Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Использование высокоэффективной жидкостной хроматографии в контроле качества местноанестезирующих лекарственных средств

П [.МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ И МЕДИЦИНСКОЙ 0 ПРОМЫШЛЕННОСТИ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

9 ? МЛГ,МДО*РВСКЛЯ МЕД»ЦИНСКЛЯ АКАДЕМИЯ " ИМЕНИ И. М. СЕЧЕНОВА

На правах рукописи СЛАНСКИЙ Валерии Эдуардович

ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ жидкостной

ХРОМАТОГРАФИИ В КОНТРОЛЕ КАЧЕСТВА МЕСТНОАНЕСТЕЗИРУЮЩИХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ

15.00.02 — фармацевтическая химия и фармакогнозия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Москва — 1994

/

Работа выполнена и Ярославском медицинском институте.

II а у ч н ы й руководитель:

кандидат фармацевтических наук, доцент А. X. Л а й п а н о в.

доктор фармацевтических паук, профессор В. И. Прокофьев а,

кандидат фармацевтических наук,

старшин научны» сотрудник Т. А. 3 а в р а ж п а я.

Ведущее учреждение — Государственный научно-исследова!-тельекпи институт по стандартизации и контролю лекарственных средств.

Защита состоится «^-Ф» (и,!гОН"£- 1994 г п час. 11а заседании специализированного совета (Д.074.05.06) в Московской медицинской академии имени И. М. Сеченова по адресу: г. Москва, Суворовский бульвар, д. 13.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Академии.

Ученый секретарь

специализированного совета Д.074.05.06

кандидат фармацевтических наук, доцент Н. П. Садчиков а.

О ф и ц и а л ь вис о п II о н с н т ы:

1994 г.

В Б Е Д Е 11 И Е Актуальною, о теми. Настоящий зтал развития йпрмацевти-ского анализа характеризуется повышением требования к качест-лэкарствемп« средств как 'заводского, та:? и экстешюралъного готопленкя. Современная химиотерапия активно нспользуэт лоре .•венвда Форш, ,в состав которых входят препараты различных мических.классов и Сармакологнчеосих групп. В связи с этих сбое внимание уделяется контролю качества многокомпонентных карственных фор«. Основгмп кр;-терияш1 мэлдунарздных троОова-Д оценки качества являются чистота и стабильность фармацез-»еских препаратов.что связано с необходимостью постоянного верпенствовшиш технология и методов контроля исходных и про-дуточных продуктов синтеза, разработкой способоъ стандзрти-' ции готового лекарственного средства. При репииин тесрети-ских и практических задач по реализации этих требовании всо льссс?■ значен:«. приобретай1 селективные, высокочувствительные точнш Физико-химические методы анализа.

Наиболее Зистро прогрессирует Еысокоэйоктисная яидкостиая аматография (ЮЭД, которая существенно превосходит »тгосфмон-ю (НОХ), тонкослойную (ТС>0, г. по некрторим параметра» и га-пуи хроматографию (ГКХ). Е^роккЯ диапазон шдекулйршд масс У';ао:,ш вепеств, высокая чувствительность, мягкость условия зделениа и температурный роят обеспечивают исклвчнтельние ловия для исследования лабильных лекарственных средств.

К одной из таких групп относятся местноанеетезйруэдив .. действенные епдетва - анестезин, новокаин, • дикаип,. теи^анн, имекаин, кокаина гидрохлорид,, совканн и иекоториэ друрто.

Внедрение ЮН з практическую деятельность, заводских ,лаОо-торий, контрольно-аналитических лаборатория,.аптечнсзЛ,-сети .и

других специализированных учреждений являемся основой <£сринрс-ешшя новых подходов и разраОстга сОг-ективнь.'х критериев' оценки чистоты, стабильности, качественного л количественного состава как отдельных, так и ыногокомпонентньа лекарствонних средств. Широкое использование ВЭ£Х сдеркшаетс>1 в связи с-'недо-таткоц унифицирован«!« »»годик для многих групп препаратов, и в частности, для изучаемых ыеетних анестетиков и содорлледх их лекарственных <1юрм.

Дель ц задачи исследования. Целью настоящего исследован"!! явилось изучение возможности применения БЭГСХ п фармацевтической анализе местиоанестезпрушг' препаратов, являющихся представителями различных классов органических соединений: анестезина, новокаина,иовокаинамида, дикаина, )-;рг.г.а;ша, трнмекаина, 'кокаина гидрохлорида и совкаина.а так»е содержащих их многокоьтоментаул готовых и экстемпоральиих лекарственных форм. '•.;.'''

Для достижения поставленной цели необходимо было решить , следующие основные задачи:

1. Изучить хроютографлческое поведение и определить оптиулль-1ш& условия хроматографирования исследуемых препаратов.

2. Провести внутригрупповое разделение производных л-амшобед-зойнол ¡полоты, ацетанилида, зкгонииа 15 хинолша.

3.. Разработать методики идентификация >#сти5аиее-гезируи»1Х препаратов в субстанции и модельных смесях оиспользование!) основных хроиатограДотеских параметров - времени удермша-ния, коэффициента емкости, спектральных отношений. 4 Разработать методики количественного определения изучаемых

лекарственных средств в субстанции и модельных смесях, б. Установить оптимальные условия хроматографироваиия и разработать методики ВЭЖХ анализа многокомпонентных лекарственны)

содержащих >.гастшЧе анестетики, как заводского, так и Э1сстзмпоралыюго гоготовленип. 0." Изучить хрокатографическое поведение, определить оптимальные условия разделения и разработать методики анализа исходных, промежуточных и готовых продуктов синтеза аклстеэчна и новокаина - п-нитротолуола, п-нитробензоШюЛ киолоты, этилового зфйра п-пнтробенаойиоя кислоти И н-амтюСепаойноД кислоти.

