Автореферат и диссертация по медицине (14.03.06) на тему:Исследование остеопротективных эффектов резвератрола и его комбинаций с эналаприлом и лозартаном

На правах рукописи

Коклина Наталья Юрьевна

ИССЛЕДОВАНИЕ ОСТЕОПРОТЕКТИВНЫХ ЭФФЕКТОВ РЕЗВЕРАТРОЛА И ЕГО КОМБИНАЦИЙ С ЭНАЛАПРИЛОМ И ЛОЗАРТАНОМ

14.03.06 - фармакология, клиническая фармакология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

1 4 МАР 2013

Курск-2013

005050703

Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Курский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации.

Научные руководители:

доктор медицинских наук, профессор Покровский Михаил Владимирович кандидат медицинских наук, доцент Файтельсон Александр Владимирович

Официальные оппоненты:

Лазарев Алексей Иванович, доктор медицинских наук, профессор, Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Курский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации, профессор кафедры оториноларингологии

Николаев Сергей Борисович, доктор медицинских наук, Областное государственное бюджетное учреждение здравоохранения «Белгородская областная клиническая больница Святителя Иоасафа», врач хирургического отделения №1

Ведущая организация:

Открытое акционерное общество «Всероссийский научный центр по безопасности биологически активных веществ»

Защита состоится « еЗ/ » 2013 г. в асов

на заседании диссертационного совета Д 208.039.03 при Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Курский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации (305041, г. Курск, ул. К. Маркса, 3).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГБОУ ВПО КГМУ Минздрава России.

Автореферат разослан « / / » фе&ПвиЫ 2013 г.

Ученый секретарь //

диссертационного совета —Пашин Евгений Николаевич

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследовании. Остеопороз - мультифакториальное системное заболевание, характеризующееся прогрессирующим снижением костной массы и нарушением структуры костной ткани, приводящими к увеличению риска переломов костей скелета. Чрезвычайная распространенность остео-псротических переломов ставит остеопороз в число приоритетных проблем современной медицины. Согласно данным ВОЗ, проблема остеопороза как причина инвалидности и смертности больных от переломов костей занимает четвертое место в мире среди неинфекционных заболеваний, уступая болезням сердечно-сосудистой системы, онкопатологии и сахарному диабету. Остеопороз выявлен у 75 миллионов человек в США, странах Европы и Японии вместе взятых (Дедов И.И., 2010; Беневоленская Л.И., 2009).

В связи с увеличением продолжительности жизни населения планеты ожидается значительный рост частоты остеопоротических переломов. Вместе с тем, применение современных методов диагностики и рано начатые профилактика и лечение остеопороза позволяют снизить риск, а в ряде случаев и предотвратить возникновение переломов (доклад Европейского общества по остеопо-розу (EFFO) в Совете Европы, 1998).

В настоящее время патогенетическая терапия данного заболевания традиционно включает препараты, замедляющие костную резорбцию (эстрогены, кальцитонин), стимулирующие костеобразование (фториды, анаболические стероиды) и препараты многопланового действия (витамин D) (Рожинская Л.Я., 2010). Это разграничение в известной мере условно, поскольку все они действуют в той или иной степени на оба процесса ремоделирования.

Однако увеличение частоты остеопороза и его осложнений показывает, что в настоящее время нет надежных методов медикаментозного лечения и профилактики зтого заболевания. Все это указывает на актуальность поиска новых подходов к фармакологическим методам воздействия при нарушениях процессов костного ремоделирования, а также обосновывает избранное нами направление исследования.

Положение о значительном вкладе микроциркуляции в процессы ремоделирования костной ткани является общепризнанным (Дедов И.И., 2010). Как известно, строение микроциркуляторного русла костной ткани существенно отличается от морфологии сосудистого русла остальных тканей организма. Костные микрососуды не имеют мышечного и соединительнотканого слоев, а имеют только эндотелий. Таким образом, именно эндотелиоциты опосредуют гуморальную регуляцию обмена между остеобластами, остеокластами и кровью (Брошусь В.В., 2003; Napoli С., 2010).

Эндотелиальная дисфункция может быть причиной нарушения кровоснабжения костной ткани (Мартынов А.И., 2005; Небиеридзе Д.В., 2005; Шес-такова М.В., 2008), которая посредством ухудшения микроциркуляции может приводить к нарушению остеогенеза и остеорепарации, вызывая тем самым ряд остеологических заболеваний, в том числе и остеопороз.

Ранее проведенные экспериментальные исследования показали положительное остеопротективное действие препаратов, корригирующих дисфункцию эндотелия, таких как ингибитор ангиотензинпревращающего фермента (АПФ) эналаприл и блокатор ангиотензиновых рецепторов (AT) лозартан (Гудырев О.С., 2008; Файтельсон A.B., 2010).

Наряду с эналаприлом и лозартаном мощным эндотелиотропным действием обладает резвератрол (тригидрокситрансстильбен - природное вещество растительного происхождения), содержащийся в большем количестве в красных виноградных винах (Кочкаров В.И., 2009).

Экспериментальные исследования выявили, что, помимо эндотелиотроп-ных свойств, резвератрол обладает так же антиоксидантной, эстрогенной и ан-тиагрегационной активностью (Кочкаров В.И., 2009). Данные свойства могут также благоприятно отразиться на костном ремоделировании и репаративной регенерации при остеопорозе.

В то же время в доступной литературе не имеется сведений о том, чтобы кто- либо использовал резвератрол в комбинациях с другими лекарственными средствами в лечении остеопоротических нарушений.

Таким образом, все изложенное свидетельствует об актуальности выбранной темы исследования.

Номер государственной регистрации темы - 01201279985.

Цель исследования. Провести оценку фармакологической активности эналаприла, лозартана, резвератрола и их комбинаций в сравнении с препаратом кальций-ДЗ Никомед в коррекции экспериментального остеопороза, вызванного билатеральной овариэктомией.

Задачи исследования:

1. Исследовать эффективность традиционного метода лечения экспериментального остеопороза препаратом кальций-ДЗ Никомед с использованием результатов измерения микроциркуляции в костной ткани, функциональных сосудистых проб и гистоморфометрического исследования.

2. Оценить остеопротективное действие эналаприла на модели экспериментального остеопороза с использованием результатов измерения микроциркуляции в костной ткани, функциональных сосудистых проб и гистоморфометрического исследования.

3. Оценить остеопротективное действие лозартана на модели экспериментального остеопороза с использованием результатов измерения микроциркуляции в костной ткани, функциональных сосудистых проб и гистоморфометрического исследования.

4. Оценить остеопротективное действие резвератрола на модели экспериментального остеопороза с использованием результатов измерения микроциркуляции в костной ткани, функциональных сосудистых проб и гистоморфометрического исследования.

5. Изучить остеопротективное действие комбинации резвератрола и эналаприла при экспериментальном остеопорозе с использованием результатов

измерения микроциркуляции в костной ткани, функциональных сосудистых проб и гистоморфометрического исследования.

