Разработка состава и технологии жидкой лекарственной формы для наружного применения с резвератролом

Полухина, Татьяна Сергеевна

Диссертации по медицине → Технология получения лекарств

Автореферат и диссертация по медицине (14.04.01) на тему:Разработка состава и технологии жидкой лекарственной формы для наружного применения с резвератролом

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Полухина, Татьяна Сергеевна Москва 2011 г.

Ученая степень: кандидата фармацевтических наук

ВАК РФ: 14.04.01

Автореферат диссертации по медицине на тему Разработка состава и технологии жидкой лекарственной формы для наружного применения с резвератролом

<1041)701 На правах рукописи

ПОЛУХИНА Татьяна Сергеевна

РАЗРАБОТКА СОСТАВА И ТЕХНОЛОГИИ ЖИДКОЙ ЛЕКАРСТВЕННОЙ ФОРМЫ ДЛЯ НАРУЖНОГО ПРИМЕНЕНИЯ С РЕЗВЕРАТРОЛОМ

14.04.01 - Технология получения лекарств

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

1 3 МАЙ 2011

Москва-2011

4846701

Диссертационная работа выполнена в ФГАОУ ВПО «Белгородский государственный национальный исследовательский университет»

Научный руководитель: Доктор фармацевтических наук

Новиков Олег Олегович

Официальные оппоненты: Доктор фармацевтических наук, профессор

Саканян Елена Ивановна

Доктор фармацевтических наук, профессор Степанова Элеонора Федоровна

Ведущая организация: ГОУ ВПО «Казанский государственный

медицинский университет»

Защита состоится «30 » МХЛ гШ г. в -77 часов на заседании диссертационного совета Д 006.070.01 во Всероссийском научно-исследовательском институте лекарственных и ароматических растений (ВИЛАР) РАСХН (117216, г. Москва, ул. Грина, 7) по адресу: 123056, г. Москва, ул. Красина, д. 2.

л О

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке «Всероссийского научно-исследовательского института лекарственных и ароматических растений» по адресу: 117216, г. Москва, ул. Грина, 7.

Автореферат разослан «¿Лу> тюыл 2о/-/г.

Ученый секретарь диссертационного совета, д. фарм. н.

А.И. Громакова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Одной из тенденций развития российского фармацевтического рынка является увеличение доли лечебной косметики и лекарственных средств, предназначенных для этих целей. Широко представленные в аптеках средства для волос являются, преимущественно импортными, большинство из них предназначены для лечения различного рода аллопеций и перхоти, и лишь отдельные - для лечения больных сухой и жирной себореей волосистой части головы. Отечественные лекарственные средства этого назначения практически отсутствуют, а имеющиеся на фармацевтическом рынке косметические средства (шампуни, лосьоны, бальзамы) при лечении и профилактике себореи просто не эффективны.

В этой связи, проведение научно-исследовательских работ, направленных на разработку новых составов, технологии и последующего производства лекарственных препаратов антисеборейного действия, является, несомненно, актуальной задачей, требующей всестороннего изучения и поиска новых решений.

Одним из перспективных к применению для профилактики и лечения себореи лекарственных веществ является 3,5,4'-тригидрокси-от/>янс-стильбен (резвератрол), достаточно широко применяемый в зарубежной медицинской практике.

Цель и задачи исследования. Целью диссертационного исследования является разработка состава и технологии жидкой лекарственной формы для наружного применения антисеборейного действия на основе полифенольного лекарственного вещества растительного происхождения - резвератрола. В связи с поставленной целью должны быть реализованы следующие задачи:

1. Теоретически обосновать и экспериментально апробировать состав жидкой лекарственной формы с резвератролом.

2. Разработать технологическую схему получения жидкой лекарственной формы для наружного применения.

3. Провести микробиологические исследования, подтверждающие антисеборейное действие разрабатываемой жидкой лекарственной формы с резвератролом.

4. Разработать методики идентификации и количественного анализа резвератрола, пригодные для его определения в разрабатываемой жидкой лекарственной форме.

5. Предложить нормы качества для разработанной жидкой лекарственной формы с резвератролом и изучить условия и сроки ее хранения разработанной жидкой лекарственной формы с резвератролом.

6. Разработать проекты НД в виде лабораторного регламента и проекта ФСП.

Научная новизна исследования.

Впервые проведены микробиологические исследования, подтверждающие антисеборейное действие препарата на основе природного лекарственного вещества полифенольной природы -резвератрола.

Разработаны методы количественного и качественного анализа, подтверждающие стабильность жидкой лекарственной формы антисеборейного действия в процессе хранения. Определены основные показатели качества разработанного лекарственного средства и определены условия и сроки ее хранения.

Научная новизна исследования подтверждена патентами РФ: №2391997 «Антисеборейное фармацевтическое средство», №2385457 «Способ идентификации резвератрола» и №2390772 «Способ количественного определения резвератрола».

Практическая значимость и внедрение результатов в практику.

На основании проведенных исследований создан оригинальный отечественный лекарственный препарат для лечения и профилактики себореи волосистой части головы на базе природной субстанции -резвератрола.

Проведена практическая апробация на предприятии ОАО «Фармстандарт-Лексредства», акт внедрения предложения (от 22.11.2010 г.), разработан проект нормативной документации (лабораторный регламент и аналитические методики), принятый к перспективному рассмотрению ОАО «Фармстандарт-Лексредства». Фрагменты технологических и аналитических исследований внедрены в лабораторно-практический курс по предметам «Фармацевтическая технология» и «Фармацевтическая химия» на фармацевтическом факультете ГОУ ВПО «Белгородский государственный университет» (№80 от 25.10.2010 г., №81 от 25.10.2010 г.) и ГОУ ВПО «Курский государственный медицинский университет» (№93 от 15.11.2010 г., №94 от 16.11.2010 г.).

Основные положения, выносимые на защиту:

- обоснование выбора состава действующих и вспомогательных компонентов при разработке жидкой лекарственной формы для наружного применения антисеборейного действия;

- технологическая схема производства жидкой лекарственной формы с резвератролом;

- микробиологические исследования разработанного состава жидкой лекарственной формы с резвератролом;

- результаты анализа полученной лекарственной формы с резвератролом и установление условий и сроков ее хранения.

Апробация работы.

Основные положения диссертационного исследования обсуждались: на Международной научно-практической конференции «Лекарственные растения и биологически активные вещества: фитотерапия, фармация, фармакология» (Белгород, 2008 г.), на Международной научно-практической конференции «Биологически активные соединения природного происхождения: фитотерапия, фармацевтический маркетинг, фармацевтическая технология, фармакология, ботаника» (Белгород, 2008 г.), на Международной научно-практической конференции «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции» (Пятигорск, 2010 г.), на научно-практической

конференции «Актуальные проблемы современной фармации и фармацевтического образования» в рамках ХШ межрегиональной специализированной выставки Белгородской торгово-промышленной палаты «Медицина. Фармация» (2010г.), на межкафедральном заседании ГОУ ВПО «Белгородский государственный университет» (2010 г.).

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ ФГАОУ ВПО «Белгородский государственный национальный исследовательский университет» в рамках научного направления «Разработка методологических подходов к анализу природных и синтетических биологически активных соединений в объектах различного происхождения. Изучение фармакологических аспектов использования данных биологически активных соединений». Номер государственной регистрации темы диссертационного исследования 01201051313.

Публикации по работе. По материалам диссертационных исследований опубликовано 18 научных работ, 6 - в изданиях, рекомендованных ВАК, получены 3 патента РФ.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 148 страницах машинописного текста, содержит 30 таблиц, 21 рисунок, состоит из введения, 4 глав, выводов, приложения, списка литературы, включающего 133 источника, в т.ч. 108 работ зарубежных авторов.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Глава 1. Аналитическая и фармакологическая характеристика резвератрола (литературный обзор)

Проведен литературный и патентный обзор аналитических и фармакологических характеристик резвератрола, в результате которого установлена многофункциональная фармакологическая активность вещества и целесообразность его использования в качестве действующей фармакологической субстанции в лекарственной форме антисеборейного действия. Выявлено, что резвератрол достаточно широко используется за рубежом в косметических препаратах, что, собственно, и послужило предпосылкой разработки лекарственных препаратов на его основе. В России резвератрол известен как компонент биологически активных добавок.

Глава 2. Материалы, методы и методики исследования

Глава 2 включает в себя описание действующих и вспомогательных веществ, фармакопейные, биофармацевтические и микробиологические методы исследования. В данной работе использовали стандартный образец резвератрола Sigma (США), кат. № R5010 и субстанция "DSM Nutritional Products Europe Ltd" (Швейцария).

Качественное определение резвератрола проводили методом тонкослойной хроматографии в системах растворителей: хлороформ -этилацетат - муравьиная кислота (2,5:1:0,1) и хлороформ - спирт этиловый

(7:3). Пластинки «Sorbfil» ПТСХ-П-А-УФ размером 10x15 см. Хроматографировали восходящим способом. Для проявления использовали диазотированную сульфаниловую кислоту.

Идентификацию резвератрола проводили УФ-спектрофотометрией в диапазоне длин волн 240-340 нм на спектрофотометре СФ-56 в кювете с толщиной слоя 10 мм. Максимум поглощения вещества находится в пределах 306-307 нм.

Разделение изомеров резвератрола осуществляли на хроматографической колонке 150x4,0 мм Reprosil Pur Cl8 Aqua ODS, размер частиц 5 мкм. Для детектирования образца был использован детектор A Chi, длина волны детектирования - 306 нм. В качестве подвижной фазы А использовали смесь: фосфатный буферный раствор -ацетонитрил (91,5:8,5); в качестве подвижной фазы В смесь: фосфатный буферный раствор - ацетонитрил (15,0:85,0). Буферный раствор - лития дигидрофосфат 0,05 М. Объем подвижной фазы - 0,75 мкл/мин. Скорость подвижной фазы - 0,9 мл/мин. Продолжительность анализа - 28 минут.

Физические и физико-химические исследования проводили согласно ГФ ХП: растворимость (ОФС 42-0049-07), иономегрия (ОФС 42-0048-07), плотность (ОФС 42-0037-07), вязкость (ОФС 42-0038-07), прозрачность и степень мутности жидкостей (ОФС 42-0051-07), тонкослойная хроматография (ОФС 42-0094-09), высокоэффективная жидкостная хроматография (ОФС 420096-09), спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях (ОФС 42-0042-07), микробиологические исследования методом диффузии в агар.

Глава 3. Обоснование состава и разработка лекарственной формы с резвератролом антисеборейного действия

Учитывая отсутствие на отечественном рынке эффективных лекарственных средств антисеборейного действия, актуальным является создание лекарственной формы с резвератролом. На рис. 1 представлена схема разработки жидкой лекарственной формы с резвератролом. Она включает в себя 5 основных блоков: маркетинговый анализ, выбор вида лекарственной формы, разработка состава, разработка технологического процесса и разработка методов стандартизации.

Резвератрол является фитоалексином полифенольной природы. Обладает широким спектром фармакологических свойств, основными из которых для решения наших задач являются: антимикробное действие, антимикотическая активность, противовоспалительное действие, улучшение микроциркуляции.

