Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Фармакокинетика и фармакогическая активность напроксена в условиях модификации его биотрансформации, всасывания и почечной экскреции

РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ МЕДИЦИНСКИХ НАУК НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ФАРМАКОЛОГИИ

на правах рукописи

РГБ ОД

. ? >Е8 1996

ВОВК ОЛЬГА ГРИГОРЬЕВНА

ФАРМАКОКИНЕТИКА И ФАРМАКОЛОГИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ НАПРОКСЕНА В УСЛОВИЯХ МОДИФИКАЦИИ ЕГО БИОТРАНСФОРМАЦИИ, ВСАСЫВАНИЯ И ПОЧЕЧНОЙ ЭКСКРЕЦИИ

14.00.25 - фармакология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва - 1996

Работа выполнена в Винницком государственном медицинском унив ситете им.Н.И.Пирогова Минздрава Украины (ректор - проф. В.М.Мор<

Научный руководитель: канд. мед. наук, Н. А. Станиславчук

Научный консультант: доктор мед. наук. проф. А.А.Пентюк

Официальные оппоненты: доктор мед. наук, проф. В. П.Жердев

доктор биол. наук, проф. А.А.Фирсов

Ведущее учреждение: Московский медицинский стоматологический институт Минздравмедпрома Российской Федерации

Защита состоится " 06" Ш&рТе.. 1996 года в на заседаю

диссертационного совета Д 001.25.01 в НИИ Фармакологии РАМН (125315, Москва, Балтийская ул. 8)

С диссертацией можна ознакомиться в научной части института

Ученый секретарь диссертационного совета, канд. мед. наук

Е. А. Вальдман

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Мировой рынок нестероидных противовоспалительных средств (НПВС) характеризуется устойчивой тенденцией к количественному и качественному расширению. Повышение спроса на них обусловлено как ростом заболеваемости населения, так и увеличением в популяции доли лиц пожилого возраста, являющихся основным контингентом больных, длительно применяющих эти препараты (Г.Я.Шварц, 1988; Я.А.Сигидин и соавт., 1988; В.А.Насонова, 1994). Противовоспалительные препараты прочно занимают третье место (вслед за антибиотиками и сердечно-сосудистыми препаратами) в структуре потребления отдельных групп лекарственных средств. Однако, широкое применение НПВС существенно ограничивается их серьезными побочными эффектами. Несмотря на интенсивные поиски новых препаратов, которые бы превосходили уже существующие по эффективности и безопасности, эта работа пока не увенчалась успехом. Поэтому важнейшей задачей фармакологии является разработка способов и средств оптимизации фармакотерапии известными противовоспалительными препаратами.

В ряду широко применяемых НПВС одно из первых мест занимает напроксен. Область медицинского использования препарата с каждым годом расширяется (J.Keys et al. 1991; A.Coll et al. 1993; L.A.Pinl et al. 1993; G.S.Geis , 1993; Caldwell et al., 1994; H.В.Бунчук, 1994). Применение напроксена составляет 8 млрд. человеко-дней ежегодно (Д. Е.Маккаски, 1993). Препарат обеспечивает достаточно сильное анальгетическое действие, снижает воспалительные явления в тканях (J. U. Wester et al., 1991; O.Nived et al., 1994).

Однако для напроксена характерны те же недостатки, что и для других НПВС. Не всегда он проявляет достаточную противовоспалительную активность и его применение сопряжено с риском возникновения побочных эффектов со стороны желудочно-кишечного тракта, почек и других внутренних органов. Так, при эндоскопическом исследовании

выявлено, что напроксен вызывает повреждения слизистой желудка i 12-перстной кишки у 46-60% пациентов (G. В. Porro et al., 1991; F.Montrone et al., 1994). Поэтому, повышение безопасности фармакотерапии напроксеном, совершенствование способов коррекции его побочных эффектов остается актуальной проблемой клинической и экспериментальной фармакологии.

Недостаточно изучен вопрос о взаимодействии напроксена с препаратами других фармакологических групп. В частности не исследоваш влияние индукторов и ингибиторов ферментов метаболизирующих ксенобиотики на фармакокинетику и фармакодинамику напроксена, а мезвд тем напроксен практически полностью метаболизируется до неактивны) метаболитов и вмешательство в биотрансформацию может существенш изменить его фармакологические свойства. В клинической пракпш НПВС часто сочетаются с наркотическими анальгетиками, однако фарма1 кокинетические механизмы взаимодействия между препаратами этих дву; групп мало изучены. Не выяснено как будет изменяться фармакокинети-ка напроксена при почечной недостаточности, при его комбинированш с веществами изменяющими реакцию мочи, с препаратами влияющими н; всасывание лекарственных веществ в желудочно-кишечном тракте.

Одним из подходов к повышению эффективности и безопасности фармакотерапии напроксеном может быть его сочетание с витаминами и ко-ферментами, которые являются естественными компонентами внутренне! среды, а некоторые из них регулируют активность ферментов метаболизма ксенобиотиков. Кроме того, воспалительный процесс и лекарственная терапия вызывают развитие недостаточности многих витаминов. Дл; ряда лекарственных веществ, как например для ортофена, показан; перспективность применения витаминов в качестве корректоров фармакологической активности и побочного действия (А.А.Пентюк, 1990, Н. А. Станиславчук. 1991).

