Автореферат и диссертация по медицине (14.04.01) на тему:Разработка и биофармацевтическая оценка лекарственных форм теноксикама и напроксена противовоспалительного действия для наружного применения

4855244

ЭЛЬ-АЛИ ФАДИ АХМАД

РАЗРАБОТКА И БИОФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА ЛЕКАРСТВЕННЫХ ФОРМ ТЕНОКСИКАМА И НАПРОКСЕНА ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНОГО ДЕЙСТВИЯ ДЛЯ НАРУЖНОГО

ПРИМЕНЕНИЯ

14.04.01 - технология получения лекарств

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

2 9 СЕН 2011

4855244

На правах рукописи

ЭЛЬ-АЛИ ФАДИ АХМАД

РАЗРАБОТКА И БИОФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА ЛЕКАРСТВЕННЫХ ФОРМ ТЕНОКСИКАМА И НАПРОКСЕНА ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНОГО ДЕЙСТВИЯ ДЛЯ НАРУЖНОГО

ПРИМЕНЕНИЯ

14.04.01 — технология получения лекарств

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Казанский государственный медицинский университет»

Научный руководитель: доктор фармацевтических наук,

доцент Насыбуллина Наиля Марсовна

Официальные оппоненты: доктор фармацевтических наук,

профессор Вдовина Галина Петровна,

Управляющая компания «Медисорб Групп», г. Пермь

доктор фармацевтических наук,

доцент Алексеева Ирина Владимировна,

ГБОУ ВПО «Пермская государственная фармацевтическая академия Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации»

Ведущая организация:

ГОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная химико-фармацевтическая академия»

Защита диссертации состоится 18 октября 2011 г. в 13.00 часов на заседании диссертационного совета Д 208.068.01 при ГБОУ ВПО «Пермская государственная фармацевтическая академия Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации» по адресу 614990, г. Пермь, ул. Полевая, 2. Тел./факс (342) 233-55-01.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке при ГБОУ ВПО «Пермская государственная фармацевтическая академия» (г. Пермь, ул. Крупской, 46).

Дата размещения объявления о защите диссертации на сайте ПГФА http://www.pfa.ru « » сентября 2011 г.

Автореферат разослан « » сентября 2011 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат фармацевтических наук,

„¿.'у

доцент '' • И.А. Липатникова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Современные стандарты рассматривают боль, как одну из значимых проблем, имеющую не только медицинское значение, но и крайне неблагоприятные социально-экономические последствия. Лечение боли остается одной из наиболее актуальных и трудных задач медицины на протяжении всей истории человечества. Острая, хроническая боль - ведущий клинический симптом ревматических болезней (РБ), широко распространенных в популяции и встречающихся более, чем у 30% населения земного шара.

Большой прогресс в медицинской практике был достигнут, когда было установлено, что нестероидные противовоспалительные препараты (НГ1ВП) связаны с подавлением активности изофермента циклооксигеназы (ЦОГ-2), регулирующей синтез простагландинов и принимающих участие в развитии воспаления и боли. В последние годы среди НПВП особой популярностью у клиницистов пользуются лекарственные вещества (ЛВ) - производное пропионовой кислоты - (напроксеи) и производное 1,2-бензотиазина - (теноксикам), обладающие большей продолжительностью действия и высокой эффективностью.

На фармацевтическом рынке России представлены лишь лекарственные формы (ЛФ) с напроксеном и теноксикамом для инъекций и внутреннего применения, оказывающих системное воздействие на организм больного. Несмотря на то, что НПВП эффективны, их нельзя назвать «идеальными» препаратами, поскольку они не лишены побочных действий (поражение желудочно-кишечного тракта, почек, сердечно-сосудистой системы и др.).

Создание ЛФ для лечения РБ и заболеваний опорно-двигательного аппарата, обладающих минимальными побочными эффектами - не только проблема фармакологии, но и фармацевтической технологии. Так, нежелательное действие НПВП на организм резко ограничивается, если эти ЛФ применяются локально в виде гелей. Трансдермальное проникновение ЛФ с НПВП позволяет достигнуть терапевтически эффективных концентраций в «тканях-мишенях» и, в отличие, от системного лечения, избежать высоких концентраций ЛВ в плазме крови, а также предотвратить нежелательные реакции НПВП.

Учитывая высокую эффективность местного лечения, вышеизложенное указывает на целесообразность создания ЛФ наружного применения с использованием НПВП на примере напроксена и теноксикама.

Цель работы. Разработать и исследовать ЛФ напроксена и теноксикама для наружного применения.

Для достижения поставленной цели планировалось решить следующие задачи:

- экспериментально и теоретически обосновать состав и разработать технологию гелей напроксена и теноксикама, предназначенных для лечения РБ;

- исследовать физико-химические, реологические, технологические и биофармацевтические свойства разработанных ЛФ - гелей напроксена и теноксикама для наружного применения;

- разработать методики количественного и качественного определения напроксена и теноксикама в субстанциях и ЛФ для наружного применения - гелях и исследовать их стабильность;

- провести биологические исследования по определению безвредности и специфической активности, разработанных ЛФ напроксена и теноксикама для наружного применения;

- разработать и составить нормативную документацию (НД) на гель напроксена и теноксикама.

Научная новизна работы. Физико-химическими и технологическими методами подобраны оптимальные растворители, способствующие увеличению растворимости напроксена и теноксикама и обеспечивающие условия для перехода данных ЛВ из раствора в основу-носитель. Методом ТГ'А определены температурные факторы, оказывающие влияние на стабильность напроксена и теноксикама в субстанциях и их ЛФ.

Биофармацевтическими методами показано, что оптимальным носителем ЛВ, обеспечивающим наибольшую степень высвобождения напроксена и теноксикама из гелей, является гидроксиэтилцеллюлоза.

Реологическими методами исследования выявлено, что эффективная вязкость гелей напроксена и теноксикама зависит от концентрации, природы ЛВ и структу-рообразователя, а также технологии изготовления гелей. При повышении температуры до 50 °С значения эффективной вязкости гелей напроксена и теноксикама остаются неизменными. С увеличением полярности растворителя набухающая способность структурообразователя возрастает.

Методами ВЭЖХ, УФ-спекгрофотометрии и ТСХ разработаны методики идентификации и количественного определения напроксена и теноксикама в субстанциях и его ЛФ для наружного применения.

На основании комплекса проведенных исследований теоретически и экспериментально обоснованы составы и технологии изготовления 5% геля напроксена и 1% геля теноксикама, обладающих противовоспалительной активностью, фармацевтической доступностью, а также стабильностью.

Практическая значимость и внедрение результатов работы:

- результаты проведенных исследований свидетельствуют о наличии противовоспалительных свойств у 5% геля напроксена и 1 % геля теноксикама и являются обоснованием для дальнейшей оценки их эффективности в клинике;

- экспериментально и теоретически разработаны оптимальные составы 5% геля напроксена и 1% геля теноксикама, обладающих противовоспалительной активностью;

- разработан проект ФСП на 5% гель напроксена и проведена апробация лабораторного регламента на ЗАО «Казанская фармацевтическая фабрика», акт внедрения от 22.03.2010 г.);

- разработан проект ФСП на 1% гель теноксикама и проведена апробация лабораторного регламента на ЗАО «Казанская фармацевтическая фабрика», акт внедрения от 25.03.2010 г.);

- результаты исследований используются в учебном процессе ГОУ ВПО «Казанского государственного медицинского университета» и ФГОУ ВПО «Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана», а также ГОУ ВПО «Казанского государственного технологического университета».

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в рамках плана научных исследований Казанского государственного медицинского университета Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации (№ гос. регистрации

01200706870) и в рамках гос. регистрации плановой тематики НИР ЦНИЛ КГМУ (№ гос. регистрации 01200852209) по теме: «Изыскание противовоспалительных и ранозаживляющих лекарственных средств для местного и общего применения», утвержденной приказом Минздравсоцразвития России от 20.05.2009 № 257.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены и обсуждены на ХШ-й, XIV-й и XV-й Всероссийской научно-практической конференции «Молодые ученые в медицине» (Казань, 2008-2010 гг.); на XVI-м Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2009), на 1-й и 2-й Республиканской научной конференции «Актуальные вопросы повышения качества последипломной подготовки фармацевтических кадров» (Казань, 2009-2010 гг.); на 2-й Региональной научно-практической конференции «Синтез и перспективы использования новых БАС» (Казань, 2009); на научной конференции биохимиков «История и достижение Казанской биохимической школы», (Казань, 2009); на научной конференции Пятигорской государственной фармацевтической академии (Пятигорск 2010).

