Автореферат и диссертация по медицине (14.03.06) на тему:Поиск новых средств фармакологической регуляции болевой чувствительности среди фрагментов атипичных опиоидных пептидов
Автореферат диссертации по медицине на тему Поиск новых средств фармакологической регуляции болевой чувствительности среди фрагментов атипичных опиоидных пептидов
На правах рукописи
ГУЗЕВАТЫХ Людмила Сергеевна
Поиск новых средств фармакологической регуляции болевой чувствительности среди фрагментов атипичных опиоидных пептидов
14.03.06 - фармакология, клиническая фармакология
Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук
Москва-2009
1 8 ФЕВ 2010
003491942
Работа выполнена в Учреждении Российской академии медицинских наук Научно-исследовательский институт фармакологии имени В.В. Закусова РАМН (НИИ фармакологии имени В.В. Закусова РАМН)
Научные консультанты:
доктор медицинских наук, профессор Воронина Татьяна Александровна
академик РАН,
доктор химических наук, профессор Мясоедов Николай Федорович
Официальные оппоненты:
доктор биологических наук Коваленко Лариса Петровна
член-корр. РАМН, доктор медицинских наук, профессор Решетняк Виталий Кузьмич член-корр. РАН, доктор химических наук, профессор Цетлин Виктор Ионович
Ведущая организация:
Московская медицинская академия им. И.М.Сеченова
Защита диссертации состоится 2010 года, в............часов на
заседании диссертационного совета Д.001.024.01 при НИИ фармакологии имени В.В. Закусова РАМН по адресу: 125315, Москва, ул. Балтийская, 8.
С диссертацией можно ознакомиться в Ученой части НИИ фармакологии имени В.В. Закусова РАМН.
Автореферат разослан...................................года.
Ученый секретарь диссертационного совета доктор мед. наук
Е.А. Вальдман.
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность темы
Поиск новых высокоэффективных анальгетиков является актуальной проблемой современной фармакологии, поскольку применяемые в клинической практике обезболивающие препараты не удовлетворяют требованиям эффективности и безопасности (M.JI. Кукушкин, В.К. Решетняк, 1999; С.С.Павленко, 1999; Г.Н. Крыжановский, 1999; В.В. Чурюканов, М.В. Чурюканов, 2002; M.JI. Кукушкин, Н.К. Хитров, 2004; Trescot et al., 2008; Осипова, 2009). Так, наркотические анальгетики характеризуются сильным обезболивающим действием, что обеспечивает возможность их использования при травмах и заболеваниях, сопровождающихся выраженным болевым синдромом (злокачественные новообразования, инфаркт миокарда и другие). Однако, наряду с анальгетическим эффектом, они оказывают влияние на центральную нервную систему человека, проявляющееся в развитии эйфории, а при их повторном применении возникает привыкание, наблюдаются синдромы психической и физической зависимости. Кроме того, увеличение дозы препарата сопровождается риском угнетения дыхательного центра (Э.Э. Звартау и др, 2007; Wintle, 2008).
Ненаркотические анальгетики не оказывают влияния на дыхательный центр, не вызывают эйфории и явлений физической и психической зависимости. Однако их анальгегическая активность проявляется, главным образом, при невралгических, мышечных, суставных болях, головной и зубной боли, а при сильной боли, связанной с травмами, полостными оперативными вмешательствами, злокачественными новообразованиями и т.п., они практически не эффективны; некоторые ненаркотические анальгетики характеризуются хорошими жаропонижающим и противовоспалительным эффектами. Нежелательным побочным действием этих препаратов является негативное влияние на желудочно-кишечный тракт, систему кроветворения, выводящую систему (E.JI. Насонов, 1999; А.Ю. Беспалов, Э.Э. Звартау, 2000; В.С.Шухов, 2001; Ю.Б. Белоусов, А.Н.Грацианская, 2008; Krenzischek et al., 2008).
В настоящее время общепризнанна ведущая роль эндогенных пептидов в регулировании различных систем организма (И.П. Ашмарин и др., 1988). В нашей стране успешно развивается направление создания лекарственных средств на основе регуляторных пептидов. Внедрены в клиническую практику ноотроп и нейропротектор семакс (ИМГ РАН (Н.Ф. Мясоедов, И.П. Ашмарин, А.А. Каменский, В.Н. Незавибатько и др., 1982)), ноотроп ноопепт (НИИ фармакологии имени В.В. Закусова РАМН (С.Б. Середенин, Т.А. Воронина, Т.А. Гудашева, Р.У. Островская и др., 1995), противоязвенный препарат даларгин (ИЭК РКНПК МЗ РФ (М.И. Титов, Ж.Д. Беспалова и др., 1983)), иммуномодулятор тимоген (ИБХ им.
академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН и Военно-медицинская академия им. С.М. Кирова (В.И. Дейгин, В.Х. Хавинсон и др., 1989)).
Существует несколько стратегий поиска веществ пептидной структуры с заданной фармакологической активностью. В НИИ фармакологии имени В.В. Закусова РАМН успешно применяется подход конструирования новых пептидных лекарственных средств как трехмерных топологических аналогов известных непептидных лекарственных соединений (Т.А. Гудашева, 1985-2008). Также часто используют множественное выравнивание аминокислотных последовательностей белковых структур, которое позволяет определить общность происхождения, функцию отдельных аминокислотных остатков, консервативность определенных участков и совпадение пространственных структур (multiple alignments) (Minkiewicz et al., 2008). Другой подход связан с поиском закономерностей в последовательностях аминокислот, способствующих эффективно и специфично взаимодействовать с рецепторами (Bakalkin et al., 1992).
В нашем исследовании был выбран подход, связанный с поиском минимальной аминокислотной последовательности, отвечающей за проявление анальгетического эффекта, среди эндогенных опиоидных пептидов (ОП), и разработка на ее основе новых соединений.
Атипичные ОП образуются из разных предшественников, и не содержат консервативной последовательности Tyr[Phe]-Gly-Gly-Phe-Met[Leu], ответственной за связывание с опиоидными рецепторами (OP) (Corbett et al., 2006). Особый интерес представляют эндоморфины (Tyr-Pro-TrptPhcj-Phe-NHi), дерморфины (Tyr-D-Ala-Phe-Gly-Tyr-Pro-Ser-NH2), и пептиды группы Туг-МИФ-1 (Tyr-Pro-Leu[Trp]-Gly-NH2), которые преимущественно связываются с ц-ОР (Broccardo et al., 1981; Zadina et al., 1996; Tseng et al., 2000). Попыток выявить общую последовательность среди атипичных ОП ранее не проводилось. Эндоморфины синтезируются в мозге млекопитающих, в том числе человека, и проявляют активность при центральном введении (Sakurada et al., 2008). Высокая анальгетическая активность этих пептидов сопровождается побочными эффектами, характерными для морфина (Czapla et al., 2000; Soignier et al., 2004; Chen et al., 2003). Дерморфины проявляют анальгетическое действие при центральном и периферическом введении (Broccardo et al., 1981; Negri et al., 2000), при этом не влияют на частоту дыхания даже в кататонических дозах (Paakkari et al., 1990), вызывают более медленное развитие толерантности по анальгетическому действию и менее выраженный синдром отмены по сравнению с морфином (Broccardo et al., 1985; Negri et al., 1995; Riba et al., 2002). Туг-МИФ-1 оказывает антиопиоидное действие, уменьшая анальгетическую активность и препятствуя развитию толерантности при использовании морфина (Erchegyi et al., 1993; Pan, Kastin, 2007), при этом в более высоких дозах обладает собственным
анальгетическим действием (2ашйгоуа е! а]., 2003). Таким образом, поиск новых потенциальных анальгетиков на основе общей структуры атипичных ОП представляется достаточно перспективным, поскольку пептиды должны обладать менее выраженными побочными эффектами, характерными для классических опиоидов.
Целью настоящего исследования явился поиск новых средств фармакологической регуляции болевой чувствительности на основе функционально-значимой минимальной аминокислотной последовательности атипичных опиоидных пептидов.
В соответствии с поставленной целью в работе решались следующие задачи:
1. Выявить наиболее часто встречающийся минимальный аминокислотный фрагмент в первичных последовательностях 60 атипичных ОП и исследовать его (Туг-Рго) анальгетический эффект, психотропную активность, механизм действия и побочное действие при системном введении.
2. Исследовать влияние модификации остатка пролина в молекуле Туг-Рго-содержащего атипичного ОП дерморфина (ДМ) на проявления анальгетической, психотропной активности и побочных эффектов.
3. Исследовать структурно-функциональные взаимоотношения в ряду удлиненных и модифицированных по остатку пролина аналогов Туг-Рго на проявление анальгетической и опиоидной активности, и отобрать наиболее перспективные для дальнейшего углубленного изучения соединения.
4. Определить спектр анальгетической активности, эффективность и продолжительность действия при разных путях введения и исследовать нейропсихотропную активность отобранных соединений.
5. Изучить механизм действия отобранных соединений.
6. Изучить побочные эффекты отобранных соединений, в том числе влияние на дыхание, оценить синдром отмены, развитие толерантности и терапевтическую широту.
7. Изучить распределение по органам и тканям отобранных соединений.
8. Провести сравнительные исследования отобранных соединений с эталонными препаратами.
Научная новизна. Выявлена последовательность Туг-Рго, встречающаяся у большинства (63%) атипичных ОП и продемонстрировано, что именно она является минимально необходимой для проявления анальгетической активности. Впервые показано, что дипептид Туг-Рго в дозах 0.1 - 10.0 мг/кг при системном введении проявляет анальгетическую активность в тестах соматической и висцеральной боли при активации ноцицепторов химическим, термическим и механическим стимулами, а также обладает противовоспалительным действием. Анальгетическое действие
дипептида реализуется через налоксон-чувствительные механизмы; Туг-Рго имеет низкое сродство к периферическим 5-ОР, и не взаимодействует с периферическими ц-ОР. Туг-Рго в дозах 1 - 800 мг/кг не влияет на частоту дыхания и не вызывает гибели мышей в течение последующих 24 часов. Установлено, что фармакологическая активность атипичных ОП не зависит от положения последовательности Туг-Рго в молекуле и модификация С- и //-конца последовательности -Туг-Рго- природными аминокислотами сохраняет анальгетическую активность полученных пептидов, что открывает возможности конструирования новых пептидов, стойких к протеолизу и обладающих анальгетическим действием.
Показано, что стереохимическая модификация или дегидрирование остатка пролина в молекуле атипичного ОП ДМ (Туг-Р-А1а-РЬе-01у-Туг-Рго-5ег-ЫН?) не изменяет анальгетическую активность при химическом и механическом раздражении и уменьшает противовоспалительное действие. Наряду с этим, дегидрирование остатка пролина в молекуле ДМ приводит к ослаблению противовоспалительного и анальгетического действия при механическом раздражении ноцицепторов, но вызывает появление анксиолитической и потерю противосудорожной активности.
При изучении 22 оригинальных пептидов выявлена новая группа соединений, обладающих анальгетическим действием, общей формулы А-Туг-Рго(Д-Рго, ДРго, Д-ДРго, Нур)-В-Х, где А, В - природные аминокислоты, а X - метальная или амидная группировка. Установлено, что анальгетическая активность этих пептидов не зависит от взаимодействия с периферическими ц- и 8-ОР подвздошной кишки морской свинки (ПКМС) и семявыносящего протока мыши (СПМ), что предполагает низкий риск развития лекарственной зависимости. Среди пептидов этой группы отобраны Туг-Рго-[ДЦ-5ег-МН2 и Туг-О-Рго-Бег-ИНг, которые обладают наиболее высокой анальгетической активностью. Установлено, что в смеси стереоизомеров Туг-Рго-[Д£]-5ег-№12 (1:1), получаемой в результате амидирования Туг-Рго-£-8ег-ОМе, анальгетической активностью обладает только Д-стереоизомер (Туг-Рго-0-8ег-ЫН2).
Впервые показано, что Туг-Рго-[Д£]-8ег-МН2 и ТугчО-Рго-Зег-ЫН2 в дозах 0.1 -10.0 мг/кг при системном введении проявляют анальгетическое действие в тестах по оценке болевой чувствительности, основанных на активации ноцицепторов термическими, химическими или механическим стимулами. Туг-Рго-[Д£]-8ег-ЫН2 активен на модели нейропатической боли; Тут-Д-Рго-Бег-ЖЬ оказывает прямое действие на первичные афференты ноцицептивного флексорного рефлекса. Анальгетическое действие Туг-Рго-[Д/,]-Зег-МН2 уменьшается при холодной (4°С) и жаркой (31-32°С) температуре окружающей среды.
Показано участие опиоидергической системы в анальгетическом действии Туг-Рго-[Д£]-5ег-КН2 и Туг-Д-Рго-Бег-ЖЬ: анальгетическая активность ослабляется неселективным антагонистом центральных ОР налоксоном и периферических ОР -
налоксоном метиодидом. Установлено, что Tyr-Pro-[AZ,]-Ser-NH2 и Tyr-Z)-Pro-Ser-NН2 взаимодействуют с «высокоаффинными» центрами связывания (1.5-3 нМ) ДМ и не взаимодействуют с «низкоафинными» (> 5 нМ). Tyr-Pro-[D,L]-Ser-NH2 и Tyr-D-Pro-Ser-NHj, в отличие от ДМ и морфина, проявляют слабое сродство (1С50 3.3x10"5 моль и 4.5х10"5 моль, соответственно) к периферическим р-ОР ПКМС и не обладают сродством (1С50 б.бхЮ"4 моль и б.ЗхЮ^моль, соответственно) к периферическим 8-ОР СПМ.
Установлено, что Tyr-[3H]Pro-[AZ,]-Ser-NH2 и Tyr-Z)-[3H]Pro-Ser-NH2 наиболее интенсивно распределяются в сильно васкуляризированных органах выделения (печень, почки) и меньше - в слабоваскуляризированных (мозг, легкие, сердце). Оба соединения выводятся из организма (t]/2ci из крови = 53.6 и 57.8 мин, MRT из крови = 43.2 и 46.1 мин, соответственно), а их протеолиз осуществляется ферментами крови, сердца, легких и мозга. В качестве основного меченного метаболита обнаруживаются пролин и £>-пролин, соответственно.
Научно-практическое значение. Выявлена новая группа оригинальных веществ регуляции болевой чувствительности общей формулы А-Туг-Ргоф-Рго, ДРго, В-ДРго, Нур)-В-Х, где А, В - природные аминокислоты, а X - метильная или амидная группа, с отличным от классических ОП механизмом действия (зарегистрирован патент РФ №2286169 (приоритет от 18.04.2005), подана заявка на международный патент WO 2008/020778 А1 (от 21.02.2008)). Преимущества наиболее активных соединений этой группы перед морфином заключаются в отсутствии угнетающего влияния на дыхательный центр, более медленном развитии толерантности по анальгетическому действию и достоверно меньшей выраженностью синдрома отмены, в связи с чем, новые соединения имеют большую, чем морфин, безопасность и терапевтическую широту. При сравнении с диклофенаком пептиды активны в меньших дозах и обладают более широким спектром анальгетических эффектов. Отобранные пептиды Tyr-Pro-[D,£]-Ser-NH2 и Tyr-/?-Pro-Ser-NH2, сочетающие анальгетическую активность и безопасность применения, можно рассматривать в качестве базисных соединений для создания потенциального анальгетика пептидной природы.
Апробация работы. Основные результаты работы доложены на Международной конференции "Роль нейромедиаторов и регуляторных пептидов в процессах жизнедеятельности" (Минск, 1999), Международной научной конференции «Новые лекарственные средства: синтез, технология, фармакология, клиника» (Минск, 2001), Всероссийском симпозиуме «Механизмы терморегуляции и биоэнергетики: взаимодействие функциональных систем» (Иваново, 2002), III Съезде биохимического общества (Санкт-Петербург, 2002), 10- German-Russian Peptide Symposium (Turingia, 2003), 8- ECNP Regional Meeting (Moscow, 2005), I съезде
физиологов СНГ (Сочи, Дагомыс, 2005), IV международной научной конференции «Биологические основы индивидуальной чувствительности к психотропным средствам» (Москва, 2006), 15th World Congress of Pharmacology (Beijing, 2006), II международном междисциплинарном конгрессе «Нейронаука для медицины и психологии» (Судак, 2006), XVIII симпозиуме «Современная химическая физика» (Туапсе, 2006), Российских научно-практических конференциях с международным участием «Актуальные вопросы острой и хронической боли» (Самара, 2005) и «Хронические болевые синдромы» (Новосибирск, 2007), II и III съездах фармакологов России (Москва, 2003; Санкт-Петербург, 2007), I, II, III и IV Российских симпозиумах по химии и биологии пептидов (Москва, 2003; Санкт-Петербург, 2005; Пущино, 2007; Казань, 2009).
Объем и структура диссертации. Представленная работа состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, 5 глав результатов исследования, обсуждения результатов, выводов и списка литературы, содержащего 687 отечественных и зарубежных источников, приложения. Диссертация изложена на 297 страницах машинописного текста, содержит 54 таблицы и 74 рисунка.
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 44 печатные работы, среди них 16 в рекомендованных ВАК журналах.
МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
Эксперименты проводили на самцах нелинейных белых крыс массой 180-250 г, самцах нелинейных белых мышей и мышей линии СВА и С57/Ы6 массой 20-25 г, самцах морских свинок массой 500 г, самцах кроликов массой 3-4 кг, полученных из Центрального питомника лабораторных животных «Столбовая» Московской области. Животных содержали на постоянном доступе к корму и воде. Содержание и уход за животными, проведение экспериментов и эвтаназия осуществлялись в соответствии с требованиями Европейской конвенции по защите экспериментальных животных (86/609 EEC). Всего было проведено 1965 экспериментов.
