Пуринорецептор-опосредованная регуляция сократительной активности маточных труб при воспалении

Вафина, Зухра Рамилевна

Диссертации по медицине → Фармакология, клиническая фармакология

Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Пуринорецептор-опосредованная регуляция сократительной активности маточных труб при воспалении

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Вафина, Зухра Рамилевна Казань 2004 г.

Ученая степень: кандидата медицинских наук

ВАК РФ: 14.00.25

Автореферат диссертации по медицине на тему Пуринорецептор-опосредованная регуляция сократительной активности маточных труб при воспалении

На правах рукописи Вафина Зухра Рамилевна

ПУРИНОРЕЦЕПТОР-ОПОСРЕДОВАННАЯ РЕГУЛЯЦИЯ СОКРАТИТЕЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ МАТОЧНЫХ ТРУБ ПРИ ВОСПАЛЕНИИ

14.00.25 - фармакология, клиническая фармакология 14.00.01 - акушерство и гинекология

Автореферат диссертации на соискание учёной степени кандидата медицинских наук

Казань- 2004

Работа выполнена в ГОУ В ПО Казанском государственном медицинском университете

Научные руководители:

доктор медицинских наук, профессор Зиганшин Айрат Усманович доктор медицинских наук, профессор Фаткуллии Ильдар Фаридович

Официальные оппоненты

доктор медицинских наук Горбунов Сергей Михайлович доктор медицинских наук, профессор Мальцева Лариса Ивановна

Ведущее учреждение: Московская медицинская академия им. И.М.Сеченова

Защита состоится 4 июня 2004 года в 9 час. 30 мин. на заседании диссертационного совета Д 208.034. 01 Казанского государственного медицинского университета (420012, Казань, ул. Бутлерова, 49).

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке Казанского государственного университета (420012, Казань, ул. Бутлерова, 49, корпус «Б»).

Автореферат разослан 30 апреля 2004 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор мед. наук, профессор

А. П. Киясов

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы

Маточные трубы являются органом репродукции, основной функциональной характеристикой которых является способность к сокращениям. Сократительная активность маточных труб имеет сложную нейро-гуморальную регуляцию, которая связана с выполнением маточными трубами их основной функции - транспортной, обеспечивающей «встречу» сперматозоидов и яйцеклетки в ампуле маточной трубы и последующее прохождение оплодотворённой яйцеклетки в полость матки.

Известно, что воспалительные процессы в области маточных труб могут изменять анатомо-гистологическое строение этого органа, повреждать его рецеп-торный аппарат и как результат приводить к нарушению сократительной функции. В результате нарушения сократительной функции маточных труб у женщин, живущих половой жизнью, могут возникнуть трубная беременность или бесплодие трубного генеза. Несмотря на большое количество исследований, посвященных изучению веществ, участвующих в регуляции сократительной активности маточных труб (Jankovic and Protic, 1995; Lindblom and Andersson, 1985; Nozaki and Ito, 1986; Gauwerky et al., 1989; Helm et al., 1982; Samuelson and Dalsgaard, 1985; Forman, 1985; Noe, 1999; Downing, 1999; Downing, 2002; Samuelson and Dalsgaard, 1985; Laszlo, 1990; Ekerhord, 1999; Jankovic, 1998 и др.), до сих пор не существует патогенетических методов коррекции нарушений сократительной активности данного органа, и проблема предупреждения повторной внематочной беременности и лечения трубного бесплодия функционального генеза продолжает оставаться актуальной.

Feoktistov, 2001). Однако роль этих рецепторов в функционировании маточных труб на сегодняшний день практически не изучена. Известно только, что АТФ принимает участие в регуляции секреции жидкости внутри просвета маточных труб человека (Downing et al., 1997), а аденозин влияет на их сократительную активность (Samuelson et al., 1985). Отсутствуют сведения о роли Р2 рецепторов в сократительной активности маточных труб без воспаления, а также в условиях острого и хронического сальпингитов. Поскольку в ранее проведенных исследованиях было установлено участие Р2 рецепторов как в воспалении (Cronstein et al., 1995; Cronstein et al., 1996; Di Virgilio, 1990), так и в сократительной активности многих гладкомышечных органов (Palea et al., 1993; Vassort, 2001; Von Kugelgen, 1995; Зиганшин и др., 2002), представляло интерес исследование наличия и функциональной активности Р2 рецепторов в маточных трубах, в том числе при воспалении. Патогенетическая связь между воспалительным процессом и нарушениями сократительной активности маточных труб подчёркивает актуальность работы, направленной на выявление и изучение механизмов нарушения сократительной активности этого органа.

Цель исследования — изучение наличия и функциональной активности Р2 рецепторов в маточных трубах человека, в том числе при воспалительных изменениях в них.

Задачи исследования

1. Фармакологическим методом оценить наличие и функциональную роль Р2 рецепторов в маточных трубах человека.

2. Провести сравнительный анализ эффективности различных агонистов Р2 рецепторов и аденозина по влиянию на сократительную активность маточных труб, в том числе на фоне действия антагониста Р2-рецепторов пиридоксальфос-фат-6-азофенил-2',4'-дисульфоновой кислоты.

3. Выполнить иммунофлюоресцентное исследование срезов маточных труб для установления имеющихся в них подтипов Р2 рецепторов.

4. Провести сравнительный анализ акушерско-гинекологического анамнеза женщин с изменениями функциональной активности пуринорецепторов маточных труб.

5. Оценить влияние возраста женщины на функциональную активность пуринорецепторов маточных труб.

Научная новизна

Впервые выявлено наличие Р2 рецепторов и проведено изучение влияния различных агонистов и антагонистов этих рецепторов на сократительную активность маточных труб человека. Впервые установлены изменения в функционировании Р2 рецепторов в маточных трубах при наличии острого и хронического воспаления. Выявлено влияние возраста женщины на сократительные ответы маточных труб под действием АТФ и аденозина. Впервые определены подтипы Р2 рецепторов в маточных трубах человека с помощью иммунофлюоресцентного метода исследования.

Научно-практическая значимость

Результаты данной исследовательской работы выявляют неизвестный ранее механизм развития нарушений сократительной активности маточных труб, реализуемый через пуринорецепторы. Изучение влияния различных агонистов Р2 рецепторов на сократительную активность маточных труб позволило составить ряд активности агонистов, влияющих в наибольшей и в наименьшей силе на сократительные ответы маточных труб как без признаков воспаления, так и с признаками воспаления и, таким образом, сделать предположение о функционировании определённых подтипов Р2 рецепторов. В группе больных с хроническим сальпингитом выявлены отличия в сократительных ответах маточных труб на аденозин и 2-метилтио-АТФ, тогда как в группе с острым сальпингитом — на АТФ, 2-метилтио-АТФ, одЗ'-метилен-АТФ и аденозин. Данный факт указывает на вовлечение в механизм нарушения сократительной функции маточных труб с хроническим и острым воспалением, как Р1 рецепторов, так и Р2 рецепторов. Научно-практическая значимость работы состоит в том, что её результаты обосновывают целесообразность ведения поиска потенциальных лекарственных средств для коррекции нарушений сократительной функции маточных труб как среди агонистов и антагонистов Р1, так и Р2 рецепторов. Изменение сократительных ответов маточных труб с воспалением под действием агонистов пуринорецепторов, возможно, отражает патогенез развития острого и хронического сальпингитов. В связи с этим, мы предполагаем,

что полученные результаты могут быть использованы также в разработке новых лекарственных препаратов с пуринорецептор-опосредуемым механизмом действия для лечения острого и хронического сальпингитов.

Основные положения, выносимые на защиту

1. В маточных трубах человека имеются функционально активные подтипы Р2 рецепторов, вовлечённые в процесс регуляции сократительной активности маточных труб.

2. При остром гнойном сальпингите пуринорецептор-опосредуемые сократительные ответы маточных труб изменяются неоднозначно: эффективность некоторых агонистов повышается (АТФ, сф-метилен-АТФ и аденозина), а других снижается (2-метилтио-АТФ).

Апробация работы

Результаты работы и основные положения диссертации были доложены и обсуждены на научной конференции, посвященной 40-летию центральной научно-исследовательской лаборатории КГМУ (Казань, 2002), X и XI Российских национальных конгрессах «Человек и лекарство» (Москва, 2003, 2004), 2-ом съезде Российского научного общества фармакологов (Москва, 2003), УШ и IX научно-практических конференциях молодых учёных КГМУ (Казань, 2003,2004).

Публикация результатов исследования

По материалам диссертации опубликовано 9 печатных работ.

Объём и структура диссертации

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, результатов собственных исследований, их обсуждения, выводов и списка литературы, включающего 146 источников, из которых 3 отечественных. Работа изложена на 111 страницах машинописного текста, иллюстрирована 14 рисунками, 9 таблицами и 3 страницами с 18 микрофотографиями результатов имму-нофлюоресцентного анализа.

На проведение данного исследования было получено разрешение Этического комитета Казанского государственного медицинского университета. Каждая пациентка давала письменное согласие на участие в исследовании.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Материалом для исследования послужили маточные трубы женщин, оперированных по поводу различных заболеваний матки и её придатков. Объём операции включал либо гистерэктомию, либо удаление придатков матки, либо сочетание гистерэктомии с удалением придатков матки. Все женщины, включённые в данное исследование, имели сохранённую менструальную функцию. Всего в исследовании использовали материал от 67 пациенток. Пациенты были разделены на три группы; критерием деления послужили результаты патогистологического исследования маточных труб1.

Первую (контрольную) группу составили женщины с различными заболеваниями матки и её придатков (миома тела матки, дермоидная киста яичника, плоскоклеточный рак шейки матки), маточные трубы которых не имели признаков воспаления (возраст пациенток 41-51 год; п=32).

Во вторую группу вошли женщины с различными заболеваниями матки и её придатков (миома тела матки, эндометриоз яичников, железисто-кистозная и атипическая гиперплазия эндометрия, серозная и муцинозная цистаденома яичника, плоскоклеточный рак шейки матки), маточные трубы которых имели признаки хронического воспаления (группа с хроническим сальпингитом; возраст пациенток 37-53 года; п= 17).

Третью группу составили пациентки, оперированные в связи с неэффективностью консервативной противовоспалительной терапии острых гнойных тубо-овариальных образований (группа с острым гнойным сальпингитом; возраст пациенток 26-46 лет; п=18).

В контрольной группе и группе с хроническим сальпингитом было проведено деление на 2 возрастные подгруппы — до 46 лет (включительно) и старше 46 лет.