Конкретное участие автора в получении научных результатов. Все приведенные в диссертации данные получены при личном участии автора, как на этапе постановки задач и разработки методических подходов к их выполнению, так и при наборе первичных фактических данных, статистической обработке и анализе полученных результатов.

Публикации. Основное содержание диссертации представлено в 25 публикациях (4 публикации в изданиях, рекомендуемых ВАК РФ).

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 154 страницах машинописного текста и состоит кз введения, обзора литературы (глава 1), описания материалов и методов исследования (глава 2), изложения собственных результатов (3-5 главы), выводов и приложения. Работа иллюстрирована 38 таблицами и 20 рисунками. Библиографический указатель включает 134 источников, в том числе 94 отечественных и 40 иностранных авторов. Во введении сформулирована актуальность, научная новизна и практическая значимость работы, указаны объем и структура диссертации.

Обзор литературы посвящен изучению ассортимента ЛФ для наружного применения с НПВП. Во второй главе дана характеристика материалов и методов исследования, а также приборов, используемых в работе. Изложены экспериментальные условия разработки методик количественного и качественного определения напроксена и теноксикама в ЛФ для наружного применения. В третьей главе изложены результаты физико-химических, технологических свойств напроксена и структурообразователя, результаты экспериментально-теоретического подбора состава и разработки технологии изготовления 5% геля напроксена, а также результаты изучения стабильности и фармацевтической доступности напроксена в геле. В четвертой главе отражены результаты экспериментального изучения по разработке и исследованию 1% геля теноксикама. Приведены результаты реологических, биофармацевтических исследований, а также результаты по изучению стабильности 1% геля теноксикама. В пятой главе рассмотрены результаты биологических и микробиологических исследований ЛФ для наружного применения - 5% геля напроксена и 1% геля теноксикама.

В приложении представлены документы, подтверждающие внедрение результатов исследования в практику.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Объекты исследования. В экспериментальных исследованиях использовали субстанции и вспомогательные вещества (ВВ), полученные от заводов-изготовителей с соответствующими протоколами анализа по требованиям НД: на-проксен; теноксикам; ацетошггрил; гидроксиэтилцеллюлоза (ГЭЦ); натрий-карбоксиметилцеллюлоза (Ыа-КМЦ), глицерин; димексид; желатин; карбопол 940; кислота ортофосфорная; ксантановая камедь (КК); метанол; полиэтиленглюколь 400 (ПЭГ-400); полисорбат-20; пропиленгликоль (ПГ); триэтаноламин, пропилпа-рабен и метилпарабен; спирт этиловый (этанол); среда Сабуро; фосфатный буфер, вода очищенная;

Методы исследования. Для достижения поставленной цели и решения задач использовали комплекс исследований по определению физико-химических, технологических, реологических, биофармацевтических, микробиологических и фармакологических свойств напроксена и теноксикама, определяющие качественные и количественные показатели, фармацевтическую доступность ЛВ из его ЛФ -гелей, стабильность, микробиологическую чистоту и противовоспалительную активность разработанных ЛФ напроксена и теноксикама для наружного применения.

Физико-химические, технологические и биофармацевтические методы анализа гелей напроксена и теноксикама осуществляли на кафедре фармацевтической технологии ГОУ ВПО «КГМУ». Оценку высвобождения напроксена и теноксикама из гелей осуществляли методами диффузии в агар и равновесного диализа через полупроницаемую мембрану. Реологические показатели гелей напроксена и теноксикама определяли на ротационном вискозиметре «Реотест-2» (Германия) на базе кафедры химии и технологии переработки эластомеров ГОУ ВПО «КГТУ».

Разработку методик определения качественного и количественного анализа напроксена и теноксикама в субстанциях и в гелях осуществляли методами ВЭЖХ, УФ-спектрофотометрии на приборах ЬС-20, БсЫтайш (Япония) и Бресогс! 40 (Германия) на базе лаборатории физико-химического анализа ИОФХ им. А.Е. Арбузова КНЦ РАН. Термогравиметрический анализ (ТГА) напроксена и теноксикама осуществляли на кафедре технологии пластических масс института полимеров ГОУ ВПО «КГТУ».

Биологические методы анализа гелей напроксена и теноксикама проводили на животных на различных моделях в соответствии с Методическими указаниям* по изучению новых нестероидных противовоспалительных препаратов (Москва 2008) на базе кафедры фармакологии и токсикологии ФГОУ ВПО «КГАВМ им Н.Э. Баумана». Оценку микробной чистоты ЛВ и их ЛФ проводили по методике рекомендованной ГФ ХП-го издания (ОФС 42-0067-07) на базе кафедры микробиологии ГОУ ВПО «КГМА».

Анализ стабильности гелей напроксена и теноксикама осуществляли в процессе естественного и ускоренного хранения. Оценку термической и коллоидно? стабильности гелей напроксена и теноксикама проводили на лабораторной центрифуге фирмы "Меиопех" (Польша) в соответствии с ГОСТом 29188.3-91 «Изделия. косметические. Методы определения стабильности эмульсий». Определение показателей качества готовых лекарственных форм осуществляли в соответствии < требованиями ОСТ 91500.05.001.00 "Стандарты качества лекарственных средств Основные положения".

Статистическую обработку всех материалов исследования осуществляли с помощью пакета прикладных программ Excel 2007 с вычислением средней арифметической ошибки, критерия Стьюдента.

Разработка и исследование геля напроксена

Напроксен рекомендован в клинической практике для лечения РБ. При создании ЛФ напроксена для наружного применения одной из задач исследования явилась разработка состава и технологии геля напроксена, для получения которого необходимо: 1) приготовление раствора JIB и 2) приготовление основы - носителя JIB, обеспечивающего легкость, высокую активность при боли и воспалении различной этиологии, нетравматичность нанесения ЛФ, а также равномерность распределения ЛВ на участках кожи и слизистых.

В предварительных экспериментах по выбору оптимальной концентрации напроксена в ЛФ для наружного применения нами было выявлено, что наиболее приемлемой является концентрация 5%.

Известно, что наибольший терапевтический эффект ЛВ проявляет в растворенном состоянии, при введении его в основу геля. Поэтому, интерес представляли исследования по растворимости напроксена в разных растворителях при повышении температуры на стадии нагревания раствора ЛВ.

Методом ТГА исследоьали влияние температур на стабильность напроксена с позиции возможного изменения его структуры в интервале от О °С до 500 °С.

В ходе изучения термоустойчивое™ напроксена показано, что при различных температурах наблюдается потеря массы ЛВ, отличающаяся от первоначальной его массы: так, при температуре 105 °С - 5%-я потеря, при температуре 280 °С - 10%-я потеря массы напроксена и при 305 °С - 50% потеря. При 500 °С наступает 100%-я деструкция напроксена.

В результате данных исследований выявлено, что напроксен проявляет устойчивость в области температур от 0 °С до 280 °С.

Разработка геля напроксена предусматривала подбор растворителя, для введения ЛВ в гель в растворенном состоянии. Поэтому первоначально изучали растворимость напроксена в чистых растворителях, а также в бинарных и тройных смесях, исследуя при этом процесс гелеобразовання.

В качестве гелеобразователей использовались высокомолекулярные соединения (ВМС): карбопол, ГЭЦ. КК и желатин, известные своей способностью образовывать в воде устойчивые гели. Однако напроксен не растворим в воде и при введении его в гель выпадает в осадок.

Поэтому одной из задач получения геля с ЛВ являлся подбор оптимального растворителя, с одной стороны, позволяющий растворить ЛВ, а с другой - улучшить процесс гелеобразовання и создать условия перехода ЛВ из раствора в гель.

Оценка растворимости напроксена в чистых растворителях показала, что напроксен растворим в этиловом спирте (этаноле) и димексиде.

В смеси: димексид - этанол в соотношении (1:2) наблюдается лучшая растворимость напроксена, однако получить качественный гель в таких условиях было затруднительно. В связи с этим возникла необходимость вводить в данную систему растворителей водную фазу, где в качестве растворителей использовали смесь, состоящую из 3-х компонентов: димексид - этанол - вода в разных соотношениях и 4-х компонентов ПЭГ 400 : димексид: вода: этанол (таблица 1). Выбрав смеси растворителей в различных соотношениях, указанных в таблице 1 представ-

ляло интерес оценить процесс набухания ВМС, при одновременном изучении растворимости напроксена в данных системах растворителей.