В работе использовано 26 пептидов, из которых 22 оригинальных, в том числе меченные тритием Tyr-[3,4-3H Pro]-[D/]Ser-NH2 и Tyr-D-[3,4-3H Pro]-Ser-NH2, синтезированные в Институте молекулярной генетики РАН (под руководством академика РАН Н.Ф. Мясоедова), и реактивы фирмы «Sigma»: налоксон, налоксон метиодид, налтрексон, налоксон бензоилгидразон, налтриндол, АМ-251, 3-метоксиналтрексон, конканавалин А.
Пептиды вводили внутрибрюшинно (в/б), внутримышечно (в/м), внутривенно (в/в), внутрь (р.о.), интраназально (и/н) в виде водного раствора, в диапазоне доз 0.0110.0 мг/кг веса животного (объем вводимого раствора составлял 1 мл/кг массы крыс и 10 мл/кг массы мышей, при и/н введении вводили 20 мкл на крысу). Блокаторы вводили подкожно. Контрольные животные получали эквивалентный объем
6
дистиллированной воды. Животных использовали однократно. Каждая экспериментальная группа состояла из 8-15 животных.
Исследования проводили в соответствии с «Руководством по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ», (ред. - Р.У. Хабриев, 2005), где дано подробное описание используемых в работе методов. Анальгетическая активность изучалась в тестах: отдергивания хвоста при действии горячей воды (54°С) и луча света (установка 602000-TF-AD-MR-01 фирмы TSE-system, Германия) (D'Amor et al., 1941), горячей пластины (52°С) (Woolfe, Macdonald, 1944), уксусных корчей при действии 0.6% раствора уксусной кислоты (Chernov et al., 1967), формалиновых болей при действии 5% раствора формалина (Bannon et al., 1998), механической боли (Haffner, ¡929), на моделях нейрогенного (M.JI. Кукушкин и др., 1993) и центрального (M.JI. Кукушкин и др., 1999) болевого синдрома, флексорного рефлекса (M.J1. Кукушкин и др., 2003). Противовоспалительное действие изучали в тесте псевдоаллергической реакции, вызванной конканавалином А (Б.И. Любимов, Л.П. Коваленко и др., 2005).
Нейропсихотропное действие пептидов оценивали в тестах: открытое поле, приподнятый крестообразный лабиринт (Lister, 1987), конфликтная ситуация (Vogel et al., 1983), неизбегаемое плавание (Porsolt, 1979), поведенческое отчаяние в тесте вращающихся колес (Nomura et al., 1982), судорог, вызванных коразолом (Swinyard, 1969) и максимальным электрошоком (White, 1992). Влияние на суммарную биологическую активность мозга оценивали по ЭЭГ крыс (Т.А. Воронина, Л.Н. Неробкова, 2000). Электроды вживляли по координатам атласа Буреша (1991) в миндалину, гипоталамус, гиппокамп, сенсомоторную кору, ретикулярную формацию ствола мозга. Влияние на систему терморегуляции оценивали по ректальной температуре и температуре кожи хвоста животного (являющегося специфическим органом теплообмена у крыс), помещенного в холодную (4-6°С), термонейтральную (27-28°С) и жаркую среду (31-32°С) (Hart, 1971, Т.Г. Емельянова и др., 2008).
Для оценки побочных эффектов и терапевтической широты соединения измеряли частоту дыхания в минуту бодрствующих мышей и наркотизированных хлоралгидратом кроликов. ЛД50 рассчитывали по показателю гибели мышей через 24 часа после введения (Е.В. Арзамасцев и др., 2005). Развитие толерантности исследовали с использованием тестов отдергивания хвоста, уксусных корчей, открытого поля, вращающихся колес и конфликтной ситуации через 7, 14 и 28 дней после введения пептидов. Интенсивность синдрома отмены изучали по специфическим признакам при провокации налоксоном в дозе 10 мг/кг массы тела (Fernandes et al., 1977) и без провокации налоксоном после прекращения 28 дневного введения пептидов в тестах отдергивания хвоста и открытого поля.
JVs Семейство к-во структура Предшественник1 рецепторы' И 1 5 | к Примечание' Ссылки
Типичные опноидные пептиды
1 [Leu']-энкефалины 3 YGGFL ПЭ, ПД + +++ - нет Martinez et al., 1992
2 неоэндорфины 2 YGGFLRKYP ПД + +++ е-ОР Oka, Ncgishi, 1982 Houghten ct al., 1983
3 Динорфины 8 YGGFLRR ПД +/++ + +++ ORL, Pasternak ct al., 1999
4 [Met ]-энкефалины 17 YGGFM ПЭ. ПОМК ++ +++ - С-ОР Zagon et al., 1991
5 Р-Эндорфины 42 YGGFMK ПОМК +++ +++ - Е-ОР Nock ct al., 1993 Narita et al., 1998
6 Ксендорфины 2 YGGFIRKPDK ПКС А и В - - + [J'SlGTPyS Pattee et al., 2003
7 Орфанин-FQ /ноцисептины 3 Y[F]GGF ПОН - - + ORL, Mollcreau ct al., 1994
Атипичные опиондные пептиды
8 Эндоморфины 2 YPW[F]F- nh2 не обнаружен +++ + + нет Goldberg et al., 1998 Monory ct al.. 2000
9 Tyr-MIF-1 3 YPL[K,W]G -NHa данных нет +/- - - модулятор, М;>Ц|, U/CB Tyr-M1F-1; нпсх. per. рец. морфина Zadina, Kastin, 1985
10 Дерморфины 9 YaFG[W]YP ПДЛ В/С, ПДМ +++ + -/+ е-ОР Montecucclii et al., 1981 Giagnoni etal., 1984
11 Дельторфины 5 Ym[i,aJFH LMD-HHi ПДЛ В/С, ПДМ + +++ -/+ нет Erspamer et al., 1989
12 Р-казоморфины 8 YPF Р-Казеин + + - ц/св Tyr-MIF-1 Zadina, Kastin, 1985 Zadina etal., 1990
13 а-казоморфины 3 YLGYL с^!-казеин - + +++ kj; к:; 5; к* -ОР; ССР Kampa et al., 1996
14 Лакторфины 2 YG[L]LF -nh2 а-/р-ЛА 7 ? 7 нет Mullally et al., 1996
15 ctsi-казоморфины YVPFP а5,-к;исин - - +++ Kj; к2; KJ-OP Kampa, etal., 1996
16 неоказоморфин 1 YFVEPF р-Казеин ? 7 7 нет Jinsmaa, Yoshikawa, 1999
17 Геморфины 10 LWYFWT р-цепь гемоглобина ++ + + модулятор EPS3; ц/св Туг-MIF-l; АТ«Рц; ингнб.ДПП Ш Zadina etal., 1990 Mocllcr et al., 1998 Lammcrich ct al., 2003 Lee et al., 2004
18 глютеновые экзорфины А 2 GYYP Глютен пшеницы - + - модулятор Fukudome et al., 1992
19 глютеновые экзорфины В 2 YGGW Глютен пшеницы - + - модулятор Fukudome et al., 1992
20 глютеновые экзорфины С 1 YPISL Глютен пшеницы - + - модулятор Fukudome et al., 1993
21 Глиадорфины 1 YPQPQPF Глиадин пшеницы о ? 7 нет Glamsta et al., 1991
22 Рубисколины 2 YPLDL Рубиско шпината - -н- - нет Yoshikawa et al., 2003
23 Сойморфины 3 YPFW конглицин сои + - - нет Ohinata et al., 2007
24 Цитохрофины 2 YPFT цитохром В + + + ц/св Tyr-MIF-1 Zadina etal., 1990
25 Серорфины 1 YGFQNA БСА ? 7 7 нет Clare. Swaisgood, 2000
26 киоторфины/ неокиоторфины 2 YR БСА - - - выделение Met-энкефалина Takagi etal., 1982
' ПЭ - проэнкефалин; ПД - продинорфин; ПОМК - проогшомеланокоргин; ПДЛ - продельторфин; ПКС -предшественник ксендорфина; ПОН - препроорфанин-РО /ноцисептин; ПДМ - продерморфин; БСА - бычий сывороточный альбумин; ЛА - лактальбумин; ДПП - дипептилпептидаза; ц'св - центры связывания; 2 +++ - сильное связывание, ++ - среднее связывание; + - слабое связывание; - отсутствие связывания; 5 ССР - рецепторы соматостатина; АТРц - рецепторы антиотензина; БР - рецепторы бомбезина;
Связывание с периферическими ОР оценивали с использованием препаратов изолированных органов ПКМС (ц-ОР) и СПМ (5-ОР) (Broccardo et al., 1981). Связывание с центральными рецепторами оценивали по вытеснению [3Н]-ДМ из мест его специфического связывания с мембранной фракцией головного мозга крыс (H.A. Беляев и др., 1990). Для изучения динамики распределения и накопления пептида в тканях и органах крыс использовали меченные тритием пептиды (В.П. Шевченко и др., 2006). Изучали влияние соединений на содержание и оборот моноаминов и аминокислот в мозге крыс при использовании ВЭЖХ/ЭД и ВЭЖХ/ФД соответственно (B.C. Кудрин и др., 2005, П.М. Клодт и др., 2005).
Статистическую обработку данных проводили при использовании стандартных пакетов статистических программ Statistica 6.0, Microsoft Excel 2003 с приложением Attestat 10.6.1, STATGRAF (Stat. & Graph. Coip., USA), Pharm/PCS (ver. 4), Primer of Biostatictics (ver. 4.03). При сравнении характеристик массивов использовались параметрический t-Student тест, непараметрический Вилкоксона-Мэнна-Уитни и альтернативный метод Фишера (F-test). ЛД50, ТД50 и ЭД5() рассчитывали по методу Litchfield, Wilcoxon (1949).
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
I. Выявление функционально значимого фрагмента в аминокислотных последовательностях атипичных опиоидных пептидов, изучение его анальгетической и другой физиологической активности
Проведенный нами анализ литературных источников показал, что в настоящее время насчитывается более 140 ОП природного происхождения. По происхождению, структурным особенностям, спектру физиологической активности и специфичности к известным опиоидным рецепторам ОП были разделены в нашей работе на 26 семейств (табл. 1). Согласно классификации Teschemacher (1993) представители ОП образуют два подкласса: типичные и атипичные ОП. Типичные ОП образуются из предшественников проопиомеланокортина, проэнкефалина, продинорфина и проорфанина-РСУноцицептина (Corbett et al., 2006). Посттрансляционные изменения предшественников приводят к образованию активных пептидов, имеющих общую N-концевую последовательность Tyr[Phe]-Gly-Gly-Phe-Met[Leu], ответственную за связывание с опиоидными и орфановыми ORLi-рецепторами (Raynor et al., 1994). Типичные ОП характеризуются высоким сродством к ОР и выраженной анальгетической активностью. Атипичные ОП более разнородны по происхождению и специфичности к известным ОР. Анальгетическая активность некоторых атипичных ОП сопровождается низким сродством к ОР, что указывает на существование иных отличных от классических опиоидных механизмов снижения болевой чувствительности. Исходя из вышеизложенного, поиск минимальной структуры,
необходимой для проявления анальгетической активности, был осуществлен в подклассе атипичных ОП.
Анализ наиболее часто встречающегося аминокислотного фрагмента в этом подклассе выявил, что мини-консенсусом, объединяющим большую часть (63%) рассматриваемой группы является дипептидный фрагмент -Туг-Рго- (рис. 1).
Рисунок 1. Распространённость дипептидных фрагментов у атипичных ОП.
■1 -VT -I -1 -1 -1 -1 -1 -VI -1 -1 "I -1 -V -I в
ADEFGH I KLMNPQRSTVW Y *
А - Ala, D - Asp, Е - Glu, F - Phe, G - Gly, H - His, I - He, К - Lys, L - Leu, M - Met, N - Asn, P - Pro, Q - Gin, R - Arg, S - Ser, T - Thr, V - Val, W - Trp, Y - Tyr
Выявленная нами уникальная распространенность дипептидного фрагмента Туг-Рго среди представителей атипичных ОП указывает на его участие в формировании фармакофора, а дипептид Туг-Рго сам по себе может обладать функциональной активностью, в том числе анальгетическим действием.
В связи с этим в настоящем исследовании был изучен широкий спектр анальгетических эффектов дипептида Туг-Рго при его системном введении. Установлено, что дипептид Туг-Рго в дозах 0.1 - 10.0 мг/кг (в/б) обладает дозо-зависимым анальгетическим действием в тесте отдергивания хвоста (тест соматической боли) (рис. 2), по уровню ЭД50 (1.2 (2.0-Ю.7) мг/кг) дипептид активнее ДМ в 4.25 раз, не уступает морфину, диклофенак в данном тесте не эффективен (табл.2). В тесте формалиновых болей Туг-Рго в дозах 1.0 и 10.0 мг/кг вызывает дозо-зависимое уменьшение болевых реакций в I и II фазе, подобно наркотическим анальгетикам, тогда как НПВС, габапентин и антагонисты NMDA рецепторов активны только во II фазе (Le Bars et al., 2001). Дипептид в дозе 0.1 мг/кг (но не 1.0 и 10.0 мг/кг) подавляет реакцию воспачения, вызванную конканавалином А, а в дозах 1.0 и 10.0 мг/кг уменьшает число корчей, вызванных уксусной кислотой (тест
10
висцеральной боли). По уровню ЭД50 (0.5 (8.3-Ю.03) мг/кг) в тесте уксусных корчей Туг-Рго на два порядка менее активен, чем ДМ, уступает морфину, но активнее диклофенака (табл. 2). Туг-Рго в дозе 10.0 мг/кг проявляет анальгетическое действие в тесте механического зажима основания хвоста (тест соматической боли) (табл. 4).
Таблица 2. Анальгетическая активность Туг-Рго, Туг-Рго-содержащих пептидов и
известных анальгетиков в тестах отдергивания хвоста и уксусных корчей.
Пептид Отде ргивание хвоста (изменение чувствительности, сек) Уксусные корчи
20 мин 40 мин 60 мин 90 мин 120 мин ЭДзо мг/кг %от контроля ЭД50 мг/кг
контроль 0.5±0.1 0.5±0.1 0.3±0.1 0.2±0.1 -0.1 ±0.1 100
Туг-Рго (в/6) 0.01 мг/кг 2.0±0.5 0.9±0.2 0.9±0.2 0.8±0.1 0±0.5 1.2(2 + 0.7) мг/кг 3.8 мкмоль/кт 0.5 (8.3 + 0.03) мг/кг 1.6 мкмоль/кг
0.1 мг/кг 3.5±0.6* 2.6±0.5* 0.7±0.2 0.4±0.1 0.1 ±0.1 82.3
1 мг/кг 3.4±0.8* 5.5±0.9 * 4.7±0.7* 3.9±0.6* 0.8±0.2 54*
10 мг/кг 4.8±1.4* 6.0±1.6* 5.9±1.6* 5.3±1.3* 4.3±1.4* 5.7*
Туг-Рго-[D,L]Ser-NH, (в/б) 0.01 мг/кг 1.0±0.2 1.3±0.3 1.2±0.2 1.0±0.3 0.9±0.2 1.3 (26 + 0.06) мг/кг 3.1 мкмоль/кг 73.5 0.06(0.1 +0.04) мг/кг 0.14 мкмоль/кг
0.1 мг/кг 5.0±0.7* 4.6±0.6* 2.3±0.3» 1.8±0.4 0.8±0.1 46.2*
1 мг/кг 4.2+0.6» S.0±0.S * 4.8±0.7» 3.6±0.6* 1.3±0.3 12.7*
10 мг/кг 6.4±1.0* 4.7±0.7 * 4.1±0.5* 3.8±0.6* 1.9±0.3 7.3*
Туг-Д-Рго-Scr-NH, (в/б) 0.01 мг/кг 2.0±0.3 1 -9±0.3 1.3±0.3 1.5±0.2 0.5+0.1 2.9(7.8+ 1.1) мг/кг 6.9 мкмоль/кг 90.9 0.2(0.4 + 0.18) мг/кг 0.47 мкмоль/кг
0.1 мг/кг 3.3±0.5* 3.5±0.6* 2.9±0.5* 1.6±0.5 1.1+0.3 65.2
1 мг/кг 5.7±0.2* 4.2+0.1 • 3.|±0.1» 2.1 ±0.1* 1.1+0.1 26.8*
10 мг/кг 6.3±].1* 4.9±0.8 » 3.9±0.8* 3.3±0.6* 2.0+0.6 7.3*
ДМ (в/б) 0.01 мг/кг 0±0.2 0.4±0.2 0.3±0.2 0±0.1 0±0.1 5.1(7.3 + 3.6) мг/кг 5.9 мкмоль/кг 47* 0.008 (0.1 + 0.0005) мг/кг 0.009 мкмоль/кг
0.1 мг/кг 0±0.1 0.5±0.1 0.3±0.1 0±0.1 -0.1 ±0.1 21.7*
1 мг/кг 3.5±0.4* 1.9±0.2 1.6±0.2 0.3±0.1 0.1 ±0.1 20.4*
10 мг/кг 2.9±0.3* 3.9±0.3 « 8.2±1.0* 5.1±0.3* 4.2±0.6* 0.3*
[DPro'WM (в/б) 0.01 мг/кг 2.7±0.6* 2.6±0.6* 1.6±0.3 0.6+0.2 0.1±0.1 1.1(6.7 + 0.2) мг/кг 1.3мкмоль/кг 70.4 0.06 (0.1 + 0.03) мг/кг 0.07 мкмоль/кг
0.1 мг/кг 2.3+0.3* 4.7±0.5* 3.7±0.3* 1.8±0.3 1±0.2 39.5*
1 мг/кг 5.8±0.9* 7.6±0.8* 5.4±0.5* 4.0+0.6* 0.2±0.1 27.6*
10 мг/кг 11±1.2* 12.4±1.6* 12.8±1.4* 6.7±0.7* 4.5±0.3* 9.5*
Морфин (в/6) 0.1 мг/кг - - - - - 2.8 (24 + 0.3) мг/кг 9.8мкмоль/кг 80.5 1.1 (6.7 + 0.2) мг/кг 1.3 мкмоль/кг
0.5 мг/кг - - - - 27.9*
1 мг/кг 1.4±0.4 0.7±0.2 0.9±0.2 0.6±0.1 0±0.1 6.6*
3 мг/кг 6.8±1.6* 9.6±2.3* 6.6±1.6* 3.5±0.6* 3.3±0.5* 0.5*
5 мг/кг 11.1 ±2.0' 12.2±2.0 * 12.3±2.0* 12.3±1.9* 12±2.0* 0.2*
Диклофенак (в/б) 10 мг/кг 0.7±0.1 0.9±0.2 1.2±0.2 0.9+0.2 0.7±0.1 >50 мг/кг 65.3 13 (89 + 2) мг/кг 43.9 мкмоль/кт
25 мг/кг 1.0+0.2 1.3±0.3 0.8±0.2 0.7±0.2 0.6±0.2 54.9*
50 мг/кг 0.7+0.2 1.3±0.2 0.6±0.2 0.610.2 0.4±0.1 13.5*
Введение (в/б) отдельных аминокислот Туг или Pro или их эквимолярной смеси не вызывает анальгезии в тесте отдергивания хвоста, следовательно, обезболивающим эффектом обладает именно дипептид (рис. 2).
