Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Профилактика и лечение инфекционных осложнений острой лучевой болезни комбинированным антибиотиком сулациллином

На правах рукописи

РГ5 ОД

2 0 " -

РЕВСКАЯ Екатерина Андреевна

ПРОФИЛАКТИКА И ЛЕЧЕНИЕ ИНФЕКЦИОННЫХ ОСЛОЖНЕНИЙ ОСТРОЙ ЛУЧЕВОЙ БОЛЕЗНИ КОМБИНИРОВАННЫМ АНТИБИОТИКОМ СУЛАЦИЛЛИНОМ

14.00,16 - Патологическая физиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

МОСКВА 1997 г.

Работа выполнена в ГНЦ РФ - Институте биофизики Министерства здравоохранения РФ

Научные руководители:

Доктор медицинских наук, профессор К.С. Чертков

Доктор медицинских наук М.М. Вядро

Официальные оппоненты:

Академик РАМН, профессор Б.Б. Мороз

Доктор медицинских наук В.Н. Мальцев

Ведущее учреждение - Сибирский Медицинский Университет

Защита диссертации состоится " ...."................... 1997 г. в....... часов на заседании диссертационного Совета ДР 074.02.03 при ГНЦ РФ - Институте биофизики МЗ РФ 123182, г.Москва, Живописная ул., 46

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института Автореферат разослан".....".......................... 1997 г.

Ученый секретарь двссертацвояного совета кандидат медицинских наук

П.В. Ижевский

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность прпблшьт. Тяжесть течения и вероятность летальных исходов костномозговой формы ОЛБ определяются, главным образом, глубиной поражения кроветворения и инфекционными осложнениями периода агранулоцитоза.

Исследованиями многих отечественных и зарубежных авторов показано, что включение антибиотиков в схемы терапии ОЛБ является эффективной мерой борьбы с пострадиационной инфекцией (Давыдова CA. Водякова Л.М., Шаль-нова ГА., Фомина И.П. 1972, Давыдова CA. исоавт. 1973,1975, 1977, 1978, 1981, Тихомирова М.В., Рогозкин В Д. 1977, Brook I., ElliotT.B. 1989, Brook I., Ledney G.D. 1991).

Согласно принципам антибиотикотерапии инфекционных осложнений, разработанным в Институте биофизики и изложенным в "Методических рекомендациях со применению схем терапии при изучении эффективности противолучевых средств в эксперименте" (1985), в качестве препаратов выбора для лечения инфекционных осложнений ОЛБ следует использовать антибиотики широкого спектра и бактерицидного типа действия, главный образом , из класса природных и полисинтетических беталактаыов н аниногликозндов.

Особое значение в случае облучения организма приобретает борьба с инфекцией, вызванной резистентной флорой. Известно, что в облученном организме происходит увеличение числа антибиотикорезистентных штаммов даже в условиях, когда антибиотикотерапия не проводилась. Не исключается также в связи с развитием аграиулоцитоза вероятность нового заражения облученного организма устойчивыми формами возбудителей (Пииегин Б.В., Коршунов В.М. 1982, Цкити-швили ДД. 1984, Шальнова ГА. с соавт. 1991).

Как известно, основным механизмом резистентности к беталактамным антибиотикам является образование микроорганизмами ферментов-беталактамаз, способных инактиввровать антибиотик путем гидролиза беталактамиого кольца. Поэтому широкое распространение получили комбинированные препараты, содержащие беталактаыпые антибиотики и ингибиторы беталактамаз (сульбактан, клавулановую кислоту). К этому перспективному классу антибактериальных средств относится, в частности, новая комбинированная лекарственная форма -сулацштин, включающая ампициллин и сульбактан в соотношении 2:1. Лечебная эффективность отечественного препарата сулацияпина, созданного в ГНЦ

антибиотиков, получала высокую клинико-микробиологичсскую оценку, сопоставимую с отзывами об аналогичном препарате "Уназин", выпущенном в США фирмой "Pfizer Inc.".

