Разработка хроматографических методик и методического подхода к метрологическому обеспечению химико-токсикологического анализа местных анестетиков

Столяров, Евгений Евгеньевич

Автореферат диссертации по медицине на тему Разработка хроматографических методик и методического подхода к метрологическому обеспечению химико-токсикологического анализа местных анестетиков

СТОЛЯРОВ ЕВГЕНИЙ ЕВГЕНЬЕВИЧ

Разработка хроматографических методик и методического подхода к метрологическому обеспечению химико -токсикологического анализа местных анестетиков

14.04.02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

1 9 МАЙ 2011

4846996

На правах рукописи

СТОЛЯРОВ ЕВГЕНИЙ ЕВГЕНЬЕВИЧ

Разработка хроматографических методик и методического подхода к метрологическому обеспечению химико -токсикологического анализа местных анестетиков

14.04.02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Пермская государственная фармацевтическая академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию».

Научный руководитель: кандидат фармацевтических наук,

доцент Малкова Тамара Леонидовна

Официальные оппоненты: доктор фармацевтических наук, профессор

Ярыгнна Татьяна Ивановна ГОУ ВПО «Пермская государственная фармацевтическая академия Росздрава»

кандидат фармацевтических наук, доцент Захарова Людмила Андреевна, Управляющая компания «Медисорб Групп», г. Пермь

Ведущая организация: ГОУ ВПО «Пятигорская государственная

фармацевтическая академия Росздрава»

Защита состоится «31» мая 2011 г. в 13 часов на заседании диссертационного совета Д 208. 068. 01 при Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Пермская государственная фармацевтическая академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» по адресу: 614990, г. Пермь, ул. Полевая, д.2.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Пермской государственной фармацевтической академии по адресу: г. Пермь, ул. Крупской, д.46.

Дата размещения объявления о защите диссертации на сайте ПГФА http://www.pfa.ru «28» апреля 2011 г. Автореферат разослан «29» апреля 2011 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета Д 208. 068. 01, кандидат фармацевтических наук,

доцент ^Липатникова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы. Химико-токсикологический анализ (ХТА) лекарственных средств, представляющих интерес с точки зрения потенциальной опасности для человека при острых отравлениях и преступных деяниях, достаточно трудоемкий процесс, где в качестве объектов исследования фигурируют биологические объекты (биожидкости, секреты, органы и т.п.). Основным в аналитической токсикологии является подготовка проб, включающая выделение (изолирование), очистку и концентрирование токсических соединений, правильное использование возможностей различных методов анализа, их рациональное сочетание и умение интерпретировать результаты. В этой области анализа очень большое значение имеет качество измерений, т.е. совокупность свойств, обуславливающих получение результатов с требуемыми точностными характеристиками, в необходимом виде и в установленные сроки.

Метрологическое обеспечение - это цикл мероприятий, правил, действий, направленных на получение достоверных, правильных, точных и воспроизводимых результатов измерений (анализа, контроля и т.п.). Обязательные требования Федерального закона «Об обеспечении единства измерений» предъявляются, в том числе к измерениям, которые выполняются по поручению суда, органов прокуратуры, государственных органов исполнительной власти.

В настоящее время подготовка и обоснование метрологического обеспечения проведения химико-токсикологического анализа, как в отношении живых лиц, так и в отношении экспертных исследований, имеющих судебно-химическую направленность, имеет первостепенное значение. Аналитическая служба Бюро судебно-медицинской экспертизы (Бюро СМЭ) и химико-токсикологических лабораторий (ХТЛ) крайне заинтересована в установлении и применении научных и организационных основ, технических средств, правил и норм, необходимых для достижения единства и требуемой точности измерений.

Обеспечение необходимой точности анализа при реализации аттестованных методик в испытательной лаборатории требует внедрения внутреннего контроля показателей качества результатов анализа. Жизненный цикл методики выполнения измерений позволяет сформулировать требования к современной лабораторно-информационной системе с целью автоматизации метрологических нужд аналитической лаборатории.

Местные анестетики по частоте развития лекарственных осложнений стабильно занимают одно из первых мест в связи с широким применением в медицинской практике и способностью вызывать отравления, в том числе и смертельные, сопровождающиеся негативными реакциями организма от простых форм аллергии до анафилактического шока. Неблагоприятные побочные эффекты токсического характера развиваются, как правило, на фоне повышенных концентраций препарата в крови при использовании их в дозах, превышающих рекомендуемые, при случайном попадании в сосудистое русло, при быстром введении препарата, а также при введении пациентам с медленным типом метаболизма. В Пермской фармакадемии ранее проведены исследования по разработке хроматографических методов определения лидокаина, тримекаина, артикаина и анилокаина в биообъектах . Необходимым этапом использования высокочувствительных методик анализа является их аттестация, оценка пригодности (валидация) и определение форм и методов контроля стабильности получаемых результатов при их реализации в экспертной практике.

Цель и задачи. Целью работы является разработка и оптимизация методик обнаружения и количественного определения ряда местных анестетиков, выработка методического подхода к метрологическому обеспечению проведения испытаний для целей химико-токсикологического анализа.

Для достижения поставленной цели предстояло решить следующие задачи:

• Оптимизировать методику изолирования местноанестезирующих средств из биожидкостей на основании изучения степени извлечения в диапазоне терапевтических и токсических концентраций.

• Разработать скрининговую методику определения группы местных анестетиков на основе капиллярной газо-жидкостной хроматографии для включения в схему химико-токсикологического анализа биожидкостей.

• Аттестовать методику выполнения измерений (МВИ) по обнаружению и количественному определению местных анестетиков в биожидкостях, провести эксперимент по оценке пригодности методики и рассчитать характеристики погрешности результатов анализа при реализации, аттестованной МВИ.

• Провести сравнительную оценку требований государственных стандартов к методам проведения испытаний и оценке приемлемости методов при проведении химико-токсикологических исследований.

• Определить основные направления реализации процедуры внутрилабораторного контроля при проведении химико-токсикологического анализа для выработки рекомендаций по его метрологическому обеспечению.

• Апробировать проведение внутрилабораторного контроля при проведении химико-токсикологического анализа местных анестетиков с использованием компьютерной программы «(}-Сотго1 5.0».

Научная новизна. Разработаны условия скринингового определения 12 местноанестезирующих веществ в крови и моче на основе капиллярной газожидкостной хроматографии, установлены оптимальные температурные градиенты для разделения всех анализируемых веществ.

На основании изучения степени извлечения в диапазоне терапевтических и токсических концентраций оптимизирована методика изолирования местноанестезирующих средств из биожидкостей.

Разработан методический подход на основании идеологии стандарта ГОСТ Р ИСО 5725-2002 к систематизации обязательных этапов деятельности аналитической службы экспертных учреждений по обеспечению достоверности и качества проведения испытаний, к которым относится аттестация аналитических методик, оценка их пригодности в конкретной лаборатории и проведение внутрилабораторного контроля качества.

Определена последовательность процедур по оценке показателей точности методики при её разработке и аттестации, оценке показателей точности результатов анализа при реализации экспертной методики в конкретной лаборатории на примере МВИ по обнаружению и количественному определению местных анестетиков в крови и моче.

Дана оценка функции внутрилабораторного контроля качества по контролю стабильности результатов судебно-химического и химико-токсикологического анализа как стабильности метрологических характеристик измерений для обеспечения точности и сопоставимости результатов.

Обоснована необходимость автоматизации рутинной деятельности химико-токсикологических и судебно-экспертных лабораторий с помощью информационных технологий, определены технические возможности использования отдельных видов контрольных карт на основе программного обеспечения «(^-контроль 5.0» в практике химико-токсикологического анализа.

Практическая значимость. Выполненная работа позволяет принимать научно-обоснованные решения при определении форм и методов реализации требований по метрологическому обеспечению проведения судебно-

химических и химико-токсикологических исследований, способствующих повышению качества и обеспечению достоверности результатов испытаний.

Разработанные методики определения местных анестетиков в биожидкостях на основе хроматографических методов внедрены в практику судебно-химического отделения Пермского бюро судебно-медицинской экспертизы (акт внедрения от 27 апреля 2009 г.), судебно-химического отделения Тюменского бюро судебно-медицинской экспертизы (акт внедрения от 14 мая 2009 г.), химико-токсикологической лаборатории областного центра острых отравлений Свердловской областной клинической психиатрической больницы (акт внедрения от 05 октября 2009 года). Усовершенствованная процедура химико-токсикологического исследования местных анестетиков в биологических жидкостях (кровь, моча) легла в основу Новой медицинской технологии «Определение местноанестезирующих препаратов в биожидкостях при судебно-химическом и химико-токсикологическом исследовании», принятой к рассмотрению Российским центром судебно-медицинской экспертизы.

Методические подходы к проведению аттестации методик обнаружения и количественного определения местных анестетиков в биообъектах внедрены в практику судебно-химического отделения Курганского бюро судебно-медицинской экспертизы (акт внедрения от 07 апреля 2009 года). Методические подходы к проведению внутрилабораторного контроля при проведении судебно-химических и химико-токсикологических исследований внедрены в работе химико-токсикологической лаборатории МУ ГКБ № 14 при построении системы менеджмента качества (акт внедрения от 16 мая 2009 г.), судебно-химического отделения Кировского областного бюро судебно-медицинской экспертизы (акт внедрения от 25 мая 2009 г.), химико-токсикологической лаборатории областного центра острых отравлений Свердловской областной клинической психиатрической больницы (акт внедрения от 05 октября 2009 года).

Апробация работы. Основные материалы работы доложены на межвузовской научно-практической конференции «Актуальные проблемы фармацевтической науки и образования: Итоги и перспективы. Вузы и регион» (Пермь, 2003), международной научно-практической конференции «Традиции и инновации в понимании и решении проблем инвалидности» (Пермь, 2005), научной конференции «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции» (Пятигорск, 2006), 80-ой Всероссийской студенческой научной конференции (Казань, 2006), Всероссийской научной конференции студентов, аспирантов и мол. ученых «Молодежь и наука - третье тысячелетие» (Красноярск, 2006), российской научно-практической конференции, посвященной 70-летию ПГФА «Достижения и перспективы в области создания новых лекарственных средств» (Пермь, 2007), Всероссийской научно - практической конференции, посвященной памяти профессора Ю.М.Кубицкого «Современные проблемы медико-криминалистических, судебно-химических и химико-токсикологических экспертных исследований» (Москва, 2007), Российской научно-практической конференции «Современное состояние и пути оптимизации лекарственного обеспечения населения» (Пермь, 2008), Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Актуальные вопросы судебно-химических, химико-токсикологических исследований и фармацевтического анализа» (Пермь, 2009).