Метилирование (Туг-Рго-оМе) или амидирование (Tyr-Pro-NH2) С-концевого пролина дипептида Туг-Рго снижает длительность анальгетического действия в тесте отдергивания хвоста и увеличивает величину анальгетического эффекта дипептида е тесте уксусных корчей (табл. 6). Сгереохимическая модификация остатка пролина в молекуле Туг-Рго не изменяет анальгетическую активность в тесте отдергивания хвоста и увеличивает в тесте уксусные корчи (табл. 6). Полученные данные позволяют предполагать разные механизмы проявления обезболивающего действия пептида в тестах соматической и висцеральной боли.
Рисунок 2. Влияние на болевую чувствительность пролина, тирозина, их смеси и Туг-Рго, в тесте отдергивания хвоста крыс.
— 4— контроль ■ Туг-Рго 0.1 мгЛг ■ 4 Туг-Рго 1 мг/кг -■» Туг-Рго Юм г/к г
• "А--- Туг 1 мгЛ<г •••■•••Рго1 мгЛсг Туг+Рго
Отличия от контроля достоверны (*) при р<0.05 по критерию Вилкоксона-Манна-Уитни (1Мс5().
Рисунок 3. Влияние блокаторов опиоидных рецепторов на анальгетическую активность Туг-Рго в тесте отдергивания хвоста.
* 90 120
Время после инъекции (мин)
— контроль • налоксон
А Туг-Рго —о— Туг-Рго+налоксон
налоксон метиодид ♦ ' - Туг-Рго+налоксон метиодид
Отличия достоверны при р<0.05 от контрольной группы (*) и от группы, которой вводили Туг-Рго (#) по критерию Вилкоксона-Манна-Уитни (и-(е50. Все соединения вводили в дозе 1 мг/кг в/б.
Анализ механизма анальгетического действия Туг-Рго с использованием фармакологических анализаторов показал, что выраженность эффекта снижается под действием антагонистов центральных и периферических опиоидных рецепторов налоксона и налоксона метиодида в тестах отдергивания хвоста и уксусных корчей (рис. 3, табл. 3), что свидетельствует о вовлечённости периферической
12
опиоидергической системы в анальгетический эффект Туг-Рго в тестах соматической и висцеральной боли.
Таблица 3. Влияние блокаторов опиоидных рецепторов на анальгетическую
активность Туг-Рго в тесте уксусных корчей.
Пептид (в/б)+блокатор (п/к) % от контроля Рецепторы |
опиоидные орфановые каннабинондаьЕ
И 1 Й1 1 6 | к | МбрГ ORL, СВ,
контроль 100%
Туг-Рго 1 мг/кг 55% 1
Туг-Рго 1 мг/кг + Налоксон 1 мг/кг 95% # центра 1ьные и периферичесгие
Туг-Рго 1 мг/кг + Налоксон метиодид I мг/кг 107% #
Туг-Рго 1 мг/кг + Налтрексон 1 и 10 мг/кг 40.4%* 38.4% * центральные и периферические
Туг-Рго 1 мг/кг + 3-метоксиналтрексон 5 мг/кг 38.4% *
Tyr-Pro J мг/кг + Налоксоназин 10 . мг/кг 31.8%*
Туг-Рго 1 мг/кг + Наптриндол 5 мг/кг 11.5% *#
Туг-Рго 1 мг/кг + Налоксона бензоил- | гидразон 1 мг/кг 9.5% *# I .Г агонист П|
Туг-Рго 1 мг/кг + АМ-251 5 мг/кг 1 48.1% *# ■ п
% относительно группы активного контроля, получившего уксусную кислоту. Отличия достоверны при р<0.05 от контрольной группы (*) и от группы, которой вводили Туг-Рго (#) по критерию Вилкоксона-Мэниа-Уигни (Шее!).
М6|ЗГ - рецепторы морфин-6-(3-глюкуронида
ЕШ - блокирует; 1 I - не влияет; Е£Ш - потенцирует.
Установлено, что анальгетический эффект Туг-Рго в тесте уксусных корчей не реализуется через рецепторы, связывающие морфин-6-(3-глюкуронид, каннабиноидные СВгрецепторы и ДгОР, так как какая-либо реакция на введение специфических антагонистов этих рецепторов (3-метоксиналтрексона, АМ-251 или налоксоназина, соответственно) отсутствовала. В то же время анальгезия, вызванная дипептидом, усиливается при блокаде 5-ОР налтриндолом, а также под действием бензоилгидразона налоксона, который стимулирует к-)- и подавляет ОЯЬг и |д-ОР (табл. 3).
Туг-Рго проявляет слабое сродство к периферическим 5-ОР (Ю50 9.1x10"5 моль) и не обладает сродством к периферическим д-ОР (1С50 7.6Х10"4 моль) на препаратах изолированных органов СПМ и ПКМС, соответственно (табл. 4), в отличие от ДМ и морфина, которые оказывают эффект в наномолярной области концентраций. Стереохимическая модификация остатка пролина в молекуле Туг-Рго приводит к потере способности связываться с периферическими §-ОР (табл. 6).
Таблица 4. Влияние модификаций по пролину на анальгетическую, нейропсихотропную активность и дополнительные эффекты
ДМ, его фрагментов И аналогов (в таблице указаны дозы в мг/кг при внутрибр кэши ином введении, вызывающие достоверные отличия от контрольной группы).
Тесты / вещество ДМ ГДРго^ДМ [ОРго"]ДМ Туг-Рго-[0,г.]5ег-М1: Туг-О-Рго-Эст-МЬ Туг-Рго
Отдергивание хвоста 1-10 мг/кг 1-10 мг/кг 0.01-10 мг/кг 0.1-10 мг/кг 0.1-10 мг/кг 0.1-10 мг/кг
4> 5 Горячая пластина 1 мг/кг 1-10 мг/кг 1-10 мг/кг 1-10 мг/кг 1-10 мг/кг не влияет
и <и 3 Й и л § Механическое раздражение 1-10 мг/кг 10 мг/кг 1-10 мг/кг 1-10 мг/кг 1-10 мг/кг 10 мг/кг
Формалиновый тест 1,11 фаза 1-10 мг/кг 1,11 фаза 1-10 мг/кг 1,11 фаза 1-10 мг/кг 1,11 фаза 1-10 мг/кг 1,11 фаза 1-10 мг/кг 1,11 фаза 1-10 мг/кг
< Уксусные корчи 0.01-10 мг/кг 1-10 мг/кг 0.1-10 мг/кг 0.1-10 мг/кг 1-10 мг/кг 1-10 мг/кг
Реакция на конканавалинА 0.1- 10 мг/кг 10 мг/кг 1 мг/кг не влияет 1-10 мг/кг 0.1 мг/кг
и § Горизонтальная двигательная активность седативное 1-10 мг/кг седативное 10 мг/кг седативное 10 мг/кг не влияет не влияет не влияет
г» о н 5 Вертикальная двигательная активность седативное 0.1-10 мг/кг седативное 1-10 мг/кг седативное 10 мг/кг не влияет не влияет не влияет
Ориент.-исслед. реакция седативное 10 мг/кг седативное 10 мг/кг не влияет не влияет не влияет не влияет
Приподнятый крестообразный лабиринт не влияет анксиолитическое 10 мг/кг не влияет анксиолитическое 1-10 мг/кг анксиолитическое 10 мг/кг анксиолитическое 1-10 мг/кг
Неизбегаемое плавание не влияет не влияет не влияет 1-10 мг/кг не влияет не влияет
Максимальный электрошок 0.1-10 мг/кг не влияет 10 мг/кг 1-10 мг/кг не влияет 10 мг/кг
Коразоловые судороги не влияет не влияет 1 мг/кг не влияет не влияет не влияет
Частота дыхания снижает снижает снижает не влияет не влияет не влияет
мышей (ТД50) > 600 мг/кг > 600 мг/кг 322 (466-1-221) мг/кг до 800 мг/кг До 800 мг/кг до 800 мг/кг
Гибель мышей через 24 часа (ЛДм) не вызывает > 800 мг/кг не вызывает > 800 мг/кг 568(618+522) мг/кг не вызывает > 800 мг/кг не вызывает > 800 мг/кг не вызывает > 800 мг/кг
В контрольной группе беспородных мышей частота дыхания соответствует 210.5±4.5 движений в минуту. Дипептид Туг-Рго в дозах 1, 10, 100, 500 и 800 мг/кг (в/б) не влияет на частоту дыхания и не приводит к гибели мышей через 24 часа после введения. Синдром отмены Туг-Рго при провокации налоксоном достоверно меньше выражен, по сравнению с отменой морфина. Дипептид в дозах 1-10 мг/кг (в/б) не изменяет температуру тела и кожи хвоста крыс при холодной (4-6°С), комфортной (27-28°С) и жаркой (31-32°С) температуре окружающей среды. В этих же дозах (в/б) Туг-Рго оказывает анксиолитическое действие в тесте ПКЛ и противосудорожное (только 10 мг/кг) в тесте МЭШ, но не в тесте коразоловых судорог, не изменяет двигательную активность и ориентировочно-исследовательскую реакцию в тесте открытое поле, не обладает антидепрессантной активностью в тесте неизбегаемого плавания (табл. 4).
II. Влияние модификаций остатка пролина в молекуле дерморфина на проявление анальгетической активности и сопутствующих эффектов
Атипичный ОП дерморфин (ДМ) - Tyr-DAla-Phe-Gly-Tyr-Pro-Ser-NH2 в дозах 1.0 и 10.0 мг/кг (в/б) проявляет дозо-зависимую анальгетическую активность в тестах соматической боли при действии термических (тест отдергивания хвоста и горячей пластины) и механических стимулов (тест механического зажима основания хвоста) и в тесте тонической боли, вызванной формалином. Пептид оказывает анальгетическое действие в дозах 0.1 - 10.0 мг/кг (в/б) в тесте висцеральной боли, вызванной уксусной кислотой и противовоспалительное действие при стимуляции конканавалином А (табл. 2, 4, 6).
Замена остатка пролина в шестом положении в молекуле ДМ на D-стереоизомер или его дегидрирование (ДРго6) увеличивает латентный период болевой реакции и удлиняет анальгетическое действие в тесте отдергивания хвоста при в/б введении (табл. 2, 4, 6). Замещение остатка пролина на D-APro6 приводит к исчезновению эффекта. Уровень активности [£>-Рго6]-ДМ и [ДРго6]-ДМ в дозе 1.0 мг/кг (в/б) выше активности морфина в той же дозе, а в дозе 10.0 мг/кг [D-Pro6]-ДМ сопоставим с морфином в дозе 5.0 мг/кг (табл. 2). В тесте горячей пластины замена остатка пролина на D-Pro6, ДРго6 или D-ДРго6 уменьшает выраженность анальгетического эффекта. Стереохимическая модификация остатка пролина в молекуле ДМ не изменяет анальгетическую реакцию в тесте механического зажима основания хвоста крыс. Дегидрирование остатка пролина в молекуле ДМ приводит к увеличению эффективных доз (табл. 4). Замена остатка пролина на D-Pro в молекуле ДМ не изменяет диапазон действующих доз в тесте уксусных корчей и формалиновых болей (табл. 2, 4, 6). Дегидрирование остатка пролина в молекуле ДМ приводит к смещению диапазона действующих доз в сторону его увеличения в тесте уксусных корчей. Стереохимическая модификация или дегидрирование остатка
пролина в молекуле ДМ вызывает уменьшение противовоспалительного действия при стимуляции конканавалином А (табл. 4).
ДМ в дозах 1-500 мг/кг (в/б) снижает частоту дыхания (ТД50 = 574 (1042+317) мг/кг) и не вызывает гибели мышей. Дегидрирование остатка пролина не приводит к изменению доз, влияющих на дыхание, не изменяет токсичность и в дозах 1-800 мг/кг (в/б) пептид не вызывает гибель мышей. Стереохимическая модификация остатка пролина в молекуле ДМ снижает уровень доз, угнетающих дыхание (ТД50 = 322 (466+221) мг/кг) и повышает токсичность (ЛД50 = 568 (618+522) мг/кг) (табл. 5).
Таблица 5. Терапевтический индекс пептидов при внутрибрюшинном введении.
ТД5о дых/ЭД5о аналг корчи ЛД50 /ЭД50 аналг корчи
дм 68 375 >100 000
[ОРго'ЩМ 5 366 9 467
Туг-Рго-[Д£]8ег-Ш2 > 13 333 > 13 333
Туг-О-Рго-Зег-Шг >4 000 >4 000
ДМ (0.1 - 10.0 мг/кг, в/б) вызывает у мышей дозо-зависимое седативное действие в тесте открытое поле, не влияет на время пребывания крыс в открытых рукавах ПКЛ и не изменяет время иммобилизации мышей в тесте неизбегаемого плавания (табл. 4). В дозах 0.1 - 10.0 мг/кг (в/б) пептид проявляет противосудорожное действие в тесте МЭШ, но не в тесте коразоловых судорог. Стереохимическая модификация остатка пролина в молекуле ДМ приводит к увеличению уровня доз, оказывающих седативное действие в тесте открытое поле и противосудорожное действие в тесте МЭШ, и появлению противосудорожного действия в тесте коразоловых судорог (табл. 4). Дегидрирование остатка пролина в молекуле ДМ вызывает появление анксиолитического и исчезновение противосудорожного действия.
ДМ (0.5 мг/кг, в/б) изменяет температуру тела в зависимости от температуры окружающей среды. В холодной среде (4-6°С) и термонейтральной (27-28°С) вызывает гипотермию, а в жаркой (31-32°С) - гипертермию. При замене остатка Ь-пролина в молекуле ДМ на Д-стереоизомер или его дегидрировании гипотермическое действие в холодной среде сохраняется. В термонейтральной среде при действии ДМ наблюдается двухфазная сосудистая реакция. Дегидрирование остатка пролина приводит к исчезновению сосудосуживающего компонента действия, а стереохимическая модификация по пролину вызывает потерю гипотермического действия и сосудистой реакции. В условиях жаркой среды дегидрирование остатка пролина в молекуле ДМ приводит к инверсии температурной реакции на гипотермическую и появлению сосудосуживающего действия. Замена остатка I-пролина в молекуле ДМ на £>-стереоизомер вызывает появление сосудосуживающего действия.
При субхроническом 7-дневном введении [£>-Рго6]-ДМ (10 мг/кг, в/б) развивается толерантность по анальгетическому действию в тесте уксусных корчей и по седативному действию в тесте открытое поле. Перекрестная толерантность к морфину не проявляется. При провокации налоксоном синдрома отмены у морфин-зависимых животных регистрировались прыжки (у 94%) и изменение веса (на 23%). У [Д-Рго6]ДМ-зависимых животных наблюдалось достоверно меньшее по сравнению с морфином число прыжков (у 18 %). Вес пептид-зависимых животных не изменялся после введения пептида и провокации налоксоном. Следовательно, [0-Рго6]-ДМ-зависимые животные легче переносят синдром отмены.
ДМ с высокой аффинностью связывается с периферическими ¡х- и 8-ОР ПКМС и СПМ (2.6х10"8 моль и 9.0х10"8 моль, соответственно) (табл. 6). Стереохимическая модификация по остатку пролина в молекуле ДМ не изменяет сродства к периферическим |1- и 8-ОР ПКМС и СПМ (табл. 6).
Рисунок 4. Профиль активностей ДМ (А) и [£>-Рго6]-ДМ (Б).