6. Изучить остеопротективное действие комбинации резвератрола и ло-зартана при экспериментальном остеопорозе с использованием результатов измерения микроциркуляции в костной ткани, функциональных сосудистых проб и гистоморфометрического исследования.

Научная новизна исследования. Впервые показано, что ежедневное внутрижелудочное введение крысам препарата кальций-ДЗ Никомед в дозе 85,7 мг/кг/сут. в течение восьми недель после билатеральной овариэктомии не приводит к статистически значимому изменению величины коэффициента эн-дотелиальной дисфункции, рассчитанного на основании результатов проведения лазерной допплеровской флоуметрии в костной ткани. Введение препарата по указанной схеме не оказывало влияния на состояние регионарной микроциркуляции в костной ткани проксимального метафиза бедренной кости экспериментальных животных. Тем не менее, препарат частично предотвращал развитие генерализованного экспериментального остеопороза, что выражалось в слабом замедлении истончения костных трабекул в проксимальных метафизах бедренной и плечевой костей, а также телах поясничных позвонков подопытных животных.

В работе впервые продемонстрировано, что резвератрол, вводимый в дозе 2 мг/кг крысам ежедневно однократно в сутки внутрибрюшинно в течение восьми недель после билатеральной овариэктомии, обладая эндотелиопротек-тивным действием, что выражалось в снижении коэффициента эндотели&чьной дисфункции, эффективно предотвращал снижение уровня регионарной микроциркуляции в костной ткани. Тем самым резвератрол способствовал замедлению системного истончения костных трабекул в губчатой костной ткани и предотвращению возникновения в них микропереломов, то есть обладал остеояро-тективной активностью.

Впервые продемонстрировано, что при комбинированном применении резвератрола с эналаприлом и лозартаном, также обладающими доказанной эн-дотелио- и остеопротективной активностью, наблюдается положительное фар-макодинамическое взаимодействие, заключающееся в более выраженном положительном влиянии указанных комбинаций препаратов на изучаемые параметры по сравнению с монотерапией резвератролом, эналаприлом или лозартаном.

Научная новизна подтверждается получением четырех патентов РФ на изобретения.

Практическая значимость. В работе обоснована эффективность приме нения ингибитора АПФ эналаприла, блокатора ATI-рецепторов лозартана, фи-тоалексина резвератрола, а также их комбинаций для коррекции остеопороти-ческих изменений костей скелета. В эксперименте доказано, что использование исследуемых препаратов и их комбинаций позволяет нормализовать изменения соотношений сосудистых реакций в ответ на введение аиетилхолина (зндоте-

лишависимая вазодилатация) и нитропруссида натрия (эндотелийнезависимая вазодилатация), предотвратить уменьшение кровоснабжения костной ткани при развивающемся остеопорозе, а также добиться замедления отрицательной динамики гистоморфометрических показателей кости.

Результаты исследования позволяют рекомендовать проведение целенаправленных клинических испытаний эналаприла, лозартана, резвератрола и их комбинаций при системном остеопорозе, а также остеопоротических переломах костей скелета.

Внедрение результатов исследования. Результаты диссертационного исследования используются в лекционных курсах кафедр фармакологии и травматологии, ортопедии и военно-полевой хирургии ГБОУ ВПО КГМУ, кафедры фармакологии и фармацевтических дисциплин ИПМО ФГАОУ ВПО НИУ БелГУ и кафедры фармакологии, клинической фармакологии и фармации ФГБОУ ВПО ОГУ.

Личный вклад автора. Автором проанализированы отечественные и зарубежные источники литературы по теме диссертационного исследования, проведены серии экспериментов, получены и обобщены результаты исследования, проведена статистическая обработка и анализ полученных данных.

В публикациях, выполненных в соавторстве, доля участия диссертанта составила 85%.

Апробация работы. Материалы работы были представлены на XV и XVII Российских национальных конгрессах «Человек и лекарство» (Москва, 2008, 2010); II и IV международных научных конференциях молодых ученых-медиков (Курск, 2008, 2010); IV конференции с международным участием «Проблема остеопороза в травматологии и ортопедии» (Москва, 2009); 74-й научной конференции КГМУ, сессии Центрально-Черноземного научного центра РАМН и отдела РАЕН «Университетская наука: теория, практика, инновации» (Курск, 2009); межвузовской научной конференции «Актуальные вопросы фармакологии и фармации» (Курск, 2009); 75-й Всероссийской научной конференции студентов и молодых ученых с международным участием «Молодежная наука и современность» (Курск, 2010); III Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Биотехнология и биомедицинская инженерия» (Курск, 2010); Третьей международной дистанционной научной конференции «Инновации в медицине» (Курск, 2010); заседании Курского регионального отделения ассоциации травматологов-ортопедов России (Курск, 2011).

Апробация диссертации проведена на научно-практической конференции кафедр фармакологии; клинической фармакологии; травматологии, ортопедии и военно-полевой хирургии; оториноларингологии; акушерства и гинекологии ФПО; хирургии ФПО; биологической химии; анатомии человека; гистологии ГБОУ ВПО КГМУ Министерства здравоохранения РФ.

По материалам диссертации опубликовано 21 печатная работа, в том числе четыре из них — в журналах, рекомендуемых ВАК для публикации основных научных результатов диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук. Получено 4 патента РФ на изобретения.

Положения, выносимые на защиту:

1. Препарат кальций-ДЗ Никомед в суточной дозе 85,7 мг/кг на модели генерализованного остеопороза, вызванного билатеральной овариэктомией, не обладает эндотелиопротективным действием и не влияет на показатели микроциркуляции в костной ткани бедра. Препарат обладает слабым остеопротектив-ным действием, заключающимся в замедлении истончения костных трабекул губчатой костной ткани.

2. Резвератрол в дозе 2 мг/кг на модели генерализованного остеопороза, вызванного билатеральной овариэктомией, обладает выраженным эндотелиопротективным действием, значительно снижая коэффициент эндотелиальной дисфункции; предотвращает снижение уровня регионарной микроциркуляции в костной ткани бедра, а также обладает статистически значимым остеопротек-тивным действием, заключающимся в замедлении системного истончения костных трабекул губчатой костной ткани и предотвращении возникновения в них микропереломов.

3. Комбинированное применение резвератрола с эналаприлом и лозарта-ном выявляет положительное фармакодинамическое взаимодействие препаратов. Эндотелио- и остеопротективное действие указанных комбинаций заключается в их выраженном положительном влиянии на показатели регионарной микроциркуляции в костной ткани проксимального метафиза бедра у крыс, значение коэффициента эндотелиальной дисфункции, рассчитанного на основании результатов проведения лазерной допплеровской флоуметрии в костной ткани, а также гистоморфометрические показатели, характеризующие среднюю ширину трабекул губчатой костной ткани в различных локализациях скелета экспериментальных животных.