Разработанные в эксперименте и успешно апробированные в коннике Л.Б.Барановым, Н.М.Надсжнной (1976, 1977,1978) схемы терапии OJI5 не содержали антибиотиков, устойчивых к действию беталактамаз. В доступной нам литературе не было сообщений о применении дня лечения ОЛБ подобных антибактериальных средств. Поэтому изучение антибактериальной активности сулациллина в отношении резистентной инфекции, развивающейся в условиях постлучевого аграаулоцвтоза, исследование его фарыахохиветичесхих особенностей в зависимости от периода лучевой болезни, а также установление возможности влияния антибиотика на отдельные факторы системы неспецифической противоинфекци-онной защиты организма являются актуальными и своевременными.

Цели н задачи работы. Целью настоящего исследования является установление терапевтической эффективности в качестве основного антибактериального средства для профилактики и лечения инфекционных осложнений ОЛБ новой лекарственной формы - сулациллина, представляющего собой комбинацию антибиотика ампициллина с ингибитором беталактамаз супьбактамои.

Для достижения цели решались последовательно следующие задачи:

1. Определение в опытах in vitro эффективной бактериостатической дозы сулациллина по отношению к лактамазопродуцирующему штамму микроорганизмов.

2.Выявленииероли концентрации яейтрофилов в антимикробном действии сулациллина in vitro.

3. Оценка лечебных свойств сулациллина в сравнении с ампициллином на мелких и крупных лабораторных животных, облученных в летальных дозах.

4. Изучение лечебных свойств сулациллина в сравнении с ампициллином в опытах на облученных мышах, подвергнутых заражению антибиотшсоустойчи-вым беталактаыазопродуцирующин штаммом микроорганизмов.

5. Исследование кинетики распределения и выведения сулациллина в разные периоды течения ОЛБ.

Научная новизна исследования. - Впервые определена лечебная эффективность сулациллина в опытах на облученных мелких и крупных лабораторных животных.

- Впервые прослежена корреляция продолжительности поддержания лечебной концентрации антибиотика в крови с периодом клинического течения ОЛБ.

- Установлен пороговый эффект в антибактериальном действии антибиотика, фагоцитирующих клеток крови и их комбинации.

• В опытах in vitro показано потенцирование антибактериального действия сулациллина лейкоцитарными клетками крови.

Практическая значимость работы. В опытах на облученных животных установлено отчетливое преимущество сулациллина по сравнению с ампициллином при лечении генерализованной инфекции, вызванной беталахтамаэопродуцн-рующим штаммом. Сулациллин рекомендован в качестве основного препарата в схему терапии ОЛБ ("Методические рекомендации по применению антибиотика сулациллина для профилактики и лечения инфекционных осложнений острой лучевой болезни", 1993).

Выявлена зависимость фарыакокпнетюси сулациллина от стадии течения лучевой болезни, что позволяет количественно обосновать увеличение дозы препарата примерно в 2 раза в разгар заболевания (при состоянии Еыражениой цито-пенин).

Модифицирована методика определения in vitro влияния антибиотиков на рост бактерий. Модификация включает подбор тест-культуры и соотношений питательных сред для одновременного культивирования бактерий и нейтрофильных клеток, полученных от мышей; определение оптямальпых концентраций антибиотиков и количества клеток в ячейке.

Основные половчяия, выносимы» на защиту:

1. Новая лекарственная форма комбинированного препарата сулациллип, содержащего ампициллин и сульбактам в соотношения 2:1, проявляет высокую лечебную эффективность, не уступающую ампициллину при лечении инфекционных осложнений ОЛБ, вызванных антибнотикочувствительными формами бактерий и существенно превосходит действие ампициллина при инфицировании резистентными штаммами микроорганизмов.

2. Кинетические параметры вводимых антибиотиков меняются в зависимости от периода ОЛБ.

3. Антибактериальный эффект сулациллина существенно повышается в культуре, содержащей сегмептоядерные нейтрофялы.

AiTpnfimiBfl ди^е^ртании. Материалы диссертации были дсщожсаы и обсуждены на заседании ыеяспабораторнон конференции ГНЦ РФ - Институт биофизики МЗ РФ 17 декабря 1996 года.

Публикации. Результаты диссертационной работы изложены в S публикациях: тезисах докладов на конференциях федерального уровня.