Учитывая затруднения, возникающие при нанесении мазей, линиментов и других вязко упругих систем на волосистую часть головы, рациональной является разработка состава и технологии жидкой лекарственной формы с природным полифенолом - резвератролом. Для этой цели проводили изучение растворимости лекарственного вещества -резвератрола - в различных растворителях.

Рис. 1. Схема разработки жидкой лекарственной формы с резвератролом

В качестве растворителей были использованы: пропиленгликоль, глицерин, спирт этиловый 96%-ный, вода очищенная, масло персиковое. Ранее было установлено, что резвератрол легко растворим в спирте этиловом 96 % и практически нерастворим в воде очищенной. Поскольку спирт этиловый применяется в фармацевтической промышленности как растворитель и консервант, то именно он был взят для дальнейших исследований. Однако, учитывая тот факт, что концентрированный спирт этиловый подсушивает кожу головы, что может усиливать шелушение, нежелательное при себорее, дальнейшие исследования растворимости резвератрола были направлены на максимальное снижение концентрации крепкого спирта и изучение растворимости его в спирте этиловом различных концентраций. Проведенные исследования показали, что резвератрол гораздо хуже растворим в спирте этиловом 70 %, мало растворим в 50 % этиловом спирте и очень мало растворим - в 30 %. Следовательно, введение резвератрола в жидкую дисперсионную среду возможно при растворении его только в спирте этиловом 96 %. Для снижения негативного воздействия спирта этилового следует ввести вспомогательные вещества.

Дальнейшие исследования были направлены на выбор этих вспомогательных веществ, при этом акцент делали на неводные растворители. Пропиленгликоль достаточно широко применяется в косметологии, фармацевтической промышленности как растворитель и консервант. Глицерин часто используется наружно в виде разбавленных растворов (до 30%). Он легко впитывается в кожу и, раздражая терморецепторы, улучшает кровоснабжение, что способствует смягчению кожи. Кроме того, глицерин в концентрации до 10% широко используется в составах косметических средств как активный гидратант. Концентрация его в кремах может достигать 10%.

Дальнейшим этапом исследований явилось определение оптимальных соотношений выбранных ингредиентов. Для этого были изучены некоторые физические и физико-химические характеристики ряда представленных ниже модельных смесей. С этой целью, были приготовлены модельные смеси, содержащие пропиленгликоль и глицерин концентрации 5%, 10% и 15% в различных соотношениях. Составы разработанных модельных смесей представлены в табл. 1.

Таблица 1. Составы разработанных модельных смесей с резвератролом

№ п/п Состав № п/п Состав

1 Резвератрол 0,30 Спирт этиловый 96 % 30,0 Пропиленгликоль 5,0 Глицерин 15,0 Вода очищенная до 100,0 мл 5 Резвератрол 0,30 Спирт этиловый 96 % 30,0 Пропиленгликоль 10,0 Глицерин 10,0 Вода очищенная до 100,0мл

2 Резвератрол 0,30 Спирт этиловый 96 % 30,0 Пропиленгликоль 10,0 Глицерин 15,0 Вода очищенная до 100,0 мл 6 Резвератрол 0,30 Спирт этиловый 96 % 30,0 Пропиленгликоль 15,0 Глицерин 10,0 Вода очищенная до 100,0 мл

3 Резвератрол 0,30 Спирт этиловый 96 % 30 Пропиленгликоль 15,0 Глицерин 15,0 Вода очищенная до 100,0 мл 7 Резвератрол 0,30 Спирт этиловый 96 % 30,0 Пропиленгликоль 5,0 Глицерин 5,0 Вода очищенная до 100,0 мл

4 Резвератрол 0,30 Спирт этиловый 96 % 30,0 Пропиленгликоль 5,0 Глицерин 10,0 Вода очищенная до 100,0 мл 8 Резвератрол 0,30 Спирт этиловый 96 % 30,0 Пропиленгликоль 10,0 Глицерин 5,0 г Вода очищенная до 100,0 мл

9 Резвератрол 0,30 Спирт этиловый 96 % 30,0 Пропиленгликоль 15,0 Глицерин 5,0 Вода очищенная до 100,0 мл

Для каждого образца были определены величина рН, плотность, вязкость и количественное содержание резвератрола в ходе изучения стабильности лекарственной формы с помощью метода УФ-спектрофотометрии (>„=307 нм, растворитель - спирт этиловый 96%). Результаты проведенных исследований представлены в табл. 2.

Таблица 2. Результаты исследования физических и физико-химических показателей модельных смесей

Состав модельной смеси Физические и физико-химические показатели модельных смесей Первоначальное содержание резвератрола в составе модельных смесей, г Количественное содержание резвератрола в составе модельных смесей через 30 дней, г

Плотность, г/см Вязкость, сСт рН

№ 1 1,012 1,98 7,2 0,306 0,210

№2 1,015 2,08 6,4 0,302 0,228

№3 1,018 2,15 6,4 0,305 0,220

№4 1,010 1,92 6,1 0,302 0,228

№5 1,012 2,10 5,7 0,302 0,230

№6 1,000 1,86 5,2 0,305 0,230

№7 1,003 1,91 5,6 0,303 0,225

№8 1,007 2,02 5,5 0,302 0,231

№9 1,006 2,01 5,4 0,301 0,229

Учитывая тот факт, что рН кожи головы в норме составляет 4,5 - 5,5, рационально создание такого же значения рН и у разработанной жидкой лекарственной формы. По показателю рН наиболее подходящими являлись модельные смеси составов № 6,8 и 9, которые использовали в дальнейших исследованиях.

Как видно из данных табл. 2, в течение 30 дней количество резвератрола снижается более чем на 25 %. Можно предположить, что в процессе хранения лекарственной формы происходит окисление резвератрола Поэтому для стабилизации резвератрола в составе разработанной лекарственной формы проведён подбор веществ с разными механизмами действия: аскорбиновая кислота, натрия сульфит, трилон Б - традиционно используемые стабилизаторы в фармацевтической технологии, малотоксичны, применяются при разработке лекарственных форм.

Составы модельных смесей с различными стабилизаторами представлены в табл. 3.

Таблица 3. Разработанные составы модельных смесей с различными стабилизаторами

Состав модельной смеси № 1 Состав модельной смеси № 2 Состав модельной смеси № 3

Резвератрол 0,30 Спирт этиловый 96% 30,0 Глицерин 5,0 Аскорбиновая кислота 0,20 Пропиленгликоль до 100,0 Резвератрол 0,30 Спирт этиловый 96% 30,0 Глицерин 5,0 Натрия сульфит 0,50 Пропиленгликоль до 100,0 Резвератрол 0,30 Спирт этиловый 96% 30,0 Глицерин 5,0 Трилон Б 0,075 Пропиленгликоль до 100,0

Изучение стабильности проводили по фармакопейным характеристикам. Результаты исследования стабильности модельных смесей с различными стабилизаторами представлены в табл. 4.

Таблица 4. Результаты исследования стабильности модельных смесей с различными стабилизаторами

Состав Время хранения, сутки

мод.

смесей 1 3 5 7 9 11 13 15

внешний вид продукта

Состав прозр. прозр. прозр. прозр. прозр. прозр. прозр. прозр.

№ 1 бесцв. бесцв. бесцв. бесцв. бесцв. бссцв. бесцв. бесцв.

жид-ть жид-ть жид-ть жид-ть жид-ть жид-ть жид-ть жид-ть

Состав прозр. прозр. прозр. прозр. прозр. прозр. прозр. прозр.

№2 бесцвет бесцвет желтая желтая желтая желтая желтая желтая

жид-ть жид-ть жид-ть жид-ть жид-ть жид-ть жид-ть жид-ть

Состав прозр. прозр. прозр. прозр. прозр. прозр. прозр. прозр.

№3 бесцвет желтая желтая желтая желтая желтая желтая желтая

жид-ть жид-ть жид-ть жид-ть жид-ть жид-ть жид-ть жид-ть

Как видно из данных табл. 4, в течение 15 дней модельная смесь №1, содержащая кислоту аскорбиновую, не изменяла цвет и прозрачность. Обусловлено тем, что кислота аскорбиновая является природным антиоксидантом, активным восстановителем, вступает в окислительно-восстановительные реакции с окислителями различной природы, где ведёт себя как донор водорода, переходя в свою окисленную форму -дегидроаскорбиновую кислоту, причём процесс этот обратимый. Помимо этого за счёт наличия енольных гидроксилов аскорбиновая кислота проявляет кислые свойства, что также важно при стабилизации резвератрола, так как в кислой среде фенолы устойчивы. По механизму действия аскорбиновая кислота относится к группе восстановительных антиоксидантов, то есть имеет более низкий окислительно-восстановительный потенциал, чем стабилизируемое вещество. Поэтому при хранении исследуемой лекарственной формы именно она будет подвергаться окислению в первую очередь, что и подтверждено в ходе эксперимента.

Кроме того, для каждого раствора было изучено количественное определение резвератрола в ходе изучения стабильности лекарственной формы с помощью метода УФ-спектрофотометрии (>=307 нм, растворитель -спирт этиловый 96%). Было установлено, что в лекарственных формах, содержащих стабилизаторы трилон Б и натрия сульфит, содержание резвератрола падает примерно на 8-10 %, что возможно объяснить недостаточной антиоксидантной активностью выбранных стабилизаторов. Следовательно, конечным явился состав модельной смеси №1, который использовали в дальнейших исследованиях.

Для подтверждения и прогнозирования фармакологического эффекта были проведены исследования по изучению скорости высвобождения резвератрола из жидкой лекарственной формы по методике Крувчинского. Результаты исследования представлены на рис. 2.

t, мин.

Рис. 2. Кинетическая кривая высвобождения резвератрола из модельной смеси

Установлено, что высвобождение резвератрола достигает 50 % через 30 минут. В течение последующего времени (1,5 часа) концентрация действующего вещества остается постоянной. Этот факт позволяет прогнозировать длительный фармакологический эффект резвератрола в разработанной жидкой лекарственной форме.

Одной из причин возникновения себореи волосистой части головы являются дрожжеподобные грибы (Malassezia furfur), следовательно, следующим этапом работы явилось изучение микробиологических свойств разработанной жидкой лекарственной формы с резвератролом методом диффузии в агар. Исследования проводились в научно-исследовательской лаборатории на базе ГОУ ВПО «Курский государственный медицинский университет» под руководством профессора П.В. Калуцкого.

Исследование спектра активности лекарственной формы с резвератролом проводили в отношении грамположительных (Staphylococcus aureus АТСС 25923, Bacillus subtilis АТСС 6633, Bacillus cereus var mycoides 537) и грамотрицательных микроорганизмов (Escherichia coli АТСС 25922, Proteus vulgaris АТСС 4636 и Pseudomonas aeruginosa АТСС 27853), рекомендованных для подобных экспериментов ГФ XI издания.