А Б
мех аналгезия мех аналгезия
Примечание: Указаны дозы, вызывающие достоверные эффекты: 1 - доза 10 мг/кг, 2 - доза 1 мг/кг, 3 - доза 0.1 мг/кг. Изменение температуры тела в дозе 0.5 мг/кг: 1 - в холодной; 2 - в термонейтральной; 3 - в жаркой средах. Дозы, угнетающие дыхание и вызывающие гибель: 3 - 300 мг/кг, 2 - 500 мг/кг. 1 - 800 мг/кг. Синдром отмены (при провокации налоксоном прыжков): I - 30% животных, 2 - 60%, 3 - 100%.
Таким образом, Туг-Рго-содержащий пептид ДМ обладает анальгетическим, седативным, противосудорожным и терморегуляторным действием. Стереохимическая модификация остатка пролина в молекуле ДМ усиливает анальгетическое действие в тесте отдергивания хвоста и уменьшает противовоспалительное и противосудорожное действие (рис. 4). При субхроническом 7-дневном введении [£>-Рго6]-ДМ по анальгетическому и седативному действию развивается толерантность. При провокации налоксоном симптомы синдрома отмены [£>-Рго6]-ДМ менее выражены по сравнению с морфином. Дегидрирование остатка пролина в молекуле ДМ сдвигает диапазон действующих доз в сторону увеличения в тестах механического раздражения основания хвоста и уксусных корчей.
III. Исследование влияния удлинения дипептидной последовательности Tyr-Pro(Z>-Pro, ДРго, Hyp) на проявление анальгетической и опиоидной активности
Анализ зависимости структуры-активности в ряду атипичных ОП выявил свободу позиционирования пары -Туг-Рго- в последовательностях пептидов. Действительно, функциональная опиоидная активность пептидов принципиальным образом не зависит от положения фрагмента Туг-Рго в пептидной цепи и сохраняется при его перемещении как в jV-конец молекулы (эндоморфины, геморфины), так и внутрь цепи (глютеновые экзорфины А, геморфины, дерморфины), так и в С-конец (глютеновый экзорфин А, геморфин-(1-5)). С другой стороны, при рассмотрении серии гомологов геморфина выявлено, что аминокислотные остатки слева от тирозина и справа от пролина не имеют критического значения для проявления функциональной активности и могут быть удалены. На основании проведенного анализа было высказано предположение о том, что удлинение дипептида Туг-Рго природными аминокислотами может приводить к новым пептидам, сохраняющим анальгетическую активность.
1. Влияние С-концевого удлинения последовательности Tyr-Pro(Z)-Pro, ДРго, Hyp) на проявление анальгетической активности и сродство к опиоидным рецепторам
Изученные пептиды Tyr-Pro-[D,L]Ser-NH2, Tyr-Pro-Ser-oMe, Tyr-D-Pro-Ser-NH2, Tyr-D-Pro-Ser-oMe, Tyr-APro-Ser-NH2, Tyr-[AZ.]APro-Ser-oMe, Tyr-Pro-Lys-NH2, Tyr-Pro-Ala-NH2 обладают анальгетическим действием в тестах отдергивания хвоста и уксусных корчей, a Tyr-Hyp-Ser-NH2, Tyr-Hyp-Ser-oMe - только в тесте уксусных корчей. Удлинение последовательности Туг-Рго положительно заряженным Lys увеличивает сродство к 5-ОР, нейтрально заряженным Ala - к р-ОР, а полярным Ser -незначительно увеличивает к |х- и уменьшает к б-ОР, при этом усиливается анальгетическая активность в тесте уксусных корчей (табл. 6).
При удлинении дипептида Туг-Рго последовательностью Gly-Pro анальгетический эффект сохраняется, хотя сродство к ¡> и S-OP практически не изменяется. При удлинении Tyr-£>-Pro-Ser последовательностью Pro-Gly-Pro значимо не изменяется сродство к р- и 6-ОР, но сокращается продолжительность обезболивающего действия в тесте отдергивания хвоста (табл. 6).
Амидирование, но не метилирование, С-концевых аминокислотных остатков увеличивает анальгетическую активность, однако выявленная закономерность не связана с увеличением сродства к р- и 5-ОР. В тестах соматической и висцеральной боли наибольшей активностью обладают трипептиды Tyr-Pro-[D,¿]Ser-NH2, Tyr-D-Pro-Ser-NH2, Tyr-Pro-Lys-NHj (табл. 6).
Таблица 6. Сравнительная анальгетическая (1 мг/кг, в/б) и опиоидная активность
пептидов общей формулы А-Б-Туг-Ргоф-Рго, ДРго, £>-ДРго, Нур)-В-Х и аналогов ДМ.
Пептид Отдергивание хвоста корчи ПКМС (и-ОР) СПМ (5-ОР)
20 мин 40 мин 60 мин 90 мин 120 мин % моль МОЛЬ
контроль 0.5±0.4 0.6±0Л 0.410.4 0.2Ю.4 010.4 100
дипептиды
Тут-Рто 3.4±0.8 » 5.510.9 • 4.710.7 • 3.910.6 • 0.810.2 54* 7.6x10-* (9.1 -6.3x10") 9.1x10"' (11 -7.7x10')
Тут-Рго-оМе Тут-Рго-№12 3.610.8» 3.011.0* 5.711.2» 5.811.5» 4.710.8 * 5.011.2* 2.910.8 * 4.010.8 * 1.410.3 0.810.2 23.8» 29.4» 8.4x10" (10-7.5x10"") 2.6х10"7 (3.0-2.3х10'7) 3.7x10'' (4.2-3.2x10"') 1.2x10"' (1.4-1.1x10"')
Туг-Д-Рго 3.811.0» 4.510.9 • 5.211.1 * 4.1+1.0* 1.210.5 31.7» 3.4x10"' (4.2-2.8x10") 8.8x10" (9.8-8.0x10")
трипептиды
Туг-Рго-Бсг-оМе 3.2±0.5 » 2.810.3 * 3.010.5 • 1.510.3 0.910.2 28.8» 6.1x10° (6.8 - 5.5x10-5) 4.0x10"* (4.4-3.7x10")
Тут-Рго-[ДХ]5сг-Ш, 4.210.6» 5.010.8 * 4.810.7 * 3.610.6» 1.310.3 12.7» З.ЗхЮ"5 (4.0-2.8x10') 6.5x10" (7.2 - 5.9x10")
Туг-Нур-Бег-оМе -1.910.2 -1.410.3 2.010.2 0.910.3 0.310.1 14.3* 5.9x10-' (6.9-4.8x10"') >10">
Туг-Нур-Зсг-М12 2.410.3 • 1.710.3 1.010.2 0.710.1 0.2Ю.1 10.9* 7.7x10"' (8.9-6.7x10"') 3.2x10"' (3.5-2.9x10')
Туг-ДРго-Бег-оМе 4.110.7» 3.710.6 » 0.210.4 0.1 ±0.4 0.1 ±0.4 19.2* 4.8x10"' (4.2-3.4Х105) 2.4x10"' (4.1 - 1.4x10"')
Туг-£>-Рго-5сг-МН2 5.710.2 • 4.210.1 » 3.110.1 • 2.110.1 * 1.110.1 26.8* 4.0x10"' (4.4-3.6x10"') 5.3x10" (6.0-4.8x10")
Туг-[ДуДРго-5ег-оМс 1.810.4 2.9+0.4 » 2.910.4 * 1.410.2 0.610.1 14.3* 1.4x10"' (2.3-0.4x10"') 2.9x10"' (3.4-2.5x10"')
Туг-ДРго-5ег-ЫН; Туг-Рго-1.у5-МН2 1.810.3 3.410.5 • 2.910.4 • 3.110.4» 6.111.0* 8.011.1 * 3.2+0.5 * 1.510.3 1.2+0.2 -0.210.1 5.2* 14.0* 5.2x10"' (8.1-3.4x10*) 7.3x10"' (8.5-6.2x10"*) 8.7x10"' (9.7-7.8x10"') 3.7x10"' (4.1 -3.3x10"')
Туг-Рго- А1а-1МН; 4.710.6 » 4.310.7 » 2.610.4 * 2.310.4 • 1.010.2 19.7» 2.6x10"" (3.1 -2.2x10") 4.4x10" (5.4-3.4x10")
тетрапегтгиды
Туг-Рго-О1у-Рго 3.610.5» 2.710.4 » 2.910.3 * 1.210.3 0.310.1 12.2» 4.6x10"* (5.6 - 3.8x10'4) 2.6x10" (3.7-1.5x10")
А1а-Туг-Д-Рго-5ег-Ш2 1.710.2 5.010.8 » 3.210.4 * 1.810.3 0.210.1 2.1 » 2.4x10"* (3.4 - 1.4x10"*) 1.7x10"' (2.0-1.5x10"')
ОА1а-Тут-Д-Рго-5сг-Ш2 1.910.3 3.610.5 » 4.0М.6 » 3.110.3» 0.610.2 6.0» 2.8x10"' (3.2-2.4x10"') >10"'
О1и-Туг-0-Рго-5ег-Ш2 Ми-Туг-Д-Рго-Бсг- ын, 3,010.5 » 0.8+0.2 6.111.2* 1.610.3 6.511.2* 0.510.2 4.3+0.9 * 0.110.1 0.910.2 -0.110.1 13.0» 7.3» 1.5x10"1 (2.0 - 1.1х10'3) >10"' 3.3x10"' (4.3-2.3x10"') 2.1x10" (2.3-1.9x10")
Ме|-Туг-Рго-А1а-Ш2 М«-Тут-ДРто-А1а- 1.310.3 1.310.3 0.510.2 1.810.3 1.310.3 1.810.3 1.310.3 1.310.3 0.510.2 0.210.1 88.6 54.3» 9.4x10"' (14 - 8.0x10"') 6.0x10"' 2.0x10"' (2.4-1.8x10"') 1.1x10"
ш, (7.2 - 5.0x10"') (21-9.1x10")
гептапегттиды
Туг-Д-Рго-Бег-Рго- 10.311.4 1.810.3 1.110.1 0.510.1 -0.110.1 9.9» 1.5x10"' 1.7x10"'
С1у-Рго * (1.7-1.3x10"') (2.0-1.5x10"')
гексапептнды
Тут-Д-А1а-РЬе-С1у-Туг-Рго-Бег-ИНг 3.5+0.4» 1.910.2 1.610.2 0.310.1 0.1+0.1 20.4» 2.6x10" (3.1-2.2x10"*) 9.0x10" (11.1 -7.3x10")
Туг-Д-А1а-РЬе-С1у-Туг-ДРго-5ег-КН2 7.610.9» 7.310.7* 4.710.5* 1.610.2 0.410.1 27.6» 4.5x10"' (5.1 -4.0x10"*) 8.4x10"" (9.4-7.5x10*)
Туг-Д-А1а-Р1ю-С1у-Тут-ОРго-Бсг-Шг Туг-Д-А1а-РЬе-С11у-Туг-ОДРго-5ег-КН2 5.8+0.9* 1.510.3 7.610.8* 1.510.3 5.410.5* 0.110.1 4.010.6* 0.110.1 0.210.1 010.1 18.1* 15.1» 3.0x10"" (3.5 - 2.6x10 ") данных нет 8.7x10"" (9.8 - 7.6x10") данных нет
Отличия от контроля достоверны (*) при р<0.05 по критерию Вилкоксона-Манна-Уитни (Шее!). ПКМС - подвздошная кишка морской свинки (СР1), СПМ - семявыносящий проток мыши (МУО)
2. Влияние Л'-концевого удлинения последовательности Tyr-Pro(J5-Pro, ЛРго)-Х на проявление анальгетической активности и сродство к опиоидным рецепторам
Филогенетический анализ мутаций аминокислотных остатков в белковых последовательностях позволило выделить основные группы взаимозаменяемых аминокислот: ароматические (Phe, Туг, Тгр), положительно заряженные (Lys, Arg, His), отрицательно заряженные (Glu, Asp), и остатки разной природы (неполярные с длинным радикалом (Val, Leu, Ile), слабополярные (Met, Cys), с коротким радикалом, (Ser, Thr, Asp, Asn, Gly, Ala, Glu, Gin, Pro)) (Shulz, Schirmer, 1982). Были синтезированы аналоги содержащие представителей основных групп, кроме положительно заряженных, поскольку положительный заряд лигандов ОР увеличивает избирательность по отношению к ц-ОР (Shiller et al., 1989), что повышает риск развития нежелательных побочных эффектов.
Добавление Ala (аминокислотного остатка с малой боковой цепью) с ЛГ-конца трипептида Tyr-.D-Pro-Ser-NH2 увеличивает сродство к 8-ОР, без изменения анальгетической активности; добавление D-Ala - не влияет на анальгетическую активность и сродство к рецепторам, а добавление Glu (отрицательно заряженного) -повышает анальгетическую активность, увеличивает сродство к S-OP и уменьшает к (I-OP. Добавление //-концевого Met к трипептиду Tyr-D-Pro-Ser-NH2 уменьшает сродство к ц- и снижает анальгетическую активность в тесте соматической боли, а к трипептиду Tyr-Pro-Ala-NHî увеличивает сродство к ц- и 5-ОР, но при этом полностью исчезает анальгетическая активность. Среди изученных тетрапептидов наибольшей анальгетической активностью обладали Ala-Tyr-D-Pro-Ser-NHj и Glu-Tyr-D-Pro-Ser-NH2 (табл. 6). Met-Tyr-Pro-Ala-NH2 обладает высоким сродством кц-и 5-ОР, но не оказывает анальгетического действия. Дегидрирование остатка пролина в молекуле Met-Tyr-Pro-Ala-NH2 приводит к уменьшению сродства к б-ОР и появлению слабой активности в тесте уксусных корчей, но не отдергивания хвоста.
Таким образом, в результате проведенных исследований не было установлено взаимосвязи между уровнем анальгетической активности пептидов общей формулы A-Tyr-Pro(D-Pro, ДРго, D-ДРго, Нур)-В-Х и их связыванием с периферическими р- и 5-ОР. Можно полагать, что в группе Тут-Рго-содержаших пептидов механизм анальгетического действия не связан со взаимодействием с периферическими ц- и 5-ОР. Оптимальным соотношением уровней анальгетической активности и связыванием с периферическими ц- и 5-ОР обладают Tyr-Pro-[A£]Ser-NH2 и Tyr-D-Pro-Ser-NH2, что позволило отобрать эти пептиды для дальнейших исследований в качестве потенциальных анальгетиков.
IV. Изучение фармакологической активности Туг-Рго-[Д1,]8ег-1ЧН2 и Туг-Л-Рго-8ег-1ЧН2
С-концевой фрагмент атипичного ОП ДМ трипептид Туг-Рго-Бег-КН? сам не взаимодействует с ц-ОР, но обеспечивает стабильность взаимодействия с ними ДМ (Saqan й а1., 1989). Туг-Рго-Эег-КНг может образовываться при гидролизе ДМ (Оаг1ак е1 а1., 1988). Ранее было показано, что при внутрижелудочковом введении трипептид не обладает анальгетической активностью (Вгоссагйо е1 а1., 1981). Влияние стереохимической модификации остатков пролина и серина на проявление активности амида трипептида не исследовалось.
1. Изучение анальгетической активности Туг-Рго-[/,,/)]8ег-1ЧН2 и Туг-О-Рго-вег-ГШг
Туг-Рго-[Д£]5ег-МН2 и Туг-£>-Рго-5ег-МН2 проявляют анальгетическую активность в дозах 0.1 - 10.0 мг/кг (в/б) в широком диапазоне тестов определения болевой чувствительности. В тесте отдергивания хвоста анальгетическая активность Туг-Рго-[Д1]5ег-МН2 и Туг-0-Рго-5ег-МН2 в дозах 1.0 и 10.0 мг/кг (в/б) сохраняется на протяжении 90 минут, а в дозе 0.1 мг/кг - 60 минут (табл.2). По уровню ЭД50 Туг-Рго-[£>,/,]8ег-]МН2 и Туг-В-Рго-Бег-ЫНо сопоставимы с ДМ. По глубине анальгетического действия пептиды уступают морфину в дозе 5.0 мг/кг. Диклофенак в дозах 10, 25 и 50 мг/кг в данном тесте не обладает обезболивающим действием. Туг-Рго-[Д£]8ег-КН2 и Туг-й-Рго-Эег-МНг в дозах 1.0 и 10.0 мг/кг показывают сходную анальгетическую активность в тесте отдергивания хвоста при в/б и в/м введении на протяжении 90 мин и при р.о. введении на протяжении 60 мин (рис. 5). При и/н введении в дозах 0.001 и 0.01 мг/кг пептиды проявляют анальгетическую активность через 20 мин после введения (рис. 5). А
Рисунок 5. Влияние Туг-Рго-[Д^]Зег-ЫН2 (А) и Туг-0-Рго-5ег-1ЧН2 (Б) при различных способах введения на болевую чувствительность в тесте отдергивания
V ипгтя
Б
"I1" ко отрога * 4' • • хнутр! (1 от/кг)
-'♦—— 1НуТри6рЮ111ГСКН04 (1 мтЛт) - *
-О -кктраюзалъко*(0,001 га/яг)
■ — хнутрго.штле чко е (I иг/ит)
Отличия от контроля достоверны (*) при р<0.05 по критерию Вилкоксона-Манна-Уитни (и-1еБ1).
В тесте горячей пластины Туг-Рго-[Д£]8ег-МН2 и Туг-Д-Рго-8ег-№Ь обладают аналитическим действием в дозах 1.0 и 10.0 мг/кг (в/б). Уровень активности этих трипептидов в дозе 1.0 мг/кг (в/б) сопоставим с активностью ДМ. Эффект сохраняется на протяжении 60 минут. Туг-Рго-[Д,.Ц8ег-МН2 и Туг-Д-Рго-8ег-ЫН2 в дозах 1.0 и 10.0 мг/кг подобно ДМ снижают болевую чувствительность в тесте механического раздражения хвоста крысы (табл. 3). Как и морфиноподобные соединения Туг-Рго-[Д1]8ег-1ЧН2 и Туг-Д-Рго-8ег-ЫН2 (1.0 и 10.0 мг/кг, в/б) устраняют болевые симптомы I и II фазы в тесте тонической боли, вызванной формалином (рис. 6).
