Автореферат и диссертация по медицине (14.00.06) на тему:Полиморфизм генов ренин-ангиотензин-альдостероновой системы, гена NO-синтазы и гена метилентетрагидрофолатредуктазы у русских мужчин с артериальной гипертонией

На правах рукописи

Сильвестрова Галина Александровна

Полиморфизм генов ренин-ангиотензин-альдостероновой системы, гена 1ЧО-синтазы и гена метилентетрагидрофолатредуктазы у русских мужчин с артериальной гипертонией (Центральный регион России)

14.00.06 - кардиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Москва - 2009

003459979

Работа выполнена в ГОУ ВПО Московская Медицинская Академия им. И.М.Сеченова

Научный руководитель

доктор медицинских наук, профессор Сыркин Абрам Львович Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Маколкин Владимир Иванович

доктор медицинских наук, профессор Кобалава Жанна Давидовна

Ведущая организация: Государственный научно-исследовательский центр профилактической медицины

Защита состоится « » ^^ 2009 года в __часов на заседании

диссертационного совета Д 208.040.05 при в ГОУ ВПО Московская Медицинская Академия им. И.М.Сеченова по адресу: 119991, г.Москва, ул.Трубецкая, д.8, стр.2

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО Московской медицинской академии им. КМ.Сеченова по адресу: 117998, г.Москва, Нахимовский проспект, д.49

Автореферат разослан <<

2008 г.

»

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор медицинских наук, профессор

Волчкова Елена Васильевна

Список сокращений

АГ Артериальная гипертония

АД Артериальное давление

3CJDK Задняя стенка левого желудочка

ИБС Ишемическая болезнь сердца

ИМ Инфаркт миокарда

ИМТ Индекс массы тела

ИММЛЖ Индекс массы миокарда левого желудочка

КДР Конечный диастолический размер

ЛП Левое предсердие

МЖП Межжелудочковая перегородка

ММЛЖ Масса миокарда левого желудочка

РААС Ренин-ангиотензин-альдостероновая система

ССЗ Сердечно-сосудистые заболевания

ТГ Триглицериды

ФВЛЖ Фракция выброса левого желудочка

ФР Фактор риска

ХС Холестерин

ЭКГ Электрокардиография

ЭХО КГ Эхокардиографическое исследование

АСЕ Ангиотензинпревращающий фермент

AGT Ангиотензиноген

AGTR Ангиотензин II рецептор I типа

MTHFR Метилентетагидрофолатредуктаза

eNOS Эндотелиальная синтаза оксида азота

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ. Актуальность проблемы.

Несмотря на успехи, достигнутые в диагностике и лечении артериальной гипертонии (АГ), это заболевание широко распространено в популяции и по данным ВОЗ АГ выявляется у 20-30% взрослого населения. В России распространенность АГ в возрастной группе старше 18 лет составляет 39,2% у мужчин и 41,1 % у женщин (Оганов Р.Г., 1997г), на долю эссенциальной гипертонии приходится 90-95% от всех больных. Начинаясь с повышения артериального давления (АД), прогрессирование АГ приводит постепенно к развитию тяжелых осложнений со стороны сердечно-сосудистой системы (ССС): острому нарушению мозгового кровообращения (ОНМК) и ишемической болезни сердца (ИБС), приводя к ранней инвалидности и сокращая срок человеческой жизни. В настоящее время считается общепризнанным "мозаичный" (многофакторный) генез эссенциальной АГ. Установлено, что такие факторы риска, как ожирение, сахарный диабет, потребление соли, гиподинамия, гиперхолестеринемия, стресс, наследственность достоверно увеличивают риск развития АГ и сердечнососудистых осложнений (Ford E.S., 1991, Гордон X. Уильяме 1995 г, Carretero О.А., 2000, Navas-Nacher Е., 2001).

По мере развития современных технологий и появившейся возможности расшифровки генома человека, стало появляться все больше и больше работ, показывающих наследственную предрасположенность к развитию АГ. По мере определения полных нуклеотидных последовательностей генома человека, было выявлено, что у разных людей в одних и тех же участках хромосом (так называемых «локусах») находятся разные нуклеотиды. Эти изменения получили названия SNPs (single nucleotide polymorphisms) и на сегодняшний день в геноме человека выявлено, по различным оценкам, от 3 до 10 миллионов распространенных SNPs. Подобные точечные мутации способны изменять количество продуцируемого геном фермента (например, количество ангиотензин-превращающего фермента), который, в свою

очередь, вовлечен в регуляцию АД. В связи с этим начал развиваться поиск генетических маркеров АГ на основании SNP-диагностики. Для выявления молекулярно-генетических факторов, определяющих предрасположенность к АГ, анализируют SNP, расположенные внутри и/или вблизи генов с потенциально наибольшим вкладом в патогенез заболевания. Большинство исследователей сходятся на том, что распространенность SNPs неодинакова в различных выборках, и имеет существенные тендерные и этнические различия. Таким образом, появилась необходимость в исследовании конкретных этнических групп (например, русских мужчин, проживающих в Центральном регионе России) для выявления SNPs-маркеров АГ, характерных для этой популяции. Цель исследования:

Изучить полиморфизм генов ренин-ангиотензин-альдостероновой системы (РААС), гена эндотелиальной NO-синтазы (eNOS) и гена метилентетрагидрофолатредуктазы (MTHFR) в качестве возможных маркеров AT у русских мужчин, проживающих в Центральном регионе России.

