Автореферат и диссертация по медицине (14.04.01) на тему:Теоретическое и экспериментальное обоснование создания трансдермальных лекарственных форм с антиоксидантами и антигипоксантами

¿ж/

На правах рукописи

ЛОСЕНКОВА Светлана Олеговна

ТЕОРЕТИЧЕСКОЕ И ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ОБОСНОВАНИЕ СОЗДАНИЯ ТРАНСДЕРМАЛЬНЫХ ЛЕ1САРСТВЕННЫХ ФОРМ С АНТИОКСИДАНТАМИ И АНТИГИПОКСАНТАМИ

14.04.01 — Технология получения лекарств

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора фармацевтических наук

17 ОКТ 2013

Москва- 2013

005535074

Диссертационная работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Смоленская государственная медицинская академия Министерства здравоохранения Российской Федерации»

Научные консультанты:

Доктор фармацевтических наук,

профессор Степанова Элеонора Федоровна

Доктор медицинских наук,

профессор Новиков Василий Егорович

Официальные оппоненты:

Жилякова Елена Теодрровна, доктор фармацевтических наук, профессор, зав. кафедрой фармацевтической технологии и организации здравоохранения ГБОУ ВПО БелГУ Минздрава России

Саканян Елена Ивановна, доктор фармацевтических наук, профессор, директор центра Фармакопеи и международного сотрудничества ФГБУ «НЦЭСМП» Минздрава России

Чучалнн Владимир Сергеевич, доктор фармацевтических наук, профессор, зав. кафедрой фармацевтической технологии ГБОУ ВПО СибГМУ Минздрава России

Ведущая организация: Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Казанский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации (ГБОУ ВПО «КГМУ» Минздрава России).

Защита состоится «/Э» 2013 г в/¿¿й^часов на заседании

диссертационного совета Д 0СГб.070.01 при Государственном научном учреждении «Всероссийский научно-исследовательский институт лекарственных и ароматических растений Российской академии сельскохозяйственных наук» (ГНУ ВИЛАР Россельхозакадемии) (117216, Москва, ул. Грина, 7) по адресу: 123056, г. Москва, ул. Красина, д.2.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГНУ ВИЛАР Россельхозакадемии по адресу: 117216, Москва, ул. Грина, 7.

Автореферат разослан Ученый секретарь диссертационного совета

Д 006.070.01,

доктор фармацевтических наук

Громакова А.И.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы исследования. В настоящее время существует ряд приоритетных направлений инновационных технологий в фармации, одним из которых является создание новых лекарственных форм (ЛФ) с улучшенными фармакокинетическими свойствами, которые за счет поддержания постоянной концентрации активного вещества в крови позволяют уменьшить кратность приема лекарственного средства (ЛС).

Трансдермальные терапевтические системы (ТДТС) относятся к инновационным трансдермальным ЛФ (тЛФ) с модифицированным высвобождением по принципу регулирования.

В регистре 2013 года представлены 25 торговых наименований ТДТС, среди которых трансдермальный пластырь и ТДТС, предназначенные для лечения никотиновой зависимости, ТДТС, содержащие наркотические анальгетики, контрацептивное и местноанестезирующие средства, нестероидное противовоспалительное средство, вазодилататоры, средство для заместительной эстрогентерапии, гомеопатический пластырь для похудания. На сегодняшний день по ТДТС имеются и другие научные разработки. Однако ТДТС, содержащих антиоксиданты и антигипоксанты, пока не существует, поэтому их создание, учитывая соответствующую фармакотерапевтическую направленность, актуально. Создание ТДТС с антиоксидантами и антигипоксантами целесообразно: тЛФ альтернативны инъекциям и могут способствовать повышению комплаентности пациентов, являясь привлекательной ЛФ, особенно для лиц пожилого возраста.

Мексидол (этилметилгидроксипиридина сукцинат) и гипоксен (натриевая соль полидигидроксифенилена-4-тиосульфокислоты) - отечественные препарата из группы антигипоксантов и антиоксидантов. Мексидол зарегистрирован в виде 5% раствора для инъекций в ампулах, таблеток по покрытых оболочкой, стоматологических паст. Гипоксен зарегистрирован в виде 7% раствора для инъекций в ампулах, таблеток, капсул по 0,25г. Период полувыведения при пероральном применении мексидола и гипоксена составляет 4,7-бчасов.

Степень её разработанности.

Современные идеи технологического характера сформулированы в работах Мизиной П.Г., Быкова В. А. (2004г.). Исследуя вопросы создания ТДТС с фенилпропаноидами Мизина П.Г., Быков В.А. предлагают критерии для их. стандартизации и подробно описывают методики для их воспроизведения. Степанова Э.Ф. и Андреева И.Н. в своих работах дают общую характеристику тЛФ в целом, как системам чрескожного транспорта, указывая на их преимущества. Кривошеев С.А. совместно с Ивановым К.А. (2001, 2005г.) рассматривают вопросы производства и стандартизации аппликационных лекарственных форм: пластырей смоляно-восковых, каучуковых.

Равикумар С., Максименко О.О., Васильев А.Е., Краснюк И.И. (2001г.) занимаются разработкой технологии и исследованием стабильности ТДТС с индометацином, напроксеном. Работы Васильева А.Е., Краснюка И.И., Тохмахчи В.И. (2008 г.) посвящены созданию ТДТС на основе полимерной гидрофильной матрицы с целью трансдермальной доставки клонидина, цитизина, диклофенака, феназепама, диазепама, а также вопросам их стандартизации. Предлагаемая авторами гидрофильная матрица используется в технологии трансдермальных терапевтических систем с разнообразными лекарственными веществами. Особенности технологии ТДТС с дипромонием (2008 г.) и флаволигнанами расторопши пятнистой (2010 г.) раскрывают в своих работах Степанова Э.Ф., Морозов Ю.А., Морина Е.А.

Существует немало работ Багировой B.JL, Арзамасцева А.П., в которых рассматриваются вспомогательные вещества, используемые, в том числе, в технологии тЛФ. Фармакокинетическим, токсикологическим и фармакодинамическим исследованиям ТДТС посвящены многочисленные работы Сариева А.К., Литвина A.A., Жердева В.П. Однако ТДТС с антиоксидантами и антигипоксантами пока не существует, поэтому нельзя считать уровень разработанности темы высоким.

Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ ГБОУ ВПО СГМА Минздрава России.

Цель настоящих исследований заключается в создании отечественных инновационных лекарственных препаратов с контролируемым высвобождением - трансдермальных терапевтических систем с этилметилгидроксипиридина сукцинатом (мексидолом) и натрия поли(дигидроксифенилен)тиосульфонатом (гипоксеном).

Задачи исследования:

-теоретически обосновать с использованием компьютерного моделирования совместимость лекарственных и вспомогательных веществ, входящих в состав трансдермальных терапевтических систем с этилметилгидроксипиридина сукцинатом и натрия поли(дигидроксифенилен)тиосульфонатом; -провести биофармацевтические исследования in vitro по выбору оптимальной композиции вспомогательных веществ;

-предложить рациональную технологию производства трансдермальных терапевтических систем с этилметилгидроксипиридина сукцинатом и натрия поли(дигидроксифенилен)тиосульфонатом, провести её валидацию. -исследовать стабильность трансдермальных терапевтических систем методом долгосрочных испытаний и выбрать рациональную упаковку для лекарственных форм;

-провести биофармацевтические исследования in vivo по изучению чрескожного транспорта при применении трансдермальных терапевтических

систем с этилметилгидроксипиридина сукцинатом и натрия поли(дигидроксифенилен)тиосульфонатом;

-провести стандартизацию разработанных трансдермальных терапевтических систем с этилметилгидроксипиридина сукцинатом и натрия поли(дигидрокси-фенилен)тиосульфонатом;

-провести биологические исследования по определению раздражающего, местнораздражающего действия, гиперчувствительности кожи, а также выявить морфологические изменения кожи лабораторных животных при взаимодействии трансдермальных композиций с их кожным покровом; -провести доклинические исследования субхронической токсичности, специфической фармакологической активности трансдермальных терапевтических систем с этилметилгидроксипиридина сукцинатом и натрия поли(дигидроксифенилен)тиосульфонатом;

-разработать методологическую схему исследований и производства трансдермальных лекарственных форм; .

-разработать проект ФСП, лабораторный регламент на пластырь-ТДТС с этилметилгидроксипиридина сукцинатом (мексидолом).

Научная новизна исследования. Впервые выбраны оптимальные составы трансдермальных терапевтических систем с антиоксидантами и антигипоксантами на основании результатов компьютерного моделирования, биофармацевтических исследований in vitro с использованием модельной биологической мембраны, а также исследований in vivo, позволивших доказать возможность чрескожного транспорта этилметилгидроксипиридина сукцината и натрия поли(дигидроксифенилен)тиосульфоната из трансдермальных терапевтических систем.

Разработана и проанализирована оригинальная технологическая схема производства ТДТС с этилметилгидроксипиридина сукцинатом (мексидолом) и натрия поли(дигидроксифенилен)тиосульфонатом (гипоксеном).

Предложены нормы качества, являющиеся критериальными для трансдермальных терапевтических систем: однородность дозирования пластырной массы, сопротивление отслаивания, потеря в массе при высушивании, тест «Растворение».' Проведены исследования структурно-реологических свойств пластырных масс с этилметилгидроксипиридина сукцинатом и натрия поли(дигидроксифенилен)тиосульфонатом, ИК-спектроскопические исследования пластырной массы с натрия поли(дигидроксифенилен)тиосульфонатом. Разработаны методики

количественного определения этилметилгидроксипиридина сукцината и натрия поли(дигидроксифенилен)тиосульфоната в составе ТДТС и проведена их валидация.

Проведены доклинические фармакодинамические исследования сконструированных пластырей-ТДТС. Показана дозозависимая церебропротекторная активность пластыря-ТДТС с

этилметилгидроксипиридина сукцинатом (мексидолом) на модели черепно-мозговой травмы, дозозависимая гастропротекторная активность на модели 18-часовой иммобилизации пластырей-ТДТС с этилметилгидроксипиридина сукцинатом и натрия поли(дигидроксифенилен)тиосульфонатом.

Проведены доклинические токсикологические исследования пластырей-ТДТС с этилметилгидроксипиридина сукцинатом и натрия поли(дигидрокси-фенилен)тиосульфонатом.

По результатам исследований получено 2 патента Российской Федерации на изобретения «Трансдермальный пластырь» <19)ГШ(")(2445123)(13>С2 (2012г.), «Трансдермальный пластырь» (19>Яи(")(2445084)(13)С2 (2012г.).

Теоретическая и практическая значимость работы. Впервые теоретически обоснованы оптимальные составы трансдермальных терапевтических систем с антиоксидантами и антигипоксантами на основании результатов компьютерного моделирования и определения основных физико-химических дескрипторов.

В результате комплекса проведённых исследований сконструированы оригинальные методологические блок-схемы для предложенных лекарственных форм, позволяющие проанализировать и обобщить фармакотехнологические аспекты их производства.

В ходе выполнения диссертационной работы созданы отечественные лекарственные препараты - трансдермальная терапевтическая система пластырного типа с этилметилгидроксипиридина сукцинатом (мексидолом), обладающая церебропротекторной и гастропротекторной активностью, а также ТДТС с натрия поли(дигидроксифенилен)тиосульфонатом (гипоксеном), проявляющая гастропротекторные свойства, относящиеся к третьему поколению ЛФ с контролируемым высвобождением. Полученные результаты свидетельствуют о возможности проведения эффективной профилактики стрессорного поражения СОЖ с помощью ТДТС пластырного типа с этилметилгидроксипиридина сукцинатом и натрия поли(дигидроксифенилен)-тиосульфонатом.

Выбраны критерии оценки качества, установлены сроки годности - 2года, составлены оптимальные технологические схемы и даны рекомендации для будущего производства трансдермальных терапевтических систем пластырного типа с этилметилгидроксипиридина сукцинатом и натрия поли(дигидроксифенилен)тиосульфонатом.

Результаты комплексного токсикологического и фармакодинамического исследований ТДТС с этилметилгидроксипиридина сукцинатом и натрия поли(дигидроксифенилен)тиосульфонатом свидетельствуют о

целесообразности их дальнейших испытаний в качестве церебропротектора и гастропротекторов пр:и лечебно-профилактических мероприятиях у неврологических больных, а также средств, нивелирующих последствия стрессорного воздействия на желудочно-кишечный тракт.

Методология и методы исследования. Работая в области создания тЛФ с антиоксидантами и антигипоксантами с учётом уже накопленного опыта многочисленных авторов, мы разработали оригинальную технологическую схему производства ТДТС методом шпрединга, используя ультразвук с целью гомогенизации пластырной массы и обеспечения её микробиологической чистоты. Свою работу мы дополнили идеей применения вспомогательных веществ с низким уровнем альдегидов с целью обеспечения стабильности тЛФ при хранении. Сформулировали все особенности технологии ТДТС с антиоксидантами и их стандартизации в виде рекомендаций к производству, обращая внимание на светочувствительность ЛВ.

