Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Фармакологическая активность, фармакокинетика и биотрансформация трамадола при его сочетании с модификаторами ферментов метаболизма ксенобиотиков и нестероидными противовоспалительными препаратами

РГВ о

- 6 МАЙ 1-7

на правах рукописи

ГОРШКОВ Вадим Корнилиевич

ФАРМАНОЛОГИЧБХЖАЯ ЛКТИВНОСЩ ФАРМАНОКИНЕГИКА И БИОТРАНОФОРМАЦИЯ ТРАМАДШ1Л ПРИ ЕГО СОЧЕТАНИИ С МОДИФИКАТОРАМИ ФЕРМЕНТОВ МЕТАБОЛИЗМА НСЕНОБИОГИНОВ И ННСГГЕРОИДНЫМИ ПРОТИЮВОСПАЛИТЕУГЬНЫМИ ПРЕПАРАТАМИ

14.00.25 - фармакология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Работа выполнена в Винницком государственном медицинском университете им.Н.И.Пирогова Минздрава Украины (ректор - проф. В.М.Мэроз)

Научныэ руководители: кавд- мед. наук Н.А.Станислаачук

доктор мед. наук, проф. А.А.Пентюк

Официальные оппоненты: доктор мед. наук, проф. В.П.Жердев

доюгор мед. наук, проф. М.Э.Каминка

Ведущее учреждение: Московский медицинский стоматологический институт им. Н.А.Семашко Минздрава России

Защита состоится «___»__ 1997 года в_ на заседании

диссертационного совета Д 001.25.01 в НИИ Фармакологии Р/М! (125315, Мэсква, Балтийская ул. 8)

С диссертацией можно ознакомиться в научной части института

Ученый секретарь диссертационного совета,

кадц. мед. наук Е.А.Вальдман

СВЦЬЯ ХАРАК1ЕИХЛИСЛ. РАБОТЫ Актуальвооть проблем!. Трамадол нашел широкое применение в клинической практика, как эффективное средство купирования болевого сиццрома средней тяжести у взрослых и детей (Р.Н.Лебедева, В.В.Ни-кода, 1992; В.А.Шхельсон и соавт., 1994; С.Прегель, 1996). Показана возможность применения трамадола у больных страдающих сакро-люмбальной, травматической, плевральной, воспалительной болью, невралгиями, мигренью. У послеоперационных бальных с полостньми, ортопедическими и травматологическими вмешательствами трамадол обеспечивает хорошее обезболивание в 70-90% случаев (M.D.Vickers, D.Paravicini, 1995; R.Kupers et al., 1995; А.А.КЬрж, Г.С.Орлов, 1996). Трамадол рекомендован ВСВ, в качестве средства лечения синдрома хронической боли у онкологических больных (C.R.Lee et al., 1993). Накоплен положительный опыт применения трамадола в ревматологии (В.И.Маколкин и соавт., 1992; Н.Г.ГУсева и соавт., 1994). Препарат рекомендован для купирования болевого синдрома при остром инфаркте миокарда (В.А.Ракитин и соавт., 1994).

Трамадол - нетипичный анальгетик центрального действия (D.Grace, I.P.Fee, 1995; K.Eggers, I.Povrer, 1995; С.Прегель,1996). Имэя определенное структурное сходство с морфином, трамадол взаимодействует с каппа-, дельта- и мо-опиоиднмли рецепторами, но способен также активировать и центральныэ норадренергическую и серо-тонинергическую системы, подавляя обратный захват нейропередатчи-ков (Е.Frankus et al., 1989; R.B.Raffa et al., 1991; Ч.Репаш, 1992; W.Reimonn, H.H. Hennies, 1994) . Препарат меньше, чем морфин воздействует на дыхательный центр, практически не влияет на системное и легочное кровообращение. Он не оказывает спазмогенного влияния на гладкую мускулатуру желудочно-кишечного и мочевыводяще-го тракта (Н.А.Ссипова и соавт., 1992; Я.Е.Яцкевич и соавт.,

1996) . Толерантность к трамадопу и зависимость от него развиваются очень редко.

Однако, несмотря на эти преимущества, трамадол существенно уступает наркотическим анальгетикам по сипе и длительности аналь-гетического действия (C.R.Lee et al., 1993; P.Dayer et al., 1994), что побуждает к поиску способов повышения его эффективности.

Одним из подходов к оптимизации фармакотерапии трамадагом является его комбинирование с препаратами других фармакологических групп и в том числе с нестерэвдньми грсктавовоспалительными средствами. Мэжду тем механизмы взаимодействия трамадола с другими лекарственными веществами практически не изучены. Не выяснено влияние индукторов и ингибиторов ферментов метаболизирукзцих лекарства на фармакологический эффект чрамадола, в то время как препарат подвергается интенсивно^ метаболизму и, очеввдно, вмешательство в его биотрансформацж> должно существенно изменить фармакологические свойства. При этом следует учесть, что действие иццукторов и ингибиторов носит, как правило, изоэнзимспецифический характер и априори сложно предввдегь характер фармамокинетического взаимодействия трамадола с другими препаратами. Очевидно, только многоуровневое изучение (фармамодинамика, фармакокинетика, биотрансформация) интерференции трамадола с другими лекарственными веществами позволит разработать способы оптимизации лекарственной терапии трамадсяом.

