Автореферат и диссертация по медицине (14.04.01) на тему:Разработка состава, технологии и норм качества фитогеля репаративного действия

На правах рукописи

Володнна Татьяна Александровна

РАЗРАБОТКА СОСТАВА, ТЕХНОЛОГИИ И НОРМ КАЧЕСТВА ФИТОГЕЛЯ РЕПАРАТИВНОГО ДЕЙСТВИЯ

14.04.01 - технология получения лекарств

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

11 ИЮЛ 2014 1П КЮЩ4——

Пятигорск - 2014

005550538

005550538

Работа выполнена в государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Омская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения Российской Федерации

Официальные оппоненты:

Жилякова Елена Теодоровна, доктор фармацевтических наук, профессор, Медицинский институт ФГАОУ ВПО «Белгородский государственный научно-исследовательский университет», заведующий кафедрой фармацевтической технологии, управления и экономики здравоохранения

Морозов Юрий Алексеевич, кандидат фармацевтических наук, доцент, ФГБОУ ВПО «Северо-Осетинский государственный университет им. К.Л.Хетагурова», доцент кафедры технологии лекарственных форм и организации фармацевтического дела

Ведущая организация: ГБОУ ВПО «Казанский государственный медицинский университет» Минздрава России

Защита состоится 17 сентября 2014 г. в 10.00 часов на заседании диссертационного совета Д 208.008.09 при ГБОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет» Минздрава России по адресу: 357532, Ставропольский край, г.Пятигорск, пр. Калинина, 11.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Пятигорского медико-фармацевтического института - филиала ГБОУ ВПО ВолгГМУ Минздрава России (357532, Ставропольский край, г. Пятигорск, пр. Калинина, 11) и на сайте ЬКр://\улу\у.ртесЫ1агт.ги.

Автореферат разослан « 2014 г.

Научный руководитель

доктор медицинских наук, доцент Пеньевская Наталья Александровна

Ученый секретарь диссертационного совета

Ремезова Ирина Петровна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Несмотря на достижения молекулярной биологии, современный уровень развития тканевой инженерии и возможности лабораторного синтеза факторов роста клеток, проблема восстановления утраченного кожного покрова при заболеваниях и повреждениях различной этиологии остается актуальной во всем мире (Л. А. Блатун, 2007; Ю. С. Винник и др., 2011; А. В. Гавриленко, 2008). В России ежегодно около 9 млн. пациентов переносят оперативные вмешательства, большинство которых протекает с травмами кожных покровов; у 8,7 млн. человек ежегодно регистрируют заболевания кожи и подкожной клетчатки (данные Центрального НИИ Организации и Информатизации Здравоохранения МЗ РФ).

Ассортимент наружных лекарственных форм (ЛФ), ускоряющих заживление ран, весьма ограничен и представлен преимущественно монопрепаратами синтетического происхождения в форме мази или крема. На российском фармацевтическом рынке нет ни одного отечественного лекарственного средства растительного происхождения с репаративным действием.

Вместе с тем, известно, что экстракты чабреца, солодки, крапивы двудомной, зверобоя продырявленного, сок алоэ обладают выраженным ранозаживляющим и противовоспалительным действием, а экстракт каштана конского и дигидрокверцетин оказывают ангиопротекторный эффект, что может обеспечить комплексный подход в лечении раневого процесса кожных покровов. Перспективной лекарственной формой для этих целей является гель, поскольку данная ЛФ характеризуется легкостью нанесения на кожные покровы, хорошим высвобождением действующих веществ и проникновением их вглубь тканей, что в отличии от мазей на гидрофобных основах, часто используемых на сегодняшний день для лечения раневой патологии, не приводит к нарушению оттока раневого отделяемого и хронизации воспалительного процесса (В. Л. Багирова, 2002; М. Нино, 2010; О. Лагвилава и др., 2013; Яремчук, А. А., 2012; И.. Багееп ег а!., 2011).

Степень разработанности темы. Технология геля как лекарственной формы разработана для многих лекарственных средств наружного применения, однако лекарственные формы для лечения раневого процесса представлены в большинстве своем мазями и кремами. Практически отсутствуют данные по технологии гелей, содержащих растительные экстракты, в том числе с несколькими компонентами. Необходимо отметать, что гели репаративного действия для наружного применения, содержащие комплекс экстрактов чабреца, солодки, крапивы двудомной, каштана конского, зверобоя продырявленного, сок алоэ и дигидрокверцетин до настоящего времени не являлись объектами изучения.

Цели и задачи исследования. Целью настоящего исследования явилось создание оригинальной фитокомпонентной наружной лекарственной формы с репаративным действием и оценка ее качества.