Структура и объем работы. Диссертация состоит из списка сокращений, введения, обзора литературы, описания материалов и методов, результатов собственных исследований и их обсуждения, выводов и списка литературы, включающего 164 источника, из которых 67 отечественных и 97 зарубежных авторов. Диссертация изложена на 126 страницах машинописного текста, содержит 8 таблиц и 46 рисунков.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы исследования

Моделирование генерализованного остеопороза. Опыты проводили на самках белых крыс линии Вистар массой 250±50 г. Для моделирования системного остеопороза крыс наркотизировали внутрибрюшинным введением раствора хлоралгидрата в дозе 300 мг/кг и проводили операцию билатеральной овари-эктомии. Животных распределяли по группам путем стратифицированной ран-

домизации со стратификацией по массе тела, условиям содержания и питания, а также по проводимым операциям и манипуляциям. Развитие генерализованного остеопороза оценивали гнетоморфометрическИ через восемь недель (на 57 день) после проведения оваризктомии, при этом контрольной группой служили животные, которым была проведена операция ложной овариэктомии.

Измерение микродиркуляции в костной ткани, проведение функциональных сосудистых проб и расчет коэффициента эндотелиальной дисфункции. Уровень микроциркуляции оценивали в ткани проксимального ме-тафиза бедра. Для этого после наркотизации (хлоралгидрат 300 мг/кг) производили хирургический доступ к проксимальному метафизу правой бедренной кости животного.

После засверливания отверстия глубиной 2,5-3 мм в проксимальном ме-тафизе бедра в него с целью стабилизации датчика, используемого для измерения микроциркуляции в кости, вводили стержень-кондуктор для проведения экспериментальных измерений.

Для получения данных о состоянии микроциркуляции в кости использовали оборудование производства компании Biopac systems: полиграф MP 100 с модулем лазерной допплеровской флоуметрии (ЛДФ) LDF100C и инвазивным игольчатым датчиком TSD144, который через канал стержня-кондуктора вводился непосредственно в ткань проксимального метафиза бедренной кости.

Регистрация и обработка результатов ЛДФ производилась с помощью программы AcqKnovvledge версии З.8.1., значения микроциркуляции выражались в перфузионных единицах (ПЕ).

После измерения внутрикостного уровня микроциркуляции, не изменяя положения датчика, проводили пробы на эндотелийзависимую вазодилатацию (ЭЗВД) в ответ на болюсное внутривенное введение раствора ацетилхолина в дозе 40 мкг/кг и эндотелийнезависимую вазодилатацию (ЭНВД) в ответ на болюсное внутривенное введение раствора нитропруссида натрия в дозе 30 мг/кг. В ответ на системное введение растворов ацетилхолина и нитропруссида наблюдалось снижение уровня микроциркуляции с последующей нормализацией показателей.

Для объективной оценки развития нарушения функции эндотелия при развивающемся генерализованном остеопорозе, а также с целью контроля эффективности применения исследуемых препаратов на основе результатов измерения микроциркуляции в кости и проведения функциональных сосудистых проб рассчитывали коэффициент эндотелиальной дисфункции (КЭД).

Для этого определяли площади прямоугольных треугольников над кривыми восстановления показателей микроциркуляции после проведения реакций ЭЗВД и ЭНВД. При этом за меньший из катетов треугольника принимали абсолютную величину падения уровпя микроциркуляции до минимального значения, за больший катет - время восстановления и стабилизации показателя микроциркуляции. Площади треугольников выражали в уловных единицах (усл. ед.).

КЭД рассчитывался как отношение площади треугольника над кривой восстановления микроциркуляции в ответ на введение нитропруссида к площа-

ди треугольника над кривой восстановления микроциркуляции а ответ на введение ацетилхолина.

Гистоморфометрическая оценка изменений, происходящих при генерализованном остеопорозе и его коррекции. Для подтверждения развития генерализованного остеопороза и в комплексной оценке эффективности исследуемых препаратов проводили морфологическое исследование костной ткани проксимальных метафизов бедренной и плечевой костей, а также тел поясничных позвонков. Материал фиксировали в 10% растворе формалина с последующей проводкой, заливкой в парафин и окрашиванием гематоксилин-эозином (Г-Э). Предметные стекла с гистологическими препаратами подвергали световой микроскопии при помощи микроскопа Leica СМЕ (увеличение хЮО: объектив х10, окуляр хЮ) и производили фотографирование костных балок цифровым фотоаппаратом Olympus SP-350 с разрешением 3264x2448 пикселей путем сопоставления объектива фотокамеры и окуляра микроскопа.

Для проведения гистоморфометрии костной ткани использовали программу ImageJ версии 1.39, предварительно откалиброванную следующим образом. Используя то же оборудование, что и для получения фотографий костных трабекул (микроскоп Leica СМЕ, увеличение хЮО; фотоаппарат Olympus SP-350, разрешение 3264x2448 пикселей), сфотографировали «линейку» длиной 1 мм на прозрачной подложке. Измерив в программе ImageJ «линейку» в пикселях, приняли расстояние в 1425 пикселей равным 1 мм. В дальнейшем измеряли ширину костных трабекул и выражали ее в микрометрах.

Обоснование доз и дизайн эксперимента. Для изучения остеопротек-тивного действия нами были выбраны препараты, эндотелиопротективное действие которых было доказано в ходе ранее проведенных исследований в лаборатории кардиофармакологии НИИ ЭМ КГМУ: эналаприла малеат, лозартан калия и резвератрол (Корокин М.В., 2006; Кочкаров В.И., 2006). В качестве препарата сравнения был выбран кальций-ДЗ Никомед, как наиболее распространенный, доступный и эффективный препарат на Российском рынке для профилактики и коррекции остеопоротических нарушений костей скелета.

Ингибитор АПФ эналаприла малеат («Рениприл» производства ОАО «Фармстандарт-Лексредства», Курск), блокатор ATI-рецепторов лозартан калия («Блоктран» производства ОАО «Фармстандарт-Лексредства», Курск) и представитель группы фитоалексинов резвератрол («Greensyn», Guangzhou Ltd.) использовали в дозах 0,5 мг/кг, 6 мг/кг и 2 мг/кг соответственно, что соответствует данным доступной литературы и выявляет эффективное эндотелиотропное действие данных препаратов в экспериментах, ранее проведенных в нашей лаборатории. Расчет дозы препарата кальций-ДЗ Никомед производился методом эквивалентного межвидового переноса доз по площади тела с использованием коэффициентов пересчета по Freireich at al., 1966. Так, суточная терапевтическая доза кальция (в пересчете на элементарный кальций) составляет 1000 мг. Коэффициент пересчета для взрослого человека с массой тела 70 кг равен 39, для крысы массой 200 г коэффициент пересчета равен 6,5. Таким образом, расчетная доза изучаемого препарата равняется 85,7 мг/кг.

Препараты вводили в течение восьми недель ежедневно однократно в сутки внутрижелудочно на суспензии из 1% крахмального раствора (зналаприл, лозартан, кальций-ДЗ Никомед) и внутрибрюшинно (резвератрол) из расчета 1 мл раствора на 100 г массы тела животного. Животные, не подвергавшиеся лечению (групп контроля и патологии), получали по той же схеме суспензию из 1% крахмального раствора.