Объем и структура работы. Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части (3 главы), общих выводов, списка литературы, включающего 172 наименования (53 источника зарубежной литературы), приложения. Работа изложена на 153 страницах машинописного текста, включает 33 таблицы, 22 рисунка и 59 страниц приложения, включающего акты внедрения, документы по аттестации методик выполнения измерений, Новую медицинскую технологию,

результаты эксперимента по внутрилабораторному контролю качества с использованием программного обеспечения «р-СопйчЯ 5.0».

Публикации. По теме диссертации опубликовано 14 работ, из них 2 -в журналах, рекомендованных ВАК, 1 монография.

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом исследований Пермской государственной фармацевтической академии (номер государственной регистрации 01.9.50 007417).

На защиту диссертации выносятся следующие положения:

• Теоретическое обоснование методического подхода к систематизации обязательных этапов деятельности аналитической службы экспертных учреждений по обеспечению достоверности и качества проведения химико-токсикологических исследований.

• Результаты изучения степени извлечения анилокаина, лидокаина, тримекаина и артикаина из мочи и крови в диапазоне терапевтических и токсических концентраций.

• Результаты экспериментальных исследований по разработке скрининговой газохроматографической методики обнаружения ряда местноанестезирующих веществ при их совместном присутствии на основе изучения факторов, влияющих на хроматографическое разделение

• Результаты эксперимента по аттестации и оценке пригодности методики выполнения измерений (МВИ) по обнаружению и количественному определению местных анестетиков в биожидкостях с использованием метода высокоэффективной жидкостной хроматографии.

в Результаты апробации проведения внутрилабораторного контроля при проведении химико-токсикологического анализа местных анестетиков в крови с использованием компьютерной программы «С?-Согйго1 5.0».

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ 1. Состояние методического и метрологического обеспечения проведения химико-токсикологических и судебно-химических экспертных исследований местных анестетиков

Существующие на сегодняшний день основные теории механизма действия местных анестетиков характеризуют эти вещества как специфически воздействующие на нервные эфферентные образования, прекращающие проведение нервных импульсов. Использование в качестве объектов исследования группы местноанестезирующих средств обусловлено проявлением системных токсических процессов и аллергических реакций, в том числе со смертельным исходом. Фармакокинетика амидных анестетиков во многом определяется быстротой всасывания, малым периодом полувыведения.

На основании анализа литературных источников сделаны выводы о необходимости оптимизации изолирования местных анестетиков из крови и мочи в диапазоне терапевтических и токсических концентраций, разработки современных скрининговых методик анализа. Предлагаемые отечественными и зарубежными авторами методики их обнаружения на основе высокоэффективной газожидкостной хроматографии в подавляющем большинстве случаев базируются не на капиллярных, а на устаревших набивных колонках, не обеспечивающих должную чувствительность и эффективность при разделении внутри группы большого числа сходных по структуре веществ.

Разработанные методики требуют проведения процедур аттестации для определения соответствующих метрологических параметров, валидации (оценки пригодности) методик и установления процедур контроля

стабильности результатов химико-токсикологического анализа. Для метрологического обеспечения получения достоверных, правильных, точных и воспроизводимых результатов экспертных исследований необходимо использование современной нормативно - правовой документации: ГОСТ Р ИСО 5725-2002 рекомендует достаточно большой набор способов контроля качества результатов исследований, приемлемых в том числе при проведении судебно-химических и химико-токсикологических исследований. Требует обоснования и возможность применения контрольных карт для контроля стабильности результатов химико-токсикологического анализа на основе компьютерных программ, позволяющих полностью или частично автоматизировать внутрилабораторный контроль.

Важнейшим информационным инструментом являются методики выполнения измерений (МВИ), основные этапы «жизни» которых представлены на рисунке 1.

Аттестации

а

Внедрение в лабораториях

Эксплуатация лабораториях

а

Откат от методики

Разработка методики г—^ Пропись методики

□

|--^

Оценка показателей качества методики

Оценка показателей качества результатов измерений

Внутрилабораторный контроль, межлабораторные сравнительные

Рис. 1 - Жизненный цикл методики анализа

Таким образом, построение плана эксперимента основывалось на основных этапах жизненного цикла МВИ, а методический подход к реализации метрологических требований включал оценку показателей качества разработанных методик анализа местных анестетиков, оценку показателей качества при внедрении методик и процедуры внутрилабораторного контроля с использованием современных информационных технологий.

2. Объекты и методы исследования

В эксперименте были использованы фармацевтические субстанции или инъекционные растворы местноанестезирующих препаратов, соответствующие требованиям нормативной документации. Для приготовления модельных смесей использовали образцы мочи и цельной крови, полученные от здоровых добровольцев, не принимавших лекарственные препараты в течение месяца до отбора проб. Модельные смеси мочи и крови готовили путем добавления 0,1 % водных растворов субстанций исследуемых веществ или растворов, представляющих собой готовые лекарственные средства, до получения концентраций 2, 5, 10 мкг/мл (что охватывает диапазон терапевтических и токсических концентраций).

При проведении исследований методом ВЭЖХ использовался жидкостный микроколоночный хроматограф «Милихром А-02», методом ГЖХ - хроматографы «Кристалл 2000М» и «Agilent 7890 А».

3. Разработка и оптимизация методик химико-токсикологического анализа местных анестетиков, аттестация и оценка пригодности МВИ

Нами был проведен эксперимент по изучению степени извлечения лидокаина, тримекаина, артикаина и анилокаина из биожидкостей (кровь, моча) в зависимости от их концентрации (2, 5 и 10 мкг/мл). Для контроля выхода анестетиков использовалась разработанная ранее методика ВЭЖХ.

Предел обнаружения исследуемых веществ методом ВЭЖХ в крови составил для лидокаина - 0,8 мкг/мл, для тримекаина и артикаина - 1,5 мкг/мл, для анилокаина - 1 мкг/мл, в моче - для лидокаина и анилокаииа -0,5 мкг/мл, для артикаина и тримекаина - 0,7 мкг/мл. Таким образом, предлагаемые методики позволяют определять уровень терапевтических и токсических концентраций анестетиков в биожидкостях.

Нами был проведён эксперимент и разработана скрининговая методика определения ряда 12 местных анестетиков (анестезина, лидокаина, тримекаина, мепивакаина, артикаина, анилокаина, ропивакаина, кокаина, дикаина, бупивакаина, пиромекаина, оксибупрокаина), методом капиллярной газожидкостной хроматографии на модельных смесях, представляющих собой растворы с концентрацией 10 мкг/мл в метаноле.

Известно, что наиболее существенными факторами, способствующими сокращению времени анализа местных анестетиков, при достаточно полном их разделении, является градиентное поднятие температуры в колонке хроматографа, скорость газа носителя, деление потока газа, температуры детектора и испарителя. Было установлено, что при стартовой температуре колонки 130°С, 140°С, 155°С, 180°С, при любом градиентном изменении температурного режима, вещества делятся не полностью и зачастую образуют продукты разложения. При стартовой температуре колонки 160°С также возможно неполное деление и возникновение продуктов разложения анализируемых веществ, но при гибком варьировании температурного градиента удается почти или полностью избежать этих недостатков.

Таким образом, наибольшая эффективность колонки при оптимальной чувствительности определения была получена при работе на хроматографе «Кристалл 2000М» при следующих условиях:

• температурные параметры: детектор пламенно-ионизационный (ПИД)

300°С; испаритель 250°С;

в расходы газов (мл/мин): азот 39, водород 20, воздух 200. Коэффициент деления потока газа-носителя 1:17, линейная скорость азота 53 см/сек. С учетом коэффициента деления объемная скорость потока азота, проходящего через колонку, составила 2,3 мл/мин. « начальная температура колонки 160°С - 1 мин., подъем до 200°С со скоростью 8°С/мин, выдержка при 200°С - 1 мин., подъем до 211°С со скоростью 1°С/мин, выдержка при 211°С - 2 мин., далее подъем до 290°С со скоростью 25°С/мин. Общее время хроматографирования 24 минуты (рис. 2).

БреняВХЭЗ 1п»ви (ШЯ СП 3&S7*« Рлмф 02*23 №0 ~ *76.313"мВ

Рис. 2 - Хроматограмма разделения группы местных анестетиков при скрининге ГЖХ на хроматографе «Кристалл 2000М»

При работе на хроматографе «Agilent 7890А» (рис.3) наибольшая эффективность колонки при оптимальной чувствительности определения была получена при следующих условиях:

• температурные параметры: детектор ПИД 300°С; испаритель 250°С;

• расходы газа (мл/мин): гелий 34, Коэффициент деления потока газа-носителя 1:30. С учетом коэффициента деления объемная скорость потока гелия, проходящего через колонку, составила 3 мл/мин.

температура колонки 160°С - 1 мин., подъем до 180°С со скоростью 8°С/мин, выдержка при 180°С - 2 мин., подъем до 190°С со скоростью 1°С/мин, выдержка при 190°С - ] мин., далее подъем до 290°С со скоростью 25°С/мин. Общее время хроматографирования 23 минуты.

, 1

2йШ ' ' 22ГО 2''с

460 б(ю' ' ' "в(ю 1 ю'оо 12W

'«W Vt)D 2)1

'2V00 26'оо а'оо эо'оо'

Рис. 3 — Хроматограмма разделения группы местных анестетиков при скрининге ГЖХ на хроматографе «Agilent 7890 А»

Как видно из рисунков 2,3 имеет место достаточно четкое разделение всех компонентов смеси, пики узкие и симметричные. Таким образом, данные температурные режимы были выбраны как рабочие, для всех 12 местных анестетиков.

Нами предложена схема химико-токсикологического анализа исследуемых веществ в биологических жидкостях хроматографическими методами на основе ранее разработанных условий (рис. 4), которая легла в основу Новой медицинской технологии «Определение местноанестезирующих препаратов в биожидкостях при судебно-химическом и химико-токсикологическом исследовании».

Рис. 4 - Схема химико-токсикологического исследования биожидкостей на наличие ряда местных анестетиков (лидокаина, тримекаина, артикаина и анилокаина)

Разработанные методики определения местных анестетиков в биожидкостях при судебно-химическом и химико-токсикологическом исследовании внедрены в практику судебно-химического отделения Пермского бюро судебно-медицинской экспертизы (акт внедрения от 27 апреля 2009 г.), судебно-химического отделения Тюменского бюро судебно-медицинской экспертизы (акт внедрения от 2.05.2009), химико-токсикологической лаборатории областного центра острых отравлений Свердловской областной клинической психиатрической больницы (акт внедрения от 05.10.2009 г.).