Данная цель была конкретизирована следующими задачами:

- провести анализ современного состояния исследований в области создания фитокомпонентных мягких наружных лекарственных форм репаративного действия;

- разработать фитокомпонентный состав геля репаративного действия;

- разработать состав вспомогательных веществ для фитогеля репаративного действия;

- изучить структурно-механические свойства разработанного фитогеля;

- разработать технологию и технологическую схему производства фитогеля репаративного действия;

- разработать нормы качества и установить сроки годности фитогеля репаративного действия;

- изучить фармакологические свойства разработанного фитогеля;

- подготовить и апробировать нормативную документацию на разработанный фитогель репаративного действия.

Научная новизна. На основании фармакологических, технологических и биофармацевтических исследований предложен состав фитогеля репаративного

действия, содержащего экстракты чабреца, солодки, крапивы двудомной, каштана конского, зверобоя продырявленного, сок алоэ и дигидрокверцетин. Разработана рациональная технология фитогеля репаративного действия; выбрана оптимальная мазевая основа. Впервые для лекарственного средства предложены такие вспомогательные вещества как гелеобразователь 700, эмульгатор Р1осаге ЕТ58, консервант ОесаЬеп С. Обоснованы показатели и нормы качества разработанного фитогеля, установлен срок годности. Методика количественного определения действующих веществ многокомпонентного фитогеля адаптирована к составу и валидирована. Впервые проведены фармакологические исследования разработанного фитогеля и подтверждена его репаративная и антимикробная активность.

Теоретическая и практическая значимость работы. Полученный экспериментальный материал послужил основанием для создания фитогеля репаративного действия на основе экстрактов чабреца, солодки, крапивы двудомной, каштана конского, зверобоя продырявленного, сока алоэ и дигидрокверцетина.

На разработанный фитогель составлены и утверждены нормативные документы в виде фармакопейной статьи предприятия (ФСП) на производство геля для ООО «Медлинфарм», г. Москва. Технологическая апробация фитогеля подтверждена соответствующим актом ООО «Медлинфарм», г. Москва.

Полученные в диссертационной работе новые данные включены в учебно-методические материалы кафедры фармацевтической технологии с курсом биотехнологии ГБОУ ВПО ОмГМА Минздрава России, кафедры фармацевтической технологии и фармакогнозии с курсом ботаники ГБОУ ВПО ТюмГМА Минздрава России, кафедры технологии лекарств ПМФИ - филиала ГБОУ ВПО ВолгГМУ Минздрава России.

Методология и методы исследований. В диссертационном исследовании использованы технологические, биофармацевтические, физико-химические, фармакологические, микробиологические, гистологические и статистические методы.

Методология исследования базируется на основных технологических и биофармацевтических условиях разработки мягких лекарственных форм. Рассмотрены возможности использования экстрактов чабреца, солодки, крапивы двудомной, каштана конского, зверобоя продырявленного, сока алоэ и дигидрокверцетина для коррекции заживления ран.

Положения, выносимые на защиту:

1. Результаты технологических по выбору оптимального состава фитогеля.

2. Результаты биофармацевтических и фармакологических исследований по выбору оптимального состава фитогеля репаративного действия.

3. Технологическая схема производства фитогеля.

4. Результаты разработки норм качества и сроков годности фитогеля репаративного действия.

5. Доказательства ранозаживляющей и антимикробной активности фитогеля репаративного действия.

Степень достоверности и апробация результатов. Достоверность полученных результатов достигается благодаря использованию современных технологических, биофармацевтических, химических, физико-химических и биологических методов, позволяющих получать воспроизводимые и однозначные результаты. Результаты измерений обработаны математическим методом и являются статистически значимыми.

Основные положения работы доложены на: 67-й научной региональной конференции Пятигорской государственной фармацевтической академии по фармации и фармакологии «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции» (г. Пятигорск, 2012 г.), Международной научной конференции с элементами научной школы для молодежи «Молодежь третьего тысячелетия» (г. Омск, 2012 г.), конференции «Роль провизора в современной системе здравоохранения» (г. Омск, 2013 г.).

По материалам диссертации опубликовано 8 работ, из них 5 - в изданиях, рекомендуемых ВАК.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Глава 1. Обзор литературы

Изложены проблемы распространенности раневого процесса кожных покровов и подходы к его лечению на разных фазах течения. Дана характеристика препаратов, применяемых для коррекции раневого процесса, в том числе фитопрепаратов для наружного применения. Проанализирована литература, отражающая возможности и пути использования фитопрепаратов д ля лечения раневого процесса, а также ассортимент этой группы лекарственных средств, зарегистрированных на Российском фармацевтическом рынке.

Глава 2. Материалы и методы исследования Исследования проводились согласно разработанному дизайну, представленному схемой на рисунке 1.