Задачи исследования:

1. Изучить распространенность прогностически неблагоприятных полиморфных аллелей гена АСЕ (I/D), гена AGTR А/С, гена AGT вариант AGT 235 и AGT 174, гена eNOS (Glu 298 Asp), гена MTHFR (С-677-Т) у русских мужчин, проживающих в Центральном регионе России;

2. Провести сравнительный анализ распространенности SNP исследуемых генов у пациентов с АГ и в контроле;

3. Оценить относительный риск развития артериальной гипертонии у пациентов с гетерозиготными вариантами исследуемых генов по сравнению со здоровым контролем;

4. Оценить взаимосвязь полиморфных аллелей исследуемых генов и показателями ЭХО-КГ у исследуемых групп;

5. Провести анализ встречаемости 8№ исследуемых генов в зависимости от стадии АГ, у пациентов с избыточным весом и отягощенной наследственностью в группах. Научная новизна работы.

Впервые у русских мужчин, проживающих в Центральном регионе России (Москва и Подмосковье), охарактеризованы полиморфизмы генов ренин-ангиотензин-альдостероновой системы, гена еМОБ, гена МТНРЯ; проведен анализ взаимосвязи полиморфизма указанных генов и АГ. По итогам анализа ассоциаций, показано что точечные мутации гена АСЕ и гена еЫОБ ассоциированы с развитием АГ в данной популяции, показана взаимосвязь полиморфизмов указанных генов с развитием поражений органов-мишеней. Впервые показана взаимосвязь двух гетерозиготных аллелей гена АСТ и АСТЫ и АГ у исследуемой выборки. Практическая значимость работы.

Показана взаимосвязь между распространенностью полиморфных маркеров некоторых исследуемых генов и артериальной гипертонией у русских мужчин центрального региона России.

Выявлены неблагоприятные маркеры развития ремоделирования миокарда у обследованных групп пациентов.

Полученные результаты имеют не только научное значение, но и могут быть использованы в клинической практике, внося свой вклад в создание «генетического паспорта». Положения, выносимые на защиту:

Помимо «традиционных» факторов риска развития АГ (ожирение, сахарный диабет, потребление соли, гиподинамия, гиперхолестеринемия, стресс, наследственность) для выявления генетической предрасположенности к развитию АГ должны быть исследованы БЫР генов РААС, гена еЫОБ и гена метилентетрагидрофолатредуктазы, так как эти системы участвуют в регуляции АД. С развитием АГ у русских мужчин, проживающих в

Центральном регионе России, ассоциированы полиморфные маркеры генов AGT 235, AGTR, АСЕ и eNOS.

Наличие в геноме неблагоприятных аллелей генов eNOS и АСЕ ухудшает морфологические характеристики миокарда как у пациентов с АГ, так и у здоровых лиц из группы контроля.

Дальнейшее изучение полиморфных маркеров развития сердечно-сосудистых заболеваний приведет к внедрению в клиническую практику генетических паспортов для раннего выявления лиц угрожаемых по развитию сердечнососудистых заболеваний. Внедрение результатов работы:

Определение SNP маркеров РААС и гена eNOS используются у пациентов Клиники Кардиологии ММА им. И.М.Сеченова.

Апробация диссертации: проведена 23 апреля 2008 года на совместном заседании кафедры профилактической и неотложной кардиологии ФППОВ, клиники кардиологии ММА им. И.М.Сеченова, отдела кардиологии НИЦ ММА им. И.М.Сеченова.

Публикации: по теме диссертации опубликовано 6 печатных работ. Структура и объем диссертации: Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, изложения результатов исследования, обсуждения результатов, выводов и практических рекомендаций. Работа изложена на 105 страницах машинописного текста, содержит 21 таблицы, 5 диаграммы и 4 рисунка. Указатель литературы включает 170 работ отечественных и зарубежных авторов. Материалы и методы исследования

Объект исследования: Всего было обследовано 222 мужчины русской национальности, проживающие в Центральном регионе России (Москва и Московская область). В основную группу (группа 1) были включены 102 человека, страдающие артериальной гипертонией, неродственные между собой и с группой контроля, в возрасте от 21 до 75 лет, средний возраст 49,9±10,б лет. У 79 пациентов диагностирована АГ без сопутствующих

поражений органов-мишений; у 23 человека перенесли ранее инфаркт миокарда на фоне длительно существующей артериальной гипертонии. В группу контроля (группа 2) были включены 120 человек, не родственные между собой, не страдающих артериальной гипертонией и ишемической болезнью сердца, в возрасте отщ 22 до 70 лет, средний возраст составлял 49,3±9,6 лет. Представленные группы больных были сходны по возрасту и статистически сравнимы.