Исследование выполнено в соответствии с Госбюджетной НИР Винницкого медицинского института СН 15.02.0001.86; N Госрегистрации -01. 86.0.33161.

Цель исследования: изучить фармакокинетику и фармакодинамику напроксена'в условиях комбинирования с индукторами и ингибиторами ферментов метаболизма лекарств, витаминными препаратами, трамалом, при модулировании всасывания и почечной экскреции.

Задачи исследования:

1. Разработать чувствительный и специфический метод определения напроксена, пригодный для контроля за уровнем препарата в биологических жидкостях в процессе фармакотерапии.

2. Исследовать влияние фенобарбитала, циметидина. тиаминдифосфата, токоферола и ретинола на противовоспалительное и анальгетическое действие напроксена на моделях адъювантного артрита, электрического и термического раздражения.

3. Оценить влияние фенобарбитала, циметидина и тиаминдифосфата на фармакокинетику напроксена и его биотрансформацию микросомами печени крыс.

4. Разработать способы коррекции повреждающего действия напроксена на слизистую оболочку желудочно-кишечного тракта и печень крыс с помощью циметидина, тиаминдифосфата, токоферола, ретинола. Оценить влияние напроксена на обеспеченность крыс витаминами А и Е.

5. Исследовать влияние напроксена на анальгетическое действие тра-мала и его биотрансформацию микросомами печени крыс.

6. Изучить влияние почечной недостаточности на фармакокинетику напроксена, действие закисления и ощелачивания мочи на почечную экскрецию напроксена и влияние полисорба на всасывание препарата в желудочно-кишечном тракте.

Научная новизна исследования. Создан чувствительный и специфический метод определения напроксена в биологических жидкостях, основанный на взаимодействии этого вещества с пара-диметиламинобен-зальдегидом в среде серной кислоты.

Впервые исследована фармакодинамическая и фармакокинетическа* интерференция напроксена с фенобарбиталом, тиаминдифосфатом, циме-тидином, токоферолом, ретинолом и трамалом и раскрыты некоторые механизмы их взаимодействия на уровне ферментных систем. Исследованг кинетика О-деметилирования напроксена микросомной фракцией печена крыс и выявлено ингибирующее действие циметидина и тиаминдифосфата на эту реакцию. Показано, что напроксен подавляет М-деметилирование трамала и усиливает его фармакологическую активность.

Исследовано влияние циметидина, токоферола, ретинола и тиамин-дифосфата на ульцерогенное действие напроксена, показатели обмене веществ в печени. Изучено влияние напроксена на обеспеченность крыс ретинолом и токоферолом.

Впервые исследован эффект закисления и ощелачивания мочи нг почечную экскрецию напроксена и влияние полисорба на всасывани? препарата в желудочно-кишечном тракте. Изучено влияние почечноГ недостаточности на фармакокинетику напроксена.

Научная и практическая ценность работы. Полученные данные экспериментально обосновывают подходы к оптимизации фармакотерапш напроксеном путем его сочетания с лекарственными препаратами други> фармакологических групп.

Показано, что назначение циметидина, токоферола, ретинола > тиаминдифосфата усиливает эффект напроксена. При этом в случае ретинола, токоферола и тиаминдифосфата имеет место сложение противовоспалительных эффектов напроксена и витаминов, тогда как циметидиг и, отчасти, тиаминдифосфат реализуют свои эффекты через угнетение

биотрансформации препарата. Различия в механизмах действия витаминов и циметидина на эффект напроксена, создают предпосылки для целенаправленной коррекции фармакологических свойств препарата, влияя с одной стороны на фармакокинетику напроксена, а с другой - воздействуя на те звенья воспалительного процесса, на которые сам нап-роксен оказывает слабое влияние.

Циметидин, токоферол, ретинол ослабляют неблагоприятное действие напроксена на желудочно-кишечный тракт и печень, смягчая выраженность нарушений обмена липидов, активности гамма-глутамилтранс-феразы и уровня глутатиона, возникающих под влиянием напроксена.

Развитие адъювантного артрита вызывает, а фармакотерапия нап-роксеном усугубляет недостаточность токоферола и ретинола у экспериментальных животных. Дополнительное назначение ретинола и токоферола устраняет дефицит указанных витаминов.

В клинике следует учитывать возможность ослабления эффекта напроксена при комбинировании его с фенобарбиталом или другими индукторами ферментов, метаболизирующих лекарственные вещества.

Способность напроксена усиливать эффект трамала, различия в механизме их анальгетического действия, свидетельствуют о целесообразности комбинирования этих двух препаратов в клинической практике. Механизм взаимодействия напроксена и трамала реализуется как на фармакодинамическом уровне (сложение эффектов), так и на уровне биотрансформации (торможение напроксеном деметилирования трамала).

Следует принимать во внимание, что почечная недостаточность может привести к задержке элиминации напроксена из организма. За-кисление мочи введением хлорида аммония ведет к уменьшению почечной экскреции напроксена, а ощелачивание мочи введением бикарбоната натрия - к усилению. В клинической практике следует учитывать, что состояния ведущие к изменению реакции мочи, могут повлиять на ско-

рость элиминации напроксена из организма. При передозировке напроксена возможно ускорить его выведение путем ощелачивания мочи.