Объем и структура лнссертакяи. Диссертация изложена на 145 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, результатов собственных исследований, обсуждения результатов, выводов и указателя литературы, включающего 20S источников, из которых 119 отечественных авторов. Работа иллюстрирована 12-ю таблицами и 22-я рисунками.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы

Работа выполнена иа 54 собаках, 390 мышах-гибридах (СВАхС57В1), 48 мышах линии С57В1 н 96 мышах линии АО..

В работе использовали лекарственную форму "Сулацшщин", созданную в ГНЦ по антибиотикам, представляющую собой фиксированную комбинацию антибиотика широкого спектра действия ампициллина и ингибитора бета-лактаыаз сульбактама, взятых в соотношении 2:1.

Исследование ш vitro антибактериальной активности сукацнллина в разных концентрациях как отдельно взятого, так и в сочетании с нейтрофилаыи, выполнялось по модифицированному нами микротурбвдиметрическому методу определения активности антибиотиков, разработанному сотрудниками ГНЦ но антибиотикам (Ансолис Л.Б., Макарова РА., Сидоренко C.B. 1994). Модификация метода включала подбор тест-культуры и питательной среды. В качестве тест-культуры использовали ампицшшинорезистентный беталактаназопродуцирую-щий штамм St. aureus 108.

Эксперименты проводили в поли стироловых планшетах с 96 ячейками, используемых для иммуноферментного анализа. Рост культуры оценивали в течении 15 часов по оптической плотности содержимого ячеек, которую определяли на приборе "Bioscreen" со стандартной программой.

Изучение лечебных свойств сулациллина в сравнении с ампициллином проводили на мелких и крупных лабораторных животных, облученных в детальных

дозах. С этой цепью мышей подвергали общему однократному гамма-облучению 137Cs яа установке ИГУР с мощностью дозы 163-167 рад/мин. Дозы облучения составляли 400, 600, 750 и 825 рад. Собаки подвергались общему однократному гамма-облучению в дозе 346 рад, соответствующей СД bs.üo. Схема терапии собак включала деконтамипацню желудочно-кишечного тракта гентамицином с 7-х по 12-е сутки, внутримышечное введение сулациллина или ампициллина в дозе 45-150 или 30-100 иг/кг соответственно с 13-х по 21-23-с сутки, назначение комплекса витаминов и фоликобаламнпа.

Специальное исследование лечебных свойств сулациллина в сравнении с ампициллином проведено на облученных в мышах линий (С57В1 и AKR), инфицированных ампициллинорезистентным штаммом Klebsiella pneumonia. Заражение животных производили на 3-й сутки после облучения, лечение проводили с 3-х по 7-е сутки после облучения.

Сулацютнн вводили подкожно в суточных дозах 1 и 2 г/кг, содержащих соответственно 0,66 г/кг н 1,32 г/кг ампициллина, а ампициллин - в «уточной дозе 1,32 г/кг, т.е. адекватной максимальной дозе сулацнллина.

Показателями эффективности лечения острого лучевого синдрома и экзогенной инфекции у мышей служили 30-дневная выживаемость и средняя продолжительность жизни (СПЖ). Оценку эффективности терапии ОЛБ у собак проводили по выживаемости, тяжести клинического течения ОЛБ, динамике изменений периферической крови.

Фармакокинетику сулациллина оценивали по содержанию в сыворотке крови собак ампициллина, входяшего в состав изучаемого антибиотика. Концентрацию ампициллина в сыворотке крови определяли совместно с сотрудником ГНЦ по антибиотикам К.К.Мануйловым с помощью метода высокоэффективной жидкостной хроматографии на хроматографе GILSON (Франция) с хроматографи-ческои колонкой 250x4 ни, заполненной сорбентом Silasorb С18 с диаметром частиц 10 ыкм.

Статистическую обработку экспериментальных данных проводили по общепринятым в медико-биологических исследованиях методам.

Результаты и обсуждение Исследование in vitro сраегштелыаой эффекгшшюепш еулааршшяа ияиттщятяа.