Критериями исключения для обеих групп являлись женский пол, сахарный диабет (в анамнезе или выявленный по результатам обследования), подтвержденный симптоматический характер артериальной гипертонии, не русская национальность (по данным сбора анамнеза). Из контрольной группы помимо этого исключались пациенты, страдающие сердечнососудистыми заболеваниями; а также лица, у которых выявлялся в процессе обследования положительный нагрузочный тест на ИБС и/или гипертонический тип реакции на нагрузку по данным тредмил-теста. Пациенты проходили обследования и при необходимости лечение в Клинике Кардиологии ММА им. И.М.Сеченова (зав.отделением Андреев Д.А.) и в ЦКБ Гражданской авиации, Москва (зав.отделением Потиевский Б.Г.) Методы исследования:

Всем лицам, вошедшим в исследование, проводилось тщательное медицинское обследование, которое включало в себя сбор анамнеза (возраст, наличие высшего образования, характер трудовой деятельности, семейное положение оценка факторов риска АГ, как наследственность, курение, ожирение (по индексу массы тела: вес в кг/рост в м2), особенности питания, физическая активность, употребление алкоголя) и ручное клиническое обследование при поступлении в стационар. Проводилось однократное Эхо КГ исследование с расчетом массы миокарда левого желудочка (ММЛЖ) по формуле предложенной 11.В.Оеуегеих е1 а1. Для стандартизации показателя ММЛЖ использовался индекс массы миокарда ЛЖ, представляющий собой отношение ММЛЖ к площади поверхности тела. Площадь поверхности тела

вычислялась по формуле Дюбуа. Диагностическими критериями гипертрофии JDK подтвержденными ЭХО КГ явились величины ИММЛЖ больше 134 т/и2 у мужчин и больше 110 г/м2 у женщин (Рекомендации ДАТ,2000).

Кроме того, всем обследованным пациентам проводился нагрузочный тредмил-тест на фоне отмены терапии бета-адреноблокаторами, антагонистами Са-рецепторов и нитратами за 3 дня до исследования. Забор венозной крови осуществлялся однократно, в день поступления в стационар. У пациентов, не принимавших ранее статины, определяли уровни общего холестерина и триглицеридов стандартным ферментативным методом. К гиперхолестеринемии относили значения ОХС> 190 мг/дл. К гипертриглицеридемии относили уровень ТГ>150 мг/дл [ВНОК, 2003] В отдельную пробирку с ЭДГА производился забор венозной крови для дальнейшего генетического исследования. Генетическое обследование проводили на базе НИИ физико-химической медицины, в лаборатории генетики человека (зав.лаборатории к.б.н. Генерозов Э.В.). ДНК лейкоцитов выделяли из 2 мл цельной крови с помощью набора Wizard (Promeda, USA) согласно инструкции производителя. Анализ полиморфных маркеров получали в ходе ПЦР-амплификации при помощи олигонуклеотидных пар праймеров с определенными последовательностями. Для идентификации точечных однонуклеотидных замен в исследуемых генах использовали подходящие смеси дезокси- и дидезоксинуклеотидтрифосфатов (dNTP и ddNTP) и следующие олигонуклеотидные зонды. Затем проводили реакцию термоцикдического минисеквенирования. Очистку продуктов реакции минисеквенирования и секвенирования проводили с помощью SpectroCLEAN Kit (Sequenom, США) согласно инструкции фирмы-производителя

Результаты кардиологического обследования регистрировали в специально разработанной стандартной карте и кодировали для последующей статистической обработки по единому образцу. При этом большинство

показателей представлено в виде альтернативных переменных (1 — признак имеется, 0 — признак отсутствует). Некоторые показатели (возраст, конечный диастолический размер левого желудочка, фракция выброса и т.п.) анализировали как количественные переменные.

Статистический анализ проводили с помощью электронных таблиц «Microsoft Excel», и пакета прикладных программ «Statistica for Windows» v. 6.0, StatSoft Inc. (США). Для каждого количественного параметра были определены: среднее значение (М), среднеквадратическое отклонение (6), медиана (Me), 95% доверительный интервал, для качественных данных -частоты (%). Для сравнения непараметрических данных применяли методы Круаскала-Уоллиса (для нескольких групп), попарное сравнение проводили с помощью критерия Манна-Уитни (для 2-х групп) для несвязанных совокупностей. Для нахождения различий между качественными показателями использовали метод у2 с поправкой Йетса на непрерывность, для вычисления, которого прибегали к построению «сетки 2x2» и «3x2», а также точный критерий Фишера для небольших выборок. Статистически значимыми считались отличия при Р<0,05 (95%-й уровень значимости). Относительный риск (ОР) заболеваемости вычисляли по формуле [A/(A+B)]/[C/(C+D)]. Доверительный интервал (ДИ) для ОР определялся как е1 и е" , где L=ln (OP)-t*m; U= In (OP)+t*m; где t-значение t-критерия, m-стандартная ошибка для OP. Результаты и обсуждение.

1. Характеристика групп. В основную группу были включены 102 человека, средний возраст 49,9± 10,6 лет. В группу контроля были включены 120 чел., средний возраст 49,3±9,6 лет.

Группы практически не различались между собой по возрасту, лишь в группе контроля было достоверно больше 40-50-летних мужчин, чем в основной группе (52,0 против 43,3; р=0,03).

В группе пациентов 79 (76,6%) человек страдали артериальной гипертонией, без сопутствующих поражений органов-мишений; 23 (23,4%) человека на

фоне длительно существующей артериальной гипертонии перенесли инфаркт миокарда.

По стадии АГ и риску развития осложнений со стороны сердечнососудистой системы пациенты 1 группы подразделялись следующим образом: (см.таблицу 1).