Статистическая обработка результатов исследования. Полученные результаты подвергали статистической обработке путем расчета среднего арифметического (М), ошибки среднего арифметического (±т). Оценка статистической значимости различий при межгрупповых сравнениях производилась по двустороннему t-критерию Стьюдента для независимых групп. Различия считали статистически значимыми при значениях р<0,05.

Наличие, степень и направление зависимости между различными параметрами внутри одной группы оценивали с помощью коэффициента корреляции Пирсона (г), а также посредством построения точечных диаграмм с проведением линий регрессии. Для статистических расчетов использовалась программа «Microsoft Excel 2003».

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

1. Комплексная оценка развития генерализованного остсопороза в эксперименте с использованием результатов измерения микроциркуляции s кости, функциональных проб и гистоморфометрического исследования.

Результаты ЛДФ в костной ткани крыс позволили констатировать достоверно более низкий уровень микроциркуляции в костной ткани у крыс с экспериментальным остеопорозом (б 1,5±3,7 ПЕ, п=30) по сравнению с интактными животными (100,5±4,4 ПЕ, п=42).

В ответ на системное введение ацетилхолина и нитропруссида наблюдали снижение микроциркуляции с последующей нормализацией показателей кровотока (рис. 1). Так, уменьшение уровня микроциркуляции при проведении пробы эндотелийзависимой вазодилатации в группе интактных животных в среднем составило 55,8±11,4 ПЕ или 46,7±3,8% от исходных показателей, в группе крыс с экспериментальным остеопорозом - 28,9±3,9 ПЕ или 38,9±3,8% соответственно. Восстановление исходных значений происходило в среднем за 22,2±3,8 и 17,2±3,3 секунд соответственно. При проведении пробы эндотелийнезависи-мой вазодилатации уровень микроциркуляции в группе интактных крыс снизился в среднем на 36,1±8,7 ПЕ или 29,0±3,5% от исходного значения, в группе животных с генерализованным остеопорозом данные показатели составили 21,2±4,6 ПЕ и 27,3±5,3% соответственно. Последующая нормализация показателей микроциркуляции происходила в среднем за 40,3±4,6 и 47,7±4,0 секунд соответственно.

Примечание. 1 - реакция ЭЗВД у интактных крыс; 2 - реакция ЭНВД у ин-тактных крыс; 3 - реакция ЭЗВД у крыс после билатеральной овариэктомии; 4 - реакция ЭНВД у крыс после билатеральной овариэктомии.

В результате подсчета коэффициента эндотелиальной дисфункции получили следующее: в группе интактных животных КЭД=1,3±0,2, в группе крыс с экспериментальным остеопорозом КЭД=2,4±0,2.

После измерения уровня микроциркуляции в костной ткани бедренной кости и проведения функциональных сосудистых проб производился забор костного биоматериала для проведения гистологического исследования.

Генерализованные остеопоротические изменения в костях скелета были гистологически подтверждены у всех крыс через восемь недель после овариэктомии: наблюдалось истончение костных трабекул. Кроме того, в отдельных гистологических препаратах отмечались микропереломы костных трабекул, о прижизненном возникновении которых судили по прорастанию соединительной ткани в месте перелома трабекулы. Объективной мерой оценки развития генерализованного остеопороза через восемь недель после билатеральной овариэктомии стало достоверное уменьшение средней ширины костных трабекул во всех изучаемых локализациях (рис. 2). Так, средняя ширина костных трабекул в проксимальном метафизе бедра у крыс с экспериментальным остеопорозом была меньше показателя интактных животных на 36,8%, в проксимальном метафизе плеча - на 37,8%. Наиболее ярко патологические процессы были выражены в телах поясничных позвонков крыс с генерализованным остеопорозом. Различие в средней ширине костных трабекул в данной локализации составило 43,7%.

мш

;

Изучая индивидуальные показатели микроциркуляции и средней ширины костных трабекул в проксимальном метафизе бедренной кости в обеих группах животных, обратили внимание на наличие определенной зависимости между двумя указанными параметрами. Для подтверждения наличия таковой зависимости рассчитали коэффициент корреляции Пирсона (г) между уровнем микроциркуляции и средней шириной костной трабекулы в обеих группах. Кроме того, для сравнения парных значений в группах построили точечные диаграммы зависимости ширины костных трабекул от уровня регионарной микроциркуляции и провели на диаграммах линии регрессии.

Получили следующие значения: в группе интактных животных г=0,67, в группе крыс с остеопорозом г=0,60. Данные значения коэффициента свидетельствуют о наличии достаточно тесной прямой зависимости между уровнем микроциркуляции и средней шириной костных трабекул в проксимальном метафизе бедра у крыс в обеих группах. Точечные диаграммы позволили более наглядно визуализировать имеющуюся зависимость между изучаемыми параметрами в каждой группе (рис, 3).

Рисунок 3. Диаграммы зависимости ширины костных трабекул от значений регионарной микроциркуляции.

Примечание. ! - в группе интактных крыс; 2 - в группе крыс с остеопорозом.

Бедро Плечо Тело позвонка

□ Интактные я Остеопороз

Рисунок 2. Средняя ширина костных трабекул в группах интактных крыс и животных с генерализованным остеопорозом в различных локализациях. Примечание. * - р<0,05 по сравнению с группой интактных животных.

Таким образом, через восемь недель после проведения билатеральной овариэктомии у самок белых крыс линии Вистар раззивается системная эндо-телиальная дисфункция, частным проявлением которой является нарушение функции эндотелия сосудов микроциркуляторного русла костной ткани. Свидетельством этого является увеличение коэффициента эндотелиальной дисфункции, рассчитанного по результатам проведения ЛДФ в костной ткани при проведении функциональных сосудистых проб.

Как следствие этого, отмечается значительное ухудшение регионарного кровотока в костной ткани, приводящее к дисбалансу процессов костного ре-моделирования и, в конечном счете, возникновению и развитии генерализованного остеопороза, сопровождающегося истончением костных трабекул к возникновением в них микропереломов. Подтверждением данному положению служит наличие прямой тесной зависимости между уровнем микроциркуляции в костной ткани проксимального метафиза бедренной кости и шириной костных трабекул в данной локализации у крыс.

Это позволило нам прийти к выводу о значительней роли нарушения функции эндотелия сосудов микроциркуляторного русла костной ткани в развитии генерализованного остеопороза. Следовательно, является патогенетически обоснованным исследование остеопротективного действия выбранных нами препаратов с доказанной эндотелиотропной активностью и их комбинаций.

2. Изучение остеопротективного действия препарата кальций-ДЗ Ни-комед при экспериментальном генерализованном остеопорозе.

Было обнаружено, что кальций-ДЗ Никомед в суточной дозе 85,7 мг/кг не предотвращал ухудшения регионарного кровотока в костной ткани бедра через восемь недель после билатеральной овариэктомии: уровень микроциркуляции в указанной локализации составил 61,5±3,9 ПЕ (п-25). Было выявлено, что изучаемый препарат не нормализовал пропорции между площадями треугольников над кривыми восстановления уровня микроциркуляции в кости в ответ на болюсное введение нитропруссида и ацетилхолина. Тем самым кальций-ДЗ Никомед статистически значимого воздействия на величину КЭД не оказывал (КЭД=2,2±0,1).