Проведение этого исследования обусловлено необходимостью изучения эффективности судациллияа в условиях постлучевого агранулоцитоза. Поэтому определение балет ериостати ческой дозы препарата в зависимости от изменения в среде концентрации нсйтрофилов представляло определенный интерес.

На первом этапе провели подбор состава среды для одновременного культивирования микробных клеток и нейтрофилов и исследовали различные соотношения мясо-пептонного бульона (МПБ) и среды RPMI (или среды 199).

Оптимальный рост бактериальной культуры был получен, когда соотношение МПБ и RPMI (или среды 199) составляло 1:1. Этот состав сред обеспечил бактериальный рост, не отличающийся существенно от показателя контроля, в качестве которого использован рост той же культуры в неразведенном МПБ. Экспериментально подобранное соотношение сред не отразилось заметным образом и на жизнеспособности нейтрофилов, определяемой по количеству неокрашенных клеток в пределах срока наблюдения (15 ч.).

при отработке рабочих концентраций сулациллнна в качестве исходной нами была выбрана концентрация 24 мкг/мл, равная концентрации препарата в сыворотке крови после введения в организм человека средних терапевтических доз (Файнгольд С.М. 1991, Вготга R.M.. с соавт. 1982, Foulds G. с соавт.1983, Hemscll D.L., Heard M.S., Hemsell P.G.1988). Оказалось, что в условиях нашего опыта су-лациллин в этой концентрации вызывает практически полное подавление роста испытуемой культуры. Поэтому все последующие концентрации сулациллнна были получены путем последовательного снижения максимальной концентрации до 1,5 мкг/мл, при которой тормозящий эффект на рост бактерий не регистрировался.

Таким образом, изучение действия сулациллнна в концентрациях указанного диапазона (от 1,5 до 24 мкг/мл) позволило определить полный спектр антимикробного действия сулациллнна: от отсутствия эффекта до полного угнетения роста бактерий, которое, как можно предположить, обеспечивается бактерицидными свойствами изучаемого антибиотика.

Преимущества в антибактериальной активности сулациллнна по сравнению с ампициллином проявлялись при концентрации последнего от б до 16

икг/мл. Минимальная бактериостатическая концентрация сулацнллина, равная 9 мкг/мл, была принята нами в качестве рабочей для использования в последующих экспериментах на животных.

СЬредгляте зааяамоеяш кошчеетма агйтрофилыгих лейхоцито* в тякшювробвом эффекте антибяопвгков.

При выборе числа клеток, наиболее отвечающего цепи испытания антибактериального действия препаратов, мы исходили из количества лейкоцитов и ней-трофилов, реально определяемых в крови облученных животных и человека, находящихся в периоде разгара лучевой болезни II-III степени тяжести. Поэтому в наших экспериментах in vitro в ячейки помещали 5, 25, 50 и 100x103 клеток, что при объеме содержимого 150 нхп обеспечивало концентрации 33, 165, 330 и 660 ней-трофилов в 1 шел, и соответствовало 0,1; 0,5; 1 и 2хЮ3 лейкоцитов в 1 шел крови мышей.

Установлено, что совместное применение антибиотиков и иейтрофнлов в количествах 5x103 или 25x103 клеток в ячейке не способствовало увеличению антимикробного действия антибиотика, поскольку торможение роста бактерий не превысило эффект, полученный при изолированной применении апткбяотиков.

При увеличении количества иейгрофильвых лейкоцитов в ячейке до SOxlO3 или 100x10* антибактериальные свойства испытываемых антибиотиков существенно усилились. В этих вариантах опытов выявились качественные изменения, относимые к категории потенцирования, о чем свидетельствует глубина подавления роста культуры St.aureus, которая превысила суммированные показатели изолированного действия антибиотика и нентрофплов. Если принять показатели роста чистой культуры за 100%, то внесение в ячейки 50х103 иейтрофнлов и сулацнллина в концентрациях б; 7,5 и 9 ыкг/мл обеспечило превышение рассчитанных показателей аддитивного ответа на 36,7; 39,8 и 38,5% (рис.1)1.