Руководствуясь предпосылкой к чрескожному транспорту мексидола и гипоксена, исследовали индивидуальную реактивность морских свинок в ответ на применение разработанных ТДТС. Токсикологические исследования, результаты изучения специфической фармакологической активности позволяют нам утверждать, что предлагаемые составы оптимальны. На основании проведённых экспериментов разработана методологическая схема исследований и производства тЛФ.

В работе использованы биофармацевтические, физические, физико-химические, технологические, фармакодинамические, микробиологические, статистические методы исследования. Биологические, исследования раздражающих, местнораздражающих свойств трансдермальных пластырей, а также гистоморфологические исследования кожи проведены на морских свинках обоего пола. Биофармацевтические исследования проницаемости кожи для трансдермального этилметилгидроксипиридина сукцината и натрия поли(дигидроксифенилен)тиосульфоната проведены с использованием крыс обоего пола.

Положения, выносимые на защиту:

-результат создания трансдермальных лекарственных форм с этилметилгидроксипиридина сукцинатом и натрия поли(дигидроксифенилен)-тиосульфонатом как перспективное направление в фармацевтическом производстве инновационных ЛП, применяемых в качестве церебропротекторов на модели ЧМТ и гастропротекторов в условиях стрессорного воздействия, оригинальные технологическая и аппаратурная схемы производства трансдермальных терапевтических систем;

-результаты биофармацевтического исследования in vitro: состав с этилметилгидроксипиридина сукцинатом и вспомогательными веществами (пропиленгликоль-1,2, пласдон К90, спирт этиловый 95%) и состав с натрия поли(дигидроксифенилен)тиосульфонатом (пропиленгликоль-1,2, натрия метабисульфит, ПВП КЗО, спирт этиловый 95%) являются оптимальными;

-результаты установления срока годности трансдермальных терапевтических систем с этилметилгидроксипиридина сукцинатом и натрия поли(дигидроксифенилен)тиосульфонатом;

-результаты гистологических и биофармацевтических исследований ш vivo, подтверждающие способность этилметилгидроксипиридина сукцината и натрия поли(дигидроксифенилен)тиосульфоната к чрескожному транспорту;

-разработанные нормы качества для оценки трансдермальной терапевтической системы с этилметилгидроксипиридина сукцинатом, включённые в ФСП «Трансмексол», а также нормы качества для оценки трансдермальной терапевтической системы с натрия поли(дигидрокси-фенилен)тиосульфонатом;

-результаты определения класса опасности лекарственной формы; -результаты биологических исследований по определению местнораздражающего, раздражающего действия, гиперчувствительности кожи, морфологических изменений кожи морских свинок при применении трансдермальных терапевтических систем с этилметилгидроксипиридина сукцинатом и натрия поли(дигидроксифенилен)тиосульфонатом;

-результаты доклинических исследований специфической фармакологической активности разработанных ТДТС.

Степень достоверности и апробация результатов.

Статистическую обработку результатов исследований проводили на ПЭВМ типа IBMPC/AT Pentium-IV с использованием пакета прикладных программ STATISTICA 6.0. Статистическую достоверность изменений оценивали с использованием t-теста Стьюдента для непарных выборок. Все статистические тесты проводили для двусторонней гипотезы при уровне статистической значимости — 0,05.

На основании проведённых исследований автором внедрены:

-состав, технология и стандартизация пластыря-ТДТС «Трансмексол 50мг/72ч, 100мг/72ч, 150мг/72ч» с этилметилгидроксипиридина сукцинатом (ФСП, лабораторный регламент, акт технологической апробации, акт о внедрении: ОАО «Тюменский химико-фармацевтический завод, ОАО «Екатеринбургская фармацевтическая фабрика»);

-состав и технология изготовления пластыря-ТДТС с этилметилгидроксипиридина сукцинатом в лабораторных условиях (учебное пособие, рекомендованное УМО по медицинскому и фармацевтическому образованию), внедрены в учебный процесс фармацевтического факультета на кафедре фармацевтической химии и фармакогнозии Смоленской государственной медицинской академии, на кафедре фармацевтической технологии Северо-Осетинского государственного университета им. K.JI. Хетагурова, на кафедре фармацевтической химии и фармацевтической технологии Воронежского государственного университета, на кафедре фармацевтической технологии и биотехнологии Саратовского

государственного медицинского университета им. В.И. Разумовского, на кафедре фармацевтической технологии Курского государственного

медицинского университета, на кафедре фармацевтической технологии и организации здравоохранения Белгородского государственного национального исследовательского университета, на кафедре фармацевтической технологии с курсом биотехнологии Омской государственной медицинской академии.

Основные положения диссертационной работы доложены на 61-й, 62-й, 63-й, 64-й, 65-й, 66-й, 67-й региональных конференциях «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции» (Пятигорск 2006, 2007, 2008, 2009, 2010, 2011, 2012), на XVI, XVII, XVIII Российском национальном Конгрессе «Человек и лекарство» (Москва 2009, 2010, 2011, 2012), на 4-й Всероссийской с международным участием научно-методической конференции «Фармобразование-2010» (Воронеж 2010), на 5-й международной конференции «Биологические основы индивидуальной чувствительности к психотропным средствам» (Москва 2010), на 1-й областной научно-практической конференции «Актуальные вопросы фармации» (Смоленск 2011), на Всероссийской научно-практической интернет-конференции с международным участием «Современные аспекты разработки и совершенствования состава и технологии лекарственных форм» (Курск 2011), на Международной научно-практической конференции «Профилактика -основной принцип отечественного здравоохранения» (Смоленск 2011), на Всероссийской научно-практической конференции «Основы формирования здорового образа жизни» (Смоленск 2012), на научно-практической конференции «Фармация - вчера, сегодня, завтра» (Смоленск 2012).

По материалам диссертации опубликовано 45 печатных работ в виде научных статей, тезисов, учебных пособий, из них 16 в журналах, рекомендованных ВАК РФ.

Соответствие диссертации паспорту научной специальности.

Научные положения диссертации соответствуют формуле специальности 14.04.01 - технология получения лекарств. Результаты проведённого исследования соответствуют пункту 1 «Исследования теоретических основ фармацевтической технологии, валидации, управление рисками, перенос технологий с этапа фармацевтической разработки в серийное производство», пункту 3 «Разработка технологий получения субстанции и готовых лекарственных форм», пункту 6 «Исследование биофармацевтических аспектов в технологии получения лекарственных средств, их дизайн и изучение факторов, влияющих на биодоступность».

Объём и структура диссертации. Материалы диссертации изложены на 343 страницах машинописного текста. Диссертация документирована 55 таблицами, 17 формулами и 57 рисунками. Диссертационная работа включает введение, обзор литературы, описание объектов и методов исследований, собственные результаты исследований, выводы, заключение, список литературы. Список литературы включает 261 научный источник, из них 209 отечественных и 52 иностранных авторов.

Приложения диссертации (блок 1, 2, 3, 4, 5) включают патенты на изобретение, НД на лекарственные препараты, отчёты ПИР, акты о внедрении, акт технологической апробации.

Основное содержание работы

1.Выбор оптимальных составов матричных композиций с этилметилгидрокснпиридина сукцинатом и натрия поли(дигидрокси-фенилен)тиосульфонатомпо результатам биофармацевтического исследования и долгосрочных испытаний стабильности.

1.1 Создание композиций вспомогательных веществ с помощью прогнозирующего метода.

С целью теоретического обоснования выбора ВВ и анализа взаимного влияния компонентов лекарственной формы (ЛФ) на первом этапе исследования были вычислены основные молекулярные дескрипторы, главными из которых являются потенциал ионизации с учётом гидратации, сродство к электрону, поляризуемость, дипольный момент в газовой фазе, коэффициент распределения в системе «октанол-вода». Исследование проведено на базе Пятигорской фармацевтической академии совместно с профессором Погребняком A.B. (табл. 1).

Таблица 1 - Расчёт основных физико-химических дескрипторов молекул этилметилгидрокснпиридина сукцината и натрия поли(дигидроксифенилен)-тиосульфоната _

Вещество Дескрипторы

Поляризуемость, А3 Коэффициент распределения, log Р Энергия гидратации, ккал / моль немо, эВ ВЗМО, эВ Диполь ный момент, д

Этилметил-гидроксипиридина сукцинат (мексидол) 15,87 0,55 -4,89 +0,007 -9,153 2,49

Натрия поли(дигидрокси-фенилен)-тиосульфонат (гипоксен) 16,48 -1,19 -24,36 -2,414 -9,115 3,78

Аналогичным образом проведены квантово-химические расчёты структурных элементов. ВВ (пролонгаторов, растворителей, пенетраторов), используемых в технологии тЛФ. Близость физико-химических дескрипторов обеспечивает взаимную химическую инерцию с одной стороны и достаточное адсорбционное взаимодействие с другой. В одинаковые группы (кластеры) со

сходными физико-химическими дескрипторами совместно с этилметилгидроксипиридина сукцинатом вошли поливинилпирролидон (ПВП), диметилсульфоксид, пропиленгликоль-1,2 (табл. 2).

Таблица 2 - Сводная таблица разделения лекарственных и вспомогательных веществ на кластеры___

VARIABLE CLUSTER DISTANCE

Mexidol 1 3 2.20

Нурохеп 2 1 2.04

PEG-400 3 1 2.04

PVP 4 3 7.56

DMSO 5 3 5.92

Tween-80 6 2 0.00

PG-1,2 7 3 6,01

В отдельный кластер совместно с натрия поли(дигидроксифенилен)-тиосульфонатом включен полиэтиленгликоль-400 (ПЭГ-400). Спирт этиловый, используемый в качестве растворителя и консерванта из-за высокого сродства к воде и общей химической инертности значимо не влиял на свойства ЛФ.

1.2 Биофармацевтические исследования in vitro составленных композиций

На основании литературных данных и результатов кластерного анализа были сконструированы и изучены 6 модельных образцов с этилметилгидроксипиридина сукцинатом и 9 модельных образцов с натрия поли(дигидроксифенилен)тиосульфонатом. В составы помимо ЛВ включены ВВ в качестве пролонгаторов (ПВП К 30, пласдон К 90), пластификаторов, растворителей, пенетраторов кожных покровов (ПЭГ-400, пропиленгликоль-1,2) и консервантов (спирт этиловый, пропиленгликоль-1,2). Натрия поли(дигидроксифенилен)тиосульфонат является полифенольным

соединением, легко вступает в реакции окисления-восстановления, поэтому с целью предотвращения окисления ЛВ, повышения его стабильности при хранении в состав композиций введён антиоксидант натрия метабисульфит. ТДГС в виде пластырей матриксного типа с антигипоксантными и антиоксидантными веществами площадью 25 см2 сконструированы согласно разработанных технологических схем.

Биофармацевтическим исследованиям методом диализа in vitro с использованием биологической мембраны, моделирующей кожные покровы, были подвергнуты субстанции ЛВ, таблетки с этилметилгидроксипиридина сукцинатом и сконструированные пластыри-ТДТС с целью сравнительной оценки влияния ВВ на степень и скорость высвобождения ЛВ из ЛФ. Диализ проводили в термостате при температуре 37°С, в качестве диализной среды использовали воду очищенную (для ТДТС с этилметилгидроксипиридина сукцинатом; рН 5,43±0,14) или фосфатный буфер (рН 7,24±0,05) с 0,5% содержанием натрия метабисульфита (для ТДТС с натрия поли(дигидроксифенилен)тиосульфонатом). Отбор проб диализата

осуществляли через 0,5; 1, 2, 4, 6, 8, 12, 18, 24, 48, 72 часа от начала эксперимента (для ТДТС с этилметилгидроксипиридина сукцинатом), для ТДТС с натрия поли(дигидроксифенилен)тиосульфонатом исследование продолжали, увеличивая период наблюдения с 72 часов до 168 часов. Отобранный объём возмещали чистым растворителем. Анализ разведения диализата осуществляли УФ-спектрофотометрически в диапазоне волн 240-340 нм в среде 0,01М кислоты хлористоводородной (для пластыря-ТДТС с этилметилгидроксипиридина сукцинатом) и в диапазоне волн 200-380 нм в среде 0,5% раствора натрия метабисульфита в фосфатном буфере (для пластыря-ТДТС с натрия поли(дигидроксифенилен)тиосульфонатом). Измерения оптической плотности опытных образцов проводили в максимуме значений (297±3нм или 305±3нм соответственно). С учётом фонового влияния ВВ, входящих в состав матрицы, параллельно проводили контрольные опыты, где в качестве объекта исследования использовали пластыри-ТДТС без ЛВ. При увеличении содержания ЛВ в тЛФ увеличивали соответственно и объём диализной среды. Оптимальные составы с этилметилгидроксипиридина сукцинатом (ТДТС №1) и натрия поли(дигидроксифенилен)тиосульфонатом (ТДТС №2) представлены в таблице 3.