Таблица 1. Распределение больных в зависимости от стадии АГ и риску развития сердечно-сосудистых осложнений (по критериям ВОЗ-МОГ, 1999г):

Стадия АГ Количество пациентов (п=102)

I 23 (22,5%)

II 56 (55%)

III 23 (22,5%)

Риск развития сердечно-сосудистых осложнений

1(низкий) 7 (6,9%)

2 (средний ) 20(19,6%)

3 (высокий) 29 (28,4%)

4 (очень высокий) 46(45,1%)

Как видно из таблицы, в группу 1 входили пациенты в основном II стадии АГ, очень высокого риска развития сердечно-сосудистых осложнений. Клинически группы различались между собой (см.таблицу 2): Таблица 2. Характеристика групп по факторам риска (представлены частота встречаемости и абсолютное количество пациентов).

Больные (п=102) Контроль (п=120) Р

Отягощенная наследственность 30,4(31) 11,7(14чел) 0,0006

Курение 44,1(45) 32,5(39) 0,03

ИМТ<25 48% (49) 61,7%(74) 0,021

25-29,9 29,4%(30) 25,8(31) 0,27

30-34,9 14,7(15) 10,8(13) 0,19

>35 7,8(8) 0,8(1) 0,02

Как видно из таблицы, достоверно чаще отягощенная наследственность выявлялась в группе пациентов- 30,4 против 11,7, р=0,0006. Такой фактор риска, как курение также чаще встречался у пациентов, страдающих АГ: 44,1 против 32,5, р=0,03. При оценке ИМТ у лиц контрольной группы соотношение роста и веса чаще было нормальным (ИМТ <25) по сравнению с пациентами из 1-ой группы (61,7 против 48, р=0,02). Среди лиц с повышенной массой тела в 1-ой группе достоверно больше было пациентов с ожирением 3-й степени (ИМТ более 35): 7,8 против 0,8%; р=0,02. При изучении показателей общего холестерина и триглицеридов было получено, что в группе пациентов показатели ОХ и ТГ были достоверно выше, чем в контрольной группе (Для ОХ: 209,4±39,7 против 192,9±54,3, р=0,01; для 1Г 167,9±88,3 против 104,4±59,4, р=0,00).

Всем пациентам 1-ой группы и 53 пациентам 2-ой группы (43,4%) проводилось ЭХО-КГ. Результаты проведенного обследования представлены в таблице 3.

Таблица 3. Показатели ЭХО-КГ в двух группах.

1 группа (N=102) 2 группа (N=53) Р

Фракция выброса 61,98±0,6б7 67,87±0,375 0,001

Левое предсердие 3,84±0,04 3,5±0,039 0,002

КДРЛЖ 5,1±0,05 5,0б±0,047 0,4

МЖП 1,11±0,019 1,04±0,03 0,03

ЗСЛЖ 1,1±0,016 0,99±0,012 0,001

ММЛЖ 222,б7±б,7 187,39±3,98 0,001

ИММЛЖ 111,84±2,99 94,01±],95 0,001

Как видно из таблицы, фракция выброса (ФВ) была достоверно выше в группе здорового контроля (р=0,001). Кроме того, достоверно отличались такие показатели, как размеры левого предсердия (ЛП), толщина межжелудочковой перегородки (МЖП), задней стенки левого желудочка (ЗСЛЖ), массы миокарда левого желудочка (ММЛЖ) и индекса массы миокарда левого желудочка (ИММЛЖ) и были больше в группе пациентов, страдающих АГ чем в группе контроля (р<0,05). Такой показатель, как конечный диастолический размер левого желудочка (КДР ЛЖ) достоверно не различался в обеих группах (р=0,4). 2. Результаты генетического исследования.

Для настоящего исследования отобраны гены с потенциально наибольшим вкладом в развитие артериальной гипертонии. Это в первую очередь гены ренин-ангиотензин-альдостероновой системы: ген АСЕ, ген АСПИ, ген АОТ 235 и 174; а также ген ЫО-синтазы (полиморфизм 01и-298-АБр) и ген метилентетрагидрофолатредуктазы. 2.1. Гены ренин-ангиотензин-альдостероновой системы. 2.1.1. Полиморфизм гена ангиотензин-превращающего фермента (АСЕ). На первом этапе мы определяли распространенность генотипов в исследуемой выборке. Так, частота встречаемости варианта ОБ гена АСЕ составляла 28%, ГО- 51,4% и II -20,6%. При сравнении частот встречаемости аллелей в двух группах, были получены следующие результаты (см. диаграмму 1).

Диаграмма 1. Сравнение частот встречаемости аллелей гена АСЕ в двух группах.

Как видно из диаграммы, частоты встречаемости вариантов гена АСЕ в группе 1 составляли: И-26,0%, 1/Е) 41,0%, О/В 33,0%; в группе 2- 11,4%, 60,5% и 23,7% соответственно. При сравнении распространенности генотипов выявлено, что в группе 1 достоверно чаще встречался вариант II (р=0,03), а также намечалась тенденция к более частой встречаемости гена БО в группе пациентов (р=0,06), что соответствует данным литературы. В группе контроля достоверно чаще встречался генотип 1/Е) (р=0,002). Относительный риск развития (ОР) артериальной гипертонии составлял 1,65 для пациентов с ОБ генотипом (доверительный интервал (ДИ) 0,84-2,8). Для генотипа ГО ОР развития АГ составил 0,68 (ДИ 0,25-0,75), что указывает на возможную протективную роль 1-аллеля. Однако, в нашей выборке было отмечено большее носительство II генотипа у пациентов группы 1, что противоречит мировым данным и может быть объяснено небольшим объемом выборки.