В качестве контроля были выбраны: спирт этиловый 70 % (обладает противомикробным, антисептическим действием и выраженным действием на микроорганизмы именно в указанной концентрации), суспензия резвератрола и 2 антисеборейных лекарственных препарата зарубежного производства: препараты Hair Vital, производитель - Betafarma S.p.A., Испания (препарат 1) и Бальзам дерматологический с экстрактом крапивы, производитель - Laboratories Home Institut - 54670 Millery, Франция (препарат 2) - наиболее широко применяемые жидкие лекарственные формы, обладающие специфической активностью и включающие в свой состав растительные компоненты. Результаты сравнительных исследований представлены на рис. 3 и рис. 4.

1 - жидкая лекарственная форма с резвератролом

2 - спирт этиловый 96 %

3 - суспензия резвератрола

4 - препарат сравнения №1 5- препарат сравнения №2

Рис. 3. Сравнительная характеристика антимикробной активности лекарственной формы с резвератролом, спирта этилового 70 %, суспензии резвератрола и препаратов сравнения

Примечание' - количество резвератрола в суспензии эквивалентно составу разработанной лекарственной формы.

Из рис. 3 следует, что зоны задержки роста данных микроорганизмов в случае использования разработанной жидкой лекарственной формы больше в сравнении с контролем - со спиртом этиловым 70 % примерно в 1,3 раза, с суспензией резвератрола - в 2,3 раза, с препаратом 1 - в 1,5 раза, с препаратом 2 - в 2,4 раза.

1 - жидкая лекарственная форма с резвератролом

2 - спирт этиловый 70 %

3 - суспензия резвератрола

4 — препарат сравнения № 1

5 - препарат сравнения №2

Рис. 4. Сравнительная характеристика анаэробной и антимикотической активности лекарственной формы с резвератролом, спирта этилового 70 %, суспензии резвератрола и препаратов сравнения

Примечание - количество резвератрола в суспензии эквивалентно составу разработанной лекарственной формы.

Из рис. 4 следует, что зоны задержки роста данных микроорганизмов в случае использования разработанной жидкой лекарственной формы с резвератролом больше в сравнении с контролем - со спиртом этиловым 70 % примерно в 1,2 раза, с суспензией резвератрола - в 1,4 раза, с препаратом 1 - в 1,3 раза, с препаратом 2 - в 1,9 раза.

Таким образом, полученные результаты исследования свидетельствуют о том, что разработанная жидкая лекарственная форма с резвератролом обладает выраженным антимикробным и фунгицидным действием, превосходящим эффективность препаратов сравнения.

Для разработанного состава была составлена технологическая схема получения жидкой лекарственной формы с резвератролом (рис. 5).

Рис. 5. Технологическая схема получения жидкой лекарственной формы с резвератролом

Как видно, она представляет собой традиционный набор технологических операций. Особенностью ее является стадия приготовления спиртового раствора резвератрола и кислоты аскорбиновой. Только после его растворения в спирте этиловом 96%, необходимо добавлять кислоту аскорбиновую.

Технология производства жидкой лекарственной формы с резвератролом заключается в следующем: в колбе на 1000 мл 3,0 г резвератрола растворяли в 300,0 г спирта этилового 96 %. Перемешивали

содержимое колбы до полного его растворения. После этого вносили в полученный спиртовой раствор резвератрола точную навеску 2,0 г аскорбиновой кислоты и снова перемешивали до ее полного растворения. Отдельно смешивали 50,0 г глицерина и 150,0 г пропиленгликоля и постепенно добавляли в смесь ранее полученный спиртовой раствор резвератрола с аскорбиновой кислотой. Полученный раствор тщательно перемешивали и доводили пропиленгликолем до метки. Фильтровали через фильтрующий материал «Миллипор» с размером пор 0,45 мкм. Розлив проводили во флаконы из темного стекла, укупоривали полиэтиленовыми пробками и крышками.

Глава 4. Разработка норм качества жидкой лекарственной формы и изучение ее сроков годности

Для идентификации резвератрола в жидкой лекарственной форме использовали ряд цветных реакций с раствором ванилина в концентрированной серной кислоте, раствором анисового альдегида в концентрированной серной кислоте, раствором диазотированной сульфаниловой кислотой. Предел обнаружения резвератрола с помощью данных реакций составляет не более 3,0 мкг/мл.

Кроме того, для определения подлинности резвератрола в разработанной лекарственной форме может быть использована ТСХ-методика, представленная выше. Данные значений величины Яг зон адсорбции резвератрола представлены в табл. 8.

Таблица 8. Данные значений величины зон адсорбции раствора стандартного образца резвератрола и резвератрола в разработанной лекарственной форме

№ п/п Система растворителей Величина Яг зоны адсорбции

Проба раствора стандартного образца резвератрола Проба лекарственной формы с резвератролом

1 Хлороформ - этилацетат -муравьиная кислота (2,5:1:0,1) 0,30 0,31 0,30 0,31 0,30 0,30

2 Хлороформ-спирт этиловый 0,41 0,40

96%-ный (7:3) 0,40 0,40

0,39 0,40

Как видно из данных табл. 8 значения величины 11гзоны адсорбции раствора стандартного образца резвератрола соответствует значению величины ¡^зоны адсорбции в разработанной лекарственной форме.

В свою очередь, определение резвератрола проводили методом УФ-спектрофотометрии (>.=307 нм, растворитель - спирт этиловый 96%). На рис. 6 представлены спектры поглощения резвератрола в спирте этиловом 96 % (СО резвератрола) и в разработанной лекарственной форме.

Длина волны, кн Длжна волш, нк

а б

Рис. 6. Спектр поглощения резвератрола. Условные обозначения: а - в спирте этиловом 96 % (раствор стандартного образца резвератрола);

6 - в разработанной лекарственной форме

Количественное определение резвератрола проводилось методом УФ-спектрофотометрии в сравнении со стандартным образцом. Было проведено

7 параллельных измерений разных образцов модельной смеси. Полученные данные обрабатывали статистически. Результаты статистической обработки определения содержания резвератрола в разработанной жидкой лекарственной форме представлены в табл. 9.

Таблица 9. Результаты статистической обработки определения содержания резвератрола в разработанной жидкой лекарственной форме (Р>0,95)

№ образца X х-х, (X - ху Метрологические характеристики

1 0,291 0,001 0,00001 X =0,292 Х-Х)2 =0,000132

2 0,293 -0,001 0,00001

3 0,295 0,002 0,00004

4 0,290 0,002 0,00004 " \ Ф- 1) АХ = 8х-1х =0,0097 £ = 3,34%

5 0,288 0,004 0,000016

6 0,296 -0,004 0,000016

7 0,292 - -

* = 0,292 ]Г (X - X)2 = 0000132

Как видно из данных табл. 9, относительная ошибка единичного определения методики количественного определения резвератрола в разработанной жидкой лекарственной форме при использовании метода УФ-спектрофотометрии составляет ±3,34 %.

Для УФ-спектрофотометрической методики количественного определения резвератрола в жидкой лекарственной форме были изучены такие валидационные характеристики как специфичность, правильность, прецизионность, линейность и диапазон применения. Предложенная методика признана корректной.

Для подтверждения отсутствия систематической ошибки были проведены опыты с добавками. Результаты опытов с добавками для методики количественного определения резвератрола в жидкой лекарственной форме представлены в табл. 10.

Таблица 10. Результаты опытов с добавками для методики количественного определения резвератрола в жидкой лекарственной форме

Взято Добавлено Должно Найдено, г Ошибка

резвератрола, резвератрола, быть, г Абсолютная Относительная

г г (г) (%)

0,3 0,075 0,375 0,3763 ±0,0013 0,345

0,3 0,150 0,450 0,4519 ±0,0019 0,420

0,3 0,225 0,525 0,5271 ±0,0021 0,398

0,3 0,300 0,600 0,6017 ±0,0017 0,282

Опыты с добавками для методики количественного определения резвератрола в жидкой лекарственной форме показали, что относительная ошибка не превышает ошибки единичного определения, что свидетельствует об отсутствии систематической ошибки.

Разработана методика идентификации резвератрола методом ВЭЖХ, представленная выше. Хроматограммы в СО резвератрола и разработанной лекарственной форме представлены на рис. 7.

■V

5И

а б

Рис. 7. Хроматограммы резвератрола. Условные обозначения: а - в спирте этиловом 96 %; б- в разработанной жидкой лекарственной форме

Из рис. 7 видно, что время удерживания резвератрола в разработанной лекарственной форме составляет 1удерж ~ 4,2 мин, что соответствует времени удерживания его стандарта.

Для количественного определения содержания резвератрола в жидкой лекарственной форме методом ВЭЖХ было проведено 7 параллельных измерений разных образцов модельной смеси. Результаты исследования количественного определения резвератрола в разработанной жидкой лекарственной форме представлены в табл. 11.

Таблица 11. Результаты количественного определения резвератрола в разработанной жидкой лекарственной форме (Р>0,95)

№ образ ца X = Х-Х,. (Х-Х,)2 Метрологические характеристики

1 0,31 -0,018 0,000324 * =0,292 ^(Х-Х)2 =0,00115

2 0,30 -0,008 0,000064

3 0,30 -0,008 0,000064 5 =0,0052 \ п(п-1) АХ = Зг-1х =0,0135 £-4,62%

4 0,298 -0,006 0,000036

5 0,294 -0,002 0,000004

6 0,271 0,021 0,000441

7 0,277 0,015 0,000225

= 0,292 £(х-х)'- = 000115

Как видно из данных табл. 11, относительная ошибка единичного определения ВЭЖХ - методики определения резвератрола в разработанной лекарственной форме составляет ±4,62 %.

Для разработанной методики количественного определения резвератрола методом ВЭЖХ были изучены валидационные характеристики: правильность, прецизионность, линейность и диапазон применения. Предложенная методика признана корректной.

Таблица 12. Результаты опытов с добавками для методики количественного определения резвератрола в жидкой лекарственной форме

Взято Добавлено Должно быть, г Ошибка

резвератрола, резвератрола, Найдено, г Абсолютная Относительная

г г (г) (%)

0,3 0,075 0,375 0,382 ±0,007 1,832

0,3 0,150 0,450 0,457 ±0,007 1,532

0,3 0,225 0,525 0,531 ±0,006 1,129

0,3 0,300 0,600 0,610 ±0,010 1,639

Было изучено количественное содержание спирта этилового и глицерина в разработанной жидкой лекарственной форме методом газожидкостной хроматографии (ГЖХ). Методика: газовый хроматограф с пламенно-ионизационным детектором, колонка стеклянная, размером 210 х 0,32 см, заполненная сорбентом «Рогарак С2», размер частиц 80 - 100 мкм,

температура колонки 220 °С; температура испарителя и детектора - 240 °С; скорость газа-носителя (гелий) - 40 мл/мин.

Хроматограмма раствора жидкой лекарственной формы (препарата) представлена на рис. 8.

2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15 0

Рис. 8. Хроматограмма раствора препарата (последовательность выхода пиков: спирта этилового, пропанол-1 (внутреннего стандарта), пропиленгликоля, глицерина)

Было проведено 7 параллельных измерений разных образцов модельной смеси. Полученные данные статистической обработки экспериментов представлены в табл. 13.