Рисунок 6. Влияние Туг-Рго-[Д1]8ег-Ш, (А) и Туг-Д-Рго-8ег-Ш2 (Б) на болевую чувствительность в формалиновом тесте.
А
1фзза
фаза
|фзм
|ф35.Ч
□контроль НО,1 мг/кг ЕНмгАсг □ 10 мг/кг |
Отличия от контроля достоверны (*) при р<0.05 по критерию Вилкоксона-Манна-Уитни (и-МЯ). Рисунок 7. Аналъгетическая активность ДМ и Туг-Рго-[Д,1]8ег-МН2 в тесте нейрогенного болевого синдрома
120 И 00
! 80
I
; 60
»
)
| 40
»
I 20
Г
о
ОТМЕНА ПРЛПАГАТОП
Г"""* /'
/ f /
/ ^-♦-' ^ 1 - ' 1 1
1 1 )
и_—1 --А—г—»—1—*—г—*—1—г—*--—*...... 1.......: 1 4 '■ 1 |......X—г -Л.........—-,-,-,-
10 11 13 15 16 18 день
-ч—ко Н1 роль
ДМ
В тесте уксусных корчей Туг-Рго-[Д£]8ег-ЫН2 (0.1 - 10.0 мг/кг, в/б) и Туг-£>-Рго-8ег->Ш2 (1.0 - 10.0 мг/кг, в/б) достоверно уменьшают число корчей, вызванных уксусной кислотой. По уровню Е05о пептиды активнее диклофенака, но уступают ДМ (табл.2). Туг-О-Рго-Зег-КНЬ (0.1 - 10.0 мг/кг, в/б) обладает выраженным противовоспалительным действием в тесте индуцированного конканавалином А воспаления, а Туг-Рго-[Д£]8ег-№12 не проявляет активность в изученных дозах. Туг-Рго-[ДХ]8ег-ЫН2 в дозе 1.0 мг/кг (в/б) препятствует развитию нейрогенного болевого синдрома (рис. 7) и не влияет на развитие центрального болевого синдрома. ДМ, напротив, усиливает болевую чувствительность в тесте нейрогенного болевого синдрома.
2. Влияние стереохимических модификаций остатка серина в молекуле Туг-Рго-|0,£]8ег-МН2 на уровень анальгетическую активность
В результате амидирования Туг-Рго-1-8ег-оМе получается смесь стереоизомеров Туг-Рго-Х-8ег-МН2 и Туг-Рго-£)-8ег-МН2 в соотношении 1:1. Изучение анальгетической активности отдельных стереоизомеров в тесте уксусных корчей показало, что анальгетическим действием при внутрибрюшинном введении обладает только Туг-Рго-./9-8ег-№-12 (рис. 8). Это соответствует полученным ранее данным Вгоссаг<1о и коллег (1981) об отсутствии анальгетического действия у Туг-Рго-£-8ег-МН2 при его внутрижелудочковом введении в тесте горячей пластины.
Рисунок 8. Влияние Ь- и £>-стереоизомеров по серину на проявление анальгетической активности Туг-Рго-[Д/,]8ег->Щ2 в тесте уксусных корчей.
Отличия от контроля достоверны (*) при р<0.05 по критерию Вилкоксона-Манна-Уитни (и^еэ!).
3. Изучение нежелательных эффектов Туг-Рго-[£Д>)8ег-]\Н2 и Туг-Х>-Рго-вег-РШг, характерных для опиоидов
Частота дыхания в контрольных группах животных соответствует 211±4 и
209.5±5.7 движений в минуту. Туг-Рго-[П,1]8ег-ЫН2 и Туг-А-Рго-Зег-ИНг не изменяют
частоту дыхания ненаркотизированных беспородных мышей в дозах 1, 10, 100, 500 и
800 мг/кт (в/б, однократно). В группе наркотизированных кроликов частота дыхания
23
до введения пептида соответствует 30±2.4 движения в минуту. После введения Туг-Рго-[Д1]8ег-МН2 в дозе 10 мг/кг (в/в, однократно) частота дыхания значимо не изменяется.
Рисунок 9. Влияние хронического введения Туг-Рго-[Д1]8ег-МН2 (А) и Туг-Д Рго-Зег-ИНг (Б) на болевую чувствительность в тесте отдергивания хвоста.
Отличия от контроля достоверны (*) при р<0.05 по критерию Вилкоксона-Манна-Уитни (Ч.Мс^).
Хроническое 14 и 28-дневное введение Туг-Рго-[Д£,]8ег-МН2 и Туг-Д-Рго-Бег-Ш2 в дозе 1.0 мг/кг (в/б) не приводит к развитию толерантности по анальгетическому эффекту в тесте отдергивания хвоста (рис. 9). 7-дневное введение трипептидов в дозах 1.0 и 10.0 мг/кг (в/б) не вызывает развитие толерантности по анальгетическому эффекту в тесте уксусных корчей. На протяжении 28 дней введения пептидов в дозе 1.0 мг/кг и после их отмены не наблюдаются симптомы синдрома отмены, сохраняются параметры активности в открытом поле и анальгетическая активность в тесте отдергивания хвоста.
Рисунок 10. Симптомы синдрома отмены Туг-Рго-[Д.£]8ег-1ч[Н2 и Туг-О-Рго-Эег-МН2, провоцированного налоксоном.
□ морфин DTyr.Pro-lL.DlSet.HH2 о Туг.рРг» Зег.ИН2
Отличия от контроля достоверны (*) при р<0.05 по критерию Вилкоксона-Манна-Уитни (ичея^.
При провокации налоксоном синдрома отмены после введения Tyr-Pro-[A,I]Ser-NH2 и Tyr-D-Pro-Ser-NHi в дозах 3x50, 3x75 и 3x100 мг/кг в течение 5 дней прыжки и птоз наблюдаются у меньшего числа животных по сравнению с поведением морфин-зависимых животных (рис.10).
При однократном введении Tyr-Pro-[A£]Ser-NH2 и Tyr-D-Pro-Ser-NH2 показывают высокий терапевтический индекс (табл. 5). Пептиды не вызывают гибели животных в дозах до 800 мг/кг (в/б). В дозе 100 мг/кг (в/б) Tyr-Pro-[A£]Ser-NH2 и Tyr-A-Pro-Ser-NH2 не влияют на двигательную активность, ориентировочно-исследовательскую реакцию и не вызывают миорелаксации, нарушения координации движений, нарушений ушного и корнеального рефлексов, судорог, тремора, птоза, прыжков, встряхиваний, стука зубами, синдрома Штрауба, чесания, чихания и бокового положения.
4. Изучение нейротропной активности Туг-Pro-[I),/. | S er- N Н2 и Туг-/>-Рго-Ser-NH2
Tyr-Pro-[A,L]Ser-NH2 и Tyr-A-Pro-Ser-NH2 в дозах 1.0 и 10.0 мг/кг (в/б) не изменяют показателей двигательной активности в открытом поле. Tyr-Pro-[AL]Ser-NH2 в дозах 1.0 и 10.0 мг/кг проявляет дозо-зависимое анксиолитическое действие в тесте ПКЛ и в дозе 10.0 мг/кг - в тесте конфликтной ситуации. Антидепрессантная активность Tyr-Pro-[Ai.]Ser-NH2 проявляется в тесте неизбегаемого плавания в дозах 1.0 и 10.0 мг/кг и в тесте вращающихся колёс по Nomura в дозе 0.1 мг/кг. Пептид в дозах 1.0 и 10.0 мг/кг оказывает противосудорожное действие в тесте МЭШ и не влияет на судорожную готовность в тесте коразоловых судорог. Tyr-A-Pro-Ser-NH2 вызывает анксиолитическое действие в дозе 10.0 мг/кг только в тесте ПКЛ (рис. 11) и не проявляет противосудорожную и антидепрессантную активность.
Рисунок 11. Профиль активности Tyr-Pro-[AX]Ser-NH2 и Tyr-D-Pro-Ser-NH2. Tyr-Pro-[A,L]Ser-NH2 Tyr-A-Pro-Ser-NH2
Примечание: Указаны дозы, вызывающие достоверные эффекты: 1 - доза 10 мг/кг. 2 - доза 1 мг/кг, 3 -доза 0.1 мг/кг. Дозы, угнетающие дыхание и вызывающие гибель: 1 - 300 мг/кг, 2 - 500 мг/кг, 3 - 800 мг/кг. Синдром отмены (при провокации налоксоном прыжков): 1 - 30% животных. 2 - 60%, 3 - 100%.
Изменение температуры окружающей среды приводит к изменению болевой реакции контрольной группы в тесте уксусных корчей (рис. 12). Максимальное число корчей наблюдается в термонейтральной среде. ДМ в дозе 1.0 мг/кг (в/б) уменьшает число корчей во всех температурных режимах. Туг-Рго-[Д.£,]Зег-МН2 обладает анапьгетическим действием только в термонейтральной среде. Наблюдаемые свойства не зависят от терморегуляторных эффектов пептидов. Туг-Рго-[Д1]8ег-МН2 в условиях холодной и термонейтральной среды не влияет на температуру тела, а в жаркой среде вызывает гипертермию, по динамике сходную с эффектом ДМ. Туг-Рго-[Д1]5ег-1МН2 только в термонейтральной среде вызывает сужение сосудов.
Рисунок 12. Болевая чувствительность в тесте уксусных корчей при разной температуре окружающей среды зависимость контрольных величин (А); влияние ДМ и Туг-Рго-[Д1]Зег-1ЧН2 (Б).
140
120 -„ 100 "
| 80-| 60 "
40 " 20 " 0
|Ь
rfl
0-6 13-14 21-22 26-27 31-33 теиперэтура скружагацей среды, оС
120 100
£ 80 5 60
CL
S 40 20 " 0
- О-бС а 2Б-27С о 31-33C
4i
Ii
дм
Туг-Рго-[D,l]Ser-MH2
Отличия от контроля в тестируемом температурном режиме достоверны (*) при р<0.05 по критерию Вилкоксона-Манна-Уитни (Шей).
5. Изучение фармакокинетических параметров Tyr-Pro-[AZ,]Ser-NH2 и Туг-ö-Pro-Ser-NH2
Анализ параметров кинетики - Tyr-[3H]Pro-[D,L]Ser-NH2 и Tyr-£>-[3H]Pro-Ser-NH2 показал, что пептиды определяются в крови, печени и почках на протяжении 120 минут, а в мозге, сердце и легких - 40 минут. Время достижения максимальной концентрации (Tmax) Tyr-[3H]Pro-[D,Z,]Ser-NH2 и Tyr-ß-[3H]Pro-Ser-NH2 составило 5 мин, а ее величина 0.71 и 0.67 % на мл/г, соответственно для пептидов. Пептиды с одинаковой скоростью выводятся из организма. Значения периода полувыведения (t|/2cl) и MRT из крови для Tyr-[3H]Pro-[D,L]Ser-NH2 - 53.8 мин и 43.2 мин, а для Туг--D-[3H]Pro-Ser-NH2 - 57.8 мин и 46.1 мин, соответственно.
В распределении Tyr-[3H]Pro-|7?,L]Ser-NH2 по органам прослеживается значительная гетерогенность. Анализ абсолютных величин тканевой доступности (Ft) исследуемых веществ (табл.7, рис. 13) показал, что пептиды наиболее интенсивно распределяются в хорошо васкуляризированных органах (почки, печень), и наименее
- в менее васкуляризированных органах (легкие, сердце, мозг). Тут-[3Н]Рго-[Д1]8ег-1ЧН2 и Туг-/)-[3Н]Рго-Зег-НН2 обладают малой интенсивностью проникновения в мозг, величина тканевой доступности - 0.11 и 0.04 соответственно. В качестве основного метаболита в тканях определяется [3Н]Рто или Д[3Н]Рго. Других возможных метаболитов Туг-[3Н]Рго/£»-[3Н]Рто или [3Н]Рго/£>-[3Н]Рго-8ег-МН2 обнаружено не было. Туг-[3Н]Рго-[0,Х]8ег-КН2 чувствителен к действию пептидаз и хорошо метаболизируется ферментами крови, сердца, легких, мозга, печени, мозга и незначительно ферментами почек.
Таблица 7. Основные фармакокинетические параметры Туг-[3Н]Рго-[Д£]8ег-1ЧН2 (А) и Туг-£>-[3Н]Рго-8ег-ЫН2 (Б) после его внутримышечного введения животным в дозе 1 мг/кг.
Биоматериалы АиС Тше| МЯТ Тщах Стах Р,
Мин*%/мл/г Мин*%/мл/г Мин Мин % на мл/г АиСткани/ АиСкрови
А Б А Б А Б А Б А Б А Б
Кровь 28.3 28.6 53.8 57.8 43.2 46.1 5.0 5.0 0.71 0.67 - -
Почки 201.2 371.1 19.2 19.0 55.6 57.3 20.0 20.0 4.05 6.16 5.70 9.19
Печень 52.6 193.8 18.2 76.9 56.1 87.6 20.0 80.0 1.06 1.57 1.49 2.34
Мозг 1.8 1.3 38.6 6.3 36.6 45.1 5.0 20.0 0.08 0.03 0.11 0.04
Сердце 9.5 12.8 50.7 67.0 37.3 39.2 5.0 5.0 0.33 0.32 0.46 0.48
Легкие 9.7 20.2 14.1 14.3 45.0 40.7 20.0 20.0 0.25 0.49 0.35 0.73
Рисунок 13. Тканевая доступность Туг-[3Н]Рго-[Д/.]8ег-1ЧН2 и Туг-£>-[3Н]Рго-8ег-ЫН2 после внутримышечного введения животным в дозе 1 мг/кг.
почки печень легкие сердце мозг
V. Изучение механизма действия Туг-Рго-[Д£]8ег-]УН2 и Туг-ДРго-Бег^Н,
В механизме анальгетического действия Туг-Рго-[Д£]8ег-МН2 и Туг-ДРго-Эег-ЫНг участвует опиоидергическая система. Это подтверждается способностью
напоксона, наптрексона и налоксона метиодида ослаблять эффекты пептидов в тестах отдергивания хвоста и уксусных корчей (табл. 8, рис. 14).
Рисунок 14. Влияние блокаторов опиоидных рецепторов на анальгетическую активность Туг-Рго-[Д£]8ег-МН2 и Туг-£>-Рго-8ег-ЫН2 в тесте отдергивания хвоста.
— контрояь —о— к«1<адт 1 '..и-; п —Tyt.Dftfr3e.NK2 -■»- T5rt.Fto.tP.Lper.NH2
— Tyt.DPto.SB.HH2 + налгжсонЗ 1Я>'гг —й— Т^-Ргй.[0.1]Зй1.НН2 + далоксон ! мг/кг
■ ■ Tyt-EiPro.3er.NH2 + м*псе:сон!.!ет 1 Mr.tr А Туг-Рго-[0Д.]^е1-НН2 + ¡етгоксон мет1 ыг/кг
— налоксая мет I г.згЛх
Отличия от контроля достоверны (*) при р<0.05 по критерию Вилкоксона-Манна-Уитни (1.1-1ен1).
Таблица 8. Влияние блокаторов опиоидных рецепторов на анальгетическую активность Туг-Рго-[Д£]8ег-МН2 и Туг-£)-Рго-8ег-ЫН2 в тесте уксусных корчей.
% от контроля Рецепторы
Пептид (в/б)+блокатор (п/к) Туг-Рго-[ДЦБег Туг-О-Рго-Эег- ЫН, опиоидные орфановые каннабиноизные
М М| 5 К М6|ЗГ окь. СВ,
13.2% 26.9%
Налоксон 1 мг/кг 87.7%# 83.1 %# шнгральиыс и периферические
Налоксон метиодид 1 мг/кг 110%# 103% # 1 '1; I, „чески. -л * ■
Налтрексон 1 мг/кг 94.3%* # 88.3%* # '1 ! >,Жр
3-метоксиналтрексон 5 мг/кг 21.8% * 25.5% *
Налоксоназин 10 мг/кг 9.7% * 13.2% *
Налтриндол 5 мг/кг 1.7% *# 11.4% *#
Налоксона бензоил-гидразон I мг/кг 36.7% * 31.2%* агонист
АМ-251 5 мг/кг 19.2%* 24.6% *
% относительно группы активного контроля, получившего уксусную кислоту. Отличия достоверны при р<0.05 от контрольной группы (*) и от группы, которой вводили пептид (#) то критерию Вшткоксона-Мэнна-Уитни (Шезг). Ь2зЗ- блокирует; □ - не влияет; И® - потенцирует; М60Г - рецепторы морфин-6-р-глюкуронида.
28
Анальгетический эффект Tyr-Pro-[D,Z,]Ser-NH2 и Tyr-Z)-Pro-Ser-NH2 (в/б) в тесте уксусных корчей не блокируется (п/к) 3-метоксиналтрексоном (антагонист рецепторов морфин-б-Р-глюкуронида), АМ-251 (антагонист каннабиноидных СВ,-рецепторов), налоксоназином (антагонист ЦгОР) или бензоилгидразоном налоксона (агонист ki-OP и антагонист ORL,- и ц-ОР) и усиливается при блокаде 5-ОР налтриндолом (табл. 8).