Исследование выполнено в соответствии с ГЬсбкдеетной НИР Винницкого медицинского института СН 15.02.0001.86; N ГЪсрегистра-ции - 01.86.0.33161.

Целью исследования является изучение фармакодинамического и фармакокинетического взаимодействия трамадола с лекарственными веществами - индукторами и ингибиторами микросомальных мэнооксигеназ и нестероидными противовоспалительными препаратами.

Задачи исследования:

1. Исследовать влияние фенобарбитала, рифампицина, циметцдина, ти-амицдифосфата, кетоконазола и нестеровдных противовоспалительных препаратов на анальгетическое действие трамадсша на различных моделях ноцицегпмвной реакции.

2. Сценить эффективность комбинации трамадсша и ортофена у бальных с поражениями суставов.

3. Оценить влияние цимэтидина, тиамивдифосфата и ортофена на фарма-кокинетику трамадсша у крыс.

4. Исследовать кинетику деметилирования' трамадола микросомной фракцией печени крыс и влияние циметидина, та-юминдафосфата, клотримаэола на эту реакцию.

5. Сравнить ингибиторное действие производных тиамина на реакции деметилирования трамадола, диметиланилина и гадроксилирования анютина микросомаыи печени крыс.

Научная аонизиа исследования.

Впервыэ исследована фармакодинамическая и фармаюокинетичес-кая интерференция трамадола с индукторами и ингибиторами микросо-мальных мэнооюсигеназ - рмфампицином, фенобарбиталом, тиамиццифос-фатом, цимзтидином, кетоконазолом и нестеровдными противовоспалительными препаратами - ортофеном, напроксеном, индомэтацином, ацетилсалициловой кислотой, ибупрофеном. Раскрыты некоторые механизмы их взаимодействия как на уровне целостного организма (фарма-кзокинетика), так и на уровне ферментных систем, осуществляющих би-отрансформацио трамадола.

Исследована кинетика деметилирования трамадсша микросомной фракцией печени крыс и обнаружено, что эта реакция катализируется по меньшей мере двумя ферментами с различным сродством к субстрату. Впервые показано, что цимэтццин, тиамиццифосфат, ортофен, нап-

роксен и клотримазол подавляют реакцию деметилирования трамадола микросомами печени крьс. При этом установлено, что циметидин и ти-аминдифосфат преимущественно подавляют активность фермэнта с высоким сродством к субстрату, а клотримазол - активность фермэнта с низким сродством.

Обнаружено, что фосфорилированные производный тиамина инги-бирукя1 активность микросомальных монооксигеназ, причем реакции гвдроксилирования ксенобиотиков оказались более чувствительными к их действию, чем реакции деметилирования. Наибольший ингибиторный потенциал обнаружен у тиаминдифосфата, средний у тиаминмэнофосфата и тиамина, наименьший - у 4-метил-5-бета-оксшмазала.

Создан чувствительный и специфический метод определения трамадола, основанный на экстракции препарата из биологических жидкостей и дальнейшем хроматографическом определении препарата.

Научная и практическая цашюоть работы. Полученньв данные экспериментально обосновывают подходы к оптимизации фармакотерапии трамадолом путем его сочетания с нестероидными противовоспалительными препаратами и веществами - ингибиторами цитохрэма Р-450.

Показано, что назначение ингибиторов микросомальных монооксигеназ - циметццина, кетоконазола и тиамивдифосфата усиливает анальгетический эффект трамадола, причем циметвдин и кетоконазол потенцируют действие трамадола в большей степени, чем тиамивдифос-фат. Цимэтидин и тиаминдифосфат замедляют элиминацию трамадола из плазмы крови и ингибируют демэтилирование трамадола микросомами печени крьс.

Индукторы микросомальных ферментов - ослабляют анальгетическую активность трамадола, причем рифампицин в большей мере влияет на фармакологический эффект трамадола, чем фенобарбитал. В клинике следует учитывать возможность ослабления эффекта трамадола при

комбинировании его с рифампицином, фенобарбиталом или другими индукторами ферментов метаболизма ксенобиотиков.

Сочетание трамадола с ортофеном, индометацином, напроксеном, ацетилсалициловой кислотой, ибупрофеном сопровоядается усилением анальгезирукщего действия трамадола. При этом в зависимости от препарата, избранной модели, срока наблвдения имеют место различные варианты фарлакодинамического взаимодействия - аддитивность, суммация или синергизм. Наиболее значительный антиноцицептивньй эффект получен при сочетании трамадола с напроксеном, ортофеном, индометацином, минимальный - при сочетании трамадола с ибупрофеном. Клинические исследования подтвердили перспективность комбинирования анальгетиков с центральном и периферическим механизмами действия. Мзханизм взаимодействия трамадола и нестероидных противовоспалительных препаратов реализуется как на фармакодинамическом уровне (сложение анальгетических эффектов), так и на фармаиокине-тическэм уровне (замедление элиминации трамадола из крови, торможение деметилирования трамадола микросомальными ферментами).