Нами были представлены подходы к оценке показателей точности при аттестации методики химико-токсикологического анализа с использованием

высокоэффективной жидкостной хроматографии на примере местноанестезирующих средств (лидокаина, анилокаина, тримекаина, артикаина) в крови. Для проведения эксперимента использовались модельные смеси, содержащие определяемые вещества в диапазоне терапевтических и токсических концентраций. Общий объем пробы (крови) в каждом случае составлял 400 мл, для проведения эксперимента использовали метод добавок.

В ходе аттестации МВИ был определен порядок проведения процедуры оперативного контроля повторяемости (сходимости), который должен проводиться при каждом испытании рабочих проб.

По итогам аттестации Уральским НИИ метрологии выдано свидетельство об аттестации № 223.1.11.11.83/2007 от 31.08.2007. Методические подходы к проведению аттестации методик обнаружения и количественного определения местных анестетиков в биообъектах внедрены в практику судебно-химического отделения Курганского бюро судебно-медицинской экспертизы (акт внедрения от 07 апреля 2009 года).

В качества образцов для оценивания характеристик погрешности результатов анализа в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725 были приготовлены модельные смеси (на основе крови) с содержанием лидокаина, анилокаина, артикаина, тримекаина 5 мкг/мл. Показатели качества результатов анализа определяемых веществ в лаборатории в целом соответствует указанным в приложении к свидетельству об аттестации МВИ (таблица 1).

В связи с введением в действие с 1 мая 2009 года ГОСТ Р 52960-2008 «Аккредитация судебно-экспертных лабораторий. Руководство по применению ГОСТ Р ИСО/МЭК 17025» проведена сравнительная оценка государственных стандартов для целей использования в экспертной практике, сформулированы основные положения, устанавливающие требования к методам проведения испытаний и оценке приемлемости, к прослеживаемости измерений.

Таблица 1 - Сравнительная оценка показателей точности при аттестации методики с показателями качества результатов анализа местных анестетиков

Диапазон измерений, значения показателей точности, повторяемости, внутрилабораторной прецизионности и воспроизводимости согласно свидетельству № 223.1.11.11.83 ФГУП УНИИМ

Наименование соединения, диапазон измерений, мкг/см3 Показатель повторяемости (относительное значение среднеквадратического отклонения повторяемости), аг% Показатель внутрилабораторной прецизионности (относительное значение среднеквадратического отклонения внутрилабораторной прецизионности), <1Ял% Показатель точности (границы относительной погрешности при вероятности (Р=0,95), 6, %

Анилокаин От 5 до 105 вкл 12 15 40

Лидокаин От 5 до 105 вкл 11 13 32

Тримекаин От 5 до 85 вкл 11 13 32

Артикаин От 5 до 105 вкл 10 12 30

Диапазон измерений, значения показателей точности, повторяемости, внутрилабораторной прецизионности и воспроизводимости, полученные в РИЦ «Фарматест» Пермской государственной фармацевтической академии

Анилокаин От 5 до 105 вкл 9,34 9,36 34

Лидокаин От 5 до 105 вкл 9,28 8,50 32

Тримекаин От 5 до 85 вкл 7,87 8,48 32

Артикаин От 5 до 105 вкл 10 8,26 30

4. Внутренний контроль качества экспертных исследований

В связи с современными требованиями предупреждения попадания в протокол или заключение эксперта ошибочных результатов, нами разработаны рекомендации по организации и проведению

внутрилабораторного контроля качества как одного из этапов обеспечения качества химико-токсикологического анализа.

Проведенные исследования позволили сделать вывод об основных направлениях внедрения внутрилабораторного контроля: создание нормативного документа, регламентирующего порядок и формы проведения

ВЛК; разработка контрольных материалов для разных биоматриц методов определения, их аттестация и включение в реестр; использование контрольных карг; создание компьютерных программ, позволяющих полностью или частично автоматизировать ВЛК

В качестве одной из форм контроля стабильности результатов анализа нами рекомендовано и с положительным результатом апробировано на примере химико-токсикологического анализа местных анестетиков использование контрольных карт с применением компьютерной программы «С2-СопИ"о1 5.0».

В ходе исследования модельных смесей крови, содержащей лидокаин, артикаин, анилокаин, тримекаин, нами были изучены различные виды контрольных карт и оценена возможность их использования при проведении судебно-химического и химико-токсикологического анализа. Периодичность оценки рабочих проб составляла 3 дня в неделю, контрольные карты велись в течение 2 месяцев.

Нами показана целесообразность ведения контрольных карт размахов, текущих расхождений, Шухарта (средних значений), СиБЫМ с использованием стандартных образцов, сформулированы рекомендации по их использованию в экспертной практике на базе программы «0-Соп1го1 5.0». Сделан вывод о том, что контрольные карты на основе рабочих проб не могут быть применены вследствие особенностей проведения экспертных исследований.

Разработан методический подход к обеспечению качества химико-токсикологических и судебно-химических исследований, включающий поэтапную систематизацию деятельности аналитической службы экспертных учреждений по обеспечению достоверности и качества проведения испытаний и план каждого этапа.

Методические подходы к проведению внутрилабораторного контроля при проведении судебно-химических и химико-токсикологических исследований внедрены в работе химико-токсикологической лаборатории

МУ ГКБ № 14 г. Екатеринбург, при построении системы менеджмента качества, судебно-химического отделения Кировского областного бюро судебно-медицинской экспертизы.

ВЫВОДЫ

1. Оптимизирована методика изолирования местных анестетиков из биожидкостей на основе изучения степени извлечения в диапазоне терапевтических и токсических концентраций. Предложенные методики в среднем позволяют извлекать из крови 74 % лидокаина, 66 % тримекаина, 65 % артикаина и 69 % анилокаина, из мочи 90 % лидокаина, 84 % тримекаина, 76 % артикаина и 91 % анилокаина (процент извлечения указан для концентрации местных анестетиков 10 мкг/см3 биожидкости).

2. Разработана скрининговая методика обнаружения 12 местных анестетиков методом высокоэффективной газожидкостной хроматографии для аппаратно-программных комплексов «Кристалл 2000» (газ-носитель азот) и «Agilent 7890А» (газ-носитель гелий), общее время хроматографирования составило соответственно 24 и 23 минуты. Установлены оптимальные температурные градиенты для разделения всех анализируемых веществ. Предложена схема химико-токсикологического анализа исследуемых веществ в биологических жидкостях хроматографическими методами, которая легла в основу Новой медицинской технологии «Определение местноанестезирующих препаратов в биожидкостях при судебно-химическом и химико-токсикологическом исследовании», принятой к рассмотрению Российским центром судебно-медицинской экспертизы.

3. Проведен эксперимент по аттестации методики выполнения измерений (МВИ) по обнаружению и количественному определению местных анестетиков в биожидкостях с использованием метода высокоэффективной жидкостной хроматографии (свидетельство об аттестации № 223.1.11.11.83/2007 от 31.08.2007). В ходе аттестации

МВИ определен порядок проведения процедуры оперативного контроля повторяемости (сходимости), который должен проводиться при каждом испытании. Проведена оценка пригодности методики и расчет характеристик погрешности результатов анализа при реализации аттестованной МВИ в РИЦ «Фарматест» ГОУ ВПО Г1ГФА Росздрава. Показатели качества результатов анализа определяемых веществ в лаборатории в целом оказались не хуже, чем указанные в приложении к свидетельству об аттестации МВИ.

4. Проведена сравнительная оценка требований государственных стандартов ГОСТ Р 52960-2008 «Аккредитация судебно-экспертных лабораторий. Руководство по применению ГОСТ Р ИСО/МЭК 17025» и ГОСТ Р ИСО/МЭК 17025 «Общие требования к компетентности испытательных и калибровочных лабораторий» к методам проведения испытаний и оценке приемлемости методов при проведении судебно-экспертных исследований. Широкая область применения стандарта ГОСТ Р ИСО/МЭК 17025-2006 интерпретирована с учетом такой специфики сферы деятельности аналитических лабораторий как участие в судопроизводстве.

5. Разработаны рекомендации по использованию ряда положений приказа Минздрава России № 220, утвердившего ОСТ "Правила проведения внутрилабораторного контроля качества количественных методов клинических лабораторных исследований с использованием контрольных материалов» в практике экспертной деятельности. Результаты проведенного исследования позволили определить основные направления реализации процедуры внутрилабораторного контроля при проведении химико-токсикологического анализа: разработка и утверждение нормативного документа, регламентирующего порядок и формы проведения ВЛК; создание контрольных материалов для разных биоматриц и разных методов определения, их аттестация и включение в реестр МЗиСР РФ;

применение идеологии проведения оперативного контроля качества аналитических исследований с использованием контрольных карт; разработка и использование компьютерных программ, позволяющих полностью или частично автоматизировать ВЛК.

6. С положительным результатом апробировано проведение ВЛК при проведении химико-токсикологического анализа местных анестетиков с использованием компьютерной программы «С>Соп1го1 5.0». При проведении судебно-химического анализа целесообразно ведение контрольных карт размахов, текущих расхождений, Шухарта (средних значений), СЫБиМ с использованием стандартных образцов. Контрольные карты на основе рабочих проб не могут быть применены вследствие особенностей проведения экспертных исследований. Разработаны рекомендации по организации контроля стабильности результатов с использованием контрольных карт для химико-токсикологических лабораторий и судебно-химических отделений бюро СМЭ.

По теме диссертации опубликованы следующие работы:

1. Гайсинович, М. С. Скрининг местных анестетиков методом капиллярной газовой хроматографии / М. С. Гайсинович, Т. Л. Малкова, Е. Е. Столяров // Актуальные проблемы фарм. науки и образования: итоги и перспективы: материалы. МНПК проф.- препод, состава «Вузы и регион». - Пермь, 2003. -С. 92.

2. Определение местных анестетиков методом капиллярной хроматографии с использованием аппаратно-программного комплекса «Кристалл 2000М» / Е.Е Столяров, Т.Л. Малкова, М.С. Гайсинович, Ю.Н. Карпенко // Проблемы экспертизы в медицине. - 2004. - № 3. - С. 25-27.

3. Капиллярная газовая хроматография в экспертизе острых отравлений лекарственными препаратами, применяемыми в анестезиологии / Т.Л. Малкова, М.С. Гайсинович, Ю.Н. Карпенко, Е.Е. Столяров // Традиции и

инновации в понимании и решении проблем инвалидности: материалы науч. - практ. конф. - Пермь, 2005. - С. 181 -183.

4. Булатов, P.M. Применение капиллярной газо - жидкостной хроматографии при химико-токсикологических исследованиях / P.M. Булатов, Т.Н. Малкова, Е.Е. Столяров // Вести. Перм. гос. фарм. акад.: науч.-практ. жури. студ. науч. общества. - 2006. - № 1. - С.56.

