Автореферат и диссертация по медицине (14.00.35) на тему:Раннее выявление детей с урологической патологией методом регистрации хемилюминесценции мочи

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РСФСР

МОСКОВСКИЙ ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ПЕДИАТРИИ И ДЕТСКОЙ ХИРУРГИИ

На правах рукописи АХМАДЕЕВ Ринат Ильдерханович

УДК 616.61-008. 64: 616—072. 85

РАННЕЕ ВЫЯВЛЕНИЕ ДЕТЕЙ С УРОЛОГИЧЕСКОЙ ПАТОЛОГИЕЙ МЕТОДОМ РЕГИСТРАЦИИ ХЕМИЛЮМИНЕСЦЕНЦИИ МОЧИ

14.00.35 - Детская хирургия

Авторе ферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

МОСКВА — 1991 г.

Работа выполнена в Башкирском государственном медицинском институте имени 15-летия ВЛКСМ.

Научный руководитель: Заслуженный деятель науки БАССР, доктор медицинских паук профессер М. Г. МДВЛЮТОВА.

Научный консультант: Доктор медицинских наук, старший научный сотрудник Р. Р- ФАРХУТДИНОВ.

Официальные оппоненты:

Доктор медицинских наук, профессор П. К- ЯЦЫК,

Доктор медицинских наук, профессор Э- А. ЮРЬЕВА Ведущее учреждение: Второй Московский ордена Ленина Государственный медицинский институт имени Н- И. Пирогова.

Защита состоится « I О» гГк^ 1991 г. в_час.

на заседании специализированного Совета Д-084. 15.01 при Московском ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательском институте педиатрии и детской хирургии Минздрава РСФСР (127143, Москва, Талдомская, 2)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ицетитута.

Автореферат разослан: « » &гслХ&Х^У_[£91 г.

Ученый секретарь специализированного совета кандидат медицинских наук

3. К- Землянская

...., | АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ

]По данным ВОЗ среди заболеваний детского возраста патология "органов мочевой системы стоит на втором месте после респираторных заболевания. В то •se время, по мнению ряда авторов, значительное число почечных заболеваний з их ранних предклиничесхих фазах остается не диагностированными. Отмечается изменение клинической картины почечной патологии, появление субклинических и асимптомных форм заболеваний, что требует совершенствования способов диагностики почечных заболеваний (Игнатова М.С., Вельтищев D.E., 1982 ; Клар С. с соавт., 1984 ; Маждраков Г. с соавт., 1980 ; Цухин H.A., Тареева И.Е., 1985 ).

На диспансерном учете в республиканской клинической детской больнице г. Уфы состоит 156 детей с обструктивными уропатиями Счто составляет 40% всех больных, прошедших через уронефрологическое отделение), из них 102 ребенка Счто составляет 65Й) старше 5 лет. В этой группе больные с запущенными формами обструкции, когда оперативное лечение малоэффективно и дети остаются на пожизненной инвалидности с клиникой хронической почечной недостаточности, составили 475?. Эти показатели,соответствующие литературным данным, заставили нас искать новый принцип ранней диагностики недостаточности функции почек на субклинической стадии заболевания, что позволило бы выработать тактику лечения, выбирая менее травматические операции, в условиях не отягченных вторичными изменениями верхних мочевых путей.

Существующие методы исследования функции почек, несмотря на достаточную объективность и информативность, не всегда могут быть использованы даже в условиях клиник из-за своей сложности, трудо -емкости, обременительности для пациента. Поэтому есть серьезные основания считать, что совершенствование и внедрение в практику качественно новых методов исследования функции почек, отличающихся простотой, доступностью, неинвазивностью, объективностью, отвечающих требованиям, предъявляемым к экспресс-методам, несомненно является актуальной задачей совеременной детской уронефрологии. Данная проблема приобретает особую значимость в настоящее время, когда достижения молекулярной биологии, биофизики, других фунда -ментальных и прикладных наук позволяют выявить наиболее ранние стадии патологического процесса, изучить молекулярные механизмы поражения, выяснить их причины, разработать эффективные способы диагностики и коррекции.

В работах последних лет неоднократно ставился зопрос о возможности использования метода сверхслабого свечения биологических жидкостей в диагностических целях ( Владимиров 33.Л., 1984; £архут-динов P.P., 1988). В частности, было показано, что при различных патологических процессах меняются хемилюминесценция крови и мочи.

Можно выделить два направления в этих исследованиях : определение спонтанного излучения и регистрация хешлютнесценции, у си ~ леннай активаторами свободно-радикального окисления, з частности, ионами двухвалентного железа. В последнем случае измерение сверхслабого излучения значительно упрощается, а анализ механизмов хе -милюминесценции облегчает выяснение причин изменения свечения.

Несомненный интерес представляет исследование возможности использования в клинических условиях метода регистрации сверхслабore свечения мочи для оценки функционального состояния почек, что и легло в основу данной работы.

ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ

Разработать и научно обосновать новый'метод раннего выявления нарушений (функции почек у детей с урологической патологией на оснс ве исследования хемилюминесценции мочи и доказать его информатив -ность при выявлении скрытой урологической патологии у детей.

ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ

1. Разработать критерии диагностической ценности исследования хемилюминесценции мочи у детей и обосновать их клиническое значе -ние.

2. Выявить в эксперименте зависимость свечения мочи от характера морфофункциональных изменений в почечной ткани.

3. Определить характер и особенности изменения хемилюминес -ценции мочи у детей с обструктивными уропатиями и разработать критерий их дифференциальной диагностики.

4. Изучить целесообразность использования регистрации хемилюминесценции мочи при диспансеризации и массовых профилактических осмотрах детей, как метода раннего выявления нарушения функции почек.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА

Впервые разработан и научно обоснован новый подход к раннему выявлению детей с урологической патологией, основанный на регистрации хемилюминесценции мочи, индуцированной ионами двухвалентно-

го тселеза. Установлено, что снижение уровня сзетосуммы свечения мочи наблюдается при обструктивных уропатиях и связано, с нарушением уродинамики верхних и нижних мочевых путей и повышается при её восстановлении.

Предложены критерии оценки параметров хемилшинесценции мочи (уровень быстрой вспышки и светосумма свечения).позволяющие дифференцировать урологическую и нефрологическуа патологии.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ Разработанный метод хемилюминесценции мочи, индуцированной ионами двухвалентного железа, является общедоступным и высокоин-формативныы методом выявления недостаточности функции почек у детей в ранних стадиях и позволяет проводить дифференциацию уроло -гической и нефрологической патологии. Установлено, что регистрация хемилюминесценции мочи мояет быть использована:

1. Для постоянного контроля за деятельностью почек в урологической практике;

2. Как скрининговый метод раннего выявления уронефрологической патологии у детей при диспансеризации и профилактических осмотрах.

ВНЕДРЕНИЕ В ПРАКТИКУ Метод регистрации хемилюминесценции мочи внедрен в практику уронефрологического отделения Республиканской детской клинической больницы (г.Уфа), использован для диспансеризации в поликлинике РДКБ, № I (г. Уфа), при проведении профилактических осмотров в детских садах JW 4, 12, детской поликлинике № 2 (г. Уфа).

" АЯРОБАЩЯ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ Основные результаты исследования доложены на УН Уральской конференции физиологов (Уфа, 1987], Всесоюзной научно-практической конференции "Санаторно-курортное лечение больных воспалительными заболеваниями почек и мочевыводящих путей" (Байрам-Али, 1982; Тру-скавец, 1988), на Региональной конференции "Медицинская наука -практике (Уфа, 1989).

ПУБЛИКАЦИИ

Научная новизна работы защищена авторским свидетельством (№ I3IC727 от 15.01.87 г.). По материалам дисеертации опубликовано 7 научных работ.

ОБЪЕМ И СТРУКТУРА .ДИССЕРТАЦИИ Работа изложена на 102 страницах машинописного текста, иллюстрирована 21 рисунком и 14 таблицами. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материала и методов исследова -

ния,результатов собственных наблюдений,заключения,выводов,практи ских рекомендаций,указателя литературы,приложения. Библиография включает 180 цитированных работ(Н8 отечественных и62 зарубе-хных авторов).

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ ОБЪЕМ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В целях разработки метода раннего выявления детей с урологи екай патологией нами были проведены экспериментальные и клиничес исследования. Обследовано 163 ребенка с различными заболеваниями почек, диспансерный осмотр проведен у 160 детей;контрольную труп составили 79 здоровых детей.

Экспериментальные исследования проведены на животных (крысь В данной работе были выделены следующие этапы (Табл.1):

Таблица I.

Общая характеристика проведенных исследований

!№ ! этапы и задачи пп ! исследования

объем и объект исследования

1. Выбор оптимальных Исследована хемилюмине-

сценция мочи у 79 здоровых детей.Изучено влия- . ние на характер свечения времени взятия и длительности хранения мочи, величины рН,температуры, концентрации железа и ид.

2. Исследование хеми- Изучена хемилюминесцен-

ция мочи в динамике развития острой почечной недостаточности (60 крыс), полученные данные сопоставлены с морфологической картиной поражения и тяжестью функциональных нарушений.

Обследовано 163 больных с различными заболеваниями почек.Изучалась зависимость хемилюминесце-нции мочи и (функционального состояния почек у детей. Обследовано 160 детей. .. . _ Выявлено 24 больных ре-

милшминесценции мо- бенка.Направлены в ста-чи для раннего выя- ционар для углубленного вления нарушения исследования и лечения, функций почек у детей в поликлинических условиях,детских учреждениях,при диспансеризации и т.д.

Выбор оптимальных условий измерения х емилюмине сценции мочи у детей,обоснование методики проведения исследования.