Рисунок 1 — Дизайн исследования

В процессе исследований по разработке оптимальных составов фитогеля репаративного действия использованы действующие и вспомогательные вещества, разрешенные к медицинскому применению и удовлетворяющие требованиям действующей нормативной документации. Описаны использованные в работе известные и модифицированные методики анализа.

Глава 3. Технологические исследования по созданию фитогеля

репаративного действия На первом этапе исследования были сконструированы шесть композиций из густых экстрактов чабреца, каштана, солодки, крапивы, масляного экстракта зверобоя, сока алоэ и дигидрокверцетина. Композиции отличались долевыми соотношениями каждого из компонентов (таблица 1).

Таблица 1 - Модельные составы по выбору фитокомпонентов

Компонент Композиция (соотношение компонентов)

№ 1 №2 №3 №4 №5 №6

Экстракт чабреца густой 1 2 5 10 10 10

Экстракт каштана густой 1 1 1 2 2 2

Экстракт солодки густой 1 I 1 2 3 2

Экстракт крапивы густой 1 1 1 3 2 4

Экстракт зверобоя масляный 1 1 1 2 2 2

Дигидрокверцетин 1 1 1 1 1 1

Сок алоэ - - - - - 8

В таблице 2 представлены результаты сравнительного изучения биологической активности модельных фитокомпозиций с использованием культуры клеток Parametium caudatum по модифицированной методике Андреевой И.Н. (2000 г.).

Для изучения протективного (антиоксидантного и

мембраностабилизирующего) действия исследуемых композиций оценивали их влияние на продолжительность периода активности инфузорий в среде с добавлением токсических веществ. В качестве токсиканта, который in vivo расщепляется до перекисных радикалов и повреждает преимущественно липидную часть мембраны, использовали 1% раствор водорода пероксида, а токсиканта, повреждающего в основном белковые структуры биомембраны — раствор 14% этилового спирта.

Таблица 2 - Экспресс-оценка биологической активности экспериментальных фитокомпознций на культуре клеток Рагатейит

саис1аШт (хронический опыт)

Объект исследования Исходное количество парамеций Количество парамеций в 0,05 мл, через 3 суток Размер парамеций, мкм Изменение двигательной активности через 24-120 часов

24 час. 48 час. 72 час. 120 час.

Композиция № 1 4-5 > 100 148 ±11 - - - БЦ;о

Композиция № 2 4-5 > 100 142 ±9 - БА БА БЦ;о

Композиция № 3 4-5 > 100 147 ±9 - - БА -

Композиция № 4 4-5 >200 151 ± 16 - - - -

Композиция № 5 4-5 > 100 146 ± 11 - БА - -

Композиция № 6 4-5 >250 148 ± 11 - - - -

Контроль 4-5 40-50 145 ± 11 - - - -

Примечание: (-) - отсутствие биологической активности, инфузории совершают

хаотичные броуновские движения; БА - движения инфузорий изменены; БЦ50 - погибло около 50 % инфузорий.

Установлено, что все шесть фитокомпознций по сравнению с контролем существенно и статистически значимо (р<0,05) удлиняли период сохранения двигательной активности инфузорий в присутствии клеточных ядов (таблица 3).

Таблица 3 - Влияние экспериментальных фитокомпознций на продолжительность сохранения двигательной активности парамеций

после добавления клеточных ядов (острый опыт)

Объект исследования Продолжительность двигательной активности парамеций в 14 % - м растворе спирта этилового, мин. Продолжительность двигательной активности парамеций в 1 % - м растворе пероксида водорода, мин.

Композиция № 1 13,32 ± 0,38 3,42 ± 0,08

Композиция № 2 14,12 ±0,12 5,20 ±0,20

Композиция № 3 15,33 ±0,50 5,83 ± 0,32

Композиция № 4 17,83 ± 0,69 7,05 ± 0,45

Композиция № 5 15,98 ±0,38 4,57 ± 0,24

Композиция № 6 18,05± 0,24 8,12 ±0,35

Контроль 8,90 ± 0,29 2,42 ± 0,08

В ходе анализа результатов хронического и острого опытов установлено, что наиболее благоприятными для используемой биологической модели

9

оказались композиции № 4 и № 6. Под их воздействием заметно повышались двигательная активность и частота деления клеток парамеций (таблица 2), в результате чего к третьим суткам их количество превосходило контроль в 4-5 раз (200 парамеций в композиции №4, 250 парамеций в композиции № 6 и 50 парамеций в контрольной группе). Кроме того, композиции № 4 и № 6 оказывали максимальные мембраностабилизирующий и антиоксидантный эффекты (таблица 3), что проявлялось статистически значимым удлинением времени остановки движения парамеций: двукратным - под воздействием спирта этилового (18 минут против 9 минут в контроле) и трехкратным — под воздействием перекиси водорода (8 минут против 2,5 минут в контроле).