Таблица 3 - Составы ТДТС с этилметилгидроксипиридина сукцинатом,

Компоненты / ТДТС ТДТС №1 ТДТС №2

Этилметилгидроксипиридина сукцинат (ООО «Бион», г.Обнинск) 50мг

Натрия поли(дигвдроксифенилен)тиосульфонат (ЗАО Корпорация «Олифен») 50мг

ПВП среднемолекулярный (1Ш11КЗО) BioChemica +

1Ш11 высокомолекулярный (Пласдон К 90), ISP +

Пропиленгликоль-1,2, ООО «Химмед» + +

Натрия метабисульфит, ООО «Химмед» +

Спирт этиловый 95% + +

Результаты биофармацевтического исследования, а также исследования стабильности пластырей-ТДТС методом долгосрочных испытаний указывают на то, что при хранении составов с ПЭГ-400 и этилметилгидроксипиридина сукцинатом происходит изменение окраски пластырной массы (пожелтение). ПЭГ-400 является универсальным растворителем, но не совместим с соединениями фенольного и полифенольного характера. Хранение составов в натрия поли(дигидроксифенилен)тиосульфонатом и ПЭГ-400 сопровождалось значительным снижением количества пластырной массы и количественного содержания ЛВ. Введение Пласдона® в состав тЛФ с натрия поли(дигидроксифенилен)тиосульфонатом способствовало образованию малорастворимого в воде соединения, что значительно снижало степень

высвобождения ЛВ из трансдермальных композиций. Способность образовывать комплексы с большим количеством веществ является их характерной особенностью.

При разработке составов с натрия поли(дигидроксифенилен)-тиосульфонатом с целью увеличения степени высвобождения в качестве солюбилизатора введён твин-80, в другие составы в качестве «энхансера» проницаемости кожных покровов диметилсульфоксид (ДМСО) в различных концентрациях. Введение в качестве солюбилизатора твина-80 способствовало увеличению скорости трансдермальной подачи натрия поли(дигидрокси-фенилен)тиосульфоната, но так как возможность чрескожного проникновения твина-80 не изучена, а литературные источники свидетельствуют о наличие твиновой модели гепатотоксичности, то данный состав не выбран нами как оптимальный. ДМСО обладает противовоспалительной активностью, в качестве антиоксиданта может быть эффективной «ловушкой» для гидроксильного радикала, обладающего наиболее выраженным повреждающим действием, но при длительном накожном применении, к сожалению, может оказывать раздражающее действие. Результаты исследования указывают на то, что введение ДМСО в состав пластырной массы с натрия поли(дигидроксифенилен)тиосульфонатом с целью увеличения степени высвобождения ЛВ из тЛФ способствовало незначительному увеличению степени высвобождения ЛВ, при этом состав, герметично ламинированный светонепроницаемой фольгой, был стабилен при хранении в течение 2 лет. ДМСО, проявляя антирадикальные и антиоксидантные свойства, предотвращал снижение концентрации натрия поли(дигидроксифенилен)тиосульфоната в ТДТС, что показано нами в работе. Результаты биофармацевтических исследований оптимальных составов ТДТС, субстанций и таблеток представлены в табл. 4.

В качестве основных исследуемых параметров выбраны скорость трансдермальной подачи ЛВ (мкг/ч-см2), степень высвобождения (%), коэффициент использования (%) ЛВ из матрицы, длительность плато пролонгации (ч).

Из таблицы 4 следует, что ТДТС в пластырной форме относятся к ЛФ с модифицированным высвобождением с контролируемой скоростью высвобождения, на что указывает длительность плато пролонгации и постоянство значений скорости трансдермальной подачи на его протяжении.

Таблица 4 - Результаты биофармацевтических исследований лекарственных форм с мексидолом и гипоксеном исследовании

Исследуемые параметры Субстанция Таблетки ТДТС №1 с этилметилгидроксипиридина сукцинатом ТДТС №2 с натрия поли(дигид-роксифени-лен)тиосульфо натом

этилметилгидроксипиридина сукцината 50мг натрия поли(дигид-роксифени-лен)тиосуль-фоната 50мг с мексидолом 0,125г

трансдермальной подачи, мкг/чсм2 Не постоянна Не постоянна Не постоянна 1,105±0,011 1,48±0,03

степень высвобождения, % 78,82 36,15 78,43 56,88 23,69

использования, % - 56,81 23,69

пролонгации, час с 6-48 час с 48-168 час

Таблетки являются традиционной ЛФ, относящейся к 1 поколению ЛФ характеризующихся не контролированным и не ре^лиГемк™ высвобождением ЛВ, о чём свидетельствует отсутствие плато ЕЗГи

непостоянство значений скорости трансдермальной подачи "Р™0™" и

Для вычисления скорости трансдермальной подачи ЛВ из исследуемы* матриц через модельную мембрану построены кривые зависимое™ кол^ стш высвободившегося ЛВ (мкг/см>) от времени (ч) (рис. 1). Скорость подаГ^ ш матриц определяли как тангенс угла наклона стационарного Участка прямоТ

Временные интервалы отбора проб от 0,5 до 72 часов

1 2 3 4 5 б 7 8 9 10111213 141516

Временные интервалы отбора проб от 0,5 до 168 часов

Рисунок 1 - Кинетические кривые подачи этилметилгидроксипиридина сукцината (мексидола) и натрия шлиСдшщрош.фенилен^о^^ (гипоксена) из пластырей-ТДТС.

Результаты биофармацевтического метода диализа через модель биологической мембраны указывают на то, что скорость трансдермальной подачи этилметилгидроксипиридина сукцината из оптимального состава при увеличении его содержания в матрице возрастает. Прямая пропорциональная зависимость скорости трансдермальной подачи от содержания этилметилгидроксипиридина сукцината в матрице сохраняется до достижения его содержания 0,2 грамма в 25 см2, при дальнейшем увеличении концентрации JTB в пластыре-ТДТС скорость трансдермальной подачи изменяется не пропорционально.

Динамика трансдермальной подачи натрия поли(дигидроксифенилен)-тиосульфоната из пластыря-ТДТС площадью 25 см2 при содержании ЛВ 0,027 грамма совпадает с динамикой его трансдермальной подачи из матрицы с содержанием ЛВ 0,055 грамма. При увеличении количества ЛВ в пластыре до 0,081 и 0,108 грамма скорость трансдермальной подачи увеличивается, но не пропорционально количественному содержанию ЛВ в матрице.

1.3 Исследование стабильности разработанных составов

Для решения задачи по исследованию стабильности пластырей-ТДТС методом долгосрочных испытаний при хранении их в реальных условиях и выбора рациональной упаковки 6 сконструированных составов с этилметилгидроксипиридина сукцинатом и 3 состава с натрия поли(дигидроксифенилен)тиосульфонатом, ламинированные силиконизи-рованной бумагой (серия №1) и герметично ламинированные светонепроницаемой алюминиевой фольгой (серия №2), отложены на хранение в течение 2 лет в бумажные пакеты (температура 20±2°С, относительная влажность воздуха 60%). По истечении 6, 12, 18, 24 месяцев хранения проводили анализ пластырей-ТДТС. Результаты анализа оптимальных составов с этилметилгидроксипиридина сукцинатом и натрия поли(дигидроксифенилен)-тиосульфонатом, хранившихся на протяжении 2 лет, представлены в табл.5.

Таблица 5 - Результаты анализа пластырей-ТДТС с этилметилгидроксипиридина сукцинатом и натрия поли(дигдроксифенилен)-тиосульфонатом при хранении в течение 2 лет__

Результаты анализа пластырей-ТДТС с этилметилгидроксипиридина сукцинатом, ламинированные силиконизированной бумагой и светонепроницаемой алюминиевой фольгой

Наименование показателя Хар-ка свежеприготовленного состава Характеристика составов после хранения

в течение 6 месяцев в течение 12 месяцев в течение 18 месяцев в течение 24 месяцев

Продолжение табл. 5

Описание Бесцветная, прозрачная масса Бесцветная,' прозрачная масса Бесцветная, прозрачная масса Бесцветная, прозрачная масса Бесцветная, прозрачная масса Слабожёлтое окрашивание массы Бесцветная, прозрачная масса Слабожёлтое окрашивание массы Бесцветная, прозрачная масса

Подлинность + +* + +* + +* + +* +

Колич-ное содержание ЛВ,(г) 0,0486± 0,0007 0,0486* 0,0007 0,0475± 0,0003 0,0474* ■ 0,0005 0,0469± 0,0008 0,047* 0,0006 0,0469± 0,0018 0,0483± 0,0005 0,0431± 0,0007 0,0480* 0,0008

Водородный показатель рН 4,928±0,11 4,928*0,11 4,904±0,08 4,92 НО, 09 4,889±0,10 4,916±0,09 4,809±0,07 4,913*0,08 4,822±0,10 4,915*0,08

Количество пластырной массы (мг) на 25 см2 495,0±1,48 495,0*1,48 493,0±1,49 496,0*1,51 497,4±1,40 498, 0*1, 5 2 487,1±1,46 500,1*1,63 466,0±1,57 494,8*1,61

Микробиологическая чистота Категория 2 Категория 2 Категория 2 Категория 2 Категория 2 Категория 2 Не соответ. Категория 2 Не соответ. Категория 2

Адгезивные свойства, Н/см (50мм/мин) 1,66*0,07 1,64*0,11 1,62*0,10 1,58*0,10 1,54*0,14

Результаты анализа пластырей-ТДТС с натрия поли(дигидроксифенилен)тиосульфонатом, ламинированные силиконизированной бумагой и светонепроницаемой алюминиевой фольгой

Наименование показателя Хар-ка Характеристика составов после хранения

товленного состава в течение бмесяцев в течение 12 месяцев в течение 18 месяцев в течение 24 месяцев

Описание Адгезивная масса тёмно-коричневого цвета; Адгезивная масса тёмно-коричневого цвета Адгезивная масса тёмно-коричневого цвета; Адгезивная масса тёмно-коричневого цвета Адгезивная масса тёмно-коричневого цвета; Адгезивная масса тёмно- коричневого цвета Адгезивная масса тёмно-коричневого цвета; Адгезивная масса тёмно- коричневого цвета Адгезивная масса тёмно-коричневого цвета; Адгезивная масса тёмно-коричневого цвета

Подлинность +* + +* + +* + +* + +* +

Продолжение табл. 5

Колич-ное содержание ЛВ, (г) 0,0515±0,0003 0,0515±0,0003 0,0466±0,0008 0,0489^0,0004 0,0431 ±0,0005 0,0486±0,0003 0,0397± 0,0006 0,0482 ±0,0004 0,0362±0,0006 0,0478±0,0005

Водородный показатель рН 7,331±0,216 . 7,330:0,216 7,096±0,123 7,297±0,102 6,769±0,139 7,253±0,092 6,692±0,14 7,217 ±0,11 6,63 8±0,137 7,203±0,129

Количество пластырной массы, (мг) 596,8±4,5 596,8±4,5 531,3±1,8 595,4±1,2 484,5± 1,4 594,2±1,6 442,3 ± 1,6 593,8±1,9 403,1 ±1,7 592,7±1,8

Микробиологическая чистота Категория 2 Категория 2 Категория 2 Категория 2 Категория 2 Категория 2 Не соответ. Категория 2 Не соответ. Категория 2

Адгезивные свойства, Н/см l,46i0,068 1,43+0,061 1,39±0,059 1,3б±0,058 1,33±0,056

Примечание: курсивом отмечены результаты анализа пластырей серии №2 (пластыри, герметично ламинированные светонепроницаемой алюминиевой фольгой); * - звёздочкой обозначены положительные результаты физико-химических методов исследования подлинности ЛВ в составе ЛФ.

Результаты исследования, проведённые методом диализа in vitro, указывают на то, скорость трансдермальной подачи из свежеприготовленного пластыря-ТДТС на протяжении плато пролонгации составляет 1,105 мкг/ч-см2, через 6 месяцев хранения незначительно увеличивается до 1,21 мкг/ч см2 с постепенным снижением значений до 1,16 мкг/ч см2 через 24 месяца хранения.

Скорость трансдермальной подачи натрия поли(дигидроксифенилен)-тиосульфоната из свежеприготовленного пластыря-ТДТС в период с 48-й по 168-й час составляет 1,48±0,01 мкг/ч-см2 с постепенным снижением значений до 1,42±0,02 мкг/ч-см2 через 24 месяца хранения. Сопротивление отслаивания, количественное содержание JIB, значение водородного показателя значимо не изменялись при хранении составов с антиоксидантами в течение 2 лет, герметично ламинированных алюминиевой фольгой.