2.1.2. Анализ полиморфных маркеров гена АвТЯ.

При анализе полиморфных маркеров гена АвТЯ по группам и между собой были получены следующие результаты: частота встречаемости варианта АА гена АСТИ в выборке составила 51,8%, гена АС 40,3%, гена С С -7,8% . При сравнении групп между собой, в группе пациентов распределение генотипов составляло: АА-48,0%, АС- 48,0% и СС -4,0%; в группе контроля 55,2%, 33,6% и 11,2% соответственно (см. диаграмму 2). При сравнении частот распределения между группами, оказалось, что достоверно чаще полиморфизм АС встречается в группе пациентов (р=0,05), а для аллеля СС-показана тенденция к его наибольшей встречаемости в группе контроля (р=0,07), что несколько расходится с мировыми данными и может быть объяснено недостаточным количеством наблюдений. ОР развития АГ у пациентов, носителей аллеля АС составляет 1,43 (ДИ 1,01-3,03) Диаграмма 2. Сравнение частот встречаемости аллелей гена АвТЯ в двух группах

%

1001

□ больные □ контроль

Ч

АЭТР АА АОТ1* АС АСТР СС

2.1.3. Анализ полиморфных маркеров гена АСГ.

Частоты встречаемости аллелей гена АСТ 235 в обеих группах составили: ММ -22,2%, МТ- 44,3% и ТТ 33,6%. При сравнении частот распределения между группами, было получено, что в группе пациентов: ММ-24,5%, МТ -42,9%, и ТТ-32,7%; а в группе контроля- 20%, 45,5% и 34,5% соответственно. Частоты встречаемости гена АвТ 174 в общей выборке составили: ТТ -72,2%, МТ - 24% и ММ -3,8%. При сравнении групп между собой, частоты встречаемости аллелей распределились следующим образом: в группе пациентов- ТТ-75,3%, МТ-22,7%, ММ-2,1%; в группе контроля -69,6%, 25,2% и 5,2% соответственно.

При сравнении распределения частот аллелей в группах не было получено достоверных различий (см.диаграмму 3).

Диаграмма 3. Сравнение частот встречаемости аллелей гена АвТ 174 и 235 в двух группах

100 75

% 50 25 0

2.1.4. Анализ ассоциаций гена ]ЧО-синтазы (еМ)8) и артериальной гипертонии.

Распределение аллелей гена еЫОЗ в обеих группах составляет- для алелля Ов 57,7%, для аллеля вТ- 36,3% и для ТТ - 6%. При сравнении частот распределения аллелей еКЮБ в двух группах было получено, что в группе 1

распространенность генотипа составила для аллеля вО -50,5%; для СТ-41,9% и для ТТ - 7,5%; в группе здорового контроля - йб -63,9%, СТ-31,5%, ТТ - 4,6% соответственно. При анализе частот распределения аллелей гена е>Ю8 выявлено, что благоприятный вариант гена вв чаще встречается в здоровой группе контроля (63,9 против 50,5; р=0,028), при этом ОР развития АГ у пациентов с наличием варианта вй гена еЫОБ снижен и составляет 0,79 (0,32; 1,01). Гетерозиготный вариант гена ОТ чаще встречался в группе больных, нежели в группе контроля (41,9 против 31,5; р=0,0642). Распределение варианта ТТ достоверно не различается в группах, (см таблицу 4)

Таблица 4. Сравнение распределения аллелей гена еЫОБ в обеих группах.

1 группа п=102 2 группа п=120 Р ОР(ДИ)

ее 50,5 (47) 63,9 (69) 0,0285 0,79(0,32; 1,01)

СТ 41,9(39) 31,5(34) 0,0642 1,33 (0,88; 2,8)

ТТ 7,5 (7) 4,6 (5) 0,207 1,63 (0,5; 5,4)

2.1.5. Анализ ассоциаций гена метилентетрагидрофолатредуктазы (МТНГО)

Для гена МТИБЯ частоты распределения аллелей распределились следующим образом: вариант СС - 40,8%, СТ -50% и ТТ -9,2% в обеих группах. При сравнении частот распределения между собой, в первой группе распределение аллелей составило: СС-36,6%, СТ-53,5%, ТТ- 9,9%. В группе контроля- - 44,4%, 47,0% и 8,5% соответственно. При сравнении распределения частот генов в двух группах не было получено достоверной корреляции с развитием АГ (см. таблицу 5).

Таблица 5. Сравнение распределения аллелей гена метилентетрагидрофолатредуктаза (МТНРЯ) в обеих группах.

1 группа п=102 2 группа 11=120 Р ОР(ДИ)

сс 36,6 (37) 44,4 (52) 0,1213 0,82 (0,4- 1,24)

ст 53,5(54) 47,0 (55) 0,1714 1,14(0,75-2,19)

тт 9,9(10) 8,5(10) 0,367 1,16(0,28-2,13)

2.1.6. Сочетания генов.

При исследовании сочетания генов было получено, что в группе пациентов достоверно чаще встречалось сочетание гетерозиготного варианта гена АСП1 и гетерозиготного варианта гена АОТ 235. Относительный риск развития АГ у пациентов-носителей такого сочетания составлял 2,95 (ДИ 1,45-5,97).

Таблица 6. Сравнение сочетания генов в обеих группах.

