФС 42-2372-94)

Экстракта зверобоя сухого - 0,050 г

(ВФС 42-2733-96)

Экстракта шиповника сухого - 0,100 г

(ФС 42-3285-96)

Экстракта солодкового корня сухого - 0,050 г

(ФС 42-2636-89)

Кислоты лимонной пищевой - 0,050 г

(ГОСТ 908-79)

Лактозы -1,150 г

(ОСТ 49-63-85)

Технологическая схема получения гранул аналогична схеме получения гранул «при диабете».

Для качественной характеристики разработаны реакции на аскорбиновую кислоту, флавоноиды и глицирризиновую кислоту. Содержание суммы фенольных соединений определяли по методике разработанной нами в ходе эксперимента. В результате разработана методика количественного анализа суммы фенольных соединений методом спектрофотометрии в пересчете на рутин-стандарт. Относительная ошибка определения не превышает ±4.8%.

Результаты клинического изучения показали лечебно-профилактическую эффективность при осенне-зимнем подъеме острых заболеваний.

Разработка сиропов на основе разработанных сухих экстрактов и их стандартизация.

Сиропы - концентрированные водные растворы сахарозы, которые могут содержать лекарственные вещества, фруктовые и пищевые экстракты.

Сироп шиповника (состав и показатели качества и безопасности). Состав сиропа шиповника на 100 г:

Экстракта шиповника сухого - 1,50 г

(ФС 42-3285-96)

Кислоты аскорбиновой - 0,30 г

(ФС 42-2668-95)

Натрия бензоата (ФС 42-2458-94) Сиропа сахарного (ГФ X, ст. 615)

-98,13 г

- 0,02 г

Технология производства сиропов сводится к следующему: 1 приготовление сахарного сиропа; 2 фильтрация сиропа; 3 измельчение и просев ингридиентов и растворение ингридиентов.

Микробиологическая чистота в соответствии с требованиями ГФ XI, вып.2, стр.193 и изм.№1, кат.З.

Разработана качественная реакция на аскорбиновую-кислоту. Количественное определение аскорбиновой кислоты проводили по методике описанной ГФ XI изд. Содержание аскорбиновой кислоты в 1мл сиропа шиповника должно быть не менее 0,0032 до 0,0048г., относительная ошибка методики определения не превышает ±2,382%. Для сиропа шиповника предусмотрено определение показателей безопасности (нормы допуска токсических элементов, радионуклидов, а также заложены нормы допуска микроорганизмов. Установлен срок годности - 1 год.

Как известно, при «простудных» заболеваниях организм человека нуждается в коррекции питания и режима работы и отдыха. В таких случаях не исключено снижение защитных сил организма и ухудшение общего состояния больных. В данной ситуации целесообразно включение в профилактические мероприятия сиропа при «простуде».

Нами разработан сироп, предложенный для профилактики и лечения простудных заболеваний следующего состава (в расчете на 100 г): Эстифана (экстракта эхинацеи пурпурной сухого)

Сироп «при простуде»

(ВФС 42-2372-94)

-0,6 г

Экстракта зверобоя сухого - 0,3 г

(ВФС 42-2733-96)

Экстракта шиповника сухого - 0,6 г

(ФС 42-3285-96)

Экстракта солодкового корня сухого - 0,3 г

(ФС 42-2636-89)

Кислоты лимонной пищевой - 0,5 г

(ГОСТ 908-79)

Натрия бензоата - 0,02 г

(ФС 42-2458-94)

Сиропа сахарного - 97,68 г

(ГФ X, ст. 615)

Технологические приемы, предложенные при получении сиропа при «простуде», не отличаются от способов изготовления других продуктов, таких, как сироп шиповника и др.

Дана качественная и количественная оценка действующим веществом в сиропе, применяя методики описанным в разделе гранулы при «простуде». Относительная ошибка методики количественного определения суммы фе-нольных соединений в пересчете на рутин не превышает ±2,17%. Сироп при «простуде» стабилен в течение 1,5 лет.