Таким образом, проведённые долгосрочные испытания стабильности позволили определить оптимальные составы пластырей-ТДТС с этилметилгидроксипиридина сукцинатом и натрия поли(дигидроксифенилен)-тиосульфонатом и выбрать материал для ламинирования. Пластыри-ТДТС, герметично ламинированные светонепроницаемой алюминиевой фольгой, стабильны при долгосрочных испытаниях на протяжении 2 лет хранения.

2.Разработка норм качества трансдермальных терапевтических систем с этилметилгидроксипиридина сукцинатом и натрия поли(дигидроксифенилен)тиосульфонатом

В процессе производства пластырей-ТДТС традиционным является разработка норм качества для их стандартизации. Оптимальные реологические характеристики пластырных масс обеспечивают однородность массы, а, следовательно, достижение равномерности распределения ее на пленке-подложке, сцепление с пленкой-подложкой. В результате проведённого исследования рассчитаны такие показатели как напряжение сдвига (т, Па), динамическая вязкость (г|, Па с) и скорость сдвига (у, с"1). По полученным данным построены кривые течения и вязкости, которые интерпретированы по Гебхарду Шрамму. Кривая течения подтверждает, что исследуемые трансдермальные- матрицы являются структурированными системами, течение которых начинается после приложения некоторого напряжения, при этом в период убывающего напряжения вязкость систем восстанавливается.

Динамическая вязкость сконструированной пластырной массы с этилметилгидроксипиридина сукцинатом находится в интервале от 4,85 до 5,93 Па-с., с натрия поли(дигидроксифенилен)тиосульфонатом в интервале от 1,22 до 10,29 Па с.

Одним из самых важных свойств для трансдермальных терапевтических систем, пластырей, защитных мазей является адгезия, так как в случае отклеивания или сползания с места аппликации терапевтический эффект ЛС снижается или полностью исчезает. Среди показателей качества пластырей-ТДТС специфическим тестом является «Сопротивление отслаивания», которое исследовали на разрывной машине РМИ-5 при двух скоростях отрыва: 50 и 100мм/мин. Исследование проводили на кафедре медицинской и биологической физики ГБОУ ВПО СГМА Минздрава России.

В качестве препаратов сравнения использованы перцовый пластырь («Верофарм», Россия) и трансдермальный пластырь «Никоретте» («МакНил», Швеция, табл.6).

Таблица 6-Результаты исследования сопротивления отслаивания пластырей на разных скоростях отрыва___

Исследуемые пластыри / Сопротивление отслаивания при двух скоростях отрыва Трансдермальный пластырь «Никоретте» Перцовый пластырь ТДГС с этилметилгидроксипиридина сукцинатом ТДТС с натрия поли(дигидрокси-фенилен)гио-сульфонатом

^ 5ИЯо юс» Н/см 1,44/1,56 1,14/1,26 1,66/1,74 1,46/1,56

Относительная погрешность метода (е), % ±4,72У±4,3<5 ±5,97/±5,40 ±4,10/±3,91 ±4,66/±4,36

Значения сопротивления отслаивания исследуемых пластырей при двух скоростях отрыва достоверно отличаются друг от друга, при этом исследуемый

показатель укладывается в оптимальный интервал значений сопротивления отслаивания 0,35-1,75 Н/см согласно данных литературы.

При исследовании подлинности этилметилгидроксипиридина сукцината в составе пластыря-ТДТС изучены УФ-спектры поглощения растворов препарата и PCO этилметилгидроксипиридина сукцината, приготовленных для количественного определения, которые в области от 240 до 340 нм имеют максимум при одной и той же длине волны (297±3 нм). ТСХ на пластинах «Сорбфил» марки ПТСХ-АФ-В-УФ также подтверждает наличие этилметилгидроксипиридина сукцината в составе пластыря-ТДТС.

Для разработки методики спектрофотометрического анализа количественного определения этилметилгидроксипиридина сукцината и натрия поли(дигидроксифенилен)тиосульфоната в пластырях-ТДТС в присутствии ВВ проанализированы электронные спектры поглощения стандартного образца этилметилгидроксипиридина сукцината, натрия поли(дигидроксифенилен)-тиосульфоната и ВВ, входящих в состав пластырей-ТДТС. Измерение оптической плотности проводили в диапазоне волн 240-340 нм в максимуме 297±3 нм (для мексидола) и в диапазоне волн 200-380 нм в максимуме 305±3 нм. Из всех ВВ, входящих в состав матрицы, пласдон К90 и ПВП КЗО не имеют максимума поглощения в этих диапазонах волн, но оказывают значительное влияние на поглощение JIB. С целью учёта фонового влияния ВВ на поглощение этилметилгидроксипиридина сукцината и натрия поли(дигидроксифенилен)тиосульфоната в диапазонах волн 240-340 нм и 200380 нм экспериментально рассчитывали поправочные коэффициенты (К=0,93 и К=0,98 соответственно), значения которых учитывали при определении количественного содержания JIB в тЛФ.

Для подтверждения линейности предлагаемой методики на примере стандартного образца строили градуировочный график зависимости оптической плотности от концентрации раствора этилметилгидроксипиридина сукцината.

Рисунок 2 - График зависимости оптической плотности от концентрации раствора этилметилгидроксипиридина сукцината.

В результате установлено, что в данной области концентраций измеряемого раствора этилметилгидроксипиридина сукцината (4-20 мкг/мл) график имеет линейный характер и описывается уравнением у=0,035х.

Коэффициент корреляции равен 0,998, значение относительной погрешности ±1,77%, что указывает на возможность использования методики с целью количественного определения содержания JEB в данном диапазоне концентраций.

В области концентраций измеряемого раствора натрия поли(дигидроксифенилен)тиосульфоната (8-100 мкг/мл) график также имеет линейный характер и описывается уравнением у=0,019х+0,017. Коэффициент корреляции равен 0,999, значение относительной погрешности ±1,38%.

УФ-спектр водного раствора натрия поли(дигидроксифенилен)-тиосульфоната, приготовленного для количественного определения, в области от 200 до 380 нм имеет плечо при 303-307 нм. Проведено исследование ИК-спектров пластырной массы.

рН 1% водного раствора компонентов матрицы пластыря-ТДТС с этилметилгидроксипиридина сукцинатом составляет 4,915±0,08. рН 1% водного раствора компонентов матрицы с натрия поли(дигидроксифенилен)-тиосульфонатом составляет 7,203±0,129.

С целью исследования однородности дозирования пластырной массы при изготовлении пластырей-ТДТС с этилметилгидроксипиридина сукцинатом и натрия поли(дигидроксифенилен)тиосульфонатом определяли количество пластырной массы, наносимой на 1 м2 подложки.

Количество пластырной массы (М, г), в пересчете на 1 м2, вычисляли по формуле 1:

м = м1^Х 2Ш (1)

где М - количество пластырной массы на 1 м2, г; Mi - средняя масса 5 пластырей (масса подложки + пластырная масса), г; Mr- средняя масса подложек 5 пластырей, г.

Количество пластырной массы с этилметилгидроксипиридина сукцинатом на 1 м2 составляет 198,0±2,30 грамм. Количество пластырной массы с натрия поли(дигидроксифенилен)тиосульфонатом на 1 м2 составляет 238,73±3,29грамма. Потеря в массе при высушивании пластырной массы с этилметилгидроксипиридина сукцинатом составляет 13,08±1,24%, пластырной массы с натрия поли(дигидроксифенилен)тиосульфонатом 14,79±0,89%, что укладывается в оптимальный интервал значений от 6-15% для трансдермальных пластырей типа «Пе'ркутены». •

Тест «Растворение» in vitro является биофармацевтическим методом исследования и широко используется в фармации не только для оценки биофармацевтических свойств ЛП с контролируемым высвобождением, стабильности ЛП, но и стандартизации ЛФ, таких как таблетки, капсулы, суспензии, ТДГС, мази, суппозитории, вагинальные таблетки, жевательная резинка для медицинского применения, имплантаты.

В качестве официальной всеми ведущими зарубежными фармакопеями, а также ОФС 42-0003-04 «Растворение» принята методика теста «Растворение» с

принудительной конвекцией, где используются аппараты «вращающаяся корзинка» - аппарат 1 и «лопастная мешалка» - аппарат 2. Британская и Американская Фармакопеи (USP) допускают также применение и других типов приборов: аппарат 3 — «поршневой цилиндр», аппарат 4 — «проточная ячейка», аппарат 5 - лопастная мешалка со стальным диском, аппарат 6 -«вращающийся цилиндр». Для исследования трансдермальных пластырей обычно используют аппараты 5,6.

В качестве среды растворения при исследовании ТДТС с антиоксидантами и антигипоксантами использовали воду очищенную (для тЛФ с этилметилгидроксипиридина сукцинатом) и 0,05% раствор натрия метабисульфита в фосфатном буфере (pH 7,4) для тЛФ с натрия поли(дигидроксифенилен)тиосульфонатом. Температура среды растворения 37±0,5°С, скорость вращения лопасти 50 об/мин. Состав среды растворения подбирали с учётом природы ЛВ, в зависимости от участка кожи для ТДТС, где должно проходить всасывание ЛВ. Параллельно проводили контрольный опыт, исследуя ЛФ без ЛВ. Количественное содержание ЛВ в отобранных пробах определяли УФ-спектрофотометрическим методом.

Для ТДТС при проведении теста «Растворение» профиль растворения должен включать не менее трёх временных интервалов в течение 24 часов наблюдения, позволяющих определить начало высвобождения ЛВ, время максимального высвобождения, а также временной период, подтверждающий пролонгированный характер высвобождения ЛВ из ЛФ.

В проведённом исследовании тест «Растворение» использован с целью стандартизации пластыря-ТДТС с этилметилгидроксипиридина сукцинатом (мексидолом) с использованием аппарата 2 «лопастная мешалка» (тестер растворимости Erweca DT 700). Степень высвобождения ЛВ через 30 минут составляет не более 62%, через 2 часа должна укладываться в диапазон от 62% до 70%, через 4 часа от 70% до 80%, через 24 часа должна быть более 80%.

Степень высвобождения натрия поли(дигидроксифенилен)-тиосульфоната из пластырей-ТДТС с- содержанием 0,027 грамма и 0,054 грамма ЛВ через 30 минут не должна превышать 5%, через 2 часа укладываться в диапазон от 5% до 20%, через 4 часа не должна превышать 40% и через 24 часа степень высвобождения натрия поли(дигидроксифенилен)-тиосульфоната из тЛФ должна быть более 50%.

Определение микробиологической чистоты разработанных пластырей-ТДТС с этилметилгидроксипиридина сукцинатом и натрия

поли(дигидроксифенилен)тиосульфонатом проводили на кафедре микробиологии ГБОУ ВПО СГМА Минздрава России (зав. кафедрой д.м.н., профессор Федосов Е.А.) согласно методике и требований ГФ XII издания: «в 1,0г матрицы трансдермального пластыря не более 100 аэробных бактерий, отсутствие бактерий сем. Enterobacteriaceae, Pseudomonas aeruginosa, Staphilococcus aureus».

З.Фармакотехнологические исследования трансдермальных

терапевтических систем с этилметилгндрокспиридина сукцинатом и натрия поли(дигидроксфенилен)тиосульфонатом

ЗЛТехнологические исследования трансдермальных терапевтических систем пластырного типа с этилметилгидроксипиридина сукцинатом и натрия полиСдигидроксифениленЧтиосульфонатом

Основываясь на результатах биофармацевтических исследований были разработаны технологические схемы производства ТДТС пластырного типа с этилметилгидроксипиридина сукцинатом и натрия поли(дигидроксифенилен)-тиосульфонатом. Схемы построены традиционно, но технологический акцент мы предлагаем сделать на следующих операциях: гомогенизация пластырной массы при производстве пластыря с натрия поли(дигидроксифенилен)-тиосульфонатом, контроль её структурно-реологических свойств, как контролируемый параметр технологического процесса, нанесение пластырной массы на плёнку-подложку, сушка, дозирование пластыря, контроль готовой продукции (рис. 3).

При производстве пластыря-ТДТС с натрия поли(дигидроксифенилен)-тиосульфонатом на стадии получения пластырной массы при проведении операции ей гомогенизации с целью сокращения времени растворения ЛВ, гомогенизации смеси и обеспечения микробиологической чистоты ЛФ использован низкочастотный ультразвук (ультразвуковой скальпель УРСК-7н с волноводом-концентратором), с помощью которого осуществляли озвучивание смеси в течение 30 секунд на частоте 22-25 кГц.

Разработанные технологическая (рис. 3) и аппаратурная схемы производства пластьфя-ТДТС с этилметилгидроксипиридина сукцината включены в лабораторный регламент «Трансмексол 50мг/72ч; 100мг/72ч; 150мг/72ч».

