Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Разработка методов ко- и латексагглютинации для иммунохимической диагностики пневмококковой инфекции

г-

■л

/

од

АПР 1393

РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ МЕДИЦИНСКИХ НАУК

1-

НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИИ ИНСТИТУТ ВАКЦИН И СЫВОРОТОК им. И.И.Мечникова

РАЗРАБОТКА МЕТОДОВ КО- И ЛАТЕКС АГГЛЮТИНАЦИИ--- -.....

ДЛЯ ИММУНОХИМИЧЕСКОИ ДИАГНОСТИКИ ПНЕВМОКОККОВОЙ ИНФЕКЦИИ

14.00.36 - Аллергология и иммунология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

На правах рукописи

АСЕЕВА Вера Георгиевна

Москва, 1993

Работа выполнена в Научно-исследовательском институте вакцин и сывороток им.И.И.Мечникова РАМН.

НАУЧНЫЙ РУКОВОДИТЕЛЬ -

кандидат медицинских наук, старший научный сотрудник Л.Н.ПАДКЖОВ ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ -

доктор медицинских наук, профессор Краснопрошина Л.И. доктор биологических наук Котосова Л.К.

ВЕДУЩЕЕ УЧРВДЕНИЕ -

Институт иммунологии МЗ РФ

Защита состоится "Л<>¿¿¿2^ 1993 г. на заседании специализированного совета (Д 001.38.01) при НИИ вакцин и сывороток им.И.И.Мечникова РАМН по адресу: 103064, г.Москва, пер.Мечникова, д.5а.

Автореферат разослан 1993г.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке НИИ вакцин и сывороток им.И.И.Мечникова РАМН.

Ученый секретарь специализированного совета кандидат медицинских наук

Н.Г.Кудрявцева

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Среди Оронхо-легочных инфекций человека значительную роль играют заболевания, вызываемые пневмококком. В связи с этим остается актуальным вопрос о разработке различных методов лабораторной диагностики, позволяющих выявить возбудитель заболевания. Раннее применение антибиотиков снижает диагностическую значимость бактериологических методов анализа. С другой стороны, серологические методы, основанные на выявлении антител к возбудителю, могут применяться на более поздних стадиях заболевания. Наиболее информативными и эффективными в данном случае представляются методы определения бактериальных антигенов на основе реакций ко- и латексагглютинации. Реакция ко агглютинации позволяет использовать свойство клеток стафилококка сорбировать, благодаря наличию на поверхности протеина А, иммуноглобулины и получать высокоактивные и чувствительные диагностикумы. Применение в качестве носителя клеток стафилококка ограничено тем, что на них можно сорбировать только иммуноглобулины класса е. Преимуществом латексных диагностикумов перед коагглютинационными является возможность использования частиц с заданным размером и физико-химическими характеристиками. Кроме того, использование инертных частиц латекса уменьшает количество неспецифических реакций, связанных со взаимодействием биологических образцов с клетками стафилококка. На частицах латекса можно сорбировать не только иммуноглобулины разных классов, но и антигены белковой и небелковой природы, что значительно расширяет область применения диагностикумов данного вида.

Целью настоящей работы явилась разработка научно-технологических основ приготовления диагностикумов на основе методов ко- и латексагглютинации для определения антигенов

I

пневмококка.

Для достижения поставленной цели были определены следующие задачи:

1. Разработать метод приготовления и изучить свойства коагглютинационных диагностикумов на основе антипневмококковых сывороток различной специфичности для диагностики капсульных и бескапсульных штаммов пневмококка.

2. Разработать метод получения латексных диагностикумов для определения антигенов пневмококка на основе моно- и поливалентных сывороток различной специфичности.

3. Изучить некоторые закономерности сорбции иммуноглобулинов на латексных частицах с различными типами поверхности, используя моноклональные антитела, оптимизировать процесс сенсибилизации латексов путем количественного контроля процесса адсорбции иммуноглобулинов.