Основанием для такого деления послужил большой диапазон разброса показателей влияния АТФ на сократительную активность маточных труб без воспаления женщин различного возраста, который был нами установлен. При этом рас' Выражаю благодарность доц. Рызванову А.А. за проведение патогистологического исследования

пределение показателей было таким, что наибольшее количество объектов исследования было расположено в области минимальных и максимальных его значений, а возраст 46-47 лет оказался наиболее удобной возрастной границей для такого деления. Кроме того, в каждой из возрастных подгрупп в этом случае мы получали примерно равное количество пациенток, и появлялась возможность провести сравнение результатов, полученных в группе с острым гнойным сальпингитом с возрастной подгруппой женщин до 46 лет двух других исследуемых групп.

Фармакологические эксперименты

Сразу же после получения образец ткани доставляли в лабораторию и из полученного материала (ампулярного отдела маточной трубы) готовили продольные гладкомышечные препараты (с эндосальпинксом) размером примерно 2х 10 мм, которые затем помещали в термостатируемые стаканчики с раствором Кребса, проводя постоянную аэрацию раствора. Сокращения регистрировали изометрическим датчиком механической активности и выводили на экран компьютера с помощью специальной программы. Оценивали изменения спонтанных сокращений маточных труб под действием агониста Р1 рецепторов аденозина и агонистов Р2 рецепторов [АТФ, аденозиндифосфорной кислоты (АДФ), 2-метилтио-АТФ, а,/3-метилен-АТФ, ури-динтрифосфорной кислоты (УТФ)], которые добавляли непосредственно в стаканчик. Антагонист Р2 рецепторов пиридоксальфосфат-6-азофенил-2',4'-дисульфоновую кислоту (PPADS) вносили непосредственно в стаканчик в концентрации 10 мкМ и инкубировали ткань с ним не менее 30 минут, после чего вновь оценивали эффективность агонистов Р2 рецепторов.

Поскольку при добавлении фармакологического агента могло происходить как увеличение сократительной активности, так и уменьшение спонтанной сократительной активности маточных труб с изменениями амплитуды, частоты и ба-зального уровня, для оценки влияния агонистов использовали интегральный показатель «площадь под кривой», определяемый за 60 сек, где исходные сокращения маточной трубы принимали за 100%, относительно которых рассчитывали % изменения этого показателя после добавления агониста.

Статистический анализ результатов проведён с использованием критерия Стьюдента (^ методом прямых и непрямых разностей, для оценки клинических

результатов применяли параметрический метод вычисления; достоверными считали изменения при

Иммунофлюоресцентные исследования

Для оценки присутствия в исследованных тканях Р2 рецепторов использовали иммунофлюоресцентный метод анализа криостатных срезов2.

Маточные трубы тотчас же после забора помещали в модифицированный раствор Кребса, охлаждённый до 4 °С и в пределах 2-4 часов доставляли в лабораторию для приготовления материала для иммунофлюоресцентного метода исследования. После предварительной отсепаровки брюшины готовили гладкомышеч-ные препараты (с эндосальпинксом) размером примерно 2x10 мм и фиксировали в течение 4 часов в 4% растворе формальдегида в 1М фосфатном буфере (рН 7,4). После фиксации ткань замораживали в жидком азоте и из замороженных тканей готовили срезы толщиной 12 микрометров, используя криостатный микротом (Reichert Jung CM 1800, Германия). Срезы наносили на желатинизированные предметные стекла, которые хранили в морозильной камере при -20°С до проведения им-муногистохимического анализа.

Срезы инкубировали в течение 14-16 часов с первичными антителами против Р2Х|, Р2Х2, Р2Х3, Р2Х4, P2Y|, P2Y2 и P2Y4 рецепторов (Roche Bioscience Polo Alto, США). В контроле срезы инкубировали с 10% раствором нормальной лошадиной сыворотки без каких-либо первичных антител. После отмывки избытка первичных антител, срезы инкубировали со вторичными антителами (Oregon Green, Jackson Immunoresearch Laboratories, США), конъюгированными с флюорохромом, дающим ярко зелёное или красное свечение под флюоресцентным микроскопом.

Микроскопирование срезов проводили, используя флюоресцентный микроскоп Zeiss Axioplan (Zeiss, Германия). Фотографирование проводили при помощи цифрового фотоаппарата Nikon CoolPix 990 (Япония).

2 Выражаю благодарность Зиганшину Б.А. за помошь в проведении этой серии исследований и проф Княсову А П. за помошь в интерпретации полученных результатов

РЕЗУЛЬТАТЫ II ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Аденозин, агонист Р1 рецепторов, в маточных трубах без воспаления у женщин в возрасте до 46 лет практически не влиял на сократительную активность маточных труб. Тогда как у женщин старше 46 лет контрольной группы, а также в группе с хроническим и острым гнойным сальпингитом аденозин стимулировал сократительную активность данного органа (см. Рис. 1). Известно, что стимуляции A1 подтипа PI рецепторов вызывает увеличение сократительных ответов гладко-мышечных органов (Wiklund et al., 1986), тогда как стимуляция Аз подтипа Р1 рецепторов, вызывает, наоборот, угнетение сократительных ответов гладкомышеч-ных органов (Samuelson et al., 1985). Также известно, что аденозин в малых концентрациях оказывает провоспалительный эффект и это явление связано преимущественно с воздействием на Агрецепторы, а в больших концентрациях оказывает противовоспалительный эффект, который опосредован Аз рецепторами (Cronstein et al., 1992; Cronstein et al., 1996; Cronstein et al., 1983; Cronstein et al., 1990; Suzuki etal, 1998).

В связи с этим можно предположить, что в маточных трубах без воспаления у женщин в возрасте до 46 лет наряду с А подтипом активно функционирует А2 подтип Р1 рецепторов. С возрастом женщины и при развитии острого и хронического сальпингитов активность этих подтипов Р1 рецепторов изменяется таким образом, что

Рис. 1. Влияние аденозина (А, п=7-15) и АТФ (В, п=10-15) и на спонтанную сократительную активность маточных труб без признаков воспаления женщин в возрасте до 46 лет включительно (светлые столбики) и старше 46 лет (заштрихованные столбики). Результаты представлены в виде изменения сократительной активности, выраженного в процентах от исходных значений. По оси абсцисс - десятичный логарифм молярной концентрации агониста. * - р<0.05 по сравнению с группой женщин до 46 лет.

либо повышается активность А1 подтипа, либо уменьшается активность А подтипа Р1 рецепторов. При этом наиболее выраженную стимуляцию сократительных ответов маточных труб под влиянием аденозина наблюдали в группе с острым гнойным сальпингитом (концентрация аденозина 10"4М), что может указывать на максимальную степень изменения функционирования этих двух подтипов Р1 рецепторов в условиях острого воспаления (см. Рис. 2). Возможно, отсутствие ингибируюшего влияния аденозина в концентрации 10-4М на сократительную активность маточных труб при остром и хроническом сальпингите (возрастная группа до 46 лет) косвенно указывает на несостоятельность местной противовоспалительной системы, высокую активность А1 рецепторов и как результат сохранение воспалительных изменений в ткани. Отсутствие достоверных различий у женщин в возрасте старше 46 лет контрольной группы и группы с хроническим сальпингитом, скорее всего, отражает сходные изменения в функциональной активности Р1 рецепторов при хроническом сальпингите и инволюционных процессах в этом органе.

АТФ, агонист Р2 рецепторов, в маточных трубах женщин в возрасте до 46 лет как контрольной группы, так и группы с хроническим сальпингитом практически не влияла на сократительную активность изучаемого органа, тогда как у женщин старше 46 лет АТФ вызывала выраженные сократительные ответы (см. Рис. 1). Возможно, это связано с изменением функционирования подтипов Р2

Рис. 2. Влияние аденозина (А, п=8-19) и АТФ (В, п=8-16) на спонтанную сократительную активность маточных труб без признаков воспаления (светлые столбики), с хроническим сальпингитом (заштрихованные столбики) и острым гнойным сальпингитом (темные столбики) женщин в возрасте до 46 лет. Результаты представлены в виде изменений в процентах от исходной сократительной реакции. По оси абсцисс - десятичный логарифм молярной концентрации агониста. * - р<0.05 по сравнению с группой без признаков воспаления.

рецепторов, чувствительных к АТФ, и служит одной из причин снижения фер-тильности женщины по мере приближения её возраста к менопаузе.

АТФ оказывает стимулирующее влияние практически на все подтипы Р2 рецепторов, кроме тромбоцитарных P2YE рецепторов, а также по некоторым сведениям и P2Y| рецепторов, для которых она служит антагонистом (Macfarlane and Mills, 1975; Leon et al., 1997). Отсутствие значимых сократительных ответов маточных труб женщин до 46 лет, как контрольной группы, так и группы с хроническим сальпингитом, видимо, свидетельствует о наличии кроме Р2Х рецепторов, которые опосредуют сокращение гладкомышечного органа, ещё P2Y рецепторов, стимуляция которых вызывает расслабление гладкой мускулатуры.

В группе с острым гнойным сальпингитом АТФ выступила наиболее сильным агонистом из всех изученных (см. Рис. 2). Как правило, АТФ действует более эффективно, чем 2-метилтио-АТФ, на Р2Х рецепторы, следовательно, можно предположить, что в маточных трубах с острым гнойным сальпингитом имеются функционально активные Р2Х2 рецепторы.

Ни в одной из исследуемых групп нами не было выявлено сократительных ответов под действием УТФ, что указывает на отсутствие функционально активных P2Y2, P2Y4 и P2Y6 рецепторов в этой ткани, которые чувствительны к УТФ (Filtz et al., 1997; Communi and Boynaems, 1997) (см. Рис. З).

Рис. 3. Влияние УТФ (А, п=8-11) и АДФ (В, п=7-11) на спонтанную сократительную активность маточных труб без признаков воспаления (светлые столбики), с хроническим сальпингитом (заштрихованные столбики) и острым гнойным сальпингитом (темные столбики) женщин в возрасте до 46 лет. Результаты представлены в виде изменений в процентах от исходной сократительной реакции. По оси абсцисс-десятичный логарифм молярной концентрации агониста.

АДФ во всех исследуемых нами группах вызывала усиление спонтанной сократительной активности маточных труб примерно в одинаковой степени, и достоверных различий среди групп исследования нами выявлено не было (см. Рис. 3).