Исследование хеми-люминесценции мочи экспериментальных животных при моделировании острой почечной недоста-т очности.

Клиническая апробация метода регистрации хемилюми -несценции мочи.

Использование метода регистрации хе-

использованные методы_

Исследование xe.v люминесценциио.о ределение Fe 7

Исследование хем люминесценции,оп деление средних лекул в крови и че,малонового ди льдегида в ткани чек,исследование чечного коэффици т а,патоморфологи

Исследование хе люминесценции,кл нико-лабораторны исследования,оио мические,инструм тальные.

Исследование хе люминесценции,кл нико-лабораторны исследования,бис мические,инструм тальные.

Первый этап исследования заключался в изучении хемилюминесцен-ции мочи у 79 здоровых детей, находившихся на обследовании в РДКБ. Изучалось влияние на показатели хемилюминесценции мочи времени взятия пробы, длительности и условия хранения, температуры измерения, величины рН мочи, концентрации добавляемого инициатора -ионов Цель этих исследований - выбор оптимального метода.

Для регистрации излучения использовался фотоэлектронный умножитель ФЭУ-37, сигнал с которого усиливался широкополосным усилителем и записывался на самописце. Питание фотоумножителя обеспечивалось источником высокого напряжения. Оптимальное напряжение составляло 820 вольт при силе тока 2,5 мА. Величина напряжения была подобрана экспериментально по соотношению сигнал / шум. Оценку стабильности работы и перерасчет получаемых результатов на условные относительные единицы проводили по вторичному эталону излучения С С4ХМ - I, ГОСТ 9411 - 81, суммарный световой поток 5,1x105 квантов в секунду, соответствовавший току, напряжением 10 мв ). Для удобства за одну относительную единицу было принято откло -нение стрелки самописца на I мм, что соответствовало интенсивности излучения 5,1 х 103 квант / сек. Светосумма свечения измерялась в квадратных сантиметрах ( I см^ * 3,06-10^ квантов в минуту ), длительность латентного периода - в минутах.

Методика определения хемилюминесценции мочи была разработана в 1ЩЛ БГМИ, совместно с Р.Р.Фархутдиновш и др. С авторское свидетельство № 1310727 от 15.01.87 г.).

Её суть заключается в следующем : отбирали пробу утренней мочи в количестве 19 мл, доводили величину рН до 5,3 - 5,5 ед., помещали в светоизолированную измерительную камеру прибора, в которой поддерживалась температура 37° С. В течение одной минуты регистрировали темновой ток, затем открывали шторку прибора и одну минуту измеряли спонтанное свечение мочи. Для инициирования реакций, сопровождающихся хемилюминесценцией, к пробе добавляли при постоянном перемешивании I мл раствора сернокислого железа ( РеБО^х 7 ). Индуцированное свечение измеряли в течение 5 минут. Вся процедура исследования хемилюминесценции мочи занимала не более 7-10 минут.

Второй этап работы состоял в изучении хемилюминесценции мочи экспериментальных животных при моделировании почечной патологии. У крыс вызывали острую почечного недостаточность путем подкожного

введения в межлопаточную область раствора сулемы из расчета 10 мг/ веса животного. О нарушении деятельности почек судили по изме нению величины суточного диуреза, почечному коэффициенту, которы определялся по отношению веса почек С в мг ) к весу тела животног С в граммах ).

В динамике развития острой почечной недостаточности проводили патоморфологические исследования почек. Для окраски фиксиро -ванных тканей использовали гематоксилин - эозин по Ван - Гизону. Животных забивали под наркозом, в соответствии с методическими рекомендациями по выведению животных из эксперимента и эвтоназии ( МЗ СССР, 1985 }.

Для приготовления гомогенатов почек экспериментальных животных, органы отмывали охлажденным фосфатным буфером ( рН - 7,45 ), измельчали и заливали буфером в соотношении I : 5 С вес : объем ) гомогенизировали в механическом гомогенизаторе 5 минут при темпе ратуре 4° С. Полученный гомогенат фильтровали через капроновый фильтр, определяли содержание белка по Лоури или по микробиурето-вой пробе, доводили концентрацию разведением до I мг/мл. Содержание малонового диальдегида С ЗДА ) в пробах оценивали по цветной реакции с 2 - тиобарбитуровой кислотой в присутствии ТХУ. Максимум поглощения окрашенного комплекса приходится на 532 нм, моляр ный коэффициент поглощения равен 1,56 • 1Сгм~^см~^ (Владимиров Ю.А. с соавт., 1972; Стальная И.Д., 1977 ). В гомогенатах органов определяли содержание ВДА в свежеприготовленной пробе и через каждые 60 минут в течение 3 часов аэробной инкубации при 37° С и постоянном встряхивании.