Каждый этап производства ЛП должен служить убедительным доказательством того, что процесс его выпуска проходит в соответствии с намеченным курсом действий. Валидационные испытания позволяют проверить функционирование тестируемой системы в предполагаемых экстремальных условиях ее эксплуатации с тем, чтобы убедиться в сохранении управляемости этой системы. Цель валидации, проведённой в диссертационном исследовании является подтверждение того, что технологический процесс производства пластыря-ТДТС с этилметилгидрокипиридина сукцинатом, осуществляемый на производственной схеме ОАО «Тюменский химико-фармацевтический завод» и ОАО «Екатеринбургская фармацевтическая фабрика» проводится в соответствии с разработанной технологической схемой производства, обладает повторяемостью и позволяет получать продукт, соответствующий требованиям ФСП.

Технологическая схема производства пластыря-ТДТС с этнлмстнлгндроксипнридипа

сукцинатом

ТП 4.3

ТП 4.4

ТП 5.1

BP 1.1 Санитарная обработка производственных помещений

BP 1.2 Санитарная обработка аппаратуры

BP 1.3 Санитарная подготовка технологической одежды персонала

BP 1.4 Подготовка воздуха

BP 2. Взвешивание или отмеривание компонентов

ТП 3.1 Растворение ЛВ в пропиленгликоле-1,2 и спирте этиловом 95%

ТП3.2 Растворение в полученном растворе Пласдона К90

ТПЗ.З Смешивание компонентов

ТП 3.4 Контроль структурно-реологических свойств пластырной массы

ТП 4.1 Нанесение пластырной массы на пленку-подложку

ТП 4.2 Сушка пластыря

BP 1. Санитарная подготовка

Jfr. производства

Отходы

* •

BP 2. Кт.

ТП 3.

Кт.

Ламинирование пластыря

Дозирование пластыря

ТП 4.

Кт.

Качественный анализ, контроль количественного содержания, рН

ТП 5.2 I Тест «Растворение», сопротивление I отслаивания

Подготовка сырья

Потери

Получение пластырной массы

Получение пластыря-ТДТС

Потери

ПОб. Рекуперация

паров 95 %

этанола

ТП 5. Контроль готовой

кт. продукции

УМО 6.1 Фасовка продукта

УМО 6.2 Маркировка

УМО 6.3 Упаковка продукта

УМО 6. Фасовка, упаковка, маркировка готовой продукции

■

Готовая На

продукция склад

Определён перечень критических стадий и параметров процесса производства пластыря-ТДТС с этилметилгидроксипиридина сукцинатом: отвешивание компонентов, операция растворения активного компонента в пропил енгликол е-1,2 и спирте этиловом 95%, растворение полимера, гомогенизация смеси на стадии получения пластырной массы, операция по нанесению пластырной массы на плёнку-подложку, сушка, ламинирование, дозирование на стадии получения пластыря.

Вышеперечисленные стадии и параметры подлежат исследованию при валидации. Контрольные точки (контролируемые параметры) технологического процесса производства пластыря-ТДТС с этилметилгидроксипиридина сукцинатом, критерии оценки представлены в табл.7. Количество загружаемого сырья рассчитано на 1 пластырь-ТДТС площадью 25см2.

Таблица 7 - Контрольные точки технологического процесса производства пластыря-ТДТС с этилметилгидроксипиридина сукцинатом

Наименова ние стадии

1

ВР-2. Подготовка сырья

ТП-3. Получение пластырной массы

Объект контроля

Контрольные точки технологического процесса

Этилметилгидроксипиридина сукцинат (мексидол)

Спирт этиловый 95%

Пропиленгликоль-1,2

Пласдон К90

Количество компонентов, последовательность и режим загрузки

Количество полимера и его растворение в спиртовом растворе

Перемешивание пластырной массы

Контроль структурно-

реологических свойств пластырной массы

Контролируемые параметры_

Размер частиц, мм

Описание

Количество, г

Концентрация, масс.%

Описание

Количество,

Размер частиц, мм Описание

Количество, г

Растворимость этилметилгидроксипиридина сукцината в пропиленглйколе-1,2 и спирте этиловом 95%

Набухаемость растворимость Пласдона К90 в спирте этиловом 95%

Однородность смешения

Динамическая вязкость

Критерий оценки

0,10

Отсутствие

посторонних

примесей

0,05

95

Отсутствие

посторонних

включений

0,225

0,10-0,20

Отсутствие

посторонних

включений

0,22

Однородность системы

Однородность системы

Однородность системы

4,85-5,93Пас

Продолжение табл. 7

ТП-4. Получение пластыря-ТДТС Нанесение пластырной массы на пленку-подложку площадью 25см2 Толщина слоя нанесения, мм 0,3-0,5

Параметры сушки Температура сушки, °С 20

Время сушки, час 24

Остаточная влажность, % 6-15

Размеры пластыря-ТДТС Размеры, мм 50x50

Пластырная масса Масса, мг 495,0±1,48

ТП-5. Контроль готовой продукции Готовый продукт Показатели качества в соответствии с требованиями проекта ФСП Соответствие требованиям ФСП 42-

На основании результатов валидации установлено, что процесс производства разработанного . пластыря-ТДГС, содержащего этилметилгидрокспиридина сукцинат, обладает повторяемостью, устойчивостью и воспроизводимостью.

3.2 Сравнительные биофармацевтические исследования in vitro и in vivo по изучению чрескожного транспорта этилметилгидроксипиридина сукцината и натрия полиСдигидроксифениленУгиосульфоната из трансдермальных терапевтических систем

Для подтверждения способности трансдермального этилметилгидроксипиридина сукцината и натрия поли(дигидроксифенилен)тиосульфоната к чрескожному транспорту были проведены сравнительные биофармацевтические исследования in vitro и in vivo с использованием лоскутов «переживающей» кожи крыс.

Главным барьером, препятствующим проникновению веществ через кожу, являются не все её слои, а только ороговевшая часть эпидермиса. В экспериментах в условиях in vivo на лоскутах кожи, связанных двумя концами с животным, находящимся под наркозом, к сожалению, не удалось зафиксировать проникновение трансдермального этилметилгидроксипиридина сукцината и натрия поли(дигидроксифенилен)тиосульфоната через кожу.

На протяжении всего эксперимента в опытном и контрольном резервуарах наблюдали высвобождение только структурных компонентов гиподермы, поэтому далее в качестве экспериментальной модели для изучения проницаемости кожи in vitro использовали модель «переживающей» кожи животных, с лоскутов которой удаляли слой гиподермы, обильно пронизанный сетью капилляров. Разведение диализата анализировали УФ-спектрофотометрически в диапазоне волн 240-340 нм (для этилметилгидроксипиридина сукцината) и в диапазоне 200-380 нм (для натрия поли(дигидроксифенилен)тиосульфоната).

Отличительные особенности между УФ-спектрами разведений опытного и контрольного резервуаров при использовании лоскутов кожи с удаленной гиподермой зафиксированы только через 6 часов наблюдения: в контрольном образце максимум поглощения спектра соответствовал длине волны 276±2 нм, в опытном образце 291,5±2 нм. В течение суток максимум поглощения УФ-спектра опытного образца смещался вправо и достигал значений длины волны 295±2 нм. При последующем добавлении к 3,0 мл диализата из опытного резервуара 6,0 мл фосфатного буфера (рН 7,4) спектр поглощения достигал максимума при длине волны 325±3 нм, что характерно для этилметилгидроксипиридина сукцината. При этом в контрольном разведении значимых изменений не наблюдали.

На 2-3 сутки эксперимента регистрировали активное высвобождение продуктов распада белка (рН 6,0), что делало невозможным дальнейшее исследование диализата/ В результате эксперимента in vitro регистрировали высвобождение этилметилгидроксипиридина сукцината из пластьфя-ТДГС, но определить количественное содержание его в диализате не удалось.

С целью количественной оценки степени высвобождения и чрескожного проникновения этилметилгидроксипиридина сукцината накладывали сконструированный пластырь на предварительно очищенную от шерсти и гидратированную кожу крыс-самцов (п=7) площадью 5 см2 (содержание JIB 10 мг) на трое суток эксперимента. По истечении времени наблюдения осуществляли смыв с поверхности кожи 0,01М раствором кислоты хлористоводородной и готовили разведение, которое анализировали спекгрофотометрически в диапазоне волн 240-340 нм, в качестве раствора сравнения использовали 0,01М раствор кислоты хлористоводородной. Аналогично проводили контрольный опыт, накладывая на кожу пластырь, не содержащий JIB. Расчёт количественного содержания этилметилгидроксипиридина сукцината проводили с учётом РСО. При количественной оценке смыва с поверхности кожи было обнаружено 25,0±2,3% этилметилгидроксипиридина сукцината.

При проведении биофармацевтических исследований по изучению чрескожного транспорта натрия поли(дигидроксифенилен)тиосульфоната с использованием лоскута «переживающей» кожи с удалённой гиподермой использовали в качестве диализной среды изотонический раствор натрия хлорида. Различия в значениях оптической плотности (D опт.) при длине волны 305±2 нм в опытном и контрольном образцах наблюдали через 6 часов эксперимента. При этом через 24 часа наблюдения значения оптической плотности опытного образца превышали значения оптической плотности контрольного образца в 2,5 раза. В дальнейшем исследуемые значения контрольного образца достоверно не изменялись, а значения оптической плотности опытного образца возрастали на протяжении всего последующего периода наблюдения. Добавление 10% раствора хлорной кислоты, последующее центрифугирование с целью отделения примесей также не обеспечивало достаточную полноту их осаждения. Через 48 часов эксперимента

зафиксирована сине-зелёная окраска диализата в опытном образце, при этом контрольный образец был мутным и не имел сине-зелёного окрашивания.

Натрия поли(дигидроксифенилен)тиосульфонат является полифенольным соединением. Увеличение значений оптической плотности опытного образца через 6 часов от начала эксперимента, возможно, связано с тем, что высвобождающийся натрия поли(дигидроксифенилен)тиосульфонат вступает в полифенол-белковое взаимодействие с образованием белого осадка, при этом диализат в опытном резервуаре более мутный, чем в контрольном, на что указывает и значение оптической плотности. В щелочной среде при взаимодействии с некоторыми реактивами полифенолы приобретают синюю окраску, по-видимому, с этим свойством полифенолов связана сине-зелёная окраска диализата опытного образца через 48 часов наблюдения.

Таким образом, модель «переживающей» кожи животных с удалённой гиподермой может быть использована для изучения чрескожного транспорта ЛВ при применении тЛФ.

4.Сравнительные доклинические токсикологические, биологические и фармакодннамнческие исследования разработанных трансдермальных терапевтических систем с этилметилгидроксипиридина сукцинатом и натрия поли(дигидроксифенилен)тиосульфонатом

4.1 Доклинические токсикологические исследования трансдермальных терапевтических систем с этилметилгидроксипиридина сукцинатом и натрия поли(дигидроксифенилен)тиосульфонатом

Изучение общетоксических свойств пластырей-ТДТС выполнены на базе вивария, ЦНИЛ ГБОУ ВПО СГМА Минздрава России с использованием крыс обоего пола и комплекса методов, рекомендованных Фармакологическим Комитетом для определения субхронической и хронической токсичности. Субхроническую токсичность трансдермальных ЛФ

этилметилгидроксипиридина сукцината и натрия поли(дигидроксифенилен)-тиосульфоната изучали при использовании пластырей-ТДТС в течение 14 дней и 1 месяца.

Основные исследуемые показатели при введении трансдермального этилметилгидроксипиридина сукцината в дозе 75 мг/кг в течение 14 дней или 1 месяца достоверно не отличались от контрольных, а также значений группы сравнения с дозой этилметилгидроксипиридина сукцината 33,7 мг/кг, вводимой внутримышечно на изотоническом растворе натрия хлорида. Дозы трансдермального этилметилгидроксипиридина сукцината 150-300 мг/кг при введении в течение 14 дней с периодичностью замены пластыря 1 раз в три дня, явились повреждающими, но не вызывали гибели животных.

Трансдермальный натрия поли(дигидроксифенилен)тиосульфонат (гипоксен) исследован в дозах 75, 150, 600, 1500, 3000 мг/кг массы тела животного при использовании пластыря в течение 14 дней с периодичностью

замены 1 раз в 7 дней. При наложении пластыря-ТДТС в течение 1 месяца исследованы дозы 75, 600, 1500 мг/кг массы тела. Дозы трансдермального натрия поли(дигидроксифенилен)тиосульфоната 150-1500 мг/кг явились повреждающими, но не способствовали гибели животных.

4.2 Сравнительные биологические исследования трансдермальных терапевтических систем с этилметилгидроксипиридина сукпинатом и натрия поли( дигидроксифениленУгиосульфонатом

Одним из первых этапов исследований явилось изучение раздражающего действия пластырей-ТДТС с этилметилгидроксипиридина сукцинатом и натрия поли(дигидроксифенилен)тиосульфонатом для установления величины их раздражающего эффекта на слизистую оболочку глаза морских свинок. Местнораздражающее действие тЛФ при длительном контакте с кожей проверяли на коже морских свинок, морфологические изменения кожи при применении разработанных пластырей-ТДТС изучали гистологически.