При одновременном применении напроксена и энтеросорбента поли-сорба ускоряется всасывание напроксена в желудочно-кишечном тракте.

Разработанный нами метод определения напроксена отличаете* доступностью, специфичностью и чувствительностью и может быть использован в лечебных учреждениях для контроля за уровнем напроксена в биологических жидкостях при проведении лечения этим препаратом.

Научные положения, выносимые на защиту

1. Для определения напроксена в биологических жидкостях разработав чувствительный и специфический .метод, основанный на хроматогра-фическом отделении неизмененной формы препарата от его метаболитов и цветной реакции с пара-диметиламинобензальдегидом.

2. Циметидин и тиаминдифосфат усиливают фармакологическое действие напроксена за счет замедления элиминации препарата из плазмь крови крыс, а ретинол и токоферол - за счет суммирования собственных противовоспалительных эффектов и эффекта напроксена. Фенобарбитал ускоряет выведение напроксена из крови и ослабляет его фармакологический эффект.

3. Циметидин и тиаминдифосфат ингибируют деметилирование напроксенг микросомной фракцией печени крыс.

4. Циметидин, токоферол, ретинол и тиаминдифосфат, оказывают гаст-ропротективное действие и уменьшают неблагоприятное влияние напроксена на печень. Дополнительное введение ретинола и токоферол? устраняет недостаточность этих витаминов, возникающую в результате адъювантной болезни и фармакотерапии напроксеном.

5. Напроксен усиливает анальгетическое действие трамала и тормозит деметилирование этого препарата микросомами печени крыс.

6. Почечная недостаточность ослабляет элиминацию напроксена и;

плазмы крови. Закисление мочи введением хлорида аммония замедляет почечную экскрецию напроксена, а ощелачивание мочи введением бикарбоната натрия - ускоряет. 7. Полисорб усиливает всасывание напроксена из желудочно-кишечного тракта. •

Апробация работы: Основные результаты работы доложены на 1-ой Украинской научной конференции "Актуальные вопросы клинической фармакологии" (Винница. 1993). заседаниях Винницких областных обществах фармакологов и биохимиков, 1 Национальном съезде фармакологов Украины (Полтава, 1995)

Публикации: по теме диссертации опубликовано 4 работы, получено 1 удостоверение на рационализаторское предложение.

Структура и объем диссертации: Работа изложена на 197 страницах машинописи, содержит 37 таблиц и 15 рисунков, библиография включает 350 источников. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, 3-х глав собственных исследований, обсуждения и списка литературы.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования: Опыты проведены на 478 крысах-самцах популяции Вистар с массой тела 110-250 г. Во время опытов животные находились на рационе, обеспечивающем поступление оптимальных количеств незаменимых нутриентов (Ю.М.Островский, 1979).

Индукцию ферментов метаболизма ксенобиотиков создавали внут-рибрюшинным введением фенобарбитала в дозе 70 мг/кг в течение 5 или 10 дней. Ингибирование активности микросомальных ферментов создавали введением животным кобальта хлорида (подкожно, дважды, в дозе 20 мг/кг с интервалом в двое суток) и циметидина (внутрижелудоч-но, в дозе 100 мг/кг в течение 5 или 10 дней).

Почечную недостаточность вызывали троекратным подкожным введением 16,65 мкмоль/кг сулемы. В крови контролировали уровень креати-нина по реакции с пикриновой кислотой (В.В.Меньшиков, 1987). Закис-ление мочи создавали внутрижелудочным троекратным введением животным хлорида аммония в дозе 100 мг/100 г массы, а защелачивание мочи - внутрижелудочным введением 100 мг/100 г массы животного натрия гидрокарбоната.

Электрическое раздражение создавали на аппарате ЭСЛ-2, который генерировал электрические импульсы с частотой 100 гц, длительностью 5 мсек и задержкой 5 мсек. Оценивали минимальную амплитуду импульсов в вольтах, вызывающую вокализацию и (или) отдергивание лап от токопроводящей поверхности дна камеры. В качестве термического раздражители использовали водяную баню с температурой 58° С. Оценивали длительность латентного периода отдергивания хвоста.

Формалиновый тест воспроизводили на крысах путем подкожного введения в тыльную поверхность задней лапки 0,1 мл 1% раствора формалина. Ноцицептивная реакция оценивалась по длительности латентного периода первой фазы, количеству покачиваний лапки, количеству облизываний или покусываний лапки, длительности вокализации, длительности латентного периода второй фазы и продолжительности второй фазы (H.Wheller-Aceto, A.Cowan, 1991).

Модель адъювантного артрита вызывали субплантарным введением крысам 0,1 мл адъюванта Фрейнда. содержащего 0,5 мг убитой вакцины БЦЖ в вазелиновом масле пополам с ланолином. Напроксен вводили 5-кратно в дозе 50 мг/кг внутрижелудочно. Часть животных перорально получала 100 мг/кг циметидина, 20 мг/кг токоферола, 3000 МЕ/кг ретинола и внутрибрюшинно 10 мг/кг тиаминдифосфата в течении 10 дней, начиная за 5 дней до введения напроксена.

Ульцерогенное действие напроксена оценивали на крысах с адъ-

ювантным артритом, после внутрижелудочного введения препарата в дозе 50 мг/кг на протяжении 5 дней. Тяжесть поражений слизистой желудка и 12-перстной кишки оценивали визуально.