2-Метилтио-АТФ считают сильным агонистом, как по отношению Р2Х, так и P2Y рецепторов (Kennedy and Leff, 1995). Она, как правило, более активна, чем АТР на Р2Х1, Р2Х3 рецепторах. В наших экспериментах 2-метилтио-АТФ выступила как один из самых сильных агонистов Р2 рецепторов в маточных трубах без воспаления и с хроническим сальпингитом. Учитывая отсутствие влияния а,р-метилен-АТФ в этих двух группах женщин, мы предполагаем, что появление выраженных сократительных ответов маточных труб на 2-метитио-АТФ связано со стимуляцией Р2Х4 и Р2Х6 рецепторов (см. Рис. 4). Используемый в наших исследованиях антагонист Р2 рецепторов PPADS не изменяла сократительные ответы маточных труб под действием 2-метилтио-АТФ и других агонистов в маточных трубах контрольной группы и группы с хроническим сальпингитом. Известно, что PPADS является антагонистом всех Р2Х рецепторов, за исключением Р2Х4 и Р2Х6, что может также косвенно указывать на наличие функционально активных Р2Х4 и Р2Х6 рецепторов в этой ткани (Boarder and Webb, 2001; Collo et al., 1996; Simon et al., 1999).

Было установлено, что сократительные ответы маточных труб под действием 2-метилтио-АТФ в контрольной группе женщин до 46 лет выше, чем в группе с хроническим сальпингитом. Кроме того, было выявлено отсутствие значимых сократительных ответов на этот агонист в маточных трубах с острым гнойным сальпингитом. Так как 2-метилтио-АТФ выступает также агонистом P2Y1 рецепторов (Conant et al., 1998), которые опосредует расслабление гладкомышечной ткани, мы сделали предположение о высокой функциональной активности P2Y| рецепторов при остром гнойном сальпингите (см. Рис. 4).

а,Р-Метилен-АТФ является селективным агонистом P2Xt и Р2Х3 рецепторов. Кроме того, чувствительностью к ней обладают некоторые гетеромультимер-ные рецепторы: Р2Хг/з, Р2Х)/з, P2Xi/s, Р2Х4/&. (Brownhill et al., 1997; Radford et al., 1997; Le et al., 1998). Она гораздо менее активна, чем АТФ на Р2Х2 и Р2Х4-7 подтипах. На P2Y рецепторах а,р-метилен-АТФ проявляет слабый эффект или вовсе

Рис. 4. Влияние 2-метилтио-АТФ (А, n=6-8) и а,Р-метилен-АТФ (В, n=7-11) на спонтанную сократительную активность маточных труб без признаков воспаления (светлые столбики), с хроническим сальпингитом (заштрихованные столбики) и острым гнойным сальпингитом (темные столбики) женщин в возрасте до 46 лет. Результаты представлены в виде изменений в процентах от исходной сократительной реакции. По оси абсцисс - десятичный логарифм молярной концентрации аго-ниста. * - р<0.05 по сравнению с группой без признаков воспаления.

не активна (Brownhill et al., 1997). В наших экспериментах а,Р-метилен-АТФ в маточных трубах без воспаления и с хроническим сальпингитом практически не влияла на сократительную активность изучаемого органа. При остром гнойном сальпингите реакция маточных труб на -метилен-АТФ значительно увеличивалась и составила в концентрации ЗОмкМ +32% от исходных значений. Возможно, это связано с наличием гетеромультимерных рецепторов в маточных трубах с острым гнойным сальпингитом или повышением активности P2Xt и Р2Х3 рецепторов в данной ткани (см. Рис. 4).

Антагонист Р2 рецепторов PPADS повышала сократительные ответы маточных труб с острым гнойным воспалением на 2-метилтио-АТФ в максимальной используемой нами концентрации 10 мкМ. Кроме того, PPADS повышала сократительные ответы маточных труб этой же группы на АДФ и АТФ в наименьших используемых нами концентрациях. Известно, что антагонисты Р2 рецепторов обладают слабой эффективностью по отношению к Р2Х4 рецепторам, и даже более того — способны потенцировать эффекты агонистов этих рецепторов в некоторых тканях (Во et al., 1995; Wang et al., 1996; Miller et al., 1998). Возможно, что повышение чувствительности маточных труб с острым гнойным воспалением к АТФ, АДФ и 2-метилтио-АТФ связано с потенцированием PPADS влияния этих агонистов на

Р2Х4 рецепторы.

При изучении акушерско-гинекологического анамнеза женщин, маточные трубы которых не имели признаков воспаления (возраст пациенток 41-51 год), было выявлено, что из 32 женщин, включённых в исследование, у трёх женщин ранее беременностей не было, при этом одна из них была virgo, другая состояла на психиатрическом диспансерном учёте, поэтому для достоверной оценки акушер-ско-гинекологического анамнеза во всей группе было решено из статистического анализа этих двух пациенток исключить. Третья пациентка (возраст 42 года), у которой не было беременности, не состояла в браке, не жила регулярной половой жизнью и имела нарушение менструальной функции по типу олигоопсоменореи. Также было выявлено наличие внематочной беременности у одной пациентки (3,3%).

В группе женщин с хроническим сальпингитом у трёх из 17 пациенток в анамнезе имелось указание на внематочную беременность (17,6%), у одной было установлено вторичное бесплодие, связанное с эндометриозом маточных труб и яичников (5,9%), у трёх женщин в течение жизни не было беременностей (17,6%). При этом у пациенток, не имевших беременностей в анамнезе, было выявлено, что одна из них (возраст 37 лет) имела бесплодие, связанное с эндометриозом яичников и маточных труб, вторая пациентка не была замужем и не жила регулярной половой жизнью, бесплодие у третьей пациентки (возраст 42 года) связывали с наличием множественных миоматозных узлов матки.

У 12 из 18 пациенток с острым гнойным сальпингитом (66,7%) развитие заболевания происходило на фоне ВМС (внутриматочное средство) в полости матки. При этом длительность экспозиции ВМС в полости матки у этих женщин варьировала: у 4 пациенток срок её использования был в пределах 5 лет, у 8 пациенток — 6-15 лет. Хронический сальпингоофорит в анамнезе был выявлен у 5 пациенток (27,8%), из которых 4 пациентки не использовали в качестве метода контрацепции ВМС. При анализе количеств маточных беременностей у одной женщины было установлено, что в группе с острым гнойным сальпингитом 3 маточные беременности и более имели 13 женщин из 18 (72,2%).

При анализе количеств маточных беременностей у одной женщины в кон-

трольной группе было установлено, что 3 маточные беременности и более имели 21 женщины из 30 (70%), тогда как в группе с хроническим сальпингитом — только 5 женщин из 17 (29,4%), Таким образом сравнительный анализ репродуктивной функции женщин контрольной группы и группы с хроническим сальпингитом показал, что при равных условиях включения пациенток в ту или иную группу исследования (единственный критерий выбора — наличие или отсутствие воспалительных изменений в маточной трубе) для женщин с хроническим сальпингитом характерна более низкая фертильность (см. Рис. 5).

Таким образом, изменения в репродуктивной функции женщин с хроническим сальпингитом, выявленные на основании акушерско-гинекологического анамнеза, и изменения функциональной активности пуринорецепторов, установленные фармакологическим методом исследования, вероятно, указывают на наличие патогенетической связи между нарушенной фертильностью женщины и функциональным состоянием Р1 и Р2 рецепторов в маточных трубах.

Иммунофлюоресцентное исследование выявило наличие нескольких подтипов Р2 рецепторов в ткани маточной трубы человека. Анализ результатов, полученных при иммунофлюоресцентном исследовании показал наличие Р2Х2 и P2Y2 рецепторов в гладкомышечных клетках всех изученных нами образцов ткани маточной трубы. В маточных трубах без воспалительных изменений было выявлено наличие в гладкомышечных клетках также Р2Х3, P2Y1 рецепторов и слабое иммунофлюорес-центное окрашивание к Р2Х1 и Р2Х4 рецепторам. В маточных трубах с признаками А Б В

Рис. 5. Долевое соотношение женщин, в акушерско-гинекологическом анамнезе которых выявлены 3 и более маточные беременности (белым цветом). 2 маточные беременности (заштрихованная область), 1 маточная беременность (серым цвеюч), 0 беременностей (чёрным цветом). А - контрольная группа женщин, Б - группа женщин с хроническим сапьпинги-юм, В - группа женщин с острым гнойным сальпингитом.

хронического воспаления было показано присутствие в гладкомышечных клетках так зР2Хз и Р2У| торов. В маточных трубах с острым гнойным сальпингитом кроме Р2Х; и Р2Уг рецепторов мы выявили наличие в гладкомышечных клетках маточной трубы Р2Х), Р2У| И Р2Уд рецепторов.

Таким образом, проведённое нами иммунофлюоресцентное исследование подтверждает присутствие различных подтипов Р2 рецепторов в маточных трубах как контрольной группы, так и группы с хроническим и острым сальпингитом. Выявление Р2 рецепторов в гладкомышечных клетках маточных труб, вероятно, указывает на их участие в регуляции сократительной активности этого органа.

Сравнение результатов фармакологического и иммунофлюоресцентного методов исследования показало, что в маточных трубах человека имеются функционально активные подтипы Р2 рецепторов. С большой вероятностью можно утверждать, что эффекты использованных нами в этом исследовании экзогенных агони-стов Р2 рецепторов в маточных трубах с острым гнойным сальпингитом опосредуются Р2Х2 и Р2У1 подтипами, а также гетеромультимерными рецепторами, чувствительными к а,Д-метилен-АТФ. Можно предположить, что в маточных трубах без воспаления и с хроническим воспалением у женщин до 46 лет отмечается относительно более высокая активность рецепторов, а у женщин старше 46 лет - Р2Х,» и Р2Хб рецепторов. Однако, это предположение следует уточнить дополнительными исследованиями.

В заключении, результаты данного исследования показывают, что в сократительной активности маточных труб принимают участие Р1 и Р2 рецепторы. Изменение активности Р1 и Р2 рецепторов маточных труб, возможно, отражает как физиологические изменения (в данном случае — процессы старения), происходящие в организме, так и указывает на вероятную возрастающую роль этих рецепторов при воспалении.

выводы

1. В маточных трубах человека имеются Р2 рецепторы, участвующие в регуляции сократительной активности этого органа, - стимуляция этих рецепторов экзогенными агонистами (АТФ, АДФ, 2-метилтио-АТФ и а,)3-метилен-АТФ) приводит к усилению спонтанных сокращений маточных труб. В гладкомышечных клетках маточных труб иммунофлюоресцентным методом выявляются несколько подтипов Р2Х и Р2У рецепторов, которые могут опосредовать влияние агонистов Р2 рецепторов.

2. При наличии острого гнойного воспаления маточных труб стимулирующее влияние АТФ, а,/3-метилен-АТФ и аденозина на сократительную активность этого органа повышается, а эффект 2-метилтио-АТФ - уменьшается по сравнению с соответствующей контрольной группой. При хроническом сальпингите влияние АТФ, АДФ, УТФ и а,/3-метилен-АТФ на спонтанную сократительную активность маточных труб существенно не изменяется, тогда как эффект аденозина -повышается, а влияние 2-метилтио-АТФ — уменьшается по сравнению с соответствующей контрольной группой женщин.