В исследованиях in vitro показано, что Tyr-Pro-[AL]Ser-NH2 и Tyr-D-Pro-Ser-NH2 не взаимодействуют с периферическими 5-ОР препарата СПМ (1С50 6.5x10"4 моль и 5.3x10"4 моль, соответственно) и проявляют слабое сродство к периферическим ц-ОР препарата ПКМС (1С50 З.ЗхЮ"5 моль и 4.0х10"5 моль, соответственно) (табл. 6).
Показано, что [3Н]-ДМ имеет два участка насыщения в мембранной фракции головного мозга крысы, соответствующие 1.5-3 нМ и >5 нМ (КД[ = 0.26 ± 0.07 нМ и концентрация рецепторов Bmaxi = 24 ± 0.66 фмоль/мг белка, КД2=1.7 ± 0.01 нМ и концентрация рецепторов Втах2 = 53 ± 4.4 фмоль/мг белка (рис. 15). Tyr-Pro-[D,i]Ser-NH2 и Tyr-Z?-Pro-Ser-NH2 вытесняют [3Н]-ДМ только из «высокоаффинных» мест связывания, в первую очередь оккупируемых [3Н]-ДМ при использовании его в концентрации 0.5 нМ. (1С5о немеченого ДМ - составила 0.5 нМ, 1С50 для Туг-Рго-[D,Z,]Ser-NH2 - 8±2 мкМ, 1С50 для Tyr-Z)-Pro-Ser-NH2 - 5±1 мкМ) и не влияют на связывание [3Н]-ДМ с «низкоаффинными» местами связывания (рис. 15), чувствительными к немеченому ДМ и агонисту ОР DAGO (1С50 составила 5 и 4.8 нМ, соответственно).
Рисунок 15. Зависимость специфического связывания от концентраций [3Н]-ДМ в присутствии 5 мкМ ДМ (контроль), Tyr-Pro-[D,£]Ser-NH2, Tyr-D-Pro-Ser-NH2. (А), в координатах Скетчарда (Б).
0p05
0,0045
* орм
S
S 0,0035
£ ороз
t 0,0025
2 0pG2
i
f 0,0315
:
!*: О opoi
0,0005
А
-контроль • Туг- D Pro- Ser- N Н2
(*Н]ДМ, нМ
0,03052
o.oaoti
O.OD0) Q.03009
o.oaoc«
0.03D07 ; О.ООВ06
оимою mm
0.00003 ОДИХ» 0,00001 о
- Туг- Pro- [D, L ] Ser- N H2
Исследование ноцицептивного флексорного рефлекса показало, что Туг-Д-Рго-Ser-NHi (1.0 мг/кг, в/б) вызывает достоверное повышение порога возникновения раннего и позднего ответа, а также снижает количество спайков в раннем и позднем ответе, что характеризует подавление частоты импульсации в ноцицептивных А5- и С-волокнах. Сходным действием обладает морфин (Kimura et al., 2004), а ДМ снижает частоту импульсации только в С-волокнах (Sullivan, Dickenson, 1988).
Анализ электрофизиологических механизмов действия показал, что Туг-Рго-[D,L]Ser-NH2 (1 мг/кг, в/б) имеет отличный от морфина и ДМ профиль изменений биоэлектрической активности. В миндалине, гипоталамусе, ретикулярной формации ствола мозга и сенсомоторной коре через 10 минут после введения Tyr-Pro-[Ai]Ser-NH2 в дозе 1 мг/кг повышает Р, и р2 активность, а ДМ в той же дозе оказывает сноподобное действие, увеличивая активность в 5-диапазоне и уменьшая в 9Ь 02, р, и диапазонах. Морфин в дозе 5 мг/кг повышает 5-активность в перечисленных структурах. Общим в действии Tyr-Pro-[Z),L]Ser-NH2, ДМ и морфина является повышение Pi активности в сенсомоторной коре через 10 минут после введения и снижение р2 активности в гиппокампе через 20 минут после введения.
Рисунок 16. Влияние ДМ, Tyr-Pro-[AI]Ser-NH2 и морфина на содержание аминокислот в стриатуме крыс.
Asp 6lu Gly ГАМК
Отличия от контроля достоверны (*) при р<0.05 по критерию Вилкоксона-Манна-Уитни (1Мс81).
Туг-Рго-[Д.Ц8ег->Ш2, ДМ и морфин также различаются по влиянию на содержание и оборот моноаминов и аминокислот в мозге крыс. Туг-Рго-[Д1]8ег-МН2 в дозе 1 мг/кг (в/б) не влияет на содержание и оборот моноаминов, снижает содержание ГАМК в спинном мозге, повышает содержание глутаминовой кислоты, аспарагиновой кислоты и глицина в спинном мозге и стриатуме (рис. 16), и только глицина в гиппокампе. Морфин в дозе 5 мг/кг повышает количество глутаминовой кислоты в стриатуме и снижает содержание глицина в гиппокампе. ДМ в дозе 1 мг/кг повышает содержание ГАМК в стволе, глицина в стволе и стриатуме, а в спинном мозге снижает количество глицина. Общим в действии Туг-Рго-[Д1]Зег-ЫН2 и ДМ
является увеличение содержания глицина в стриатуме, а сходство между Туг-Рго-[D,Z,]Ser-NH2 и морфином проявляется в повышении глутаминовой кислоты в стриатуме. На содержание глицина в гиппокампе морфин и Tyr-Pro-[ß,i]Ser-NH2 оказывают разнонаправленное действие: трипептид - повышает, а морфин - снижает. На содержание глицина в спинном мозге ДМ и Tyr-Pro-[A£]Ser-NH2 также оказывают разнонаправленное действие.
Таким образом, аналитическая активность Tyr-Pro-[ö,L]Ser-NH2 и Tyr-D-Pro-Ser-NH2 снижается налоксоном и не проникающим через ГЭБ налоксона метиодидом; пептид проявляет слабое сродство к периферическим р-ОР и не взаимодействует с периферическими 5-ОР на препаратах изолированных органов ПКМС и СПМ. При блокаде 6-ОР анальгетическая активность усиливается. Анальгетическое действие Tyr-Pro-[D,L]Scr-NH2 и Tyr-D-Pro-Ser-NH2 в тесте уксусных корчей не реализуется через pi, морфин-6-Р-глюкуронидные, каннабиноидные СВЬ и орфановые ORLr рецепторы. Электроэнцефалографические и нейрохимические исследования также выявили существенные различия в эффектах Tyr-Pro-[D,L]Ser-NH2, ДМ и морфина и указывают на участие иного, отличного от классического опиоидного механизма действия, в реализации эффектов Tyr-Pro-[D,£]Ser-NH2 и Tyr-£>-Pro-Ser-NH2.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Анализ первичных последовательностей атипичных ОП, используемый в настоящей работе, позволил выявить наиболее часто встречающуюся пептидную последовательность - дипептид Туг-Рго у 63% пептидов. Эта последовательность Туг-Рго принимает участие в образовании ß-поворота, необходимого для взаимодействия с центрами связывания (Haslach et al., 2008; Doi et ah, 2002). Так ДМ (Tyr-D-Ala-Phe-Gly-Tyr-Pro-Ser-NH2), благодаря присутствию в молекуле Ö-Ala2 и ¿-Pro6 в растворе может образовывать два N- и С-концевых ß-поворота (Renugopalakrishnan, Rapaka, 1988), что соответствует двум центрам связывания ДМ. Это послужило основанием для предположения о том, что модификация Pro в молекуле Туг-Рго-содержащих пептидов может привести к изменению их биологической активности. Действительно, в нашем исследовании установлено, что замена пролина в молекуле ДМ на D-стереоизомер или его дегидрирование приводит к усилению и пролонгированию анальгетической активности в тесте соматической боли при термическом раздражении ноцицепторов, но не влияет на анальгетические эффекты при механическом и химическим раздражении соматических и висцеральных рецепторов, а также ослабляет седативное действие. Однако, несмотря на различия в эффектах, стереохимическая модификация по пролину в молекуле ДМ не изменяет сродства к р-и 5-ОР на препаратах изолированных органов.
Полученные результаты подтвердили значимость последовательности Туг-Рго для проявления эффектов пептидов и побудили к детальному изучению собственной активности дипептида. Дипептид Туг-Рго впервые был синтезирован и описан в работе, посвященной количественной оценке горького вкуса пептидов этой группы, как один из фрагментов р-казеина (Shinoda et al., 1986). В этом же году было установлено, что Тут-Pro является одним из продуктов ферментативной деградации in vitro опиоидного пептида ДМ (Scalia et al., 1986). В плазме человека и крысы Туг-Рго может образовываться при деградации пептида Tyr-MIF-1 (Kastin et al., 1994), эндоморфина-l (Tomboly et al., 2002; Barsun et al., 2007) и эндоморфина-2 (Sakurada et al., 2003). В гидролизе принимают участие дипептилпептидазы III и IV (Chen et al., 2004). Tyr-Pro также был обнаружен в ферментативном гидролизате казеинов молока (FitzGerald, Meisel, 2000; Zhu et al., 2007). Туг-Рго может также образовываться при гидролизе дипептилпептидазой IV нейропептида Y (NPY), в результате чего образуется фрагмент NPY3.36, с уменьшенной аффинностью к Y, рецепторам (Gerald et al., 1996). Установлено, что дипептид обладает антигипертензивным действием в дозах 0.1 - 10.0 мг/кг у спонтанногипертензивных крыс (Yamamoto et al., 1994), и этот эффект может быть обусловлен подавлением действия ангиотензин-превращающего фермента (Zhu et al., 2007). В исследованиях R6nai и коллег (2006) показано выраженное анальгетическое действие дипептида (100 нмоль на крысу, т.е. примерно 0.16 мг/кг) при внутрижелудочковом введении в тесте отдергивания хвоста.
Анальгетическая активность Туг-Рго при системном введении ранее не изучалась. В нашем исследовании было установлено, что Туг-Рго в дозах 0.1 - 10.0 мг/кг обладает дозо-зависимой анальгетической активностью в тестах тонической и фазической болей, вызванных термическим, механическим и химическим раздражением соматических и висцеральных рецепторов, которая снижается неселективными блокаторами центральных и периферических ОР налоксоном и налоксона метиодидом, соответственно. В тестах in vitro Tyr-Pro обладает слабым сродством к периферическим 5-ОР и не взаимодействует с периферическими ц-ОР. В исследованиях Ronai и коллег (2006) также не удалось обнаружить у Туг-Рго опиоидной активности в тестах in vitro. Кроме того, этой же группой исследователей было показано, что в экстракте мозга крыс через 30 мин после внж введения [3Н]Туг-Рго радиоактивность обнаруживается в тетра- и трипептидах, родственных эндоморфину-2, причём основным метаболитом является дезамидированный эндоморфин-2. Однако, анальгетическое действие эндоморфина-2 чувствительно к действию антагонистов ОР налоксоназину и 3-метоксиналтрексону, что указывает на участие щ-опиатных и морфин-6-/?-глюкуронидных рецепторов (Mizoguchi et al., 2006; Sakurada et al., 2002). В наших исследованиях установлено, что анальгетическое действие Туг-Рго не блокируется антагонистом ргОР налоксоназином и антагонистом
морфин-6-Р-глукуронидных рецепторов 3-метоксиналтрексоном, следовательно, анальгетическое действие при периферическом введении Туг-Pro не опосредовано эндоморфином-2.
Выполненный нами анализ первичной структуры атипичных ОП показал, что опиоидная активность не зависит от положения пары -Туг-Рго- в последовательностях этой выборки и сохраняется, как при его перемещении в N-конец молекулы (эндоморфины, геморфины), так и внутрь цепи (глютеновые экзорфины А, геморфины, дерморфины), и в С-концевое положение (глютеновый экзорфин А, геморфин-(1-5)). Это указывает на возможность сохранения анальгетической активности при модификации -Туг-Pro- с С- и //-концов природными аминокислотами.
На основании полученных результатов были синтезированы и изучены соединения общей формулы A-Tyr-Pro(D-Pro, ДРго, D-ДРго, Нур)-В-Х, где А, В -природные аминокислоты, а X - метильная или амидная группа. Среди протестированных 22 оригинальных синтетических пептидов наиболее эффективными оказались Tyr-Pro-[D,L]Ser-NH2 и Tyr-D-Pro-Scr-NIb. Анализ литературных источников показал, что свойства пептидов Tyr-Pro-Z)-Ser-NH2 и Tyr-D-Pro-Ser-NH2 ранее не изучались, а трипептид Tyr-Pro-L-Ser-NH2 был изучен только при внутримозговом введении в тесте горячей пластины, где продемонстрировал отсутствие анальгетической активности (Broccardo et al., 1981). В- наших исследованиях было установлено, что в изучаемой нами смеси стереоизомеров Туг-Pro-[AI]Ser-NH2 (1:1) анальгетической активностью при в/б введении обладает именно Tyr-Pro-D-Ser-NH2, а не Tyr-Pro-Z-Ser-NH2 Установлено, что Tyr-Pro-[D,L]Ser-NH2 и Tyr-ö-Pro-Ser-NHo в дозах 0.1-10.0 мг/кг проявляют активность в широком наборе тестов оценки болевой чувствительности и на моделях воспалительной боли. Tyr-£>-Pro-Ser-NH2 подавляет частоту импульсации в А5- и С-волокнах ноцицепторов. Туг- Pro-[D, ¿] S er-NH2 оказывает обезболивающее действие на модели нейропатической боли, но не при моделировании центрального болевого синдрома. Анальгетическое действие пептида зависит от температуры окружающей среды (в холодной и жаркой среде ослабляется). Анальгетический эффект Tyr-Pro-[ö,I]Ser-NH2 и Tyr-ß-Pro-Ser-NH2 (в/б) блокируется неселективными антагонистами центральных и периферических ОР, однако пептиды проявляют слабое сродство к периферическим р- и не связываются с 6-ОР на препаратах изолированных органов ПКМС и СПМ, но взаимодействуют с «высокоаффинными» местами связывания ДМ в головном мозге крыс.
Таким образом, выявлен новый класс пептидных соединений, обладающих анальгетической активностью. Отобранные для дальнейших исследований пептиды Tyr-Pro-[Z>,L]Ser-NH2 и Tyr-£)-Pro-Ser-NH2 проявляют анальгетическую активность и
обладают рядом преимуществ по сравнению с морфином: 1) имеют большую терапевтическую широту и не оказывают влияния на частоту дыхания при превышении терапевтической дозы в 500 раз; 2) у пептидов не отмечено развития толерантности по анальгетическому действию при их хроническом введении; 3) у пептидов не выявляется проявлений синдрома отмены после прекращения их длительного введения (28 дней) и наблюдается достоверно менее выраженные проявления острой физической зависимости при провокации напоксоном. По сравнению с диклофенаком пептиды активны в более широком диапазоне тестов и в меньших дозах.
ВЫВОДЫ
1. При анализе биоинформационными методами первичной последовательности 60 представителей атипичных опиоидных пептидов выявлена аминокислотная последовательность -Туг-Рго- у 63% веществ. Показано, что наличие опиоидной активности пептидов не зависит от положения -Туг-Рго- в их молекулах.
2. Туг-Рго в дозах 0.1 - 10.0 мг/кг (в/б) проявляет анальгетическую активность в тестах фазической и тонической боли при раздражении соматических и висцеральных ноцицепторов химическими, термическими и механическими стимулами. Анальгетическая активность Туг-Рго чувствительна к действию центральных и периферических антагонистов опиоидных рецепторов налоксона и налоксона метиодида, однако пептид проявляет слабое сродство к 8-опиоидными рецепторам семявыносящего протока мыши и не взаимодействует с ц-опиоидным рецепторам подвздошной кишки морской свинки.
3. Стереохимическая модификация остатка пролина в молекуле Туг-Рго-содержащего пептида дерморфина не влияет на сродство к периферическим ц- и 5-опиоидным рецепторам. Замена ¿-пролина на О-стереоизомер не изменяет анальгетическую активность дерморфина при механическом и химическом раздражении ноцицепторов, но ослабляет противовоспалительное действие. Дегидрирование пролина в молекуле дерморфина повышает сродство к опиоидным рецепторам, ослабляет противовоспалительное и анальгетическое действие при механическом раздражении ноцицепторов и приводит к появлению анксиолитической и потере противосудорожной активности.
4. Изучение зависимости между строением и анальгетической активностью в ряду новых 22 синтетических пептидов, содержащих -Туг-Рго-, выявило, что наибольшей активностью обладают трипептиды Туг-Рго-[Д Ь] Бег-ИНг (1:1) и Туг-Б-Рго-Бег-МНг, которые в дозах 0.1 - 10 мг/кг проявляют анальгетическое действие в тестах фазической и тонической боли при раздражении соматических и висцеральных ноцицепторов химическими, термическими и механическими стимулами, и в тестах воспалительной боли. Анальгетическая активность трипептидов сохраняется в
34
течение 90 минут и наблюдается при различных способах введения (внутрибрюшинном, внутримышечном, внутрь и интраназальном). В смеси стереоизомеров Tyr-Pro-[D,L]Scr-NH2 анальгетической активностью обладает D-стереоизомер, а ¿-стереоизомер - не активен.
5. При исследовании механизма действия Tyr-Pro-[D,£]Ser-NH2 и Tyr-D-Pro-Ser-NHj обнаружено, что анальгетическая активность пептидов чувствительна к действию центральных и периферических антагонистов опиоидных рецепторов (напоксона, налтрексона и налоксона метиодида), однако пептиды проявляют слабое сродство к ц-опиоидным рецепторам подвздошной кишки морской свинки и не взаимодействует с 5-опиоидными рецепторами семявыносящего протока мыши. Оба пептида связываются с «высокоаффинными» центрами связывания дерморфина мембранной фракции гомогената мозга крысы. Tyr-Pro-[Ai]Ser-NH2 увеличивает содержание в стриатуме и спинном мозге возбуждающих глутаминовой и аспарагиновой аминокислот и тормозной аминокислоты глицина, и в гиппокампе -глицина.