Ит/чнт новизна. Впервые на основании изучения хроматогра-Снческих свойств иселе/^ешх соединения проведено внутригруп-побоэ разделение 8 мэстйогшестезируюцлх лскарстгенних средств . е использованием изократического ».градиентного элюирозания.

Предложи« методики идеитифигании местных анестетиков по трем .основным- параметрам: времени удерживания, коэффициенту емкости и спектральным отношениям. Установлен!! оптимальный хро-мзтографические условия и разработан» методики количественного определения изучаемых препаратов в субстанции и модельных смесях с использованием метода внесшего стандарта.

Епериь'?. предлотани методики и проведен количественный анализ 6 готовж и 12 зкетеыпоралышх многокомпонентных лекарственных форм методом внутренигго стандарта.

Проведена оптимизация условий постадиЯного контрой синтеза анестезина и- новоганна и рмработали методики качественного и количественного определения исходим, процеяуточных и коиочшх продуктов производства усазштыХ Лрепаратоз.

Практическая значимость работы. Разработанные методики оциикя качества анестезина и новокаина в присутствия возможных примесей и полупродут-ов синтеза внедрены в практику ЦЗЛ ¡Ьво-кузнецкого ПХСО "Органика".

Диссертационные материалу использовзям в подготовке н

. - 4 -

издании рекламного проспекта к зкидкостн-му хроматографу "Мили хрсм-4" и каталога методик ВЭЖХ, выполненных на прибора "1,!;ш! хром" (ПО "Научприбор").

Методики анализа анестезина и новокаина, а та1ш.> готовы; лекарственных форм, содержащих четные анестетики ("Меповапи! "Павестезнн", "Белластезин" и "БеллалгиИ") сошли в информаци1 онно-ыетодическнй бюллетень ШШ (tó! ,1992' г.).

Разработанные методики качественного и' количественного определения кокаина гидрохлорида, дикаина и сошсаина' внедрен! в практику ЭНУ УВД Ярославской области.

Подготовлено и издало учебное пособие "Применение высок эффективной мидкостноп хроматографии в контроле качества лек стьенных средств', испольэукэдзесн р учебном процессе Ярослап ского. Тюменского и Рязанского медицинских институтов.

Апробация работы! Основные результаты проведенных иссле дованшч представлены на: Всесоюзной конференции "Применение хроматографии ó rtínnoñoñ, микробиологической и медицинской пр иышленностк (Геленд::<пЛ, 1930 г.} . У Всесоюзном симпозиуме по молекулярной' жидкостной1 хройато^рафйи (Рига,- 1GQ0 г.), Бсесс юной научной конференцтг "Молодела, - практическому здравое» ранению (Шскьа, 1990" г. У, ^ждун'ародном' научной симпозиуме "Методы контроля лекарственных средств, современное состоят и перспективы" (Ашхабад, Í991 г.), Не жре с публика» с ко ií kohí^j ции "Проблемы стандартизации и контроля качества лекарствен) средств" (Москва, Í99Í г.). til Всесокзн'ой конференции по макокинетике (Шсква, 1991 г.), Республиканской научной кош ренций "Реализация научный достихзнн'й в практической йармац; (Харьков, Í9SÍ г.), Республиканской научно-практической кот ренций "Рёаервы собершенствовеШкй лекарственного обеспечен«

¡-'¡селения PCSUP" (Владимир, 1091 г.). IY ВсесоюоцоЯ ко^ерацска голодых yvciicK по прикладной хроматография (ЛдуСга, 1031 г.), 1ау1!!ю-практт!оскопкоа'1срепк2я,*л№гуальы« вогтрсси фпртцеЕтв-1ескоЛ науки п практики" (Курск, 1091 г.)» I Российской национальном конгрессе "Человек и лекзрстЕо" (Нэскьа, 1302 г.).

Публикации по работе. По материалам диссертация спуЗ-кпгз->анн 22 научные работы.

'Ьлохен'.'я, гыдвягаемш па ааеяуу., На ьготту вшосятсз ела-. аушю положения: "

- условия хронатогра^нческого разделения группы нестисз-иеетезкруяйи« лекарственных средств из раздгаш классов zituz-,'еских соеднлениЛ;.

- методики качественного и количестпсшюг о определениз поучаемых препаратов &субстанции и моделью.fl екмм;

- методики анализа б.готовых к 1г'экстеь;порал>нц5С иного-компонентных лекаре fвеяных '¿ори;

- методшеи постоднйного копг^-эля синтеза анестезина и новокаина. . :

Структура и объем диссертации. Гиссерт&шюпная работа состоит из введения, обоора литературы» 4-х глаь эк2перк1Еиталъ-ш« исследования, cOiy'X вшюдов и списка литератур» (104 источника, й tow числе 43 иностранных).,'Работа изложена на 175 страницах машинописного текста, иллюстрировала 55 рисунками и -33 таблицами.

СОДЕРЖАШО;-РАБОТЫ И БЕ СОЮЗНЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ

1. Оптимизация уело ml ВЗДХ местных анестетиков

Объектами исследования явились местноанестез;!ружз!е лекарственные средства, производные п-амияобенэойноЯ кислота (анестезин, новокаин, новокаинамид, дикаин), ацвтаяилида (ксикаин»

- б -

тримекашО.экгошша (кокаина гидрохлорид) и хинолииа (сов:'лия), отвеча^-дае требованиям НТД.