3. Как в контрольной группе, так и в группе с хроническим сальпингитом, у женщин старше 46 лет АТФ вызывает более выраженные сократительные ответы маточных труб, чем у женщин в возрасте до 46 лет. Влияние других агонистов Р2 рецепторов существенно не отличается в двух исследованных возрастных группах.

4. Антагонист Р2-рецепторов пиридоксаль-6-фосфат-2',4'-дисульфоновая кислота (РРА08) в концентрации 10-5М достоверно не угнетает эффекты ни одного из использованных агонистов Р2 рецепторов ни в одной из групп женщин. При остром гнойном сальпингите РРА08 усиливает эффекты АТФ и 2-метилтио-АТФ.

5. Нарушение репродуктивной функции женщин с хроническим сальпингитом сопровождается изменениями функциональной активности пуринорецепто-ров и нарушением моторики маточных труб.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Для восстановления или сохранения репродуктивной функции женщин, в том числе на этапе реабилитации после острого и хронического сальпингитов, перспективным направлением выступает поиск лекарственных средств с пурино-рецептор-опосредованным механизмом действия.

2. Новые сведения о пуринорецептор-опосредованных нарушениях сократительной активности маточных труб, выявленные данным исследованием, можно использовать в лекционном курсе на кафедре акушерства и гинекологии при преподавании студентам таких тем как «Бесплодный брак», «Острый живот в гинекологии» в аспекте внематочной беременности, «Неспецифические воспалительные заболевания женских половых органов».

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ РАБОТ

1. Зефирова Ю.Т. Изучение Р2 рецептор-опосредуемых ответов в различных тканях человека и животных / Ю.Т. Зефирова, З.Р. Вафина, А.П. Зайцев, А.В. Рыч-ков, Ж.Ю. Фалу, Д.Ф. Хазиахметов, А.У. Зиганшин // Современные методы исследования в медицине и фармации. Научно-практическая конференция, посвященная 40-летию ЦНИЛ КГМУ: Тез. докл. - Казань, 2002. - С. 19-20.

2. Зиганшин А.У. Анализ роли Р2 рецептор-опосредуемых ответов в различных тканях человека и животных / А.У. Зиганшин, З.Р. Вафина, А.П. Зайцев, Ю.Т. Зефирова., БА Зиганшин., А.В. Рычков, Ж.Ю. Фалу, Д.Ф. Хазиахметов // Фундаментальные проблемы фармакологии. II съезд Российского научного общества фармакологов: Тез. докл. - Москва, 2003. - С. 199.

3. Вафина З.Р. Роль пуринорецепторов в сократительной активности маточных труб / З.Р. Вафина // VIII научно-практическая конференция молодых учёных КГМУ: Тез. докл. - Казань: КГМУ, 2003. - С. 14.

4. Ziganshin A.U. Changes of expression of P2 receptor subtypes in human uterus during pregnancy / A.U. Ziganshin, J.T. Zefirova, A. P. Zaitsev, Z.R. Vafina, B.A Ziganshin, G. Burnstock // Autonomic Neuroscience: Basic and Clinical. - 2003. - Vol. 106, №1. - P. 24.

5. Вафина З.Р. Влияние АТФ и аденозина на сократительную активность маточных труб человека / З.Р. Вафина, А.У. Зиганшин А.У., И.Ф. Фаткуллин, А.А. Рызва-нов // Акушерство и гинекология. - 2004. - № 1. - С. 44-47.

6. Вафина З.Р. Сократительная активность маточных труб и некоторые аспекты её регуляции / З.Р. Вафина, А.У. Зиганшин А.У., И.Ф. Фаткуллин // Казанский медицинский журнал. - 2004. - Т. 85, №2. - С. 138-141.

7. Зиганшин А.У. Фармакологическая характеристика Р2 рецепторов в маточных трубах человека / А.У. Зиганшин, З.Р. Вафина, И.Ф. Фаткуллин // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2004. - № 3. - С. 273-276.

8. Вафина З.Р. Сравнительная характеристика влияния некоторых агонистов Р2 рецепторов на сократительную активность маточных труб без воспаления и при наличии острого сальпингита / З.Р. Вафина, А. У. Зиганшин, И.Ф. Фаткуллин //

IX научно-практическая конференция молодых учёных КГМУ: Тез. докл. - Казань: КГМУ, 2004. - с. 119-120. 9. Вафина З.Р. Изменение активности Р2 рецепторов при остром гнойном сальпингите / З.Р. Вафина., А.У. Зиганшин, С.Ф Гараева, З.Г. Шакирова., Э.Я. Киселёва, P.P. Абуталипова // Фундаментальные проблемы фармакологии. XI Российский национальный конгресс «Человек и лекарство»: Тез. докл. - М, 2004. - С. 428.

»-8682

Подписано в печать 22 04 2004 Ризография Бумага офсетная 60>84 16 Объем 1 0 усл печ л Тираж 100 экз Заказ № 45 4 0012 г Казань Бутлерова 49 типография КГМУ

Оглавление диссертации Вафина, Зухра Рамилевна :: 2004 :: Казань

1. Введение.стр.

2. Обзор литературы.

2.1 Сократительная активность маточных труб и её регуляция.

2.2. Общая характеристика пуринорецепторов.

2.3. Характеристика Р2 рецепторов.

2.4. Изучение пуринорецепторов в репродуктивной системе.

2.5. Роль пуринорецепторов при воспалении.

2.6. Клиническое применение агонистов и антагонистов пуринорецепторов.

3. Материал и методы исследования.

3.1. Объекты исследования.

3.2. Фармакологические эксперименты на изолированных препаратах маточных труб.

3.3. Использованные фармакологические агенты.

3.4. Анализ результатов.

3.5. Иммунофлюоресцентный метод исследования.

4. Результаты собственных исследований.

4.1. Предварительные эксперименты и общая характеристика сократительной активности маточных труб, наблюдаемая в процессе фармакологического эксперимента.

4.2. Влияние агонистов пуринорецепторов на сократительную активность маточных труб без воспалительных изменений.

4.2.1 Возраст женщин до 46 лет.

4.2.2 Возраст женщин старше 46 лет.

4.3. Влияние агонистов пуринорецепторов на сократительную активность маточных труб с хроническим сальпингитом.

4.3.1. Возраст женщин до 46 лет.

4.3.2. Возраст женщин старше 46 лет.

4.4. Влияние агонистов пуринорецепторов на сократительную активность маточных труб с острым гнойным сальпингитом.

4.5. Сравнительный анализ сократительных ответов маточных труб под действием различных агонистов пуринорецепторов в исследуемых группах

4.6. Результаты иммунофлюоресцентного метода исследования

4.7. Акушерско-гинекологический анамнез женщин различных исследуемых групп

4.8. Сравнительный анализ результатов фармакологического метода исследования и состояния репродуктивной функции женщин с хроническим сальпингитом.

5. Обсуждение результатов.

6. Выводы.!.*.

Введение диссертации по теме "Фармакология, клиническая фармакология", Вафина, Зухра Рамилевна, автореферат

Известно, что воспалительные процессы в области маточных труб могут изменять анатомо-гистологическое строение этого органа, повреждать его рецепторный аппарат и как результат приводить к нарушению сократительной функции. В результате нарушения сократительной функции маточных труб у женщин, живущих половой жизнью, могут возникнуть трубная беременность или бесплодие трубного генеза (Стрижаков и др., 1998). Несмотря на большое количество исследований, посвященных изучению веществ, участвующих в регуляции сократительной активности маточных труб (Jankovic and Protic, 1995; Lindblom and Andersson, 1985; Nozaki and Ito, 1986; Gauwerky et al., 1989; Helm et al., 1995; Samuelson and Dalsgaard, 1985a; Forman, 1985; Noe, 1999; Downing, 1999; Samuelson et al., 1985b; Laszlo, 1990; Ekerhord, 1999; Jankovic, 1998 и др.), до сих пор не существует патогенетических методов коррекции нарушений сократительной активности данного органа, и проблема предупреждения повторной внематочной беременности и лечения трубного бесплодия функционального генеза продолжает оставаться актуальной.

Изучение Р1 и Р2 рецепторов, основными эндогенными агонистами которых выступают соответственно аденозин и аденозинтрифосфорная кислота (АТФ), ведётся с середины XX века. В литературе существует довольно много сведений относительно участия Р1 и Р2 рецепторов в регуляции функциональной активности органов желудочно-кишечного тракта (Burnstock, 2001b), сердца (Broad and Linden, 2001; Pelleg and Vassort, 2001), почек (Jackson, 2001; Inscho et al., 1991), лёгких (Biaggioni and Feoktistov, 2001). Однако роль этих рецепторов в функционировании маточных труб на сегодняшний день практически не изучена. Известно, что АТФ принимает участие в регуляции секреции жидкости внутри просвета маточных труб человека (Downing et al., 1997), а аденозин влияет на их сократительную активность (Samuelson et al., 1985b). Отсутствуют сведения о роли Р2 рецепторов в сократительной активности маточных труб без признаков воспаления, а также в условиях острого и хронического сальпингитов. Поскольку в ранее проведенных исследованиях было установлено участие Р2 рецепторов как в воспалении (Cronstein et al., 1995; Cronstein et al., 1996; Di Virgilio, 1990), так и в сократительной активности многих гладкомышечных органов (Palea et al., 1993; Vassort, 2001; von Kugelgen, 1995; Зиганшин и др., 2002), представляло интерес исследование наличия и функциональной активности Р2-рецепторов в маточных трубах, в том числе при воспалении. Патогенетическая связь между воспалительным процессом и нарушениями сократительной активности маточных труб подчёркивает актуальность работы, направленной на выявление и изучение механизмов нарушения сократительной активности этого органа.

ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ

Изучение наличия и функциональной активности Р2 рецепторов в маточных трубах человека, в том числе при воспалительных изменениях в них.

ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ

1. Фармакологическим методом оценить наличие и функциональную роль Р2 рецепторов в маточных трубах человека.

2. Провести сравнительный анализ эффективности различных агонистов Р2 рецепторов и аденозина по влиянию на сократительную активность маточных труб, в том числе на фоне действия антагониста Р2 рецепторов пиридоксальфосфат-6-азофенил-2',4'-дисульфоновой кислоты.

5. Оценить влияние возраста женщин на функциональную активность пуринорецепторов маточных труб.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА

Впервые проведено изучение влияния различных агонистов Р2 рецепторов на сократительную активность маточных труб человека без признаков воспаления. Впервые установлены изменения в функционировании Р2 рецепторов в маточных трубах при наличии острого и хронического воспаления. Выявлено влияние возраста женщины на сократительные ответы маточных труб под действием АТФ и аденозина. Впервые определены подтипы Р2 рецепторов в маточных трубах человека с помощью иммунофлюоресцентного метода исследования.

НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ

Результаты данной исследовательской работы выявляют неизвестный ранее механизм развития нарушений сократительной активности маточных труб, реализуемый через пуринорецепторы. Изучение влияния различных агонистов Р2 рецепторов на сократительную активность маточных труб позволило составить ряд активности агонистов, влияющих в наибольшей и в наименьшей силе на сократительные ответы маточных труб как без признаков воспаления, так и с признаками воспаления и, таким образом, сделать предположение о функционировании определённых подтипов Р2 рецепторов. В группе больных с хроническим сальпингитом выявлены отличия в сократительных ответах маточных труб на аденозин и 2-метилтио-АТФ, тогда как в группе с острым сальпингитом — на АТФ, 2-метилтио-АТФ, а,/3-метилен-АТФ и аденозин. Данный факт указывает на вовлечение в механизм нарушения сократительной функции маточных труб с хроническим и острым воспалением, как Р1 рецепторов, так и Р2 рецепторов. Научно-практическая значимость работы состоит в том, что её результаты обосновывают целесообразность ведения поиска потенциальных лекарственных средств для коррекции нарушений сократительной функции маточных труб как среди агонистов и антагонистов Р1, так и Р2 рецепторов. Изменение сократительных ответов маточных труб с признаками воспаления под действием агонистов пуринорецепторов, возможно, отражает патогенез развития острого и хронического сальпингитов. В связи с этим, мы предполагаем, что полученные результаты могут быть использованы также в разработке новых лекарственных препаратов с пуринорецептор-опосредуемым механизмом действия для лечения острого и хронического сальпингитов.

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ

2. При остром гнойном сальпингите пуринорецептор-опосредуемые изменения сократительных ответов маточных труб изменяются неоднозначно: эффективность некоторых агонистов повышается (АТФ, оф-метилен-АТФ и аденозина), а других снижается (2-метилтио-АТФ).

2. Обзор литературы

Маточные трубы — орган репродукции, основной функцией которого является транспорт сперматозоидов и яйцеклетки в ампулярный отдел маточной трубы, а затем оплодотворённой яйцеклетки в полость матки. Нормальная сократительная активность маточных труб обеспечивается, в первую очередь, благодаря координированным сокращениям мышечного слоя маточной трубы и реснитчатого эпителия эндосальпинкса.

Для маточных труб характерно наличие постоянной спонтанной сократительной активности, наблюдаемой даже in vitro при отсутствии воздействия какого-либо стимулирующего фактора (Samuelson et al., 1986).

Спонтанная сократительная активность маточных труб прогрессивно нарастает в течение фолликулярной фазы,' достигая максимума в период овуляции. При этом было установлено, что во время овуляторной фазы циркулярный мышечный слой имеет большую частоту сокращений, чем продольный (Helm et al., 1982), а в истмическом внутреннем продольном, истмическом циркулярном, ампулярном циркулярном мышечных слоях маточной трубы частота спонтанных сокращений значительно выше в пролиферативную фазу менструального цикла, чем в секреторную (Samuelson et al, 1986).

Кроме того, в литературе описаны отличия в спонтанной сократительной активности различных мышечных слоев маточной трубы. Было установлено, что в истмическом внутреннем продольном мышечном слое частота спонтанных сокращений выше, чем в истмическом циркулярном (Samuelson et al., 1985а; Samuelson et al., 1986), а в ампулярно-истмическом отделе спонтанные сокращения лучше выражены во внутреннем циркулярном слое, чем в наружном продольном (Forman et al., 1983).

Сокращения маточных труб могут варьировать по амплитуде, частоте и базальному тонусу (Samuelson et al., 1985а; Laszlo et al., 1990). Действие одно и того же стимулирующего агента может вызвать различные сократительные ответы этого органа в зависимости от изучаемого отдела маточной трубы. Было показано, что аденозин вызывает сократительные ответы в ампулярном отделе маточной трубы в секреторную и пролиферативную фазы одинаково, тогда как в истмическом отделе — преимущественно в пролиферативную фазу менструального цикла (Samuelson et al., 1985b; Laszlo et al., 1990).

Сократительная активность маточных труб имеет сложную нейро-гуморальную регуляцию, в которой принимают участие не только катехоламины, ацетилхолин, простагландины, гормоны (эстрогены, прогестерон, окситоцин и др.), но также нейропептиды (нейропептид Y, вещество Р, нейротензин и др.), связывающий половые гормоны белок, у-аминомасляная кислота, относящийся к кальцитониновому гену пептид, гистамин, фактор активации тромбоцитов, оксид азота и др.

Ацетилхолин и окситоцин стимулируют сократительную активность маточных труб человека, тогда как катехоламины могут, как стимулировать, так и ингибировать сократительную активность маточных труб человека в зависимости от типа рецептора, на который они действуют (Jankovic and Protic, 1995).

Было выявлено, что ПГ-Е2 уменьшает частоту медленных волн сокращений маточных труб (изучали циркулярные гладкомышечные препараты маточных труб), a nT-F2a, наоборот, увеличивает частоту медленных волн сокращений (Nozaki and Ito, 1986). Другими исследователями было установлено, что после ингибирования сократительной активности маточных труб ингибиторами циклооксигеназы ПГ-Е2 восстанавливает сократительную активность продольного мышечного слоя маточных труб, не влияя при этом на циркулярный (Lindblom and Andersson, 1985).

Нейропептид Y сам по себе не изменяет параметров сократительной активности маточных труб (базальный тонус, амплитуда и частота сокращений), но подавляет ацетилхолин-индуцированные сокращения, угнетает высвобождение норадреналина из мышечного препарата (истмический отдел маточной трубы) во время электростимуляции, т.е. играет роль нейромодулятора (Gauwerky et al., 1989; Helm et al., 1982; Samuelson and Dalsgaard, 1985a).

Вещество P влияет в концентрационной зависимости на различные параметры спонтанной сократительной активности маточных труб (амплитуда, частота, базальный тонус), оказывая стимулирующее воздействие (Gauwerky et al., 1989). В циркулярных мышечных препаратах вещество Р вызывает комбинированные фазные и тонические ответы, а в продольных мышечных препаратах— главным образом, тонические сокращения. Как в продольных, так и циркулярных мышечных препаратах сокращения, вызванные веществом Р, быстро исчезают в бескальциевой среде (Forman, 1985).

Нейротензин в экспериментальных условиях стимулирует сократительную активность маточных труб, что проявляется в виде увеличения базального тонуса, амплитуды и частоты сокращений (Gauwerky et al., 1989; Reinecke, 1987).

Вазоактивный интестинальный пептид вызывает уменьшение спонтанных сокращений истмического отдела маточных труб и сокращений истмико-ампулярного отдела маточной трубы, индуцированных веществом Р, простагландином F2a и К+-деполяризацией (Forman, 1985).

Связывающий половые гормоны белок (sex hormone binding globulin) —-белок, связывающий в крови половые гормоны и таким образом участвующий в регуляции их эффектов на ткани-мишени, так как в связанном состоянии половые гормоны теряют свою активность. Двойное иммуногистохимическое окрашивание выявило совместную локализацию связывающего половые гормоны белка и эстрогеновых рецепторов в эпителиальных клетках ампулярного отдела и мышечных клетках истмического отдела маточной трубы, что может указывать на существование местной регуляции сократительной активности маточных труб, осуществляемой через этот белок (Noe, 1999). у-Аминомасляная кислота вызывает увеличение частоты сокращений и уменьшение их амплитуды, как в циркулярных, так и продольных мышечных препаратах ампулярного отдела маточной трубы. В продольных мышечных препаратах подобный эффект у-аминомасляной кислоты не зависит от фазы менструального цикла, тогда как в циркулярных мышечных препаратах его выявляют только в фолликулярную фазу менструального цикла и в маточных трубах женщин постменопаузального периода (Laszlo, 1990).

Относящийся к кальцитониновому гену пептид обратимо ингибирует спонтанные сокращения и сокращения маточных труб, индуцированные веществом Р (Samuelson and Dalsgaard, 1985а).

Гистамин увеличивает частоту сокращений продольных и циркулярных мышечных препаратов маточных труб в концентрационной зависимости (Downing, 1999). Он вызывает тонические сокращения изолированных мышечных препаратов как ампулярного, так и истмического отделов маточной трубы. Чувствительность ампулярного отдела к гистамину незначительно выше, чем истмического. Эффекты гистамина на ампулярный и истмический отдел этого органа не зависят от фазы менструального цикла. Результаты исследования показали, что все 3 типа гистаминовых рецепторов (HI, Н2, НЗ) вовлечены в эффекты гистамина в ампулярном отделе маточных труб, но только HI-рецепторы ответственны за влияние гистамина на истмический отдел маточной трубы. Интересен факт отсутствия чувствительности ампулярного сегмента маточной трубы постменопаузальных женщин к гистамину (Jankovic, 1998).

Фактор активации тромбоцитов в экспериментальных условиях способен изменять СГ-индуцированные сокращения маточных труб и таким образом участвовать в транспорте оплодотворённой яйцеклетки (Downing, 1999).

Оксид азота (NO) вызывает уменьшение частоты, амплитуды и базального тонуса спонтанных сокращений маточных труб (изучали истмический отдел) в концентрационной зависимости. Результаты проведённого авторами исследования указывают на наличие в маточных трубах эндогенной NO-системы, играющей важную роль в регуляции сократительной активности этого органа (Ekerhovd, 1999).

Заключение диссертационного исследования на тему "Пуринорецептор-опосредованная регуляция сократительной активности маточных труб при воспалении"

6. Выводы

1. В маточных трубах человека имеются Р2-рецепторы, участвующие в регуляции сократительной активности этого органа, - стимуляция этих рецепторов экзогенными агонистами (АТФ, АДФ, 2-метилтио-АТФ и а,(3-метилен-АТФ) приводит к усилению спонтанных сокращений маточных труб. В гладкомышечных клетках маточных труб иммунофлюоресцентным методом выявляются несколько подтипов Р2Х и Р2У рецепторов, которые могут опосредовать влияние агонистов Р2-рецепторов.

2. При наличии острого гнойного воспаления маточных труб стимулирующее влияние АТФ, а;/3-метилен-АТФ и аденозина на сократительную активность этого органа повышается, а эффект 2-метилтио-АТФ - уменьшается по сравнению с соответствующей контрольной группой. При хроническом сальпингите влияние АТФ, АДФ, УТФ и ог,/?-метилен-АТФ на спонтанную сократительную активность маточных труб существенно не изменяется, тогда как эффект аденозина - повышается, а влияние 2-метилтио-АТФ - уменьшается по сравнению с соответствующей контрольной группой женщин.