Липиды из гомогената почек выделяли хлороформ - метанольной экстракцией по Фолчу. Количество диеновых коньюгатов в липидных экстрактах определяли по изменении оптической плотности при 233 к молярный коэффициент экстинкции - 2,1 • С Владимиров

Ю.А. с соавт., 1972; Стальная И.Д. с соавт., 1977 >.

Параллельно в пробах измеряли содержание гидроперекисей хемилюминесцентным методом и путем определения приращения концена рации продуктов, образующихся в процессе разложения гидропере -кисей, ионами двухвалентного железа и реагирующих с 2 - тиобарбит ровой кислотой ( Владимиров Ю.А. с соавт., 1976 ). Оптическую плотность, спектры поглощения исследовали с помощью спектрофотометра СФ - 26.

Экспериментальная часть работы - моделирование острой почечной недостаточности у животных проводилась на базе ДНИЛа Башкирского Государственного медицинского института. Исследования природы хемилюминесценции мочи, зыбор оптимальных условий её изме -рения, определение продуктов перекисного окисления липидов в крови, моче, почках животных, гистоморфологические исследования велись совместно с д.м.н. Р.Р.Зархутдиновым и к.м.н. С.А.Кантю-ковым.

Третий этап исследования заключался в изучении хемилюминесценции мочи у больных, поступивших в Республиканскую детскую клиническую больницу г. Уфы. Обследовано 163 ребенка с различными заболеваниями почек. Исследование хемилюминесценции мочи проводили при поступлении,в процессе лечения и перед выпиской из стацио -нара. У всех больных определяли содержание белка в крови и моче, при необходимости исследовали белковые фракции крови методом электрофореза на бумаге с последующей окраской бромфеноловым. Лейкоцитарную формулу крови подсчитывали з мазках, окрашенных по Романовскому - Гимзе.

Всем больным проводили общий анализ мочи, исследование по Нечипоренко, микроскопическое исследование осадка мочи, функциональную пробу Зимницкого. В крови оценивали уровень остаточного азота по Асселю. С помощью наборов Био-тест исследовали содер -жание мочевины, креатинина, фосфора, хлоридов, активность щелочной фосфатазы.

Всем детям проводилась экскреторная урография, по показаниям - микционная цистография, детям с 10-летнего возраста - радиоизотопную ренографию и почечную ангиографию. Для оценки перспективности использования метода регистрации хемилюминесценции мочи при диспансеризации и для выявления скрытых форм заболеваний, обследовано 160 детей из детских садов.

Все полученные данные подвергнуты статистической обработке с помощью ЭВМ с использованием критерия Стьюдента, по програм -ме "31а1дгарЬг«Г С США ).

Хемилюминесценция мочи при экспериментальной почечной патологии.

Измерение и анализ биохемилюминесценции, как и любой другой физико-химический метод исследования может быть полезным лишь в том случае, если известна природа изучаемого явления, установлены

характер и причины изменения свечения при патологии.

Судя по имеющимся данным, хемилюминесценция мочи, в отли -чие от свечения крови, гомогенатов органов, суспензии внутриклеточных структурне связана с процессами перекисного окисления липидов. Этот вывод вытекает из следующего : на характер хемилю-минесценции мочи не оказывают влияние антиоксиданты,такие,как например, ионол, подавляющий свободно-радикальные процессы в ли-пидах. Кроме того, в моче за время развития медленной вспышки свечения не обнаруживается накопления продуктов перекисного окис, ния липидов - ни малонового диальдегида, ни диеновых коньюгатов

В то же время, результаты экспериментов, в которых исследовалось влияние на хемилвминесценцию мочи добавления люминола, пе рекиси водорода и различных перехватчиков активных форм кислород позволяют считать, что свечение мочи, индуцированное ионами двух валентного железа, зависит от интенсивности образования радикалов неорганического происхождения - супероксидного анион радикал; синглетной формы кислорода, гидроксильного радикала.

Следует заметить, что образование активных форм кислорода и радикалов липидно природы очень часто взаимосвязано, ибо радикалы кислорода являются инициаторами перекисного окисления липидов и,в то же время, образуются при окислении ненасыщенных жирньс кислот С Владимиров Ю.А. с соавт., 1972 ).

С целью установления причин и выявления зависимости между изменением характера хемилюыинесценции мочи и морфо-функциональ-ными поражениями почек, на животных была моделирована острая почечная недостаточность. Показано, что с нарастанием почечной недостаточности происходит изменение параметров хемилюминесценции мочи. Сопоставление патоморфологических данных с характером изменения свечения мочи позволило установить, что интенсивность хе милюминесценции имеет минимальный уровень в период максимальных повреждений структуры почечной паренхимы, в стадии выраженного коагуляционного некроза канальцевого аппарата. По срокам это соответствует олигоанурическому периоду развития острой почечной недостаточности, когда функциональная активность почек, судя по величине диуреза и почечному коэффициенту, была резко снижена. По мере нормализации функций клубочкового и канальцевого аппарата почек отмечалось восстановление интенсивности хемилюминесценц:

мочи. В то же время на характер хемилюминесценции мочи,индуцированной добавлением солей двухвалентного железа, влияет концентрация средних молекул. Увеличение этой фракции полипептидов в крови и в моче наблюдается при нарушении функции почек и отражает тя -жесть состояния. Средние молекулы оказывают неблагоприятное влияние на многие функции организма. Показано, что полипептиды с молекулярной массой I - 10 тыс. дальтон, относящиеся к фракции средних молекул, угнетают хемилюминесценции) плазмы крови, индуцированную добавлением солей двухвалентного железа С Владимиров Ю.А.,1976; Фархутдинов P.P. с соавт., 1974 ). Эти продукты связывают Fe^t лишая тем самым ионы железа каталиаической активности. Судя по полученным нами данным, повышение содержания средних молекул в моче также вызывает уменьшение скорости окисления что и ведет к угнетению развития хемилюминесценции. Некоторые авторы отмечают, что определение "средних молекул" биохимическими методами не всегда эффективно, поэтому угнетение светосуммы хемилюминесценции мочи, как один из показателей увеличения содержания средних молекул заслуживает, на наш взгляд, внимания.

До сих пор существуют спорные взгляды на молекулярные механизмы развития многих нефрологических заболеваний, в том числе и токсических поражений почек. Одной из причин повреждения мембранного аппарата почек, по-видимому является нарушение процессов свободно-радикального окисления. Некоторые авторы отмечали уве -личение. продуктов перекисного окисления липидов в моче и при заболеваниях почек (Кожевников Ю.Н. с соавт., 1981). В наших исследованиях было показано, что развитие токсического нефрита сопро -воздается повышением малонового диальдегида в гомогенате почек экспериментальных животных. Уже в'первые сутки поражения резко увеличивается скрость накопления ВДА. Полученные данные рассматриваются как подтверждение патогенетического значения нарушения свободно-радикального окисления при токсическом нефрите. Этот процесс оказывает влияние на структуру и функции биологических мембран. Возможность нарушения перекисного окисления липидов необходимо иметь в виду при профилактике и лечении заболеваний почек. Следует так же считать возможным и правомочным использование метода регистрации свечения мочи для раннего обнаружения па -тологических процессов в почках.

Хемилюминесценция мочи у детей в норме.

Для выявления диагностической ценности измерения хемийюми-несценции мочи была проведена клиническая апробация данного метода. Вначале было исследовано 79 здоровых детей, находившихся на обследовании в стационаре и поликлинике Республиканской детской клинической больницы. Отсутствие патологии почек доказывалось с помощью традиционных методов исследования, включая общий анализ крови ( общий белок, остаточный азот, креатинин кр ви, мочевина }, анализ мочи по Зиыницкому. В сомнительных с луч; ях проводились специальные исследования - ультразвуковое исследование почек, экскреторная урография.

Среди обследованных было 38 девочек и 41 мальчик, в возрае от I до 3-х лет - 10; от 3 до 5 лет - 26; от 7 до 10 лет - 27; от 10 до 14 лет - 16.

Применение метода регистрации хемилюминесценции мочи для оценки изменений, происходящих в почках, потребовало выбора и обоснования определенного способа регистрации свечения. С этой целью было изучено влияние на параметры хемилюминесценции мочи её рН, температуры среды и концентрации ионов двухвалентного железа, добавляемых с целью усиления свечения, а также зависи -мость интенсивности излучения мочи от времени взятия пробы и длительности её хранения.

Максимальная интенсивность хемилюминесценции мочи отмечена при колебаниях рН от 5,0 до 5,5 ед., и начальной концентрации Ре в среде инкубации 2,5 мМ. Указанные условия можно считать оптимальными для развития хемилюминесценции мочи. Длительность хранения в течение 4-х часов'при различных температурных режима: не оказывала существенного влияния на изменение параметров све -чения. В то же время, интенсивность свечения мочи у здоровых детей зависит от времени взятия пробы. Изменение свечения мочи в течение суток совпадает с колебаниями выделительной и концентрационной функции почек - повышается в утренние и вечерние часы и понижается днем и ночью. В наших исследованиях увеличение светосуыыы свечения мочи коррелировало с клиренсом креатинина. При этом следует подчеркнуть, что на измерение хемилюминесцен -ции мочи в среднем уходило в 10 раз меньше времени, чем на опре-делезие креатинина и было не обременительно для пациента.

Исследование влияния различных факторов на хемилюминесцен-цию мочи свидетельствует, что при использовании метода регистрации сверхслабого свечения мочи в диагностических целях, необхо -димо особое внимание уделять условиям проведения измерений, отклонение от стандартной методики может стать причиной ухудшения воспроизводимости результатов исследования. В дальнейшей работе мы строго придерживались разработанного способа измерения хеми -люминесценции мочи.