Нами был разработан метод определения напроксена в биологических жидкостях, основанный на его реакции с 0,5% раствором пара-ди-метиламинобензальдегида в концентрированной серной кислоте. Метод обладает достаточной чувствительностью и открывает напроксен в количестве 1 мкг. Линейная зависимость между концентрацией напроксена в пробе и величиной оптической плотности находится в пределах 1-40 мкг. Чувствительность метода позволяет надежно определить напроксен в количествах, имеющихся в биологических жидкостях, при назначении пациентам обычных доз препарата. Коэффициент вариации при параллельных определениях составляет всего 3,54%. Диклофенак натрия, ме-фенамовая кислота, циметидин, делагил, ацетилсалициловая кислота, эуфиллин не мешают определению напроксена.

Напроксен из плазмы крови экстрагировали хлороформом при pH 1-2, что обеспечивает экстракцию более 90% вещества. Используя тонкослойную хроматографию на силикагелевых пластинках "Силуфол" и систему растворителей гексан-этилацетат-ледяная уксусная кислота в объемных соотношениях 69,5:30:0,5, удается отделить напроксен от его метаболитов и других веществ, экстрагирующихся из плазмы крови. Зону сорбента, содержащую напроксен, счищали в пробирку с 0,5 мл раствора пара-диметиламинобензальдегида в концентрированной серной кислоте и после центрифугирования измеряли оптическую плотность.

Параметры фармакокинетики напроксена - рассчитывали в рамках двухчастевой модели со всасыванием на основании известных уравнений, используя компьютерную программу (В.К.Пиотровский, М.Вайс, 1988; В.Н.Соловьев, A.A.Фирсов, В.А.Филов, 1980; Л.Е.Холодов, В.П.Яковлев, 1985).

Метаболизм амидопирина оценивали по экскреции с мочой 4-амино-антипирина и ]\!-ацетиламиноантипирина, содержание которых определяли по образованию индофенолового красителя при взаимодействии с фенолом и феррицианидом калия (Т.А.Попов, 0.Б.Леоненко, 1977). И-ацети-ламиноантипирин определяли после кислотного гидролиза мочи.

Влияние полисорба на всасывание напроксена в пищеварительном тракте крыс изучали путем определения содержания напроксена в плазме крови после внутрижелудочного введения раствора напроксена на 3% взвеси полисорба из рассчета 100 и 300 мг/кг соответственно. Оценено всасывание напроксена на "вывернутых мешочках" тонкого кишечника, используя ранее описанные приемы (Ю.М.Островский, 1979).

Микросомную фракцию печени получали известными методами (И. И. Карузина, А.И.Арчаков, 1977). Деметилазную активность микросом определяли по образованию формальдегида из трамала или напроксена (И.И.Карузина, А.И.Арчаков, 1977). Малоновый диальдегид определяли по реакции с тиобарбитуровой кислотой (Ю.А.Владимиров, А.И.Арчаков, 1972). Содержание белка определяли микробиуретовым методом (Г. А. Кочетов, 1980). Концентрацию фосфолипидов оценивали по их способности образовывать гидрофобные комплексы с ферротиоцианатом аммония (А.А.Пентюк и соавт, 1987), общих липидов - по реакции с фос-форнованилиновым реактивом. Содержание парацетамола определяли по реакции образования индофенолового красителя (И.М.Коренман, 1970).

Активность гамма-глутамилтрансферазы (КФ 2.3.2.2) исследовали по освобождению пара-нитроанилина из гамма-глутамил-пара-нитроани-лида (СеПоШ, Бе ИабаЬГгапк, 1972- 1973). Содержание восстановленного глутатиона в печени определяли в глутатионтрансферазной реакции (Аэаока, ТакаЬаэЫ, 1981).

Статистическую обработку результатов исследований производили методами биометрии (Е.В.Гублер, 1978, В.Н.Носков, 1990).

- 11 -

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Нами оценено влияние циметидина, витаминных препаратов на противовоспалительное действие напроксена на модели адъювантного артрита. В процессе развития артрита увеличивается объем воспаленной конечности, и снижается порог болевой чувствительности (табл. 1).

Таблица 1

Влияние циметидина, токоферола, ретинола и тиаминдифосфата на противовоспалительный эфект напроксена на модели адъювантного артрита у крыс (М + ш; п = 15-20)

1 1 1 1 I Динамика в процессе лечения (%)|

1 Группы животных 1- 1 1

1 1 отека конеч- 1 порога болевой 1

1 1 „ . 1 ности 1 I чувствительности! 1 1

Контроль (интактные) 99,9 +2,1

Крысы с адъювантным артритом

Нелеченные 110,7+ 3,0 86. 1 4 6,2

Напроксен 94,3 + 4, 1 114,7 + 5,4

Циметидин 112,4 + 7,6 90,7 + 5,3

Циметидин + напроксен 79 7 + 2,6* 132,1 + 5,4*

Токоферол 100, 7 + 4, 3 98,8 + 3,6

Токоферол + напроксен 77, 8 + 5,7* 121,2 + 4,7

Ретинол 102, 1 + 2, 1 96, 2 + 3,0

Ретинол + напроксен 85, 3 + 5,4 125,4 + 5,3

Тиаминдифосфат 103,7 + 5,3 101, 3 + 3,9

Тиаминдифосфат + напроксен 83,5 + 5,4 144, 1 + 5,4*

Примечание: "*" - достоверность различий по отношению к группе "напроксен".