При световой микроскопии срезов костей скелета крыс, получавших лечение препаратом кальций-ДЗ Никомед в дозе 85,7 мг/кг/сут., обнаружили отсутствие микропереломов трабекул и сохранение структуры костной ткани во всех исследуемых локализациях. Выявили, что кальций-ДЗ Никомед препятствовал снижению средней ширины костных трабекул до уровня животных с экспериментальным остеопорозом в исследуемых локализациях, однако средняя ширина трабекул не приближалась к значениям интактных крыс (рис. 4). Так, средняя ширина костных трабекул в проксимальном метафизе бедра под влиянием препарата кальций-ДЗ Никомед была на 14,3% больше, чем у животных с генерализованным остеопорозом. В проксимальном метафизе плечевой кости средняя ширина костных трабекул у крыс, получавших в течение восьми недель после овариэктомии кальций-ДЗ Никомед, оказалась больше на 16,6%, чем у

животных с остеопорозом. Влияние изучаемого препарата на среднюю ширину костных трабекул в поясничных позвонках заключалось в увеличении последней под влиянием препарата на 22,4% по сравнению с крысами, не получавшими лечения.

120 100 80

мкм 60 40 20 о

Рисунок 4. Влияние препарата кальций-ДЗ Никомед на значения средней ширины костных трабекул через восемь недель после овариэктомии. Примечание. * - р<0,05 по сравнению с группой интактных животных; ** - р<0,05 по сравнению с группой крыс с экспериментальным остеопорозом.

В группе животных, получавших исследуемый препарат, нами также было выявлено и подтверждено наличие прямой зависимости между уровнем микроциркуляции в костной ткани проксимального метафиза бедра и средней шириной костных трабекул в данной зоне. Коэффициент корреляции Пирсона (г) между указанными параметрами у крыс данной группы составил 0,67.

Таким образом, кальций-ДЗ Никомед в дозе 85,7 мг/кг/сут. через восемь недель после билатеральной овариэктомии не обладал эндотелиопротективным действием и не влиял на уровень микроциркуляции в костной ткани. Однако ежедневное введение экспериментальным животным изучаемого препарата в указанной дозировке позволило в слабой степени замедлить истончение костных трабекул благодаря повышению концентрации кальция в организме экспериментальных животных, обусловленному экзогенным введением препарата кальция.

3. Изучение остеопротективного действия эналаприла, лозартана, резвератрола и их комбинаций при экспериментальном генерализованном остеопорозе.

Было обнаружено, что эналаприл в дозе 0,5 мг/кг (п=35), лозартан в дозе б мг/кг (п=35) и резвератрол в дозе 2 мг/кг (п=20) в качестве монотерапии эффективно предотвращали снижение уровня регионарного кровотока в костной ткани бедра, сохраняя значения микроциркуляции на уровне интактных крыс. Результаты ЛДФ в группах животных, получавших эналаприл, лозартан и резвератрол, достоверно не отличались от таковых в группе интактных крыс (р=0,252, 0,926 и 0,455 соответственно) и не различались между собой, а также достоверно отличались от показателей в группе крыс с остеопорозом (рис. 5).

100

ПЕ

75

50

□ Интактные Я Остеолороз

В Кальций-ДЗ Никомед 85,7 мг/кг (3 ОП+Энагвприл 0,5 мг/кг

В ОП+Лозартан 6 мг/кг И ОП+Резвератрол 2 мг/кг

Ш ОП+Резвератрол+Эналалрил £5 ОП+Резеератрол+Лозартан

Рисунок 5. Влияние эналаприла, лозартана и резвератрола, а также комбинированного применения резвератрола с эналаприлом и лозартаном на показатели микроциркуляции в проксимальном метафизе бедренной кости у крыс. Примечание. * - р<0,05 по сравнению с группой интакткых животных; ** - р<0,05 по сравнению с группой крыс с остеопорозом.

В ходе ранее проведенных в нашей лаборатории экспериментальных исследований было установлено, что резвератрол способен вступать в положительное фармакодинамическое взаимодействие с основными антигипертензив-ными препаратами, в том числе с эналаприлом и лозартаном на модели Ь-ЫАМЕ-индуцированной эндотелиальной дисфункции. В рамках сформированной концепции о том, что «качество» кости зависит от адекватности функционирования сосудистого эндотелия, нами было проведено исследование эндоте-лио- и остеопротективной активности комбинаций резвератрола с эналаприлом и лозартаном на модели генерализованного остеопороза, вызванного билатеральной овариэктомией.

Было установлено, что комбинации резвератрола с эналаприлом (п=20) и лозартаном (п=20) полностью предотвращали нарушение микроциркуляции в костной ткани; более того, уровень микроциркуляции при использовании обозначенных комбинаций превышал показатели интактных животных, а также показатели в группах животных, получавших лечение резвератролом, эналаприлом и лозартаном в качестве монотерапии. Результаты ЛДФ в группах крыс, получавших комбинации резвератрола с эналаприлом и лозартаном, достоверно не различались между собой (рис. 5).

Было выявлено, что эналаприл, лозартак и резвератрол в качестве монотерапии статистически значимо снижали КЭД до значений 1,6±0,1, 1,5±0,2 и 1,3±0,2 соответственно (рис. 6). Как и в случае измерения уровня микроциркуляции в костной ткани, значения КЭД у крыс, получавших эналаприл, лозартан и резвератрол, достоверно не отличались от таковых в группе интактных животных (р>0,1) и не различались между собой.

Было также установлено, что комбинации резвератрола с эналаприлом и лозартаном, так же, как и резвератрол, эналаприл и лозартан в качестве ионотерапии, приводили пропорции между площадями треугольников над кривыми восстановления уровня микроциркуляции в кости в ответ на внутривенное бо-люсное введение нитропруссида и ацетилхолина к таковым у интактных жи-

вотных. Тем самым изучаемые комбинации статистически значимо снижали КЭДдо значений 1,2±0,1 и 1,1 ±0,1 для комбинаций резвератрола с зналаприлом и лозартаном соответственно (рис. 6). Как и в случае измерения уровня регионарной микроциркуляции, значения КЭД у крыс, получавших комбинации резвератрола с зналаприлом и лозарганом, достоверно не отличались от таковых в группе интактных животных (р=0,705 и р=0,661 соответственно) и не различались между собой (р=0,894).

з

2 1

о

Рисунок 6. Влияние эналаприла, лозартана и резвератрола, а также комбинированного применения резвератрола с зналаприлом и лозартаном на коэффициент зндотелиальной дисфункции по данным лазерной допплеровской флоуметрии в костной ткани проксимального метафиза бедра.

Примечание. * - р<0,05 по сравнению с группой интактных животных; ** - р<0,05 по сравнению с группой крыс с остеопорозом.