Далее проводили исследования по выбору оптимальной композиции вспомогательных веществ с помощью биофармацевтических исследований in vitro. С целью определения оптимальной основы-носителя были приготовлены по 9 модельных составов для каждой фитокомпозиции с использованием различных основ (таблица 4).

Таблица 4 — Модельные составы по выбору вспомогательных

веществ

Компонент Состав № (с фитокомпозицией №6 / с фитокомпозицией №4)

1/10 2/11 3/12 4/13 5/14 6/15 7/16 8/17 9/18

Ланолин 46,5 65

Вазелин 46,5

Лецитин 28

ПЭО-400 28

ПЭГ-4000 65

Flogel 700 0,47 0,45

Carbopol 940 0,93

Масло подсолнечное 73

Аэросил 4 1 2

Flocare ЕТ58 50 50 2

Фитокомпозиция №6 / №4 10/10

Раствор натрия гидроксила 10% 0,5 0,5 0,5

Вода очищенная до 100,0 100,0 100,0

Для всех модельных составов были определены термо- и коллоидная стабильность - параметры позволяющие прогнозировать устойчивость ЛФ в

процессе производства и хранения при изменении температурных параметров и механическом воздействии (таблица 5).

Таблица 5 - Испытание устойчивости модельных составов фитогеля

Стабильность Состав геля №

1 и 10 2 и 11 Зи 12 4и 13 5 и 14 6 и 15 7 и 16 8 и 17 9и 18

Выдерживание в термостате + + + + + + + + +

Замораживание - + + + + - + + +

Коллоидная стабильность + + + + + + + + +

Как следует из данных, представленных в таблице 5, составы №№ 2 - 5, 7 - 9, 11 - 14 и 16 - 17 достаточно хорошо выдерживали как замораживание, так и нагревание в термостате. Составы №№ 1, 6, 10 и 15 после размораживания «выпотевали». Все образцы оказались устойчивы к центрифугированию, то есть продемонстрировали коллоидную стабильность, поэтому были оставлены для проведения дальнейших исследований.

Оценку степени высвобождения биологически активных веществ

13 16

14

12 10

8 6 4

и

Рисунок 2 - Степень высвобождения БАВ в зависимости от основы для геля: а - с фитокомпозицией №6, б - с фитокомпозицией №4

Примечание: содержание составов представлено в таблице 4.

Как видно из рисунка 2, образцы геля на основе карбопола, флогеля и флогеля с флокаром (составы №№ 4, 5, 9, 13, 14, 18) обладают одинаковой биодоступностью (диаметр окрашенной зоны 15-16 мм). В связи с тем, что гели карбопола и флогеля относятся к группе редко сшитых полимеров и имеют

юводили по традиционной методике диффузии в гель (рисунок 2).

Диаметр согрышхюак

1метр окрашенной [Ы, мм

18

cocía»

16

состав М2

14

сосгав.>сЗ

12

соста».^4 10

состав -VÓ 8

состав -V''> б

состав 4

состав 2

состав .V:9 0

состав №

одинаковую физико-химическую природу, то для дальнейших исследований были выбраны составы № 5 и № 9 для фитокомпозиции № 6 и составы № 14 и № 18 для фитокомпозиции № 4.

Далее были проведены биофармацевтические исследования по выбору оптимального пенетратора с целью достижения более полного высвобождения фитокомпозиции из выбранной основы. Составлены гелевые композиции, содержащие в качестве пенетраторов такие вспомогательные вещества, как пропиленгликоль в концентрации 2 % (составы №№ 5.1, 9.1, 14.1, 18.1), полиэтиленгликоль 400 - 2 % (составы №№ 5.2, 9.2, 14.2, 18.2), диметилсульфоксид - 2 % (составы №№ 5.3, 9.3, 14.з; 18.3) (рисунок 3).

Диаметр окрашенной зоны, мм

■состав №5.1 состав № 5.2 ■состав №5.3 •»состав №9.1 состав № 9.2 ■состав №9.3 "состав № 14.1 "состав № 14.2 ■состав № 14.3 «состав № 18.1 •состав № 18.2 состав № 18.3

5.1 5.2 5.3 9.1 9.2 9.3 14.1 14.2 14.3 18.1 18.2 18.3

Рисунок 3 - Степень высвобождения БАВ из фитогеля в зависимости от пенетратора

При использовании в качестве пенетратора пропиленгликоля диаметр окрашенной зоны составил 18 мм, что на 2 мм больше аналогичного показателя для составов, содержащих ПЭГ 400 и диметилсульфоксид. Это позволило выбрать пропиленгликоль в качестве пенетратора для разрабатываемого фитогеля репаративного действия.