Введение напроксена приостанавливает развитие адъювантного артрита.

Назначение циметидина само по себе не влияет на динамику развития артрита у крыс, но существенно потенцирует эффект напроксена. Введение альфа-токоферола или ретинола тормозит развития адъювантного артрита, что свидетельствует о наличии у них собственного противовоспалительного действия. При комбинировани напроксена с токоферолом или с ретинолом противовоспалительные эффекты витаминов и напроксена суммируются. Тиаминдифосфат также проявляет противовоспалительные свойства и усиливает (за счет сложения эффектов) действие напроксена.

Нами проведено тестирование анальгетической активности напроксена на моделях электрического й термического раздражения (табл. 2). На фоне тиаминдифосфата, начиная с 4-х часов, наблюдается усиление анальгетического действия напроксена. Более значительное усиление эффекта напроксена обеспечивает циметидин, тогда как фенобарбитал ослабляет действие напроксена.

Эксперименты подтвердили наличие у напроксена ульцерогенного действия (табл. 3). Применение циметидина, токоферола и ретинола существенно уменьшает этот эффект напроксена, но введение тиаминдифосфата не снижает частоты и тяжести язвенных поражений.

Напроксен снижает содержание фосфолипидов и повышает активность гамма-глутамилтрансферазы в слизистой желудка. Циметидин, токоферол и ретинол уменьшают влияние напроксена на уровень фосфолипидов, но тиаминдифосфат не коррегирует эффект напроксена. Циметидин и тиаминдифосфат не предотвращают повышения активности гамма-глутамилтрансферазы, но токоферол и ретинол частично препятствуют этому нарушению. Близкие результаты получены по другим показателям в слизистой желудка - малоновому диальдегиду и общим липидам.

Напроксен вызывает снижение уровня восстановленного глутатио-

Таблица 2

Влияние циметидина, тиаминдифосфата (ТДФ) и фенобарбитала (ФБ) на анальгетический эффект напроксена на модели электрического и термического раздражения у крыс (М ± ш; п = 5)

Группы животных

Время после введения препарата (часы)

-1-1-1-1-

II 2 1 4 1 6|8

I_I

Модель электрического раздражения Напроксен 148+14,0 192+23,3 147+9,5 107+2,9 94+2,2

Напроксен + ТДФ 131+13,3 209+18,2 165+11,2 115+6,8 114+6,О*

Напроксен + циметидин 131+6,4 171+9,4 146+10,0 127+5,8* 119±6,2 Напроксен + ФБ 148+18,2 200+9,0 119+4,0*87+4,3* 88+3,4

Модель термического раздражения Напроксен 124+14,0 182+18,3 129+14,1 100+3,0 94+2,7

Напроксен + ТДФ 129+2,0 179+9,4 136+7,1 123+5,5*113+5,3*

Напроксен + циметидин 133+5,4 170+8,6 148+9,7 122+6,0* 115+3,2* Напроксен + ФБ 130+9,8 172+14,2 117+7,0 89+4,3 88+3,6

Примечание: 1. Порог болевой чувствительности до введения напроксена принято за 100%. 2. Знаком "*" обозначены достоверные различия по отношению к группе "Напроксен".

на в печени. Введение циметидина, ретинола, тиаминдифосфата и, особенно, токоферола противодействует снижению содержания глутатиона.

Адъювантный артрит вызывает падение уровня токоферола и ретинола в плазме крови крыс. На фоне напроксена дефицит этих витаминов усугубляется. Введение циметидина также снижает обеспеченность крыс витаминами А и Е и только дополнительное введение токоферола и ре-

Таблица 3

Влияние циметидина, токоферола, ретинола и тиаминдифосфата на в: язвенных поражений слизистой желудка и 12-перстной кишки и не. слизистой желудка, печени и плазме крови у крыс с адъювантным

1 Группы ..... 1 Язвенные поражения 1 Слизистая желудка I Печень

1 животных множест- I 1 суммарная 1фосфолипи-1 ГГТ-аза, Глутатио.

венность тяжесть 1ды, мкг/мг| нмоль/мин мкмоль/

I белка |на 1мг белка

Интактные

О 49.5+3.1 38,0+4,6 7,74+0,1

Крысы с адъювантным артритом

Нелеченные 0 0 49,3+2,4 24,4+1,7 7,91+0,2

Напроксен 5,00+0,60 9,02+1,45 33,1+2,1 59,2+5,1 6,45+0,1 Циметидин +

напроксен 3,10+0.45* 4,19+0,57* 43,9+2,9* 65,4±5,1 7,21+0,2 Токоферол +

напроксен 2,85+0,45* 4,18+0.65* 44,5+2,3* 40.9+3,6* 7,60+0,3 Ретинол +

напроксен 3.10+0,45*5,11+0,75 44,5+1,8* 49,7+5,6 7,03+0,1 Тиаминдифосфат

+ напроксен 5,28+0,45 9,30+1,28 36,7+1,2 55,9+6,1 7,08+0,1

Примечание: Знаком "»"обозначены достоверные различия по отношению ГГТ-аза - гамма-глутамилтрансфераза

- 15 -

тинола эффективно препятствует изменению их содержания.