Анализ эмпирического распределения переменных величин спонтанного свечения, амплитуды быстрой вспышки и светосуммы свечения мочи, 79 детей, прошедших тщательный и всесторонний клинико-лабораторный контроль, показал следующее: ( Табл. 2.)

Среднее значение и ошибка спонтанного свечения составляет 11,3+ 0,36 отн. ед. Амплитуда быстрой вспышки - 199,7+ 4,2 отн. ед., а светосумма свечения - 30,9 + 1,02 отн. ед. При этом характер хемилюминесценции мочи практически не зависит от пола ребенка, а параметры свечения с момента рождения до 14 лет незначительно возрастают, оставаясь ниже по сравнению со взрослыми людьми в 1,1 - 1,2 раза.

Используя ЭВМ было проведено сопоставление распределения переменных зеличин - спонтанного свечения, амплитуды быстрой вспышки, светосуммы свечения с теоретическим распределением.СРис.1) Гипотеза согласия на уровне 95% во всех указанных случаях не отвергается, что позволяет отнести выбранную группу здоровых детей к одной генеральной совокупности, а существующий разброс показателей считать случайным в пределах группы. Такая проверка на однородность необходима для дальнейшего выявления различий в показателях между здоровыми и больными.

Хемилюминесценция мочи у детей с почечной патологией.

Под нашим наблюдением находилось 163 ребенка во возрасте от 3 месяцев до 14 лет с почечной патологией. Из них 52 ребенка страдали пороками развития почек и мочеточников, осложнившихся пиелонефритом, нуждавшихся в хирургической коррекции. У 46 ди-агносцирован острый гломерулонефрит, у 34 больных - хронический гломерулонефрит и 41 ребенок поступил в клинику с диагнозом -первичный пиелонефрит.

Значале была предпринята попытка провести статистический анализ группы больных с почечными заболеваниями без учета канк-

ретного диагноза по той же методике, что и в группе здоровых. Оказалось, что спонтанное свечение, амплитуда быстрой вспышки и светосумма свечения мочи больных отличается от соответствующих показателей в норме. Однако, при сравнении эмпирического и тео -ретического распределения переменных внутри самой группы, гипо -теза согласия на уровне 95% была отвергнута, что указало на не -возможность отнесения больных к одной генеральной совокупности. В ней существуют несколько подгрупп, что и показал детальный анализ с учетом особенностей этиопатогенеза заболевания. После разделения больных в соответствии с нозологическими формами заболевания, группы становятся однородными и их можно отнести к одной генеральной совокупности внутри себя С Рис. I.).

Проведенное исследование свидетельствует, что, с одной стороны, изменение характера хедалюминесценции мочи не является спе цифичным для какой-либо одной определенной нозологической формы заболевания почек, свечение мочи в той или иной степени меняется при нарушении функции почек, независимо от причины. С другой сто роны, каждая из нозологических форм заболевания имеет свои осо бенности.

Изучение корреляционных связей между различными переменными спонтанным свечением, амплитудой быстрой вспышки, светосуммой хемилюминесценции мочи, не выявило наличия строгой зависимости между ними ни в норме, ни при патологии. Каждый из этих показа -телей является самостоятельным, несет определенную информацию, характеризует различные стороны и механизмы развития свечения. Этот вывод совпадает с результатами экспериментального исследо -вания природы хемилюминесценции мочи. При сравнении всей совокупности больных без учета нозологических форм заболевания со здоровыми детьми, уровень значимости достоверности отличия споь тайного свечения составляет р с 0,1; амплитуды быстрой вспышки -р^ 0,01 и свегосуммы свечения - р-< 0,02. Два последних параметр? могут использоваться для выявления почечной патологии. Наиболее показательной, на наш взгляд, является светосумма свечения. Она менее всего зависит от изменения условий измерения хемилюминесценции мочи - температуры, длительности хранения, рН мочи, концентрации добавляемого инициатора и т.д. Светосумма свечения меняется соответственно с показателями, отражающими состояние выделительной и концентрационной функции почек, с

уровнем средних молекул з моче, остаточного азота крови и т.д.

Применение метода регистрации хемилюминесценции мочи при

диспансеризации детей.

Разработанный нами метод оценки функционального состояния почек, основанный на исследовании хемилюминесценции мочи, был апро -бирован во время профилактического осмотра детей в дошкольных уч -реждениях. Среди 160 обследованных детей указания в амбулаторных картах на наличие заболеваний почек было лишь у одного пациента. После исследования хемилюминесценции мочи была выделена группа риска из 29 детей, у которых светосумма излучения оказалась ниже 95% доверительного интервала среднего значения, характерного для здорового ребенка. Проведено полное урологическое обследование в условиях однодневного или дневного стационара урологического отделения Республиканской детской клинической больницы, включая общепринятые клинические методы исследования, экскреторную урографшэ и УЗИ органов брюшной полости. Углубленный клинико-лабораторный анализ выявил у 27 из них уронефрологические заболевания. В двух случаях обнаружена гипоплазия почек, в трех - пузырно-почечный реф -люкс II - III степени. В двух случаях - нерефлексиругощий мегауре-тер, у двоих - одно- и двусторонний нефроптоз с явлениями интер-стициального нефрита, у одного ребенка - подвздошная дистопия по -чки, хронический пиелонефрит, латентное течение. Двоим поставлен диагноз - поликистоз почек.