Научная новизна работы. В результате проведенных исследований разработан метод изготовления коагглютинационных диагностикумов для идентификации как капсульных, так и бескапсульных штаммов пневмококка.

Разработана оригинальная методика приготовления латексных диагностикумов на основе моно- и поливалентных антипневмококковых сывороток различной специфичности.

Изучены закономерности сорбции моноклональных антител на поверхности полистроловых латексов различных типов. Выявлена зависимость эффективности сорбции антител на латексных частицах от соотношения рН среда и изоэлектрической точки сорбируемых антител. Показано, что контроль сорбции иммуноглобулинов на латексах может быть осуществлен путем измерения электрофоретической подвижности частиц и определения агрегативной устойчивости суспензии при сенсибилизации.

Положения, выносимые на защиту. Способ диагностики

пневмококковой инфекции, основанный на использовании коагглютинационных диагностикумов различной специфичности, позволяющий идентифицировать капсульные и бескапсульные штаммы пневмококка.

Универсальный принцип изготовления и контроля диагностикумов для латексагглютинации, основанный на физико-химических закономерностях взаимодействия иммуноглобулинов с поверхностью латексных частиц.

Практическая значимость работы. Полученные данные легли в основу изготовления коагглютинационных диагностикумов для идентификации пневмококка. На разработанный способ определения антигенов в реакции коагглютинации получено Авторское свидетельство (n 1762242). Оформлен Лабораторный регламент по изготовлению и контролю системы диагностической для определения s.pneumoniae в реакции коагглютинации, утвержденный на Ученом совете НШ ВС им.Мечникова 14.II. 1991. Диагностикумы апробированы при исследовании клинического материала в лаборатории микробиологии и клинической иммунологии НИИ Педиатрии РАМН, в лаборатории эпидемиологии острых менингитов НИИ ЭМ им. Гамалеи. При клинической апробации показана высокая чувствительность и специфичность диагностикумов.

Разработаны научно-технологические основы изготовления диагностикумов на основе полистироловых латексов с различными типами модификации поверхности. Получены латексные диагностикумы, эбладающие специфической активностью по отношению к различным антигенам пневмококка.

Апробация работы. Отдельные фрагменты диссертационной работы Зыли доложены на 2-ой Всесоюзной конференции по актуальным вопросам микробиологии в неинфекционной клинике (Москва, 1988), на сонференции "Современные направления создания медицинских

3

диагностикумов" (Москва, 1990), на 6-ой мевдународной конференции по быстрым методам диагностики в микробиологии и иммунологии (Хельсинки, 1990), на конференции молодых ученых ШШВС им.Мечникова (Москва, 1988). Диссертация апробирована на научной конференции отдела иммунохимической диагностики НИИ ВС им.Мечникова РАМН.

Объем и структура диссертации. Диссертация включает введение, две главы обзора литературы, три главы собственных исследований, заключение, выводы и список литературы. Работа содержит 130 страниц машинописного текста, 15 таблиц и 21 рисунок. Список литературы содержит 100 источников.

СОДЕРЖАНИЕ ДИССЕРТАЦИИ МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Для приготовления антигенных препаратов пневмококка использовали эталонные штаммы пневмококка по К-серотипам из коллекции лаборатории микробиологии условно-патогенных бактерий НИИВС им.Мечникова. Препараты капсульных полисахаридов пневмококка получали методом осаадения ацетоном (Кузнецова Е.М. и соавт, 1985), препараты тейхоевых кислот - методом спиртового осаждения (эогепвеп, непг1сЬзеп, 1984). Препараты микробных клеток получали центрифугированием бульонной культуры пневмококка 83 серотипов.

В работе использовали сыворотки к тейхоевым кислотам пневмококка, моно- и поливалентные сыворотки к капсульным полисахаридам, а также отгп-сывортку, содержащую антитела к капсульным полисахаридам пневмококка всех . серотипов, приготовленные в НИИВС им.И.И.Мечникова. Препараты моноклональных антител к миоглобину человека были получены в НИИОМП (г.Тарту, Эстония). Были использованы продукты, различных клонов гибридом, препараты обозначали в соответствии с исходными клонами клеток. Активность препаратов проверяли методом иммуноферментного анализа. 4

Изоэлектрические точки определяли методом изоэлектрофокусирования.