Дальнейшие исследования были посвящены выбору оптимального консерванта. Изготовлены образцы гелей с фитокомпозициями №4 и №6 (на

основе карбопола и флогель-флокара) со следующими консервантами: бензалкония хлорид 0,05%, смесь нипагин с нипазолом в соотношении 2:1 и декабен С 0,05%.

Результаты исследования влияния консервантов на микробиологическую чистоту фитогелей приведены в таблицах 6 и 7. Оказалось, что все использованные консерванты обеспечивали соответствие ЛФ требованиям ГФ XII (2 категория), но наибольшую эффективность в отношении всех видов микроорганизмов проявил декабен С.

Таблица 6 - Влияние консервантов на микробиологическую чистоту геля с фнтокомпознцнен №6

Консервант Число жизнеспособных микроорганизмов в 1 г мази Наличие Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus должны отсутствовать*

бактерий и грибов суммарно не более 102* Бактерии семейства ЕшегоЬайепасеае не более 101*

Состав 5 Состав 9 Состав 5 Состав 9 Состав 5 Состав 9

Без консерванта 120 115 9 10 - -

Бензалкония хлорид 60 65 7 8 - -

Нипагин+ нипазол 2:1 90 85 5 5 - -

Decaben С 30 35 - - - -

Примечание: * - требование ГФ XII.

Таблица 7 - Влияние консервантов на микробиологическую чистоту геля с фнтокомпознцнен №4

Консервант Число жизнеспособных микроорганизмов в 1 г мази Наличие Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus должны отсутствовать*

бактерий и грибов суммарно не более 102* Бактерии семейства Е^егоЬааепасеае не более 101*

Состав 14 Состав 18 Состав 14 Состав 18 Состав 14 Состав 18

Без консерванта 115 115 9 10 - -

Бензалкония хлорид 70 65 8 7 - -

Нипагин+ нипазол 2:1 85 80 6 5 - -

ОесаЬеп С 40 43 - - - -

Примечание: * - требование ГФ XII.

Таким образом, проведенные биофармацевтические исследования позволили уточнить оптимальный состав вспомогательных веществ разрабатываемого фитогеля (таблица 8).

Таблица 8 - Составы вспомогательных веществ для получения

фитогеля

Компонент Состав 1 Состав 2

Основообразователь 700 0,45 -

СагЬоро1940 - 0,93

Загуститель Раствор натрия гидроксида 0,1М 0,5

Эмульгатор Носаге ЕТ 58 2 1

Пенетратор Пропиленгликоль 2,0

Консервант ОесаЪеп С 0,05

Растворитель Вода очищенная До 100,0

Для разработанных составов была определена осмотическая активность

(таблица 9), поскольку этот технологический параметр имеет значение для уменьшения явлений воспаления и отека.

Таблица 9 - Осмотическая активность составов вспомогательных

веществ

Состав 1 Состав 2

Время, час Осмотическая активность, % Время, час Осмотическая активность, %

1 343 1 305

2 428 2 410

4 555 3 485

6 588 4 570

8 613 5 584

12 642 6 590

24 673 12 623

Как видно из таблицы 9, скорость поглощения воды обоими составами в

течение эксперимента менялась в сторону увеличения. Осмотическая активность образцов геля на основе Р^е1 700 и Носаге ЕТ58 (состав 1) была равна 343% через 1 час, 673% - через 24 часа, а на основе СагЬоро1 940 (состав 2) - 305% и 623% соответственно. Наибольшей осмотической активностью обладал состав 1 (флогель и флокар).

Для изучения структурно-механических свойств фитогеля репаративного действия проведены реологические исследования. По полученным данным была построена кривая течения (рисунок 4).

300 200

Рисунок 4 - Кривая течения фитогеля

При изучении тиксотропных свойств данного фитогеля удалось доказать,

что он характеризуется плавным возрастанием напряжения сдвига с увеличением скорости сдвига до полного разрушения системы. При этом данная структура равномерно и быстро восстанавливается, что позволяет говорить о стабильности геля во всех интервалах скоростей сдвига, что подтверждает также величина механической стабильности данного состава (1,03). Таким образом, данные реологических исследований свидетельствуют о полной технологичности данной лекарственной формы.

На основании результатов проведенных исследований сконструировано два состава фитогеля репаративного действия (таблица 10).

Таблица 10 - Составы экспериментального фитогеля репаративного действия

Наименование компонента Количество, г

Состав 1 (фитогель 1) Состав 2 (фитогель 2)

Экстракт чабреца густой Экстракт каштана густой Ээкстракт солодки густой Экстракт крапивы густой Экстракт зверобоя масляный Дигидрокверцетин Сок алоэ Пропиленгликоль ЭесаЬеп С Раствор натрия гидроксида 10% Р1осаге ЕТ58 Р^е1 700 Вода очищенная 3,5 0,7 0,7 1,4 0,7 0,35 2,65 2,0 0,05 0,5 2,0 0,45 До 100,0 3,5 0,7 0,7 1,4 0,7 0,35 2,0 0,05 0,5 2,0 0,45 До 100,0

Для данных составов была разработана оптимальная технологическая

схема производства (рисунок 5).