1 группа N=102 2 группа N=120 Р ОР (95% ДИ)

ЛП (см) АСТЯ АС-КАСТ 235 МТ 28,4% 11,9% 0,02 2,95 (1,45- 5,97)

При анализе других сочетаний генов не было получено достоверных различий в распределении аллелей в основной и контрольной группах. 2.1.7 Зависимость морфологических показателей миокарда от аллелей генов РААС, гена еШБ и гена МТЫИ*.

Нами были изучены различия морфологических показателей миокарда (фракция выброса, размеры левого предсердия и левого желудочка, толщины межжелудочковой перегородки и задней стенки левого желудочка, масса миокарда левого желудочка и индекс массы миокарда левого желудочка) у

пациентов-носителей различных генотипов (объединены группы 1 и 2, сравнение проводилось по наличию или отсутствию носительства генотипа). Были получены следующие результаты (см. таблицу 7) Таблица 7.Распределение вариантов аллелей генов РААС, гена еМОБ и гена ШОТК и показателей ЭХОКГ (сравнение 2-х независимых групп по методу Манна-Уитни).

ФВ% ЛП (см) КДР лж (см) МЖП (см) ЗСЛЖ (см)

АСЕ - ИИ 64,61 ±1,049 Р=0,34 3,87±0,07 Р=0,032 5,08±0,063 Р=0,704 1,11±0,024 Р=0,53 1,09±0,02 Р=0,13

АСЕ-Ш 63,85±0,75 Р=0,99 3,66±0,04 Р=0,017 5,11±0,057 Р=0,74 1,06±0,018 Р=0,058 1,029±0,014 Р=0,008

АСЕ-II 62,85±1,08 Р=0,3 3,78±0,07 Р=0,61 5,10±0,08 Р=0,97 1,14±0,06 Р=0,1 1,1 ±0,04 Р=0Д2

АвШ-АА 64,01±0,675 Р=0,82 3,72±0,04 Р=0,54 5,11±0,04 Р=0,87 1,08±0,026 Р=0,43 1,05±0,019 Р=0,57

АвТЯ-АС 63,65±0,64 Р=0,67 3,77±0,05 Р=0,53 5,07±0,063 Р=0,83 1,12±0,02 Р=0Д1 1,08±0,017 Р=0,28

АвТЯ-СС 64,78±2,32 Р=0,67 3,74±0,18 Р=0,99 5,12±0,12 Р=0,91 0,97±0,03 Р=0,09 1,01±0,03 Р=0,29

АСТ174-ТГ 64,25±0,59 Р=0,44 3,75±0,04 Р=0,38 5,13±0,047 Р=0,16 1,09±0,022 Р=0,7 1,06±0,016 Р=0,57

АСТ174-МТ 62,59±1,31 Р=0,16 3,66±0,09 Р=0,33 5,06±0,068 Р=0,61 1,07±0,028 Р=0,68 1,04±0,021 Р=0,46

АвТ 174-ММ 65,17±2,31 Р=0,64 3,85±0,09 Р=0,53 4,9 5±0,084 Р=0,39 1,12±0,05 Р=0,69 1,06±0,04 Р=0,97

АСТ235-ТТ 63,76±1,0 Р=0,76 3,7±0,054 Р=0,56 5,07±0,06 Р=0,63 1,13±0,04 Р=0,1 1,05±0,018 Р=0,74

АСТ235-МТ 63,3 5±0,855 Р=0,28 3,78±0,06 Р=0,25 5,17±0,06 Р=0,12 1,07±0,024 Р=0,49 1,07±0,023 Р=0,68

АСТ235-ММ 65,3 8±0,866 Р=0,14 3,74±0,07 Р=0,95 5,03±0,068 Р=0,3 1,06±0,027 Р=0,34 1,04±0,024 Р=0,52

ЫОБ -Ов 64,19±0,72 Р=0,36 3,76±0,04 Р=0,95 5,08±0,048 Р=0,58 1,1±0,017 Р=0,84 1,07±0,014 Р=0,24

N08 -СТ 63,46±0,89 Р=0,б8 3,7±0,06 Р=0,21 5,12±0,07 Р=0,74 1,08±0,03 Р=0,48 1,03±0,019 Р=0,045

N08-ТТ 61,8±1,77 Р=0,32 4,07±0,166 Р=0,025 5,17±0,146 Р=0,65 1,16±0,11 Р=0,35 1,14±0,11 Р=0,13

мтста -СС 63,62±0,83 Р=0,б6 3,79±0,064 Р=0,28 5,17±0,06 Р=0,19 1,088±0,02 Р=0,80 1,058±0,017 Р=0,67

МТНРЯ- СТ 64,07±0,71 Р=0,76 3,73±0,05 Р=0,79 5,05±0,046 Р=0,19 1,106±0,028 Р=0,48 1,07±0,19 Р=0,27

мюта-тт 63,31±1,64 Р=0,74 3,66±0,06 Р=0,54 5,12±0,155 Р=0,87 1,02±0,028 Р=0,19 0,99±0,03 Р=0,07

Таблица 7. Распределение вариантов аллелей генов РААС, гена еМОБ и гена МЮТЛ и показателей ЭХОКГ (Продолжение).