Интерстициальный нефрит выявлен у 9 детей, мочекислый диатез - у четверых, хронический пиелонефрит - у двоих. Лишь 2 ребенка из этой группы риска оказались здоровыми и одному диагноз был поставлен ранее. У всех остальных детей заболевание выявлено впервые и они взяты на амбулаторный учет. Таким образом, у 93,1$ детей, у которых показатели хемилюминесценции мочи отличались от средних значений, выявилась скрытая патология, которая ранее при профилактических осмотрах не диагностировалась. Учитывая незначительные затраты времени на проведение исследования хемилюминесценции мочи, неинвазивность метода, мы рекомендуем использовать этот способ при диспансерном обследовании.

Применение этого метода открывает новые возможности при массовом обследовании детей с целью выявления скрытой патологии по -чек или предболезни, может оказать помощь в правильной организа -

ции диспансерного наблюдения и реабилитации больных детей.

Данный способ особенно перспективен для оценки деятельности почек у детей до двух лет, у которых использование таких методов исследования как радиоизотопные, проба по Зимницкому, клиренс креатинина и некоторые другие не- выполнимы технически или очень трудоемки.

Простота измерения хемилюминесценции мочи, высокая чувтви-тельность метода, незначительные затраты времени и средств, не-инвазивность - все это отвечает требованиям, предъявляемым к экспресс-способам анализа.

ВЫВОДЫ

1. Разработан новый подход к раннему выявлению урологической патологии у детей, основанный на регистрации хемилюминесценции мочи, индуцированной ионами двухвалентного железа.

2. Проведена оценка диагностических возможностей предложенного метода в эксперименте на животных. Доказано, что морфофункциональ ные изменения в почках уже на ранних стадиях развития острой по -чечной недостаточности приводят к уменьшению светосуммы свечения.

3. Нарушение функции почек при обструктивных уропатиях харак -теризуется снижением быстрой вспышки и уменьшением светосуммы свечения мочи, что обусловлено повышением содержания "средних молекул" в моче.

4. Клинические наблюдения за больными с пороками развития вера них мочевых путей, требующих хирургического вмешательства, до и после оперативного лечения показали, что снижение интенсивности хемилюминесценции мочи у детей предшествует увеличению клиренса креатинина, остаточного азота и мочевины в крови. Степень угнетения свечения соответствует тяжести заболевания и зависит от стаду патологического процесса. По мере восстановления деятельности почек, свечение мочи нормализуется.

5. Использование хемилюминесценции мочи в клинических условия? и при массовых осмотрах детей в качестве скрининг-теста и экспрес метода позволило выявить ранние стадии нарушения функции почек с достоверностью 93%.

6. Анализ вертикальных гистограмм распределения быстрой вспыли и светосуммы свечения указывает на возможность проведения первич* ной дифференциации между урологической и нефрологической патоло -гией.

7. При массовых обследованиях с помощью данного метода у 11% детей выявлены отклонения, потребовавшие специального урологического обследования, в результате которого были диагностированы обструктивные уропатии без явных клинических проявлений, но требовавшие урологического наблюдения и оперативного лечения.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Разработанный метод регистрации хемилюминесценции мочи позволяет оценить функциональное состояние почек в течение 5 -10 минут бео введения рентгеноконтрастных веществ, радиоизотопов и т.д., неинвазивен и безопасен для пациентов.

Исследование проводится по следующему способу: отбирается 19 мл мочи, помещается в камеру прибора; в течение I минуты из -меряется спонтанное свечение, затем добавляется I мл 50 мМ раствора сернокислого железа, определяется амплитуда вспышки и далее в течение 5 минут измеряется светосумма хемилюминесценции.

Этот метод рекомендуется использовать:

1. Для раннего выявления нарушения функции почек, контроля за эффективностью лечения, а также при наблюдении больных в после -операционном периоде.

2. Для определения недостаточности функции почек у детей до двух лет, как наиболее доступный, неинвазивный и информативный, когда остальные методы исследования функции почек технически трудно выполнимы.

3. Для проведения массовых профилактических осмотров и диспансерного наблюдения, выявления и ранней реабилитации детей с за -болеваниями почек.

Таблица 2.

СТАТИСТИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ПОКАЗАТЕЛЕЙ ХЕМИЛШИНЕСЦЕНЦИИ МОЧИ ЗДОРОВЫХ И БОЛЬНЫХ ДЕТЕЙ.

» ! Обследование ! Переменная ! С*'едня~* ! °шибка~ ........Достоверность ' "разницы (р )

! ! ! !спенней ! Т ! 2 ! 3 ! 4 !