Для проведения'экспериментальной работи били приготоЕлени ш'додьмда "нос:; нселедуемщ соединения « концентрацией 0.,5 иг/ и» следующего состава- (1) - анестезии, новокаин; дикаи-..; (И) - ксшсаин, тримокаии, ковоканнамд; (III) •• кокаина г/хл. сов-калм, дшсшш; (IY) - анестезин.новокаин, дикаин.кснйакн,трпые-каин,кокаина r/ял; (У) - анестезин. новокаин, новокаипашд, дикаин, ксикаин, тримекшш, кокаина r/хл, cccicaiüi. В качестве растворителя использовали 40Z этанол.

Исследования проводили ма отечественных ждкосттгх микро-кплоночних хроматограф серии "Мнлихрои" (ПО "!Ьучпрп5ор", г. Орел), осиаадииых однолучевм,! сканирукда УФ-спектрофотомз-трическиы детектором.

Используемая хроиатографическая система вкличала аналитическую колонку из нерлавевдзй стали длиной 64, SO или' 100 мм с внутренним диаметром 2 ш. Сорбент - 0епарон С18 или Ciuacopú •CJ8 (ЧСФР) с диаметром частиц б шя Эффективность колонок находилась з пределах 4000-5000 теоретических тарепок (т. т.).

ауикции подвижной фазы Еыполиялп снеси растворителей: води t бидистиллированной деиошшованной, метанола и.ацешщтрила. В качестве полярного компонента систем использовали различные буферное раствори и ион-парные реагенты: О,О-П! фосфатный буфер со значением рН 1,5 - -1,5 (£Б), ледяная уксусная, кислота (УК),три-отилашш (ТЭА) ,днэтиламин ( 73А), О.СЮ5М раствор тетрабутиламцо-нич (TEA) фосфата, 0.05U раствор ацетата-аымония л Др.

С целью выявления закономерностей Эфоыатографического поведения в ряду местноанестеэирующих препаратов изучено влияаиз ■ изменения подвижной фазы на величину параметров.коэффициента

емкости (к*) и зффекгпши'ости (N) анализируемых соединений.

IIa оснэиапии исследований установлена савнсимость хромато-графического поведения производных ПЛБК, ацетанилида, акгоцина и хинолина от струстуры и физико- химических свойств весеств: растворимости, полярности,: кислотности и осног-чости.

В результате проведанной оптимизации хроматографических услопкХ анализа костных анестетиков получено достаточно хорожзе разделение отдельных смесей (1} - в подвижной фазе ацетонитрил-СБ рИ 3,5 (система А) 10:60; (И) - в подвитой фазе мотонол-УК-ТЭА-вода (оистека Б) 40:1,0:1,0:57,5; (III) - в системе В с содержанием органического модификатора 60-707.; (|У> - в системе ßc концзнтрацией штанола 402. Для доститянил разделения всей Группа изучаемых соединений (модельная смесь V) оптимальном явился ре.тим ступенчатого градиента, создаваемого путей последовательного злтрования пробы системой В с содержанием иэтапэ-Ла 30, 50 и 70% (по GOO мкл}. Хроматографа полного разделения моделЬноЛ сшен изучаемых анестетиков представлена на рис. 1.

Рис. 1. Хронатогракнз модальной снес» ('О.

1 - новскаинашд, 2 - новокаин, 3 - ксикаин, 4 - кокаина г/хл,5 - тркмшсаИй.О - анестезин,? - дика!«, 8 - совкаин Для всех пар пиков величина разрепения составила от 1 до 2, что полностью удовлетворяет требованиям ВЗНОС Время анализа не

- в -

превываэт 15 минут.

?.. ЦцоиткЗшацая и количественное определенно местноанео-тезирукадах препаратов в субстанции и модельных смесях ' Б основу разработки мзтодш; (лчестсенного и количественного определения исследуемых соединений бшш положэнц рез''.итати оптимизации хроштографических условий анализа мастных анесте-тикор при изократическом и градиентном эдвироваииш

- шподвилаая Фаза - колонка 80 х 2 ад, заполненная сорбентом Сепарон Cl 8; подвиадал фаза - нэократическос елрированда системой В а соотношением комитентов 40:1,6:1,0:57,5 - для снес-тевица,новокаина, дшеанна, кпикиша, трпмс-каина, и ког-аика г/хм, 30:1,6:1,0:67,5-для иовашнамвда и 60; 1,5:1,5:37,5-для- совкаииа.

- Неподвижная iaoa - колонка ВО х 2 ым с Сепароиом Clé; под-викная Фаза - градиентное здшроеаниэ смесью растворителей урванного сыкэ состава о изшкендаы концентрации метанола от 30% до 70Z - в случае хроыатогра£нровал;;я дадс-льной сиеси ( Y).

разработка универсальной методики идентификации исследуемых местноанестезирукда препаратов осуществлялась на основе определения трех хроматографичеаких и спзюралыш параметров:

воамени удерживания (t ). коэффициента, емкости (к*) и спек-R

. тральных отношений (D), рассчитшззэшх в рехиш двухволновой

детекции при 23в и 260 км с опорной длиной волны 238 им.

Стандартные растворы исследуешх препаратов хрокатографнровалц

с использованием оптимальных хроштографлчеекпх систем и по

данным б параллельных опытов каходвдщ средние арифметические

значения t , к' и 0,а такав стандартные и относительные стан-R

дартные отклонения этих величин при изократичеекш и градиентной влюировании (таблица 1).

Последующую идентифшеацию всслодуешх препаратов в с у б-

станции л моделоной смеси (У) осуществляли по разработанной методике путеы сравнения перечисленных визе параметров со стандартными значениями этих величин, приведенными з таблица 1,

Таблица 1.