6. Животные, получавшие Tyr-Pro-[A,Z]Ser-NH2- и Tyr-D-Pro-Ser-NHj в высоких возрастающих дозах, проявляют достоверно меньшие по интенсивности симптомы синдрома отмены, провоцируемого налоксоном, по сравнению с морфином и [А-Ргоб]-дерморфином. Хроническое (28 дней) введение Tyr-Pro-[D,L]Ser-NH2 и Tyr-A-Pro-Ser-NH2 не приводит к развитию толерантности по анальгетическому эффекту, а прекращение 28-дневного введения пептидов не вызывает проявлений синдрома отмены.
7. Tyr-Pro-[D,L]Ser-NH2 и Tyr-D-Pro-Ser-NH2 наиболее интенсивно распределяются в сильно васкуляризированных органах (печень, почки) и меньше - в слабоваскуляризированных (мозг, легкие, сердце). Соединения выводятся из организма (ti,2ci из крови = 53.8 и 57.8 мин, MRT из крови = 43.2 и 46.1 мин соответственно). Протеолиз Tyr-Pro-[D,L]Ser-NH2 и Tyr-D-Pro-Scr-NH2 осуществляется ферментами крови, сердца, легких и мозга. В качестве основного меченного метаболита обнаруживается пролин и А-пролин, соответственно.
8. Tyr-Pro-[A,i]Ser-NH2 и Tyr-A-Pro-Scr-NII2 в сравнении с морфином обладают большей терапевтической широтой, достоверно менее выраженными проявлениями синдрома отмены и толерантности, не влияют на дыхательный центр (в дозах до 800 мг/кг), а в сравнении с диклофенаком - активны в меньших дозах и имеют более широкий спектр анальгетической активности. Отобранные пептиды, сочетающие анальгетическую активность и безопасность применения, можно рассматривать в качестве базисных соединений для создания потенциального анальгетика пептидной природы.
СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ АВТОРА
1. Гузеватых, Л.С. Влияние дерморфина, его фрагментов и аналогов на систему терморегуляции [Текст] / Л.С. Гузеватых, Т.Г. Емельянова, А.Б. Усенко, H.H. Горячева, JI.A. Андреева, Л.Ю. Алфеева, Н.Ф. Мясоедов // Международная конференция "Роль нейромедиаторов и регуляторных пептидов в процессах жизнедеятельности", 1999, Беларусь, Минск. - Минск, 2001. - С. 126.
2. Гузеватых, Л.С. Изучение анальгетической активности аналогов эндогенного пептида дерморфина [Текст] / Л.С. Гузеватых, Л.А. Андреева, Л.Ю. Алфеева, А.Б. Усенко, Т.Г. Емельянова, Т.А. Воронина, Н.Ф. Мясоедов // Международная научная конференция «Новые лекарственные средства: синтез, технология, фармакология, клиника». Минск, 14-16 ноября 2001. - Минск, 2001. - С.58.
3. Емельянова, Т.Г. Влияние аналогов дерморфина на терморегуляцию крыс в различных температурных режимах [Текст] / Т.Г. Емельянова, А.Б. Усенко, А.П. Бонарцев, A.A. Каменский, Л.С. Гузеватых, Л.А. Андреева, Л.Ю. Алфеева, Н.Ф. Мясоедов // Известия АН, серия биологическая. - 2002. - Т.З. - С. 348-354.
4. Гузеватых, Л.С. Влияние структурных изменений Pro6 в молекуле дерморфина на анальгетическую активность [Текст] / Л.С. Гузеватых, Т.Г. Емельянова, А.Б. Усенко, Л.А. Андреева, Л.Ю. Алфеева, Т.А. Воронина, Н.Ф. Мясоедов // Известия АН, серия биологическая. - 2002. - Т. 4. - С. 472-476.
5. Емельянова, Т.Г. Структурно-конформационные особенности дерморфинов и их роль в регуляции температурного гомеостаза [Текст] / Т.Г. Емельянова, Л.С. Гузеватых, А.Б. Усенко, Л.А. Андреева, Л.Ю. Алфеева, Н.Ф. Мясоедов // Тезисы докладов Всероссийского симпозиума «Механизмы терморегуляции и биоэнергетики: взаимодействие функциональных систем»; Иваново, 1-5 октября 2002. - Иваново, 2002. -С. 22.
6. Емельянова, Т.Г. Дерморфины - природные опиоидные пептиды. Связь структуры с функцией [Текст] / Т.Г. Емельянова, Л.С. Гузеватых, А.Б. Усенко, Л.А. Андреева, Л.Ю. Алфеева, Н.Ф. Мясоедов // Тезисы научных докладов III Съезда биохимического общества; Санкт-Петербург, 2002. - С.-Пб., 2002. - С. 538.
7. Emel'yanova, T.G. In vitro and in vivo opioid activity of [D-Pro6]dermorphin, novel analogue to dermorphin [Текст] / T.G. Emel'yanova, A.B. Usenko, M.G. Uranova, A.A. Kamensky, L.S. Guzcvatykh, L.A. Andreeva, L.A. Alfeeva, N.F. Myasoedov, E. Gianini, G. Improta, M. Broccardo // Peptides. - 2003. - V.24, №3. - P. 419-428.
8. Гузеватых, Л.С. Анальгетическая активность аналогов дерморфина со стереохимическими модификациями пролина в шестом положении [Текст] / Л.С. Гузеватых, Т.А. Воронина, Т.Г. Емельянова, Л.А. Андреева, Н.Ф. Мясоедов // Материалы II съезда Российского научного общества фармакологов «Фундаментальные проблемы фармакологии»; Москва, 2003, ч. 2. - М., 2003. - С. 228.
9. Emel'yanova, T.G. Structure-activity relationships of Dermorphines [Текст] / T.G. Emel'yanova, A.B. Usenko, L.S. Guzevatykh, L.A. Andreeva, L.Y. Alfeeva,
N.F. Myasoedov // Tenth German-Russian Peptide Symposium, Turingia, Germany, 2-5 October 2003. - Germany, Turingia, 2003. - P. 23.
10. Емельянова, Т.Г. Структурно-функциональные исследования дерморфинов [Текст] / Т.Г. Емельянова, А.Б. Усенко, Л.С. Гузеватых, Л.Ю. Алфеева, Л.А. Андреева; Н.Ф. Мясоедов // Тезисы докладов Российского симпозиума по химии и биологии пептидов; Москва, 17 ноября 2003. - М., 2003. - С. 10.
11. Валуйских, Д.В. Роль шестой аминокислоты молекулы дерморфина в проявлении анальгетической активности пептида [Текст] / Д.В. Валуйских, Л.С. Гузеватых, Л.Ю. Алфеева, Л.А. Андреева, Т.Г. Емельянова, Т.А. Воронина, Н.Ф. Мясоедов // Тезисы стендовых сообщений Российского симпозиума по химии и биологии пептидов; Москва, 17 ноября 2003. - М., 2003. - С. 66.
12. Емельянова, Т.Г. «Терморегуляторная активность фрагментов дерморфина» [Текст] / Т.Г. Емельянова, H.H. Горячева, Л.С. Гузеватых, Л.А. Андреева, Л.Ю. Алфеева, Н.Ф. Мясоедов // Известия АН, серия биологическая. - 2004. - Т.5. - С. 570-576.
13. Емельянова, Т.Г. «Изучение терморегуляторной активности фрагмента природного предшественника дерморфина - Arg-дерморфина и его аналогов» [Текст] / Т.Г. Емельянова, H.H. Горячева, Л.С. Гузеватых, Л.А. Андреева, Л.Ю. Алфеева, Н.Ф. Мясоедов // Известия АН, серия биологическая. - 2005. - Т. 1. - С. 47-54.
14. Гузеватых, Л.С. «Анальгетическая активность дерморфина и его пролиновых аналогов» [Текст] / Л.С. Гузеватых, Д.В. Валуйских, Т.А. Воронина, Т.Г. Емельянова, Л.А. Андреева, Л.Ю. Алфеева, С.Б. Середенин, Н.Ф. Мясоедов // Экспериментальная и клиническая фармакология. - 2005. -Т.68, №2. - С.8-10.
15. Гузеватых, Л.С. «Сравнительное изучение физической зависимости пролинового аналога дерморфина и морфина» [Текст] / Л.С. Гузеватых, Д.В. Валуйских, Т.А. Воронина, Т.Г. Емельянова, Л.А. Андреева, Л.Ю. Алфеева, Н.Ф. Мясоедов // Экспериментальная и клиническая фармакология. - 2005. - Т.68, №3. - С. 16-19.
16. Guzevatykh, L.S. «The biological activity of the novel fragment of the natural precursor for the dermorphin - Arg-dermorphin and its analogues» [Текст] / L.S. Guzevatykh // Proceeding of 8th ECNP Regional Meeting, Moscow - Russia, April 14-16, 2005. - Eur. Neuropsychopharmacology. - 2005. - V.15 (Suppl. 2). - S268.
17. Гузеватых, Л.С. «Анальгетическая активность дерморфина и его аналогов» [Текст] / Л.С. Гузеватых, Т.А. Воронина, Т.Г. Емельянова, Л.А. Андреева, Н.Ф. Мясоедов // Тезисы докладов II Российского симпозиума по химии и биологии пептидов, Санкт-Петербург, 25-27 мая 2005. - С.-Пб., 2005. - С.39.
18. Емельянова, Т.Г «Влияние стереохимической модификации Pro6 в молекуле дерморфина на изменение сосудодвигательной активности« [Текст] / Т.Г. Емельянова, Л.С. Гузеватых, Л.Ю. Алфеева, Л.А. Андреева, Н.Ф. Мясоедов, Т.А. Воронина // Тезисы докладов И Российского симпозиума по химии и биологии пептидов, Санкт-Петербург, 25-27 мая 2005. - С.-Пб., 2005. - С.56.
19. Гузеватых, Л.С. «Анальгетическая активность пролиновых аналогов дерморфина» [Текст] / Л.С. Гузеватых, Т.А. Воронина, Т.Г. Емельянова, Л.А. Андреева, Н.Ф. Мясоедов
// Материалы Российской научно-практической конференции с международным участием «Актуальные вопросы острой и хронической боли» Самара, 28-30 июня 2005 // Патогенез. - 2005. - Т. 1. - С.7-8.
20. Гузеватых, Л.С. «Физиологическая активность новых аналогов дерморфина» [Текст] / J1.C. Гузеватых, Т.Г. Емельянова, J1.A. Андреева, Т.А. Воронина, Н.Ф. Мясоедов // Материалы I съезда физиологов СНГ, Сочи, Дагомыс, 19-23 сентября 2005. - М., 2005. -С.59.
21. Алфеева, Л.Ю. Семейство пептидов, обладающее анальгетической активностью» [Текст] /Л.Ю. Алфеева, JI.A. Андреева, Т.А. Воронина, Л.С. Гузеватых, Т.Г. Емельянова, Н.Ф. Мясоедов, С.Б. Середенин / Патент РФ №2286169, приоритет от 18.04.2005 // Бюллетень "Изобретения. Полезные модели"от 27.10.2006. - 2006. - №30. - С. 227.
22. Гузеватых, Л.С. «Фармакологическая активность аналогов дерморфина» [Текст] / Л.С. Гузеватых, Т.Г. Емельянова, Л.А. Андреева, Т.А. Воронина, Н.Ф. Мясоедов // Материалы IV международной научной конференции «Биологические основы индивидуальной чувствительности к психотропным средствам», Москва, Россия, 13-16 марта 2006. - М., 2006. - С.47.
23. Voronma, T. «Substances with analgesic activity among dermorphine analogues» [Текст] / T. Voronina, L. Guzevatykh, L. Andreeva, T. Emelyanova, S. Seredenin, N. Myasoedov // 15lh World Congress of Pharmacology, Beijing, China, July 2-7, 2006 - Beijing, China, 2006. -P.45.
24. Гузеватых, Л.С. «Анальгетическая и нейротропная активность новых аналогов дерморфина» [Текст] / Л.С. Гузеватых, Т.А. Воронина, Т.Г. Емельянова, Л.А. Андреева, Н.Ф. Мясоедов // Второй международный междисциплинарный Конгресс «Нейронаука для медицины и психологии», Судак, Крым, Украина, июнь 10-21, 2006. - Судак, 2006. -С. 38.
25. Гузеватых, Л.С. «Новые аналоги дерморфина и их анальгетическая и нейротропная активность» [Текст] / Л.С. Гузеватых, Т.А. Воронина, Т.Г. Емельянова, Л.А. Андреева, Н.Ф. Мясоедов // Материалы XVIII симпозиума «Современная химическая физика» Туапсе, Россия, 22 сентября - 3 октября 2006. - М., 2006. - С.86.
26. Громовых, П.С. «Синтез меченных тритием фрагментов дерморфина и исследование кинетики распределения радиоактивности в органах крысы при их внутримышечной инъекции» [Текст] / П.С. Громовых, Л.С. Гузеватых, Л.А. Андреева, Л.Ю. Алфеева,
B.П. Шевченко, К.В. Шевченко, И.Ю. Нагаев, Н.Ф. Мясоедов, Т.А. Воронина // Радиохимия. - 2007. - Т.49, №1. - С. 93-96.
27. Гузеватых, Л.С. «Сравнительный анализ анальгетической активности дерморфина, [D-Рго6]-дерморфина и их С-концевых трипептидов» [Текст] / Л.С. Гузеватых, Т.А. Воронина, Т.Г. Емельянова, Л.А. Андреева, П.С. Громовых, Н.Ф. Мясоедов,
C.Б. Середенин // Известие РАН, серия биологическая. - 2007. - №5. - С. 577-582.
28. Громовых, П.С. «Синтез, фармакокинетика и метаболизм С-концевого трипептида дерморфина и его диастереомера» [Текст] / П.С. Громовых, Л.С. Гузеватых, К.В. Шевченко, Л.А. Андреева, Л.Ю. Алфеева, В.П. Шевченко, И.Ю. Нагаев, Т.А. Воронина, Н.Ф. Мясоедов // Биоорганическая химия. - 2007. - Т.ЗЗ, №6. - С. 581-587.
38
29. Емельянова Т.Г. «Влияние N-концевых трипептидов бомбезина, литорина и их аналога на температуру тела и возможные реакции» [Текст] / Т.Г. Емельянова, И.В. Сосновская, H.H. Горячева, Л.С. Гузеватых, Т.А. Воронина, Е.Б. Евстегнеева, В.П. Голубович // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2007. - Т. 144, № 8. - С. 174-176.
30. Емельянова, Т.Г. «Связь структуры дерморфинов с их терморегуляторной активностью» [Текст] / Т.Г. Емельянова, Л.С. Гузеватых, Л.А.Андреева, Л.Ю. Алфеева, Н.Ф. Мясоедов // Известие РАН, серия биологическая. - 2007. - №6. - С. 711-719.
31. Емельянова, Т.Г. «Зависимость анальгетической активности дерморфина, метэнкефалина и динорфина А от температуры окружающей среды» [Текст] / Т.Г. Емельянова, А.Б. Колотилова, Л.С. Гузеватых, Н.Ф. Мясоедов // Доклады Академии наук. - 2007. -Т.417, № 5. - С. 704-706.
32. Гузеватых, Л.С. «Анальгетическая активность дипептида Тут-Pro» [Текст] / Л.С. Гузеватых, Т.А. Воронина, Т.Г. Емельянова, Л.А. Андреева, Н.Ф. Мясоедов // Материалы Российской научно-практической конференции с международным участием «Хронические болевые синдромы»; Новосибирск, 23-25 мая 2007. - Новосибирск, 2007. -С.51.
33. Громовых, П.С. «Использование меченого тритием Tyr-[3,4-3H]Pro-Ser-NH2 для изучения их рецепторного связывания с мембранной фракцией головного мозга крыс» [Текст] / П.С. Громовых, О.Ю. Соколов, Н.В. Кост, A.A. Зозуля, Л.А. Андреева, Л.Ю. Алфеева, Л.С. Гузеватых, К.В. Шевченко, И.Ю. Нагаев, В.П. Шевченко // III Российский симпозиум «Белки и пептиды». Тезисы стендовых сообщений; Пущино, 16—21 сентября 2007 - Пущино, 2007. - С. 67.
34. Гузеватых, Л.С. «Короткие Туг-Рго-содержащие пептиды - новый класс пептидов, обладающих анальгетической активностью» [Текст] / Л.С. Гузеватых, Т.А. Воронина, Т.Г. Емельянова, Л.А. Андреева, Н.Ф. Мясоедов // Ш Российский симпозиум "Белки и пептиды"; Пущино, 16-21 сентября 2007. - Пущино, 2007. - С. 48.
35. Сосновская, И.В. «Влияние пролиновых аналогов дерморфина на двигательную активность и ориентировочно-исследовательскую реакцию» [Текст] / И.В. Сосновская, Л.С. Гузеватых, Т.А. Воронина, Т.Г. Емельянова, Л.А. Андреева, Н.Ф. Мясоедов // III Российский симпозиум "Белки и пептиды"; Пущино, 16-21 сентября 2007. - Пущино, 2007. - С. 92.