Разработанный нами метод определения трамадола отличается доступностью, специфичностью и чувствительностью и может быть использован в лечебных учреждениях для контроля за уровнем препарата в биологических жидкостях при проведении фармакотерапии.

Научные хюясяэения, еыгюям^ ш ¡^¿зпутгу

1. Индукторы микросомальных монооксигеназ - фенобарбитал и рифам-пицин ослабляют, а ингибиторы - цимэтццин, кетоконазол и тиа-миндифосфат усиливают анальгетическуво активность трамадола.

2. Комбинирование трамадола с нестеровдными противовоспалительными препаратами сопровождается усилением антиноцицептивного действия препарата, причем максимальный фармакологический эф-

фект возникает 15м комбинировании трамадола с напроксеном или ортофеном.

3. Цимэтидин, тиамиццифосфат и ортофен замедляют элиминацию трамадола из плазмы крови.

4. Реакция дамзтилирования трамадола ыикросамами печени крыс катализируется по меньшей мере двумя ферментами с, соответственно, вькхжим и низким сродством к субстрату. Ингибирукздее действие цимзтидина, тиаминдифосфата, напроксена и ортофена преимущественно направлено на фермент с высоким сродством к субстрату, а клотримазола - на фермент с низким сродством.

5. Среди производных витамина Е^ наиболее вьюоюэй ингибиторной активностью по отношению к микросомальным моноксигеназам печени обладает тиамивдифосфат, а наимэньшей - фрагмент молекулы тиамина - 4-метип-5-бета-окси,гиазал.

Апробация работах: Основнье результаты работы доложены на конференции "Актуальныэ пробшмы медицины" (Винница, 1996), 14 объединенной научно-технической конференции (Винница, 1996), Международной конференции "Клиническая фармакология - 25 лет" (Мхжва, 1997), заседаниях Винницких областных обществ фармакологов и биохимиков (1995, 1996)

Публикации: по теме диссертации опубликовано 6 работ.

Структура и обгьем доооертации: Работа излажена на 190 страницах машинописи, содержит 40 таблиц и 19 рисунков, библиография включает 256 источников. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, 3-х глав собственных исследований, обсуждения и списка литературы.

ООДЕЕЯЙНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы исследования: спытьг проведены на 302 крысах-самцах популяции Вистар с массой тела 145 - 240 г. Во время экспериментов животныз находились на рационе, обеспечивающем поступление оптимальных количеств нутриентов (Ю.М.Островский, 1979).

Индукцию ферментов вызывали внутрибркшинным введением крьсам фенобарбитала в дозе 70 мг/кг, 1 раз в день, в течение 5 дней. Ри-фампицин вводили внутрижвлудочно в дозе 100 мг/кг, 1 раз в день, 5-кратно. Исследования проводили через 48 часов после последнего введения фенобарбитала и через 24 часа после последнего введения рифампицина.

Ингибирование ьюнооксигеназных реакций вызывали введением ци-метидина в дозе 100 мг/кг (внутриявлудочно, 1 раз в день, в течение 5 дней), тиаминдифосфата в дозе 10 мг/кг (внутрибрсшинно, 1 раз в день, в течение 6 дней) и кетоконазола в дозе 50 мг/кг (перораль-но, 1 раз в день, в течение 3 дней). Животных брали в опыт через 2-3 часа после последнего введения ингибиторов, когда их концентрация в тканях максимальна.

Моделями ноцицегтгивной реакции служили: тест электрического и термического раздражения кожи у крыс. Электрическое раздражение воспроизводили в специальной камере, используя аппарат ЭСЛ-2, который генерировал электрические импульсы с частотой 100 гц, длительностью 5 мсек и задержкой 5 мсек. Сценивали минимальную амплитуду импульсов в вольтах, вызывающую ноцицептивную реакцию у крьс, которую регистрировали по вокализации и (или) отдергиванию лап от то-юэпроводящей поверхности дна камеры. В качестве термического раздражители использовали водяную баню с температурой 58° С. Анальгети-ческий эффект оценивали по длительности латентного периода отдергивания хвоста. Формалиновый тест воспроизводили на крысах путем под-

кожного введения в тыльную поверхность задней лапки 0,1 мл 1% раствора формалина. Ноцицептивная реакция оценивалась по длительности латентного периода первой фазы, количеству покачиваний лапки, количеству облизываний или покусываний лапки, длительности вокализации, длительности латентного периода второй фазы и продолжительности второй фазы (Н.МЬе11ег-Асе1:о, А.Сонап, 1991).

Клинические исследования проведены у 11 жэнцин и 10 мужчин в возрасте 32-74 года (14 больных с ревматоидным артритом, 2-е реактивным артритом и 5 - с остеоартрозом) . В первый день обследования больные уе получали никаких анальгетиков, и им проводилась оценка уровня боли по визуальной 100 мм шкале.