Таблица 13. Результаты статистической обработки определения содержания спирта этилового в разработанной жидкой лекарственной форме (Р>0,95)

№ образца X = Х-Х, (X - X,)2 Метрологические характеристики

1 0,280 0,014 0,000196 X =0,294 £(Х-Х)2 =0,00056

2 0,289 0,005 0,000025

3 0,298 -0,004 0,000016

4 0,300 -0,006 0,000036 V ф-1) АХ = Б; -1х =0,0094 е = 3,2%

5 0,310 -0,016 0,000256

6 0,293 0,001 0,000001

7 0,288 0,006 0,000036

* = 0,294 £(Х-Х)> = о,00056

Как видно из данных табл. 13, относительная ошибка единичного определения методики количественного определения спирта этилового в разработанной жидкой лекарственной форме при использовании метода ГЖХ составляет ±3,2 %.

В табл. 14 представлены результаты статистической обработки определения содержания глицерина в разработанной жидкой лекарственной форме.

Таблица 14. Результаты статистической обработки определения содержания глицерина в разработанной жидкой лекарственной форме (Р>0,95)

№ образца X = Х-Х, (X - х .у Метрологические характеристики

1 0,049 0 0 X =0,049 ^(А'-Х)2 =0,00003

2 0,050 -0,001 0,00001

3 0,048 0,001 0,00001 \YJx-x,)2

4 0,049 0 0 "" ф-1) ..... АХ = • Л, = 0,002 Е = 4,08%

5 0,049 0 0

6 0,049 0 0

7 0,050 -0,001 0,00001

Х = 0,049 = 0,00003

Из данных табл. 14 видно, что относительная ошибка единичного определения методики количественного определения глицерина в разработанной жидкой лекарственной форме при использовании метода ГЖХ составляет ±4,08 %.

Для количественного определения кислоты аскорбиновой в лекарственной форме использовали метод окислительно-восстановительного титрования (титрант- 2,6-дихлориндофенолят натрия). Точку эквивалентности определяли погенциометрически (платиновый электрод МеПЬот кат. № 6.0415.100). Данные статистической обработки полученных результатов представлены в табл. 15.

Таблица 15. Данные статистической обработки результатов определения содержания аскорбиновой кислоты в жидкой лекарственной форме

№ образца х = Х-Х, (Х-Х,)2 Метрологические характеристики

1 0,180 0,01 0,0001 X =0,19 £(Х-Х)2 =0,000441 1Т(х-х,)2 $ -0 0018

2 0,180 0,01 0,0001

3 0,199 -0,009 0,000081

4 0,188 0,002 0,000004 ' ] ф-1) АХ- ■ Л,-0,0047 £ = 2,4 %

5 0,199 -0,009 0,000081

6 0,188 0,002 0,000004

7 0,191 -0,001 0,000001

8 0,198 -0,008 0,000064

9 0,189 0,001 0,000001

10 0,188 0,002 0,000004

И 0,190 - -

12 0,189 0,001 0,000001

= 0,19 ^(Х-Х)2 =000044|

Как видно из данных табл. 15, относительная ошибка единичного определения методики количественного определения аскорбиновой кислоты в разработанной жидкой лекарственной форме составляет ±2,4 %.

В целях обеспечения комплекса испытаний препарата с резвератролом был изучен срок его годности в процессе хранения (+4°С, темное место). Срок годности препарата «Фитоэстрол» составляет не менее 27 месяцев.

Спецификация на препарат «Фитоэстрол» представлена в табл. 16.

Таблица 16. Спецификация на препарат «Фитоэстрол»

Показатели Методы Нормы

Описание Визуально Прозрачная бесцветная или слегка желтоватая вязкая жидкость.

Подлинность Резвератрол Метод УФ-спектрофотометрии УФ спектр расгеора препарата, в области от 205 нм до 500 нм должен иметь максимумы поглощения при длинах волн 217 ± 2 нм и 306 ± 2 нм, а также минимум поглощения при 255 ±2нм.

Метод высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) Времена удерживания основных пиков на хроматограммах раствора препарата, полученных при количественном определении резвератрола должны совпадать с временами удерживания пиков резвератрола на хроматограммах раствора стандартного образца (СО) резвератрола

Кислота аскорбиновая Качественная реакция раствора йода на кислоту аскорбиновую К раствору препарата прибавляют 1,0 мл 0,05 M раствора иода и перемешивают; раствор в течение 10 сек должен обесцветиться.

Спирт этиловый и глицерин Метод газожидкостной хроматографии (ГЖХ) Относительные времена удерживания основных пиков на хроматограммах раствора препарата полученных при количественном определении спирта этилового и глицерина, должны соответствовать относительным временам удерживания пиков спирта этилового и глицерина на хроматограммах раствора СО спирта этилового и глицерина.

рН раствора ГФ XI вып. 1 стр 113 (потенциометрически) От 4,0 до 5,5

Цветность ГФХП РФ, стр 93. Препарат должен выдерживать сравнение с эталоном цветности Y6

Плотность ГФХП РФ, стр 38. метод 1 От 0,964 до 0,966 г/см3

Номинальный объём Не менее 100,0 мл

Посторонние примеси Метод высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) Не более 2 % единичной примеси. Не более 4 % суммы всех примесей.

Количественное определение Резвератрол Метод высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) Содержание резвератрола в 1,0 мл лекарственной формы должно быть от 0,0028 г до 0,0032 г

Продолжение табл. 16

Кислота аскорбиновая Окислительно-восстановительное титрование (титрант - 2,6-дихлориндофенолят натрия) Содержание кислоты аскорбиновой в 1,0 мл лекарственной формы должно быть от 1,8 мг до 2,2 мг.

Спирт этиловый и глицерин Метод газожидкостной хроматографии (ГЖХ) Содержание спирта этилового в 1,0 мл лекарственной формы должно быть от 0,28 г до 0,32 г. Содержание глицерина в 1,0 мл лекарственной формы должно быть от 0,048 г до 0,052 г.

Срок годности Не менее 27 месяцев

ВЫВОДЫ

1. Разработан состав жидкой лекарственной формы с резвератролом, включающий в себя:

Резвератрол 3,0

Спирт этиловый 96 %-ный 300,0 Аскорбиновая кислота 2,0 Глицерин 50,0 Пропиленгликоль до 1000,0

2. Составлена технологическая схема получения жидкой лекарственной формы с резвератролом, состоящая из подготовки исходных компонентов, получения раствора действующего компонента, приготовления основы для жидкой лекарственной формы, получения жидкой лекарственной формы, фасовки и упаковки готовой лекарственной формы.

3. Проведен комплекс микробиологических исследований разработанной жидкой лекарственной формы с резвератролом. Подтверждены преимущественное противогрибковое и антимикробное действия препарата в сравнении с некоторыми существующими антисеборейными средствами.

4. Предложен набор методик идентификации и количественного анализа резвератрола, позволяющий проводить его определение в разработанной жидкой лекарственной форме. При этом использованы методы: ТСХ, ВЭЖХ, СФ, цветные реакции.

5. На основе разработанных методик анализа резвератрола предложены нормы качества для жидкой лекарственной формы с ним. Нормы качества препарата «Фитоэстрол» включают в себя: описание, подлинность, прозрачность, рН, количественное определение, срок годности. Содержание резвератрола в 1,0 мл лекарственной формы должно быть от 0,0028 г до 0,0032 г, спирта этилового - от 0,28 г до 0,32 г, глицерина - от 0,048 г до 0,052 г, аскорбиновой кислоты - от 1,8 мг до 2,2 мг.

6. С использованием разработанных методик анализа резвератрола изучены сроки годности жидкой лекарственной формы - препарата «Фитоэстрол». Установлено, что срок годности препарата «Фитоэстрол» составляет не менее 27 месяцев.

7. Разработаны проект Фармакопейной статьи предприятия и лабораторный регламент на производство жидкой лекарственной формы -препарата «Фитоэстрол».

Список научных работ, опубликованных по теме диссертации

1. Новиков О.О., Киселева Т.С. (Полухина Т.С.), Кочкаров В.И, и др. / Фармакологическая характеристика резвератрола//Курский научно-практический вестник «Человек и его здоровье». - 2007. -№3 - С. 97—104.

2. Васильев Г.В., Киселева Т.С. (Полухина Т.С.), Новиков О.О. и др. / Аналитическая характеристика резвератрола // Курский научно-практический вестник «Человек и его здоровье». - 2007. - №3. - с. 90-96.

3. Новиков О.О., Покровский М.В, Киселева Т.С. (Полухина Т.С.) и др. / Энохимия резвератрола. Анализ возможных путей его биосинтеза // Вестник Воронежского государственного университета. - 2007. - №2. - С. 165-170.

4. Киселева Т.С. (Полухина Т.С.), Писарев Д.И., Новиков О.О. и др. / Разработка методик идентификации резвератрола в модельной смеси // Вестник новых медицинских технологий - 2008. - T.XV. - №1- С. 25-26.

5. Фадеева Д.А., Киселева Т.С. (Полухина Т.С.), Писарев Д.И. и др. / Применение спектрофотометрии для количественного определения 3,5,4'-тригидроксистильбена в мягкой лекарственной форме // Вестник новых медицинских технологий - 2008. - T.XV. - №2. - С. 207-208.

6. Киселева Т.С. (Полухина Т.С.), Жилякова Е.Т., Новиков О.О. и др. / Разработка новых антисеборейных препаратов на основе резвератрола // Аллергология и иммунология. - 2008. - Март. - Т.9. - №1. - С. 38.

7. Новиков О.О., Киселева Т.С. (Полухина Т.С.), Писарев Д.И. и др. / Разработка методики количественного определения резвератрола в жидкой лекарственной форме для наружного применения // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции:сб. науч. тр./под ред. М.В. Гаврилина / Пятигорская ГФА. - Пятигорск, 2008. - Вып.63. - С. 265-267.

8. Новиков О.О., Киселева Т.С. (Полухина Т.С.), Фадеева Д.А. и др. / Разработка методов идентификации резвератрола в креме // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукциихб. науч. тр./под ред. М.В. Гаврилина / Пятигорская ГФА. - Пятигорск, 2008. - Вып.63. - С. 348-351.

9. Киселева Т.С. (Полухина Т.С.), Новиков О.О., Фадеева Д.А. и др. / Себорея: этиология, патогенез, проблемы медикаментозной терапии // Лекарственные растения и биологически активные вещества: фитотерапия, фармация, фармакология: матер, междунар. научн.-практич. конф., посвященной Дню Российской науки, Белгород, 8 февраля 2008г. / Под ред. проф. В.Н. Сорокопудова. - Белгород: "Политерра", 2008. - С. 108-111.

10. Киселева Т.С. (Полухина Т.С.), Новиков О.О., Жилякова Е.Т. и др. / Использование 3,5,4'-тригидроксистильбена в качестве противосеборейного агента // Лекарственные растения и биологически активные вещества: фитотерапия, фармация, фармакология: матер, междунар. научн.-практич. конф., посвященной Дню Российской науки, Белгород, 8 февраля 2008г. / Под ред. проф. В.Н. Сорокопудова. - Белгород: "Политерра", 2008. - С. 129-132.