5. Химико-токсикологический анализ местноанестезирующих препаратов и лекарственных средств, потенцирующих их действие / Е.Е. Столяров, Т.Н. Малкова, М.С. Гайсинович, P.M. Булатов // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сборник науч. трудов,- Вып. 61. - Пятигорск: изд. ПятГФА, 2006. - С. 298.

6. Булатов, P.M. Токсикологическое значение лекарственных препаратов, применяемых в анестезиологической практике / P.M. Булатов, Е.Е. Столяров, Т.Л. Малкова // Сборник тезисов 80-ой Всероссийской студенческой научной конференции (18-20 апреля 2006 г.). - Казань, 2006. - С. 201-202.

7. Карпенко, Ю.Н. Хроматографические методы в химико-токсикологическом анализе ряда местных анестетиков / Ю.Н. Карпенко, Т.Л. Малкова, Е.Е. Столяров // Современные проблемы медико-криминалистических, судебно-химических и химико-токсикологических экспертных исследований: сборник материалов Всерос. науч.-практ. конф., посвящ. памяти проф. Ю.М. Кубицкого. - Москва, 2007. - С. 218-221.

8. Столяров, Е.Е. Высокоэффективная жидкостная хроматография в химико-токсикологическом анализе местноанестезирующих средств / Е.Е. Столяров, P.M. Булатов, Т.Л. Малкова // Достижения и перспективы в области создания новых лекарственных средств: материалы рос. науч. - практ. конф., посвящ. 70 - летаю ПГФА (27-28 ноября 2007 г.). - Пермь, 2007. - С. 217-219.

9. Столяров, Е.Е. К вопросу аттестации МВИ массовых концентраций местных анестетиков в биологических жидкостях / Е.Е. Столяров, Т.Л. Малкова // Современное состояние и пути оптимизации лекарственного обеспечения населения: материалы рос. науч.-практ. конф. ПГФА (14-ая

международная выставка «Медицина и здоровье», 13-15 ноября 2008 г.). -Пермь, 2008. - С.155-157.

10. Столяров, Е.Е. Определение ряда местных анестетиков в биологических жидкостях при химико-токсикологических исследованиях / Е.Е. Столяров, Ю.Н. Карпенко, T.J1. Малкова // Суд. - мед. экспертиза. - 2009. - №3. - С. 24 -27.

11. Контрольные карты в системе внутрилабораторного контроля качества, программные и технические средства их применения / Е.Е. Столяров, И.П. Крохин, P.M. Булатов, T.JI. Малкова // Вестн. Перм. гос. фарм. акад.: науч.-практ. журн. - 2009. - № 5. - С.156 -157.

12. Столяров, Е.Е. Методическое и метрологическое обеспечение проведения химико-токсикологических и судебно-химических экспертных исследований на примере местных анестетиков / Е.Е. Столяров // Сборник материалов Всероссийской научно-практической конференции с международным участием (ГОУ ВПО ПГФА Росздрава, 28.09 - 3.10.2009 г.). -Пермь, 2009.-С. 11-14.

13. Столяров, Е.Е. Использование программы Qcontrol 5.0 при проведении внутрилабораторного контроля качества химико-токсикологического анализа местных анестетиков в биожидкостях / Е.Е. Столяров, Т.Н. Малкова // Сборник материалов Всероссийской научно-практической конференции с международным участием (ГОУ ВПО ПГФА Росздрава, 28.09 - 3.10.2009 г.). - Пермь, 2009. - С. 25-27.

14. Малкова, Т.Л. Внутренний и внешний контроль качества судебно-химических экспертных исследований / Т.Л. Малкова, Е.Е. Столяров. Монография. - Пермь (ГОУ ВПО ПГФА Росздрава), 2009. - 73 с.

Подписано в печать 27.04.2011 Формат 60*84/16. Набор компьютерный. Бумага ВХИ. Тираж 100 экз. Усл. печ. л 1,5 Заказ № 55/2011.

Отпечатано на ризографе в типографии ГОУ ВПО ПГФА 614070, г. Пермь, ул. Крупской, 46, тел./факс. 8-901-266-59-37, (342) 282-57-92

Оглавление диссертации Столяров, Евгений Евгеньевич :: 2011 :: Пермь

Введение

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Глава 1. Состояние методического и метрологического 14 обеспечения проведения химико-токсикологических и судебно-химических экспертных исследований местных анестетиков

1.1 Фармакотоксикологическая характеристика местных 14 анестетиков

1.2 Применения методов газожидкостной и высокоэффективной 20 жидкостной хроматографии для определения местных анестетиков в фармацевтическом и химико-токсикологическом анализе

1.3 Обеспечение единства измерений при проведении химико- 29 токсикологических исследований

1.4 Роль стандартов ГОСТ Р ИСО 5725 в совершенствовании 34 метрологических подходов к обеспечению качества

1.5 Жизненный цикл методики выполнения измерений (МВИ)

1.5.1 Нормативно-методическая база химико- 36 токсикологических исследований

1.5.2 Разработка МВИ

1.5.3 Аттестация и валидация МВИ

1.5.4 Внутрилабораторный контроль при эксплуатации 42 МВИ

1.6 Применение контрольных карт в системе управления качеством аналитических исследований

Выводы по главе 47 ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

Глава 2. Объекты и методы исследования

2.1 Физико-химические свойства объектов исследования

2.2 Характеристика средств измерения

2.3 Методические основы проведения эксперимента для процедуры аттестации МВИ

Глава 3. Разработка и оптимизация методик химико- 60 токсикологического анализа местных анестетиков, аттестация и оценка пригодности МВИ

3.1 Оптимизация методики изолирования местных анестетиков из 60 крови и мочи

3.2 Разработка скрининговой методики определения местных 66 анестетиков на основе капиллярной газо-жидкостной хроматографии

3.3 Аттестация методик выполнения измерений (МВИ) по 77 обнаружению и количественному определению местных анестетиков в биообъектах с использованием метода высокоэффективной жидкостной хроматографии

3.4 Валидация методики определения местных анестетиков в 87 крови с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии

3.4.1 Сравнительная оценка характеристик погрешности 88 результатов измерений при реализации методики определения местных анестетиков в крови на основе ВЭЖХ

3.4.2 Рекомендации по проведению валидации 100 аналитических методик в экспертной практике

3.5 Сравнительная оценка требований государственных 101 стандартов к методам проведения испытаний и оценке приемлемости методов при проведении судебно-экспертных исследований

Выводы по главе

Глава 4. Внутренний контроль качества при проведении 107 химико-токсикологического анализа

4.1 Разработка рекомендаций к организации 107 внутрилабораторного контроля качества при проведении химико-токсикологического анализа

4.2 Изучение возможности применения контрольных карт при 113 проведении химико-токсикологического анализа с использованием программных и технических средств

4.3 Разработка методического подхода к обеспечению качества 127 химико-токсикологического и судебно-химического анализа

Выводы по главе

Введение диссертации по теме "Фармацевтическая химия, фармакогнозия", Столяров, Евгений Евгеньевич, автореферат

Актуальность проблемы. Химико-токсикологический анализ (ХТА) лекарственных средств, представляющих интерес с точки зрения потенциальной опасности для человека при острых отравлениях и преступных деяниях, достаточно трудоемкий процесс, где в качестве объектов исследования фигурируют биологические объекты (биожидкости, секреты, органы и т.п.). Основным в аналитической токсикологии является подготовка проб, включающая выделение (изолирование), очистку и концентрирование токсических соединений, правильное использование возможностей различных методов анализа, их рациональное сочетание и умение интерпретировать результаты. В этой области анализа очень большое значение имеет качество измерений, т.е. совокупность свойств, обуславливающих получение результатов с требуемыми точностными характеристиками, в необходимом виде и в установленные сроки.

Метрологическое обеспечение - это цикл мероприятий, правил, действий, направленных на получение достоверных, правильных, точных и воспроизводимых результатов измерений (анализа, контроля и т.п.) [79]. Обязательные требования Федерального закона «Об обеспечении единства измерений» предъявляются, в том числе к измерениям, которые выполняются по поручению суда, органов прокуратуры, государственных органов исполнительной власти.

В настоящее время подготовка и обоснование метрологического обеспечения проведения химико-токсикологического анализа, как в отношении живых лиц, так и в отношении экспертных исследований, имеющих судебно-химическую направленность, имеет первостепенное значение. Аналитическая служба Бюро судебно-медицинской экспертизы (Бюро СМЭ) и химико-токсикологических лабораторий (ХТЛ) крайне заинтересована в установлении и применении научных и организационных основ, технических средств, правил и норм, необходимых для достижения единства и требуемой точности измерений.

Измерения, относящиеся к сфере государственного регулирования обеспечения единства измерений, должны выполняться по аттестованным методикам измерений с применением средств измерений утвержденного типа, прошедших поверку, а результаты измерений должны быть выражены в единицах величин, допущенных к применению в РФ [107]. Несмотря на то, что аттестацию МВИ проводят аккредитованные на этот вид деятельности учреждения, весь объем эксперимента для процедуры аттестации должен быть выполнен непосредственно в судебно-медицинском экспертном учреждении или химико-токсикологической лаборатории.

Обеспечение необходимой точности анализа при реализации аттестованных методик в испытательной лаборатории требует внедрения внутреннего контроля показателей качества результатов анализа. Жизненный цикл методики выполнения измерений позволяет сформулировать требования к современной лабораторно - информационной системе с целью-автоматизации метрологических нужд аналитической лаборатории.

Местные анестетики по частоте развития лекарственных осложнений.' стабильно занимают одно из первых мест, в связи с широким применением в медицинской практике и способностью вызывать отравления, в том числе и смертельные, сопровождающиеся негативными реакциями организма от простых форм аллергии до анафилактического шока. Неблагоприятные побочные эффекты токсического характера развиваются, как правило, на фоне повышенных концентраций препарата в крови при использовании их в дозах, превышающих рекомендуемые, при случайном попадании в сосудистое русло, при быстром введении препарата, а также при введении пациентам с медленным типом метаболизма. В Пермской фармакадемии, ранее, проведены отдельные исследования, по разработке методик хроматографического определения лидокаина, тримекаина, артикаина и анилокаина в биообъектах [41, 57]. Необходимым этапом использования высокочувствительных методик анализа является их аттестация, оценка пригодности (валидация) и определение форм и методов контроля стабильности, получаемых результатов при их реализации в экспертной практике [98].

Целью работы является разработка и оптимизация методик обнаружения и количественного определения ряда местных анестетиков, выработка методического подхода к метрологическому обеспечению проведения испытаний для целей химико-токсикологического анализа.

Для достижения поставленной цели предстояло решить следующие задачи:

• Оптимизировать методику изолирования местноанестезирующих средств из биожидкостей на основании изучения степени извлечения в диапазоне терапевтических и токсических концентраций.