Содержание трамадола определяли разработанным нами методом, основанном на реакции трамадола с пара-диметиламинобензальдегццом в среде концентрированной серной кислоты. Кровь для исследования брали через 0,5, 1, 2, 4, 6 и 8 часов после внутрибркшинного введения препарата в дозе 100 мг/кг. Параметры фармакокинетики рассчитывали в рамках двухчастевой модели со всасыванием на основании известных уравнений (В.Н.Соловьев и соавт., 1980; Л.Е.Холодов, В.П.Яковлев, 1985; В.К.Пиотровский, М.Вайс, 1988).

Ижросомную фракцию печени получали известными методами (И.И.Карузина, А.И.Арчаюэв, 1977) . Деметилазную активность в микро-сомной фракции печени определяли по скорости образования формальдегида из трамадола и димзтиланилина, по скорости гидроксилирования анилина в пара-аминофенол (И.И.Карузина, А.И.Арчаков, 1977). Содержание белка определяли микробиуретовьм методом (Г.А.Кочетов, 1980).

Исследования кинетики демзтилирования трамадола выполнены совместно с З.С.Мздвцць и О.Г.Вовк.

Статистическую обработку результатов исследований производили методами биометрии (Е.В.Губпер, 1978, В.Н.Носков, 1990) .

результата ихлкдований и ж обсуждение

Нами оценено влияние индукторов микросомальных монооюсигеназ (фенобарбитал и рифампицин) и ингибиторов этих ферментов (цимети-дин, тиамиццифосфат, квтоконазал) на анальгетическое действие тра-мадола у крыс, которое оценивалось по порогу болевой чувствительности к термическому раздражителю (рис. 1). Предварительное введение крысам фенобарбитала и рифампицина вызывает снижение анальгети-ческого эффекта трамадола. При этом эффект индукторов наиболее отчетливо проявляется между 2 и 4 часом эксперимента. В то же время введение крысам цимэтвдина, тиаминдрфосфата и кетоконазола существенно потенцирует и удлиняет анальгетический эффект трамадола у крыс:. Сходньв по направленности и величине данные получены на модели электрического раздражения.

%

Рис. 1. Влияние индукторов и ингибиторов микросомальных моноок-сигеназ на анальгетический эффект трамадола у крыс.

При сочетании трамадала с нестеровдньали противовоспалительными препаратами наблюдается выраженное фармаюэдинамическое взаимодействие, характер которого (аддитивность, суммация, синергизм) зависит как от вида антифлогистика, сочетающегося с трамадолом, так и от срока наблюдения (табгг. 1). Наиболее выраженное и дли-

Таблица 1

Анальгетический эффект трамадола, нестероидных противовоспалительных препаратов и их сочетаний на модели термического раздражения у крыс (М ± т, средние величины из 5 наблюдений)

I Время после введения трамадола (часы)

Группы животных |--------------------------------

! 1 ! 2 ! 4 6

Трамадол 188±28,5 142+16,0 107+15,6 9513,1

Сртофен 125+3,4 100+2,8 97±4,5 9714,5

Сртофен + трамадол 397±23,1* 275+33,7* 167±6,9* 119+7,7*

Ицдомзтацин 112±4,3 98±6,0 97±4,3 10016,4

Индометацин + трамадол 282139,0* 221+26,2* 196115,8* 157116,0*

Напроксен 166±1б,1 142+5,6 11617,0 9713,0

Напроксен + трамадол 295±12,4* 237+21,1* 190116,3* 176122,7*

Ацетилсалициловая кислота 140+17,8 122+13,9 101+6,4 9014,3

Ацетилсалициловая кислота

+ чрамадол 248+26,2* 244144,1* 196+25,7* 157+21,0*

Ибупрофен 129111,3 113±7,1 9713,0 9716, 6

Ибупрофен + трамадол 220+12,1* 17718,5* 13819,2* 108+5,4*

Примечание: 1. Порог болевой чувствительности до введения препаратов принят за 100%. 2. Знаком "*" обозначены достоверные различия по сравненью с группой "Трамадол".

тельное анальгетическое действие обеспечивается при сочетании трамадала с ортофеном или напроксеном, наименьшее при комбинировании трамадала с ибупрофеном. Те же исследования, проведенные на модели электрического раздражения, выявили аналогичнье закономерности взаимодействия трамадала и штгифлогистиков.

Для оценки центральных и периферических механизмов анальгети-ческпго действия трамадала и нестероадных противовоспалительных препаратов использован формалиновый тест. В основе первой фазы теста лежит непосредственное раздражение болевых рецепторов химическим агентом, а возникновение второй фазы в основном обусловлено асептическим воспалением и выработкой медиаторов воспаления.