Результаты определения параметров идентификации и их

метрологические характеристики

Цазвание к' Б

[препарата X 1 X 3 X -

1 • изокгатическсз злюирование

[новокаин 2,398 0,020 0,81 . 0,750 0.014 1,91 1.918 0,021 1,09

¡новокаин» «амид ¡анестезин 2,082 10,464 0,015 0,156 0,72 1,53 0,020 6, саз 0,009 0,121 1,73 1,82 3,670 3,454 3,020 0,012 0,55 0,ЗС

|дикпин 17,011 0,345 2.03 11,417 0,252 2,21 0,286 0,003 1,20

ртошкшн 4,556 0,041 0,91 2,325 0,030 1,29 0,212 0,0С2 1.031

Трикекаин 8,012 0.С97 1.21 4.840 0,071 1,45 0,133 0,002 2,10

кокаина г/хл совкаин 5.046 7,770 0,079 0,130 1,30 1.07 3.267 4,672 0.058 0,039 1,76 1.91 о.оез 0,279 О.ОС! 0,002 1.59 0,721

градиентное элюированне |

новокаин 3,029 0,047 1,64 1,211 0,034 2,81 1,419 0,053 0,53]

новокаин-амид аьестезин 2,403 0,490 0.020 0.087 1,21 1,03 0,753 5.197 0,021 0,004 2,80 1,23 3,339 3,291 0,0)9 0,021 о,5а! ? 0,621

дикаии 10,579 0,117 1,10 б.'722 0,035 1,27 0,225 0,002 0,74!

ксикаин 8,580 0,052 0,91 3,073 0,038 1,24 0,193 0.008 4,15!

¡тримекаин 7,557 0,074 0,93 4.525 0,054 1,19 0,097 0,004 4.12

кокаина ¡г/хл совками 0.458 13,347 о.сог 0,209 0.9? 1,57 3,714 ■ 8,743 0.040 0,153 1,23 1,75 0,070 0,225 0,001 0,002 1,31 1.05

Количественное, определение местных анестетиков в субстанции и модельной смеси (У) проводили методом внесшего стандарта. Длгт оценки количественного содержания исследуемых веерств кс-

- 10 -

пользовали параметр высоты хроштографического пика.

с целью построения калибровочных графиков установлен интервал линейной за&исияюсти высот пиков изучаемых соединений от их кон^'-итрации, который составил для всех препаратов 0,21,0 иг/ил. В ыйранио» интервале концентраций строили кхшОро-вочиью графики местноанестезирующих средств й расечигывали их математическую модель.

Проведенные исследования позволили разработать общую методику и провести количественный анализ местных анестетиков в (¿зрмаколейньк препаратах (субстанции) методом ВЭлХ. Параллель- . но проводили количественное определение ыестноанестезирущих средств официальными методами. Результаты сравнительной оценки

метрологических характеристик для предлагаемого и официальных

¥

методов представлены в таблице 2. ;

Таблица 2.

Данные статистической обработки результатов количественного

определения изучаемых препаратов в субстанции (П"101Р"952)

\п Название препарата Мотод анализа Метрологические данные • |

X з. 5г ■ .ел 1

I1 2 3 4 5 6 7 8

1 ЕЭЖХ ■ 99,02 1,275 0,403 0,91 0,92

1 новокаин

нитрито- 99,45 0,830 0,262 0,59 0,59

1 иетрия

1 ВЭЖХ 99,21 1,296 0,410 0,93 0,94

\г новокаин- 100,16 1

амид нптрито- 1,107 0,350 0,79 0,79

| метрия 1

1 южх . 100,63 1.559 0,493 1,11 1.10 |

у анестезии

1 нитрито- 99,22 0,781 0.247 0,55 0,56 ]

штрин ВЭЖХ : 101,40 2,020 0,639 1.44 . 1,42 ]

4 дикаин

| нитрито- 89,65 0,743 0,235 0,53 0,53.1

| мстрия

2 3 4. 5 6 7 8

ВЭЕХ 98,95 1,792 0,557 1,26 1,29

ксикаин

неводное 100.18 1,010 0,319 0,72 0,72

титрование

ЕЭКХ 08.91 1,932 0,011 1,30 1,40

тримекаш» 0,605

неводноо 93,71 0,254 0,57 0.5В

титрование

КГ'ХХ 99,6? 2,369 0,749 1,69 1,70

котика

г/хл неполное титрование 99,79 1,525 0.Л82 1,09 1,09

вэжх . 101,06 1,767 0,559 1.26 1,25

сошсаин

неполно^ . 99,31 0,711 0,225 0,51 0,51

титрование

' С цель» проведения количественного анализа мастных анесте-

тиков в модельной смеси (У) определена калибровочные коэффициент!) изучим« соединений я установленном ранее интервале- линейной зависимости высоты пика сг концентрации <0,2-1,0 1,г/нл).

Результат 10 количественных определений компонентов полольной смеси (У) подвергали статистической обработка ("аОл. 3).

Таблица 3.

Дашше статистической обработки результатов количественного

определения изучаемых препаратов з модельной сноси (п-ч0,Р-952)

1(1 Название . препарат? Метрологические данные

X <>« Д х 6.2 !

1 новокаин 98.39 4,780 1,612 3,42 3,40 1

2 иоаокаинамид 97,76 4.9СЗ 1,552 З.Ы 3,63 1

;з анестезин 101,44 5,880 1,359 4,20 4,14 |

4 днкаин 102.53 6,020 1,904 4,30 4.19 I

г; ксикенн 03.20 5,611 1,774 4,01 4,08 |

6 тримекаин . 100.12 6.805 2,152 4,86 4,85

7 кокаина г/хл 101,47 5.309 1,679 3,79 3,74

I8 соякаин 103,81 7,003 2,215 5,01 4,83

-12 -

Таким образом, использование ВЗЯХ для инализа субстанции и смосой изучаемых препаратов позволяет значительно повысить селективность, сократить затраты труда и времени при сохранении высокой тоюсти определения.