• Разработать скрининговую методику определения группы местных анестетиков на основе капиллярной газо-жидкостной хроматографии для включения в схему химико-токсикологического анализа биожидкостей.

• Аттестовать методику выполнения измерений (МВИ) по обнаружению и количественному определению местных анестетиков в биожидкостях, провести эксперимент по оценке пригодности методики и рассчитать характеристики погрешности результатов анализа при реализации, аттестованной МВИ.

• Провести сравнительную оценку требований государственных стандартов к методам проведения испытаний и оценке приемлемости методов при проведении химико-токсикологических исследований.

• Определить основные направления реализации процедуры внутрилабораторного контроля при проведении химикотоксикологического анализа для выработки рекомендаций по его метрологическому обеспечению.

• Апробировать проведение внутрилабораторного контроля при проведении химико-токсикологического анализа местных анестетиков с использованием компьютерной программы «С^-Сопйх)1 5.0».

Научная новизна. Разработаны условия скринингового определения 12 местноанестезирующих веществ в крови и моче на основе капиллярной газожидкостной хроматографии, установлены оптимальные температурные градиенты для разделения всех анализируемых веществ.

На основании изучения степени извлечения в диапазоне терапевтических и токсических концентраций оптимизирована методика изолирования местноанестезирующих средств из биожидкостей.

Разработан методический подход на основании идеологии стандарта ГОСТ Р ИСО 5725-2002 к систематизации обязательных этапов деятельности аналитической службы экспертных учреждений по обеспечению достоверности и качества проведения испытаний, к которым относится аттестация аналитических методик, оценка их пригодности в конкретной лаборатории и проведение внутрилабораторного контроля качества.

Определена последовательность процедур по оценке показателей точности методики при её разработке и аттестации, оценке показателей точности результатов анализа при реализации экспертной методики в конкретной лаборатории на примере МВИ по обнаружению и количественному определению местных анестетиков в крови и моче.

Дана оценка функции внутрилабораторного контроля качества по контролю стабильности результатов судебно-химического и химико-токсикологического анализа как стабильности метрологических характеристик измерений для обеспечения точности и сопоставимости результатов.

Обоснована необходимость автоматизации рутинной деятельности химико-токсикологических и судебно-экспертных лабораторий с помощью информационных технологий, определены технические возможности использования отдельных видов контрольных карт на основе программного обеспечения «(^-контроль 5.0» в практике химико-токсикологического анализа.

Практическая значимость. Выполненная работа позволяет принимать научно-обоснованные решения при определении форм и методов реализации требований по метрологическому обеспечению проведения судебно-химических и химико-токсикологических исследований, способствующих повышению качества и обеспечению достоверности результатов испытаний.

Разработанные методики определения местных анестетиков в биожидкостях на основе хроматографических методов внедрены в практику судебно-химического отделения Пермского бюро судебно-медицинской экспертизы (акт внедрения от 27 апреля 2009 г.), судебно-химического отделения Тюменского бюро судебно-медицинской экспертизы (акт внедрения от 14 мая 2009 г.), химико-токсикологической лаборатории областного центра острых отравлений Свердловской областной клинической психиатрической больницы (акт внедрения от 05 октября 2009 года). Усовершенствованная процедура химико-токсикологического исследования местных анестетиков в биологических жидкостях (кровь, моча) легла в основу Новой медицинской технологии «Определение местноанестезирующих препаратов в биожидкостях при судебно-химическом и химико-токсикологическом исследовании», принятой к рассмотрению Российским центром судебно-медицинской экспертизы.

Методические подходы к проведению аттестации методик обнаружения и количественного определения местных анестетиков в биообъектах внедрены в практику судебно-химического отделения Курганского бюро судебно-медицинской экспертизы (акт внедрения от 07 апреля 2009 года). Методические подходы к проведению внутрилабораторного контроля при проведении судебно-химических и химико-токсикологических исследований внедрены в работе химико-токсикологической лаборатории МУ ГКБ № 14 при построении системы менеджмента качества (акт внедрения от 16 мая 2009 г.), судебно-химического отделения Кировского областного бюро судебно-медицинской экспертизы (акт внедрения от 25 мая 2009 г.), химико-токсикологической лаборатории областного центра острых отравлений Свердловской областной клинической психиатрической больницы (акт внедрения от 05 октября 2009 года).

Апробация работы. Основные материалы работы доложены на межвузовской научно-практической конференции «Актуальные проблемы фармацевтической науки и образования: Итоги и перспективы. Вузы и. регион» (Пермь, 2003), международной научно-практической конференции «Традиции и инновации в понимании и решении проблем инвалидности» (Пермь, 2005), научной конференции «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции» (Пятигорск, 2006), 80-ой Всероссийской студенческой научной конференции (Казань, 2006), * Всероссийской научной конференции студентов, аспирантов и мол. ученых «Молодежь и наука — третье тысячелетие» (Красноярск, 2006), российской научно-практической конференции, посвященной 70-летию ПГФА «Достижения и перспективы в области создания новых лекарственных средств» (Пермь, 2007), Всероссийской научно - практической конференции, посвященной памяти профессора Ю.М.Кубицкого «Современные проблемы медико-криминалистических, судебно-химических и химико-токсикологических экспертных исследований» (Москва, 2007), Российской научно-практической конференции «Современное состояние и пути оптимизации лекарственного обеспечения населения» (Пермь, 2008), Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Актуальные вопросы судебно-химических, химикотоксикологических исследований и фармацевтического анализа» (Пермь, 2009).

Объем и структура работы. Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части (3 главы), общих выводов, списка литературы, включающего 172 наименования (53 источника зарубежной литературы), приложения. Работа изложена на 152 страницах машинописного текста, включает 33 таблицы, 21 рисунок и 4 раздела приложения, включающего акты внедрения, документы по аттестации методик выполнения измерений, Новую медицинскую технологию, результаты эксперимента по внутрилабораторному контролю качества с использованием программного обеспечения «С2Соп1:го1 5.0».

Заключение диссертационного исследования на тему "Разработка хроматографических методик и методического подхода к метрологическому обеспечению химико-токсикологического анализа местных анестетиков"

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1. Оптимизирована методика изолирования местных анестетиков из биожидкостей на основе изучения степени извлечения в диапазоне терапевтических и токсических концентраций. Предложенные методики в среднем позволяют извлекать из крови 74 % лидокаина, 66 % тримекаина, 65 % артикаина и 69 % анилокаина, из мочи 90 % лидокаина, 84 % тримекаина, 76 % артикаина и 91 % анилокаина (процент извлечения указан для концентрации местных анестетиков 10

•у мкг/см биожидкости).

2. Разработана скрининговая методика обнаружения 12 местных анестетиков методом высокоэффективной газожидкостной хроматографии для аппаратно-программных комплексов «Кристалл 2000» (газ-носитель азот) и «Agilent 7890А» (газ-носитель гелий), общее время хроматографирования составило соответственно 24 и 23 минуты. Установлены оптимальные температурные градиенты для разделения всех анализируемых веществ. Предложена схема химико-токсикологического анализа исследуемых веществ в биологических жидкостях хроматографическими методами, которая легла в основу Новой медицинской технологии «Определение местноанестезирующих препаратов в биожидкостях при судебно-химическом и химико-токсикологическом исследовании», принятой к рассмотрению Российским центром судебно-медицинской экспертизы.

3. Проведен эксперимент по аттестации методики выполнения измерений (МВИ) по обнаружению и количественному определению местных анестетиков в биожидкостях с использованием метода высокоэффективной жидкостной хроматографии (свидетельство об аттестации № 223.1.11.11.83/2007 от 31.08.2007). В ходе аттестации МВИ определен порядок проведения процедуры оперативного контроля повторяемости (сходимости), который должен проводиться при каждом испытании. Проведена оценка пригодности методики и расчет характеристик погрешности результатов анализа при реализации аттестованной МВИ в РИЦ «Фарматест» ГОУ ВПО ПГФА Росздрава. Показатели качества результатов анализа определяемых веществ в лаборатории в целом оказались не хуже, чем указанные в приложении к свидетельству об аттестации МВИ.

4. Проведена сравнительная оценка требований государственных стандартов ГОСТ Р 52960-2008 «Аккредитация судебно-экспертных лабораторий. Руководство по применению ГОСТ Р ИСО/МЭК 17025» и ГОСТ Р ИСО/МЭК 17025 «Общие требования к компетентности испытательных и калибровочных лабораторий» к методам проведения испытаний и оценке приемлемости методов при проведении судебно-экспертных исследований. Широкая область применения стандарта ГОСТ Р ИСО/МЭК 17025-2006 интерпретирована с учетом такой специфики сферы деятельности аналитических лабораторий как участие в судопроизводстве.

5. Разработаны рекомендации по использованию ряда положений приказа Минздрава России № 220, утвердившего ОСТ "Правила проведения внутрилабораторного контроля качества количественных методов клинических лабораторных исследований с использованием контрольных материалов» в практике экспертной деятельности. Результаты проведенного исследования позволили определить основные направления реализации процедуры внутрилабораторного контроля при проведении химико-токсикологического анализа: разработка и утверждение нормативного документа, регламентирующего порядок и формы проведения ВЛК; создание контрольных материалов для разных биоматриц и разных методов определения, их аттестация и включение в реестр МЗиСР РФ; применение идеологии проведения оперативного контроля качества аналитических исследований с использованием контрольных карт; разработка и использование компьютерных программ, позволяющих полностью или частично автоматизировать ВЛК.

6. С положительным результатом апробировано проведение ВЛК при проведении химико-токсикологического анализа местных анестетиков с использованием компьютерной программы «С>-Соп1то1 5.0». При проведении судебно-химического анализа целесообразно ведение контрольных карт размахов, текущих расхождений, Шухарта (средних значений), Си8ЦМ с использованием стандартных образцов. Контрольные карты на основе рабочих проб не могут быть применены вследствие особенностей проведения экспертных исследований. Разработаны рекомендации по организации контроля стабильности результатов с использованием контрольных карт для химико-токсикологических лабораторий и судебно-химических отделений бюро СМЭ.

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2011 года, Столяров, Евгений Евгеньевич

1. Аналитическая хроматография / К.И. Сакодынский, В.В. Бражников, С.А. Волков и др. М.: Химия, 1993. - 464 с.

2. Андерсон, A.A. Жидкостная хроматография аминосоединений / A.A. Андерсон. Рига: Зинатне, 1984.-295 с.

3. Арзамасцев, А.П. Валидация аналитических методов / А.П. Арзамасцев, Н.П. Садчикова, Ю.Я. Харитонов // Фармация 2006. -№4. — С.8-12.

4. Барам, Г.И. Новые возможности высокоэффективной жидкостной хроматографии в анализе лекарственных средств / Г.И. Барам, Д.В. Рейхарт, // Фарматека. 2002. - №11. - С.71-74.