ММЛЖ(г) ИММЛЖ (г/м^)

217,15±8,15 107,7±3,97

АСЕ-00 Р=0,42 Р=0,612

201,7±4,54 102,5±2,46

АСЕ-Ю Р=0,07 Р=0,143

222,87±17,12 111,05±6,88

АСЕ - II Р=0,2 Р=0,23

210,88±7,83 104,9б±3,2б

АОГС-АА Р=0,97 Р=0,64

214,32±6,53 108,2±3,3

АСТИ-АС Р=0,56 Р=0,3

188,72±9,9 96,7±5,38

АСТЯ-СС Р=0,26 Р=0,34

212,±5,09 107,26±2,57

АвТ 174-ТТ Р=0,82 р=0,68

204,38±8,01 104,12±3,85

АСТ174-МТ Р=0,51 Р=0,7

204,81±15,78 100,72±7,66

АСТ174-ММ Р=0,81 Р=0,64

208,74±6,44 105,19±3,19

АвТ 235 - ТТ Р=0,8 Р=0,87

217,21 ±9,55 107,74±4,12

АйТ 235 - МТ Р=0,24 Р=0,43

201,01±8,63 102,87±4,29

АСТ 235- ММ Р=0,29 Р=0,48

212,±5,09 107,26±2,57

ШБ -00 Р=0,82 р=0,68

202,86±7,06 103,4±3,69

ШБ -ОТ Р=0,19 Р=0,38

249,8б±49,86 115,75± 17,83

N08-ТТ Р=0,042 Р=0,27

214,07±6,59 107,54±3,21

МЮТЯ -СС Р=0,63 Р=0,54

МТНРЯ- СТ 210,78±7,71 105,54±3,31

Р=0,97 Р=0,85

МЮТК-ТТ 192,37±5,26 97,06±2,35

Р=0,23 Р=0,21

Как видено из таблицы, было получено, что у лиц-носителей генотипа ББ гена АСЕ определялись достоверно большие размеры ЛП (р=0,032) по сравнению с пациентами-носителями генотипа II и ГО.

При исключении из расчетов пациентов с перенесенным инфарктом миокарда было получено, что у пациентов с ОБ генотипом гена АСЕ достоверно больше размеры левого предсердия по сравнению с лицами-носителями других генотипов гена АСЕ (Н+Ю): 3,84 против 3,66, р=0,028. У лиц, носителей генотипа ГО такие показатели, как размеры левого предсердия, масса миокарда левого желудочка, толщина межжелудочковой перегородки и толщина задней стенки левого желудочка была достоверно меньше, чем у лиц, имеющих другие варианты генотипа АСЕ (р<0,05). При аналогичном анализе различий в показателях ЭХО КГ у пациентов с различными генотипами генов АСТИ, АОТ 235 и 174 и гена МШРЯ достоверных различий получено не было.

При изучении различий показателей ЭХО КГ и аллелей гена еИОБ, получено, что у лиц, носителей варианта ОТ гена еЖ)8, толщина ЗСЛЖ была достоверно меньше, чем у лиц, носителей других генотипов. А у лиц, носителей неблагоприятного варианта гена Ж^ТТ размеры левого предсердия и масса миокарда левого желудочка (ММЛЖ) были достоверно больше, нежели у носителей других генотипов гена еЫ08. У пациентов с неблагоприятным ТТ генотипом гена еЫОБ, при исключении из исследования пациентов с перенесенным ИМ были достоверно больше размеры ЛП, МЖП, ЗСЛЖ, ММЛЖ и ИММЛЖ (см. таблицу 8). Таблица 8. Параметры ЭХО КГ у пациентов- носителей различных вариантов аллелей е>Ю8 (исключая пациентов с перенесенным ИМ).

N08 ссз+ет N08 ТТ Р

ЛП (см) 3,76±0,04 4,03±0,2 0,044

КДР ЛЖ (см) 5,0б±0,03 5,27±0,16 0,157

МЖП (см) 1,08±0,01 1,22±0,13 0,04

ЗСЛЖ (см) 1,05±0,01 1,18±0,13 0,03

ММЛЖ 206,75±4,61 274,51±59,2 0,04

иммлж 104,1±2,29 123,8±21,43 0,05

2.1.8. Сравнение распределения генов РААС, гена eNOS и гена метнлентетрагидрофолатредуктазы у пациентов с различными стадиями АГ, ожирением, курением и отягощенной наследственностью.

При анализе распространенности исследуемых аллелей среди всех пациентов 2-х групп с отягощенной и неотягощенной наследственностью не было получено различий в распределении генов. При сравнении пациентов с отягощенной и неотягощенной наследственностью по группам было получено, что аллель NOS ТТ несколько чаще встречался в группе без отягощенной наследственности (5,4 против 0; р=0,05). Таким образом, скорее всего, исследуемые гены не определяют наследственный характер сердечнососудистых заболеваний в семье.

При сравнении пациентов с таким фактором риска, как курение не было получено достоверных различий в распространенности исследуемых аллелей. Сочетание курения и неблагоприятных аллелей исследуемых генов также не приводило к увеличению риска развития АГ.

При сравнении частот распределения аллелей генов РААС, гена eNOS и гена MTHFR и стадией АГ достоверной взаимосвязи получено не было (р>0,05). Также не было получено достоверной взаимосвязи между исследуемыми аллелями и степенью ожирения (р>0,05). При объединении пациентов с повышенным ИМТ в одну группу вне зависимости от стадии ожирения также не было получено достоверной корреляции между наличием ожирения и развитием АГ (р>0,05). Выводы:

1. При анализе частот встречаемости потенциально неблагоприятных полиморфных аллелей генов-кандидатов артериальной гипертонии в общей исследуемой выборке было получено, что вариант DD гена АСЕ встречался с частотой 28%, вариант СС гена AGTR 7,8%, вариант 174ММ гена AGT -3,8%, вариант 235 ТТ гена AGT- 33,6%, вариант ТТ гена NOS - 6% и вариант

ТТ гена MTHFR- 9,2%; при этом распространенность аллелей DD АСЕ, СС AGTR, AGT 174 M, AGT 235 Т и ТТ NOS существенно отличалось от аналогичных европейских выборок.