3. Анализ лекарственных Форм, содержащих изучаемые препараты; методой ВЭКХ - .

Из известны;: в наптояиее время лекарственных форм.содержа-¡9IX изучаемые препараты, били выбраны наиболее трудоемкие п исполнении прописи ваводского и экстешорального приготовление (псровки,таблетки, р; створы).состав, которых приведен в таблица 4.

Выбор оптимальных условий контроля качества исследуемых лекарственных форы проводил.; на основании предварительно полученных данных по изучению спектральных свойств и хродатографи-ческого поведения соединений. '

Для количественного анализа компонентов изучаемых прописей применен метод внутреннего стандарта. С цель» выбора внутренних стандартов изучены лекарственные препараты и химические соединения, близкие к исследуемым по структуре, физико-химическим л спектральным свойствам.

Оптимальное разделение изучаемых лекарственных форм было достигнуто при использовании колонки ДЛИНОЙ 61 ш или <30 им и подвижных фаз описанного тшо состава (А и Б) с различным значением рН и соотношением компонентов. Детектирование осуществлялось при. длинах волн, наиболее близких к максимумам поглощения исследуемых препаратов.'В качестве внутреннего стандарта использовались п-нитрооензойная кислота, теофйллин, анестезин, дикаин, триыекаин и антипирин.

На следующем этапе с целью построения калибровочных графиков изучали зависимость отношения высот пиков исследуемых

Таблица 4. , Состав изучаемых лекарственных форм

Готовые лекарственные Форш

Наименование Состав Наименование Состав

í........ "Павестезин" анестезина 0,3 папаверина Г/ХЛ 0,05 "Белластезин" анестез1ша 0,3 з-та красавки густого * 0,015

"Ееллалпш" [ • анестезина 0,25 анальгина 0,25 натрия гидрокарбоната * 0,1 э-та красавки густого * .0,015 "Меноваэин" анестезина 1,0 новокаина 1,0 ментола л .2,5 спирта этил. 70% ДО 100,0

¡таблэтки анестезина по. 0,3г 1 ■ анестезина 0,3 0,5% раствор новокаина iioEoicaiuia 5,0 р-ра соляной кислоты 0,1 ¡I * до рН 3,8-4,3 воды Д/И ДО 1 Л

Экстешорадыше дегарствениые Формы

новокаина 0,1 . анальгина 0,2 J

папаверина г/хл 0,2 фенобарбитала

воды диет. 20,0 анестезина по. 0,05

лезомицетин 2,0 . атропина суьф. 0,02.

гювокаииа 1.0 эфедрина г/хл 0,05

спирта этил. . ■ новокаина ' 0,04

70% до 100,0 спирта этил. 90% 10,0

новокаина . . 0.66 эфедрина г/хл 0,6

фурацилнна 0,066 новокаина о.а

Г спирта этил 100,0 к-tw аскорбиновой 3,0

70% до води диет, до - 120,0

; вфедрица г/хл 0,1 диСггола О,СО

[ новокаина 0,05 анальгина

| води. ДИСТ. до 10,0 анестезина по 0,3

амидопирина новокаина

анестезина по 0,2 резорцина по 0,05

димедрола

р-ра борной 10,0

5СИСЛ0ТЫ 2% *

. р-ра фурацилина 1 5000 20,0 р-ра фурацилина 1: 6000 100,0

антипирина эфедрина г/хл . 1,5

I эфедрина г/хл новокаина •■ 0,5

| новокаина до 0,3 тиамина бромида 0,5

компоненты анализу не подвергались в связи с отсутствием поглощон"л в УФ-области.

соединений к высоте пика внутреннего стандарта от концентрации. Определяли интервал концентраций, в котором эта зависимость линейна. В выбранном интервале строили калибровочные кривш и с помогсыо метода наименызих квадратов рассчитывали уравнения либрсвочных графиков каждого препарата.

IIa основании проведенных предварительных исследований Curat разработаны штодшеи качественного и количественного опредоло-лил компонентов 6 готовых и 12 зкегешюральных лекарственных форм. Анализ таблеток "Павестеакна"."В5лластезица"4"Беллалпша", анестезина, инъешушнкого раствора новокаина, препарата "Мгно-васии", а такле модельных экстемпоральных лекарственных емзеей приведенного в табл. 4 состава свидетельствуют о достаточно высокой воспроизводимости, селективности и достоверности предлагаемых методик, позволяющих за 5-10 мин провести одномоментное качественное и количественное определение 2-4 препаратов из различных химических и фармакологических групп в одчой лекарственной форме.

4. Применение ВЗЖХ в постадкйном контроле синтеза анестезина и новокаина

Для выполнения экспериментальной работы 1 ¡о во кузнецким XSQ были любезно предоставлены образцы исходна продуктов, полупродуктов и конечных продутое синтеза исследуемых препаратов: п-нитротолуол (ЯП), исходная п-шпробензойная кислота (ШБК), этиловый эфир ГОШК ("нитроэфир"), Ш£БК, регенерированная из маточников "нитроэфира", п-аминобензойная кислота (ЛАБК), анестезин технический,анестезин фармакопей.ч основание новокаина, новокаин фармакопейный. Для проведения оптимизации хроматогра-фических условий анализа готовили стандартные растворы указанных соединений,двалды перекристаллизоваиных из этанола,а также

модельные снеси следукце-го состпз^ (У1) - анестезин, 1ШБК.1ШТ, "нитрозфйр"; (VI!) - 5нзстёз1Ш.ПЛБН.ШГГ."тпроэфир"; (УП1) -новокаин, !ШЖ, анестезии. О келью определения оптимальной длины

установлспи области иэксщ-шышго спегопаглосония изучаемых соединения. Установлено, что для хроматографирования ысдальних смесей (У1,УП) (полупродукты синтеза анестезина) оптимальной является ялша волны 260 им, для модельной смеси (УШ) (полупродукты синтеза новокаина) - 280 им.