Таблица 1

Смеси растворителей димексид - этанол - вода и ПЭГ 400 - димексид - вода - этанол в различных пропорциях

№ образца Соотношение растворителей

1 димексид : этанол : вода (1:1:8)

2 димексид : этанол : вода (1:2:7)

3 димексид : этанол : вода (3:3:4)

4 ПЭГ 400 ¡димексид: вода: этанол (1:1:7:1)

При исследовании процесса набухания образцов желатина и КК в данной системе растворителей получались образцы гелей, обладающие низкой степенью набухания, поэтому в дальнейшем, в качестве структурообразователей исследовались ВМС (карбопол 940 и ГЭЦ) в указанных выше системах растворителей.

Кинетика набухания ВМС и кинетика растворимости напроксена в смеси изучаемых растворителей представлены на рисунках 1 и 2.

Е.%

5 Ю 15 20

Рис. 1. Кинетика набухания ВМС в смеси растворителей (димексид- этанол- вода) в про-порциях: (1:1:8>1;(1:2:7)-2;(3:3:4)-4 и в смеси (ПЭГ 400: димексид: вода: этанол) в пропорции (1:1:7:1) -3. По оси абсцисс - время, ч; по оси ординат - степень.

Предварительные исследования по оценке степени набухания ГЭЦ и карбо-пола 940 (рис.1) при одновременном изучении растворимости напроксена (рис. 2) в системе различных растворителей, указанных в таблице 1, показали, что процесс набухания карбопола и ГЭЦ имеет одинаковый характер, но зависит от компонентов и их соотношения в системе растворителей. о. у.

Рис.2. Кинетика растворимости напроксена в смеси растворителей (димексид - этанол -вода) в пропорциях: (1:1:8)- 1; (1:2:7)- 2; (3:3:4)- 4 и в смеси (ПЭГ400: димексид: вода: этанол) в пропорции (1:1:7:1) — 3. По оси абсцисс- время, ч; по оси ординат - степень растворимости напроксена.

Как видно из рис.1 кинетический профиль набухания ВМС (образец 1) в системе координат «степень набухания - время» располагается выше кинетических профилей набухания образцов 2 и 4, соответствующих системе растворителей: ди-мексид-этанол-вода в пропорциях 1:2:7 и 3:3:4 и выше образца 4, соответствующего системе (ПЭГ 400-димексид-вода-этанол) в пропорции (1:1:7:1). При этом степень набухания ВМС при уменьшении соотношения водной фазы в указанных системах уменьшалась в ряду растворителей в пропорциях: 1:1:8 - 1:2:7 - 1:1:7:1 -3:3:4. Напротив, в этом же ряду растворителей одновременно возрастала степень растворимости напроксена, которая достигала максимума в системе растворителей в пропорции (3:3:4). Однако в данной системе растворителей при таком соотношении гелеобразование было затруднено.

Тем самым, было показано, что для получения стабильных гелей с напроксе-ном оптимальным растворителем является смесь, представленная 3-мя растворителями: димексид - этанол - вода в пропорции 1:2:7. Данные результаты позволили выбрать оптимальный растворитель, обеспечивающий с одной стороны - растворимость напроксена, а с другой - набухаемость ВМС. Эти результаты положены в основу разработки состава и технологам получения 5% геля напроксена. Для полного изучения технологических свойств гелей, использовали различные комбинации ВВ, представленные в таблице 2. Все составы 5% гелей напроксена оценивали по критериям: внешний вид, рН, термическая и коллоидная стабильность.

Таблица 2

Составы исследуемых образцов гелей с напроксеном_

№ образца 1 2 3 4 5 6 7 8

Компоненты

Напроксен 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0

Димексид 10.0 10.0 10.0 20 10.0 10.0 14.0 10.0

ПЭГ - 400 - - 20.0 - 30.0 10.0 20.0 30.0

Консерванты 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4

Глицерин - - - - 14.0 _

Желатин - - - - - 2.5

Ксантано-вая камедь - - 1.0 - - - - -

Карбопол 1.0 - - - - 1.0 _

ГЭЦ - 3.0 - 3.0 3.0 - _ 3.0

Спирт этиловый (этанол) 20.0 20.0 - 50.0 - - - 32.0

Эмульгатор 0.2 0.2 - - - _ _

Вода очищенная До 100.0 До 100.0 До 100.0 До 100.0 До 100.0 До 100.0 До 100.0 До 100.0

Как показали исследования по оценке качества гелей напроксена на предмет коллоидной и термической стабильности: состав 4 (на основе ГЭЦ), состав 7 (на основе желатина и глицерина) и состав 8 (на основе ГЭЦ с ПЭГ-400) в течение 3-х

месяцев хранения проявляли нестабильность. При этом образец геля состава 3 оказывался нестабильным в течение 2-х недельного срока хранения и приобретал запах. Образец геля состава 5 в течение срока хранения расслаивался и изменял значения рН, не выдерживая при этом испытания на термическую и коллоидную стабильность.

На основании результатов термической и коллоидной стабильности образцов, приведенных в таблице 2, отбирались составы гелей напроксена на основе карбопола и ГЭЦ (составы 1,2,6), исследованные в дальнейшем на предмет реологических и биофармацевтических свойств и оказывающих влияние на процессы высвобождения ЛВ из гелей и на их потребительские свойства: намазываемость, адгезию, способность выдавливаться из туб.

Для изучения реопараметров выбранных составов гелей напроксена строили кривые кинетики деформации в координатах: скорость сдвига - напряжение сдвига в области изменения градиентов скорости течения от малых к большим и от больших к малым.

Реограмма течения 5% гелей напроксена представлена на рис. 3.

Рис.3 . Реограммы течения 5% гелей напроксена на различных основах.

1 -5% гель напроксена на основе карбопол;

2 -5% гель напроксена на основе ГЭЦ;

6 -5% гель напроксена на основе карбопола и ПЭГ-400.

Как видно из рисунка 3, реологические свойства изучаемых образцов гелей напроксена на разных основах неодинаковы: показатели эффективной вязкости и напряжение сдвига наиболее оптимальны при использовании гелевой основы -ГЭЦ.

Важным критерием проявления фармакологического эффекта ЛВ является их фармацевтическая доступность, показателем которой служит высвобождение ЛВ - напроксена из ЛФ - гелей. Для оценки высвобождения напроксена из 5 "Л гелей использовали метод равновесного диализа через полупроницаемую мембрану. Количество высвободившегося напроксена из гелей определяли методом УФ спектрофотометрии. Отбор проб изучаемых образцов диализата с ЛВ - напроксе-ном осуществляли в течение 48 часов.

i

о

SO loo 2.SÛ JiOD 2SO 500 SSO ЯОО SOt>

Напряжение едемга, Ла.е

Степень высвобождения напроксена из гелей оценивали также с помощью микробиологического метода, основанного на способности исследуемого JIB угнетать рост микроорганизмов на стандартной гест - культуре С. albicans. Учет результатов проводили через 48 - 72 часа.

Средние кинетические профили высвобождения напроксена из 5% гелей на разных основах, определяемые методом равновесного диализа представлены на рис. 4.

Рис. 4. Средние кинетические профили высвобождения напроксена из 5% гелей, где: 1 -5% гель напроксена на основе карбопол;

2 -5% гель напроксена на основе ГЭЦ;

6-5% гель напроксена на основе карбопол и ПЭГ- 400.

Анализ результатов показал, что в течение 48 часов наблюдения процесс высвобождения напроксена из 5% гелей носит пролонгированный характер. Более полно напроксен высвобождается из 5% гелей на основах карбопол с ПЭГ 400 (образец 6) и ГЭЦ (образец 2) в сравнении с основой карбопол (образец 1) и при этом подчиняется уравнению Higuchi, в соответствии с диффузионным механизмом высвобождения J1B. Значения кажущихся коэффициентов диффузии составили для гелей: образца 1 - 0,59 ± 0,09 см2/с; образца 2 - 0,84 ± 0,03 см2/с и для образца 6 -0,77 ± 0,05 см2/с. Это говорит о том, что процесс высвобождения ЛВ из гелей идет с неодинаковой скоростью и зависит от природы ВВ, а также от технологии приготовления гелей. Тем самым, результаты высвобождения напроксена из гелей, определяемые методами равновесного диализа и микробиологическим методом вполне сопоставимы. Проведенный комплекс исследований свидетельствовал в пользу выбора оптимального состава 5% геля на основе ГЭЦ, технологическая схема которого приведена на рис. 5.

1 2 -6

Время, ч

при р<0,05

Рис. 5. Технологическая схема производства 5% геля напроксена (Кх- контроль химический, Кб - контроль биологический, Кт - контроль технологический).

Для количественного и качественного определения содержания напроксена в субстанции и 5% геле с помощью ВЭЖХ и ТСХ разработаны методики анализа. Относительная ошибка определения напроксена (1.07 %) укладывается в пределы погрешности метода хроматографического анализа ± 2 %.