5. Береговых, В.В. Основные принципы проведения валидации на фармацевтическом производстве /В.В. Береговых. М.: Русский врач, 2005.- 186 с.

6. Бидлинмейер, Б.М. Препаративная жидкостная хроматография / Б.М. Бидлинмейер. М.: Мир, 1990. - 358 с.

7. Богомолов, Ю.А. ГСИ информационная основа СМК / Ю.А.Богомолов // Методы оценки соответствия. - 2008. - № 3. - С. 4-7.

8. Болдырев, И.В. Совершенствование системы качества испытательной лаборатории в связи с введением стандартов ГОСТ Р ИСО 5725 / И.В. Болдырев // Методы оценки соответствия. — 2005. — № 7. — С. 5-8

9. Букреева, Л.П. Использование ВЭЖХ в анализе опиатов с применением косвенного СФМ детектирования / Л.П. Букреева, П.Е. Кузнецов, //

10. Хим.- фармацевт, журн. 2000.-№5. — С. 55-56.

11. И. Ваганова, O.A. Валидация аналитических методик / O.A. Ваганова, И.А. Касаткин, Д.О. Скобелев // Методы оценки соответствия. — 2007. -№8.-С. 12-14.

12. Веселовская, Н.В. Хроматографический анализ фенциклидина, его метаболитов и аналогов в биологической жидкости. / Н.В. Веселовская, С.А. Савчук, Б.Н. Изотов // Суд.-мед. экспертиза. 1999.- №2.- С.20-25.

13. Вощинина, H.A. Химико-токсикологическое исследование производных п-аминобензойной кислоты (анестезин, новокаин и новокаинамид): дис . канд. фарм. наук: 15.00.02: защищена 25.10. 00 / Вощинина Наталья Анатольевна. Курск, 2000 - 171 с.

14. ВФС 42 2846 - 97. Анилокаин субстанция / Фармакопейный гос. комитет. - введ. 1997-10-03 - РУ № 97/292/2 - б/с.- Б.м., [1997].- 9 с.

15. Голубев, Э.А. Измерения. Контроль. Качество. ГОСТ Р ИСО 5725: основные положения. Вопросы освоения и внедрения / Э.А. Голубев, JI.K. Исаев. М.: Стандартинформ, 2005. - 136 с.

16. ГОСТ Р ИСО 9000 2008 Системы менеджмента качества. Основные положения и словарь. - Взамен ГОСТ Р ИСО 9000 - 2001; введ. 200909-10.- М.: Стандартинформ, 2009. - 35 с.

17. ГОСТ Р ИСО 9001-2008. Системы менеджмента качества. Требования. Взамен ГОСТ Р ИСО 9001-2001; введ. 2009-11-13. - М.: Стандартинформ, 2009. - 31 с.

18. ГОСТ Р ИСО/МЭК 17025-2006. Общие требования к компетентности испытательных и калибровочных лабораторий : введ. 2006-1-27. М.: Стандартинформ, 2007. - 25 с.

19. ГОСТ Р 52960-2008. Аккредитация судебно-экспертных лабораторий. Руководство по применению ГОСТ Р ИСО/МЭК 17025. введ. 2009-0501 ; утв. приказом Ростехрегулирования от 24.09.2008 г. № 212-ст. - М.: Стандартинформ, 2008. - 16 с.

20. ГОСТ Р 50779.42-99 (ИСО 8258-91). Статистические методы. Контрольные карты Шухарта. введ. 2000-01-01. - М.: Стандартинформ, 2008. - 36 с.

21. ГОСТ 8.207-76. Прямые измерения с многократными наблюдениями. Методы обработки результатов наблюдений. Основные положения.-введ. 1977-01-01.- М.: Стандартинформ, 2008. 8 с.

22. ГОСТ Р 8.563-96. Государственная система обеспечения единства измерений. Методики выполнения измерений. Взамен ПР 50.2.001-94 ; введ. 1997-07-01. -М.: Стандартинформ, 2008.-23 с.

23. Государственная фармакопея СССР. Вып.1. Общие методы анализа / МЗ СССР. 11-е изд., доп. - М.; Медицина, 1987. - С. 175 -176.

24. Государственная фармакопея СССР. Препараты. ФС № 167 «Кокаина гидрохлорид» / МЗ СССР. 10-е изд., - М.; Медицина, 1968. - С. 193.

25. Дворкин, В.И. Внутрилабораторный контроль точности результатов измерений по стандартам ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002 и ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 / В.И. Дворкин // Партнеры и конкуренты. — 2003. — № 1. — С. 26-39

26. Еремин, С.К. Применение высокоэффективной жидкостной хроматографии в химико-токсикологическом анализе лекарственных соединений / С.К. Еремин, Б.Н. Изотов // Журн. аналит. химии. 1988. -Т. 44, №4-С. 5-19.

27. Еремин, С.К. Анализ лекарственных средств / С.К. Еремин, Б.Н. Изотов, Н.В. Веселовская. М.: Медицина, 1993. - С. 54 -58.

28. ИСО 9001:2008. Системы управления качеством. Требования (ISO 9001:2008 Quality management systems Requirements). - Взамен ИСО 9001:2000; введ. 2008-11-13.- M.: Стандартинформ, 2009.-38 с.

29. Калетина Н.И. Токсикологическая химия. Метаболизм и анализ токсикантов / Н.И. Калетина. М.: ГЭОТАР - Медиа, - 2008. - 1016 е.: ил.

30. Калмановский, В.И. Рубрика «Вопрос — ответ» / В.И.Колмановский // Методы оценки соответствия. — 2007. № 10. — С. 42

31. Камаев, А.В. Применение жидкостной хроматографии при исследовании объектов криминалистической экспертизы / А.В. Камаев М.: ЭКЦ МВД РФ, 1994. - 20 с.

32. Карасек, Ф. Введение в хромато — масс спектрометрию / Ф. Карасек, Р. Клемент. - М.: Мир, 1993.- 236 с.

33. Карпенко Ю.Л. Разработка методик обнаружения и колкчественного определения ряда местноанестезирующих средств в биологических объектах: дис. . канд. фармац. наук: 15.00.02: защищена 20.06.06/ Карпенко Юлия Николаевна. — Пермь, 2006. 182 с.

34. Кислун, Ю.В. Обнаружение наркотических и других одурманивающих веществ в моче методом газожидкостной хроматографии: дис. . канд. фарм. наук: 15.00.02: защищена 21.06.93 / Кислун Юрий Викторович. — М., 1993.-158 с.

35. Кокорина, Н.О. Опыт применения высокоэффективной микроколоночной жидкостной хроматографии в химическом отделении Бюро СМЭ г. Новосибирска / Н.О. Кокорина, Г.Г. Шамовский // Актуал. вопр. судеб, мед. и эксперт, практики. 1999. - №4. - С. 138143.

36. Коржевская В.Ф. Смерть после введения лидокаина / В.Ф. Коржевская, Л.Г. Матвеева// Суд.-мед. экспертиза. 1991. - №1. - С. 50-51.

37. Круть, М.Н. Анализ острых отравлений лекарственными препаратами / М.Н. Круть, Г.Н. Зарафьянц // Эксперим. и клин, фармакология. — 1992. №3. — С.54-56.

38. Кудрин, А.Н. Фармакология / А.Н. Кудрин.- М.: Медицина, 1991.- 496 е.: ил.

39. Куцевич, И.В. Введение в LIMS / И.В.Куцевич // Лабораторные информационные системы LIMS: сб. тр. — М., 2006. — С. 8-24.

40. Лазарян, Д. С. Определение алкалоидов опия и некоторых синтетических производных морфинана методом высокоэффективной жидкостной хроматографии / Д.С. Лазарян, Т.Х. Вергейчик, // Суд.-мед. экспертиза. -1992.- №4.- С.37-39.

41. Лапуста, М.Г. Предпринимательство: учеб пособие /М.Г. Лапу ста. 2-е изд., испр. и доп. - М.: Инфра - М, 2003. - 224 с.

42. Ларенцова, Л.И. Неблагоприятные побочные реакции на местноанестезирующие средства в стоматологической практике. / Л.И. Ларенцова, A.B. Астахова // Новые лекарств, препараты: экспресс-информ. -2002. -№8. С. 74-80.

43. Лебедев, А. Т. Масс-спектрометрия в органической химии / А. Т. Лебедев. М.: БИНОМ, 2003. - 493 с.

44. Лев, А. О применении терминов из мертвого языка / А. Лев // Методы оценки соответствия. 2007. - № 8. — С. 17.

45. Лекарственные средства, применяемые в анестезиологии и реаниматологии: федер. рук. для врачей по использованию лекарств, средств. М., 2001. -Вып.11. - С.571-579.

46. Лопатин, A.C. Лекарственный анафилактический шок / A.C. Лопатин. -М. 1983.-132 с.

47. Лопатин, A.C. Побочное действие местноанестезирующих средств. / Новые лекарств, препараты: экспресс-информ.-1986.-№7.- С.1- 4.

48. Малкова, Т.Л. Разработка методов анализа и стандартизация нового местноанестезирующего средства анилокаина: дис. . канд. фармац. наук: 15.00.02: защищена 5.03.1991 / Малкова Тамара Леонидовна. — Пермь, 1991.-191 с.

49. Малкова, Т.Л. Внутренний и внешний контроль качества судебно-химических экспертных исследований. / Т.Л. Малкова, Е.Е.Столяров. -Пермь (ГОУ ВПО ПГФА Росздрава), 2009. 73 с.

50. Машковский, М.Д. Средства действующие приемущественно в области чувствительных (афферентных) нервных окончаний / М.Д. Машковский // Лекарственные средства: практ. пособие. 15-е изд., перераб., испр. и доп.- М.: Новая волна, 2007.- гл.З. — С 307 - 315

51. Мелентьев, А.Б. Определение клофелина в крови методом ГХМС / А.Б. Мелентьев // Суд.-мед. экспертиза. -2000.- №4.- С.28-31.

52. Мелентьев, А.Б. Скрининг лекарственных, наркотических веществ и их метаболитов методом газовой хроматографии с масс-селективнымдетектором / А.Б. Мелентьев // Проблемы экспертизы в медицине. — 2002. №4.-С. 15-20.

53. Мердок, Дж. Контрольные карты / Дж. Мер док. М.: Физкультура и спорт, 1986.-150 с.

54. Михайлов, И Б. Настольная книга врача по клинической фармакологии /ИБ. Михайлов. СПб.,2001. - 500 с.

55. НД 42 13624 — 05. Артикаина гидрохлорид. Субстанция. — Б.м.,2005,-20 с.

56. НД 42 1022 — 99 Тримекаина гидрохлорид. Субстанция. - Б.м., 1999. -7 с.