ТДТС пластырного типа не оказывали раздражающего действия при нанесении изотонического раствора компонентов матрицы на конъюнктиву глаза морских свинок. Результаты исследования местнораздражающего действия, гиперчувствительности кожи после многократных аппликаций позволяют отнести изучаемые пластыри-ТДТС к нулевому классу выраженности раздражающих свойств.

Литературные данные свидетельствуют о том, что разнообразные ЛВ при нанесении на поверхность кожи могут воздействовать на морфофункциональные её свойства. С целью изучения возможного воздействия компонентов пластырей-ТДТС на структуру кожи были проведены гистоморфологические исследования срезов кожи морских свинок.

Проводили системную полуколичественную (по трёх-бальной шкале) и количественную (подсчёт и измерение) оценку некоторых гистологических параметров строения кожи. Исследовали 21 первичный абсолютный показатель и 6 расчётных относительных показателя. Гистоморфологические исследования кожи проведены на базе ЦНИЛ ГБОУ ВПО СГМА Минздрава России.

Результаты гистоморфологических исследований указывали на то, что после применения пластыря-ТДТС с этилметилгидроксипиридина сукцинатом в течение 5 дней и пластыря с натрия поли(дигидроксифенилен)-тиосульфонатом в течение 7 дней возникали 3 основных типа индивидуальной реакции животных: выраженное утолщение эпидермиса, диффузная лейкоцитарная инфильтрация, отражающая реакцию всех участков кожи на тримингование, гипертрофия сальных желёз. При этом раздражающего действия на кожу крыс и других патологических её изменений не выявлено.

4.3Сравнительные фармакодинамические исследования церебро-протекторной активности трансдермальной терапевтической системы с этилметилгидроксипиридина сукцинатом

Эксперименты по изучению влияния ТДТС пластырного типа с этилметилгидроксипиридина сукцинатом на процессы гидратации в ткани головного мозга были выполнены на 100 белых лабораторных крысах обоего пола массой 220,0-240,0. г. Животные находились на обычной лабораторной диете. Все животные были разделены на 11 групп: интактную, опытные группы (4), контрольные группы (4), группа сравнения (1), контроль для группы сравнения (1). В каждой серии экспериментов использовано не менее 9 крыс приблизительно одинаковой массы, с примерно равным соотношением самцов и самок.

Процессы гидратации, протекающие в мозговой ткани контрольных групп животных (КТ 1-4), которым наложен пластырь-ТДТС без ЛВ на фоне черепно-мозговой травмы (ЧМТ), носили динамичный и выраженный характер, что проявлялось в увеличении содержания общей воды, свободной фракции и снижении связанной фракции, а также значения коэффициента гидратации. Отмечалась выраженная активация процессов СРО в супернатанте ткани мозга, проявляющаяся в повышении значений величины светосуммы хемшпоминесценции, максимальной интенсивности хемилюминесцентного свечения, увеличении 'тангенса угла подъёма быстрой вспышки при одновременном снижении значения отношения Фмакс./Б и тангенса угла спада быстрой вспышки. Исследование показателей индуцированной биохемилюминесценции в супернатанте мозга проводили на биохемшпоминометре ЦНИЛ ГБОУ ВПО СГМА Минздрава России.

Трансдермальный этилметилгидроксипиридина сукцинат в дозах 30 мг/кг и 50 мг/кг при лечебно-профилактическом введении на модели ЧМТ проявлял выраженную церебропротекторную активность, проявляющуюся в уменьшении содержания общей воды, свободной фракции и увеличении содержания связанной воды, коэффициента гидратации, а также снижению активации процессов СРО в ткани мозга. На фоне применения трансдермалыюго этилметилгидроксипиридина сукцината в дозах 30 мг/кг и 50 мг/кг достоверно снижалось содержание общей воды в гомогенате ткани мозга на 1,89% (р1<0,001) и 1,98% (р1<0,05), свободной фракции на 4,32% (р1<0,0001) и 5,84% (р1 <0,0001) соответственно относительно показателей контрольной группы животных при одновременном увеличении содержания связанной воды на 2,16% (р1<0,0001) и 14,56% (р1<0,0001), а также коэффициентов гидратации в 1,23-1,24 раза (р1<0,0001). При этом содержание свободной фракции в гомогенате мозга опытной группы превышало показатели группы сравнения на 1,08% (р2<0,05) и на 2,90% (р2<0,05), а содержание связанной фракции было меньше на 0,67% (р2<0,01) и 5,34% (р2<0,01) относительно показателей группы сравнения.

Трансдермальный этилметилгидроксипиридина сукцинат в дозах ЗОмг/кг и 50 мг/кг достоверно нивелировал патологически завышенные или заниженные показатели индуцированной . биохемилюминесценции в супернатанте мозга, снижая активность реакций свободно-радикального окисления и повышая общий антиоксидантный статус организма.

Доза трансдермального этилметилгидроксипиридина сукцината 20 мг/кг явилась терапевтически не эффективной на модели ЧМТ, так как содержание общей воды, свободной фракции, связанной воды и значение коэффициента гидратации достоверно не отличалось от контрольных значений. При применении пластыря-ТДТС в дозе 100 мг/кг все изменения водного баланса имели тенденцию к нарастанию, что свидетельствовало о дальнейшем прогрессировании процессов дезорганизации биомакромолекул. Отмеченные изменения водного баланса, возможно, связаны с проявлением прооксидантной активности препарата.

4.4 Сравнительные фармакодинамические исследования гастропротекторной

активности_трансдёрмальных_терапевтических_систем_с

этилметилгидроксипиридина сукцинатом и натрия полиСдигидроксифенилен")-тиосульфонатом натрия

Исследования проведены на белых беспородных крысах-самцах массой 220-240 грамм. Гистологические срезы слизистой оболочки желудка (СОЖ) исследованы на кафедре патологической анатомии (зав. кафедрой д.м.н, профессор Доросевич А.Е.).

Животные были разделены на 29 групп (п=7): интактная группа (И); контрольные группы КТЭ 1-6, подвергшиеся воздействию 18-часового иммобилизационного стресса с прикреплённым на межлопаточную область пластырем без ЛВ; опытные группы животных (ЭПТ 1-7), которым накладывали пластырь-ТДТС с этилметилгидроксипиридина сукцинатом (ТЭ) в течение 5 дней до иммобилизации и- в момент воздействия стресса в дозах 5 мг/кг, 10 мг/кг, 15 мг/кг, 20 мг/кг, 40 мг/кг, 75 мг/кг (в 1см2 - 2мг ЛВ), 150 мг/кг (в 1см2-4мг ЛВ).

Слизистая оболочка желудка интактной группы животных нежно розового цвета, блестящая, сочная, количество слизи незначительно, складчатость умеренно выражена, петехиальных кровоизлияний и видимых деструкций не обнаружено (рис. 4).

Острый иммобилизационный стресс у животных контрольных групп сопровождался не только поражением слизистой оболочки желудка (СОЖ), появлением эрозий клиновидно-щелевидной формы (рис. 5), но и гипертрофией надпочечников, инволюцией тимуса, селезёнки, активацией процессов свободно-радикального окисления (СРО) в ткани желудка.

Установлено, что эффективно курсовое трансдермальное введение этилметилгидроксипиридина сукцината в дозах 20-75 мг/кг и натрия поли(дигидроксифенилен)тиосульфоната в дозах 15-40 мг/кг.

Трансдермальный этилметилгидроксипиридина сукцинат и натрия поли(дигидроксифенилен)тиосульфонат способствовали уменьшение1 количества дефектов СОЖ, общей площади поражения, снижению активностл реакций свободно-радикального окисления и повышению антиоксидантногэ статуса организма относительно значений контрольных групп животных, не уступая по эффективности группам сравнения и в некоторых случаях даже превосходя их (р<0,05).

Гастропротекторный эффект транедермального этилметилгидроксипиридина сукцината (ТЭ) в дозах 75-150 мг/кг был более выраженным, чем i группе сравнения с внутрижелудочным введением субстанции в дозе 20 мг/кг.

При применении транедермального натрия поли(дигидроксифенилен) тиосульфоната (ТП) в дозах 25-40 мг/кг гастропротекторный эффект был аналогичен эффекту группы сравнения при внутрижелудочном введении субстанции в дозе 50 мг/кг.

Крыса S, вес 171,0 г. Окраска

гематоксилином и эозином. Увеличение х 180. Описание в тексте.

Рисунок 4- Слизистая оболочка желудка интактной группы животных.

Крыса (5, вес 224,8 г. Увеличение *40 (объектив). Эрозия клиновидной формы. Слущивание эпителия валиков. Рисунок 5 - Слизистая оболочка желудка крыс контрольной группы.

Гистологическое исследование гастробиоптатов опытных групп свидетельствовало об отсутствии дефектов СОЖ (рис. 6,7). Наблюдали стазы в капиллярах, слущивание эпителия валиков, имеющее вторичный характер и, по-видимому, связанное с дисциркуляторным повреждением в подслизистом слое.

Курсовое транедермальное введение этилметилгидроксипиридина сукцината в дозах 40-150 мг/кг' и натрия поли(дигидроксифенилен)-тиосульфоната в дозах 15-60 мг/кг способствовало достоверному уменьшению степени гипертрофии надпочечников, инволюции тимуса и селезёнки, при этом стресс-протекторный эффект транедермального этилметилгидроксипиридина сукцината сопоставим с эффектом группы сравнения, а в дозах 75-150 мг/кг даже превышал его.

, вес 229,1 г. Увеличение *40 (объектив). Полнокровные сосуды в подслизистом слое, лизис эритроцитов.

Крыса в, вес 224,6 г. Увеличение х40 (объектив). Стазы в капиллярах. Лейкоцитарная инфильтрация вокруг сосудов, спазм сосудов.

Рисунок 6 - Слизистая оболочка желудка крыс при стрессорном поражении на фоне фармакологической коррекции ТП в дозе 25 мг/кг.

Рисунок 7 - Слизистая оболочка желудка крыс при стрессорном поражении на фоне фармакологической коррекции ТЭ в дозе 40 мг/кг.

Таким образом, свободно-радикальная и антиоксидантная активность этилметилгидроксипиридина сукцината (мексидола) и натрия поли(дигидрокси-фенилен)тиосульфоната (гипоксена), безусловно, создаёт благоприятный фон для проявления гастропротекторного и стресс-протекторного эффектов тЛФ этилметилгидроксипиридина сукцината и натрия поли(дигидроксифенилен)-тиосульфоната.

5.Разработка методологической схемы исследований и производства трансдермальных лекарственных форм

Создание и рациональное производство тЛФ возможно только при всесторонне обоснованном технологическом процессе, что требует, в том числе оптимального планирования проведения эксперимента. С целью оптимизации исследований, как на предварительном, так и основном этапах целесообразна разработка единой схемы действий.

В результате проводимых исследований должны быть выявлены особенности в технологии тЛФ с антиоксидантами и антигипоксантами, установлены определённые закономерности на отдельных этапах производства тЛФ, в том числе при выборе ВВ с целью конструирования ЛФ, экспериментально подтверждена проницаемость кожи для ЛВ, вводимых трансдермально, разработаны нормы качества, проведены технологические исследования по выбору рациональной упаковки.

Закономерность, установленная между критериями, характеризующими качество ЛВ, ВВ и прогнозируемых тЛФ (пластыри, мази, гели, ТДТС), с одной

стороны, а также качественным и количественным содержанием ВВ, с другой стороны, позволила разработать алгоритм выбора оптимального состава тЛФ.

Для оптимизации процесса выбора основы для гелей, мазей и матричной композиции для пластырей-ТДТС необходимо:

-изучить ассортимент и физико-химические свойства ЛВ и ВВ; -спрогнозировать и экспериментально подтвердить чрескожный транспорт ЛВ, совместимость ЛВ и ВВ с целью выбора оптимальной композиции с использованием компьютерного моделирования;

-выбрать ВВ по целевому назначению: пролонгаторы, гелеобразователи, растворители, консерванты, антиоксиданты, пенетраторы с учётом физико-химических свойств ЛВ;

-выбрать составы основ трансдермальных гелей, мазей, пластырей и приготовить модельные образцы согласно технологической схеме;

-изучить структурно-реологические свойства гелевых, мазевых основ и матричных композиций; •

-оценить намазываемость и экструзию гелевых или мазевых основ; -определить коэффициенты разжижения модельных образцов гелей на различных полимерных основах.

-изучить осмотические свойства модельных образцов гелей или мазей методом диализа;

-оценить адгезивные свойства модельных пластырных образцов; -определить характер, степень высвобождения и значения скорости трансдермальной подачи в результате проведения биофармацевтических исследований in vitro методом диализа с целью выбора оптимальных составов тЛФ;

-определить оптимальное значение рН для гелей, мазей, пластырных масс (рН 5,5-6,5) с целью предотвращения раздражающего действия тЛФ; -выбрать оптимальное соотношение компонентов основы; -выбрать оптимальные составы гелей, мазей, пластырей с пролонгированным характером высвобождения и длительной постоянной скоростью трансдермальной подачи;

-исследовать стабильность выбранных составов методом ускоренного старения и выбрать стабильные составы;

-провести первичный скрининг биологической активности стабильных составов гелей, мазей, пластырных масс на модели Paramecium caudatum; -определить и выбрать оптимальный состав тЛФ.