11. Киселева Т.С. (Полухина Т.С.), Новиков О.О., Писарев Д.И. и др. / Целесообразность введения стабилизатора в исследуемый бальзам на основе резвератрола и установления первоначального срока годности // Биологически активные соединения природного происхождения: фитотерапия, фармацевтический маркетинг, фармацевтическая технология, фармакология, ботаника: матер. Междунар. Научн.-практич. Конф., Белгород, 30 июня - 3 июля 2008 года / Под редакцией профессора В.Н. Сорокопудова.-Белгород: «Политерра», 2008. - С.91-93.

12. Васильев Г.В., Киселева Т.С. (Полухина Т.С.), Новиков О.О. и др. / Применение масс-спектрометрии для анализа 3,5,4-тригидроксистильбена (резвератрола) // Фармация из века в век : сборник научных трудов. Часть III. Анализ и стандартизация лекарственных средств. - СПб.: Изд-во СПФХА, 2008. - С. 167-170.

13. Полухина Т.С., Новиков О.О., Васильев Г.В. / Использование метода ВЭЖХ для обнаружения и количественного определения резвератрола в жидкой лекарственной форме антисеборейного действия // Materialy V mezinarodni vedecko-prakticka conference «DNY VEDY-2009»,27 brezen-05 dubna 2009 roku, Praha,Publishing House «Education and Science» s.r.o., 2009. -p.36-39.

14. Полухина Т.С., Новиков О.О. / Перспективы использования резвератрола в антисеборейных лекарственных формах // VII Международный симпозиум по фенопьным соединениям: фундаментальные и прикладные аспекты. Материалы докладов. 19-23 октября 2009г. - Москва Институт физиологии растений им. К. А. Тимирязева РАН, 2009. - С. 324.

15. Полухина Т.С., Жилякова Е.Т., Новиков О.О. и др. / Сравнительное изучение биоцидной активности разработанного бальзама с резвератролом и существующих антисеборейных лекарственных препаратов // Актуальные вопросы фармакологии и фармации: Сборник трудов межвузовской научной конференции, посвященной памяти профессора В.В.Пичугина и 75-летию КГМУ, 2009. - С. 294-296.

16. Жилякова Е.Т., Полухина Т.С., Новиков О.О. / Изучение биоцидной активности жидкой лекарственной формы с резвератролом // Российский медико-биологический вестник имени академика И.П.Павлова. - №3. - 2009 г. - С. 28-31.

17. Полухина Т.С., Жилякова Е.Т., Писарев Д.И. и др. / Разработка методики количественного определения ацетилированного 3,5,4-тригидроксистильбена методом косвенной нейтрализации в жидкой лекарственной форме // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр./под ред. М.В. Гаврилина / Пятигорская ГФА. - Пятигорск, 2010. - С. 373-375.

18. Новиков О.О., Полухина Т.С., Васильев Г.В. и др. / Применение метода масс-спектрометрии с Малди при экспресс анализе образцов поликомпонентного состава с полифенолами // Фитодизайн в современных условиях: материалы междунар.науч.-практ. конф., Белгород, 14-17 июня 2010 г. / под ред. В.К.Тохтарь, В.Н.Сорокопудов. -Белгород: Изд-во БелГУ, 2010. - С. 408-410.

Патенты

1. Способ идентификации резвератрола : пат. 2385457 Российская Федерация : МПК7 G 01 N 30/94 / Новиков О.О., Васильев Г.В., Киселева Т.С. (Полухина Т.С.) и др.; заявитель и патентообладатель государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Белгородский государственный университет». - №2008143376/28 ; заявл. 31.10.2008 ; опубл. 27.03.2010, Бюл. № 9.

2. Способ количественного определения резвератрола : пат. 2390772 Российская Федерация : МПК7 G 01 N 30/90 / Новиков О.О., Васильев Г.В., Киселева Т.С. (Полухина Т.С.) и др.; заявитель и патентообладатель государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Белгородский государственный университет». - №2009113845/28 ; заявл. 13.04.2009 ; опубл. 27.05.2010, Бюл. № 15.

3. Антисеборейное фармацевтическое средство: пат. 2391997 Российская Федерация МПК7 А 61 К 36/87, А 61 К 31/05, А 61 Р17/08 / Новиков О.О., Васильев Г.В., Киселева Т.С. (Полухина Т.С.) и др.; заявитель и патентообладатель государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Белгородский государственный университет», общество с ограниченной ответственностью «Асклепий». -№2007148491/15; заявл. 27.06.2009; опубл. 20.06.2010, Бюл. № 17.

Подписано в печать 22.04.2011.Times New Roman. Формат 60784/16. Усл. п. л. 1,0. Тираж 100 экз. Заказ 48. Оригинал-макет подготовлен и тиражирован в издательстве Белгородского государственного университета 308015, г. Белгород, ул. Победы, 85

Оглавление диссертации Полухина, Татьяна Сергеевна :: 2011 :: Москва

ОГЛАВЛЕНИЕ.

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. АНАЛИТИЧЕСКАЯ И ФАРМАКОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РЕЗВЕРАТРОЛА (3,5,4'-ТРИГИДРОКСИ-ГЛ4ЯС-СТИЛЬБЕНА)

1.1. Методы выделения и анализ! 3,5,4'-тригидрокси-га/?£Шс-стильбена (резвератрола).

1.2. Применение резвератрола в медицине.

1.3. Перспективность резвератрола как компонента дерматологических лекарственных форм.

1 Л. Анализ номенклатуры отечественного рынка существующих антисеборейных препаратов.

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ, МЕТОДЫ И МЕТОДИКИ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материалы исследования.

2.1.1. Действующее вещество и его характеристика.

2.1.2. Вспомогательные вещества и их характеристика.

2.2. Методы исследования.

2.2.1. Физические и физико-химические методы анализа:.

2.2.1.1. Растворимость (ОФС 42-0049-07).

2.2.1.2. Ионометрия (ОФС 42-0048-07).

2.2.1.3. Плотность (ОФС 42-0037-07).

2.2.1.4. Вязкость (ОФС 42-0038-07).

2.2.1.5. Прозрачность и степень мутности жидкостей

ОФС 42-0051-07).

2.2.1.6. Биофармацевтические методы анализа скорости высвобождения резвератрола из лекарственной формы по методике Крувчинского.

2.2.1.7. Тонкослойная хроматография (ОФС 42-0094-09).

2.2.1.8. Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях (ОФС 42-0042-07).

2.2.1.9. Высокоэффективная жидкостная хроматография

ОФС 42-0096-09).

2.2.1.10. Газовая хроматография.

2.2.1.11. Электронное микроскопирование.

2.2.2. Химические методы анализа:.

2.2.2.1 Общие реакции на подлинность резвератрола и аскорбиновой кислоты.

2.2.2.2 Косвенная нейтрализация ацетилированного резвератрола

3,5,4'-тригидрокси-/ядо«с-стильбена).

2.2.2.3 Количественное определение кислоты аскорбиновой 52 методом окислительно-восстановительного титрования.

2.2.3. Биологические методы контроля.

2.2.3.1 Микробиологические исследования.

2.2.4. Статистическая обработка результатов химического эксперимента (ОФС 42-0111-09).

ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ 2.".ТЛ.

Глава 3. ОБОСНОВАНИЕ СОСТАВА И РАЗРАБОТКА

ТЕХНОЛОГИИ ЖИДКОЙ ЛЕКАРСТВЕННОЙ ФОРМЫ С

РЕЗВЕРАТРОЛОМ АНТИСЕБОРЕЙНОГО ДЕЙСТВИЯ

3.1. Выбор действующего вещества и вида лекарственной формы

3.2. Изучение растворимости резвератрола в различных растворителях. V. 1.

3.3. Выбор вспомогательных'веществ:.

3.3.1. Выбор дисперсионной среды.

3.3.2. Выбор консерванта.

3.3.3. Выбор стабилизатора.

3.4. Изучение величины рН модельных смесей.

3.5. Определение скорости высвобождения резвератрола из жидкой лекарственной формы по методике Крувчинского.

3.6. Разработка технологической схемы производства жидкой лекарственной формы с резвератролом.

3.6.1. Технология приготовления жидкой лекарственной формы с резвератролом.

3.6.2: Технологическая схема получения жидкой лекарственной формы с резвератролом:. лл.

3:7. Изучение биоциднойактивности жидкой лекарственной формы с 3,5,4'-тригидрокси-транс-стильбеном 78 (резвератролом).—.••■•■•.

ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ 3.:.

Глава 4. РАЗРАБОТКА НОРМ КАЧЕСТВА РАЗРАБОТАННОЙ ЖИДКОЙ

ЛЕКАРСТВЕННОЙ ФОРМЫ И ИЗУЧЕНИЕ ЕЕ СРОКОВ ГОДНОСТИ

4.1. Использование цветных реакций для идентификации 3,5,4'-тригидрокси-^янс-стильб^на.

4.1.1. Количественное определение 3,5,4'-тригидрокси-т/?<янсстильбена методом фотометрии в видимой области спектра.

4.2. Использование метода хроматографии в тонком слое сорбента для идентификации 3,5,4'-тригидрокси-тр£шс-стильбена (резвератрола). ^

4.3. Использование УФ-спектрофотометрии для идентификации (резвератрола).

4.3.1. Изучение возможности количественного определения 3,5,4'-тригидрокси-/ттранс-стильбена в жидкой лекарственной форме методом УФ-спектрофотометрии.

4.3.2. Валидация УФ-спектрофотометрической методики количественного определения 3,5,4-тригидрокси-трансстильбена в жидкой лекарственной форме.

4.4. Использование метода высокоэффективной жидкостной хроматографии для идентификации резвератрола.

4.4.1. Изучение возможности количественного определения Чг о резвератрола методом ВЭЖХ.

4.4.2. Валидация ВЭЖХ-методики количественного определения резвератрола в жидкой лекарственной форме.

4.5. Изучение возможности количественного определения ацетилированного резвератрола в разработанной лекарственной форме методом косвенной нейтрализации.

4.6. Изучение возможности количественного определения спирта этилового и глицерина в разработанной жидкой лекарственной форме методом газожидкостной хроматографии (ГЖХ).

4.7. Изучение возможности количественного определения кислоты аскорбиновой в жидкой лекарственной форме методом окислительно-восстановительного титрования.

4.8. Определение срока годности разработанной жидкой лекарственной формы с резвератролом.

4.9. Составление проекта Фармакопейной статьи предприятия для жидкой лекарственной формы с 3,5,4'тригидроксистильбеном (резвератролом).

ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ 4.

Введение диссертации по теме "Технология получения лекарств", Полухина, Татьяна Сергеевна, автореферат

Актуальность темы. Одной.из тенденций развития российского фармацевтического рынка является увеличение доли лечебной косметики и лекарственных средств, предназначенных для этих целей. Широко представленные в аптеках средства для волос являются, преимущественно импортными, большинство из них предназначены для лечения различного рода аллопеций и перхоти, и лишь отдельные — для лечения больных сухой и жирной себореей волосистой части головы. Отечественные лекарственные

Ч '» средства этого назначения практически отсутствуют, а имеющиеся на фармацевтическом рынке косметические средства (шампуни, лосьоны, бальзамы) при лечении и профилактике себореи просто не эффективны.