Стабильность наработанных образцов 5% геля напроксена, упакованных в тубы алюминиевые по 30 г оценивали на 5-ти сериях в условиях естественного и ускоренного хранения по параметрам, включенным в ФСП: внешний вид, рН, подлинность, количественное содержание, посторонние примеси и микробная чистота в соответствии с требованиями ОСТа 91500.05.001.00 «Стандарты качества лекарственных средств. Основные положения». Результаты данного исследования представлены в таблице 3.

Таблица 3

Показатели качества 5% геля напроксена

№ показатели Методы определения нормы Соответствие нормам

1 Описание Визуально ГФ XII - го изд. Однородная кремообразная масса, белого цвета, со слабым запахом спирта. Соотв-т

2 Подлинность тех Пятна на хроматограмме раствора испытуемого образца должны соответствовать аналогичным пятнам на хроматограмме раствора стандартного образца. Соотв-т

•у J Вязкость ОФС 42-0038-07 0,34-108 Па • с Соотв-т

4 Масса содержимого упаковки ОСТ 64-492-85 Согласно требованиям ОСТ от 48,5 до 51,5 г. Соотв-т

5 рН водн. извлечения Потенциометрия ГФ ХН-го изд. От 5,5 до 6,5 Соотв-т

6 Размер частиц ГФ ХИ-го изд. Не > бОмкм Соотв-т

7 Родственные примеси тех На хроматограмме раствора испытуемого образца не должно быть дополнительных пятен Соотв-т

8 Микробная чистота ОФС 42-0067-07 не более 100 бактерий и грибов, не более 10 энтеробактерий и других гр(-) в 1,0 г (мл), отсутствие St. aureus и Ps. aeruginosa Соотв-т

9 Количественное определение ВЭЖХ и УФ- спектрофотометр™ Содержание напроксена (в упо-ковке) от 95,0 % до 105,0 % от заявленного содержания. Соотв-т

10 Упаковка По 30 г в алюминиевой тубе с внутренним лаковым покрытием на основе клея БФ-2 и с бушонами из полиэтилена низкого давления. Тубу вместе с инструкцией по применению упаковывают в картонную коробку. Соотв-т

11 Маркировка В соответствии с ФСП Соотв-т

12 Срок годности 2 года Соотв-т

Исследования микробиологической чистоты 5% гелей напроксена проводили в соответствии с требованиями ОФС 42-0067-07 (ГФ XII - го изд.). В результате исследований было показано, что 5% гель напроксена обладает антимикробным действием по отношению к тест-культуре С. albicans и. соответствует требованиям ОФС по разделу «Микробиологическая чистота».

Исследования на стабильность показали, что наработанные серии образцов 5% геля напроксена на основе ГЭЦ по анализируемым показателям соответствовали предъявляемым требованиям НД и позволили установить срок годности -2 года

Разработка и исследование геля теноксикама

В последние годы наряду с препаратами НПВП - производными пропионовой кислоты, заслуживают внимание и JIB производные 1,2 - бензотиазина, отличающиеся высокой эффективностью, избирательностью и наибольшим периодом полувыведения, одним из которых является теноксикам. Разрабатывая технологию и осуществляя выбор оптимального состава геля теноксикама, руководствовались теми же принципами, используемыми нами при разработке 5% геля напроксена.

В предварительных исследованиях на животных по изучению токсичности и специфической активности образцов гелей теноксикама была выбрана концентрация теноксикама 1%, проявляющая противовоспалительную активность в условиях «in vivo».

Для введения теноксикама в ЛФ, необходимо было изучить его растворимость в различных растворителях и с помощью метода ТГА оценить влияние температурного фактора на стабильность субстанции ЛВ в интервале температур от 0 °С до 600 "С. В ходе изучения термоустойчивости теноксикама нами определено, что при возрастании температуры наблюдается различная в процентном соотношении потеря массы ЛВ, отличающаяся от первоначальной его массы. Так, при температуре 215 °С наблюдается 5%-я потеря массы теноксикама. При температуре 230 "С -10%-я потеря массы ЛВ; при 265 °С - 50%-я потеря массы ЛВ, а при 560 °С наступает 100% -я деструкция теноксикама. В ходе данных исследований выявлено, что теноксикам проявляет устойчивость в области температур от 0 °С до 230 °С.

Результаты исследования растворимости теноксикама, проведенные в соответствии с требованиями ГФ XII - го издания показали, что последний не растворим в воде, глицерине, в маслах, ПГ; легко растворим в димексиде, умеренно растворим в ПЭГ 400, мало растворим в этаноле. Исследования по подбору бинарных и тройных смесей свидетельствовали, что теноксикам практически нерастворим в смесях: этанол + ПГ и ПЭГ- 400 + ПГ в соотношении (1:1); очень мало растворим в смесях: ПЭГ-400 + димексид в соотношении (1:1) и ПЭГ- 400 + ПГ + в соотношении (1:1:1).Умеренно растворим в смеси: димексид + ПГ + этанол в соотношении (1:1:1); растворим в смесях: димексид - этанол в соотношении (1:1), ПЭГ- 400 + димексид + этанол в соотношении (1:1:1) и ПЭГ- 400 + ПГ + димексид в соотношении (1:1:1).

При создании геля теноксикама, как и в случае с напроксеном, важно было подобрать оптимальный растворитель, обеспечивающий растворимость ЛВ и условия его перехода из раствора в гель. В качестве гелеобразователей были отобраны карбопол и ГЭЦ. Основываясь на вышеизложенные результаты по разработке геля напроксена, в качестве растворителей (в которых бы теноксикам растворялся и при этом переходил из раствора в гель), нами был апробирован растворитель, представленный смесью: димексид-этанол-вода в соотношении

(1:2:7). При этом было выявлено, что кинетика набухания карбопола и ГЭЦ зависит от соотношения компонентов и, в первую очередь, от массовой доли водной фазы. При увеличении количества воды в упоминаемой выше системе растворителей набухание карбопола и ГЭЦ возрастает, а при увеличении массовой доли органических растворителей увеличивается растворимость теноксикама, но при этом процесс гелеобразования уменьшается. Тем самым, подобран оптимальный состав растворителей, обеспечивающий максимальную растворимость теноксикама и удовлетворительную степень набухания карбопола и ГЭЦ. Полученные результаты положены в основу разработки состава и технологии изготовления геля теноксикама.

В предварительных фармакологических исследованиях на животных по оптимизации концентрации теноксикама в ЛФ для наружного применения - геле нами было выявлено, что наиболее приемлемой является концентрация 1%.

Для выбора оптимального состава геля теноксикама осуществляли подбор ВВ, для чего использовали разные комбинации в различных пропорциях. Составы 1% гелей теноксикама представлены в таблице 4.

Таблица 4

Составы исследуемых 1% гелей с теиоксикамом

№ образца I II III IV V VI VII VIII

Компоненты

Теноксикам 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0

Димексид 10.0 10.0 10.0 10.0 10.0 10.0 10.0 10.0

ПЭГ - 400 - - 10.0 10.0 10.0 10.0 10.0 10.0

Консерванты 0.4 - 0.4 0.4 - - 0.4 0.4

Глицерин - - - - - 15.8 19.0 -

Желатин - - - - - - 2.1 -

КК - - 1.0 - - - - -

Карбопол 1.0 - - - - 1.0 - -

ГЭЦ - 3.0 - 3.0 3.0 - - -

На-КМЦ - - - - - - 3.0

Спирт этиловый 20.0 20.0 - - - - - -

Эмульгатор 0.4 0.4 - - - - - -

Вода очищенная До 100.0 До 100.0 До 100.0 До 100.0 До 100.0 До 100.0 До 100.0 До 100.0

Как видно из таблицы 4, образцы 1% гелей теноксикама I и VI изготовлены на основе карбопола; образец III на основе КК; образцы гелей II, IV, V на основе ГЭЦ; образец VII на желатино-глицериновой основе, а образец VIII на основе Na-КМЦ. Все составы гелей теноксикама оценивались на термическую и коллоидную стабильность, в ходе которой было выявлено, что гели теноксикама составов IV,V,VII и VIII по данному показателю не выдержали испытаний. Наиболее предпочтительными образцами 1% гелей теноксикама, используемые для биофармацевтических и реологических исследований, явились составы I, II, III и VI.

Для каждого образца 1% геля теноксикама, рассчитывали реопараметры, на основании которых строили реограммы течения 1% гелей с различным содержанием ВВ. Реограмма течения 1% геля теноксикама на различных основах представлена на рисунке 6.