Это позволяет нам заключить, что значительную роль в поддержании адекватного кровоснабжения костной ткани играет сохранение функции эндотелия сосудов, питающих кость. В свою очередь, сохранение уровня микроциркуляции в кости на значениях, близких к значениям у интактных животных, способствует поддержанию нормального протекания процессов костного ремо-делирования и препятствует развитию остеопороза. Данное положение подтверждается результатами гистоморфометрического исследования костей скелета у крыс, получавших в течение восьми недель после овариэктомии исследуемые препараты и их комбинации.

При световой микроскопии срезов костей скелета у крыс, получавших лечение зналаприлом, лозартаном, резвератролом, а также комбинациями резвератрола с зналаприлом и лозартаном, обнаружили отсутствие микропереломов грабекул, сохранение структуры костной ткани и большую ширину костных трабекул, чем у крыс с остеопорозом, не получавших лечения, во всех исследуемых локализациях (рис. 7, 8, 9).

Значения средней ширины костных трабекул в проксимальных метафизах бедренной и плечевой костей и телах поясничных позвонков у крыс, получавших исследуемые препараты в качестве монотерапии, статистически значимо отличались от значений как животных с остеопорозом, так и интактных крыс, а также достоверно отличались в сторону увеличения от показателей в группе

□ Интактные _ ■ Остеопороз

¡2 Кальций-ДЗ Никомед 85,7 мг/кг КЗ ОП+Эналаприп 0,5 мг/кг

В ОП+Лозартан 6 мг/кг Ш ОП+Резвератрол 2 мг/кг

СО ОП+Резвератрол+Зналаприл Б ОП+Резвератрол+Лозартак

животных, получавших кальций-ДЗ Никомед. Большей активностью обладали лозартан и резвератрол. Показатели средней ширины костных трабекул во всех исследуемых локализациях у крыс, получавших комбинации резвератрола с эналаприлом и лозартаном, статистически значимо отличались от значений как животных с остеопорозом, так и интактных крыс, достоверно не отличались друг от друга во всех локализациях, а также превышали показатели групп с монотерапией (рис. 7, 8, 9).

О Интактные Н Остеопороз а Кальций-ДЗ Никомед 85,7 мг/кг В ОП+Эналаприл 0,5 мг/кг

В ОП+Лозартан 6 мг/кг Ш ОП+Резвератрол 2 мг/кг

П ОП+Резвератрол+Эналаприл Н ОП+Резвератрол+Лозартан

Рисунок 7. Влияние эналаприла, лозартана и резвератрола, а также комбинированного применения резвератрола с эналаприлом и лозартаном на значение средней ширины костных трабекул в проксимальном метафизе бедренной кости.

Примечание. * - р<0,05 по сравнению с группой интактных животных; ** -р<0,05 по сравнению с группой крыс с остеопорозом.

□ Интактные ■ Остеопороз

Я Кальций-ДЗ Никомед 85,7 мг/кг К ОП+Эналаприл 0,5 мг/кг

В ОП+Лозартэн 6 мг/кг Ш ОП+Резвератрол 2 мг/кг

Н ОП+Резвератрол+Эналаприл 0 ОП+Резвератрол+Лозартан

Рисунок 8. Влияние эналаприла, лозартана и резвератрола, а также комбинированного применения резвератрола с эналаприлом и лозартаном на значение средней ширины костных трабекул в проксимальном метафизе плечевой кости. Примечание. * - р<0,05 по сравнению с группой интактных животных; ** — р<0,05 по сравнению с группой крыс с остеопорозом.

60

гикм

40

20

О Интакгные Я Остеопороз Ш Кальций-ДЗ Никомед 85,7 мг/кг 51 ОП+Эналаприл 0,5 мг/кг

Н ОГКЛозартан 3 мг/кг Ш ОП+Резвератрол 2 мг/кг

3? ОП+Резвератрол+Эналалрил 0 ОП+Резвератрол+Лозартаи

Рисунок 9. Влияние зналаприла, лозартана и резвератрола, а также комбинированного применения резвератрола с эналаприлом и лозартаном на значение средней ширины костных трабекул в телах поясничных позвонков. Примечание, * - р<0>05 по сравнению с группой интактных животных; ** - р<0,05 по сравнению с группой крыс с остеопорозом.

В группах крыс, получавших исследуемые препараты и их комбинации, нами также было выявлено и подтверждено наличие прямой зависимости между уровнем микроциркуляции в костной ткани проксимального метафиза бедра и средней шириной костных трабекул в данной зоне. Так, коэффициент корреляции Пирсона (г) между указанными параметрами у крыс, получавших энала-прил, составил 0,40, лозартан - 0,83, резвератрол - 0,75, резвератрол + энала-прил - 0,73, резвератрол + лозартан - 0,77, что также подтверждает предлагаемую нами теорию патогенеза нарушения костного ремоделирования при дисфункции сосудистого эндотелия.

Таким образом, эналаприл в дозе 0,5 мг/кг, лозартан в дозе 6 мг/кг и резвератрол в дозе 2 мг/кг в качестве монотерапии через восемь недель после билатеральной овариэктомии, обладая выраженным эндотелиопротективным действием, сопровождающимся снижением коэффициента эндотелиальной дисфункции по данным лазерной допплеровской флоуметрии до уровня интактных животных, эффективно предотвращали ухудшение регионарного кровотока в костной ткани. Это позволило частично компенсировать нарушения процессов костного ремоделирования при развивающемся генерализованном остеогюрозе, свидетельством чего явилось замедление истончения костных трабекул в губчатой костной ткани, сохранение микроархитектоники и предотвращение возникновения микропереломов трабекул. Более выраженным действием обладали лозартан и резвератрол.

На модели экспериментального генерализованного остеопороза, вызванного билатеральной овариэктомией, резвератрол вступал в положительное фармакодинамическое взаимодействие с эналаприлом и лозартаном, что выражалось в более эффективном по сравнению с монотерапией резвератролом, эналаприлом и лозартаном предотвращении падения уровня регионарной микроциркуляции в костной ткани, снижении коэффициента эндотелиальной дисфункции и предотвращении истончения костных трабекул. Обе изучаемые комбинации препаратов продемонстрировали статистически неразличимую фарма-

кологическую активность, несколько большую, чем при использовании монотерапии исследуемыми препаратами.

ВЫВОДЫ

1. Кальций-ДЗ Никомед в суточной дозе 85,7 мг/кг на модели остеопоро-за, вызванного билатеральной овариэктомией, не оказывает влияния на кровоснабжение костной ткани и величину коэффициента эндотелиальной дисфункции, но обладает слабым положительным воздействием на ширину костных трабекул экспериментальных животных, увеличивая ее в среднем на 17,8%.