В хромзтогра^ическ,'» систему входила аналитическая колонка размером 80 х 2 ш с "Сепароном С18" (Б кош). 51а основании результатов предварительных опытов для проведения оптимизации Сил ■ пярздш подпияшэ фазы, представляющие собой смеси тюды или водных раствора различных солей- с органическими модификаторам метанолом и ацетонитрилом. В результате установлено, что оптимальной системой хроматотрафироапиия полупродуктов синтеза новокаина (модельная смесь УШ) является системл ацетонитрил-ФЗ рН 3,5 40:60 (Л), для полупродуктов синтеза анестезина (модельная смеси У| и У И) - система метанол-<осфатиий буфер (рН 4,5) 70:20 (В) и ыэтанол-ТЕЛ фосфат 60:40 (Г), соответственно (рис. 2-4). • 2 .

водт* детонирования изучены спо!ггральныо характеристики и

3

1—1—I—1—1_1-г. I ..I_' ' » ' "Ь > мии

0 2 4 6 8 10

Гиз. 2. Хромтгограмма модельной смеси £ У111).

1-ПАЕН, 2-коеокшш, З-анестезин, 4-ДНТЛ (в. с.)

' 5

5

2 4

о ' 2 ' 4 '* £ ' а '

(—I—I—I—I, ..Ч.. {

о 2 А Ь

i * • мин

Рис. а Хромзтограша модельной Рис. 4. Хроматограмма модельной смеси (VI) в системе (В). " смеси (VII) в снстекю (Г). 1-ШБК, 2-анестезип, 3-ДКГЛ 1-ПАБК, 2-анестезиН, 3 - ДНГЛ

Идентификацию исследуемых веществ проводили по разработанной наш ранее методике с использованием времени удерживания, коэффициента-емкости и спектральных отношений при длинах волн 260/2ао нм с опорной длиной волны 260 нм.' По результатам 6 параллельных опытов Оылн найдены средние вначешш определяемых параметров, стандартные и относительные стандартные от-ююнения, представленные в таблице 6.

Последующую идентификацию палупродутаов синтеза анестезина и новокаина в модельных смесях. Ш-У1 И) проводили по разработанной методике путем сравнения значений Ь , к' и 0 со стан-

дартными Беличичаии, приведенными в таблице 5. Найденные значения хроматогра$ичзских параметров находятся в установленных пределах стандартных отклонений, что свидетельствует о достоверности и объективности разработанной методики качественного анализа.

(в. с.), 4-ПНГ, 5- "нитроэфчр1

(в. е.), 4-гагГ, 5-"нйтроэфнр'

Таблица б.

I

Результаты определения параметров идентификация полупродуктов синтеза анестезина и новокаина

fí Название соединения к' D |

s Sp.Z X | s Я s я» 1

И&танол - Ф5 (рН 4,5) 70:30 j

1 ТИШИ ' i ,946 0,004 0,19 0,390 0,003 0,72 0,933 0,003 0.865

2 Г а-естрзин 3,060 0,025 0,81 1,192 0,018 1,48 2,544 0,031 1.21

3 шгг 5,255 0;077 1,47 2,754 0,055 2,00 1,586 0,019 1,20

г нитроэфир в, 142 0,060 0,93 3,387 0,043 1,26 0,591 0,006 0,97

1- Штанол - TBA iJocí QT 60:40

Г ПЛБК 2,170 0,015 0,63 0,550 0,011 1,94 1.601 0,013 0,34

2 анестезин 3,607 0,035 0,93 1,577 0,025 1,59

3 ШГГ в, 751 0,038 0.56 3,622 0,027 0,70

4 нитроэфир' В, 339 0,044 0,52 4,957 0,031 0,53

5 гаяж 3,721 0,031 0,32 1,650 0,022 1,32

Ацет'оиитрил ФБ .(рН 4,5) 40:60

1 HOBoiíaiüi 3,070 0,031 0,09 1,103 0,022 1,8? 3,026 0,030 1,00

г ПАЕК о -ас« 0,013 0,57 0,660 0,012 1.83

3 анестезин 0,400 0,039 0,60 3,572 0,02В 0,77

Количественное определение полупродуктов синтеза анестезина и новокаина проводилось катодом внутреннего-стандарта, в качестве которого мспольаовшш £,4-динитротолуол (ДНТЛ). Изучен интервал линейной зависимости и построены калибровочные графики исследуемых соединений в пределах концентраций от О,Oí до 0,08 кг/мл. lía основании данных предварительных исследования раара-ботона универсальная методика и проведена серия иэ 10 анализов указанных вьш модельных сносей (YI-YHI).

Результаты количественного определений подвергая» статис-аичзснпЯ обработка, Метрологические дшнгаэ для изучаемых соединений приведены в таблицах 6,7.

Таблица 6.

Данные статистичьской обработки результатов количественного определений полупродуктов синтеза анестезина (п-10,Р-е5Х)

Л Название соединения Петрологические данные

X S Д X £,х J

1 ПНБК 100,42 2,511 0,794. 1,80 1,79

2 ! анестезин 08*55 3.Q94 1,263 2,84 2,05

3 ШГ 100,80 3,703 1,173 • 2,67 2,65

4 "нитроэфир" 100,01 3,112 0,984 2,22 2,22

б ПАЕК 100,01 2,692 0,851 1,94 1,02 |

Таблица 7.