Изучение реологических свойств исследуемых гелей теноксикама показало наличие разных значений реологических характеристик: напряжение сдвига, эффективной вязкости в зависимости от скорости сдвига у изучаемых образцов.

При этом наиболее оптимальным составом с реологическими показателями является образец II на основе ГЭЦ. ::: ? - 1

Напряжение сдвига, Па. с Рис.6 . Реограммы течения 1% гелей теноксикама на разных основах. 1-1% гель теноксикам на основе карбопол; И - 1% гель теноксикам на основе ГЭЦ VI - 1% гель теноксикам на основе карбопол и ПЭГ- 400.

Оценку гелевой основы высвобождать JIB - в диализат проводили методом равновесного диализа через полупроницаемую мембрану и методом диффузии в агаровый слой в течение 48 часов времени наблюдения. Результаты по высвобождению теноксикама из гелей, определяемые методом диализа через полупроницаемую мембрану представлены на рисунке 7.

§ а

--I

II

—— VI

при р<0,05

Рис.7. Средние кинетические профили высвобождения теноксикама из 1 % гелей, где: I -1% гель теноксикам на основе карбопола;

II -1% гель теноксикам на основе;

VI -1% гель теноксикам на основе карбопола и ПЭГ-400.

Исследования по оценке высвобождения теноксикама из гелей, осуществляемых методом диффузии в агаровый гель и методом равновесного диализа, показало, что наибольшей степенью высвобождения теноксикама в диализат обладает 1 % гель на основе ГЭЦ (образец И) по сравнению с гелем на основе карбопол (образец I) и ПЭГ 400 (образец VI).

Для полного описания процесса высвобождения теноксикама из 1% гелей использовали уравнение Е^исЫ. Используя уравнение №§исЫ. вычисляли значения кажущихся коэффициентов диффузии. Так, для образцов гелей состава I коэффициент диффузии составил в пределах 0,58 ± 0,08; для образцов состава II - 0,89± 0,03 и для образцов состава VI в пределах 0,79 ± 0,06, что говорит о том, что процесс высвобождения теноксикама из гелей идет с неодинаковой скоростью и зависит от природы ВВ, а также от технологии приготовлении гелей.

Таким образом, высвобождение теноксикама из гелей, определяемое различными методами исследования (методом диффузии в агаровый слой и методом равновесного диализа через мембрану), позволяет сделать вывод, что наибольшая степень высвобождения теноксикама наблюдается из 1% гелей на основе ГЭЦ (образец II) в сравнении с другими образцами гелей.

Проведенный комплекс исследований с использованием различных методов анализа позволил экспериментально и теоретически обосновать состав 1% геля теноксикама и технологию его получения на основе ГЭЙ[. Технологическая схема производства 1% геля теноксикама представлена на рис.8.

УМО 5. Фасовка и упаковка (кб, кх, кг)

Готовая продук-

ВР 1. Подготовка Производства (кб, кх)

ВР 2. Подготовка полупродуктов (кб,кх)

ТП 3. Приготовление основы геля (кб, кх) 4

_ ТП 4. Получение 1% геля теноксикама (кт)

\

ВР 1. ]. Подготовка помещений

ВР 1.2. Подготовка оборудования

ВР 1.3. Подготовка персонала

ВР 1.4. Получение воды очищенной

-> ВР 2.1. Отвешивание ингредиентов

-► ВР 2.2. Отмеривание воды очищенной и растворителей

-> ТП 3,1. Введение консервантов в очищенную воду

ТП 3.3. Введение гелеобразователя в очищенную воду

-6- ТП 3.4. Введение нейтрализующего агента в гель

ТП. 4.1. Растворение напроксена в растворителях

- ТП 4.2. Введение теноксикама в основу

-г> ТП 4.3. Гомогенизация

-> ТП 4.4. Стандартизация

УМО 5.1. Фасовка геля в тубы

УМО 5.2. Маркировка и упаковка

Рис.8. Технологическая схема производства 1% геля теноксикама.

(Кх - контроль химический, Кб - контроль биологический, Кт - контроль технологический)

Наработанные 1% гели теноксикамз ¡¿гряду с предложенной технологией оценивали в соответствии с требованиями проекта ФСП (таблица 5).

Таблица 5

__Показатели качества 1% геля теноксикама

№ показателя Методы определения нормы Соответствие нормам

1 Описание Визуально ГФ XII-го изд. Однородная кремообразная масса, белая, со слабым запахом спирта. Соогв-т

2 Подлинность ГЖХ Времена удерживания основных пиков на хромато-грамме испытуемого раствора должны соответствовать временам удерживания основных пиков на хрома-тограмме раствора стандартного образца теноксикама. Соотв-т

3 Вязкость ОФС 42-0038-07 0,34-108 Па-с Соотв-т

4 Масса содержимого упаковки ОСТ 64-492-85 Согласно требованиям ОСТ от 48,5 до 51,5 г. Соотв-т

.5 рН'водн. извлечения Потенциометрия ГФ ХН-го изд. От 5,5 до 6,5 Соотв-т

б Размер частиц ГФ Х11-го изд. Не > бОмкм Соотв-т

7 Родственные примеси ГЖХ Любой единичной примеси не более 0,2%. Суммы примесей не более 0,5%. Соотв-т

8 Микробная чистота ОФС 42-0067-07 не более 100 бактерий и грибов, не более 10 энтеробактерий и др. гр(-) в 1,0 г (мл), отсутствие St aureus и Ps. aeruginosa Соотв-т

9 Количественное определение ВЭЖХ и УФ-Спектро-фотометрия Содержание напроксена (в упо-ковке) от 95,0 % до 105,0 % от заявленного содержания Соотв-т

10 Упаковка По 30 г в алюминиевой тубе с внутренним лаковым покрытием на основе клея БФ-2 и с бутонами из полиэтилена низкого давления. Тубу вместе с инструкцией по применению упаковывают в картонную коробку. Соотв-т

11 Маркировка В соответствии с ФСП Соотв-т

12 Срок годности 2 года Соотв-т

Для определения подлинности, посторонних примесей, количественного содержания теноксикама в геле разработаны методики анализа с использованием методов УФ-спектрофотометрии, ВЭЖХ и ГЖХ. Посторонние примеси в 1% геле теноксикама оценивали по методике, валидированной по параметру «специфичность», для доказательства которого получены хроматограммы раствора модельной смеси геля теноксикама и стандартов примесей (ШР ЛБ). В области удерживания примесей теноксикама дополнительные пики отсутствуют, при этом пики теноксикама и примесей разделены с Кразл. > 1,5. Нормирование содержания любой посторонней примеси в гелях теноксикама проводили на уровне не более 0,1%, суммарное содержание - не более 0,3 %. Пригодность методики определения содержания теноксикама в гелях подтверждена результатами анализа модельных смесей теноксикама в гелях и установлением критериев: «специфичность», «линейность» и «правильность». Исследования микробиологической чистоты проводили по методике, рекомендованной ГФ XII издания (ОФС 42-0067-07). В результате было выявлено соответствие разработанных 1% гелей теноксикама требованиям ОФС по показателю «Микробиологическая чистота». Изучение стабильности геля теноксикама 1% в тубах алюминиевых с внутренним лаковым покрытием на основе клея БФ-2 и с бушонами из полиэтилена низкого давления позволили установить срок годности - 2 года.

Биологические методы исследования ЛФ напроксена и теноксикама для наружного применения

Экспериментальные исследования по изучению общетоксического и местно-раздражающего действия гелей напроксена и теноксикама выполнены в соответствии с «Руководством но экспериментальному (доклиническому) изучению новых фарма-колопгаеских веществ» (Москва, 2005). В результате проведенных исследований в опытах на жнвотных установлено, что 5% гель напроксена и 1% гель теноксикама, а также гелевые основы: карбопол и ГЭЦ при накожных аппликациях хорошо переносились, не влияли на общее состояние и поведение животных и визуально не вызывали признаков раздражения кожи. На протяжении всего опыта ни в одной из групп животных не было отмечено гибели, при этом на органах животных (легкие, печень, селезенка, почки, желудок), получавших накожно 5% гели напроксена и 1% гели теноксикама, а также основы, в сравнении с контролем патологические изменения не обнаруживались. Эти данные позволяют заключить, что 5% гель напроксена и 1% гель теноксикама не оказывают общетоксического и местно-раздражающего действия.