Использование в качестве контрольного препарата ампициллина совместно с нейтрофнлами в той же концентрации также характеризовалось потенцированием бакгериостатнческого эффекта , но в этом варианте опыта выраженность антимикробного действия была меньше, чем в экспериментах с сулацилянном. Разница между расчетными аддитивными значениями и полученными в действитель-

1 Примечание. Оптическая плотность на рисунках указана по оси ординат в единицах оптической плотности х 10"3.

ности результатами составила соответственно испытанным дозам ампициллина (4, 5 и 6 нкг/нл) 10,9; 18,9 н 25,5%(рнс.2).

Особенно рельефно проявилась роль нейтрофилов при увеличении их количества в ячейке до 100x103 кдеток. В этом варианте потенцирование антимикробного действия комбинации антибиотиков и нейтрофилов отмечено при всех испытанных дозах антибиотиков. Так, в диапазоне концентраций сулациллина 6; 7,5 и 9 нкг/нл проявился предельный эффект торможения роста бактерий, и в результате не получено дозовых различий в действии антибиотика. Различия между расчетными аддитивными и экспериментально полученными показателями были равны соответственно49,5; 51,7 и 36,1%.

При использовании соответствующих концентраций ампициллина и нейтрофилов сохранилась зависимость от дозы, что свидетельствует о меньшей активности антибиотика сравнения. Это положение подтверждается и при анализе различия между экспериментальными и расчетными (аддитивными) результатами (29,3; 32,3 и 45,5%).

Таким образом, в опытах in vitro установлено потенцирующее влияние нейтрофилов, используемых в концентрациях 0,33x103/мкп и более на бактериостати-ческий эффект комбинации антибиотиков и нейтрофилов, причем в опытах с сулацшшином потенцирование было более выражено по сравнению с ампициллином.

flccjiedotimue терапеетикгской зффаегшиноеггш еулая^ивша и алапщрллипа яд модст острой лучевой болгзгшу мышей

На следующем этапе работы была проведена серия экспериментов по изучению сравнительной эффективности сунадшыхина н ампициллина при лечении инфекционных осложнений ОЛБ у мышей. Результаты этих опытов представлены на рисунке 3.

Применение суяацщпшна или ампициллина в суточных дозах соответственно 300 или 200 мг/кг у мышей, облученных в СД во, обеспечило примерно равную выживаемость в опытных группах. Эти результаты в 2,3-2,5 раза превысили выживаемость в контрольной группе мышей. Сулацилпин в суточной дозе 150 нг/кг не оказал лечебного действия, не отмечено выраженного лечебного эффекта в опытах на мышах, облученных в СД шо.

рост стафилококка в присутствии неятросрилов

щшшщшшштж

400

зоо -

200

100 -

мкг/мл

Р?38Я Л, кмШ! Б . А —получением угнетение роста стафилококка р присутствии неятрофилов и сулоииллина. Б—ожидаемое угнетение роста стафилококка в присутствии неятрофилов и сулаииллина

г'ис.. 1 .Ожидаемый(аддитивный) и полученный

потенцируюший эффект комбинации нейтро —

филов (50x10 в ячейке) и сулаииллина.

рост стафилококка в присутствии нейтрофилов

500

400 -

300 -

200 -

100 -

мкг/мл

А ЩИ Б , А-полученное угнетение роста стафилококка в присутствии нейтрофилов и ампициллина, Б-ожидаемое угнетение роста стафилококка в присутствии нейтрофилов и ампициллина

Рис.2.0жидаемьй(аддитивный) и полученный потенцируощий эффект комбинации нейтро— филов (50x10 в ячейке) и ампициллина.

выживаемость, %

750 825

лоза облучения, рад

Контроль ШШ Сулаииллин, 150мг/кг

Сулсшиллин,300мг/кг ¡ИШ Ампициллин,200мг/кг

*—достоверно по сравнению с контролем, р<0,05

Рис.3.Выживаемость мышей в зависимости от лозы облучения и варианта терапии

yiccjudataiae эффектшпеспиг сулвцялшла а акгшцяллгош е оттшх

на облучетжх мышах, звражетгих.резаетешшялм к ампащшвщу капанном лткроергаиязмое.