4. Антагонист Р2-рецепторов пиридоксаль-6-фосфат-2',4'-дисульфоновая кислота (РРАОБ) в концентрации достоверно не угнетает эффекты ни одного из использованных агонистов Р2 рецепторов ни в одной из групп женщин. При остром сальпингите РРАББ усиливает эффекты АТФ и 2-метилтио-АТФ.

5. Нарушение репродуктивной функции женщин с хроническим сальпингитом сопровождается изменениями функциональной активности пуринорецепторов и нарушением моторики маточных труб.

7. Практические рекомендации

1. Для восстановления или сохранения репродуктивной функции женщин, в том числе на этапе реабилитации после острого и хронического сальпингитов, перспективным направлением выступает поиск лекарственных средств с пуринорецептор-опосредованным механизмом действия.

2. Новые сведения о пуринорецепторных нарушениях сократительной активности маточных труб, выявленные в данном исследовании, можно использовать в лекционном курсе на кафедре акушерства и гинекологии при преподавании студентам таких тем как «Неспецифические воспалительные заболевания женских половых органов», «Бесплодный брак», «Острый живот в гинекологии» в аспекте внематочной беременности.

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2004 года, Вафина, Зухра Рамилевна

1. Зиганшин А.У. Фармакологическая характеристика Р2 рецепторов в матке человека / А.У. Зиганшин, А.П. Зайцев, А.Ф. Шамсутдинов // Бюлл. экспер. биол. мед. 2002. - Т. 133, №3. - С. 298-300.

2. Зиганшин А.У. Участие простагландинов и оксида азота в АТФ-индуцируемых сокращениях матки у беременной / А.У. Зиганшин, Ю.Т. Зефирова, А.П. Зайцев // Казанский медицинский журнал. 2003. — Т. 84, № 4. - С. 295-298.

3. Стрижаков А.Н. Внематочная беременность / А.Н. Стрижаков, А.И. Давыдов, М.Н. Шахламова, Л.Д. Белоцерковцева М.: Медицина, 1998.-215 с.

4. Abbrachio M.P. Purinoceptors: are there families of P2X and P2Y purinoceptors? / M.P. Abbrachio, G. Burnstock // Pharmacol. Ther. 1994. -у. 64.-P. 445-475.

5. Agteresch H.J. Randomized clinical trial of adenosine-5'-triphosphate in patients with advanced non-small-lung cancer / H.J. Agteresch, P.C. Dagnelie, van der Gaast, T. Stijnen, J.H. Wilson // J. Natl. Cancer Inst. 2000. - V. 92, №4.-P. 321-328.

6. Asemu G. Adaptation to high altitude hypoxia protects the rat heart againstischemia-induced arrhythmias. Involvement of mitochondrial K(ATP) channel / G. Asemu, F. Papousek, B. Ostadal, F. Kolar // J. Mol. Cell. Cardiol. 1999. -V. 31.-P. 1821-1831.

7. Bardini M. Distribution of P2X receptor subtypes in the rat female reproductive tract at late pro-oestrus/early oestrus / M. Bardini, H.Y. Lee, G. Burnstock // Cell Tissue Res. 2000. - V. 105. - P. 105-113.

8. Barricordi O.R. An ATP-activated channel is involved in mitogenic stimulation of human T lymphocytes / O.R. Barricordi, D. Ferrari, L. Melchiorri, P. Chiozzi, S. Hanau, E. Chiari, M. Rubini, F. Di Virgiolio // Blood. 1996. - V. 87. - P. 682-690.

9. Biaggioni I. PI Receptors in the Respiratory System / I. Biaggioni, I. Feoktistov // Handbook of Experimental Pharmacology, V. 151 (II). Purinergic and Pyrimidinergic Signaling: Eds. M.P. Abbracchio, M. Williams. Berlin: Springer, 2001. - P. 240-279.

10. Bo X. A P2S purinoceptor cDNA conferring a novel pharmacological profile / X. Bo, Y. Zhang, M. Nassar, G. Burnstock, R. Schoepfer // FEBS Lett. 1995. -V.375.-P. 129-133.

11. Boarder M.R. P2Y receptors: Structure and Function / M.R. Boarder, T.E. Webb // Handbook of Experimental Pharmacology, V. 151 (I). Purinergic and Pyrimidinergic Signaling: Eds. M.P. Abbracchio, M. Williams. Berlin: Springer, 2001.-P. 66-88.

12. Bogousslavsky J. Benefit of ADP receptor antagonists in atherothrombotic patients: new evidence / J. Bogousslavsky // Cerebrovasc. Dis. 2001. - V. 11. -P. 5-10.

13. Boyer J.L. Differential effects of P2-purinoceptor antagonists on phospholipase C and adenylat cyclase-coupled P2Y-purinoceptors / J.L. Boyer, I.E. Zohn, K.A. Jacobson // Br. J. Pharmacol. 1994. - V. 113. - P. 614-620.

14. Broad R.M. PI Receptors in the Cardiovascular System / R.M. Broad, J. Linden // Handbook of Experimental Pharmacology, V. 151 (II). Purinergic and Pyrimidinergic Signaling: Eds. M.P. Abbracchio, M. Williams. Berlin: Springer, 2001.-P. 4-32.

15. Brownhill V.R. Ontogeny of P2-purinoceptors in the longitudinal muscle and muscularis mucosae of the rat isolated duodenum / V.R. Brownhill, S.M. Hourani, I. Kitchen // Br. J. Pharmacol. 1997. - V. 122(2). - P. 225232.

16. Burnstock G. A basis of distinguishing two types of purinergic receptor / G. Burnstock, R.W. Straub, L. Bolis // Cell Membrane Receptors for Drugsand Hormones: A multidisciplinary Approach. Raven, New York. - 1978. -P. 107-118.

17. Burnstock G. A unifing purinergic hypothesis for the initiation of pain / G. Burnstock // Lancet. 1996a. - V. 347. - P. 1604-1605.

18. Burnstock G. Physiological and pathological roles of purines: An update / G. Burnstock // Drug. Dev. Res. 1993. - V. 28. - P. 195-206.

19. Burnstock G. Purine-mediated signalling in pain and visceral perception / G. Burnstock // Trends in Pharmacological Science. 2001a. - V. 22. - P. 182188.

20. Burnstock G. Purinergic nerves / G. Burnstock // Pharm. Rev. — 1972. -V. 24.-P. 509-581.

21. Burnstock G. Purinergic Signalling in Gut / G. Burnstock // Handbook of Experimental Pharmacology, V. 151 (I). Purinergic and Pyrimidinergic Signaling: Eds. M.P. Abbracchio, M.Williams. Berlin: Springer, 2001b. -P. 141-238.

22. Burnstock G. Purinoceptors: Ontogeny and Phylogeny / G. Burnstock // Drug. Dev. Res. 1996b. - V. 39. - P. 204-242.

23. Burnstock G. P2X receptors in sensory neurones / G. Burnstock // Br. J. Anaesth. 2000. - V. 84. - P.476-488.

24. Burnstock G. Is there a basis for distinguishing two types of P2-purinoceptors? / G. Burnstock, C. Kennedy // Gen. Pharmacol. 1985. - V. 16. - P. 433-440.

25. Bynum J.W. Differential adenosine sensitivity in fibroblasts from different age donors / J.W. Bynum // Exp. Geront. 1980. - V. 15. - P. 217-225.

26. Chessel LP. A. P2X receptors / LP. Chessel, A.D. Michel, P.P. Humphrey // Handbook of Experimental Pharmacology, V. 151 (I). Purinergic and Pyrimidinergic Signaling: Eds. M.P. Abbracchio, M. Williams. Berlin: Springer, 2001.-P. 47-63.

27. Clemow D.B. Development of 5'-nucleotidase staining in the olfactory bulbs of normal and naris-occluded rats / D.B Clemow, P.C. Brunjes // Int. J. Dev. Neurosci. 1996. -V. 14. - P. 901-911.

28. Communi O. Receptors responsive to extracellular pyrimidine nucleotides / O. Communi, J.M. Boeynaems // Trends Pharm. Sci. 1997. - V. 18. - P. 8386.

29. Connant A.R. Characterizaton of the P2 receptors on the human umbilical vein endothelial cell line ECV304 / A.R. Connant, M.J. Fisher, A.G. McLennan, A.W.M. Simpson // Br. J. Pharmacol. 1998. - V. 125. - P. 357-364.

30. Crankshaw D.J. Pharmacological techniques for the in vitro study of the uterus / D.J. Crankshaw // J. Pharm. Toxicol. Methods. 2001. - V. 45. - P. 123-140.

31. Cronstein B.N. Purinergic mechanisms in inflammation / B.N. Cronstein, G.B. Maarten, B.F. Becker // Drug Develop. Res. 1996. - V. 39. - P. 426435.

32. Cronstein B.N. The anti-inflammatory effects of an adenosine kinase inhibitor are mediated by adenosine / B.N. Cronstein, D. Naime, G. Firestein // Arthritis Rheum. 1995. - V. 38. - P. 1040-1045.

33. Cronstein B.N. Adenosine: an endogenous inhibitor of neutrophil-mediated injury to endothelial cells / B.N. Cronstein, R.I. Levin, Belanoff J., G. Weissman, R. Hirschhorn // J. Clin. Invest. 1983. - V. 78. - P. 760-770.

34. Cronstein B.N. Nonsteroidal anti-inflammatory agents inhibit stimulated neutrophil adhesion to endothelium: adenosine dependent and independentmechanisms / B.N. Cronstein, Van de Stouwe M., L. Druska, R.I. Levin,

35. G. Weissmann // Inflam. 1994. - V. 18. - P. 323-355.

36. Dickens CJ. Human Fallopian tubal epithelial cells in vitro: establishment of polarity and potential role of intracellular ATP in fluid secretion / C.J. Dickens, M.T. Comer, J. Southgate, H.J. Leese // Human Reprod. 1996. - V. 11(1). -P. 212-217.

37. Di Virgilio F. Extracellular ATP as a possible mediator of cell-mediated cytotoxicity / Di Virgilio F., P. Pizzo, P. Zanovello, V. Bronte, D. Collavo // Immunol. Today. 1990. - V.l 1.- P.274-277.

38. Downing S.J. Effect of inflammatory mediators on the electrophysiology of the human oviduct / S.J. Downing, E.L. Chambers, S.D. Maguiness, A. Watson,

39. H.J. Leese // Biol. Reprod. 1999. - V. 61(3). - P. 657-664.

40. Downing S.J. Electrophysiological basis of human fallopian tubal fluid formation / S J. Downing, S.D. Maguiness, A. Watson, H.J. Leese // J. Reprod. Fertil. 1997. - V. 111(1). - P. 29-34.