Изучение специфической активности 5% геля напроксенаи 1% геля теноксикама, а также гелевой основы ГЭЦ проводили на модели формалинового отёка и на модели УФ-эритемы. В качестве препаратов сравнения использовались известные противовоспалительные ЛФ с НПВП в виде гелей - «Долгит» (Германия), «Феброфид» (Польша) и «Вольтарен» (Швейцария). Модель «формалинового отёка воспроизводили введением 0,1 мл 2 % раствора формалина в полость коленного сустава экспериментальных крыс. Гели 5% напроксена и 1% теноксикама наносились на лапу крысы непосредственно после введения раствора формалина. Выраженность воспалительной реакции оценивали онкометрически в динамике через 3, 4 и 5 часов после индукции воспаления по степени уменьшения прироста, отёка лапы по сравнению с контрольной группой.

Результаты влияния 5% гелей напроксена н 1% гелей теноксикама на формалиновый отек показали, что данные ЛФ обладают антнэкссудативным действием. При этом наибольшую специфическую активность проявляли 5% гель напроксена и 1% гель'теноксикама на основе ГЭЦ и по противовоспалительному действию не уступали препаратам сравнения.

На модели УФ-эритемы показано, что наибольшей активностью при профилактическом и лечебном применении обладают 5% гель напроксена на основе ГЭЦ и гель «Вольтарен». Результаты по оценке специфической активности 5% геля напроксена и 1% геля теноксикама прошли экспертизу Локального Этического комитета ГОУ ВПО «КГМУ» (протокол заседания бюро от 18.02.09 г).

Общие выводы

1. На основании комплекса физико-химических, реологических, технологических, биофармацевтических и биологических . исследований теоретически и экспериментально обоснованы составы и технология получения 5% геля напроксена и 1% геля теноксикама, обладающих высокой противовоспалительной активностью, фармацевтической доступностью, стабильностью и оптимальными реологическими показателями, рекомендуемых для лечения ревматических заболеваний.

2. Физико-химическими методами подобран оптимальный состав растворителей, состоящий из димексида, этанола и воды в соотношении (1:2:7), способствующий растворимости напроксена и теноксикама для введения их в гелевую основу. Методом ТГА определены условия, при которых напроксен в интервале температур от 0 °С до 280 °С, а теноксикам в интервале от 0 °С до 220 °С проявляют термоустойчивость. С использованием методов УФ - спектрофотометрии, ВЭЖХ, ГЖХ и ТСХ разработаны методики для определения качественных и количественных показателей, а также стабильности гелей напроксена и теноксикама

3. Технологическими и реологическими методами установлено, что оптимальным носителем, обеспечивающий наибольшее высвобождение напроксена и теноксикама из гелей и их реопараметры (вязкость, напряжение сдвига, тиксотроп-ность) является гидроксиэтилцеллюлоза. Биофармацевтическими исследованиями показано, что высвобождение напроксена и теноксикама из гелей носит пролонгированный характер и зависит от: природы и концентрации структурообразователя, наличия ВВ, а также от технологии изготовления ЛФ. Процесс высвобождения напроксена и теноксикама из гелей описывается уравнением Higuchi, определяющего линейную зависимость количества высвобождаемого ЛВ от времени высвобождения.

4. В опытах на животных по изучению специфической активности на различных моделях выявлено, что 5% гель напроксена и 1% гель теноксикама на основе пидроксиэтилцеллюдозы проявляют высокую противовоспалительную активность. Микробиологическими методами исследования показано, что 5% гель напроксена обладает антимикробным действием по отношению к тест-культуре С. albicans, при этом 1% гель теноксикама не обладает антимикробным действием.

5. На основании разработанных показателей качества подготовлена НД, с использованием которой возможно осуществление контроля 5% геля напроксена и 1% геля теноксикама в процессе производства и хранения. Данные ЛФ отвечают современным требованиям, предъявляемым к качеству и стабильности лекарственных средств, пригодных для промышленного производства.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Эль Али Ф.А. Биофармацевтнческие аспекты создания противовоспалительных лекарственных форм / Ф.А. Эль Али // Тезисы XIV-й Всеросс. научно-практической конференции: «Молодые ученые в медицине», Казань, 25-26 апреля 2007 г. - С.245-246.

2. Эль Али Ф.А., Исследование физико-химических свойств нестероидных противовоспалительных лекарственных форм / Ф.А. Эль Али Î! Тезисы XIV-й Всеросс. научно-практической конференции: «Молодые ученые в медицине», Казань, 2425 апреля 2008 года - С. 188-189.

3. Насыбуллина Н.М. Биофармацевтические аспекты создания наружных лекарственных форм противовоспалительного действия / Н.М. Насыбуллина, Ф.А. Эль Али, P.A. Мустафин, Э.И. Алмакаева и др. // Тез. докл. XVI-ro Росс. нац. конгр.: «Человек и лекарство». - М., 2009. - С.705.

4. Насыбуллина Н.М. Поиск и разработка наружных лекарственных форм противовоспалительного действия / Н.М. Насыбуллина, Ф.А. Эль Али, P.A. Мустафин, Э.И. Алмакаева и др. // Матер. Республ. научно - практ. конференции «Актуальные вопросы повышения качества последипломной подготовки фармацевтических кадров». - Казань, 2009. - С.117-119.

5. Эль Али Ф.А. Технологические аспекты создания лекарственных форм противовоспалительного действия для наружного применения / Ф.А. Эль Али, Н.М. Насыбуллина, Д.Р. Замалдинова // Тезисы XIV-й Всеросс. научно-практической конференции: «Молодые ученые в медицине», Казань, 2009. - С. 153.

6. Насыбуллина Н.М. Биофармацевтическая оценка лекарственных форм НПВП для наружного применения/ Н.М. Насыбуллина, Ф.А. Эль Али, P.A. Мустафин, Э.И. Алмакаева и др.// Матер. П-й Региональной научно-практ. конференции: «Синтез и перспективы использования новых биологически активных соединений» - Казань, 2009. - С.142-144.

7. Насыбуллина Н.М. Микробиологический метод анализа в создании НПВП для наружного применения / Н.М. Насыбуллина, Ф.А. Эль Али, Э.И. Алмакаева и др.// Матер. П-й Региональной научно-пракг. конференции: «Синтез и перспективы использования новых биологически активных соединений» - Казань, 2009.- С 140-141.

8. Эль Али Ф.А. Контроль качества лекарственной формы напроксена наружного применения / Ф.А. Эль Али, Н.М. Насыбуллина, И.А. Салахов // Журнал «Фармация», М„ № 1,- 2009. - С.6-8.

9. Эль Али Ф.А. Определение теноксикама в лекарственной форме для наружного применения / Ф.А. Эль Али, Н.М. Насыбуллина, И.А. Салахов // Журнал «Фармация», М., № 3,- 2009. - С.20-23.

10. Насыбуллина Н.М. Разработка наружных нестероидных противовоспалительных лекарственных форм / Н.М. Насыбуллина, Ф.А. Эль Али, P.A. Мустафин и др.// журнал. РАЕ «Фундаментальные исследования». - М., № 12, 2007. - С. 348-349.

И. Эль Али Ф.А. Микробиологический метод исследования в изучении наружных лекарственных форм с НПВП / Ф.А. Эль Али, А.Т. Хусаинова., Н.М. Насыбуллина // Тезисы XIV-й Всеросс. научно-практической конференции «Молодые ученые в медицине», Казань, 2009. - С.153-154.

12. Эль Али Ф.А. Оценка токсичного действия теноксикама и напроксена в опытах на животных / Ф.А. Эль Али, Н.М. Насыбуллина // Тезисы и научно-практ. конференции: «Становление и достижения биохимической школы Казанского университета», Казань, 12 ноября 2009. - С.150-151.

13. Эль Али Ф.А. Изучение физико-химических свойств напроксена с помощью термогравиметрического метода анализа / Ф.А. Эль Али // Тезисы XV-й Всеросс. научно-практической конференции: «Молодые ученые в медицине», Казань, 2-3 апреля 2010 г.-С.236.

14. Насыбуллина Н.М. Изучение растворимости производных бснзотиазина и процесса набухания гелеобразонателя / Н.М. Насыбуллина, P.A. Мустафин, Ф.А. Эль Али // Журнал «Фармация», М., № 5.- 2010. - С .29-31.

15. Эль Али Ф.А. Разработка метода количественного определения напроксена в лекарственной форме для наружного применения / Ф.А. Эль Али, Н.М. Насыбуллина, И.А. Салахов // Тезисы 44-й Всеросс. научной конференции с международным участием студентов и молодых ученых: «Актуальные проблемы теоретической, экспериментальной, клинической медицины и фармации» Тюмень 2010 -

■ С. 53-54.

16. Эль Али Ф.А. Этапы определения токсичности лекарственных средств 1,2-бензотназина при накожных аппликациях в опытах на животных / Ф.А. Эль Али, P.A. Мустафин // Тезисы научных работ студентов и молодых ученых Всеросс. научно-практической конференции с международным участием, посвященной 1000-летию г. Ярославля 2010 - С. 356-357.