Очистку иммуноглобулинов антипневмококковых сывороток проводили методом аффинной хроматографии. В качестве носителя использовали гель протеин А-сефароза. Контроль специфической активности полученных в ходе экспериментов иммуноглобулиновых фракций проводили методами ИФА, ракетного иммуноэлектрофореза и перекрестного иммуноэлектрофореза с промежуточным гелем.

Суспензии полистироловых латексов получены в НИИ синтетического каучука (г. С.-Петербург). В работе использовали следующие виды латексов: карбоксилированные .латексы, латексы с метакрилатом цинка и эпоксидированные латексы. Всего в ходе исследования были проанализированы 18 серий латексов. При изучении интенсивности сорбции иммуноглобулинов использовали метод флюорометрии: концентрацию белков определяли по уровню их собственной флюоресценции в растворе после взаимодействия с латексными частицами. Измерение электрофоретической подвижности частиц латекса при сорбции иммуноглобулинов проводили на приборе zetasizer (Malvern, Великобритания). Электрофоретические свойства частиц выражали в значениях с-потенциала. Измерение средних размеров частиц латексной суспензии в процессе сенсибилизации антителами и для контроля уровня специфической реакции проводили на приборе Autosizer (Malvern, Великобритания).

Реакции ко- и латексагглютинации проводили на стеклянной поверхности. Реакцию считали положительной при наличии четко выраженной агглютинации с просветлением фона в течение 1-3 минут при реакции коагглютинации и 5-8 минут при реакции латексагглютинации, если контрольный диагностикум при этом не давал агглютинации. Интенсивность реакции оценивалась визуально по 4-х крестовой шкале.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ОБСУЖДЕНИЕ Получение коагглютинационного даагностикума для идентификации пневмококка. В первом разделе работы проведено определение параметров технологии приготовления и изучены свойства коагглютинационных диагностикумов. Путем подбора оптимального состава буферного раствора и режима ультразвуковой обработки разработан метод приготовления коагглютинационного даагностикума, позволяющий повысть чувствительность метода с 15 раз по сравнению с известным. Данным методом получены диагностикумы на основе ангипневмококковых сывороток различной специфичности: моновалентные к капсульным полисахаридам пневмококка,

поливалентные и диагностикумы на основе ошп-сыворотки, содержащей антитела к полисахаридам пневмококка всех серотипов. В клинических условиях особенно важно использование диагностикумов на основе отп1—сыворотки, обладающих широкой видовой специфичностью, и позволяющих идентифицировать пневмококк независимо от серотипа. Показано, что качество диагностикумов зависит от свойств исходной сыворотки, в первую очередь - от ее специфической активности. Так, чувствительность диагностикумов на основе отпл.-сыворотки в реакциях с клеточными антигенными препаратами пневмококка различных серотипов колебалась от 53 до 100% в зависимости от серии сыворотки,использованной для сенсибилизации. В тех случаях, когда диагностикум на обладал специфической активностью по отношению к какому-либо серотипу пневмококка, дополнительная сенсибилизация готового диагностикума моновалентной сывороткой к данному серотипу позволяла увеличить чувствительность диагностикума. Минимальная концентрация капсульного полисахарида, определяемая с помощью полученного нами диагностикума, составляла от 30 до 230 нг/мл в зависимости от серотипа. (табл.1) Несмотря на неодинаковую чувствительность диагностикума по отношению к 6

различным капсульным антигенам, достигнутая чувствительность является достаточной для клинического анализа.

Таблица I.

Чувствительность коагглютинационного диагностикума в реакциях с полисахаридами пневмококка различных серотипов.