15

Рисунок 5 - Технологическая схема производства фитогеля

Примечание: ВР - стадии вспомогательных работ; ТП - стадии основного технологического процесса; УМО - стадии упаковки, маркировки; Кт, Кх, Км - контроль технологический, контроль химический и контроль микробиологический.

Технологическая схема содержит стандартные стадии технологического процесса и построена традиционно. Наиболее важными являются стадии ТП 3.2 и ТП 3.3, обеспечивающие тщательную гомогенизацию смеси компонентов. Для проведения валидации технологических процессов были определены критические стадии процесса производства геля (таблица 11).

Таблица 11 - Перечень критических стадий и параметров процесса производства фитогеля

Наименование критической технологической стадии (операции) Наименование критического параметра Примечание

ТП 3.2 Введение экстрактов чабреца, солодки, крапивы, каштана, зверобоя, сока алоэ и дигидрокверцетина Число оборотов мешалки, время перемешивания Нарушение показателя может привести к нарушению структуры геля

ТП 3.3 Введение эмульгатора, пенетратора Может привести к неоднородности геля в отношении действующих компонентов

Глава 4. Разработка норм качества фитогеля репаратнвного действия

Проверку подлинности составов фитогеля проводили по основным действующим веществам: флавоноиды, дигидрокверцетин, алоэнин (таблица13).

Для количественного определения хлорофиллов в фитогелях 1 и 2 использовали метод Хольма-Ветгштейна, содержание хлорофилла "составило 1,74±0,06 мг% и 1,75±0,06 мг% соответственно.

Важным в исследовании лекарственных препаратов является наличие точной и чувствительной методики количественного определения действующего вещества. Основными веществами, определяющими фармакологический эффект фитокомпонентов геля, являются флавоноиды. Определение их количества в фитогелях проводили по методике ГФ XI в пересчете на дигидрокверцетин. Количественное содержание флавоноидов в фитогелях 1 и 2 практически не различалось и составило 0,72±0,04% и 0,70±0,03% соответственно.

Валидацию методики количественного определения суммы флавоноидов в фитогеле проводили по линейности, сходимости и правильности (таблица 12).

Таблица 12 - Результаты валидационной оценки определения

флавоноидов методом спектрофотометр!»!

Показатель Результат Принятый критерий

Специфичность Максимум при 390 ± 2 нм -

Уравнение регрессии у = (3,08±0,13) х -

Коэффициент корреляции г = 0,9939 г >0,99

. Сходимость (Я50) 5,0 % < 5 %

Правильность(процент восстановления) 100,06% 100±5 %

Таким образом, методика количественного определения флавоноидов в

пересчете на дигидрокверцетин является точной и воспроизводимой и может быть включена в нормативную документацию на гель.

Разработку норм качества полученного геля проводили в соответствии с требованиями ОСТ 91500.05.001-00 «Стандарты качества лекарственных средств. Основные положения». Соответствующие нормы качества для фитогеля 1 репаративного действия представлены в таблице 13.

Таблица 13 — Нормы качества разработанного фитогеля

репаративного действия

Показатели Методы Нормы

Описание Визуальный Однородная масса мягкой консистенции, желто-коричневого цвета с характерным запахом

Подлинность Качественная реакция на флавоноиды (цианидиновая проба) Качественная реакция на фенольные соединения (алоэнин) (для фитогеля 1) Красно-фиолетовое окрашивание при добавлении концентрированной хлористоводородной кислоты и цинковой пыли к спиртовому извлечению из геля с последующим нагреванием ТСХ в системе растворителей этилацетат:спирт этиловый 95%: вода (100:13,5:5). Яг 0,5-0,55 пятно ярко-голубой флюоресценции

Водородный показатель (рН) Потенциометрическое определение 6,5-7,0

Микробиологическая чистота ГФХН Категория 2

Количественное определение УФ-спектрофотометрия Флавоноидов не менее 0,68% (в пересчете на дигидрокверцетин) Хлорофиллов не менее 1,5мг %

Стабильность образцов геля оценивали на пяти сериях в условиях хранения

при температуре не выше +15°С по показателям и нормам качества,

представленным в таблице 13. Исследования на стабильность показали, что указанные серии образцов гелей стабильны на протяжении 18 месяцев хранения.

Глава 5. Изучение фармакологической активности фнтогеля репаративного действия Мембраностабилизирующую и антиоксидантную активность разработанных составов фитогеля и основы изучали в тесте на парамециях. В качестве препаратов сравнения использовали гелевую основу, мазь репаративного действия с фитокомпонентами на гидрофобной основе «Цикадерма» и мазь репаративного действия на гидрофильной основе «Левомеколь» (таблица 14).