2. Эналаприл в дозе 0,5 мг/кг на модели генерализованного остеопороза имеет выраженное эндотелиопротектизное действие, проявляющееся в снижении коэффициента эндотелиальной дисфункции до значения 1,6±0,1 по сравнению с 2,4±0,2 у крыс, страдающих остеопорозом, предотвращает снижение уровня микроциркуляции в костной ткани бедра, удерживая его на значениях, не отличающихся от интактных крыс (93,3±4,5 ПЕ), а также, увеличивая ширину костных трабекул в среднем на 29,5% по сравнению с группой крыс с остеопорозом и предотвращая возникновение микропереломов, обладает остеопро-тективным действием.

3. Лозартан в дозе б мг/кг на выбранной модели патологии, обладая выраженным эндотелиопротективным действием, снижает коэффициент эндотелиальной дисфункции до 1,5±0,2; препарат эффективно предотвращает снижение показателей микроциркуляции в костной ткани, удерживая его на уровне интактных животных (100,0±2,3 ПЕ), и имеет выраженное остеопротективное действие, увеличивая ширину костных трабекул в среднем на 45,5%.

4. Резвератрол в дозе 2 мг/кг обладает эндотелиопротективным действием на модели остеопороза, вызванного билатеральной овариэктомией, что выражалось в снижении коэффициента эндотелиальной дисфункции до значения 1,3±0,2, предотвращает снижение уровня регионарной микроциркуляции в костной ткани бедра (91,0±12,8 ПЕ по сравнению с 61,5±3,7 ПЕ у крыс с остеопорозом) и, предотвращая истончение костных трабекул (средняя ширина костных трабекул превышает показатели животных с остеопорозом на 49,5%), обладает остеопротективной активностью.

5. Комбинация резвератрола в дозе 2 мг/кг и эналаприла в до?е 0,5 мг/кг обладает более выраженным, чем монотерапия резвератролом и эна-лаприлом, эндотелиопротективным действием: коэффициент эндотелиальной дисфункции под влиянием указанной комбинации снижался до значения 1,2±0,1. При этом наблюдалось статистически значимое увеличение уровня микроциркуляции в проксимальном метафизе бедра до 108,6±19,0 ПЕ, а также увеличение ширины костных трабекул в среднем на 55,0%, что являлось проявлением выраженного остеопротективного действия.

6. Комбинация резвератрола в дозе 2 мг/кг и лозартана в дозе 6 мг/кг также обладает более выраженной, чем монотерапия указанными препаратами, эн-дотелиопротективной активностью, снижая коэффициент эндотелиальной дисфункции до 1,1±0,1 по сравнению с 2,4±0,2 у крыс с остеопорозом. Указанная комбинация эффективно предотвращала ухудшение регионарной микроциркуляции в костной ткани бедра, удерживая ее на уровне 109,5±7,4 ПЕ, а также обладала выраженной остеопротективной активностью, увеличивая ширину костных трабекул у животных после овариэктомии в среднем на 56,3%.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Роль нарушения микроциркуляции в костной ткани в развитии остеопороза / О.С. Гудырев, А.И. Маяков, В.Ю. Чердаков, Н.Ю. Коклина // II международная научная конференция молодых ученых-медиков (21-22 февраля 2008 г., г. Курск). - Курск: КГМУ, 2008. - Т. I. - С. 32-34.

2. Нарушение микроциркуляции в костной ткани как звено патогенеза остеопороза / О.С. Гудырев, A.B. Файтельсон, М.В. Покровский, Н.Ю. Коклина [и др.] // XV Российский национальный конгресс «Человек и лекарство» (14-18 апреля 2008 г., г. Москва). - Москва, 2008. - С. 616.

3. Коррекция микроциркуляторных нарушений в костной ткани у крыс при экспериментальном остеопорозе / A.B. Файтельсон, О.С. Гудырев, Г.М. Дубровин, Н.Ю. Коклина // IV конференция с международным участием «Проблема остеопороза в травматологии и ортопедии» (11-12 февраля 2009 г., г. Москва). -Москва: ЦИТО им. H.H. Приорова, 2009. - 30 с.

4. Эндотелий костных сосудов как мишень фармакологического воздействия при экспериментальном остеопорозе //A.B. Файтельсон, О.С. Гудырев, М.В. Покровский, [и др.) // Кубанский научный медицинский вестник. -2009.-№5(110).-С. 116-121.

5. Оценка параметров микроциркуляции в костной ткани у крыс при экспериментальных переломах на фоне моделированного гипоэстрогениндуцированно-го остеопороза / A.B. Файтельсон, О.С. Гудырев, Г.М. Дубровин, Н.Ю. Коклина // Сборник трудов 74-й научной конференции КГМУ, сессия центральночерноземного научного центра РАМН и отделения РАЕН «Университетская наука: теория, практика, инновации». - Курск, 2009. - Т. 1. - С. 369-372.

6. Модель экспериментального гипоэстрогенного остеопороза / О.С. Гудырев, Н.Ю. Коклина, М.В. Корокин [и др.] // IV Международная научная конференция молодых ученых-медиков (25-26 февраля 2010 г., г. Курск). - Курск: КГМУ, 2010.-Т. 1.-С. 304-305.

7. Фармакологическая коррекция микроциркуляторных нарушений при экспериментальном остеопорозе / О.С. Гудырев, Н.Ю. Коклина, Н.В. Стабровская [и др.] // IV Международная научная конференция молодых ученых-медиков (2526 февраля 2010 г., г. Курск). - Курск: КГМУ, 2010. - Т. 1. - С. 310-311.

8. Фармакологическая коррекция нарушений микроциркуляции на модели экспериментального остеопороза / A.B. Файтельсон, О.С. Гудырев, М.В. Покровский, Н.Ю. Коклина [и др.] // XVII Российский национальный конгресс «Человек и лекарство» (12-16 апреля 2010 г., г. Москва). - Москва, 2010. - С. 731-732.

9. Фармакологическая коррекция остеопороза эналаприлом и лозартаном: экспериментальное исследование / О.С. Гудырев, Н.В. Стабровская, М.В. Корокин. A.B. Файтельсон, Н.Ю. Коклина [и др.] // 75-я Всероссийская научная конференция студентов и молодых ученых с международным участием, посвященная 75-летию КГМУ, «Молодежная наука и современность» (20-21 апреля 2010 г., г. Курск). - Курск: КГМУ, 2010. - Ч. I. - С. 289.

10. Резвератрол в фармакологической коррекции микроциркуляторных нарушений при экспериментальном остеопорозе / О.С. Гудырев, A.B. Файтельсон, М.В. Покровский, Н.Ю. Коклина [и др.] // III Всероссийская научно-практическая конференция с международным участием «Биотехнология и био-медицннская инженерия» (7-8 июня 2010 г., г. Курск). - Курск, 2010. - С. 190192.

11. Резвератрол в комбинации с эналаприлом в фармакологической коррекции микроциркуляторных нарушений при экспериментальном остеопорозе / О.С. Гудырев, A.B. Файтельсон, М.В. Покровский, Н.Ю. Коклина [и др.] // III Всероссийская научно-практическая конференция с международным участием «Биотехнология и биомедицинская инженерия» (7-8 июня 2010 г., г. Курск). -Курск, 2010.-С. 192-193.