Для выяснения механизма действия витаминов, циметидина и фенобарбитала на фармакологическую активность напроксена исследована биотрансформация и анальгетическое действие модельного препарата амидопирина. Напроксен,'имеет сходство с амидопирином - оба вещества обладают анальгетическими свойствами, и напроксен и амидопирин подвергаются в организме деметилированию.

Введение фенобарбитала стимулирует метаболизм амидопирина. Экскреция с мочой крыс 4-аминоантипирина (продукта деметилирования амидопирина) возрастает на 78%. Под влиянием хлорида кобальта, циметидина и тиаминдифосфата тормозится биотрансформация амидопирина по пути его деметилирования, а экскреция 4-аминоантипирина соответственно, уменьшается на 36,4, 54,6 и 18%. Это совпадает со снижением анальгетического действия амидопирина у крыс, получавших фенобарбитал, и с его усилением у животных, получавших циметидин и тиаминдифосфат. Эти данные указывают на существенную связь биотрансформации этого анальгетика с его фармакологическим действием.

Фармакокинетические исследования показали, что введение циметидина вызывает сдвиги в концентрации напроксена в плазме крови крыс (табл. 4). Несколько замедляется всасывание напроксена в желудочно-кишечном тракте, что проявляется удлинением времени достижения максимальной концентрации (со 126 до 168 мин), увеличением периода полуабсорбции (с 35 до 44 мин). Более значительно изменяется выведение напроксена. Площадь под фармакинетической кривой увеличивается с 2380 до 3542 мкг.час/мл, период полувыведения - с 8,47 до 13,3 часов, среднее время удержания препарата в крови - с 1,35 до 2,25 часа. Циметидин влияет и на анальгетический эффект напроксена. В начальные сроки имеется тенденция к ослаблению эффекта препарата (что совпадает с замедлением всасывания), а начиная с 8 часа эффект

Таблица 4

Влияние циметидина, тиаминдифосфата и фенобарбитала на динамику концентрации напроксена в плазме крови и его анальгетическое действие после внутрижелудочного введения 50 мг/кг напроксена крысам с адъювантным артритом (п = 4, М +" ш)

I-1-1-1-1-1

IВремя, часы| Контроль | Циметидин |Тиаминдифосфат!Фенобарбитал |

I_I_I_I_I_I

Концентрация напроксена в плазме крови, мкг/мл

0,5 89,5+6,7 78.3+5,6 102,3+15,1 153,5+9,2*

1,0 177,3+9,8 131,8+4,5* 208,0+27,2 209,1+15,4

2,0 233.1 + 18,5 192,8+7,3 228,1+21,6 250,2+21,6

4,0 173,4+12,9 210,5+5,6* 166,6+15,4 160,0±9,2

8,0 98,5+7,3 128,5+10,9 101,4+11,8 72,5+10,4

12,0 71,5+3.6 100,5+5,5* 70,1 + 10,4 27,3+13,6*

24,0 21,5+1,5 47,3+3,6* 25,8±3,6 9.6+1,5*

Анальгетическое действие напроксена, %

0,5 64, 1+3, 4 53,3+12,8 71,2+10,6 77,0+4,2

1, 0 93,2+9, 8 80, 4+20. 1 101, 8+27, 0 132 +14, 0

2,0 126.9+19.6 96.2+14,5 134,3+14,6 155 +18,1

4,0 186,0+11,8 145, 5+28,1 174,1+37,0 173 ±17,0

8,0 168.8+16.3 246, 3+25, 2* 156, 9±12, 6 103 +13,4*

12, 0 83, 3+9, 5 153, 9+17,4* 83,4+15,0 48,0+9,2 *

24, 0 58,9+11,5 119,3+14,3* 68,2+9,8 7,5 +5,6 *

Примечание: знаком "*" обозначены достоверные различия по отношению к группе "Контроль"

напроксена значительно усиливается. Под влиянием тиаминдифосфата прослеживается тенденция к задержке выведения напроксена и к увеличению его анальгетического эффекта. Введение фенобарбитала усиливает процессы элиминации напроксена. Снижается площадь под фармакоки-нетической- кривой (в 1,4 раза), период полувыведения (с 8/47 до 5,58 часов), время удержания препарата в крови (в 1,86 раза), растет на 38% клиренс. Анальгетическое действие напроксена, начиная с 8 часа опыта, существенно уменьшается.

Как известно, напроксен подвергается интенсивной биотрансформации, а фармакологической активностью обладает его неизмененная форма. Поэтому эффекты циметидина, фенобарбитала и тиаминдифосфата могут быть обусловлены влиянием на биотрансформацию напроксена. В опытах in vitro показано, что реакция О-деметилирования напроксена микросомной фракцией печени крыс подавляется циметидином и тиамин-дифосфатом (табл. 5). Концентрация циметидина вызывающая 50% инги-

Таблица 5

Скорость деметилирования напроксена микросомами печени крыс в присутствии циметидина и тиаминдифосфата (ед. опт. плот./30 мин)

I-1-1-1-1

I Концентрация | Скорость I Концентрация тиа- I Скорость I Iциметидина, мкМ I реакции I миндифосфата, мкМ I реакции I

I_I_I_I_I

26

О, 085 О, 055 О, 050 0,035 0,020

18

72

145

289

578

О, 070 0,050 0,040 0,035 О, 025 О, 075

106

212

423

1690

без ингибитора 0,090

без ингибитора

бирование этой реакции составляет 181 мкМ (46,4 мкг/мл), а тиамин-дифосфата - 194 мкМ (89,4 мкг/мл). Ингибирующие концентрации циме-тидина сопоставимы с теми, которые возникают в тканях при его клиническом применении. Тиаминдифосфат подавляет деметилирование в концентрациях несколько превышающих физиологические.