Таблица 14 - Влияние экспериментальных базовых мазевых растворов на продолж!гтельность сохранения двигательной активности Рагатейит саийаЫт после добавления клеточных ядов (острый опыт)

Объект исследования (1% базовый раствор) Время остановки парамеций, мин Время наступления лизиса парамеций, мин

14%-й раствор спирта этилового 1%-й раствор пероксида водорода 14%-й раствор спирта этилового 1%-й раствор пероксида водорода

основы фитогеля 6,13±0,06 2,38±0,06 7,25±0,11 4,05±0,21

фитогеля 1 11,75±0,12 6,11±0,05 14,37±0,15 9,78±0,12

фитогеля 2 11,25±0,08 5,82±0,10 13,55±0,10 8,54±0,15

мази«Левомеколь» 8,27±0,17 4,56±0Д2 9Д1±0,10 6,07±0,05

мази «Цикадерма» 9,53±0,21 5,37±0,24 10,47±0,13 7,18±0,23

Наиболее выраженные мембраностабилизирующий и антиоксидагггный эффекты оказывал базовый 1%-й раствор разработанного фитогеля 1, который по отношению к образцам сравнения увеличивал в 1,5-2 раза продолжительность двигательной активности парамеций и время наступления их лизиса в присутствии клеточных ядов (спирта этилового и пероксида водорода).

Оценку ранозаживляющего действия проводили на модели линейной кожной раны по характеру клинического течения на 4, 8, 12, 16, 20 дни наблюдения. Все животные были разделены на четыре группы: контрольная группа (без лечения), опытная группа 1 (лечение фитогелем 1), опытная группа 2 (лечение фитогелем 2) и группа сравнения (лечение мазью «левомеколь») (таблица 15).

Таблица 15 - Влияние разработанного фитогеля на время заживления линейной кожной раны

Исследуемый объект Средний линейный размер раны, мм

исходный на 4 день на 8 день на 12 день на 16 день на 20 день

Контрольная группа (п=7) 26,6±1,3 22,9+0,6 17,8±1,7 5,3±0,5 3,1 ±0,6 1,3±0,7

Группа сравнения (п=7) 28,0±1,0 22,0±1,1 17,6±1,1 4,3+0,7 2,7+0,5 0

Опытная группа 1 (п=7) 2S,1±1,4 19,8±1,4 15,2+1,1 2,7±0,5 1,4±0,5 0

Опытная группа 2 (п=7) 25,3±1,2 20,6+1,5 16,1±1,0 3,2±0,3 1,7±0,5 0

Воздействие фитогелей 1 и 2 приводило к изменению динамики морфологических характеристик процесса регенерации кожных ран. Согласно макроскопическим и гистологическим критериям зрелости рубца (степень эпителизации, соотношения клеточных и волокнистых элементов соединительной ткани, степень выраженности и инволюции сосудистого компонента грануляционной ткани и др.), оба состава фитогеля способствуют более быстрому заживлению линейной раны (регенерации кожи), формированию и созреванию рубца.

Антимикробную активность предлагаемых составов фитогеля репаративного действия определяли методом диффузии в агар (ГФ XII). Исследования проводили на кафедре микробиологии ГБОУ ВПО ОмГМА. Фитогели 1 и 2, в отличие от их основ, проявляли выраженную антибактериальную активность в отношении тест-культуры Staphylococcus aureus 209 Р: диаметры зоны задержки роста составили 23 мм и 28 мм соответственно для дозы 10 млн. и 1 млн. клеток на I мл микробной взвеси, используемой для посева тампоном. Введение консерванта в фитогели не влияло на размеры зон задержки роста тест-культуры. Результаты, полученные в ходе данного эксперимента, свидетельствуют о возможности применения фитогеля в терапии раневого процесса, в том числе инфицированных ран.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В ходе проведенного анализа современного состояния исследований в области создания фитокомпонентных мягких наружных лекарственных форм репаративного действия установлено, что ассортимент таких средств на российском фармацевтическом рынке крайне ограничен и представлен

преимущественно монопрепаратами синтетического происхождения в форме мази или крема. При этом отечественные препараты растительного происхождения с ранозаживляющим действием отсутствуют, несмотря на высокую потребность в них. Вместе с тем, фитокомпоненты, содержащиеся в извлечениях чабреца, солодки, крапивы двудомной, каштана конского, зверобоя продырявленного, соке алоэ и дигидрокверцетин обладают регенерирующим, противовоспалительным, ангиопротекторным,

противоотечным действием, что свидетельствует о перспективности их использования в составе лекарственного препарата репаративного действия.