Серотипы пневмококка Чувствительность (нг/мл)

3 170

ЮА 30

I0F 230

23А 170

Специфичность диагностикумов была проверена в реакциях с антигенными препаратами и микробными клетками 20 штаммов стрептококков, 15 штаммами клебсиелл, н.influenzae типа ь (штамм 11/64) и в.pertussis (штамм 305). Некоторые диагностикумы оказались способными к перекрестным реакциям с антигенами данных микроорганизмов. Так, диагносгикум на основе omni-сывортки серии I реагировал Z штаммами клебсиелл, а диагностикум на основе сыворотки серии 2 - с 3 штаммами клебсиелл и I штаммом стрептококка. Б целом можно отметить достаточно высокую специфичность полученных диагностикумов.

Значительное число заболеваний легких вызывается т.н. нетипируемыми штаммами пневмококка, в том числе - бескапсульными

(Krook.Holmberg,1987). В СВЯЗИ С ЭТИМ, ДЛЯ ПОЛНОЙ идентификации пневмококка разработан способ, основанный на одновременном использовании диагностикумов разной специфичности:

1.Против капсульных полисахаридов пневмококка,

2.Против тейхоевых кислот пневмококка,

3.Контрольный диагностикум с неиммунной кроличьей сывороткой.

С помощью данной диагностической системы было

проанализировано 63 штамма пневмококка, выделенных от больных

(таблица 2). 29 штаммов находились в капсульной форме. 25 (86.2%)

из них реагировали с диагностикумом на основе отпл.-сыворотки и 4

(13.8%) - с диагностикумам к тейхоевым кислотам. Из 34

бескапсульных штаммов 10 (29.4%) реагировали с пуловым

диагностикумом и 24 (70.6%) - с диагностикумом к тейхоевым

кислотам. Следовательно, разработанный нами способ идентификации

позволяет определять капсульные и некапсульные штаммы пневмококка.

Таблица 2.

Оценка способа идентификации клинических штаммов пневмококка.

Характеристика Кол-во Кол-во позитивных реакций с диагностикумом

штаммов штаммов пуловый к тейхоевым контрольный сумма

кислотам

Капсульные 29 25 4 0 29

86,2% 13,8% 100%

Бескапсульные 34 10 24 0 34

29,4% 70,6% 100%

Всего 63 35 28 0 63

55,% 44,4% 100%

В ходе исследования был разработан оптимальный способ хранения диагностикумов для коагглютинации. Показано, что хранение диагностикумов в течение года в присутствии формалина в концентрации 0.1% при температуре Ю°С не приводит к потере специфической активности препарата. Полная технологическая схема приготовления и хранения диагностикумов изложена в Лабораторном регламенте, утвержденном Ученом совете НИИВС им.Мечникова.

Клиническая апробация диагностикумов проводилась в

лаборатории клинической иммунологии НИИ Педиатрии РАМН. В реакции

коагглютинации было проверено 38 штаммов пневмококка, выделенных

от детей с воспалительными заболеваниями органов дыхания.

Чувствительность диагностикума соптавляла 100%. Высокая

специфичность коагглютинационного диагностикума была показана при 8

исследовании проб спинно-мозговой жидкости больных гнойным и серозным менингитом различной этиологии, проведенном в лаборатории эпидемиологии острых менингитов НИИ ЭМ им.Гамалеи.

Таким образом, в результате проведенных исследований разработана оригинальная методика приготовления диагностикумов для коагглютинации, позволяющая повысить чувствительность метода. Сочетание определения капсульных и некапсульных антигенов впервые позволило достичь полной идентификации пневмококка не только независимо от серотипа, но и от наличия капсулы у данного микроорганизма.

Научно-технологические основы ■ создания латексных агглютинационных диагностикумов. Для экспериментов использовали полистироловые латексы, отличающиеся типом модификации поверхности: латексы с метакриловой кислотой, с метакрилатом цинка и зпоксидированные латексы. Средний размер частиц с суспензии карбоксюшрованных латексов составлял 680 нм, £-потенциал -74 мВ, для суспензии латексов с метакрилатом цинка эти величины составляли 549 нм и -80 мВ, а для эпоксидированных латексов от 631 до 898 нм и от -61 до -87 мВ в зависимости от серии латексов.