Одним из перспективных к применению для профилактики и лечения себореи лекарственных веществ является 3,5,4—тригидрокси-транс-стильбен (резвератрол), достаточно широко применяемый в зарубежной медицинской практике.

Цель и задачи исследования. Целью диссертационного исследования является разработка состава и технологии жидкой лекарственной формы для наружного применения антисеборейного действия на основе полифенольного лекарственного вещества растительного происхождения — резвератрола. В связи с поставленной целью должны быть реализованы следующие задачи:

2. Разработать технологическую схему получения жидкой лекарственной формы для наружного.применения.

3. Провести микробиологические исследования, подтверждающие антисеборейное действие разрабатываемой жидкой лекарственной формы с резвератролом. ( ,

Ч 4

5. Предложить нормы качества для разработанной жидкой лекарственной формы с резвератролом и изучить условия и сроки ее хранения.

6. Разработать проекты НД в виде лабораторного регламента и проекта ФСП.

Научная новизна исследования. ч, *

Впервые проведены "Микробиологические исследования, подтверждающие антисеборейное действие препарата на основе природного лекарственного вещества полифенольной природы - резвератрола.

Практическая значимость и внедрение результатов в практику.

Проведена практическая апробация на предприятии ОАО «Фармстандарт-Лексредства», акт внедрения предложения (от 22.11.2010 г.), разработан: проект нормативной документации (лабораторный регламент и аналитические методики), принятый к перспективному рассмотрению ОАО «Фармстандарт-Лексредства». Фрагменты технологических и аналитических исследований внедрены в лабораторно-практический курс по? предметам: «Фармацевтическая; технология» и «Фармацевтическая химия» на фармацевтическом: факультете ГОУ ВПО «Белгородский государственный университет» (№80 от 25.10.2010 г., №81 от 25.10.2010 г.) и ГОУ ВПО «Курский государственный медицинский университет» (№93 от 15.11.2010 г., №94 от 16.11.2010 г.); \

Основные положения, выносимые на защиту:: обоснование выбора1 состава* действующих и вспомогательных компонентов: при разработке жидкой} лекарственной1 формы для наружного применения антисеборейного действия; технологическая схема производства жидкой? лекарственной формы* с резвератролом;

- микробиологические исследования: разработанного состава жидкой лекарственной формы с резвератролом;

- результаты анализа« полученной:, лекарственной формы с резвератролом и установление условий и сроков ее хранения.

Апробация работы.

Основные положения: диссертационного исследования обсуждались: на Международной научно-практической* конференции «Лекарственные растения: и: биологически активные вещества: фитотерапия, фармация, фармакология» (Белгород, 2008 г.); на Международной научно-практической конференции «Биологически активные соединения природного происхождения: фитотерапия,''," фармацевтический маркетинг, фармацевтическая ¡технология;; фармакология; ботаника» (Белгород, 2008 г.), на Международной научно-практической конференции «Разработка, исследование: и маркетинг новой фармацевтической продукции» (Пятигорск, 2010 г.), на научно-практической , конференции «Актуальные проблемы современной фармации и фармацевтического образования» в рамках XIII межрегиональной специализированной выставки Белгородской торгово

1 » промышленной палаты «Медицина. Фармация» (2010г.), на межкафедральном заседании ГОУ ВПО «Белгородский государственный университет» (2010 г.).

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ Белгородского государственного национального исследовательского университета в рамках научного направления «Разработка методологических подходов к анализу природных и синтетических биологически активных соединений в объектах различного происхождения. Излечение фармакологических аспектов использования данных биологически активных соединений». Номер государственной регистрации темы диссертационного исследования 01201051313.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 148 страницах машинописного текста, содержит 30 таблиц, 21 рисунок, и ^ состоит из введения, 4 глав, выводов, приложения, списка литературы, включающего 133 источника, в т.ч. 108 работ зарубежных авторов.

Заключение диссертационного исследования на тему "Разработка состава и технологии жидкой лекарственной формы для наружного применения с резвератролом"

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1. Разработан состав жидкой лекарственной формы с резвератролом, включающий в себя:

Резвератрол 3,0

Спирт этиловый 96 % - ный 300,0 Аскорбиновая кислота 2,0 Глицерин 50,0 Пропиленгликоль до 1000,0

2. Составлена технологическая схема получения жидкой лекарственной формы с резвератролом, состоящая из подготовки исходных компонентов, получения раствора действующего компонента, приготовления основы для жидкой лекарственной формы, получения жидкой лекарственной л формы, фасовки и упаковки готовой лекарственной формы.

3. Проведен комплекс микробиологических исследований разработанной жидкой лекарственной формы с резвератролом. Подтверждены преимущественное противогрибковое и антимикробное действия препарата в сравнении и некоторыми существующими антисеборейными средствами.

5. На основе разработанных методик анализа резвератрола предложены нормы качества для. жидкой лекарственной формы с ним. Нормы качества препарата «Фитоэстрол» включают в себя: описание, подлинность, прозрачность, рН, количественное определение, срок годности. Содержание резвератрола в 1 мл лекарственной формы должно быть от 0,0028 г до 0,0032 г, спирта этилового — от 0,28 г до 0,32 г, глицерина — от 0,048 г до 0,052 г, аскорбиновой кислоты - от 1,8 мг до 2,2 мг.

6. С использованием разработанных методик анализа резвератрола изучены сроки годности жидкой лекарственной формы — препарата «Фитоэстрол». Установлено, что срок годности препарата «Фитоэстрол» составляет не менее 27 месяцев.

134

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2011 года, Полухина, Татьяна Сергеевна

1. Аналитическая хроматография / К. И. Сакодынский и др.. М. :1. Химия, 1993.-464 с. \•

2. Барковский, В. Ф. Физико-химические методы анализа : учеб. / В. Ф. Барковский, С. М. Горелик, Т. Б. Городенцева. М. : Высш. шк., 1972. -343 с.

3. Баффингтон, Р. Детекторы для газовой хроматографии / Р. Баффингтон, М. Уилсон ; пер. с нем. В. В. Соболя ; под ред. В. Г. Березкина. М. : Мир, 1993.-80 с.

4. Беликов, В. Г. Фармацевтическая химия : учеб. : в 2 ч. / В. Г. Беликов. — 3-е изд., перераб. и доп. Пятигорск : Изд-во Пятигор. гос. фармац. акад., 2003. — Ч. 2 : Специальная фармацевтическая химия. — 545 с.

5. Биохимия фенольных соединений : пер. с англ. / под ред. Дж. Харборна. М. : Мир, 1968. - 451 с.

6. Государственная фармакопея Российской Федерации / Федер. гос. учреждение «Науч. центр экспертизы средств мед. применения» Росздравнадзора и др.. 12 изд. - М. : Науч. центр экспертизы средств мед. применения, 2008. - Ч. 1. - 696 с. : ил., табл.

7. Дерффель, К. Статистика в аналитической химии / К. Дерффель ; пер. с нем. Л. Н. Петровой ; под ред. Ю. П. Адлера. М. : Мир, 1994. - 268 с. : ил. ч '

8. Дмитрук, С. И. Фармацевтическая и медицинская косметология : учеб. / С. И. Дмитрук ; Сиб. гос. мед. ун-т. М. : Мед. информ. агентство, 2007.- 178 с.

9. Дроздов, В. А. Введение в физико-химические методы анализа : учеб. пособие / В. А. Дроздов, В. В. Кузнецов. С. Л. Рогатинская ; под общ. ред. О. М. Петрухина. М. : Изд-во Моск. хим.-технол. ин-та, 1980. - 80 с. : ил.

10. Ежова, М. А. К вопросу об этиологии, клинике и лечении себорийного дерматита / М. А. Ежова // Косметика и медицина. 2001. - № 5.-С. 16-21.

11. Львов, А. Н. Опыт лечения десквамативных дерматозов волосистой части головы шампунем «Келюаль 08» / А. Н. Львов, Т. Б. Косцова / Российский журнал кожных и венерических болезней. 2006. - № 1.-С. 76-78.к

12. Новоселов, В. С. Современные противогрибковые средства / В. С. Новоселов // Фармацевтический вестник. 2002. - 13 авг.

13. Новые физические и физико-химические методы исследования органических соединений / Б. В. Иоффе и др. ; под общ. ред. Б. В. Иоффе. -Л. : Изд-во Ленингр. ун-та, 1984. 240 с.

14. Румшиский, Л. 3. Математическая обработка результатов эксперимента : справ, руководство / Л. 3. Румшиский. М. : Наука, 1971. -192 с.

15. Сергеев, Ю. В. «Кето Плюс» шампунь: новый подход к лечению перхоти и себорейного дерматита / Ю. В. Сергеев, Е. В. Кудрявцева, Е. Л. Сергеева // Иммунопатология, аллергология, инфектология. 2002. - № 4. -С. 21-22.

16. Сергеев, Ю. В. Шампунь Низорал: соврем, подход к лечению Ма1а88ег1а инфекции кожи / Ю. В. Сергеев, А. Ю. Сергеев // Вестник дерматологии и венерологии. - 1997. — № 3. - С. 60-62.

17. Суколин, Г. И. Себорейный дерматит: новое в этиологии и лечении / Г. И. Суколин // Русский медицинский журнал. 1998. - № 6. - С. 382-384.- I

18. Технология лекарственных форм : в 2 т. / под ред. Т. С. Кондратьевой. М.: Медицина, 1991. - Т. 1. - 496 с. ; Т. 2. - 544 с.

19. Фармацевтическая химия : учеб. пособие / Э. Н. Аксенова и др. ; под ред. А. П. Арзамасцева. М. : ГЭОТАР-МЕД, 2004. - 640 с.

20. Физико-химические методы анализа : учеб. пособие / А. К. Бабко и др.. М. : Высш. шк., 1968. - 334 с.

21. Чеботарев, В. К. Прогнозирование в титриметрических методах анализа с использованием реакций комплексообразования и осаждения / В. К. Чеботарев ; Алтайский, гос. ун-т.- Барнаул : Изд-во Алтайского гос. унта, 1999.- 110 с.

22. Шатц, В. Д. Высокоэффективная жидкостная хроматография : основы теории. Методология. Применение в лекарств, химии / В. Д. Шатц ; АН ЛатвССР, Ин-т орган, синтеза. Рига : Зинатне, 1988. - 390 с.

23. Энциклопедия лекарств. : ежегод. сб. / под ред. Г. Л. Вышковского. М. : РЛС-2007. — 1488 с. — (Регистр лекарственных средств России; вып. 15).

24. Юинг, Г. Инструментальные методы химического анализа / Г. Юинг ; пер. с англ. Е. Н. Дороховой, Г. В. Прохоровой. М. : Мир, 1989. -608 с. : ил.

25. A global survey of trans-resveratrol concentrations in commercial wines / D. M. Goldberg et al. // Am: j. Enol. Vitic. 1995. - Vol. 46, № 2. - P. 159-165.