Сироп зеленого чая. Сироп зеленого чая должен иметь следующий состав в расчете на 100 г: Экстракта зеленого чая сухого - 1,2 г

(ТУ 9191-014-18684507-99)

Кислоты лимонной пищевой - 0,4 г

(ГОСТ 908-79)

Натрия бензоата - 0,02 г

(ФС 42-2458-94)

Отдушки "ароматической" - 0,05 г

Сиропа сахарного

- 98,33 г

(ГФ X, ст. 615)

Нами разработана методика качественного анализа на наличие дубильных веществ и флавоноидов в сиропе зеленого чая и наряду с этим разработана методика количественного определения дубильных веществ в пересчете на галловую кислоту. Содержание суммы дубильных веществ в пересчете на галловую кислоту в сиропе зеленого чая должно бытьне менее 0,3%. Относительная ошибка определения суммы дубильных веществ в пересчете на галловую кислоту не превышает ±4,78%. Отсутствие систематической ошибки подтверждено с помощью опытов с добавками галловой кислоты. В ТУ заложены показатели, необходимые для характеристики сиропов. Установлен срок годности - 1 год.

Для улучшения питательной ценности зеленого чая разработан сироп зеленого чая с шиповником.

Сироп может быть использован как профилактическое средство при гиповитаминозах, снижении общей резистентности организма особенно весной и зимой. Как известно, препараты шиповника применяются для повышения общей сопротивляемости организма.

В связи с этим предложен следующий состав сиропа зеленого чая с шиповником (в расчете на 100 г):

Экстракта зеленого чая сухого - 1,2 г

Сироп зеленого чая с шиповником

(ТУ 9185-05-18684507-99) Экстракта шиповника сухого (ФС 42-3285-96) Кислоты лимонной пищевой

-0,4 г

-0,6 г

(ГОСТ 908-79) Натрия бензоата (ФС 42-2458-94)

- 0,02 г

Сиропа сахарного (ГФ X, ст. 615)

- 98,33 г

Полученный сироп представляет собой прозрачную, густоватую жидкость светло-оранжево-коричневого цвета, с ароматным запахом и сладко-горьковатым вкусом.

Характеристика конечного продукта осуществлена качественно по реакции на аскорбиновую кислоту и дубильные вещества. Для количественного анализа использована методика используемая в сиропе зеленого чая. Относительная ошибка определения дубильных веществ не превышает ±2,41%. Установлен срок годности - 1год. Показатели качества заложены в ТУ.

Сироп с женьшенем Была разработана технология производства сиропа с женьшенем, в рецептуру которого дополнительно введены экстракты шиповника и солодки с целью усиления общеукрепляющего действия.

Предложен следующий состав сиропа с женьшенем (в расчете на 100г): Экстракт женьшеня сухого (ТУ 9191-015-18684507-00) 0,30г

Экстракт шиповника сухого (ФС 42-3285-69) 1,50г

Экстракт солодкового корня сухого

(ФС 42-2636-89) 0,40г

Кислоты лимонной пищевой

(ГОСТ 908-79) 0,40г

Натрия бензоата

(ФС 42-2458-94) 0,04г

Сиропа сахарного До получения

(ГФХ ст. 615) ЮОг сиропа

Учитывая многообразие химических соединений, входящих в экстракты растений, обуславливающих действие сиропа, предложено проводить

стандартизацию по содержанию аскорбиновой кислоты, а в подраздел «Подлинность» включить качественные реакции на наличие сапонинов, глицирри-зиновой и аскорбиновой кислот и УФ - спектр раствора препарата, полученного для количественного определения, являющегося суммарной характеристикой компонентов препарата, имеющих поглощение света в УФ- области спектра. Массовую долю аскорбиновой кислоты рекомендовано определять по аналогии с определением её в сухом экстракте шиповника..

Массовая доля аскорбиновой кислоты в сиропе не менее 0,2%, ошибка единичного определения аскорбиновой кислоты не превышает +7,38%. Установлен срок годности 1 год.

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1. С учетом химического состава исходного сырья исследовано влияние технологических факторов (полярность экстрагента, его концентрация и температура, соотношение экстрагента и сырья, время экстракции, условия выпарки и сушки) на выход экстрактивных и действующих веществ. Показана возможность экстракции многокомпонентной растительной композиции сырья с различным анатомическим строением. Рациональность подтверждена технологическими свойствами и стабильными показателями качества готового продукта.