41. Drury A.N. The physiological activity of adenine compounds with special reference to their effects upon the mammalian heart / A.N. Drury, A. Szent-Gyorgi // J. Physiol. 1929. - V. 68. - P. 213-237.

42. Dubyak G.R. Role of P2 Receptors in the Immune System / G.R. Dubyak // Handbook of Experimental Pharmacology, V. 151 (II). Purinergic and Pyrimidinergic Signaling: Eds. M.P. Abbracchio, M. Williams. Berlin: Springer, 2001. - P. 323-354.

43. Dubyak G.R. Signal transduction via P2-purinergic receptors for extracellular

44. ATP and other nucleotides / G.R. Dubyak, C. El-Moatassim // Am. J. Physiol. 1995. - V. 265. - P. 577-606.

45. Firestein G.S. Anti-inflammatory effects of adenosine kinase inhibitors in acute and chronic inflammation / G.S. Firestein // Drug. Dev. Res. 1996. -V. 39.-371-376.

46. Firestein G.S. Adenosine regulating agents: a novel approach to acute inflammation and inflammatory arthritis / G.S. Firestein, D. Bullough, M. Erion, B. Upgarkar // Clin. Res. 1993. - V. 41. - P. 41-170.

47. Foresta C. Extracellular ATP is a trigger for the acrosome eaction in human spermatozoa / C. Foresta, M. Rossato, F. Di Virgilio // J. Biol. Chem. 1992. -V. 267.-P. 19443-19447.

48. Foresta C. Role of P2 purinergic receptors in rat Leydig cell steroidogenesis /

49. C. Foresta, M. Rossato, A. Nogara, F. Gottardello, P. Bordon, F. Di Virgilio // Biochem. J.- 1996. V. 320. - P. 499-504.

50. Forman A. Concentrations and contractile effects of substance P in the human ampullary-isthmic junction / A. Forman, K.E. Andersson, S. Maigaard, U. Ulmsten // Acta. Physiol. Scand. 1985. - V. 124(1). - P. 17-23.

51. Forman A. Effects of calcium and nifedipine on noradrenaline- and PGF-2 alpha-induced activity of the ampullary-isthmic junction of the human oviduct in vitro / A. Forman, K.E. Andersson, U. Ulmsten // J. Reprod. Fértil. -1983.-V. 67(2).-P. 343-349.

52. Franceschi C. Purines and cell dearth / C. Franceschi, M.P. Abbracchio,

53. D. Barbier, S. Ceruti, D. Ferrar // Drug. Dev. Res. 1996. - V. 39. - P. 442449.

54. Gauwerky J.F. Regulatory peptides of the uterine tube in the human / J.F. Gauwerky, M. Reinecke, K. Schneider // Arch. Gynecol. Obstet. 1989. -V. 245(1-4).-P. 401-404.

55. Gillman T.A. Evidence for the presence of both PI and P2 purinoceptors in the rat myometrium / T.A. Gillman, J.N. Pennefather // Clin, and Experiment. Pharm. And Physiol. 1998. - V. 25. - P. 592-599.

56. Glass R. Expression of nucleotide P2X receptor subtypes duringspermatogenesis in the adult rat testis / R. Glass, M. Bardini, T. Robson, G. Burnstock // Cells tissues organs. 2001. - V. 169. - P. 377-387.

57. Hansen M.A. P2X (purinergic) receptor distribution in rat blood vessels / M.A. Hansen, J.R. Dutton, V.J. Balcar, J.A. Barden, M.R. Bennett // J. Auton. Nerv. Syst. 1999. - V. 75. - P. 147-155.

58. Haynes J.M. Ai and A2-purinoceptros in the guinea-pig uterus / J.M. Haynes, J.N. Pennefather // Clin, and Experiment. Pharm. And Physiol. 1993. - V. 20 -P. 609-617.

59. Heather A. The effects of P2Y receptor agonists and adenosine on prostaglandin production by the guinea-pig uterus / A. Heather, N.L. Poyser, M. Hollingsworth // Br. J. Pharm. 2001. V. 132.- P. 709-721.

60. Helm G. Neurohumoral regulation of Fallopian tube motility / G. Helm, C. Owman, N.O. Sjoberg, B. Walles // Med. Pregl. 1995. - V. 48(11-12). -P. 395-398.

61. Holton P. The liberation of adenosine triphosphate on antidromic stimulation of sensory nerves / P. Holton // J. Physiol. (Lond). 1959. - V. 145. - P. 494504.

62. Hopwood A.M. Adenosine 5'-triphosphate, adenosine an endothelium-derived relaxing factor in hypoxic vasodilation of the heart / A.M. Hopwood, J. Lincoln, K.A. Kirkpatrick, G. Burnstock // Eur. J. Pharm. 1989. - V. 165. -P. 323-326.

63. Inoue K. Implications of ATP receptors in brain functions / K. Inoue, S. Koizumi, S. Ueno // Prog. Neurobiol. 1996. - V. 50. - P. 483-492.

64. Inscho E.W. Juxtamedullary afferent arteriolar responses to PI and P2 purinergic stimulation / E.W. Inscho, P.K. Carmines, L.G. Navar // Hypertension.-1991.-V. 17.-P. 1033-1037.

65. Jackson E.K. PI and P2 Receptros in the Renal System / E.K. Jackson // Handbook of Experimental Pharmacology, V. 151 (II). Purinergic and Pyrimidinergic Signaling: Eds. M.P. Abbracchio M.P., Williams M. Berlin: Springer, 2001.-P. 34-71.

66. Jacobson K.A. Purine and pyrimidine (P2) receptors as drug targets / K.A. Jacobson, M.F. Jarvis, M. Williams // Journal of Medicinal Chemistry. -2002. V. 45. - P. 4057-4093.

67. Jankovic S.M. Different roles of histamine receptor subtypes in ampullar and isthmic segments of human fallopian tube / S.M. Jankovic, M. Varjacic, S.V. Jankovic // Indian. J. Med. Res. 1998. - V. 107. - P. 224-230.

68. Jankovic S.M. Neurohumoral regulation of Fallopian tube motility /

69. S.M. Jankovic, B.A. Protic // Med. Pregl. 1995. - V. 48(11-12). - P. 395398.78 .Jarvis B. Clopidogrel: a review of its use in the prevention of atherothrombosis / B. Jarvis, K. Simpson // Drugs. 2000. - V. 60. - P. 347-377.

70. Kamada S. Existance of P2 purinoceptros on human and porcine granulosa cells / S. Kamada, P.F. Blackmore, S. Oehninger, K. Gordon, G.D. Hodgen // J. Clin. Endocrin. Metabol. 1994. - V. 78. - P. 650-656.

71. King B.F. Effects of extracellular pH on agonism and antagonism at the recombinant P2X2 receptor / B.F. King, S.S. Wilman, L.E. Ziganshina, J. Pintor, G. Burnstock // Br. J. Pharm. 1997. - V. 121. - P. 1445-1453.

72. King B.F. Full sensitivity of P2X purinoceptor to ATP revealed by changingextracellular pH /B.F. King, L.E. Ziganshina, J. Pintor, G. Burnstock //Br. J. Pharm.-1996.-V. 117.-P. 1371-1373.

73. Kowaluk E.A. Adenosine kinase inhibitors / E.A. Kowaluk, S.S. Bhagwat, M.F. Jarvis // Curr. Pharm. Des. 1998. - V. 4(5). - P. 403-416.

74. Von Kugelgen I. Vasoconstrictor responses to the P2X-purinoceptor agonist ß,y-methylene-L-ATP in human cutaneous and renal blood vessels / I. von Kugelgen, B. Krumme, U. Schaible, P.J. Schollmeyer, L.C. Rump // Br. J.

75. Pharm. 1995. - V. 116. - P. 1932-1936.04»

76. Laasberg T. Ca mobilizing receptors of gastrulating chick embryo / T. Laasberg // Comp. Biochem. Physiol. C. Comp. Pharm. 1990. - V. 97. -P. 1-12.

77. Lammas D.A. ATP-induced killing of mycobacteria by human macrophages is mediated by purinergic P2Z (P2X7) receptors / D.A. Lammas, C. Stober,

78. C.J. Harvey, N. Kendrick, S. Pnchalingam, D.S. Kumararatne // Immunity.1997.-V. 7.-P. 433-444.

79. Laszlo A. Effects of GABA on the spontaneous muscular activity of the human fallopian tube ampullar segments in vitro / A. Laszlo, G.L. Nadasy, S.L. Erdo, E. Monos, G. Siklosi, B. Zsolnai // Acta. Physiol. Hung. 1990. - V. 76(2). -P. 123-130.

80. Le K. Primary structure and expression of a naturally truncated human P2X ATP receptor subunit from brain and immune system / K. Le, M. Paquet,

81. D. Nouel, K. Babinski, P. Seguela // FEBS Lett. 1997. - V. 418. - P. 195199.

82. Le K. Central P2X4 and P2X6 channel subunits coassemble into a novel heteromeric ATP receptor / K. Le, K. Babinski, P. Seguela // J. Neurosci.1998.-V. 18.-P. 7152-7159.

83. Leon C. The P2Y1 receptor is an ADP receptor antagonized by ATP and expressed in platelets and megakaryoblastic cells / C. Leon, B. Hechler, C. Vial, C. Leray, J.P. Cazenave, C. Gashet // FEBS Letts. 1997. - V. 403. - P. 26-30.

84. Lewis C.J. P2X receptor immunoreactivity in different arteries from the femoral, pulmonary, cerebral coronary and renal circulations / C.J. Lewis, R.J. Evans // J. Vase. Res. 2001. - V. 38. - P. 332-340.

85. Lindblom B. Influence of cyclooxygenase inhibitors and arachidonic acid on contractile activity of the human Fallopian tube / B. Lindblom, A. Andersson // Biol. Reprod. 1985. - V. 32(3). - P. 475-479.

86. Liu S.F. Evidence for two P2-purinoceptor subtypes in human small pulmonary arteries / S.F. Liu, D.G. McCormack, T.V. Evans, P.J. Barnes // Br. J. Pharm. 1989. - V. 98. - P. 1014-1020.

87. Lorenzen A. PI Receptors / A. Lorenzen, U. Schabe // Handbook of Experimental Pharmacology, V. 151 (I). Purinergic and Pyrimidinergic Signaling: Eds. M.P. Abbracchio M.P., Williams M. Berlin: Springer, 2001. -P. 29-45.

88. Macfarlane D.E. The effects of ATP on platelets: Evidence against the central role of ADP in primary aggregation / D.E. Macfarlane, D.C.B. Mills // Blood. 1975.-V46.-P. 309-320

89. Miller K.J. Cibacron blue allosterically modulates the rat P2X4 receptor / K.J. Miller, A.D. Michel, LP. Chessel, P.P.A. Humphrey // Neuropharm. -1998.-V. 37.-P. 1579-1586.