Предложенный нами алгоритм оптимизации выбора основы тЛФ легко воспроизводим в промышленных условиях и положен в основу обобщенного модуля исследований по созданию и производству TTC.

При освоении производства ЛФ необходимо выделять два этапа -начальный, и этап промышленного выпуска. Особенностью этого этапа является то, что воздействия на все' другие виды экологических ресурсов не учитываются, учет ведется только для таких технико-экономических показателей как максимальный коэффициент полезного действия,

максимальный выход полезного продукта, использование технических достижений, то есть показателей которые сводили бы к минимуму затраты на единицу продукции.

Для предотвращения воздействия на данный вид ресурсов применяются активные методы охраны окружающей среды. Это сфера экологизации производства, предусматривающая совершенствование существующих и разработку новых технологий производства, обеспечивающих максимальное снижение материальных и энергетических затрат.

Наиболее перспективным среди активных методов охраны окружающей среды и рационального природопользования является создание безотходных технологий. Все вопросы промышленной экологической безопасности и ресурсосбережения должны быть учтены на всех этапах технологического процесса.

Составляя производственный блок методологической схемы, мы учли эти общие, но важные для любой технологии позиции. Методологическая схема системной разработки и усовершенствования технологии тЛФ должна включать также подсистему подготовки сырья. Производители должны соблюдать правила ОМР и подвергать аналитическому контролю все исходные материалы.

Проблема качества субстанций в настоящее время широко обсуждается на различных уровнях и для ее решения принимаются самые разнообразные меры. В частности, повышение фармакопейных требований к субстанциям по микробиологической чистоте, определения следов растворителей, тяжелых металлов, радионуклеотядов (для субстанций растительного происхождения), прозрачности методов испытания на чистоту, а также введение особого порядка регистрации субстанций, так называемых «центральных досье».

Кроме того, проводится совершенствование аналитических методик, включая их валидацию и транспарантность, широкое использование стандартных образцов. Особенно, на наш взгляд, следует отметить процесс валидации, как один из важных составляющих производства лекарственных препаратов по СМР.

Мы также учли необходимость этого блока, поскольку в нашем случае речь идет о ТДТС - системе инновационной, в исследовании и технологии которой есть нерассмотренные, а лишь сформулированные позиции.

Нами предложена комплексная методологическая схема исследования и производства ТДТС. Производственный блок данной схемы апробирован на ОАО «Тюменский химико-фармацевтический завод», ОАО «Екатеринбургская фармацевтическая фабрика» и подтвержден соответствующими документами. Обобщенный модуль исследований по созданию и производству ТДТС представлен на рис. 8. На основании результатов проведённого исследования нами сформулированы основные рекомендации по исследованию и производству ТДТС пластырного типа. Это использование нетоксичных адгезивов, чувствительных к давлению и обладающих адгезией к коже человека, а также высокими когезионными характеристиками, ВВ высокой

степени чистоты марки «х.ч.» или «ч.д.а.», не содержащих примесей альдегидов с целью обеспечения стабильности ЛФ при хранении. Выбор оптимального состава должен быть проведён с учетом результатов биофармацевтических исследований: степени высвобождения ЛВ из ЛФ, скорости его трансдермальной подачи, коэффициента использования ЛВ и длительности плато пролонгации. Состав матрицы должен обеспечивать оптимальное значение рН для тЛФ (5,5-6,5). Необходимо использовать светонепроницаемую герметичную упаковку в случае изготовления пластырей-ТДТС со светочувствительными ЛВ. Обязательное соблюдение правил охраны труда и техники безопасности при работе с этанолом.

Блок 1

Рисунок 8 -Обобщенный модуль исследований по созданию и производству ТДТС

Общие выводы

1.Впервые разработаны трансдермальные терапевтические системы с этилметилгидроксипиридина сукцинатом и натрия поли(дигидроксифенилен)-тиосульфонатом матриксного типа. В качестве вспомогательного комплекса трансдермальная терапевтическая система с этилметилгидроксипиридина сукцинатом содержит пропиленгликоль-1,2, поливинилпирролидон высокомолекулярный (пласдон К90 ISP). В качестве вспомогательного комплекса трансдермальная терапевтическая система с натрия поли(дигидроксифенилен)тиосульфонатом содержит пропил енгликоль-1,2, натрия метабисульфит, поливинилпирролидон среднемолекулярный (ПВП КЗО).

2.Проведенные квантово-химические расчёты физико-химических дескрипторов действующих компонентов и вспомогательных веществ: теплоты гидратации, энергии гидратации, теплоты образования молекулы с учётом эффекта гидратации, величины десятичного логарифма коэффициента распределения в модельной системе «октанол-вода» позволяют упростить выбор оптимальных составов трансдермальных терапевтических систем с этилметилгидроксипиридина сукцинатом и натрия поли(дигидроксифенилен)-тиосульфонатом.

3.В результате проведения биофармацевтических исследований по выбору оптимальной композиции вспомогательных веществ с помощью модифицированной методики диализа через биологическую мембрану рассчитаны скорость трансдермальной подачи этилметилгидроксипиридина сукцината 1,105±0,Ó11 мкг/ч-см2, степень высвобождения 56,88% и коэффициент использования этилметилгидроксипиридина сукцината из матрицы 56,81%. Скорость ■ трансдермальной подачи натрия поли(дигидроксифенилен)тиосульфоната составила 1,48±0,03 мкг/ч-см2, степень высвобождения 23,69% и коэффициент использования натрия поли(дигидроксифенилен)тиосульфоната из матрицы 23,69%.

4.Разработанная оптимальная технологическая схема производства трансдермальных терапевтических систем с этилметилгидроксипиридина сукцинатом, натрия поли(дигидроксифенилен)тиосульфонатом указывает на то, что основными технологическими стадиями являются получение пластырной массы, нанесение пластырной массы на плёнку-подложку, ламинирование и дозирование. Установлены критические точки данного технологического процесса, выполнена его валидация.

5.Исследована стабильйость трансдермальных терапевтических систем с этилметилгидроксипиридина сукцинатом и натрия поли(дигидроксифенилен)-тиосульфонатом методом долгосрочных испытаний при хранении в различных упаковках. Сконструирована герметичная светонепроницаемая упаковка, обеспечивающая сохранность лекарственной формы в течение 2 лет.

6.Исследован и доказан чрескожный транспорт этилметилгидроксипиридина сукцината и натрия поли(дигидроксифенилен)тиосульфоната с использованием биофармацевтических методов in vivo и in vitro.

7.В результате исследования структурно-реологических свойств пластырной массы с этилметилгидроксипиридина сукцинатом и натрия поли(дигидрокси-фенилен)тиосульфонатом установлен оптимум динамической вязкости для массы с мексидолом 4,85-5,93 Па-с, для массы с гипоксеном 1,22-10,29 Па с. Разработаны нормы качества для трансдермальной терапевтической системы с этилметилгидроксипиридина сукцинатом по следующим показателям: количество пластырной массы 198,0±2,30 г/м2, сопротивление отслаивания 1,66±0,07 Н/см, потеря в массе при высушивании 13,08±1,24%. Разработаны нормы качества для трансдермальной терапевтической системы с натрия поли(дигидроксифенилен)тиосульфонатом по следующим показателям: количество пластырной массы 238,73±3,29 г/м2, сопротивление отслаивания 1,46±0,07 Н/см, потеря в массе при высушивании 14,79±0,89%.

8.Проведены биологические исследования трансдермальных терапевтических систем с этилметилгидроксипиридина сукцинатом и натрия поли(дигидрокси-фенилен)тиосульфонатом по оценке раздражающего, местнораздражающего действия и гиперчувствительности кожи, позволяющие отнести разработанные пластыри-ТДТС к 0 классу выраженности раздражающих свойств.

9.В результате проведения доклинических токсикологических исследований трансдермальных терапевтических систем с этилметилгидроксипиридина сукцинатом и натрия поли(дигидроксифенилен)тиосульфонатом установлено, что дозы этилметилгидроксипиридина сукцината 150-600 мг/кг при трансдермальном- введении являются повреждающими, но не вызывают гибели животных. Дозы натрия поли(дигидроксифенилен)тиосульфоната 150-3000 мг/кг при трансдермальном введении являются повреждающими и не вызывают гибели животных.

10.Установлена церебропротекторная дозозависимая активность этилметилгидроксипиридина сукцината и гастропротекторная дозозависимая активность этилметилгидроксипиридина сукцината и натрия поли(дигидроксифенилен)тиосульфоната при сравнительных исследованиях трансдермальных терапевтических систем на моделях черепно-мозговой травмы и 18-часовой иммобилизации животных.

11.Впервые разработанная методологическая схема исследований и производства может быть использована при разработке составов и созданию трансдермальных ЛФ. С целью проведения технологической апробации производства составлена, необходимая нормативная документация.

Заключение. Таким образом, наши исследования посвящены созданию трансдермальных ЛФ с этилметилгидроксипиридина сукцинатом, натрия поли(дигидроксифенилен)тиосульфонатом и экспериментальному обоснованию их терапевтической эффективности.

Для достижения поставленной цели проведены квантово-химические расчёты физико-химических дескрипторов действующих компонентов и вспомогательных веществ, позволившие автору разработать оптимальные

составы пластырей-ТДТС с этилметилгидроксипиридина сукцинатом и натрия поли(дигидроксифенилен)тиосульфонатом.

Предложенные оригинальные технологические схемы производства пластырей-ТДТС свидетельствуют о несложном аппаратурном оформлении технологического процесса. Выбрана упаковка, установлен срок годности пластырей-ТДТС, который составил 2 года.

С целью стандартизации пластырей-ТДТС авторами исследованы подлинность, сопротивление отслаивания, однородность дозирования пластырной массы, потеря в массе при высушивании, степень и скорость высвобождения ЛВ по тесту «Растворение». Разработана методика количественного анализа этилметилгидроксипиридина сукцината и натрия поли(дигидроксифенилен)тиосульфоната в составе тЛФ, вошедшие в ФСП «Трансмексол».

Изучение местнораздражающегб действия и гиперчувствительности на морских свинках показало, что пластыри-ТДТС не обладают раздражающим действием на кожу.

Установлена способность тЛФ этилметилгидроксипиридина сукцината и натрия поли(дигидроксифенилен)тиосульфоната в определённом спектре доз достоверно предотвращать повреждение слизистой оболочки желудка, уменьшать степень инволюции тимуса, селезёнки, гипертрофии надпочечников, снижать активность ПОЛ на модели 18-часовой стрессорной иммобилизации предварительно голодавших сутки животных.

В ходе изучения церебропротекторной активности трансдермального этилметилгидроксипиридина сукцината при лечебно-профилактическом применении установлена его дозозависимая способность уменьшать количество общей воды и свободной фракции, увеличивать количество связанной фракции и коэффициента гидратадии в гомогенате мозга животных при изучении на модели черепно-мозговой травмы, достоверно не превышая активности этилметилгидроксипиридина сукцината группы сравнения при его внутрибрюшинном введении.

Дозы тЛФ были выбраны исходя из результатов проведенных исследований по определению субхронической токсичности: летальная доза трансдермального этилметилгидроксипиридина сукцината, вызвавшая гибель 16% животных составляет 1500 мг/кг. Дозы трансдермального этилметилгидроксипиридина сукцината 150-600 мг/кг и дозы

трансдермального натрия поли(дигидроксифенилен)тиосульфоната 150-3000 мг/кг являются повреждающими.

Исследована и подтверждена способность трансдермальных форм этилметилгидроксипиридина сукцината и натрия поли(дигидроксифенилен)-тиосульфоната к чрескожному транспорту на модели «переживающей» кожи животных гп уИго. Предложенные методологические подходы к исследованиям и производству ЛФ с антиоксидантами и антигипоксантами в дальнейшем могут быть использованы в последующих исследованиях по разработке составов и созданию ТДТС.

Список работ, опубликованных автором по теме диссертации

I .Трансдермальный пластырь: пат. 2445084 Рос. Федерация: МПК А61К 31/185, 31/795/С.О. Лосенкова, Э.Ф.Степанова, В.Е.Новиков; заявитель и патентообладатель Смоленская гос. медицинская академия. -№ 2010116752/15; заявл. 27.04.2010; опубл. 20.03.2012, Бюл. №8. - 10 с.