Данные статистической обработки результатов количественного определения полупродуктов синтейа ьовскаипа (n-10, Р-05Х)

N Название соединения Метрологические данные

х - s ■ - Дх С.1

1 ПАБК 100,60 1,385 0,441 1,00 1,00

2 новокаин 100,51 1.077 0,584 1.35 1,34

3 анестезин 98,73 1,769 . 0,559-; 1,25 1,25

Оценка чувствительности анализа примесей проводилась с учетом молярных-коэффициентов зкстиякци» анализируемых компонентов. Установлено, что минимальное количество анестезина, которое можно определить на хроматографе, составляет при максимальной чувствительности прибора 0,0015 мет» для 1ШБК - 0,0023 мкг, "нитроэфира" - 0,00225 мкг, новокаина - 0,00152 мкг, ПАШ - 0.00162 мкг, ПОТ - 0,0025 ыкг.

Разработанные методики качественного и количественного определения были использованы в анализе исходных, прокеку-точных и конечных продуктов синтеза анестезина и новокаина

IX спиртовые раствори Исходной ПНЬЛ,"нитроэфира",обратной ПНБК, выделенной нз маточшюв "питроэ^ира", технического алесто-эинз, фармакопейного анестезина,' техничосг-ого новокаина и фармакопейного новокаина йронзтогра^аравали в установленных ранее ооти'иазь'них условиях.

В перечисленных риаэ образцах били обнаружены различные примеси в концентрами от 0,03 до 0,6%: примесь "нитрозфира" -в обратной ПНБК и техническом анестезине, примесь ПЗШК - в "нитрозффе" и техническом анестезине, примесь анестезина -в техническом. новокаине.

Таким образом, разраббташше ме'тодшш постадийного контроля сшгт.^за анестезина и новокаина отличаются Еисскоп чувствительность» и точность» и позволяют унифицировать анализ примесей на различи;« этапах производства- указанных препаратов.

0С1ШШЕ шводы

1. Изучено хроматсграФическое поведение и определены оптимальные условия хроттографированпл новокаина, новокаинамида, анестезина, дикаина, кенкаина, тримекаина, кокаина гидрохлорида и совгаи'на: обра^енно-^азны система с использованием сорбента

' Сепарсн С18 и элшнта метанол- утауейая ю;слота-триэтиламин-вода с различным соотнесением компонентов.

2.' Проведено внутригрупповое разделение местных анестетиков производных ПАЕК, ацетанилида, зкгошша и хинолина.а такта всей группы исследуемых препаратов в режиме изократического и градиентного элюироваиия.

3. Разработана общая методика идентификации изучаемых соединений в; субстанции и модельных смесях с использованием основных хроматографичесщ;х и спектральных параметров: времени удерживания, коэффициента емкости, спектральных отношений.

Относительное стандартное отклонение аначений этих параметров не превысило + 2% при изократическом я + 42 при градиентном элшровании.

4. Разработаны методики количественного хромагографнческого опрэделения изучаемых препаратов в субстанции и модельных смесях. Проведена сравнительная оценка предложенных нааи методик о официальными методами. Показано, что БЭХХ отличается более высокой чувствительностью,специфичность».сокращает время анализа в 1,5-2 раза. Относительна;! ошибка хроматографического метода составила от +0.02 до +1,702, официального от +0,51. до +1,032.

5. Изучена и практически подтверждена возможность анализа шогокомпоноктных лекарственных форм, содержащих изучаемые препараты, с использованием метода внутреннего стандарта. Установлены оптималып» хроыатографические условие и проведен выбор внутренних стандартов для каждой лекарсхвенной смеси.

разработаны методики хронографического определения компонентов о готовых и 12 экстемпоральньи трудноанаяизируеШх лекарственных Форм (табйетю1, порошки, детворы).

6. Изучено хрсматографическое поведение И спектральные характеристики исходных, промежуточных и.готовых продуктов синтеза анестезина и-новокаина.- Определены оптимальные условия разделения и детектирования п-нитробензойной кислотй. п-ачи-нобекзойной кислоты, п-нитротолуола, этилового эфира п-нитро-Сонзойной кислоты, анестезина и новокаина

Разработана унифицированная »методика ВЭЖХ яоетадийного

' - . . - . • v

контроля синтеза анестезина и новокаина,которая характеризуется высокой чувствительностью и скоростью выполнения анализа, позволяет повысить объективность оценки качества выпускаемой фармацевтической продукции.

- 21 -

7. Предлокенпыо хрсматографические методики качественного И' количественного определения ыестноанестезирушлх препаратов-отличаится высокой чувствительностью, специфичностью, достаточ--ной'точностью, нэ требуют больших затрат труда и Бреизкн и могут бить рекоыендовани для пршсгичес;сого применения в контрольно-шшитическизс лабораториях аптечной сети. Фармацевтических фабрик и1 заводов, химико-токсикологических лабораториях и ЭКУ УВД.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ

1-, Перспективные методы контроля ячества лекарственных средств/а Э:СланскиЯ, Е. В. йуалина, Е. а Шишкина и др. //Изыскание и изучение новых фармакологических средств: Тез, докл. Все-росс. студ. науч. конф. - Пермь, 1989. -С. 50-51.

2. Сланский В. Э., ЛаЯпщюв А. X. Применение ВЭЖХ в анализе лекарственных Форм//У. Всессюэ, сиип, по молекулярной жидкостной хромзтогрэфии: Тез. до гл. -Рига, 1990. -С. 142.