57. НД 42 14192 - 06 Лидокаина гидрохлорид. Субстанция. - Б.м.,2006, 23 с.

58. НД 42 3089 — 00. Скандонест 3% раствор для инъекций, карпулы 1,8 мл. - Б.м., 2000,-19 с.

59. НД 42 9063 - 06. Маркаин 0,5% раствор для инъекций, во флаконах. — Б.м., 2006,- 18 с.

60. НД 42 13476 - 05. Наропин раствор для инъекций 7,5мг/мл, — Б.м., 2005, - 24 с.

61. НД 42 11141 - 00. Инокаин капли глазные 0,4 % - Б.м., 2000, - 11 с.

62. Новиков, В.Н. Внутренний аудит системы менеджмента и контроль качества результатов испытаний / В.Н. Новиков, А.А.Никитюк, В.В.Новиков // Методы оценки соответствия. — 2007. № 2. — С. 42-45.

63. Новиков, В.Н. Основы аудита в лабораториях: учеб. пособие /

64. B.Н.Новиков, А.А.Никитюк. Киев: Нора-Принт, 2004. -230 с.

65. Новиков, В.Н. Особенности разработки систем менеджмента в лабораториях в рамках требований ИСО/МЭК 17025:2005 / В.Н. Новиков // Методы оценки соответствия. — 2006. № 11(5). — С 29-32.

66. Новиков, В.Н. Автоматизация процесса вычисления характеристик методик во время их валидации / В.Н. Новиков, В.В. Новиков // Методы оценки соответствия. 2007. - № 7. — С. 39-44.

67. Определение местных анестетиков методом капиллярной хроматографии с использованием аппаратно программного комплекса «Кристалл 2000М» / Столяров, Е.Е. Майкова, T.JI. Гайсинович, М.С. и др. // Проблемы экспертизы в медицине. - 2004. - № 3. - С. 25-27.

68. Пикула, Н.П. Метрологическое обеспечение и контроль качества химического анализа / Н.П. Пикула, A.A. Бакибаев, Г.Б. Слепченко. — Томск: Изд-во Том. политех, ун-та, 2007. 154 с.

69. Пиотровский, В.К. Определение пиромекаина и тримекаина в сыворотке крови методом ГЖХ / В.К. Пиотровский, С.В. Благодатских //Хим. фармацевт, журн. - 1995.-Т.17,№ 11. - С. 1381-1383.

70. Панева, В.И. О рекомендациях по метрологии Р 50.2.011-2005 / В.И. Панева, О.Б. Пономарева. // Партнеры и конкуренты. 2006. - № 4.1. C.40-41.

71. Пономарева, JI.C. Рубрика «Вопрос ответ» / Л.С.Пономарева // Методы оценки соответствия. - 2007. - № 10. - С. 42

72. Приказ МЗ РФ № 220 от 26.05.03. «Правила проведения внутрилабораторного контроля качества количественных методов клинических лабораторных исследований с использованием контрольных материалов»: утв. 26.05.03 МЗ РФ. // Главный врач 2003.

73. Рабинович, С.А. Комбинированное обезболивание в амбулаторной стоматологии / С.А. Рабинович, М.В. Лукьянов // Человек и лекарство: тез. докл. VII рос. нац. конгр. — М., 2000.- С. 373.

74. Рекомендации по метрологии. Р 50.2.003-2000. ГСИ. Внутренний контроль качества результатов- измерений. Пакет программ (^Соп1хо1. -введ. 2001- 01- 01.- М.: Стандартинформ, 2000. 8 с.

75. РМГ 76 2004. Государственная система обеспечения единства измерений. Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа. — Взамен МИ 2335-2003; введ. 2006 - 09 - 01; М.: Стандартинформ, 2008. - 86 с.

76. РМГ 60-2003. ГСИ. Смеси аттестованные. Общие требования и разработка. Взамен МИ 2334-2002; введ. 2004-07-01. - М.: Стандартинформ, 2007. — 15 с.

77. РМГ 61-2003 ГСИ. Показатели точности, правильности, прецизионности методик количественного химического анализа. Методы оценки. Взамен МИ 2336-2002; введ. 2005-01-01. - М.: Стандартинформ, 2007. - 45 с.

78. РМГ 59-2003. Проверка пригодности к применению в лаборатории реактивов с истекшим сроком хранения способом внутрилабораторного контроля точности измерений. Введ. 2004-07-01. - М.: Стандартинформ, 2007. - 11с.

79. Родовниченко, М.С. Изучение лидокаина и новокаинамида в химико-токсикологическом отношении: дис. . канд. фарм. наук: 15.00.02: защищена 03.07.98 / Родовниченко Марина Сергеевна. Пятигорск,1998.-167 с.

80. Родовниченко, М.С. Обнаружение и количественное определение лидокаина и новокаинамида в биологических жидкостях / М.С. Родовниченко, М.Г. Цыбулина // Суд.-мед. экспертиза. -1998.- №1.-С.24-27.

81. Роль аккредитации в создании системы метрологической прослеживаемости (по материалам бюллетеня «ILAC News», октябрь 2008 г.) // Методы оценки соответствия. 2008. - № 12. - С.26-28. -(Коллектив авторов).

82. Руководство по валидации методик анализа лекарственных средств / Н.В. Юргель, A.JI. Младенцева, A.B. Бурдейн и др. М.: Фармацевтическая промышленность, 2007. — 57 с.

83. Скворцова, О.Н. Лекарственные средства, применяемые в анестезиологии / О.Н. Скворцова // Новая аптека. 2002. - №12. — С.23-30.

84. Сланский, В.Э. Использование высокоэффективной жидкостной хроматографии в контроле качества местноанестезирующих лекарственных средств: дис. . канд. фарм. наук: 15.00.02: защищена 20.06.94 / Сланский Валерий Эдуардович. М., 1994. - 175 с.

85. Столяров, Б.Н. Практическая газовая и жидкостная хроматография / Б.Н. Столяров, А.Г. Витенберг. СПб., 1998. - 610 с.

86. Столяров, Е.Е. Использование программы Qcontrol 5.0 при проведении внутрилабораторного контроля качества химико-токсикологического анализа местных анестетиков в биожидкостях / Е.Е. Столяров, Т.Д.

87. Малкова // Сборник материалов всероссийской научно-практической конференции с международным участием (ГОУ ВПО ПГФА Росздрава, 28.09 3.10.2009 г). - Пермь, 2009. - С. 31-34.

88. Титова, А.В. Изучение процесса экстракции лекарственных соединений из биологического материала: дис. .канд. фармац. наук: 15.00.02: защищена 27.05.84 / Титова Алевтина Викторовна. — М., 1984. 145 с.

89. Тавер, Е.И. Программирование испытаний / Е.И. Тавер // Методы оценки соответствия. 2008. - № 4. - С. 41-43.

90. Терещенко, А.Г. Управление движением проб в аналитической лаборатории / А.Г. Терещенко, A.M. Янин // Автоматизация и современные технологии. — 2006. № 11. — С. 3-7.

91. Терещенко, А.Г. Цикл жизни методик анализа в лабораторно-информационных системах (ЛИС) «Химик-аналитик» / А.Г. Терещенко, О.В. Терещенко, Т.В. Толстихина // Методы оценки соответствия. 2007. - № 12. - С. 14-17.

92. Терещенко, А.Г. Организация внутрилабораторного контроля качества анализа на базе ЛИС «Химик-аналитик» / А.Г. Терещенко, Т.В. Толстихина // Партнеры и конкуренты. 2004. - № 10. — С. 41-46.

93. Фартушный, А.Ф. Дифференциальная диагностика летальных исходов при лечении больных лидокаином / А.Ф. Фартушный, Э.Б. Мужановский // Суд.-мед. экспертиза. 1998. - №1. - С. 33-35.

94. Фаланаган, Р. Дж. Основы аналитической токсикологии : пер. с англ. / Р. Дж. Фаланаган. Женева, 1997. —363 с.

95. Федеральный Закон «Об обеспечении единства измерений» : от 26.06.2008 № 102 ФЗ: принят Гос. Думой 11.06.2008; одобрен Советом Федерации 18.06.2008 // Рос. газ. 2008. - 2 июля.

96. Федеральный Закон «О техническом регулировании» от 27.12.2002 № 184 ФЗ: (ред. от 18.07.2009): принят Гос. Думой 11.06.2008; одобрен Советом Федерации 18.06.2008 // Рос. газ. 2002. - 31 декабря.

97. Федеральный Закон «О государственной судебно-экспертнойдеятельности в Российской Федерации» от 31.05.2001 № 73 ФЗ: (ред. от 28.06.2009): принят Гос. Думой 5.04.2001; одобрен Советом Федерации 16.05. 2001 //Рос. газ.-2001.-2 июня.

98. ФС 42 3024 — 00. Анестезин субстанция / Фармакопейный гос. комитет. - Введ. 2000-10-03 - РУ № 64/228/14, 30.04.64 - б/с.- Б.м., [2000].- 6с.

99. ФС 42 3773 - 99. Дикаин субстанция / Фармакопейный гос. комитет. -Введ. 1999-07-28 - РУ № 64/228/64, 30.04.64 - б/с.- Б.м., [1999].- 6с.

100. ФС 42 1823 - 82. Пиромекаин субстанция / Фармакопейный гос. комитет. - Введ. 1982-06-09 - РУ № 71/625/5, 10.09.71 - б/с.- Б.м., [1982].-6с.

101. Уголовно-процессуальный кодекс Российской Федерации: федерал. Закон от 18.12.2001, № 174 ФЗ: (ред. от 18.07.2009): принят Гос. Думой 22.11.2001; одобрен Советом Федерации 5.12.2001 // Рос. газ. 2001. -22 декабря.

102. Хайвер К. Высокоэффективная газовая хроматография / К. Хайвер; под. ред. В.Г Березкина; пер. с англ. М.А. Кожевника М.: Мир, 1993. -288с.

103. Чайка, И.И. Системы менеджмента качества и их роль в свете закона «О техническом регулировании» / И.И.Чайка // Методы оценки соответствия. 2007. - № 1(7). - С. 10-12.

104. Шатц, В.Д. Высокоэффективная жидкостная хроматография. Основы теории. Методология. Применение в лекарственной химии / В.Д. Шатц, О.В. Сахартова. Рига: Зинатне, 1988.-300 с.

105. Шмидт, A.A. Фармакотерапевтический справочник обезболивающихсредств / А.А. Шмидт, Е.С. Шмидт. Ростов н/Д„ 1998. — 97 с.

106. Штрибель, Х.В. Терапия хронической боли: практ. рук. / Х.В. Штрибель; под. ред. Н.А. Осиповой; пер. с нем. В.Ю. Халатова.- М.: ГЭОТАР Медиа, 2005. - 304 с.