1 ! ! ¡средней ! I ! 2 ! 3 ! 4 ! 5 ! б

спонтанные П.3 0,6 „ 0,1 0,05 0,01 од 0,05

I Здоровые (пФ 79) вспышка 199,7 4,2 - 0,01 0,01 0,01 0,05 0,6

светосумма 30,9 1,02 - 0,02 0,01 0,05 0,05 0,01

2 Больные (п=163) из них спонтанные вспышка 6,5 88,5 0,45 5,4 " ОД 0,01 - 0,5 0,9 0.5 0.9 0,5 0,4 0,5 0,05

светосумма 7,2 0,28 0,02 - 0.5 0.05 0,5 0,8

Пороки развития ■; понтанние ч,з 0,23 0,05 0.5 0,9 0,8 0.6 - 1

3 требующие хирург. вспышка 172,9 4.3 0,6 0,05 0,05 0,05 0,1

коррекции (п=52) светосумма 6,2 0,24 0,01 0,8 0,3 0,3 0,1 -

Кейрогенные дис- спонтанные 5.7 0,27 0,1 0,07 0,4 0,4 - 0,6

функции мочевого вспышка 111,4 2,9 0,05 0.4 0,4 0.5 - ОД

пузыря (п=41) светосумма 12,4 . 0,48 0,05 0.3 0.7 0.3 - од

5 Острый гломеруло-нефрит спонтанные вспышка светосумма 3.8 85,8 10,4 •0,17 2,9 0.4 Э,С5 0,01 0,01 0,5 0,9 0.5 - 0,9 0,9 0.1 0,4 0,4 0,7 0,9 0,05 0,3

Хронический спонтанные 3,7 0,22 о,г>1 0,5 0,9 — 0,4 • 0,8

6 гломерулонефрит вспышка 88,8 з.з 0,01 0,9 0,9 - 0,5 0,05

(п=34) светосумма 16,9 0.4 0,05 0,05 0,1 - 0,3 0,3

Р:гс, 1

Спонтанное свечение

5 ¿г—

2 / / < \ \

Аз 4 / / г \ \ \

•1 ч / ч ч

/\ < \ ч

п

25 20 15 10 5

0 2 А 6 8 10 12 14 16 -18 20 гг 14 э (отн.ед.)

П 25

Вспышка 5

/ / г—4 ч \

/ / f V \ >

/ / / 3 \ Ч \

'А л / —ч ч ч ч

к У Чч V. >

го

15 10

5

О 2 Ц 6 8 Но 12 14 Н6 1а 2о 22 24 9 (отн.едО П

гэ го

Сзетосумма

у

3 / / г \ \

2 Ц / / / \ \

Л / / / ч ч ч

у ч

15 10 5

о 2 А 6 8 10 12 14 16 18 20 22 2А 9(отн.ед.)

Вертикальные гистограммы распределения спонтанного свечения, быстрой вспышки и светосуммы хемилкзминесценции мочи здоровых и больных детей С I- хронический гломерулонефрит; 2- острый гло-мерулонефрит; 3- обструктивные уропагии; 4- острый пиелонефрит; 5- норма ).

MB

Клинические примеры: а - двухстронний мегауретер, уретеро-

гадронефроз, хронический пиелонефрит В - двухстронний пузырно-почечный рефлюн

выявлен впервые.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Хемилюминесценция мочи з норме и при патологии // Тезисы докладов научно-практической конференции. Байрам-Али, 1982 г.-С. 32-33 (в соазт. с Р.Р.^архутдиновым, С.А.Кантяковым).

2. Хемилюминесценция мочи в норме и при патологии // Реактивность организма з норме и при патологии.-Уфа, 1983.-С.42-43 ( в совт. с С.А.Кантюковым, И.И.Загидуллиным ).

3. Хемилюминесценция мочи при заболеваниях почек // Вопросы клинической и теоретической медицины. -Уфа, 1983. - С.52-55.

( в соавт. с С.А.Кантюковым, Д.М.Дмитриевым ).

4. Хемилюминесценция мочи, индуцированная ионами двухвалентного железа // Лабораторное дело. - 1986.-С.263-267 (в со -авт. с Р.Р.'5архутдиновым, С.А.Кантюковым ).

5. Способ диагностики почечной патологии. - Авторское свидетельство на изобретение .Т° 131(7727 от 15.01.87 ( в соавт. с Р.Р.Яархутдиновым, С.А.Кантюковым, И.И.Загидуллиным ).

6. Минимальный мочевой синдром у детей // Педиатрия. - 1988.-IX.- С. 41-43 ( з соавт. с З.М.Еникеезой, З.Х.Ахметшиным, 5.3.

Сакаевой ).

7. Экспресс-оценка функционального состояния почек методом регистрации хемшгаминесценции мочи // Материалы Всесоюзной на -учно-практической конференции. Трускавец, 1988. -С. 51-53.