17. Эль Али Ф.А. Создание трансдермальных лекарственных форм производных .1,2 - б'ензотиазина / Ф.А. Эль Али, P.A. Мустафин // Тезисы научных работ студентов и молодых ученых Всеросс. научно-практической конференции с международным участием, посвященной 1000-летию г. Ярославля 2010 - С. 357.

18. Насыбуллина Н.М./ Доклинические исследования в создании лекарственных форм нестероидной структуры,' Н.М. Насыбуллина, Ф.А. Эль Али, P.A. Мустафин, // Журнал «Клиническая фармакология и терапия», материалы второй международной конференции: «Информация о лекарственных средствах - качественному использованию лекарств».- Казань, 15-16 октября 2010. - С.73-74.

19. Насыбуллина Н.М. Доклинические этапы в создании противо-воспалительных лекарственных форм для наружного применения / Н.М. Насыбуллина, Ф.А. Эль Али //Тезисы Республ. научно-практ. конференции: «Актуальные вопросы повышения качества последипломной подготовки фармацевтических кадров».- Казань, 25 марта2010-С. 163-167.

20. Эль Али Ф.А. Оценка структурно-механических свойств лекарственных форм для наружного применения / Ф.А. Эль Али, Н.М. Насыбуллина // Тезисы Республ. научно-практ. конференции: «Актуальные вопросы повышения качества последипломной подготовки фармацевтических кадров». - Казань, 25 марта 2010 -С. 261265.

21. Насыбуллина Н.М. Термогравиметрический анализ производных 1,2-бензотиазина / Н.М. Насыбуллина, Ф.А. Эль Али, P.A. Мустафин, // Тезисы Всеросс. конференции с элементами научной школы для молодежи «Актуальные проблемы органической химии ».- Казань 6-8 октября 2010 г. - С. 155.

22. Насыбуллина Н.М. Создание лекарственных форм для наружного применения препаратов - производных 1,2-бензотиазина / Н.М. Насыбуллина, Ф.А. Эль Али, P.A. Мустафин. // Тезисы сборника научных трудов: «Разработка, исследование и

маркетинг новой фармацевтической продукции». - в.65. - Пятигорск, 2010 - С. 217-218.

23. Насыбуллина Н.М., Использование ВЭЖХ для количественного определения теноксикама в лекарственной форме для наружного применения / Н.М. Насыбуллина, Ф.А. Эль Али, И.А. Салахов // Тезисы сборника научных трудов: «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции». - в.65. -Пятигорск, 2010 - С. 359 - 360.

24. Насыбуллина Н.М. Изучение набухающей способности полимера в геле на-проксена / Н.М. Насыбуллина, Ф.А. Эль Али //Тезисы сборн. матер. Всеросс. конференции с элементами научной школы для молодежи: «Проведение научных исследований в области синтеза, свойств и переработки высокомолекулярных соединений, а также воздействие физических полей на протекание химических реакций». - Казань, 10-12 ноября 2010 г. - С. 71.

25. Насыбуллина Н.М. Аналитические исследования в области создания лекарственных форм производных пропионовой кислоты /Н.М. Насыбуллина, Ф.А. Эль Али //Тезисы сборн. матер. Всеросс. конференции с элементами научной школы для молодежи: «Проведение научных исследований в области синтеза, свойств и переработки высокомолекулярных соединений, а также воздействие физических полей на протекание химических реакций». - Казань, 10-12 ноября 2010 г. - С. 156.

Современные стандарты рассматривают боль, как одну из значимых проблем, имеющую не только медицинское значение, но и крайне неблагоприятные социально-экономические последствия. Лечение боли остается одной из наиболее актуальных и трудных задач медицины на протяжении всей истории человечества. Острая, хроническая боль - ведущий клинический симптом ревматических болезней (РБ), широко распространенных в популяции и встречающиеся более чем у 30% населения земного шара.

Большой прогресс в медицинской практике был достигнут, когда было установлено, что нестероидные противовоспалительные препараты (НПВП) связаны с подавлением активности изофермента циклооксигеназы (ЦОГ-2), регулирующей синтез простагландинов и принимающих участие в развитии воспаления и боли. В последние годы среди НПВП особой популярностью у клиницистов пользуются лекарственные вещества (ЛВ) - производное пропионовой кислоты - (напроксен) и производное 1,2-бензотиазина -(теноксикам), обладающие большей продолжительностью действия и высокой эффективностью [126].

На фармацевтическом рынке России представлены лишь лекарственные формы (ЛФ) с напроксеном и теноксикамом для инъекций и внутреннего применения, оказывающих системное воздействие на организм больного. Несмотря на то, что НПВП эффективны, их нельзя назвать «идеальными» препаратами, поскольку они не лишены побочных действий (поражение желудочно-кишечного тракта, почек, сердечно-сосудистой системы и др.).

Создание ЛФ для лечения РБ и заболеваний опорно-двигательного аппарата, обладающих минимальными побочными эффектами - не только проблема фармакологии, но и фармацевтической технологии. Так, нежелательное действие НПВП на организм резко ограничивается, если эти ЛФ применяются локально в виде гелей. Трансдермальное проникновение ЛФ с НПВП позволяет достигнуть терапевтически эффективных концентраций в «тканях-мишенях» и, в отличие, от системного лечения, избежать высоких 8 концентраций JIB в плазме крови и предотвратить нежелательные реакции наНПВП. т

Учитывая высокую эффективность местного лечения, вышеизложенное указывает на целесообразность создания ЛФ наружного применения с использованием НПВП на примере напроксена и теноксикама.

Цель работы. Разработать и исследовать ЛФ напроксена и теноксикама для наружного применения.

Для достижения поставленной цели планировалось решить следующие задачи:

- экспериментально и теоретически обосновать состав и разработать технологию гелей напроксена и теноксикама, предназначенных для лечения РБ;

- исследовать физико-химические, реологические, технологические и биофармацевтические свойства разработанных ЛФ - гелей напроксена и теноксикама для наружного применения;

- разработать методики количественного и качественного определения напроксена и теноксикама в субстанциях и ЛФ для наружного применения - гелях и исследовать их стабильность;

- провести биологические исследования по определению безвредности и специфической активности разработанных ЛФ напроксена и теноксикама для наружного применения;

- разработать и составить нормативную документацию (НД) на гель напроксена и теноксикама.

Научная новизна работы. Физико-химическими и технологическими методами подобраны оптимальные растворители, способствующие увеличению растворимости напроксена и теноксикама и обеспечивающие условия для перехода данных ЛВ из раствора в основу-носитель. Методом ТГА определены температурные факторы, оказывающие влияние на стабильность напроксена и теноксикама в субстанциях и их ЛФ.

Биофармацевтическими методами показано, что оптимальным носителем ЛВ, обеспечивающим наибольшую степень высвобождения напроксена и те9 ноксикама из гелей, является гидроксиэтилцеллюлоза.

Реологическими методами исследования выявлено, что эффективная вязкость гелей напроксена и теноксикама зависит от концентрации, природы JIB и структурообразователя и технологии изготовления гелей. При повышении температуры до 50 °С значения эффективной вязкости гелей напроксена и теноксикама остаются неизменными. С увеличением полярности растворителя набухающая способность структурообразователя возрастает.

Методами ВЭЖХ, УФ-спектрофотометрии и ТСХ разработаны методики идентификации и количественного определения напроксена и теноксикама в субстанциях и его ЛФ для наружного применения.

На основании комплекса проведенных исследований теоретически и экспериментально обоснованы составы и технологии изготовления 5% геля напроксена и 1% геля теноксикама, обладающих противовоспалительной активностью, фармацевтической доступностью, а также стабильностью.

Практическая значимость и внедрение результатов работы:

- результаты проведенных исследований свидетельствуют о наличии противовоспалительных свойств у 5% геля напроксена и 1 % геля теноксикама и являются обоснованием для дальнейшей оценки их эффективности в клинике;

- экспериментально и теоретически разработаны оптимальные составы 5% геля напроксена и 1% геля теноксикама, обладающих противовоспалительной активностью;

- разработан проект ФСП на 5% гель напроксена и проведена апробация лабораторного регламента на ЗАО «Казанская фармацевтическая фабрика», акт внедрения от 22.03.2010 г.);

- разработан проект ФСП на 1% гель теноксикама и проведена апробация лабораторного регламента на ЗАО «Казанская фармацевтическая фабрика», акт внедрения от 25.03.2010 г.);

- результаты исследований используются в учебном процессе ГОУ ВПО «Казанского государственного медицинского университета» и Ф1ОУ ВПО «Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баую мана», а также ГОУ ВПО «Казанского государственного технологического университета».