В клинической практике НПВС часто комбинируют с наркотическими анальгетиками. На модели электрического и термического раздражения и формалиновом тесте мы оценили эффект раздельного и совместного введения напроксена и трамала (табл. 6). При одновременном введении напроксена и трамала происходит усиление их анальгетического действия, причем если через 6 часов эффекты напроксена и трамала, введенных по отдельности, уже исчезают, то при комбинированном введении препаратов их действие еще сохраняется.

Формалиновый тест на крысах дал близкие результаты. Как известно, по первой фазе теста можна судить о наличии у препаратов преимущественно центральных механизмов антиноцицептивного действия, а вторая фаза - как центральных, так и периферических. Трамал эффективно подавляет как первую, так и вторую фазы теста, что свидетельствует о преобладании центральных механизмов его действия. В эффекте напроксена имелось своеобразие: он в большей мере воздействовал на вторую фазу теста и почти вдвое увеличивал латентное время наступления второй фазы.

При комбинировании напроксена и трамала значительно усиливается их обезболивающее действие, как в первой, так и второй фазах. Если трамал и напроксен сами по себе не предотвращают наступление второй фазы, то их комбинация полностью ее устраняет. Это свидетельствует о взаимодополняющем действии трамала и напроксена и о целесообразности комбинирования препаратов для устранения болевых синдромов с различными механизмами их происхождения.

Таблица 6

Динамика порога болевой чувствительности (в %) под влиянием напроксена, трамала и их сочетаний на моделях электрического и термического раздражения у крыс (М+т; п=5)

Группы I До | Время после введения трамала (часы)

животных | введения |-1-1-1-

I |1|2|4|6

Электрическое раздражение 192+7,5 160+12,8 110+5,3 96+2,1 192+7,5 142+4,9 113+4,3 95+5,6 224+16,2 200+14,1* 153+9,9* 117+5,8* Термическое раздражение 188+28,5 142+16,0 107+15,6 95±3,1 166+16,1 142+5,6 116+7,0 97+3,0 295+12,4* 237+21,1* 190±16,3* 176+23* Примечание 1. Трамал вводили через 1,5 часа после напроксена.

2. Знаком "*" обозначены достоверные различия по сравнению с группой "напроксен".

Трамал 100

Напроксен 100

Напроксен + трамал 100

Трамал 100

Напроксен 100

Напроксен + трамал 100

Не исключено, что напроксен и трамал взаимодействуют на уровне биотрансформации. Микросомная фракция печени крыс интенсивно де-метилирует трамал. Математическое моделирование показало, что в этой реакции принимают участие две монооксигеназы (с высоким и низким сродством к трамалу). В присутствии напроксена (50 мкг/мл) практически полностью ингибируется активность фермента с высоким сродством (Кш в присутствии напроксена возрастает с 25 до 70 мкМ, а Ушах снижается в 3 раза) и частично подавляется активность фермента

с низким сродством к субстрату (Km повышается с 600 мкМ до 720, а Vmax снижается на 15%). По-видимому, имеет место конкуренция между трамалом и напроксеном за активный центр деметилазы. Не исключаются и неконкурентные механизмы ингибирующего действия напроксена.

Скорость всасывания лекарственных веществ из желудочно-кишечного тракта может сильно изменяться в присутствии других веществ, особенно препаратов с сорбционным механизмом действия. Мы изучили влияние энтеросорбента полисорба на скорость всасывания напроксена (табл. 7). Уже через 0,5 часа после внутрижелудочного введения взвеси напроксена с полисорбом уровень напроксена в плазме крови

Таблица 7

Влияние полисорба и почечной недостаточности на динамику концентрации напроксена (мкг/мл) в плазме крови у крыс (М + ш; п=4)

1 1 N 1 Напроксен, i i 100 мг/кг i i I Напроксен, 200 мг/кг |

i 1 I Время, часы ) Контроль 1 ! Полисорб 1 1 1 1 Контроль точечная недо-|

1 1 i i 1 |статочность 1 i . . . j ....... J

0. 5 1,0 2,0 4,0 8,0 12,0 24,0

88 + 4,6 161 + 8,8* 168 ± 57 170 + 56

180 + 17,5 263 + 14,6* 250 ± 15 240 + 12

249 + 17,5 249 + 17.5 292 + 13 270 + 10

237 + 11,6 190 + 5,8* 225 ± 22 220 + 16

170 + 35, 0 138 + 12,8 130 ± 13 164 + 8,6*

105 + 17,5 103 + 8,7 95 +7.4 123 + 7,3*

38 + 2,9 38 + 8,7 45 +5,4 70 + 7,6*

Знаком "* " обозначены достоверные различия с со

ветствующим контролем.