2. На основании физико-химических, технологических и фармакологических исследований разработаны научно-методические основы создания и стандартизации сухих экстрактов, обладающих иммуностимулирующим, адаптогенным, общеукрепляющим действием, а также улучшающих обмен веществ. Разработана принципиальная схема получения сухих экстрактов, как основы для создания лекарственных средств и БАД.

3. Разработана технология получения сухого экстракта из смеси растительного сырья "Рецепт-1" с фармакологическим действием аналогичным сбору.

4. В зависимости от свойств БАВ, предложены оптимальные параметры режимов расцылительной-сушки-экстрактов-элеутерококка,—женьшеняу-эхинацеи, зеленого чая, шиповника, «Рецепт-1».

Разработана технология получения сухого экстракта из смеси растительного сырья "Рецепт-1" с фармакологическим действием аналогичным сбору.

5. Разработаны методики качественного и количественного определения БАВ в сухих экстрактах. Сумма производных оксикоричных кислот в пересчете на цикоревую кислоту в сухом экстракте эхинацеи методом спек-трофотометрии; сумма панаксозидов в пересчете на методом ВЭЖХ в сухом экстракте женьшеня; элеутерозида В в сухом экстракте элеутерококка

методом ВЭЖХ; аскорбиновая кислота в сухом экстракте шиповника методом спектрофотометрии; дубильные вещества в пересчете на галловую кислоту в сухом экстракте зеленого чая; сумма флавоноидов в сухом экстракте "Рецепт-1" методом спектрофотометрии в пересчете на рутин.

6. На основе сухих экстрактов разработаны составы, технологии и проведена стандартизация готовых форм в виде гранул и сиропов: гранулы «от простуды», при сахарном диабете, сироп шиповника, зеленого чая, зеленого чая с шиповником, сироп «при простуде», сироп с женьшенем. Правильность выбора рецептуры подтверждена клиническими исследованиями. Показатели качества и безопасности включены в нормативную документацию (ТУ).

Все продукты зарегистрированы МЗ РФ в качестве БАД.

СПИСОК ОСНОВНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ

ДИССЕРТАЦИИ

1. Глызин В.И., Толстых Л.П., Давыдова В.Н., Тареева Н.В. «Сухие экстракты из лекарственного растительного сырья». Тезисы науч.докл. 1. Российский нац. конгресс «Человек и лекарство», Москва, 1992 г., с. 28.

2. Соколов С.Я., Байков В.П., Толстых Л.П., Савина A.A., Давыдова В.Н. «Изучение фармакологической активности сухого экстракта шрота элеутерококка». Тез.науч.докл. Всес. конференции,'Томск, 1989 г., с. 12.

3. Глызин В.И., Толстых Л.П., Давыдова'В.Н. «Оптимизация процесса экстрагирования корней и корневищ элеутерококка». Тезисы науч. докл.Всес. научно-технической конференции, Харьков, 1990 г., с.15-16.

4. Глызин В.И., Толстых Л.П., Евстратова Р.И., Савина А.А Давыдова В.Н., Солдатова О.В., Соколов С.Я., Бойко В.П., Полетаева Т.И., Белошапко A.A., Енютина Е.Ю., Омельницкий П.П., Рванцова Н.В. «Способ получения экстракта элеутерококка». Автор, свидетельство № 1628292,1990 г.

5. Глызин В.И., Толстых Л.П., Давыдова В.Н., Маяцкая Т.В. «Способ получения биологически-активной добавки из элеутерококка для косметических изделий». Автор, свидетельство № 5020063,1992 г.

6. Глызин В.И., Толстых Л.П., Давыдова В.Н., Мухамеджанова Д.М., Маяцкая Т.В. «Способ получения биологически-активной добавки из шиповника для косметических изделий». Автор, свидетельство N° 5020064,1992 г.

7. Давыдова В.Н. «Сухие экстракты лекарственных растений в лечебно-профилактических средствах при простуде». Тезисы научн. докл. научно-прак. конференции «БАД и лекарственные препараты на натуральной основе в профилактике, лечении и реабилитации». Москва, 2000 г., с. 39-40.