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в рамках плана научных исследований Казанского государственного медицинского университета Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации (№,гос. регистрации 01200706870) и в рамках гос. регистрации плановой тематики НИР ЦНИЛ КГМУ (№ гос. регистрации 01200852209) по теме: «Изыскание противовоспалительных и ранозаживляющих лекарственных средств для местного и общего применения», утвержденной приказом Минздравсоцразвития России от 20.05.2009 №257.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены и обсуждены на Х1П-Й, Х1У-Й и ХУ-й Всероссийской научно-практической конференции «Молодые ученые в медицине» (Казань, 2008-2010 г.); на ХУ1-м Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2009), на 1-й и 2-й Республиканской научной конференции «Актуальные вопросы повышения качества последипломной подготовки фармацевтических кадров» (Казань, 20092010 г.); на 2-й Региональной научно-практической конференции «Синтез и перспективы использования новых БАС» (Казань, 2009); на научной конференции биохимиков «История и достижение Казанской биохимической школы», (Казань, 2009); на научной конференции Пятигорской государственной фармацевтической академии (Пятигорск, 2010).

Публикации. Основное содержание диссертации представлено в 25 публикациях (4 публикации в изданиях, рекомендуемых ВАК РФ).

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 154 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы (глава 1), описания материалов и методов исследования (глава 2), изложения собственных результатов (3-5 главы), выводов и приложения. Работа иллюстрирована 38 таблицами и 20 рисунками. Библиографический указатель включает 134 источников, в том числе 94 отечественных и 40 иностранных авторов. Во введении

Общие выводы:

1. На основании комплекса физико-химических, реологических, технологических, биофармацевтических и биологических исследований теоретически и экспериментально обоснованы составы и технология получения 5% геля напроксена и 1% геля теноксикама, обладающих высокой противовоспалительной активностью, наилучшей степенью высвобождения ЛВ стабильностью и оптимальными реологическими показателями, рекомендуемых для лечения ревматических заболеваний.

2. Физико-химическими методами подобран оптимальный состав растворителей, состоящий из димексида, спирта этилового и воды в соотношении (1:2:7), способствующий растворимости напроксена и теноксикама для введения их в основу геля. Методом ТГА определены условия, при которых напрок-сен в интервале температур от 0 °С до 280 °С, а теноксикам в интервале от 0 °С до 220 °С проявляют термоустойчивость. С использованием методов спектро-фотометрии, ВЭЖХ, ГЖХ и ТСХ разработаны методики для определения качественных и количественных показателей, а также стабильности гелей напроксена и теноксикама.

3. Технологическими и реологическими методами установлено, что оптимальным носителем ЛВ, обеспечивающий наибольшее высвобождение напроксена и теноксикама из гелей и их оптимальные реопараметры (вязкость,

139 напряжение сдвига, тиксотропность) является гидроксиэтилцеллюлоза. Биофармацевтическими исследованиями показано, что высвобождение напроксена и теноксикама из гелей носит пролонгированный характер и зависит от: природы и концентрации структурообразователя, наличия ВВ, а также от технологии изготовления ЛФ. Процесс высвобождения напроксена и теноксикама из гелей описывается уравнением Хигучи, определяющего линейную зависимость количества высвобождаемого JIB от времени высвобождения.

4. В опытах на животных по изучению специфической активности на различных моделях выявлено, что 5% гель напроксена и 1% гель теноксикама на основе гидроксиэтилцеллюлозы проявляют высокую противовоспалительную активность. Микробиологическими методами исследования показано, что 5% гель напроксена обладает антимикробным действием по отношению к тест-культуре С. albicans, при этом 1% гель теноксикама не обладает антимикробным действием.

5. На основании разработанных показателей качества подготовлена НД, с использованием которой возможно осуществление контроля 5% геля напроксена и 1% мази теноксикама в процессе производства и хранения. Данные ЛФ отвечают современным требованиям, предъявляемым к качеству и стабильности ЛС, пригодных для промышленного производства.

Заключение

1. Оптимальной лекарственной формой теноксикама для наружного применения является 1 % гель на основе ГЭЦ.

2. 1% гель теноксикама разработанного состава обладает оптимальными технологическими, структурно-механическими и биофармацевтическими характеристиками .

3. Разработанный 1 % гель теноксикама стабилен в течение 2-х лет хранения.

Глава 5. Биологические исследования по оценке токсичности и специфической активности напроксена и теноксикама

В последние годы возросли требования к проведению отдельных этапов создания новых ЛС, и, прежде всего, к стадии доклинических исследований, одним из важнейших разделов которых являются токсикологические исследования. Программа токсикологического изучения предусматривает проведение экспериментов на различных видах лабораторных животных для оценки общетоксического действия новых ЛС и ЛФ. Одним из этапов определения общетоксического действия новых ЛС и ЛФ является изучение их острой и хронической токсичности.

5.1. Изучение общетоксического действия напроксена и теноксикама

Изучение общетоксического действия напроксена и теноксикама проводили на кроликах, мышах и крысах в соответствии с методикой, описанной в главе 2 «Материалы и методы исследования»

5.1.1. Изучение острой токсичности напроксена

Для изучения острой токсичности напроксена использовали животных обоего пола одинакового возраста: 24 белых мышей массой 18-30 г и 24 белых крыс массой 250-300 г. Лабораторных животных делили на четыре группы - 2 опытные и 2 контрольные (по 6 животных в каждой группе). Перед началом эксперимента животных выдерживали в карантине в течение 10 дней. Животные были клинически здоровы, находились в одинаковых условиях содержания и кормления. Суспензию из напроксена в смеси с крахмальной слизью в соотношении 1:2 вводили внутрижелудочно однократно при помощи зонда (шприц

123 с инъекционной иглой с напаянным оловом на конце) в дозах 0,5 мл (или 12500 мг/кг) - белым мышам и 5 мл (или 9100 мг/кг) - белым крысам. Контрольным животным вводили крахмальную слизь без напроксена в тех же объемах.

За животными вели клиническое наблюдение в течение 10 дней. При этом учитывали состояние волосяного покрова, слизистых оболочек, подвижность, отношение к корму, время возникновения и характер интоксикации, ее тяжесть и обратимость, сроки гибели или их выздоровления.

После введения суспензии напроксена через 30 минут у животных наступало угнетённое состояние. Реакция на внешние раздражители (шум, свет, тактильные, болевые и др.) имелись, животные охотно принимали корм. Спустя 2 часа с момента введения напроксена, общее состояние животных постепенно становилось удовлетворительным. Животные были более подвижными и активными, но по сравнению с контрольными группами было выражено явное угнетение.

После суток в течение всего периода наблюдения белые мыши и крысы оставались подвижны, хорошо принимали корм и воду. Волосяной покров животных был удовлетворительно чистым, но отмечалась его матовость. Слизистые оболочки глаз, рта и влагалища были розового цвета. На протяжении опыта, как в контрольных, так и в опытных группах летальных исходов не наблюдалось. В результате изучения острой токсичности напроксена было установлено, что однократное введение максимальных доз суспензии из напроксена в соотношении 1:2 приводило к незначительным нарушениям со стороны общего состояния животных, а именно: резкое угнетение общего состояния наблюдалось спустя 30 минут после введения препарата. Внешние изменения (волосяной покров спустя 1-2 дня становился слегка матовым, что указывает на незначительное влияние препарата на печень). Но смертельных исходов, как в опытных, так и в контрольных группах животных не наблюдалось. К 10-му дню после введения напроксена общее состояние животных нормализовалось, волосяной покров становился чистым, гладким и блестящим. Поскольку дозы JIB 0,5мл и 5 мл являлись максимально вводимыми для мышей и крыс, то большие дозь1 напроксена ввести не удалось. Вследствие этого невозможно было определить ЛД50.

5.1.2. Изучение острой токсичности теноксикама

Для изучения острой токсичности теноксикама были также использованы белые мыши и крысы. На предварительном этапе выяснилось, что при введении указанным выше способом суспензии теноксикама с крахмальной слизью, приготовленной в соотношении 1:2 (12500 мг/кг), погибли все животные. При введении теноксикама в виде суспензии в соотношении 1:10 (1800 мг/кг) погибало около 75% животных, а при введении суспензии теноксикама в соотношении 1:20 (1100 мг/кг) остались живы все мыши и крысы. Определение параметра острой токсичности теноксикама для животных проводили по методу Кербера, описанного в главе 2 «Материалы и методы исследования». Результаты определения острой токсичности теноксикама для мышей и крыс представлены в таблице 32 и 33.