В представленных выше экспериментах на мышах показано, что сулацил-лин ограничивает развитие инфекционных осложнений подобно ампициллину и это подтверждается примерно равным уменьшением летальных исходов у облученных животных, получавших антибиотики.

Исходя нз этих результатов, с большой вероятностью можно утверждать, что микробная флора у облученных мышей не проявляла выра жениой резистентности к действию ампициллина и потону добавление к антибиотику сульбактама не отразилось на лечебных свойствах сулациллина. Чтобы выявить преимущества последнего, было необходимо провести исследования на облученных животных, инфицированных ампициллинорезистентиой формой возбудителя.

Для исследования была подобрана доза облучения 400 рад, при которой сочетание с микробным заражением в дозе 5x106 микробных тел/мышь приводит в контроле к абсолютной гибели животных. Для заражения, которое проводили на 3-й сутки после облучения, использовали резистентный к ампициллину штамм Klebsiella pneumonia.

Антибиотики вводили с 3-х по 7-е сутки после облучения, т.е. в период наиболее выраженной невтропении.

Результаты этих исследований представлены в таблице 1.

Антибактериальное действие сулациллина отчетливо проявилось в период назначения препарата. Так, на 4-е сутки после заражения (т.е. в дспь окончания антибактериальной терапии) выжило 58-83,3% облученных и инфицированных мышей ( см. табл.1). Конечная терапевтическая эффективность сулациллина, определяемая по тесту 30-дневно£ выживаемости, в зависимости от применяемой дозы антибиотика равнялась 25-58%. Снижение терапевтического эффекта после окончания антибиотикотерапии, по-видимому, связано с реактивацией инфекции.

Таким образом, в наших экспериментах установлено, что в период нейтро-пении, развивающейся у мышей при облучении в дозе 400 рад, сульбактам эффективно защищает активность ампициллина, увеличивая продолжительность жизни обличенных и инфицированных животных. Необходимо подчеркнуть, что все контрольные и леченные ампициллином облученные мыши погибли к 7-м суткам после экспозиции.

Таблица 1

Терапевтическая эффективность еулацнллина н ампнцелнна у мышей, облученных в дозе 400 рад, на модели экзогенного сепсгаа (заражение резистентным к амшцелнну штаммом К1. рпешпошае в дозе 5х10( микробных тел/мышь)

Вариант терапии Количество животных в группе Выживаемость СПЖ, сут.

на 1-е сутки терапии,% а день окончания терапии, % иа 30-е сутки,%

Сулацилин, 2 г/кг в сут. 12 100 83,3 58* 9,6+2,3**

Сулацилин, I г/кг в сут. 12 100 58* 25 *• 6,5+1,1*

Аыпицелин, 1,32 г/кг в сут. 12 100 0 0 3,4+ОД

Контроль 12 100 0 0 3,5+0,3

* - достоверно по сравнению с контролен, при р<0,05

** - достоверно по сравнению с показателями в группе мышей, леченных аыпицелином, р<0,05

Полученные результаты дают основание предположить, что в случаях экзогенного заражения резистентными микроорганизмами можно достигнуть повышения результатов лечения судациллином путем увеличения продолжительности антибиотикотерапии и дозы препарата.

Исследование терапевтячгскей эффегаяятосгпи сумщвллвяа а амя^иивта е схемах лепета ОЛЕ у собак.

Лечение по варианту схемы с сулациллинон способствовало выживанию 66,7% собак, облученных в СД ss-90. Такой же уровень выживаемости был получен н при использовании схемы с ампициллином.

Терапевтическая эффективность препаратов, оцениваемая по клинико-гематологическим данным, также оказалась равной.

Как в контроле, так и в опыте гематологические показатели свидетельствовали о крайнем угнетении кроветворения у подавляющего большинства животных. Однако развитие III степени тяжести костномозгового синдрома соответствовало выраженности клинических проявлений лишь в контрольной группе,

1S

в 70 врсш1 как в опытных группах соответствие кхшничсскои картины гематологическим показателям было отмечено менее, чем у половины животных.