Под влиянием трамадала существенно снижается выраженность первой и второй фаз ноцицептивной реакции на формалин (табл. 2). Нестероидныз противовоспалительные препараты менее эффективно влияют на показатели формалинового теста. При совместном введении трамадала и антифлогистиков эффективность анальгезии значительно возрастает, при этом наибольшим эффектом обладает комбинация трамадала с напроксеном. Значительную активность проявляли также сочетания трамадала с ортофеном и иццометацином. Палученныэ данныэ свидетельствуют о наличии у ортофена, индометацина и напроксена как периферических, так и центральных компонентов механизма их действия. У напроксена более, чем у ортофена или ивдомэтацина, выра-жвн центральный компонент. В то же время фармакологическое действие трамадала проявляется только через центральный механизм. Эти данные свидетельствуют о взаимодополняющем действии трамадала и нестероидных противовоспалительных препаратов на ноцицептивную реакцию и о целесообразности комбинирования этих препаратов в клинической практике.

Мы апробировали сочетание трамадала и ортофена у артралоги-

Таблица 2

Влияние трамадала и сочетаний его с ортофеном, индомзтацином и напроксеном на первую и вторую фазы формалинового теста у крыс (М ± хп; п = 5)

I Признаки ноцицепции ¡Вокали- ¡Длительность

Группы |------------------¡зация, I фазы, мин

животных II степени ¡II степени ¡сек I

Первая фаза

Контроль 64,415,8 11, 6±1,5 25,1±7, 5 4,1+0,2

Трамадол 19,2+4,1 2,4±2,1 0 4,5+0,8

Сртофен 49,2±4,3* 4,0±1,7 3,6±2, 1* 5,6±1,7

Сртофен+ Трамадол 3,2±2,1* 0* 0 1,6+1,1*

Иьщометацин 46,8±9,6* 3,6±2,4 1,0+0, 6* 4,6±0,2

Ивдометацин+Трамадол 12,8±3,2 0* 0 3, 6±0,2

Напроксен 36,3±10,9 4,8±0,6 1,4+1, 1* 4,5±0,8

Напроксен+Трамадол 6,2±3,8* 0,8+0,9* 0 3,2±1,3

Вторая фаза

Контроль 56,8+7,1 5,8+0,85 0 14,2+2,8

Трамадол 6,4±1,5 0 0 2, 6±0,4

Сртофен 13,4+4,7 2,2±1,3 0 8,2+2,1*

Сртофен+Трамадол 2,0+2,0* 0 0 0, 6±0,6*

Иьщометацин 16,6±4,2* 0 0 4,2+0,9

Индомэтацин+Трамадол Вторая фаза отсутствует

Напроксен 19,5+1,9* 2,4+0,85 0 9,0±2,4*

Напроксен+ Трамадол Вторая фаза отсутствует

Примечание: Знаком "*" обозначены достоверныз различия по сравнению с группой "Трамадол".

ческмх больных со стойким болевым синдромом (14 бальных с ревматоидным артритом, 2-е реактивным артритом и 5 - с распространенным остеоартрозом). Внутримышечное введение трамадола оказывает более сильное и длительное обезболивающее действие чем ортофен (рис. 2) . Максимально по величине и длительности обезболивающий эффект достигался при сочетании ортофена с трамадолом. Так, в сравнении с введением одного трамадола, длительность обезболивания при комбинировании трамадола с ортофеном возрастала в 1,3 раза, а в сравнении с введением одного ортофена - в 2 раза.

Эти даннью указывают на существенную фармакодинамическую ин-

Время, часы

Рис. 2. Динамика болевого синдрома у больных с заболеваниями суставов после введения ортофена (кривая 1), тр>амадола (кривая 2) и их сочетания (кривая 3)

терференции мзжду трамадолом и нестероидными противовоспалительным препаратами. Одинаковая (анальгетическая) направленность фармакюло гического эффекта, но разные механизмы ее реализации (центральный ; трамадола и преимущественно периферический у антифдагистиков) обес печивают максимальное обезболивание при сочетании этих препаратов Однако, не исклкнено, что одной из причин влияния нестероидных про тивовоспалительных препаратов на фармакологический эффект трамадо ла, является взаимодействие меяду ними на уровне фармакокинетики Что же касается иццукторов и ингибиторов монооксигеназ, которыэ н проявляют собственного анальгетического действия, то здесь можн предполагать только фармакокинета1ческиэ механизмы интерференции.

Для изучения фармакхжинетики был разработан метод определени трамадсла, основанный на экстракции препарата из биологических жид костей даэтиловым эфирюм, очистке экстракта методом тонкослойно; хроматографии с последующим определении по реакции с 0,5% раство ром тр»-диметашаминобенэальдегвда в концентрированной серной кис лоте. Трамадол очищали от примесей методом тонкослойной хроматогра фии на пластинах "Силуфся", используя систему растворителей гек сан-метанол-дизтиламин (8:1:0,5 по объему). Мзтод характеризуете вьпокой воспроизводимостью (коэффициент вариации 3,48%), чувствительностью (определяемый минимум менее 1 мкг) и достаточно высокой специфичностью (диклофенак натрия, мефенамовая кислота, циметидин, делагил, аспирин, эуфилпин не дают реакцию с 0,5% раствором па-ра-диштиламинобензальдегада в концентрированной серной кислоте, а напроксен я иццометацин хотя и способны взаимодействовать с этим реактивом, но легко отделяются от трамадола при хроматографии).