1. В результате проведенных технологических, биофармацевтических и биологических исследований определены оптимальные соотношения различных экстрактов лекарственного растительного сырья в фитокомпозициях, разработан состав вспомогательных веществ для создания геля с репаративным действием.

2. Разработаны два состава и технология фитогеля, включающего в себя действующие вещества в количестве 10% (густые экстракты чабреца, солодки голой, крапивы двудомной, каштана конского, масляный экстракт зверобоя продырявленного, сок алоэ и дигидрокверцетин), основу Flogel 700 - 0,5% с добавлением эмульгатора Flocare ЕТ 58 - 2%, пенетратор пропиленгликоль -2%, консервант Decaben С - 0,05%, воду очищенную до 100,0.

3. Установлено, что разработанный фитогель представляет собой структурированную систему, обладающую выраженными тиксотропными свойствами, а также достаточной технологичностью.

4. Установлены нормы качества разработанной ЛФ: внешний вид, водородный показатель, качественный и количественный анализ, микробиологическая чистота. Определен срок годности фитогеля, составивший 18 месяцев.

5. В опытах in vivo установлено, что фитогель оригинального состава оказывает ранозаживляющее действие. Подтверждена его антибактериальная активность в отношении тест-культуры Staphylococcus aureus 209 P.

На разработанный фитогель предложена технологическая схема производства, апробированная на производственной базе предприятия ООО «Медпинфарм», г. Москва, составлен и утвержден нормативный документ в виде ФСП на производство фитогеля репаративного действия для ООО «Медпинфарм» (г. Москва). Результаты данного диссертационного исследования могут быть рекомендованы для использования в фармацевтической практике с целью расширения ассортимента ранозаживляющих лекарственных препаратов за счёт отечественных объектов.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Володина, Т. А. Возможности использования фитокомпозиций и лекарственных препаратов-дженериков для разработки наружных мягких лекарственных форм / Т. А. Володина, Ю. Ю. Жидкова, А. В. Майорова // Фундаментальные исследования. - 2011.-№ 11, ч. 1.-С. 198-201.

2. Исследование репаративных свойств фитогеля, содержащего экстракты чабреца и солодки / Т. А. Володина, H.A. Пеньевская, С.И. Викторов [и др.] // Фундаментальные исследования. - 2012. — № 11, ч. 2. - С. 472-477.

3. Володина, Т.А. Обоснование оптимального состава композиций из растительных экстрактов с использованием биологического теста на парамециях / Т. А. Володина // Омский научный вестник. Серия Ресурсы земли. Человек. - 2012. - № 2 (114). - С. 30-31.

4. Фармакотехнологические исследования мазей с верапамилом и мазей, содержащих фитокомпозицию с чабрецом, предлагаемых к использованию в качестве дерматопротекторов / Т. А. Володина, Ю.Ю. Жидкова, A.B. Майорова [и др.] // Научные ведомости БелГУ. Серия Медицина. Фармация. — 2011. — № 22 (117), вып. 16/2. - С. 88-94.

5. Количественное определение содержания флавоноидов в эспериментальном фитогеле / Т. А. Володина, Л.С. Ушакова, С.С. Ляшенко [и др.] // Роль провизора в современной системе здравоохранения: мат. конф. 1617 мая 2013г. - Омск, 2013. - С. 19-22.

6. Володина, Т.А. Создание технологической схемы производства фитогеля репаративного действия / Т. А. Володина, Э.Ф. Степанова, H.A. Пеньевская // Роль провизора в современной системе здравоохранения: мат. конф. 16-17 мая2013г.-Омск,2013.-С. 15-19.

7. Володина, Т.А. Количественное определение содержания хлорофиллов в композитном фитогеле / Т. А. Володина // Роль провизора в современной системе здравоохранения: мат. конф. 16-17 мая 2013г. — Омск, 2013. — С. 13-15.

8. Разработка и валидационные характеристики методики количественного определения содержания флавоноидов в фитогеле репаративного действия / Т. А. Володина, H.A. Пеньевская, Л.С. Ушакова [и др.] // Фундаментальные исследования. - 2013. -№ 10, ч. 9. - С. 1987-1990.

Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Омская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения Российской Федерации (644043, г. Омск, ул. Ленина, 12)

Володина Татьяна Александровна

РАЗРАБОТКА СОСТАВА, ТЕХНОЛОГИИ И НОРМ КАЧЕСТВА ФИТОГЕЛЯ РЕПАРАТИВНОГО ДЕЙСТВИЯ

14.04.01 - технология получения лекарств

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Подписано в печать 24.06.2014 Формат 60x84/16 Бумага офсетная П.л.- 1,0 Способ печати - оперативный Тираж 100

Издательско-полиграфический центр ОмГМА 644050, г. Омск, пр. Мира, 30, тел. 60-59-08