ОЛБ в леченых группах имела сходное клиническое течение с примерно равной частотой возникновения некротических ангин, язвеино-некротичесжих колитов и пневмоний. Процент каждого из этих инфекционных осложнений по клиническим и патологоанатомнческим данным составил около 33%, тогда как в контроле это число равнялось от 50 до 83%.

В то же время применение супацнллина позволило снизить по сравнению с ампициллином частоту и выраженность таких симптомов лучевой болезни, как анорексия, гипертермия, потеря массы тела.

Отмеченные различия коррелируют с менее выраженным геморрагическим синдромом у части собак, леченных сулацшпшном: у половины животных этой группы наблюдали геморрагический синдром I степени тяжести, тогда как среди леченных ампициллином было только около 30% таких животных.

Однако эти различия в эффективности препаратов можно определить лишь как тенденцию, поскольку, как уже указывалось, в целом терапия обоямн антибиотиками дала сходные результаты, что, по-видимому, связано с отсутствием резистентности у возбудителен, вызвавших инфекционный процесс у большинства животных.

Сопоставление результатов наших экспериментов с данными предшествующих работ (Давыдова С А. ссоавт., 1975, 1978,1979, Тихомирова М.В., Ро-гозкин В.Д., 1977) позволяет считать полученный терапевтический эффект близким к максимально возможному при использовании подобных схем терапии животных, облученных в СД 85-90. Следует подчеркнуть, что эти результаты были достигнуты при использовании меньших доз ампициллина, содержащегося в лекарственной форме "сулацшшин" по сравнению с ампициллином, применяемым в качестве отдельного препарата. Дозы ампициллина равнялись соответственно 116 и 142,5 мг/кг.

Исследование фармакокяяетики сулаерлятш при острой лучевой болезни.

Разработка рациональных схем антибиотикотерапии, обеспечивающих безопасность лечения и наиболее полный терапевтический эффект, вместе с данными об антимикробной активности требует четких знаний об особенностях всасывания, распределения и выведения антибиотика. Для комбинации ампициллина с суль-бактамом эти параметры, являющиеся основными фармакокинетическнми пара-

метрами, хорошо изучены. Однако эти сведения касаются фарнакокинетикн препарата в необлученном организме. Отсутствие в литературе сведений о кинетике комбивадии ампициллина с сульбактаиом в облученном организме, особенно в разных периодах течения лучевой болезни, и побудило нас к изучению в экспериментах на собаках фармахокинетических особенностей сулациллина в периоде разгара и начале восстановления острой лучевой болезни, когда количество лейкоцитов в периферической крови животных равнялось соответственно 0,б±0,16 и 5,7±1,77 тыс.в мкя.

Проведенное исследование выявило, что такие фарыакокинетическис характеристики, как скорость всасывания, время достижения пиковой концентрации и минимального терапевтического эффекта, а также скорость выведения ампициллина из организма не зависят от периода лучевой болезни и сопоставимы с литературными данными, полученными при испытанияхна здоровых добровольцах и больных с другими нозологическими формами (Орлов В А., Соколова В.И., Сарсенбаева Д.И., Мануйлов К.К. 1994, Foulds G. с соавг., 1980,1983,1985, FouldsG. 1986).

В то же время пиковая концентрация ампициллина в крови собак, находящихся в начале периода восстановления, оказалась в 1,5 раза выше, чем у животных, находящихся в периоде разгара, составляя соответственно 41,9±5,3 и 27,1±10,9 мкг/ил (рис.4). Это свидетельствует об активации процессов утилизации антибиотика или о снижении степени всасывания препарата в кровоток в разгаре заболевания я, следовательно, уменьшении его биодоступности. Как известно, биологическая доступность лекарственного вещества характеризуется также размером площади под фармакокннетической кривой.

В вашем исследовании площадь под фармакокннетической кривой, характеризующей кинетику ампициллина в периоде восстановления, оказалась почти в 2 раза больше (124,0±35,8 мкг/мл.ч), чем площадь под фармакокннетической кривой периода разгара ОЛБ (65,3127,0 мкг/мл.ч).

Следствием снижения биодоступности ампициллина в периоде разгара ОЛБ явилось сокращение на 2 часа времени терапевтического действия антибиотика, что отчетливо демонстрируется на рисунке.