С помощью разработанного нами ьлэтода мы оценили динамику концентрации трамадола в плазме крови крыс (табл. 3). После внут-рибркшинного введения 100 мг/кг трамадола уже через 1 час достига-

Таблица 3

Влияние цимзтидина, тиаминдифосфата и ортофена на динамику концентрации трамадала в плазме крови крыс (п= 4, М ± т)

Время взятия пробы, часы Группы животных

Трамадсл Трамадол + Циметвдин Трамадол+Ти-аминпифосфат Трамадсш + Сртофен

Концентрация трамадола в плазме крови, мкг/мл

0,5 6,8 ± 0,45 6,8 ± 0, 64 7,0 + 0,50 9,0 ± 0,98

1,0 7,3 ± 0,44 7,8 ± 0,84 8,5 ± 0,47 11,4 ± 0,42*

2,0 5,6 + 0,33 6,6 ± 0,36 8,6 ± 0,42* 10,7 ± 0,78*

4,0 4,2 ± 0,33 5,2 ± 0,28* 7,0 + 0,48* 9,9 ± 0,92*

6,0 2,9 ± 0,20 4,3 ± 0,30* 5,0 ± 0,42* 9,0 ± 0,70*

8,0 2,2 ± 0,22 3,6 ± 0,28* 4,4 ± 0,39* 7,6 ± 0,56*

Примечание: знаком обозначены достоверна различия по отношению к группе "Контроль"

ется максимальная концентрация препарата в крови, после чего, начиная со 2-го часа, уровень трамадола постепенно снижается. Вычисления параметров фармаюэкинетики трамадола у контрольных животных показали, что максимальная концентрация трамадола в плазма крови крыс составляет 7,38 мкг/мл и достигается в среднем за 68,8 минут. Период полувсасыванил трамадола из бркшной полости составляет 19,3 минута, а кинетический объем распределения - 746,5 мл. Площадь под фармаюокинетической кривой - 2798 мкг. мин/мл, период полувыведения - 268 минут, ойций клиренс - 2,14 мл/мин, а среднее время удержания препарата в плазма крови - 134,7 минут.

Оказалось, что введение крысам циметццина, тиаминдифосфата и ортофена замедляет выведение трамадола из плазмы крови животных.

Наибольшие по масштабам изменения возникают в бета-фазе фарлако-кинетической кривой. Рассчеты параметров фармакокинетики показали что циметццин, тгиаминдифосфат и ортофен практически не влияют на процессы всасывания трамадсота из бркшной полости и распределение препарата в организма, но сильно изменяют параметры, отражающие элиминацию трамадола - константу и полупериод элиминации, клиренс препарата, площадь под фармакокинетической кривой, среднее время удержания трамадола в крови. Особенно сильное действие оказывает ортофен - под его влиянием ппссцадь под фармакокинетической кривой увеличивается в 4,3 раза, а период полуэлиминации - в 2,35 раза.

Способность циметидина, тиаминдифосфата и ортофена замэдлят процессы элиминации трамадола очевидно связана с их вмешательстве в биотрансформацию препарата. Нами было исследовано влияние этих других веществ на реакцию деметилирования трамадола микросомнс фракцией печени крьс. Эта реакция является ведущей в цепи штаболг; ческих превр>ащений трамадола в организме.

Вначале была исследована зависимость скорости деметилирования трамадола от количества субстрата. Оказалось, что монооксигеназнь комплекс печени крыс достаточно активно деметилирует трамадсл и де же при его низких концентрациях субстрата регистрируются значится ль ные скорости реакции. При концентрации трамадола 8,53 ьМ достигает ся почти полное насыщение субстратом. Однако, кривая Михаелиса-Мз1-тена в координатах Лайнуивера-Верка не спрямляется и на получение графике регистрируются два участка с различным углом наклона к ос абсцисс. Подобная ситуация возможна при наличия двух ферментов де метилирукзцих трамадол с различным сродством к субстрату. Поэте му для определения параметров деметилирования трамадола нами бьд использована известная математическая модель на основе системы ч< тырех уравнений. Введение экспериментальних данных в модель, прк

дусматриваюцую существование двух ферментов, дает кривую, на которую хорошо накладываются экспериментальные точки (рис. 3).

Прибавление циметидина, ортофена и напроксена в среду инкубации вызывает ингибирование демвтилирования трамадола за счет более сильного подавления фермента с высоким сродством к субстрату и менее значимого ингибирования фермента с низким сродством к субстрату (табл. 4) . При этом цимзтидин и ортофен ингибируют фермент с вьоэ-ким сродством в основном по неконкурентно:^/ типу, о чем свидетель-

V (зкст/5 мин)

Концентрация субстрата, мМ

Рис. Кинетика демэтилирования трамадола микросомами печени крыс, (прямье координаты). Мэдель катализа двумя фермзнтами. Кривая 1 и 2 отражают кинетику демэтилирования трамадола фермзнтами с высоким и низким сродством к субстрату, соответственно. Кривая 3 - суммарная скорость деметипирования трамадола.