26. Alcohol and mortality in middle-aged men from eastern France / S. C. Renaud et al. // Epidemiology 1998. - Vol. 9, № 2. - P. 184-188.

27. Alteration in phase I and II enzyme activities and polycyclic aromatic hydrocarbons-DNA adduct formation by plant phenolics in mouse epidermis / H. Szaefer et al. // Nutr. Cancer. 2004. - Vol. 48, is. 1. - P. 70-77.

28. Analysis of wines for resveratrol using direct injection high-pressure liquid chromatography with electrochemical detection / K. D. McMurtrey et al. // J. Agric. Food Chem. 1994. - Vol. 42, is. 10. - P. 2077-2080.

29. Anti-inflammatory effects of resveratrol in lung epithelial cells:i

30. Antiplatelet activity of synthetic and natural resveratrol in red wine / A. A. Bertelli et al. // Int. J. Tissue React. 1995. - Vol. 17, № 1. - P. 1-3.

31. Babu, S. K. Estimation of trans-resveratrol in herbal extracts and dosage forms by high-performance thin-layer chromatography / S. K. Babu, K. V. Kumar, G. V. Subbaraju // Chem. Pharm. Bull. 2005. - Vol. 53, № 6. - P. 691693.

32. Bhat, K. P. Cancer chemopreventive activity of resveratrol / K. P. Bhat, J. M. Pezzuto // Arm. N. Y. Acad. Sci. 2002. - Vol. 957 : Alcohol and wine in health and disease. — P. 210-229.

33. Bhat, K. P. Resveratrol exhibits cytostatic and antiestrogenic properties with human endometrial adenocarcinoma (Ishikawa) cells / K. P. Bhat, J. M. Pezzuto // Cancer. Res. -2001. Vol. 61, № 16. - P. 6137-6144.

34. Cancer chemopreventive activity of resveratrol, a natural product derived from grapes / M. B. Jang et al. // Science. 1997. - Vol. 275, № 5297. -P. 218-220.

35. Chemo-enzymatic synthesis and cell-growth inhibition activity of resveratrol analogues / V. Cardile et al. // Bioorg. Chem. 2005. - Vol. 33, № 1. -P. 22-33. >

36. Contents of resveratrol, piceid, and their isomers in commercially available wines made from grapes cultivated in Japan / M. Sato et al. // Biosci. Biotechnol. Biochem. 1997. - Vol. 61, № 11. - P. 1800-1805.

37. Cowley, N. C. The permissive effect of sebum in seborrhoeic dermatitis: an explanation of the rash in neurological disorders / N. C. Cowley, P. M. Farr, S. A. Shuster // Br. J. Dermatol. 1990. - Vol. 122, № 1. - P. 71-76.

38. Determination of trans-resveratrol in plasma by HPLC / M. E. Juan et al. // Anal. Chem. 1999. - Vol. 71, № 3. - P. 747-750.

39. Development of a reversed-phase high-performance liquidchromatography method for analyzing raras-resveratrol in peanutkernels / J. J. L. Rudolf .et al.] // Food Chem. 2005. - Vol. 89, № 4. - P. 623-638.

40. Direct HPLC analysis of cis and trans resveratrol and piceid isomers in Spanish red Vitis vinifera wines / R. M. Lamuela-Raventos et al. // J. Agric. Food Chem. 1995. - Vol. 43, is. 2. - P. 281-283.

41. Effect of enological practices on the resveratrol isomer content of wine / P. Jeandet et al. // J. Agric. Food Chem. 1995. - Vol. 43, is. 2. - P. 316319.

42. Effect of flavonoids and vitamin E on cyclooxygenase-2 (COX-2) transcription / K. A. O'Leary et al. // Mutat. Res. 2004. - Vol. 551, is. 1-2. - P. 245-254.

43. Effects of maternal xenoestrogen exposure on development of the reproductive tract and mammary gland in female CD-I mouse offspring / Y. Nikaido et al. // Reprod. Toxicol. 2004. - Vol. 18, is. 6. - P. 803-811.

44. Effects of meteorological factors and mineral elements on the content of resveratrol in Polygonum cuspidatum rootstalk / Y. Cao et al. // Ying Yong Sheng Tai Xue Bao. 2004. - Vol. 15, №7.-P. 1143-1147.

45. Effect of resveratrol alone and its combination with cyclosporin A on the immune function of human peripheral blood T lymphocytes. / L. Yu [et al.] // Xi Bao Yu Fen Zi Mian Yi Xue Za Zhi. 2003. - Vol. 19, is. 6. - P. 549-551.

46. Effects of resveratrol on gene expression in renal cell carcinoma / T. Shi et al. // Cancer Biol. Ther. 2004. - Vol. 3, is. 9. - P. 882-888.

47. Enhancement of tyrosinase inhibition of the extract of Veratrum patulum using cellulase / D. H. Kim et al. // Biotechnology and Bioengineering. -2004. Vol. 87, is. 7. - P. 849-854.

48. Expression of the grapevine stilbene synthase gene VST1 in papaya provides increased resistance against diseases caused by Phytophthora palmivora / Y. J. Zhu et al. // Planta. 2004. - Vol. 220, is. 2. - P. 241-250.

49. Expression of the stilbene synthase (StSy) gene from grapevine in transgenic white poplar results in high accumulation of the antioxidant resveratrol glucosides / A. Giorcelli et al. // Transgenic Res. 2004. - Vol. 13 № 3. - P. 203-214.

50. Facial seborrheic dermatitis treated with fluconazole 2% shampoo / D. Rigopoulos et al. // Int. J. Dermatol. L994. - Vol. 33, № 2. - P. 136-137.

51. FADD-dependent apoptosis induction in Jurkat leukemia T-cells by the resveratrol analogue, 3,4,5-trihydroxy-trans-stilbene / Y. Wang et al. // Biochem. Pharmacol. 2005. - Vol. 69; is. 2. - P. 249-254.

52. Flavones and polyphenols inhibit the NO pathway during apoptosis of leukemia B-cells / C. Quiney et al. // Leuk Res. 2004. - Vol. 28, is. 8. - P. 851861.

53. Fremont, L. C. Biological effects of resveratrol / L. C. Fremont // LifeSci. 2000. - Vol. 66, is. 8. - P. 663-673.

54. Fulda, S. Sensitization for anticancer drug-induced apoptosis by the chemopreventive agent resveratrol / S. Fulda , K. M. Debatin // Oncogene. 2004. -Vol. 23, is. 40.-P. 6702-6711.

55. G2/M cell cycle arrest and induction of apoptosis by a stilbenoid, 3,4,5-trimethoxy-4'-bromo-cis-stilbene, in human lung cancer cells / E. J. Lee et al. // Life Sci. 2004. - Vol. 75, is. 23. - P. 2829-2839.

56. Germination of peanut kernels to enhance resveratrol biosynthesis and prepare sprouts as a functional vegetable / K. H. Wang et al. // J. Agric. Food Chem. 2005. - Vol. 53, is. 2. - P. 242-246.

57. Hanel, H. Therapy of seborrhoeic eczema with an antifungal agent with an antiphlogistic effect / H. Hanel, E. Smith-Kurtz, S. Pastowsky // Mycoses. 1991, Vol. 34, suppl. 1. - P. 91-93.

58. Hoing, M. V. Ketoconazole shampoo in the treatment of dandruff and/or seborrhoeic dermatitis / M. V. Hoing, A. M. De Dier, V. K Schuermans // Pharmaceutica. 1997. - № 2. - P. 4-19.

59. In vitro effects of the polyphenols resveratrol, mangiferin and (-)-epigallocatechin-3-gallate on the scuticociliate fish pathogen Philasterides dicentrarchi / J. Leiro et al. // Dis. Aquat. Organ. 2004. - Vol. 59, № 2. - P. 171-174.

60. Ingham, J. L. 3, 5, 4'-trihydroxstilbene as a phytoalexin form groundnuts (Arachis hypogaea) / J. L. Ingham // Phytochemistry. 1976. - Vol. 15, № 11.-P. 1791-1793.

61. Involvement of cytochrome P450 1A2 in the biotransformation of trans-resveratrol in human liver microsomes / B. Piver et al. // Biochem. Pharmacol. 2004. - Vol. 68, is. 4. - P. 773-782.

62. Is resveratrol an estrogen agonist in growing rats? / R. T. Turner et al. // Endocrinology. 1999. - Vol. 140, № 1. - P. 50-54.

63. Isolation and Identification of stilbenes in two varieties of Polygonum cuspidatum / B. C. Vastano et al. // J.-Agric. Food Chem. 2000. - Vol. 48, is. 2. -P. 253-256.

64. Isorhapontigenin, a new resveratrol analog, attenuates cardiac hypertrophy via blocking signaling transduction pathways / H. L. Li et al. // Free Radic. Biol. Med. 2005. - Vol. 38, is. 2. - P. 243-257.

65. Jang, M. C. Cancer chemopreventive activity of resveratrol, a natural product derived from grapes / M. C. Jang et al. // Science. 1997. - Vol. 275, № 5297.-P. 218-220.

66. Jaworski, A. W. Fractionation and HPLC determination of grape phenolics / A. W. Jaworski, C. Y. Lee // J. Agric. Food Chem. 1987. - Vol. 35, is. 2.-P. 257-259.

67. Jeandet, P. Y. The production of resveratrol (3,5,4'-trihydroxystilbene) by grape berries in different developmental stages / P. Y. Jeandet, R. A. Bessis, B. C. Gautheron // Am. J. Enol. Vitic. 1991. - Vol. 42, № 1. - P. 41-46.

68. Kinetics of trans- and cis-resveratrol (3,4',5-trihydroxystilbene) after red wine oral administration in rats / A. E. Bertelli et al. // Int. J. Clin. Pharmacol. Res. 1996. - Vol. 16, № 4-5. - P. 77-81.

69. Kopp, P. Resveratrol, a phytoestrogen found in red wine. A possible explanation for the conundrum of the «French paradox»? / P. Kopp // Eur. J. Endocrinol. 1998. - Vol. 138, № 6. - P. 619-620.

70. Lamuela-Raventos, R. M. Occurrence of resveratrol in selected California wines by a new HPLC method / R. M. Lamuela-Raventos, A. L. Waterhouse // J. Agrie. Food Chem. 1993. - Vol. 41, is. 4. - P. 521-523.

71. Langcake, P. C. The production of resveratrol and the viniferins by grapevines in response to ultraviolet irradiation / P. C. Langcake, R. J. Pryce // Phytochemistry. 1977. -Vol. 16, №8.-P. 1193-1196.

72. Larrosa, M. The grape and wine polyphenol piceatannol is a potent inducer of apoptosis in human SK-Mel-28 melanoma cells / M. Larrosa, F. A. Tomás-Barberán, J. C. Espin // Eur. J. Nutr. 2004. - Vol. 43, № 5. - P. 275-284.

73. Levels of cis- and /ram1-resveratrol and piceid isomers in rose and white Vitis viniferawines / A. I. Romero-Pérez et al. // J. Agrie. Food Chem. — 1996.-Vol. 44, is. 8.-P. 2124-2128.