12. Изучение модели гипоэстрогенного остеопороза на экспериментальных животных / О.С. Гудырев, A.B. Файтельсон, М.В. Покровский, Н.Ю. Коклина [и др.] // III Всероссийская научно-практическая конференция с международным участием «Биотехнология и биомедицинская инженерия» (7-8 июня 2010 г., г. Курск). - Курск, 2010.-С. 193-195.

13. Роль эндотелиальной дисфункции в развитии остеопоротических изменений костей скелета / О.С. Гудырев, A.B. Файтельсон, Н.Ю. Коклина [и др.] // Третья международная дистанционная научная конференция «Инновации в медицине» (декабрь 2010 г., г. Курск). - Курск, 2010. - С. 47-48.

14. Остеопротективные свойства резвератрола при экспериментальном остеопорозе / О.С. Гудырев, A.B. Файтельсон, Н.Ю. Коклина, Н.В. Стабровская /7

хретья международная дистанционная научная конференция «Инновации в медицине» (декабрь 2010 г., г. Курск). - Курск. 2010. - С. 55-56.

15. Протективное действие эналаприла и лозартана при экспериментальном остеопорозе / О.С. Гудырев, A.B. Файтельсон, М.В. Покровский, А.И. Иванов, Т.В. Павлова, Н.Ю. Коклина [и др.] // Курский научно-практический вестник «Человек и его здоровье». —2011. -№ 2. - С. 9-14.

16. Фармакологическая коррекция экспериментального остеопороза резверат-ролом / A.B. Файтельсон, Н.Ю. Коклина, О.С. Гудырев [и др.] // Приволжский научный вестник. - 20П. -№ 2. - С. 97-100.

17. Остеопротективное действие эналаприла, лозартана и резвератрола npif экспериментальном остеопорозе / О.С. Гудырев, A.B. Файтельсон, М.В. Покровский, А.И. Иванов, Н.Ю. Коклина [и др.] // Научные ведомости Белгородского государственного университета. Серия: Медицина. Фармация. - 2011. — Л® 22 (117). Выпуск 16/2. - С. 9-15.

18. Влияние резвератрола на моделирование костной ткани в эксперименте // Рецензируемый медицинский научно-практический журнал «Медицинский альманах». - Нижний Новгород - ООО «Ремедиум Приволжье». - март 2012, № 1 (20), С 160-163 (соавт. A.B. Файтельсон, Г.М.Дубровин, О.С.Гудырев, Н.Ю. Коклина, М.В.Покровский, А.В.Иванов).

19. Сравнительная оценка остеопротективиого действия резвератрола и комбинации резвератрола с эналаприлом при лечении экспериментального остеопороза / А.В.Файтельсон, Н.Ю. Коклина, О.С.Гудырев, Г.М.Дубровнн, М.В.Покровский, А.В.Иванов // Журнал «Экспериментальная и клиническая фармакология». - Москва. - Издательство «Фолиум». — 2012. - том 75, № 5, С 35-38.

20. Фармакологическая коррекция экспериментального остеопороза комбинацией резвератрола с лозартаном / Н.Ю. Коклина, А.В.Файтельсон, Д.С.Р. Рад-жкумар, М.В. Покровский // Журнал «Вестник» Волгоградского государственного университета - приложение (Материалы IV Всероссийского научно-практического семинара молодых ученых с международным участием «Современные проблемы медицинской химии. Направленный поиск новых лекарственных средств»). - Волгоград. - Издательство ВОЛГГМУ. - 2012. - С 146-147.

21. Микроциркуляторные изменения в надкостнице и костной ткани у крыс с экспериментальным оетеопорозом / Д.С.Р. Раджкумар, A.B. Файтельсон, Н.Ю. Коклина, М.В. Покровский //Журнал «Вестник» Волгоградского государственного университета - приложение (Материалы IV Всероссийского научно-практического семинара молодых ученых с международным участием «Современные проблемы медицинской химии. Направленный поиск новых лекарст-

венных средств»). •- Волгоград. - Издательство ВОЛГГМУ. - 2012. - С 162-163 (соавт. Д.С.Р. Раджкумар, A.B. Файтельсон, Н.Ю. Коклина, М.В. Покровский).

Патенты

1. Пат. 2369390 Российская Федерация, МПК7 А61К 31/401. Способ коррекции остеопороза и профилактики возникновения остеопоротическнх переломов эналаприлом / Покровский MB., Гудырев О.С., Файтельсон A.B., Коклина Н.Ю. [и др.]; заявитель и патентообладатель Курский гос. мед. ун-т. - № 2008122134/14; заявл. 02.06.2008; опубл. 10.10.2009.

2. Пат. 2369391 Российская Федерация, МПК7 А61К 31/4178. Способ коррекции остеопороза и профилактики возникновения остеопоротическнх переломов ло-зартаном / Покровский М.В., Гудырев О .С., Файтельсон A.B., Коклина Н.Ю. [и др.]; заявитель и патентообладатель Курский гос. мед. ун-т. — № 2008122136/14; заявл. 02.06.2008; опубл. 10.10.2009.

3. Пат. 2437160 Российская Федерация, МПК7 А61К 31/045. Способ коррекции остеопороза и профилактики возникновения остеопоротическнх переломов рез-вератролом в комбинации с эналаприлом / Покровский М.В., Гудырев О.С., Файтельсон A.B. [и др.]; заявитель и патентообладатель Курский гос. мед. ун-т. -№2010114475/14; заявл. 12.04.2010; опубл. 20.12.2011.

4. Пат, 2437161 Российская Федерация, МПК7 А61К 31/045. Способ коррекции остеопороза и профилактики возникновения остеопоротическнх переломов рез-вератролом / Покровский М.В., Гудырев О.С., Файтельсон A.B., Коклина Н.Ю. [и др.]; заявитель и патентообладатель Курский гос. мед. ун-т. - № 2010114473/14; заявл. 12.04.2010; опубл. 20.12.2011.

УСЛОВНЫЕ ОБОЗНАЧЕНИЯ

АГ - артериальная гипертензия

АПФ - ангиотензинпревращающий фермент

АТ- ангиотензин

ГМК - гладкомышечные клетки

Г-Э - гематоксилин-эозин

КЭД - коэффициент эндотелиальной дисфункции

ЛДФ - лазерная допплеровская флоуметрия

Л-0 - ложная операция

ОП - остеопороз

ПЕ - перфузионные единицы

ЭД - эндотелиальная дисфункция

ЭЗВД - эндотелийзависимая вазодилатация

ЭНВД - эндотелийнезависимая вазодилатация

Лицензия ЛР N° 020862 от 30.04.99 г. Сдано в набор 21.01.2013 г. Подписано в печать 23.01.2013 г. Формат 30x42'/8 Бумага офсетная. Гарнитура Times New Rom. Печать офсетная. Усл. печ. л. 1,0. Тираж 100 экз. Заказ № 59А Издательство Курского государственного медицинского университета 305041, г. Курск, ул. К. Маркса, 3.