Таблица 4

Ккнетические парамэгры деметилирования трамадола микросомной фракцией печени крыс в присутствии цимзтидина, тиамиццифосфата, ортофена, напроксена и клотриьлазола

! Фермент с высоким I Фермент с низким ¡сродством к субстрату | сродством к субстрату

Ингибитор I Кт1,пМ ! \taaxl ! Мп2,пМ | -------------ь-------к----------^----------(----------

'Без ингибитора ! 0,035 I 0,040 0, 640 0,112

¡Циметцдин ! 0,037 I 0,016 1, 083 0,106

¡Сртофен ! 0,035 | 0,011 1, 100 0,090

1 Напроксен 1 0,070 ! 0,009 0, 720 0,048

! Тиаминдафосфат ! 0,200 1 0,002 1, 450 0,105

! Клотримазол I 0,074 ! 0,042 1, 340 0,030

ствует значительное снижение Утах1 и незначительное измэнение Кт1 Напроксен, тиаминдифосфат и клотримазол одновременно увеличиваю константу Михаелиса и снижают максимальную скорость реакции - т есть действуют как смэшаннш - конкурентно - неконкурентные иигибк торы этого фермента. Что касается фермента с низким сродством субстрату то циметедин, ггиаминдифосфат и ортофен проявляют свойств преимущественно конкурентного ингибитора, так как мало снижают мак симапьную скорость реакции, но увеличивают константу Михаелиса Напроксен проявлял преимущественно свойства неконкурентного ингиби тора, так как почти не изменяет константу Михаелиса, но снижае максимальную скорость реакции. Клотримазол проявляет свойства инте

битора смешанного типа.

Экспериментально определенные константы ингибирования оОцей скорости деметилирования трамадола двумя ферментами для циметидина составили 40,05 мкМ, ортофена - 16,11 мкМ, тиамиццифосфата - 24,1 мкМ, клотримазола - 20,6 мкМ.

При сравнении способности производных тиамина ингибировать мэнооксигеназныэ реакции, катализируемж ферментативным комплексом микросом печени крис, обнаружилось зависимое от концентрации подавление реакции демэтилирования трамадола (табл. 5). При этом фрагмент молекулы тиамина - 4-метил-5-бета-окситиазол оказался весьма слабым ингибитором реакции демзтилирования трамадола. Несколько больший эффект оказывает тиаминбромид, однако фосфорилиро-

Таблица 5

Влияние производных тиамина на реакцию деметилирования трамадола микросомами печени крыз (в % к исходной активности, п= 4, Htm)

1 Производима тиамина J Концентрация, мкМ

1 + ■ 1 1 < 1 13,8 __ 138 L _ __ 1380

!Контроль (исходная 1 --— 1

¡активность) ! 1 1 100+3, 3 100±3,3 100+3, з ;

1 * !4-метил-5-бета-окситиазол| 98, 6±2, 8 94,4±1,9 80,2±3, 7*1

! Тиаминбромид ! 97,8±2, 0 92,5+1,8* 47,9+3, 3*1

1Тиаминмонофосфат ! 95,3+0, 6 81,0±3,3* 31,8+3, g* 1

1 Тиамиццифосфат ! 84,2±3, 3* 43,0±2,7* 6,9 +1, 8*!

ванныэ производима тиамина - тиаминмэнофосфат и особенно юофер-мэнтная форма витамина В! - тиамиццифосфат сильно подавляют эту реакцию. Так, тиамиццифосфат вызывал достоверное ингибирование тримадолдемэтилазной активности микросом печени уже в минимальной концентрации - 13,8 мкМ, которая сопоставима с содержанием тиамина в органах.

Производныэ тиамина способны ингибировать и другие реакции, катализируемые мэнооксигеназным комплексом микросом печени крьп -реакцию деметилирования М-димэтиланилина и реакцию гидроксилирова-ния анилина. Как и в случае трамадола, степень тораложения проявляла зависимость от концентрации ингибитора. Однако, реакция деметилирования Ы-диметиланилина била бситве устойчивой к действию производных тиамина, чем реакция демзтилирования трамадола. Так, например, тиамиццифосфат в концентрации 138 мкМ снижал скорость деметилирования трамадола до 43,0±2,7% от исходной, а деметилирования деметипанилина только до 64,0+3,5%. Реакция гидрокпилирова-ния анилина оказалась более чувствительной к действию производных тиамина, чем реакция деметилирования диметиланилина или трамадола. Так, в концентрации 138 мкМ тиамиццифосфат тормозил скорость гид-роксилирование анилина до 24,4±2, 6% от исходной. Наибольшей способностью ингибировать реакции деметилирования И-диметиланилина и гидрокпилирования анилина обладал тиамиццифосфат, затем в порядке убывания следовали тиаминмонофосфат, тиаминбромид и 4-мэтил-5-бе-та-оксиггиазол.