8. Давыдова В.Н. «Сухой экстракт зеленого чая и метод его стандартизации». Тезисы научн. докл. научно-прак. конференции «БАД и лекарственные препараты на натуральной основе в профилактике, лечении и реабилитации». Москва, 2000 г., с. 90-92.

9. Давыдова В.Н. «Комплексное применение биологически активных добавок в виде концентрированных основ для профилактики и лечения сердечно-сосудистых заболеваний». Тезисы научн. докл. Международный симпозиум «Биологически активные добавки к пище XXI века»,. Санкт-Петербург, 2000 г .,с. 68.

Ю.Давыдова В.Н. «Перспективы использования биологически активных добавок при лечении больных сахарным диабетом».- Тезисы научн. докл. Международный симпозиум «Биологически активные добавки к пище XXI века»,.Санкт-Петербург, 2000 г., с. 69.

П.Давыдова В.Н. «Лечебно-профилактическое средство, обладающее общеукрепляющим и тонизирующим действием (варианты),'способ его получения и способ приготовления сухого экстракта зеленого чая». Патент на изобретение, заявка № 2000104905, решение о выдаче патента 29.02.00 г.

12.Давыдова В.Н. «Лечебно-профилактическое средство от простуды». Патент на изобретение. Заявка № 2000104823, решение о выдаче патента 29.02.00.

13.Давыдова В.Н., Мешков И.И., Постников В.И. Основа концентрированная (бальзам) «Домашняя аптека «Великолепный». Патент на изобретение, заявка № 99103796, решение о выдаче патента 17.01.00.

14.Давыдова В.Н., Мешков И.И., Постников В.И. Основа концентрированная (бальзам) «Домашняя аптека «Панацея», Патент на изобретение, заявка № 99103794, решение о выдаче патента 21.06.99.

15.Давыдова В.Н., Мешков И.И., Постников В.И. Основа концентрированная (бальзам) «Домашняя аптека «Звездный». Патент на изобретение, заявка № 99103795, решение о выдаче патента 17.01.00.

16.Давыдова В.Н., Цой Т.А. Средство «Элексир здоровья «Встань-ка», оказывающее общеукрепляющее действие и ослабляющее эффект этилового спирта при его остром и хроническом употреблении (варианты). Патент № 2145862.

П.Глызин В.И., Тареева Н.В., Давыдова В.Н.,Багинская А.И., Колхир В.К., Сокольская Т.А. Силимар - отечественный аналог карсила// I международный науч. конгресс «Традиционная медицина и питание: теоретические и практические аспекты», Москва, тезисы докладов, 1994 г. с. 152.

18.Глызин В.И., Тареева Н.В., Давыдова В.Н.,Багинская А.И., Асанов Э.Б., Сокольская Т.А. Сибектан - комплексный гепатопротектор из растений.// 1 международный научный конгресс «Традиционная медицина и питание: теоретические и практические аспекты», тезисы докладов, Москва, институт традиционных методов лечения МЗ РФ, 1994, с. 152.

19.Быков В.А., Глызин В.И., Климахин Г.И., Тареева Н.В., Сокольская Т.А., Давыдова В.Н.,Громакова А.И., Колхир В.К., Багинская А.И., Вичканова С.А., Пименов К.С., Вандышев В.В., Лужнов В.Д., Гладышев Ю.А., Малахов А.И., Семикин В.В., Коржова Л.П., Кузнецова Н.В. Способ комплексной переработки плодов расторопши пятнистой.// Патент № 2099076, Москва, 1997 г.

20.Азаркова А.Р., Давыдова В.Н., Бурова А.Е., Кирьянов A.A., Нестеров Н.И. «Изучение состава химических веществ сухого экстракт арники облиственной». Труды Всероссийского НИИ лекарственных и ароматических растений, Москва, 2000, с. 50.

21.Давыдова В.Н. «Современные аспекты технологии получения сухих экстрактов и их ассортимент», Москва, Новая Аптека, вып. 4, 2002 г., с. 106109.

22.Сокольская Т.А., Давыдова В.Н., Пинеев С.А. «Методы стандартизации сухих экстрактов», Москва, Новая Аптека, вып. 4,2002 г., с.69-71.