2. При сравнении распространенности исследуемых генов в группах пациентов и здорового контроля в группе пациентов с артериальной гипертонией несколько чаще встречается неблагоприятный вариант DD гена АСЕ, а в группе здорового контроля- достоверно чаще благоприятный вариант GG гена eNOS.

3. При анализе сочетанного взаимодействия генов было получено, что в группе пациентов с артериальной гипертонией достоверно чаще встречалось сочетание гетерозиготных вариантов генов AGTR АС и AGT 235 МТ, ОР развития артериальной гипертонии при наличии этого сочетании составляет 2,95 (95% ДИ 1,45; 5,97).

4. При изучении показателей ЭХО КГ и точечных мутаций исследуемых генов получено, что:

1) У лиц имеющих неблагоприятный генотип DD гена АСЕ наблюдались достоверно большие размеры левого предсердия, по сравнению с носителями генотипов II и ГО; достоверность сохраняется при исключении из анализа пациентов с перенесенным инфарктом миокарда.

2) У пациентов с неблагоприятным вариантом ТТ NOS наблюдались достоверно больше размеры левого предсердия и массы миокарда ЛЖ, по сравнению с носителями варианта GG и GT гена eNOS; при исключения из анализа пациентов с перенесенным инфарктом миокарда пациенты с ТТ генотипом гена eNOS имеют достоверно большие размеры левого предсердия, межжелудочковой перегородки, задней стенки левого желудочка, большую массу миокарда левого желудочка и индекс массы миокарда левого желудочка.

5. Не было получено достоверных различий в распространенности полиморфных маркеров исследуемых генов в зависимости от стадии АГ,

наличия отягощенной наследственности в анамнезе и ожирения в исследуемой выборке. Практические рекомендации.

1. У русских мужчин, проживающих в Центральном регионе России, выявление при генетическом типировании гетерозиготных вариантов гена АСТИ. АС и гена АСТ 235 МТ должно приводить к более тщательному наблюдению и профилактике развития артериальной гипертонии в связи с более высоким риском развития АГ у носителей этого сочетания генов;

2. Целесообразно более раннее выявление лиц с вариантом ОБ гена АСЕ и ТТ генотипом гена еЫОБ с целью возможной профилактики развития ремоделирования миокарда.

'пнсок работ по теме диссертации:

1. Зайкина A.A. Савинецкая (Сильвестрова) Г.А., Маршева О.В., Погода Т.В., Генерозов Э.В., Сыркин A.JI. Полиморфизм генов-кандидатов и их вклад в развитие ИБС у мужчин // В сборнике XIV Российского национального конгресса"Человек и лекарство". Тез. докл. — Москва, 2007 г.—С. 96

2. A.A. Зайкина, Г.А. Савинецкая (Сильвестрова), Д.В. Герок, О.В. Маршева, Т.В. Погода, Э.В. Генерозов, А.Л. Сыркин. П Генетический полиморфизм при ишемической болезни сердца// Кардиология, 2008. т.48. №1. С.62-65

3. Сильвестрова Г.А, Голубева A.A., Сыркин A.JL, Погода Т.В., Генерозов Э.В. Полиморфные маркеры генов ренин-ангиотензин-альдостероновой системы и гена NO-синтазы в диагностике артериальной гипертонии у мужчин Центрального региона России // Кардиология и сердечно-сосудистая хирургия, 2008 т.1, №5. С.40-45

4. Савинецкая (Сильвестрова) Г.А., Голубева A.A., Погода Т.В., Генерозов Э.В. Влияние генов ренин-ангиотензин-альдостероновой системы и гена NO-синтазы на развитие артериальной гипертонии// Клиническая медицина, 2008. т.86. №8. С.12-17;

5. Сильвестрова Г.А., Голубева A.A., Сыркин A.JL, Генерозов Э.В., Погода Т.В., Терехов В.Н., Потиевский Б.Г. Полиморфизм генов-ренин-ангиотензин-альдестероновой системы и гена NO-синтетазы и их влияние на развитие артериальной гипертензии у русских мужчин московской популяции// В сборнике XV Российского национального конгресса" Человек и лекарство". Тез. докл. — Москва, 2008 г.— С. 112

6. Голубева A.A., Савинецкая (Сильвестрова) Г.А., Погода Т.В., Терехов В.Н., Потиевский Б.Г., Генерозов Э.В., Сыркин АЛ. Изучение некоторых генов-кандидатов и их вклад в развитие ишемической болезни сердца// В сборнике XV Российского национального конгресса «Человек и лекарство». Тез.докл.-Москва,2008 г.-с.394

Подписано в печать 22.12.08 Формат 60x84/16. Бумага офсетная.

_Тираж 100 экз. Заказ № 885 _

Отпечатано в службе множительной техники ГУ РОНЦ им. H.H. Блохина РАМН 115478, Москва, Каширское ш., 24