2.Трансдермальный пластырь: пат. 2445123 Рос. Федерация: МПК A61L 15/44, А61К 31/44 / С.О. Лосенкова, Э.Ф.Степанова, В.Е.Новиков; заявитель и патентообладатель Смоленская гос. медицинская академия. - № 2010123973/15; заявл. 11.06.2010; опубл. 20.03.2012, Бюл. №8. - 10с.

3.Гепато- и гастропротекторные свойства гипоксена /Е.И. Климкина, В.Е. Новиков, С.О. Лосенкова и др. // Бюл. сибирской медицины (приложение 2). -

2006.-С.98-100.

4.Поиск потенциальных антиоксидантов в ряду производных 3-оксипиридина / С.О. Лосенкова, К.Н. Кулагин, Е.И. Климкина и др. // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр. - Пятигорск,

2007. - Вып.62. - С.493-497.

5.Дементьева, М.В. Количественное определение мексидола в диализате методом спектрофотометрии / М.В. Дементьева, С.О. Лосенкова // 60-ая науч. студенческая конф. и 36 конф. молодых учёных СГМА: сб. матер. - Смоленск,

2008. - С.69-70.

6.Фармакологическая активность синтетических антигипоксантов и антиоксидантов / A.B. Крикова, В.Е. Новиков, С.О. Лосенкова и др. // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр./под ред. М.В. Гаврилина. - Пятигорск, 2008. - Вып.63. - С.442-443.

7.Изучение ассортимента лекарственных средств антиоксидантного и антигипоксантного действия в аптеках г.Смоленска / Н.О. Крюкова, A.B. Крикова, С.О. Лосенкова и др. // «Человек и лекарство»: сб. матер.ХУ Росс, нац. конгр. - Москва, 2008. - С.647.

8.Лосенкова, С.О. Трансдермальные терапевтические системы (обзор) / С.О. Лосенкова // Эксперим. и клинич. фармакология. - 2008, Т.71. - №6. - С.54-57.

9.Лосенкова, С.О. Разработка состава, конструирование и биофармацевтические исследования трансдермальной композиции с гипоксеном / С.О. Лосенкова, Э.Ф. Степанова, В.Е. Новиков // «Человек и лекарство»: сб. матер.ХУ1 Росс.нац. конгр. - Москва, 2009. — С.545. Ю.Разработка состава, конструирование и стандартизация трансдермальных композиций с мексидолом/ С.О. Лосенкова, Э.Ф. Степанова, В.Е. Новиков и др. //Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр./ под ред. М.В. Гаврилина. - Пятигорск, 2009. - Вып.64. - С. 179181.

II .Биофармацевтическое исследование трансдермальной матричной системы с мексидолом / К.Н. Пименова, О.Ю. Гершунина, С.О. Лосенкова и др.// Вестник СГМА. - 2009. - №2. - С. 137.

12.0беспечение микробиологической чистоты трансдермальных композиций с гипоксеном / Т.Ю. Савостина, A.C. Фасоля, С.О. Лосенкова и др. // Вестник СГМА. - 2009. - №2. - С.140.

13.Лосенкова, С.О. ' Особенности методики биофармацевтического исследования трансдермального пластыря с мексидолом / С.О. Лосенкова, Э.Ф. Степанова, В.Е. Новиков // Вестник ВГУ. Серия: Химия, Биология, Фармация. -2009.-№1.-С.113-116.

14.Лосенкова, С.О. Конструирование и биофармацевтические исследования трансдермальных композиций с антигипоксантом / С.О. Лосенкова, Э.Ф. Степанова // Вестник новых медицинских технологий. - 2009, T.XVI. - №3.-С.135-137.

15. Лосенкова, С.О. Биофармацевтические исследования матричных трансдермальных композиций с мексидолом / С.О. Лосенкова, Э.Ф. Степанова, В.Е. Новиков // «Человек и лекарство»: сб. матер. XVII Росс. нац. конгр. -Москва, 2009. - С.667.

16. Лосенкова, С.О. Биофармацевтические исследования in vitro трансдермальных пластырей с мексидолом 1 С.О. Лосенкова, Э.Ф. Степанова, В.Е. Новиков// Курский науч.-практич. вестник «Человек и его здоровье». -2010. - №1. - С. 117-122.

17.Лосенкова, С.О. Экспериментальное изучение проницаемости кожи при трансдермальном введении мексидола / С.О. Лосенкова, В.Е. Новиков, Э.Ф. Степанова // Курский науч.-практич. вестник «Человек и его здоровье». - 2010. - №2. - С.160-164.

18. Лосенкова, С.О. Биофармацевтические исследования матричных трансдермальных композиций с гипоксеном / С.О. Лосенкова, Э.Ф. Степанова,

B.Е. Новиков // «Фармобразование-2010»: материалы 4-й Всеросс. с междунар. участием науч.-методической конф.—Воронеж, 2010.- С.241-242.

19.Создание и биофармацевтические исследования трансдермальных лекарственных форм с мексидолом / С.О. Лосенкова, Э.Ф. Степанова, В.Е. Новиков и др. И Биологаческие основы индивидуальной чувствительности к психотропным средствам: материалы 5-ой международ, конф,- Москва, 2010. -

C.58-59.

20.0пределение адгезивных свойств трансдермального пластыря с гипоксеном / С.О. Лосенкова, С.К. Кириллов, К.И. Максименкова и др. II Вестник СГМА. -2010. - №3. - С.26-28.

21.Киселёва, А.П. Конструирование матричной композиции с гипоксеном, биофармацевтические и микробиологические аспекты исследования / А.П. Киселёва, С.О. Лосенкова, B.C. Дукова // Вестник СГМА (спецвыпуск). - 2010. -С.158.

22.Лосенкова, С.О.Спектрофотометрическое определение гипоксена в составе трансдермального пластыря / С.О. Лосенкова, Э.Ф. Степанова // Научные ведомости БелГУ. Серия: Медицина. Фармация. 2010. - №22 (93). Выпуск 12. -С.160-166.

23.Определение адгезивных свойств трансдермального пластыря с таурином / М.А. Огай, С.О. Лосенкова, Э.Ф. Степанова и др. // Курский науч.-практич. вестник «Человек и его здоровье». — 2010. - №3. - С.153-155. 24.Лосенкова, С.О. Реологические исследования пластырной массы с мексидолом / С.О. Лосенкова, М.А. Огай, A.B. Пантюхин // Научные ведомости БелГУ. Серия: Медицина. Фармация. 2011. - №4 (99). Выпуск 13. — С. 187-189. 25.0пределение поверхностного натяжения матричной композиции трансдермального пластыря с гипоксеном / К.И. Максименкова, С.О. Лосенкова, С.К. Кириллов и др. // «Человек и лекарство»: сб. матер. XVIII Росс, нац. конгр. - Москва, 2011. - С.509.

26.Лосенкова, С.О. Изучение ассортимента траясдермальных терапевтических систем в сети аптечных организаций ОАО «Смоленск-Фармация» / С.О. Лосенкова, К.И. Максименкова, A.B. Крикова // Профилактика — основной принцип отечественного здравоохранения: материалы Международ, науч.-практич. конф. / под ред. В.Н. Костюченкова, С.Н. Дехнич. - Смоленск, 2011. — С.67-68.

27.Лосенкова, С.О. Вспомогательные вещества в технологии трансдермальных лекарственных форм / С.О. Лосенкова, Э.Ф.Степанова // Современные аспекты разработки и совершенствования состава и технологии лекарственных форм: материалы Всерос. науч.-практич. конф. с международ, участием. - Курск, 2011.-С.105-112.

28.Лосенкова, С.О. Определение стабильности трансдермальных пластырей с мексидолом /С.О. Лосенкова // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр./ под ред. М.В. Гаврилина. -Пятигорск, 2011. -Вып.66. - С.415-418.

29.Лосенкова, С.О. Экспериментальное изучение проницаемости кожи при трансдермалыюм введении гипоксена / С.О. Лосенкова, В.Е. Новиков, Э.Ф. Степанова // Вестник новых медицинских технологий. - 2011, T.XVIII. - №3.-С.250-253.

30.Лосенкова, С.О. Тест «Растворение» в оценке скорости высвобождения мексидола та трансдермального пластыря / С.О. Лосенкова, Э.Ф. Степанова, В.Е. Новиков // НПЖ Фармация. - 2011. - №6. - С.34-36.

31.Определение адгезивных свойств трансдермального пластыря с мексидолом / С.О. Лосенкова, С.К. Кириллов, Э.Ф. Степанова и др. // Росс, медико-биологический вестник им.акад. И.П. Павлова.- 2011. - №1. - С.138-141.

32. Лосенкова, С.О. Использование теста «Растворение» для оценки скорости высвобождения гипоксена из трансдермального пластыря / С.О. Лосенкова, Э.Ф. Степанова // Научные ведомости БелГУ. Серия: Медицина. Фармация. -2011.-№16 (111). Выпуск 15. — С.255-259.

33.Лосенкова, С.О. Исследование стабильности трансдермального пластыря с гипоксеном / С.О. Лосенкова, Э.Ф. Степанова // Кубанский науч. медицинский вестник. - 2012. - №1 (130). - С. 106-110.

34.Лосенкова, С.О. Разработка технологии салфеток с иммобилизованным гипоксеном и биофармацевтические исследования in vitro / С.О. Лосенкова,

Э.Ф. Степанова, К.И. Максименкова // Основы формирования здорового образа жизни: материалы Всерос. науч.-практич. конф. - Смоленск, 2012. — С.95-96.

35.Лосенкова, С.О. Стандартизация трансдермального пластыря с мексидолом / С.О. Лосенкова, Э.Ф.Степанова // Научные ведомости БелГУ. Серия: Медицина. Фармация. -2012. - №4 (123). Выпуск 17. - С.220-222.

36.Лосенкова, С.О. Разработка методологической схемы исследований и производства трансдермальных лекарственных форм / С.О. Лосенкова, Э.Ф. Степанова // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр./ под ред. М.В. Гаврилина. — Пятигорск, 2012. - Вып.67. - С.171-175.

37.Исследование токсичности трансдермального пластыря с гипоксеном / С.О. Лосенкова, Г.Н. Фёдоров, Э.Ф. Степанова и др. // Вестник СГМА. - 2012, Т.П. -№4. - С.52-57.

38.Лосенкова, С.О. Морфологические особенности кожи морских свинок при применении трансдермального пластыря с мексидолом / С.О. Лосенкова, С.М. Баженов, Г.Н. Фёдоров П Вестник новых медицинских технологий. - 2012, T.XIX. - №4.- С. 160-162.

39.Лосенкова, С.О. Доклиническое токсикологическое изучение трансдермального пластыря с гипоксеном / С.О. Лосенкова, Г.Н.Фёдоров // Токсикологический вестник. — 2012. - №5.- С.23-28.

40.Лосенкова, С.О. Производство микрокапсул лекарственных веществ и трансдермальных пластырей: учебно-методическое пособие / С.О. Лосенкова, A.B. Крикова. - Смоленск: СГМА, 2007. -18с.

41.Лосенкова, С.О. Совершенствование технологии и разработка новых лекарственных форм: учебно-методическое пособие / С.О. Лосенкова, A.B. Крикова. - Смоленск: СГМА, 2007.-16с.

42.Лосенкова, С.О. Вспомогательные вещества в технологии чрескожных систем доставки лекарственных веществ: учеб. пособие для студентов / С.О. Лосенкова, Э.Ф.Степанова. - Смоленск: Изд. ООО «Принт-Экспресс», 2009,-78с.

43.Лосенкова, С.О. Трансдермальные лекарственные формы: учебно-методическое пособие / С.О. Лосенкова, Э.Ф. Степанова. - Смоленск: СГМА, 2009. -51с.

44.Биофармацевтические исследования в фармацевтической технологии: учебное пособие / С.О. Лосенкова, И.И. Великанова, М.Н. Ковалькова и др. -Смоленск: СГМА, 2010.-68с.

45.Лосенкова, С.О. Учебно-методическое пособие к лабораторным занятиям по заводской технологии для студентов заочного отделения / С.О. Лосенкова, М.Н. Ковалькова. - Смоленск: СГМА, 2010.-140с.

ЛОСЕНКОВА СВЕТЛАНА ОЛЕГОВНА

ТЕОРЕТИЧЕСКОЕ И ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ОБОСНОВАНИЕ СОЗДАНИЯ ТРАНСДЕРМАЛЬНЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ФОРМ С АНТИОКСИДАНТАМИ И АНТИГИПОКСАНТАМИ

14.04.01 - Технология получения лекарств

АВТОРЕФЕРАТ.

на соискание учёной степени доктора фармацевтических наук

Формат 60x84/16. Тираж 100 экз. Печ. листов 2,0. Дата сдачи в печать 23.09.2013 г. Заказ № 6256/1.

Отпечатано в ООО «Принт-Экспресс», г. Смоленск, пр-т Гагарина, 21. Тел.: (4812) 32-80-70

Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Смоленская государственная медицинская академия Министерства здравоохранения Российской Федерации» (214019, г.Смоленск, ул.Крупской, 28).