23. Давыдова В.Н. «Алгоритм разработки импортозамещающей продукции (на примере получения сухого экстракта для лечения инсулиннезависимо-го сахарного диабета)», Москва, Новая Аптека, вып. 5, 2002 г., с. 72-75.

24.Давыдова В.Н. «Сбор лекарственных растений для профилактики и поддерживающей терапии при диабете», заявка на патент № 2002103851 от 18.02.2002 г.

25.Давыдова В.Н. «Средство для профилактики и поддерживающей терапии при диабете и способ его получения», заявка на патент №.2002103852 от 18.02.2002 г.

26. Давыдова В.Н. «Средство для профилактики и поддерживающей терапии при диабете и способ его получения», заявка на патент № 2002103853 от 18.02.2002 г.

27. Давыдова В.Н. «Сбор лекарственных растений при комплексной терапии инсулиннезависимого сахарного диабета». Тезисы научного доклада Научно-практической конференции «Биологически активные добавки в профилактике заболеваний, Москва, 2002 г., с. 15-16.

28.Давыдова В.Н. «Перспективы использования сухого экстракта женьшеня в лечебно-профилактических средствах». Тезисы научного доклада Научно-практической конференции «Биологически активные добавки в профилактике заболеваний, Москва, 2002 г., с.21-22.

29.Давыдова В.Н. «Сироп на основе сухих экстрактов женьшеня, шиповника и солодки». Тез. науч. докл. Научно-практической конференции «Биологически активные добавки в профилактике заболеваний, Москва, 2002 г., с. 50-51.

30.Давыдова В.Н. «Биологически активные вещества зеленого чая в пара-фармацевтических средствах». Тез. науч. докл. к V Всероссийскому съезду физиотерапевтов и курортологов и научному форуму «Физические факторы и здоровье человека», 2002 г. Москва, с. 41-42.

31.Давыдова В.Н. «Сухой экстракт эхинацеи в профилактике и лечении острых воспалительных заболеваний». Тез. научн. докл. к V Всероссийскому съезду физиотерапевтов и курортологов и научному форуму «Физические факторы и здоровье человека», 2002 г. Москва, с. 18-19.

32. Глызин В.И., Толстых Л.П., Давыдова В.Н., Азаркова А.Ф., Гаевский A.A., Вандышев В.В., Трегубов В.М,, Маяцкая Т.В.«Способ получения биологически активной добавки из ромашки для косметических изделий, патент № 2005484, приоритет изобрет. 29.12.1991 г.

33. Глызин В.И., Толстых Л.П., Давыдова В.Н., Азаркова А.Ф., Гаевский A.A., Вандышев В.В., Трегубов В.М., Маяцкая Т.В «Способ получения биологически активной добавки из календулы для косметических изделий», патент «№ 2008014, приоритет изобрет. 29.12.1991 г.

34. Давыдова В.Н., Азаркова А.Ф., Глызин В.И.,.Маяцкая Т.В «Разработка способов получения, стандартизация и исследования действия сухих экстрактов ромашки и календулы при накожном их применении». Тез.научн. доклал. «Институт традиционных методов лечения», Москва.: 1-й международный научный конгресс, 1991 г. с. 31,

35.Бурова А.К., Кирьянова A.A., Давыдова В.Н., Азаркова А.Ф., «К вопросу стандартизации нового вида сырья ромашки и календулы». Институт почвоведения и фитосинтеза, Москва, 1991 г., с. 18,

36. Давыдова В.Н., Толстых Л.П., Савина A.A., Соколов С .Я., Колхир В.К. «Изучение шрота стальника». Тез. докл. Всес. научно-технич. конференции, Москва, 1988 г., с. 22.

ЗТГБагинская А.И., Колхир ВТК., Í лызин~В!И~Глазова~Н.Г.7~Лескова~Т.Е:7" Тареева Н.В., Давыдова В.Н., Охотникова В.Ф., Качалина Т.В., Сокольская Т. А. «Разработка лекарственных препаратов на основе комплексного использования плодов расторопши пятнистой// П Российский нац. Конгресс «Человек и лекарство», тезисы докладов, Москва, 1995 г., с. 623.