превышает в 1,8 раза контрольные значения. Оказалось, что время достижения максимальной концентрации сокращается со 136 до 74 мин, а период полуабсорбции с 34 до 18 мин. Однако параметры, имеющие отношение к элиминации напроксена, изменяются незначительно.

Для уточнения механизмов влияния полисорба на всасывание напроксена проведены опыты на "вывернутых" мешочках тонкого кишечника. Оказалось, что присутствие полисорба в инкубационной среде значительно (в среднем в 2,3 раза) усиливает транспорт напроксена через слизистую оболочку кишки. При этом стимулирующее действие в большей мере проявляется в конечной части тонкого кишечника.

В клинической практике приходится считаться с возможностью назначения напроксена больным страдающим почечной недостаточностью. Поэтому на модели почечной недостаточности, вызванной введением сулемы, исследовали динамику концентрации напроксена в крови. О наличие почечной недостаточности свидетельствовало увеличение уровня креатинина в плазме крови в 3,7 раза. Почечная недостаточность сопровождается задержкой напроксена в плазме крови. Так, на 12 часов опыта уровень напроксена превышал контроль на 29%, а на 24 часа -на 55%. В 1,3 раза возрастает площадь под фармакокинетической кривой, в 1,5 и 5,5 раза период полувыведения и среднее время удержания препарата в плазме крови. Снижается на 35% клиренс препарата.

В другом исследовании изучали влияние закисления и ощелачивания мочи на экскрецию напроксена с мочой у крыс. Подобная ситуация может возникнуть при комбинировании напроксена с препаратами, способными изменить реакцию мочи. Кроме того, при передозировке напроксена может возникнуть необходимость ускорения его элиминации из организма. Для сравнения был взят парацетамол, вещество, которое в отличие от напроксена (имеющего кислотные свойства) проявляет свойства слабого основания.

Увеличение кислотности мочи введением хлорида аммония уменьшает экскрецию напроксена с мочой (с 472+29 мкг в контроле до 318+42 мкг), тогда как повышение щелочности мочи введением гидрокарбонатг натрия стимулирует его экскрецию до 662+54 мкг. С другой сторонь повышение кислотности стимулирует выведение парацетамола'(с 355+45 до 599+82 мкг), а повышение щелочности мочи тормозит выведение парацетамола до 209+22 мкг.

- 23 -ВЫВОДЫ

1. Создан чувствительный и специфический метод определения напроксена в биологических жидкостях, основанный на хроматографическом отделении напроксена от его метаболитов и цветной реакции с пара- диметиламинобензальдегидом.

2. Под влиянием циметидина и тиаминдифосфата замедляется выведение напроксена из плазмы крови крыс и усиливается его фармакологическое действие, тогда как под влиянием фенобарбитала ускоряется элиминация препарата и ослабляется его эффект. Циметидин и тиаминдифосфат тормозят О-деметилирование напроксена микросомами печени.

3. Ретинол, токоферол и тиаминдифосфат, обладая собственной противовоспалительной активностью, усиливают фармакологическое действие напроксена.

4. Циметидин, токоферол, ретинол и, в меньшей мере тиаминдифосфат, уменьшают неблагоприятное действие напроксена на желудочно-кише-ный тракт и печень, а введение ретинола и токоферола, кроме того, устраняют недостаточность этих витаминов, возникающую в результате адъювантной болезни и фармакотерапии напроксеном.

5. Напроксен усиливает анальгетическое действие трамала и тормозит деметилирование этого препарата микросомами печени крыс.

6. Почечная недостаточность приводит к ослаблению элиминации напроксена. Закисление мочи замедляет почечную экскрецию напроксена, а ощелачивание - ускоряет.

7. Энтеросорбент полисорб усиливает всасывание напроксена из желудочно-кишечного тракта.

- 24 -

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Модификация противовоспалительного эффекта ортофена, индомета-цина и напроксена индукторами и ингибиторами метаболизма ксенобиотиков и витаминными препаратами /Тез. докл. Украинской научной конференции с участием стран СНГ "Актуальные проблемы клинической фармакологии" Винница, 1993. -С. 39-40. (Пентюк A.A., Остапчур Е.И., Сливка О.Я.)

2. Влияние фенобарбитала, хлорида кобальта, циметидина, ретинола, токоферола и тиаминдифосфата на биотрансформацию ацетанилида и амидопирина / Тезисы, докл. Украинской научной конференции с участие!^ стран СНГ "Актуальные проблемы клинической фармакологии" Винница, 1993. -С. 26-27. (Пентюк A.A., ВовкО.Г., Пентюк H.A., Семененкс И.Ф., Колесник H.H.)

3. Модификация фармакодинамики и побочных эффектов нестероиднон противовоспалительного препарата напроксена циметидином, ретинолом, токоферолом и кокарбоксилазой / Материалы научных работ сотруднико! Винницкого государственного медицинского университета им. Н.И.Пиро-гова. - Винница, 1994. -С. 77.

4. Влияние фенобарбитала на фармакокинетику напроксена у крыс, Тезисы докладов I Национального съезда фармакологов Украины//Киев, 1995, с. 29 (соавт. Н. А. Станиславчук)