3. Лайпанов А. X, Сланский а 0. Уроматографнческое разделение местноанестезируккдх препаратол, иыекда токсикологическое значение/Лам йе. -с. 124,

4. Сланский" Е Э. , Прск.н а Я . Серегина В. а Хромата графический анализ лекарственных смесей//Применение хроматографии в лицевой, микробиологической и мэдицичаюй промышленности: Тез. Д0(сл. Есесош. конф. -Ы., 1990. -С. 105-103.

6. Лийпанов А. ОС., Слаиский а Э. Идентификация ядовитых, наркотических и сильнодействующих лекарственных средств с помощью ЮЖХ//Там та. -С. 106-107.

б. Сланския ЕЭ. .Белозеров А. а .Серегина Е. а Комплексное применение физико-химических методов в анализе лекарственных смесей// Молодежь - практическому здравоохранению: Тез. докл. Веесоюз. науч. конф. молодых ученых и студентов. -Ы. .1990. -С. 62.

- 22 -

7. Комплексное применение современных инструментальных методов анализа для стандартизации и контроля качества лекаре!-венных средств/А. Х-ЛаЯпашв, В. 3. Сланский, В. IL Богрданова

и др. //Методы контроля лекарственных средств: Тез. докл. Междуна-роди. науч. симп. -Аяхабад, 1631. -С. БО-51.

8. ЛаЛпанов А. X , Сланский Е. а Применение ВЗДХ в анализе лекарственных смесей, содержащих местные акестетики//Сармация. -1931.-М 1.-0. 28-31.

9. Лайпанов А. X, Сланский ЕЭ. Хромат ографиче с кий анализ лекарственных форм, содержащих местные анестетики//Хим. -фарм, журн. -1991. -Т. 25,N 6. -С. 75-77.

10. ЛаЯпаноп А. X., Сланский В. 9. Хроматографйчеосое разделение местноанестезнруюзих препаратов, имош1Х токсикологическое еначение//£урн. физ. химии. -1991. -Т. 65,N 12. -С. 3359-3363.

П. Лайпанов L X., сланский В. Э. Изучение хроматограФичас-

*

кого поведения некоторых веиеств из группы ароматических аминов // Актуальные вопросы фармацевтической н^угл и практики: Тег. докл. науч. -практ. конф. -Курск, 1991. -Ч. 2. -С. 58-59.12. Сланский а 3. ,Богрданова Е IL .ЛаЯпалов А. X. Анализ трох-компоненгной лекарственной смеси с помощи» ГОЕС/Гам жэ. -С. 56.

13. Сланский В. Э,, Бэлозеров A.IL , Лайпшюв A. X. Применение ВЭЯХ в контроле производства анестезина и новокаина//IV Еоесо-юз. конф. молодых ученых по прикладной хроматографии; Тез. дот:. -Дяубга.1991, -С, 62.

14.Богрданова ЕЕ .Сланский В.Э. .Лаяпанов A.X Применение инструментальных методов для анализа новых лекарственных форм// , Реализация научных достижений в практической фармации: Тез. доел, республ. науч. конф.-Харьков,1991.-С. 151-152.

. 15. Лайпанов А. X.. Сланский В Э. Применение ЕЭЖХ для стан-

- Й3 " ,

дзртизэцчи. и глитрола качества производного п-аыинобензойноп кислоты - Ш1'эстев1глп//Прс5лс>.!ы стандартизации и контроля качества лекарственных средств: Тез. докл. н-злреспубл. конф. -И. ,1991.-t. 2,41,-С, 21-22.

16. Лайпалов А. X., Слгшёкий Е Э. , Бсгрданова В. IL йюокоэф-фестипш жидкостная хроматография в биофармацевтическсм иссле-доваяян !ювскаина//Созременное состояние и перспективы развития Заршкешшетики; Тез. докл. 3 Есеооюз. конф. -М. ,1991.-С. 52.

17.СлаискиЯ ЕЗ. , Лайпалов А. X. Применение ВЗЖХв анализе лекарственных фзри ые'етг "Ьанестезирушзго действия//Резсрвы со-йэг^енстнованпя лекарственного обеспечения населения РСФСР: Тез. докл. науч. -пргет. конф. -Еедшир,1991-С. 77-78.

18. Применение современных фнзкко-химическлх методов для Стандартизации и контроля (сачества лекарственных средств/

А. X Лайпаноп, а Э. Сланскпй, R IL Богрданова," Е.Е Серегина// ■Человек н лекарство: Тез. докл. I Российского национального конгресса. -М., 1992. -С. 275.

TQ.'ITpHMC-ireilHtJ. BUCOKOaJ'JiOKTHBHOii жидкостной ХрОг.!аТОГрафИ1! . г 'тзятроло качества многокомлскентких лекарственных ферм/ к. Х'Лайпапоа, Е 3, Сл:йс!шй, Е Е Есгрдансса, Е. В. Серегина// Фзг^пеБтич&спиЛ анализ - науке к прэгакгс: CO. науч. трудов 1ВШ Хлрпш'И га Г®. -К ,1992. -Т. £0. -С. 99-104. ,

20. Слзпскпй Е-3. , ЛаГталей Д. X Диализ готовых лекарственных форм, содержали teem» анестетики,. методом ВЗИХ^/Коитроль качества ле'карств: Инф. -метод, бш. BI10I-. -М. , 1992. -С. 00.

21.Слз!!С1шй ЕЕ. Определение доброкачественности фармакопейного" ам8стезииа//Там «е.-С. 78.

~22.Слансккй ЕЭ. , Лайланов Л. X. Определение качества фармакопейного новокаИна//Там те.-С. 79.