Разработка научно-технологических основ получения диагностикумов была начата с изучения закономерностей взаимодействия иммуноглобулинов с частицами латексов. В связи с тем, что препараты иммуноглобулинов представляют собой, с точки зрения молекулярной биологии, довольно сложную смесь молекул, первый этап исследований проводился в модельной системе с использованием моноклональных антител к миоглобину человека.

Одним из важных факторов, определяющих процесс взаимодействия белков С поверхностью, является рН среды (БЬ:1га1тта,Бизауа.1985). Результаты изучения влияния рН на сорбцию антител на поверхности латекса с метакриловой кислотой представлены на рисунке I.

9

флюоресценция флюоресценция

О 10 20 30 40 ' 50 0 10 20 30 40 50 концентрация бежа (мкг/мл) концентрация белка (мкг/мл)

--рН 7.0 —*-рН 5.5 .....контроль

----рН 6.5 -о-рН 5.0

---рБ 6.0 — 4—рН 4.5

Рисунок I. Изотермы адсорбции иммуноглобулинов на латексах с

метакриловой кислотой при различном рН среды.

Изотермы адсорбции получали путем измерения собственной флюоресценции моноклональных антител, оставшихся в растворе после взаимодействия с частицами латекса. Контрольная прямая представляет собой собственную флюоресценцию иммуноглобулинов. Антитела из клона 4А, имеющие изоэлектрическую точку 5.5 полностью сорбируются на латексах при рН 4,5 при концентрации белка до 20 мкг/мл. При этих значениях концентрации белка интенсивность флюоресценции раствора после взаимодействия с частицами близка к 0. При концентрации 20 мкг/мл белок сорбируется на поверхности частиц в виде мономолекулярного слоя. При дальнейшем увеличении концентрации часть белка остается в ра'створе и интенсивность флюоресценции возрастает. Увеличение рН среды выше 5.5 приводит к

тому, что связывание белка с латексными частицами постепенно уменьшается. Для антител из клона ЗС, имеющих р1 6,9, закономерности сорбции носят другой характер. Полное связывание бежа в концентрациях, соответствующих образованию монослоя на поверхности частиц, происходит при рН 5.5, 6.0, 6.5. При рН 7.0 происходит частичная сорбция белка. Аналогичная зависимость интенсивности сорбции антител от рН среды была получена для латексов с метакрилатом цинка и эпоксидированных латексов.

Одним из важных показателей, позволяющих контролировать процесс сорбции антител на поверхности латексов, является измерение электрофоретической подвижности и,

следовательно, с-потенциала поверхности частиц в процессе сенсибилизации (БМгаЪата et а1., 1990). Закономерности изменения С-потенциала аналогичны для всех изученных типов латексов (рисунок 2). По мере заполнения поверхности частиц молекулами бежа потенциал падает и принимает постоянные значения с момента образования мономолекулярного слоя на поверхности.

концентрация бежа (мкг/мл)

- клон ЗС

--- клон 4А

Рисунок 2. Изменение дзета-потенциала частиц латекса с метакриловой кислотой при сенсибилизации.

При понижении значений с-потенциала латексная суспензия теряет агрегативную устойчивость и в некоторых случаях может наблюдаться самопроизвольная агглютинация суспензии (гвот, 1986 ). Поэтому необходимым этапом работы являлся контроль размеров частиц при добавлении в суспензию иммуноглобулинов в процессе сенсибилизации. Как следует из данных, представленных на рисунке 3, средний размер частиц даже при полном заполнении их поверхности белком возрастает незначительно. Аналогичные данные получены для других типов латексов. Следовательно, использованные суспензии сохраняют агрегативную устойчивость в процессе сенсибилизации, что является важным условием при создании на их основе диагностикумов.