90. Mills D.C.B. ADP receptors on platelets / D.C.B. Mills // Thromb. Haemost.1996.-V. 76.-P. 835-856.

91. Montesinos M.S. Wound healing in accelerated by agonists of adenosine A2 receptors / M.S. Montesinos, P. Gadangi, M. Longaker, J. Sung, J. Levine, D. Nilsen // J. Exp. med. 1997. - V. 186. - 1615-1620.

92. Morrison M.S. ATP is a potent stimulator of the activation and formation of rodet osteoclasts / M.S. Morrison, L. Turin, B.F. King, G. Burnstock, T.R. Arnett // J. Physiol. 1998. - V. 511. - P. 495-500.

93. Naemsch L.N. P2X(4) purinoceptors mediate an ATP-activated nonselective cation current in rabbit osteoclasts / L.N. Naemsch, A.F. Weidema, S.M. Sims, T.M. Underhill, S.J.Dixon // J. Cell. Sci. 1999. - V. 112. -P.4425-4435.

94. Noe G. Sex hormone binding globulin expression and colocalization with estrogen receptor in the human Fallopian tube / G. Noe // J. Steroid. Biochem. Mol. Biol. 1999. - V. 68(3-4). - P. 111-117.

95. Nori S.l. Coexpression of mRNAs for P2X2, P2X2 and P2X4 receptors in rat vascular smooth muscle: An in situ hybridization and RT-PCR / S.l. Nori, L. Fumagalli, X. Bo, Y. Bogdanov, G. Burnstock // J. Vase. Res. -1998.-V. 35.-P. 179-185.

96. Nozaki M. Menstrual cycle and sensitivity of human fallopian tube to prostaglandins / M. Nozaki, Y. Ito // Am. J. Physiol. 1986.- V. 251(Pt 2). -P. R1126-R1136.

97. O'Connor S.E. Further subclassification of ATP receptors based on agonist studies / O'Connor S.E, I.A. Dainty, P. Leff // Trends Pharm. Sci. -1991.-V. 12.-P. 137-141.

98. Palea S. Evidence for purinergic neuro-transmission in human urinary bladder affected by interstitial cystitis / S. Palea, W. Artibani, E. Ostardo, D.G. Trist, C. Pietra // J. Urol. 1993 - V. 150. - P. 2007-2012.

99. Palmer T.M. Adenosine receptors / T.M. Palmer, G.L. Stiles // Neuropharm. 1995. - V. 34. -P.683-694.

100. Pelleg A. P2 Receptors in the Cardiovascular System / A. Pelleg, G. Vassort // Handbook of Experimental Pharmacology, V. 151 (I). Purinergic and Pyrimidinergic Signaling: Eds. M.P. Abbracchio M.P, Williams M. -Berlin: Springer, 2001. P. 74-99.

101. Petit P. Evidence for two different types of P2 receptors stimulatinginsulin secretion from pancreatic B cells / P. Petit, D. Hillaires-Buys, M. Manteghetti, S. Debrus, J. Chapal, M.M. Loubatier-Mariani // Br. J. Pharm. 1998. - V. 125. - P. 1368-1374.

102. Piper A.S. P2-purinoceptors mediating spasm of the isolated uterus of the non-pregnant guinea-pig / A.S. Piper, M. Hollingsworth // Br. J. Pharm. -1996.-V. 117.-P. 1721-1729.

103. Radford K. Baculovirus expression provides direct evidence for heteromeric assembly of P2X2 and P2X3 receptors / K. Radford, C. Virginio, A. Surprenat, R.A. North, E. Kawashima // J. Neurisci. 1997. - V. 17. -P. 6529-6533.

104. Rapaport E. Generation of extracellular ATP in blood and its mediated inhibition of host weight loss in tumor-bearing mice / E. Rapaport, J. Fontaine // Biochem. Pharmacol. -1989. V. 38. - P. 4261-4266.

105. Rapaport E. Anticancer activities of adenine nucleotides in tumor bearing hosts / E. Rapaport // Drug Dev. Res. 1993. - V.28. - P.428-431.

106. ReineckeM. Neurotensin in the human fallopian tube: immunohistochemical localization and effects of synthetic neurotensin on motor activity in vitro / M. Reinecke // Neurosci. Lett. 1987. - V. 73(3). -P. 220-224.

107. Rongen G.A. Cardiovascular pharmacology of purines / G.A. Rongen, J.S. Floras, J.W. Lenders, T. Thien, P. Smits // Clin. Sci. -1997. V. 92. -P.13-14.

108. Rosengren S. Anti-inflammatory effects of an adenosine inhibitor:decreased neutrophil accumulation and vascular leakage / S. Rosengren, G.W. Bong, G.S. Firestein // J. immunol. 1995. - V. 154. - P. 5444-5451.

109. Samuelson U.E. Action and localization of neuropeptide Y in the human fallopian tube / U.E. Samuelson, C.J. Dalsgaard // Neurosci. Lett. 1985a. -V. 58(1).-P. 49-54.

110. Samuelson U.E. Myogenic and neurogenic control of electrical and mechanical activity in human oviductal smooth muscle / U.E. Samuelson, N.O. Sjostrand // Acta. Physiol. Scand. 1986. - V. 126(3). - P. 355-363.

111. Samuelson U.E. Dual effects of adenosine and adenosine analogues on motor activity of the human fallopian tube / U.E. Samuelson, N.P. Wiklund, L.E. Gustafsson // Acta. Physiol. Scand. 1985b. - V. 125(3). - P. 369-76.

112. Schachter J.B. HEK293 human embryonic kidney cells endogenously express the P2Y. and P2Y2 receptors / J.B. Schachter, S.M. Sromek, R.A. Nicholas, T.K. Harden // Neuropharm. 1997. - V. 36. - P. 1181-1187.

113. Shimizu I. Alterations with age of the responces to vasodilatator agents in isolated mesenteric arteries of the beagle / I. Shimizu, N. Toda // Br. J. Pharm. 1986. - V. 89. - P. 769-778.

114. Simon J. Molecular cloning and characterization of splice variants of the mouse P2X4 receptor / J. Simon, LP. Chessel, A.D. Michel, E.A. Barnard, P.P.A. Humphrey // Br. J. Pharm. 1999. - V. 126. - P. 127.

115. Slater M. Distributional changes of purinergic receptor subtypes (P2Xj7) in uterine epithelial cells during early pregnancy / M. Slatter, J.A. Barden, C.R. Murphy // The Histochem. J. 2000. - V. 32. - P. 365-372.

116. Song S.L. P2 purinoceptor-mediated inhibition of cyclicAMP accumulationin NG108-15 cells / S.L. Song, S.H. Chues // Brain Res. 1996. -V. 734.-P. 243-251.

117. Soodak L.K. Luteolysis is linked to luteinizing hormone-induced depletion of adenosine triphosphate in vivo / L.K. Soodak, G.J. Macdonald, H.R. Behrman // Endocrinol. 1988. - V. 122. - P. 187-193.

118. Stoop R. Different sensitivities to pH of ATP-induced currents at four cloned P2X receptors / R. Stoop, A. Surprenant, R.A. North // J. Neurophysiol. 1997.-V. 78.-P. 1837-1840.

119. Suzuki H. Inhibitory effect of adenosine on degranulation of human cultured mast cells upon cross-linking of Fc epsilon RI / H. Suzuki, M. Takei, T. Nakahata, H. Fukamachi // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1998. -V. 242. - P. 697-702.

120. Tassel W. Endometrial cell dearth during early pregnancy in the rat / W. Tassel, M. Slater, J.A. Barden, C.R. Murphy // The Histochem. J. 2000.-V. 32.-P. 373-379.

121. Thannhauser S.J. Experimentelle Studien über den Nucleinstofwescel/2/Mittelung/ Stoffwechselversuche mit Adenosin and Guanosin / S.J. Thannhauser, A. Bommes // Hoppe-Seiler's Z Physiol. Chem. -V. 91.-P. 336-344.

122. Theobald R.J. The effect of arylazido aminopropionyl ATP (ANAPP3) on inhibition of pelvic nerve evoked contractions of the cat urinary bladder / R.J. Theobald // Europ. J. Pharm. 1995. - V. 130. - P .351-354.

123. Vassort G. Adenosine 5'-triphosphate: a P2-purinergic agonist in the myocardium / G. Vassort // Physiol. Rev. 2001. - V. 81. - P. 767-806.

124. Wikklund N.P. Adenosine modulation of adrenergic neurotransmission in the human Fallopian tube / N.P. Wikklund, U.E. Samuelson, J.A.N. Brundin //Europ. J. Pharmacol.- 1986.-V. 123.-P. 11-18.

125. Williams M. Developments in P2 receptor targeted therapeutics / M. Williams // Prog. Brain Res. 1999. - V. 120. - P. 93-96.

126. Yerxsa B.R. Therapeutic use of nucleotides in respiratory and ophthalmic diseases / B.R. Yerxsa // Drug Dev. Res. 2000. - V. 50. - P. 22.

127. Yeung C.H. Temporary inhibition of the initiation of motility of demembranated hamster sperm by high concentrations of ATP / C.H. Yeung // Int. J. Androl. 1986. - V. 9. - P. 359-370.

128. Ziganshin A.U. PPADS selectively antagonizes P2x-purinoceptor-mediated responses in the rabbit urinary bladder / A.U. Ziganshin,

129. C.H.V. Hoyle, X. Bo, G. LafiiBracht, E. Mutschler, H.G. Baumert, G. Burnstock // Brit. J. Pharmacol. 1993. - V. 110. - P. 1491-1495.

130. Ziganshin A.U. Ecto-enzymes and metabolism of extracellular ATP / A.U. Ziganshin, C.H.V. Hoyle, G. Burnstock // Drug Dev. Res. 1994a. -V. 32.-P. 134-146.

131. Ziganshin A.U. Selective antagonism by PPADS at P2x-purinoceptors in rabbit isolated blood vessels / A.U. Ziganshin, C.H.V. Hoyle, G. Lambrecht, E. Mutscher, H.G. Baumert, G. Burnstock // Br. J. Pharm. 1994b. - V. 111. -P. 923-929.

132. Ziganshina L.E. Acute oedema formation induced by ATP: Reevaluation of the mechanisms involved / L.E. Ziganshina, A.U. Ziganshin, C.H.V. Hoyle, G. Burnstock // Inflamm. Res. 1996. - V. 45. - P. 96-102.

133. Zou A.P. Role of renal medullary adenosine in the control of blood flow and sodium excretion / A.P. Zou, F. Wu, P.L. Li, A.W.Jr. Cowley // Am. J. Physiol. 1999. - V. 276. - P. 790-798.