74. Lin, J. K. Chemoprevention of cancer and cardiovascular disease by resveratrol / J. K. Lin, S. H. Tsai // Proc. Natl. Sci. Counc. Repub. China. B. -1999.-Vol. 23, №3.-P. 99-106.

75. Marks, R. The effects of a shampoo containing zinc pyrithione on the control of dandruff / R. Marks, A. D. Pearse, A. P. Walker // Br. J. Dermatol. -1985. Vol. 112, № 4. - P. 415-422.

76. Method for the quantitative extraction of resveratrol and piceid isomers in grape berry skins. Effect of powdery mildew on the stilbene content / A.

77. Romero-Perez et al. // J. Agric. Food Chem. 2001. - Vol. 49, is. 1. - 210-215.

78. New stilbene derivatives from Calligonum leucocladum / M. Okasaka et al. // J. Nat. Prod. 2004. - Vol. 67. is. 6. - P. 1044-1046.

79. Okuda, T. C. 7rara-Resveratrol concentrations in berry skins and wines from grapes grown in Japan /' T. Okuda, K. Yokotsuka // Am. J. Enol. Vitic. 1996.-Vol. 47, № 1.-P. 93-99.

80. Optimisation of sample preparation for the determination of trans-resveratrol and other polyphenolic compounds in wines by high performance liquid chromatography / S. Malovanab et al. // Anal. Chim. Acta. 2001. - Vol. 428, is.2.-P. 245-253.

81. Orfanos, C. E. Oral retinoids in the treatment of seborrhoea and acne / C. E. Orfanos, C. C. Zouboulis // Dermatology. 1998. - Vol. 196, № 1. - P. 140147.

82. Pharmacokinetics in mice, "and growth-inhibitory properties of theiputative cancer chemopreventive agent resveratrol and the synthetic analogue trans 3,4,5,4' tetramethoxystilbene / S. Sale et al. // Br. J. of Cancer. - 2004. - Vol. 90, №3.-P. 736-744.

83. Phytochemical analysis and anti-allergic study of Agave intermixta Trel. and Cissus sicyoides L / A. M. Quilez et al. // J. Pharm. Pharmacol. 2004. -Vol. 56, is. 9.-P. 1185-1189.

84. Piceid, the major resveratrol derivative in grape juices / A. I. Romero-Pérez et al. // J. Agrie. Food Chem. 1999. - Vol. 47, is. 4. - P. 1533-1536.

85. Pityrosporum ovale (Malassezia furfur) as the causative agent of seborrhoeic dermatitis: new treatment options / J. M. Faergemann et al. // Br. J. Dermatol. 1996.-Vol. 134, suppl. 46.-P. 12-15.

86. Plant foods and herbal sources of resveratrol / J. C. Burns et al. // J. Agrie. Food. Chem. 2002. - Vol. 50, № 11. - P. 3337-3340.

87. Plasma, urine and tissue levels of trans- and cis-resveratrol (3,4',5-trihydroxystilbene) after short-term or prolonged administration of red wine to rats / A. E. Bertelli et al. // Int. J. Tissue. React. 1996. - Vol. 18, № 2-3. - P. 67-71.

88. Renaud, S. A. Wine, alcohol, platelets, and the French paradox for coronary heart disease / S. A. Renaud, M. N. De Lorgeril // Lancet. 1992. - Vol. 339, № 8808. - P. 1523-1526.

89. Resveratrol analogues as selective cyclooxygenase-2 inhibitors: synthesis and structure-activity relationship / M. Murías et al. // Bioorg. Med. Chem. 2004. - Vol. 12, is. 21. - P. 5571-5578.

90. Resveratrol content of wines of different ages: relationship with fungal disease pressure in the vineyard / P. Jeandet et al. // Amer. J. Enol. Viticult. -1995.-Vol. 46, № 1,-P. 1-4.

91. Resveratrol glucosides are important components of commercial wines / D. M. Goldberg et al.7/ Am.'JVEnol. Vitic. 1996. - Vol. 47, № 4. - P. 415-420.

92. Resveratrol in raw and baked blueberries and bilberries / M. M. Lyons et al.}//J; Agric. Food. Chetn. -2003. Vol. 51, № 20. - P. 5867-5870.

93. Resveratrol induces FasL-related apoptosis through Cdc42 activation of ASKl/JNK-dependent signaling pathway in human leukemia HL-60 cells / J. L. Su et al. // Carcinogenesis. 2005. - Vol. 26, is. 1. - P. 1-10.

94. Resveratrol is absorbed in the small intestine as resveratrol glucuronide / G. Kuhnle et al. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 2000. -Vol. 272, № 1.-P. 212-217.

95. Resveratrol, a polyphenolic compound found in grapes and wine, is an agonist for the estrogen receptor / B. D. Gehm et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1997. - Vol. 94, № 25.-P. 14138-14143.

96. Resveratrol, a red wine polyphenol, protects spinal cord from ischemia-reperfusion injury / U. Kiziltepe et al. // J. Vase. Surg. 2004. - Vol. 40, is. l.-P. 138-145. \ i.

97. Rice-Evans, C. A. Antioxidant properties of phenolic compounds / C. A. Rice-Evans, N. J. Miller, G. Paganga // Trends Plant Sci. 1997. - Vol. 2, № 4. -P. 152-159.

98. Role of resveratrol in prevention and therapy of cancer: preclinical and clinical studies / B. B. Aggarwal et al. // Anticancer. Res. 2004. - Vol. 24, № 5A. - P. 2783-2840.

99. Sanders, T. H. Occurrence of resveratrol in edible peanuts / T. H. Sanders, R. W. McMichael, K. W. Hendrix // J. Agric. Food Chem. 2000. - Vol. 48, is. 4.-P. 1243-1246. v v.

100. Siemann, E. H. Concentration of the phytoalexin resveratrol in Wine / E. H. Siemann, L. L. Creasy // Am. J. Enol. Vitic. 1992. - Vol. 43, № 1. - P. 4952.

101. Sirtuin activators mimic caloric restriction and delay ageing in metazoans / J. G. Wood et al. // Nature. 2004. - Vol. 430, № 7000. - P. 686689.

102. Sobolev, V. S. ¿ram'-Resveratrol content in commercial peanuts and peanut products / V. S. Sobolev, R. J. Cole // J. Agric. Food Chem. 1999. - Vol. 47, is. 4. -P. 1435-1439.

103. Stilbene derivatives from Gnetum cleistostachyum / C. S. Yao et al. // J. Asian Nat. Prod. Res. 2005. - Vol. 7, is. 2. - P. 131-137.

104. Storz, P. Activation loop phosphorylation controls protein kinase D-dependent activation of nuclear factor kappaB / P. Storz, H. Doppler, A. Toker // Mol. Pharmacol. 2004. - Vol. 66, is. 4. - P. 870-879.

105. Synthesis and biological-.properties of new stilbene derivatives of resveratrol as new selective aryl hydrocarbon modulators / P. de Medina et al. // J. Med. Chem. -2005. -Vol. 48, is. 1. P. 287-291.

106. The human sebocyte culture model provides new insights into development and management of seborrhoea and acne / C. Zouboulis et al. //

107. Dermatology. 1998. - Vol. 196, № 1.-;P. 21-31.*

108. The protective effects of resveratrol against changes in blood platelet thiols induced by platinum compounds / B. Olas et al. // J. Physiol. Pharmacol. -2004. Vol. 55, № 2. - P. 467-476. -

109. Treatment of dandruff with a 2% ketoconazole shampoo / T. Piepponen et al. // J. Dermatol. Treatment. 1992. - Vol. 3, № 3. - P. 119-123.

110. Trela, B. C. Resveratrol: isomeric molar absorptivities and stability / B. C. Trela, A. L. Waterhouse // J. Agric. Food Chem. 1996. - Vol. 44, is. 5. - P. 1253-1257.

111. Vasodilator constituents from the roots of Lysidice rhodostega / S.S

112. Gao et al. // Planta Med. 2004. - Vol. 70, is. 12. - P. 1128-1134.

113. Vrhovsek, U. Effects of various vinification techniques on the concentration of cis- and trans-resveratrol and resveratrol glucoside isomers in wine / U. Vrhovsek, S. Wendelin, R. Eder // Am. J. Enol. Vitic. 1997. - Vol. 48, №2.-P. 214-219.

114. Wang, S. G. Two new oligostilbenes from Caragana sinica / S. G. Wang, D. Y. Ma, C. Q. Hu // J. Asian Nat. Prod. Res. 2004. - Vol. 6, is. 4. - P. 241-248.

115. Waterhouse, A. L. The occurrence of piceid, a stilbene glucoside, in grape berries / A. L. Waterhouse, R. M. Lamuela-Raventos // Phytochemistry. -1994. Vol. 37, is. 2. - P. 571-573.

116. Yang, H. Two new hepatoprotective stilbene glycosides from Acer mono leaves / H. Yang, S. H. Sung, Y." C. Kim // J. Nat. Prod. 2005. - Vol. 68, is. 1. -P. 101-103.4ИЯ

117. СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЕ!1. РЕЗВЕРАТРОЛА11 а инк и >6 ладател 1»( л и): Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Белгородский государственный университет " (1111)1. Автор(ы): см. на обороте

118. Заявка №2009113845 Приоритет изобретения 13 апреля 2009 г. Зарегистрировано в Государственном реестре изобретении Российской Федерации 27мая 2010 < Срок действия патента истекает 13 апреля 2029 г

119. Руководитель (Федеральной Счужбы по интеллектуальной собственности, патентам и товарным знакам2390772•'•' "'у-'*;/". •. . ч ч ' а ■1. БII. Симонов

120. Ш тшштштшш Щ тшшштшшш ш $ Ш ® & ЙЙ^йишйш Ш1*0 (2006.01)

121. ФЕДЕРАЛЬНАЯ СЛУЖБА ПО ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ, ПАТЕНТАМ И ТОВАРНЫМ ЗНАКАМ12> ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ

122. Статус по данным на 27 05 2010 действует21., (22) Заявка: 2009113845/28,13.04.2009

123. Дата начала отсчета срока действия патента 13.04.20095. Опубликовано: 27.05.2010

124. Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Белгородский государственный университет" (Яи)

125. АНТИСЕБОРЕЙ1ЮЕ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКОЕ СРЕДСТВО

126. ПаIейIообчад.ие<'п.(:ш) Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Белгородский государственный университет " (П V), Общество с ограниченной ответственностью "Аскчепий " (1111)1. Атпор(ы): см. на обороте

Автореферат и диссертация по медицине (14.04.01) на тему:Разработка состава и технологии жидкой лекарственной формы для наружного применения с резвератролом

Автореферат диссертации по медицине на тему Разработка состава и технологии жидкой лекарственной формы для наружного применения с резвератролом

Оглавление диссертации Полухина, Татьяна Сергеевна :: 2011 :: Москва

Введение диссертации по теме "Технология получения лекарств", Полухина, Татьяна Сергеевна, автореферат

Заключение диссертационного исследования на тему "Разработка состава и технологии жидкой лекарственной формы для наружного применения с резвератролом"

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2011 года, Полухина, Татьяна Сергеевна

Похожие научные работы

Каталог диссертаций