Время после Ешедения сулшиллина, мин.

По оси ординат - концентрация ампициллина, А - группа собак с содержанием в крови лейкоцитов 0,6x10 /л, Б - группа собак с содержанием в крови лейкоцитов 5,7x10 у л, *-различие достоверно при р<0,05

Рис.4.Изменение срелних значений концентрации ампициллина, входящего в состав сулациллина, в крови облученных собак

Таким образом, установленный нами факт снижения биодоступности ампициллина в разгаре ОЛБ может служить теоретическим обоснованием тактики увеличения доз антибиотиков в 1,5-2 раза в периоде агранулоцитоза.

ВЫВОДЫ

1. Препарат сулациллин, содержащий ампициллин и сульбактам в соотношении 2:1, является эффективным антибактериальным средством, имеющим преимущества по сравнению с ампициллином при испытаниях на беталактамазо-продуцирующих микроорганизмах in vitro и в облученном организме.

2. Антибактериальное действие сулацилпина in vitro потенцируется в присутствии нентрофнлъных лейкоцитов. Потенцирующее действие лейкоцитов отмечается при концентрациях 0,33x103 и более в 1 мкл,

3. Сулациллин в качестве основного антибиотика оказывает подобно ампициллину выраженное лечебное действие при инфекционных осложнениях острой лучевой болезни. Выживаемость леченных сулациллином собак после облучения в дозе, вызывающей гибель 90% контрольных животных, составляет 66,7%.

4. Сулациллин существенно превосходит по эффективности ампициллин при лечении животных, подвергнутых облучению в заражению резистентным беталак-тамазопродуцврующим штаммом Kl. pneumoniae.

Выживаемость леченных сулациллином мышей составляет 58% и превышает показатель контрольной группы (0%) и леченной ампициллином (0%).

5. Фарнакокинетнка сулацилпина меняется в зависимости от периода течения острой лучевой болезни, В периоде разгара (количество лейкоцитов - 0,6 тыс. в мкл) время эффективной концентрации уменьшается примерно на 2 часа и уменьшается количество сулацилпина в крови на 40-50% по сравнению с параметрами, определяемыми после введения равной дозы антибиотика в периоде восстановления, когда количество лейкоцитов составляет в среднем 5,7 тыс. в мкл.

6. В соответствии с параметрами фармахокинетики сулацшшина для достижения терапевтического эффекта в периоде разгара ОЛБ требуется увеличе-

ние дозы основного антибиотика примерно в 2 раза по сравнению с дозой, назначаемой в другие периоды.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ

1. Ревская ЕА., Давыдова С А., В ядро М.М. Применение сульбакта-ма/ампицшшина для печения острой лучевой болезни.//Актуал. пробл. химиотерапии бактериальных инфекций: тезисы докладов. Всес. научн. центр по антибиотикам, М., 1991, с.533-534.

2. Ревская ЕА., Давыдова СА. Сравнительная эффективность сулацилшша и ампициллина при экспериментальной острой лучевой болезни.// Восстановительные и компенсаторные процессы при лучевых поражениях: тезисы докладов X научной конференции. Санкт-Петербург, 1992, с.159-160.

3. Ревская ЕА., Тогобицкий В.Ю. Возможности повышения эффективности антибиотикотерапии при острой лучевой болезниУ/Актуальные проблемы медицинской реабилитации. Сборник научных трудов б Центрального военного клинического госпиталя МО РФ. М., 1993, с.37.

4. Ревская ЕА. Применение сулациллина дня повышения эффективности лечения инфекционных осложнений ОЛБ.//В сб. - "Актуальные проблемы разработки медицинских средств и методов сохранения и восстановления боеспособности личного состава вооруженных сил". МО РФ, 1994, с.54.

5. Ревская ЕА., Мануйлов К.К. Особенности фармакокинетики сулациллина в разные периоды острой лучевой болезпн в эксперименте.//!! сб.-"Научиая конференция молодых ученых России, посвященная 50-летию Академии медицинских наук: тезисы докладов". М., 1994, с.402-403.