концентрация белка (мкг/мл) —•— клон ЗС —^— клон 4А

Рисунок 3. Изменение средних размеров частиц латекса при

сенсибилизации

На заключительном этапе создания модельной системы была изучена специфическая активность -полученных диагностикумов по отношению к антигену - миоглобину человека. На рисунке 4 представлено изменение средних размеров частиц суспензии после добавления антигена и контрольные кривые роста размеров частиц после механического перемешивания. В течение 15 минут после приготоЁления диагностикума не наблюдается увеличения размероЕ 12

частиц. После перемешивания произошло небольшое увеличение средних размеров частиц. При добавлении в суспензию антигена наблюдался более интенсивный рост средних размеров частиц, что свидетельствует о протекающем в суспензии специфическом взаимодействии частиц диагностикума с молекулами антигена. Аналогичные данные были получены при контроле специфической активности диагностикумов на основе других типов латексов.

время (мин.)

—Л— специфическая реакция (после добавления миоглобина) —.— контроль (после перемешивания)

Рисунок 4. Контроль агглютинации сенсибилизированных частиц

латекса при реакции с антигеном.

Таким образом, полученные нами данные о процессе сорбции моноклональных антител на поверхности полистроловых латексов различных типов позволяют выявить некоторые закономерности взаимодействия иммуноглобулинов с частицами латексов, количественно охарактеризовать процесс сорбции антител, а также проконтролировать агрегативную устойчивость латексной суспензии в процессе сенсибилизации антителами и специфическую активность полученных препаратов.

Получение латексных диагностикумов для идентификации антигенов пневмококка.Закономерности сорбции иммуноглобулинов, изученные в модельных экспериментах, позволили перейти к разработке условий сенсибилизации латексов поликлональными антительными преператами. Характер зависимости интенсивности адсорбции иммуноглобулинов поликлональных ангипневмококковьгх сывороток от рН среды был аналогичен. При рН 6.0-7.0 происходит практически полная адсорбция иммуноглобулинов на поверхности латексов с метакриловой кислотой, метакрилатом цинка.и эпоксидированных латексов. Контроль сорбции антител, согласно полученным ранее данным, проводили путем измерения с-потенциала частиц в процессе сенсибилизации. Специфическая активность диагностикумов на основе латексов с различными типами модификации поверхности отличается. Максимальная активность наблюдалась при использовании эпоксидированното латекса и поэтому данный тип латексов использовался в дальнейшем при изготовлении диагностикумов для идентификации антигенов пневмококка.

При изготовлении латексных диагностикумов на основе поликлональных сывороток важным является применение высокоочищенных препаратов иммуноглобулинов. Использование высокоочищенных антительных препаратов позволяет избежать сорбции на латексных частицах примесей, затрудняющих сорбцию специфических иммуноглобулинов и снижающих стабильность и активность диагностикумов. Особенно важна стадия очистки при изготовлении диагностикумов на основе поливалентных сывороток. Для выделения иммуноглобулиновых фракций из поликлональных сывороток нами применялся метод аффинной хроматографии. Было показано, что специфическая активность исходной поливалентно* сыворотки и латексного диагностикума, полученного на основе иммуноглобулиновой фракции, не отличались. 14

Нами получены латексные диагностикумы на основе антипневмококковых сывороток различной специфичности: моновалентных сывороток против капсульных полисахаридов различных серотипов, против тейхоевых кислот пневмококка, а также на основе поливалентных сывороток. Чувствительность полученных диагностикумов несколько отличалась в зависимости от серии использованного латекса и составляла от 30 до 240 нг/мл по

отношению к различным антигенам пневмококка (таблица 3).

Таблица 3.

Чувствительность латексного диагностикума.