107. Agilent J&W GC Column Selection Guide. Santa Clara, Agilent Technologies, Inc., 2009. — 158 p.

108. Aitkenhead R. Alan. Textbook of Anaesthesia. / Alan R. Aitkenhead, Smith Graham, David J. Rowbotham. 5 th. ed. - Amsterdam: Churchill Livingstone Elsevier, 2006. - 868 p.

109. Abracham, I. Simultaneous analisis of lidocain and bupivacain enantiomers in plasma by high-performance liquid chromatography / I. Abracham, J. Fawcett, J. Kennedy // J. Chromatogr. 1997. - Vol. 703. - P. 203-208 - (B).

110. Baram, G.I. Portable liquid chromatography for mobile laboratories / G.I. Baram // J. Chromatogr. 1996. - Vol. 728. - P. 387-399.

111. Boguzs, M. UF-detections in the HPLC screening / M. Boguzs, E. Erkens // J. Anal. Toxicol. 1993. Vol. 14. - P. 165-170.

112. Block, A. Effect of local anaesthetic agents on cardiac conduction and contractility / A. Block, G. Covino // Reg. Anaesth. 1981. - Vol. 8. - P. 55 -61.

113. Burn, A.G.L., Pharmacokinetics of the enantiomers of mepivacaine and bupivacaine after epidural administration of the racemates. / A.G.L. Burn, K. Groen // The International Monitor, XV Annual ESRA Congress. Nice, 1996.-P.97.

114. Charp, M.E. HPLC in the screening methods / M.E. Charp. // J. Anal. Toxicol. 1987. - Vol. 11. - P. 8-11.

115. Clark, S. Isolation and Identification of Drugs / S. Clark London, 1986. -P. 705-706.

116. Copeland, S. E. The Effects of General Anesthesia on the Central Nervous and Cardiovascular System Toxicity of Local Anesthetics / S. E.Copeland, L. A. Ladd // Anesth. Analg. 2008. - Vol. 106(5). - P.1429 - 1439.

117. De Zeeuw, R. Potential and pitfalls of chromatographic techniques and detection modes in substance identification for systematic toxicological analysis / R. De Zeeuw, J. Hartstra // J. Chromatogr. 1994. - Vol.674. - P. 3-13.

118. Dalens, B. Caudal anesthesia./ B.Dalens // Regional Anesthesia in Infants, Children and Adolescents. — London: Williams & Wilkins, 1995. P. 171 -194.

119. Desparmet, J.Continuous epidural infusion of bupivacaine for postoperative pain relief in children/ J.Desparmet, C. Meistelman // Anesthesiology. 1987. -Vol. 67.-P. 108-110.

120. Desrnedde, M. Grand Mai Convulsion After an Accidental Intravenous Injection of Ropivacaine/ M. Desrnedde, D. Furlan // Anesth. Analg. 2004. -Vol. 98(2).-P. 521 -523.

121. Di Fazio, C.A. Metabolism of local anaesthetics in the fetus, newborn and adults. //Br. J. Anaesth. 1979. - Vol. 51. - P. 29 - 36.1. S ' f

122. Drummer, 0. H. Reverse-phase mode in HPLC / O. H. Drummer, A. Kotsos. // J. Analyt. Toxicol. 1993. - Vol. 17. - P. 225-229.

123. Eyres, R.L. Plasma bupivacaine concentrations in children during caudal epidural anesthesia. / R.L. Eyres ,W. Bishop // Anaesth. Intens. Care. 1983. -Vol. 11.-P. 20-22.

124. Eyres, R.L., Plasma concentrations following topical larengeal application. / R.L. Eyres, W Bishop // Anaesth. Intes. Care. 1983. - Vol. 11. - P. 23 - 26.

125. Finucane T.Brendan, Complications of Regional Anesthesia/ Brendan T Finucane.- 2 nd. Ed. New York: Springer Science+Business Media, LLC, 2008. -P.61-87.

126. Grouls, R. Capillary gas chromatographic method for the determination of nbutyl-p-aminobenzoate and lidocain in plasma samples / R. Grouls, E. Machilsen. //J. Chromatogr. 1995. - Vol. 673. - P.51-57 - (B).

127. Hashimoto, K Epinephrine increases the neurotoxic potential of intrathecally administered lidocaine in the rat / K. Hashimoto, K. Hampl // Anesthesiology. 2001. Vol. 94. - P.876-881.

128. ILAC G19:2002. Guidelines for Forensic Science Laboratories. IV. — Silver water, The ILAC, 2002. - 15p.

129. JCGM 200:2008. International vocabulary of metrology — Basic and general concepts and associated terms (VIM). 3rd. ed. - Geneva, 2008. — 90 p. - (The Joint Committee for Guides in Metrology JCGM/WG 2).

130. Kindler, C.H. Two-Pore Domain Potassium Channels / C.H. Kindler, C. Yost. // New Sites of Local Anesthetic Action and Toxicity Regional Anesthesia and Pain Medicine. 2005. - Vol. 30. - P. 260-274.

131. Kortgen, A. Methämoglobinämie durch Prilocain nach Plexusanästhesien / A. Kortgen, U. Janneck // Anaesthesist. 2003. - Vol. 52. - P. 1020-1026.

132. Koster, M. Determination of lidocain in plasma by direct solid-phase microextraction combined with gas chromatography / M. Koster, C. Wernes, J.B. Morsink // J. Chromatogr. 2000, Vol. 739. - P.175-182 - (B).

133. Laurence E. Mather Acute Toxicity of Local Anesthetics: Underlying Pharmacokinetic and Pharmacodynamic / E .Laurence Mather, E. Susan // Concepts Regional Anesthesia and Pain Medicine. 2005. Vol. 30. - P. 553566.

134. Liguori, G. Transient neurologic symptoms after spinal anesthesia with mepivacaine and lidocaine / G. Liguori, V. Zayas // Anesthesiology. 1998. -Vol. 88.-P.619-623.

135. Lynch, J. Transient radicular irritation after spinal anesthesia with hyperbaric4% mepivacain / J. Lynch, L. Radbruch // Anesth. Analg/ 1997. - Vol. 85. -P.872-873.

136. Madhusudhan, S Stereoselective determination of mepivacain in human serum using a brush-tipe chiral stationary phase and solid-phase extraction/ S. Madhusudhan, T. James // J. Chromatogr. 1997. Vol. 690. - P.359-362 -(B).

137. McCloskey, J.J., Bupivacaine toxicity secondary to continuous caudal epidural infusion in children./ J.J. McCloskey, S.E. Haun // Anesth. Analg. -1992.-Vol. 75.-P. 287-290.

138. Muguruma, T., Epidural Lidocaine Induces Dose-Dependent Neurologic Injury in Rats / T. Muguruma, S Sakura // Anesth. Analg., 2006; - Vol. 103. -P. 876 - 881.

139. Moriya, F. Postmortem Stability of Cocaine and Cocaethylene in Blood and Tissues of Humans and rabbits / F. Moriya, Y. Hashimoto // J. Forensic Sci. 1996. - Vol. 41. №4. - P. 612-616.

140. Piper, S. L. Comparison of Ropivacaine and Bupivacaine Toxicity in Human Articular Chondrocytes / S. Piper, H.T. Kim // J. Bone Joint Surg. Am. -2008. Vol. 90(5). - P.986 - 991.

141. Radwan, A. M. The Neurotoxicity of Local Anesthetics on Growing Neurons: A Comparative Study of Lidocaine, Bupivacaine, Mepivacaine, and Ropivacaine / A. M. Radwan, S. Saito //Anesth. Analg. 2002. - Vol.94(2).-P. 319-324.

142. Rohm, K. D. Persisting Neurological Symptoms After Uncomplicated Intrathecal Bupivacaine / K. D. Rohm , J. Boldt // Anesth. Analg. 2006. — Vol. 103(4).-P.1047- 1047.

143. Rosalia, P. Cytotoxicity of Local Anesthetics in Human Neuronal Cells / P. Rosalia, P. Sohin // Anesth. Analg. 2009. - Vol. 108. - P. 997-1007.

144. Ross, B. Local anesthetic distribution in a spinal model: a possible mechanism of neurologic injury after continuous spinal anesthesia. / B. Ross, B. Coda//Reg Anesth. 1992. - Vol. 17. - P.69-77.

145. Satsumae, T. Convulsions after ropivacaine 300 mg for brachial plexus block / T. Satsumae, M.Tanaka // Br. J. Anaesth., 2008. - Vol. 101(6). - P. 860 - 862.

146. Schüttler, J. Modern Anesthetics / J. Schüttler, H. Schwilden // Handbook of Experimental Pharmacology. Heidelberg: Springer-Verlag Berlin Heidelberg, 2008. - 493 P.

147. Sebastian, N The Effects of Lipid Infusion on Myocardial Function and Bioenergetics in 1-Bupivacaine Toxicity in the Isolated Rat Heart / N. Sebastian, C. Jörg // Anesth Analg 2007. - Vol. 104. - P. 186-192.

148. Shewhart, W.A. Statistical method for the view point of guality control. / W.A. Shewhart, W.E. Deming. Lancaster: Lancaster Press, 1939. - 50lp.

149. Shinichi, S The Comparative Neurotoxicity of Intrathecal Lidocaine and Bupivacaine in Rats / S.Shinichi, K. Yumiko // Anesth Analg 2005. - Vol. 101. - P.541-547.

150. Seymour, R. Pharmacology and Dental Therapeutics. / R. Seymour, J. Meechan, J. Walton. 3rd. ed. - New York: Oxford university press, 1999. - 392 P.

151. Stefanie, R. High-performance liquid chromatographic determination of ropivacain, 3-hydroxy-ropivacain and 2',6'-pipecoloxylidid in plasma. / R. Stefanie, Le C. Pascal, G. Dollo // J. Chromatogr. 1998. - Vol. 719. -P.239-244 - (B).

152. Stuart, G. Comparison of the Electrocardiographic Cardiotoxic Effects of Racemic Bupivacaine, Levobupivacaine, and Ropivacaine in Anesthetized Swine /. G Stuart, J. Morrison // Anesth. Analg. 2000. - Vol. 90. - P. 1308-1314.

153. Sumi, M. Intrathecal hyperbaric 0.5% tetracaine as a possible cause of transient neurologic toxicity. / M. Sumi, S. Sakura // Anesth Analg 1996. -Vol. 82.-P. 1076-1077.

Оглавление диссертации Столяров, Евгений Евгеньевич :: 2011 :: Пермь

Введение диссертации по теме "Фармацевтическая химия, фармакогнозия", Столяров, Евгений Евгеньевич, автореферат

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2011 года, Столяров, Евгений Евгеньевич

Похожие научные работы

Каталог диссертаций