Таким образом, проведенные исследования показали, что индукторы микросомальных ферментов фенобарбитал и рифампицин ослабляют анальгетическую активность трамадола, а ингибиторы - циметидин, кетоконазсш и тиамиццифосфат усиливают ее. Потенцируицее действие циметидина и тиамиццифосфата совпадает с их способностью замэдлять

элиминацию трамадола из плазмы крови. Взаимодействие трамадола и нестероидных противовоспалительных препаратов реализуется как на фармакодинамическом уровне (сложение эффектов), так и на уровне фармакокинетики (замедление элиминации трамадола из крови, торможение деьетилирования трамадола микросомальными ферментами).

Грамадоп интенсивно д^мотч тируется микросомальной фракцией печени крыс, и в этой реакции принимают участие 2 фермента - соответственно с высоким и низким сродством к трамадслу- Сртофен, нап-роксен, цимэтидин, тиаминдифосфат и клотримазол в концентрациях, которые могут создаваться в тканях и биологических жидкостях организма в процессе фармакотерапии, существенно угнетают деметуширование трамадола. Ингибируюцее действие ортофена, налроксена, циме-тидина и тиами здифосфата преимущественно направлено на ферлент с высоким сродством к субстрату, а клотримазола - на фермент с низким сродством. Среди производных тиамина наибольшим ингибиторам потенциалом обладает тиаминдифосфат, наименьшим - 4-мэтил-5-бе-та-оюситиазол.

Полученные данныэ расширяют представления о взаимодействии трамадола с препаратами других фармакологических групп и создают условия для повышения эффективности и безопасности фармакотерапии этим препаратом в клинике.

ВЫВОДЫ

1. Индукторы микросомапьных мэнооксигеназ ослабляют анальгети-ческую активность трамадола, причем рифампицин в большей сте пени влияет на эффект трамадола, чем фенобарбитал.

2. Ингибиторы микросомапьных мэнооксигеназ (циметадин, кетокона зол и тиаминдифосфат) усиливают анальгетический эффект трама дола, причем циметидин и кетоконазол потенцируют действие пре парата в большей степени, чем тиамивдифосфат.

3. Комбинирование трамадола с нестероидными противовоспалительны ми препаратами сопровождается повышением анальгетического эф фекта, причем максимальное усиление наблкэдается при сочетали трамадола с напроксеном или ортофеном.

4. Цимэтидин, тиамигщифосфат и ортофен замедляют элиминацию тра мадола из плазмы крови крыс.

5. Реакция деметилирования трамадола микросомами печени крьк ка тализируется по ьлзньшей мзре двумя ферментами - с высоким ! низким сродством к субстрату.

6. Циметидин, тиамивдифосфат, ютэтримазол, напроксен и ортофе: ингибируюг реакцию деметилирования трамадола микросомами пече ни криз по смешанному типу. При этом ингибируюцее действие ор тофена, напроксена, циметадина и тиаминцифосфата преимущест венно направлено на фермент с высоким сродством к субстрату, клотримазола - на фермент с низким сродством.

7. Среди производных витамина В1 наиболее высокой ингибитор! юй активностью по отношению к микросомальным мэноксигеназам пече ни обладает тиаминдифосфат, а наименьшей - фрагмент молекул тиамина - 4-мэтил-5-бета-окситиазал.

8. Создан чувствительный метод определения трамадола в биологи ческих жидкостях, основанный на хроматографической очиетк трамадола и цветной реакции с пара-диметиламинобензальдегицом

СПИЭСК РАБОТ, СПУБЛИШВАНЖК Ш ТЕЖ ДЖХЕРТАЦИИ

1. Клиническое и экспериментальное обоснование целесообразности комбинирования трамала с циметидином в анестезиогюгичесюой практикв//Тезисы научно-практической конференции "Актуальныэ проблемы медицины". -Винница. - 1996. - С. 154-155. (вместе Н.А.Станиславчуком).

2. Влияние производных тиамина и рибофлавина на активность ферментов метаболизма ксенобиотиков и фармакологический эффект анальгетиков // Вопросы мэд. химии. - 1995, N 5. -С.42 -45 (вместе с Н.А.Оганиславчуком, A.A. Пентююом, Н.А.Пешюк)

3. Фармакокинетическое и фармаюодинамическое взаимодействие наркотического анальгетика трамала с противовоспалительном препаратом ортсфеном//Штериалы 14 объединенной научно-технической конференции. Ккев - Винница- 1996.- 50-51. (вшсте с Н.А.Оганиславчуком и A.A. Пентажом)

4. Анальгетический эффект ортофена и его сочетания с трамалом у больных с суставным синдромом //Материалы, мэждународной конференции "Клиническая фармакология - 25 лет". М.: 1997,- С. 77-78. (вместе с Н.А.Станиславчуком)

5. Антиноцицепташный эффект трамала в условиях его комбинирования с нестероидными противовоспалительными препаратами// Экспериментальная и клиническая фармакология. -1997. -№ -С. (вместе с Н.А.Станиславчуком, А.А.Пениоком, О.Г.Вовк, Е.И.Ос-тапчук)

6. Активность деметилазы в условиях ингибирования циьвзтвдином, ор-тофеном и тиаминщфэсфатом// Укр. биохим. журнал.- 1997 (принята к печати) (вместе с Н.А.Станиславчуком, А. А. Пентююом, З.С.Мадввдь)