Специфичность диагностикума Антигенный препарат Чувствительность (нг/мл)

к полисахариду г19В капсульный полисахарид т19В 30 - 120

поливалентный капсульные полисахариды т19В, 3, 6В 120 - 240

к тейхоевым кислотам * препарат тейхоевых' кислот 120 - 240

Важным результатом исследования является то, что разработанный нами метод приготовления диагностикумов является универсальным - антитела разного видового происхождения (кроличьи и мышиные), различной специфичности (моно- и поливалентные), различного уровня молекулярной гетерогенности '(моно- и поликлональные) могут быть использованы как основа для приготовления диагностикумов по единому принципу.

выводы

1. Разработана диагностическая система, включающая коагглютинационные диагностикумы различной специфичности, позволяющая достичь полной идентификации как капсульных, так и бескапсульных штаммов пневмококка.

2. В результате исследования физико-химических закономерностей сорбции антител на поверхности латексных частиц разработан универсальный метод приготовления и контроля диагностикумов для реакции латексагглютинации, позволяющий получать диагностикумы на основе антител разного видового происхождения, специфичности и молекулярной гетерогенности. Полученные диагностикумы на основе антипневмококковых сывороток обладали чувствительностью от 30 до 240 нг/мл.

3. На основании изучения закономерностей сорбции моноклональных антител на поверхности полистироловых латексов различных типов установлено, что эффективность сорбции иммуноглобулинов определяется взаимосвязью свойств латексных частиц (значение заряда, наличие функционально активных группировок) и параметров препаратов иммуноглобулинов (изоэлектрические точки молекул бежа, концентрация раствора).

4. Показателем эффективности сорбции иммуноглобулинов на латексных частицах и специфической активности диагностикумов может служить электрофоретическая подвижность частиц латекса и определение агрегативной устойчивости суспензии.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАВДИ

1. "Идентификация пневмококков и клебсиелл методом коагглютинации". Падюков Л.Н., Таранов В.А., Багуро А.П., Асеева В.Г. Актуальные вопросы клинической микробиологии в неинфекционной клинике. Тезисы докладов 2-ой Всесоюзной конференции, Москва, 1988, чЛ, стр.58-59.

2. Особенности гуморального иммунного ответа на пневмококк у детей: определение антител в сыворотке крови, плевральной жидкости и слюне". Уланова М.А., Таточенко В.К., Кулак Ю.В., Катосова Л.К., Падюков Л.Н., Пугачева Н.Л., Асеева В.Г., ЖМЭИ, 1990, N2, стр.55-62.

3. "Закономерности сорбции моноклональных антител на полистироловые латексные частицы". Асеева В.Г., Сухишвили С.А., Ярославов А.А., Падюков Л.Н. В сб. "Современные направления создания медицинских диагностикумов", 1990, Москва, стр. 82

4. "Увеличение чувствительности реакции коагглютинации". Таранов В.А., Жилина И.Л., Асеева В.Г., Ксенофонтова М.К., Батуро

A.П., Падюков Л.Н. В сб. "Современные направления создания медицинских диагностикумов". 1990, стр.129

5. Latex agglutination for the determination of pneumococcal antigen in acute pneumoniae. Асеева В.Г., Пугачева Н.Л., .Таранов

B.А., Батуро А.П., Падюков Л.Н. В сб: "Abstracts of 6th international Congress of Rapid Methods and Automation in Microbiology and immuniiogy". Хельсинки, Финляндия, 1990, стр.76.

6. "Quality control of latex diagnosticum". Асеева В.Г., Падюков Л.Н. В Сб: "Abstracts of 6th International Congress of Rapid Methods and Automation in Microbiology and Immunology."

Хельсинки, Финляндия, 1990, стр.77.

7. "Получение латексных диагностикумов". Асеева В.Г., Падюков Л.Н. В сб. "Современные методы иммунохимической и

17

молекулярнобиологической диагностики", Москва, 1992, стр.103-110

8. "Способ приготовления диагностикума для определения антигенов в реакции коагглютинации" Падюков Л.Н., Таранов В.А., Асеева В.Г., Батуро А.П., Цветкова Н.В., Каверина К.Г.. Колмогорова О.В. Авторское свидетельство N 1762242, 1992.