36. Гузеватых, Л.С. «Аналоги дерморфина - новый класс анальгетических средств» [Текст] / Л.С. Гузеватых, Т.А. Воронина, Л.А. Андреева, Т.Г. Емельянова, Н.Ф. Мясоедов, С.Б. Середенин // Материалы III Съезда фармакологов России. «Фармакология практическому здравоохранению». Санкт-Петербург, 23-27 сентября 2007 г. // Психофармакология и биологическая наркология. - 2007. - Т. 7 (спец. выпуск); ч. 1. - С. 1670.
37. Калинина, Т.С. «Сравнительное изучение дифференцировочных стимульных свойств анксиолитиков и нейролептиков» [Текст] / Т.С. Калинина, Т.А. Воронина, Л.С. Гузеватых, Е.В. Петрянина // Материалы III Съезда фармакологов России. «Фармакология практическому здравоохранению». Санкт-Петербург, 23-27 сентября 2007 г. // Психофармакология и биологическая наркология. - 2007. - Т. 7 (спец. выпуск); ч. 1.-С. 1715.
38. Каримова, О.Б. «Исследование влияния природного опиоидного пептида дерморфина и его С-концевого фрагмента на содержание нейротрансмиттерных аминокислот в структурах мозга крыс Wistar» [Текст] / О.Б. Каримова, П.М. Клодт, В.Б. Наркевич, Л.С. Гузеватых, B.C. Кудрин, А.И. Майский, Т.А. Воронина // Материалы III Съезда фармакологов России. «Фармакология практическому здравоохранению». Санкт-Петербург, 23-27 сентября 2007 г. // Психофармакология и биологическая наркология. -2007. - Т. 7 (спец. выпуск); ч. 1. - С. 1719.
39. Сосновская, И.В. «Роль пролина в молекуле дерморфина в проявлении анальгетической активности пептида» [Текст] / И.В. Сосновская, Л.С. Гузеватых, Т.А. Воронина, Л.А. Андреева, Т.Г. Емельянова, Н.Ф. Мясоедов, С.Б. Середенин // Материалы III Съезда фармакологов России. «Фармакология практическому здравоохранению». Санкт-Петербург, 23-27 сентября 2007 г. // Психофармакология и биологическая наркология. -2007. - Т. 7 (спец. выпуск); ч. 2. - С. 1961.
40. Гузеватых, Л.С. «Анальгетическая активность дипептида TYR-PRO» [Текст] / Л.С. Гузеватых, Т.А. Воронина, Т.Г. Емельянова, Л.А. Андреева, Л.Ю. Алфеева, С.Б. Середенин, Н.Ф. Мясоедов // Известие РАН, серия биологическая. - 2008. - №1. -С. 1-7.
41. Громовых, П.С. «Использование меченного тритием дерморфина для исследования взаимодействия С-концевого аналога дерморфина Tyr-Pro-Ser-NH2 и его стереоизомера Tyr-D-Pro-Ser-NHi с опиоидными рецепторами» [Текст] / П.С. Громовых, О.Ю. Соколов, Н.В. Кост, A.A. Зозуля, Л.С. Гузеватых, Л.А. Андреева, Л.Ю. Алфеева, К.В. Шевченко, В.П.Шевченко, И.Ю. Нагаев, Мясоедов Н. Ф.. // Доклады Академии наук. - 2008. -Т. 419,№2.-С. 276-278.
42. Гузеватых, Л.С. «Выявление функционально значимого дипептидного фрагмента в аминокислотных последовательностях атипичных опиоидных пептидов» [Текст] / Л.С. Гузеватых // Биоорганическая химия. - 2008. - Т.34, № 5. - С. 591-609.
43. Сосновская, И.В. «Влияние дерморфина и его пролиновых аналогов на двигательную активность, ориентировочно-исследовательскую реакцию, уровень тревожности и устойчивости к депрессии» [Текст] / И.В. Сосновская, Л.С. Гузеватых, Т.А. Воронина, Т.Г. Емельянова, Л.А. Андреева, Л.Ю. Алфеева, С.Б. Середенин, Н.Ф. Мясоедов // IV Международный Междисциплинарный Конгресс "Нейронаука для медицины и психологии", 10-20 июня Судак, Крым, Украина, 2008 г. - М:000 «МАКС Пресс», 2008. -С. 283.
44. Гузеватых, Л.С. «Поиск новых анальгетиков на основе общей последовательности атипичных опиоидных пептидов» [Текст] / Л.С. Гузеватых, Т.А. Воронина, Т.Г. Емельянова, Л.А. Андреева, Н.Ф. Мясоедов // Материалы IV Российского симпозиума «Белки и пептиды», Казань, 23-27 июня 2009. - Казань: Издательство «ФизтехПресс» КазНЦ РАН, 2009. - С. 20.
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
А1а- аланин в/б - внутрибрюшинное введение
Arg- ■ аргинин в/в - внутривенное введение
Asn- -аспарагин внж - внутрижелудочковое введение
Asp - - аспарагиновая кислота и/н - интраназальное введение
Gin - ■ глутамин п/к - подкожное введение
Glu- ■ глутаминовая кислота р.о. - введение внутрь
Gly- • глицин
His- гистидин 5-НТ - серотонин
Hyp- - гидроксипролин 5-ОИУК - 5-оксииндолуксусная кислота
Ile-i изолейцин ГАМК - у-аминомаслянная кислота
Leu- ■ лейцин ГВК - гомованилиновая кислота
Lys - ■лизин ДА - дофамин
Met- - метионин ДОФУК - 3,4-диоксифенилуксусная кислота
Phe- • фенилаланин НА - норадреналин
Pro- пролин
Ser- серин DAGO - Tyr-D-Ala-Gly-MePhe-Gly-ol-энкефалин
Tau - ■таурин НПВС - нестероидные противовоспалительные средства
Thr- треонин
Trp- триптофан ГЭБ - гематоэнцефалический барьер
Tyr- тирозин ДвА - двигательная активность
Val- валин МЭ111 - тест максимального электрошока
APro - дегидропролин ОИР - ориентировочно-исследовательская реакция
OMe - метиловый эфир ПКЛ - приподнятый крестообразный лабиринт
nh2- -амид ПКМС - подвздошная кишка морской свинки
СПМ - семявыносящий проток мыши
ДМ- -дерморфин ЭЭГ - электроэнцефалограмма
ОП- опиоидные пептиды
OP- опиоидные рецепторы
1С50 - доза, вызывающая 50% связывание
ЭД50 - доза, вызывающая 50% эффект
ТД50 - доза, вызывающая угнетение дыхания на 50%
ЛД50 - доза, вызывающая гибель у 50% животных
Втах - концентрация мест связывания КД - константа диссоциации
AUCo-t (нг/млхмин) - площадь под фармакокинетической кривой (площадь под
кривой концентрация лекарственного вещества - время);
MRT (мин) - среднее время пребывания вещества в организме;
T]/2ei (мин) - период, за который выводится половина введенной и всосавшейся дозы
вещества
Tmax - время, необходимое для достижения пиковых концентраций
СШах_ пиковая концентрация (максимальная концентрация препарата в плазме);
Ft - тканевая доступность, рассчитывается по формуле: Ft = AUCt 0., / AUCp о-» где
AUCt о., - AUC в IKaH1I, AUCp o-i- AUC , крови
Заказ № 102-а/12/09 Подписано в печать 26.11.2009 Тираж 150 экз. Усл. п.л. 2
ООО "Цифровичок", тел. (495) 649-83-30 www.cfr.ru; e-mail:info@cfr.ru
Оглавление диссертации Гузеватых, Людмила Сергеевна :: 2009 :: Москва
Список сокращений
Введение
Обзор литературы
Материалы и методы исследований
Результаты исследований
Глава 1. Выявление функционально значимого фрагмента в аминокислотных последовательностях атипичных опиоидных пептидов и изучение его анальгетической активности
Глава 2. Влияние модификаций пролина в молекуле дерморфина на проявление анальгетической активности и сопутствующих эффектов
Глава 3. Исследование влияния удлинения С- и /V-конца дипептидной последовательности Tyr-Pro(Z)-Pro, APro, Hyp) на проявление анальгетической и опиоидной активности
Глава 4. Изучение фармакологической активности Туг-Pro-[Д I]-Ser-NH2 и Tyr-D-Pro-Ser-NFb
Глава 5. Изучение механизма действия Туг-Pro-1D, L \-Ser-NН2 и Tyr-D-Pro-Ser-NH
Обсуждение результатов
Заключение диссертационного исследования на тему "Поиск новых средств фармакологической регуляции болевой чувствительности среди фрагментов атипичных опиоидных пептидов"
выводы
1. При анализе биоинформационными методами первичной структуры 60 представителей атипичных опиоидных пептидов выявлена аминокислотная последовательность -Туг-Рго- у 63% веществ. Показано, что наличие опиоидной активности пептидов не зависит от положения -Туг-Рго- в их молекулах.
2. Туг-Рго в дозах 0.1 - 10.0 мг/кг (в/б) проявляет анальгетическую активность в тестах фазической и тонической боли при раздражении соматических и висцеральных ноцицепторов химическими, термическими и механическими стимулами. Анальгетическая активность Туг-Рго чувствительна к действию центральных и периферических антагонистов опиоидных рецепторов налоксона и налоксона метиодида, однако пептид проявляет слабое сродство к 8-опиоидными рецепторам семявыносящего протока мыши и не взаимодействует с р-опиоидными рецепторами подвздошной кишки морской свинки.
3. Стереохимическая модификация остатка пролина в молекуле Туг-Рго-содержащего пептида дерморфина не влияет на сродство к периферическим р- и 5-опиоидным рецепторам. Замена ¿-пролина на А-стереоизомер не изменяет анальгетическую активность дерморфина при механическом и химическом раздражении ноцицепторов, но ослабляет противовоспалительное действие. Дегидрирование пролина в молекуле дерморфина повышает сродство к опиоидным рецепторам, ослабляет противовоспалительное и анальгетическое действие при механическом раздражении ноцицепторов и приводит к появлению анксиолитической и потере противосудорожной активности.
4. Изучение зависимости между строением и анальгетической активностью в ряду новых 22 синтетических пептидов, содержащих -Туг-Рго-, выявило, что наибольшей активностью обладают трипептиды Туг-Рго -[/),£] 8 с г- N Н 2 (1:1) и Туг-Г)-Рго-8ег-1ЧН2, которые в дозах 0.1-10 мг/кг проявляют анальгетическое действие в тестах фазической и тонической боли при раздражении соматических и висцеральных ноцицепторов химическими, термическими и механическими стимулами, и в тестах воспалительной боли. Анальгетическая активность трипептидов сохраняется в течение 90 минут и наблюдается при различных способах введения (внутрибрюшинном, внутримышечном, внутрь и интраназальном). В смеси стереоизомеров Туг-Рго-[Д /,|8ег-Ы1 [2 анальгетической активностью обладает А-стереоизомер, а Х-стереоизомер - не активен.
5. При исследовании механизма действия Туг-Рго-[ДХ]8ег-МН2 и Туг- 1)-Рго-8ег-]ЧГН2 обнаружено, что анальгетическая активность пептидов чувствительна к действию центральных и периферических антагонистов опиоидных рецепторов (налоксона, налтрексона и налоксона метиодида), однако пептиды проявляют слабое сродство к р-опиоидным рецепторам подвздошной кишки морской свинки и не взаимодействует с 8-опиоидными рецепторами семявыносящего протока мыши. Оба пептида связываются с «высокоаффинными» центрами связывания дерморфина мембранной фракции гомогената мозга крысы. Tyr-Pro-[AZ,]Ser-NH2 увеличивает содержание в стриатуме и спинном мозге возбуждающих глутаминовой и аспарагиновой аминокислот и тормозной аминокислоты глицина, и в гиппокампе - глицина.
6. Животные, получавшие 'I'yr-Pro-[ ДI. jSer-N1Ь и Tyr-D-Pro-Ser-NH2 в высоких возрастающих дозах, проявляют достоверно меньшие по интенсивности симптомы синдрома отмены, провоцируемого налоксоном, по сравнению с морфином и [А-Рго6]-дерморфином. Хроническое (28 дней) введение Tyr-Pro-[AL]Ser-NH2 и Tyr-APro-Ser-NH2 не приводит к развитию толерантности по анальгетическому эффекту, а прекращение 28-дневного введения пептидов не вызывает проявлений синдрома отмены.
7. Tyr-Pro-[AL]Ser-NH2 и Tyr-A-Pro-Ser-NH2 наиболее интенсивно распределяются в сильно васкуляризированных органах (печень, почки) и меньше - в слабоваскуляризированных (мозг, легкие, сердце). Соединения выводятся из организма (t]/2ei из крови = 53.8 и 57.8 мин, MRT из крови = 43.2 и 46.1 мин соответственно). Протеолиз Туг-Pro-[/),Z]Scr-NTb и Tyr-D-Pro-Ser-NPb осуществляется ферментами крови, сердца, легких и мозга. В качестве основного меченного метаболита обнаруживается пролин и А-пролин, соответственно.
8. Tyr-Pro-[AL]Ser-NH2 и Tyr-A-Pro-Ser-NH2 в сравнении с морфином обладают большей терапевтической широтой, достоверно менее выраженными проявлениями синдрома отмены и толерантности, не влияют на дыхательный центр (в дозах до 800 мг/кг), а в сравнении с диклофенаком - активны в меньших дозах и имеют более широкий спектр анальгетической активности. Отобранные пептиды, сочетающие анальгетическую активность и безопасность применения, можно рассматривать в качестве базисных соединений для создания потенциального анальгетика пептидной природы.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Анализ аминокислотных последовательностей атипичных ОП, используемый в настоящей работе, позволил выявить наиболее часто встречающуюся дипептидную последовательность - дипептид Туг-Рго у 63% пептидов. Эта последовательность Туг-Рго принимает участие в образовании ß-поворота, необходимого для взаимодействия с центрами связывания (Haslach et al., 2008; Doi et al., 2002). Так ДМ (Tyr-£>-Ala-Phe-Gly-Tyr-Pro-Ser
2 6
NH2), благодаря присутствию в молекуле D-Ala и Z-Pro , в растворе может образовывать два N- и С-концевых ß-поворота (Renugopalakrishnan, Rapaka, 1988), что соответствует двум центрам связывания ДМ. Это послужило основанием для предположения о том, что модификация Pro в молекуле Туг-Рго-содержащих пептидов может привести к изменению их биологической активности. Действительно, в нашем исследовании установлено, что замена остатка пролина в молекуле ДМ на D-стереоизомер или его дегидрирование приводит к усилению и пролонгированию анальгетической активности в тесте соматической боли при термическом раздражении ноцицепторов, но не влияет на анальгетические эффекты при механическом и химическим раздражении соматических и висцеральных рецепторов, а также ослабляет седативное действие. Однако, несмотря на различия в эффектах, стереохимическая модификация по пролину в молекуле ДМ не изменяет сродства к р- и 5-ОР на препаратах изолированных органов.
Полученные результаты подтвердили значимость последовательности Туг-Рго для проявления эффектов пептидов и побудили к детальному изучению собственной активности дипептида. Дипептид Туг-Рго впервые был синтезирован и описан в работе, посвященной количественной оценке горького вкуса пептидов, как один из фрагментов ß-казеина (Shinoda et al., 1986). В этом же году было установлено, что Туг-Рго является одним из продуктов ферментативной деградации in vitro опиоидного пептида ДМ (Scalia et al., 1986). В плазме человека и крысы Туг-Рго может образовываться при деградации пептида Tyr-MIF-1 (Kastin et al., 1994), эндоморфина-l (Tomboly et al., 2002; Barsun et al., 2007) и эндоморфина-2 (Sakurada et al., 2003). В гидролизе принимают участие дипептилпептидазы III и IV (Chen et al., 2004). Tyr-Pro также был обнаружен в ферментативном гидролизате казеинов молока (FitzGerald, Meisel, 2000; Zhu et al., 2007). Tyr-Pro может также образовываться при гидролизе дипептилпептидазой IV нейропептида Y (NPY), в результате чего образуется фрагмент NPY3.36, с уменьшенной аффинностью к Yi рецепторам (Gerald et al., 1996). Установлено, что дипептид обладает антигипертензивным действием в дозах 0.1 - 10.0 мг/кг у спонтанногипертензивных крыс (Yamamoto et al., 1994), и этот эффект может быть обусловлен подавлением действия ангиотензин-превращающего фермента (Zhu et al., 2007).
В исследованиях Rônai и коллег (2006) показано выраженное анальгетическое действие дипептида (100 нмоль на крысу, т.е. примерно 0.16 мг/кг) при внж введении в тесте отдергивания хвоста.
Анальгетическая активность Туг-Рго при системном введении ранее не изучалась. В нашем исследовании было установлено, что Туг-Рго в дозах 0.1 - 10.0 мг/кг обладает дозо-зависимой анальгетической активностью в тестах тонической и фазической болей, вызванных термическим, механическим и химическим раздражением соматических и висцеральных рецепторов, которая снижается неселективными блокаторами центральных и периферических ОР налоксоном и налоксона метиодидом, соответственно. В тестах in vitro Tyr-Pro обладает слабым сродством к периферическим 5-ОР и не взаимодействует с периферическими р-ОР. В исследованиях Rônai и коллег (2006) также не удалось обнаружить у Туг-Рго опиоидной активности в тестах in vitro. Кроме того, этой же группой исследователей было показано, что в экстракте мозга крыс через 30 мин после внж введения [3Н] Туг-Рго радиоактивность обнаруживается в тетра- и трипептидах, родственных эндоморфину-2, причём основным метаболитом является дезамидированный эндоморфин-2. Однако, анальгетическое действие эндоморфина-2 чувствительно к действию антагонистов ОР налоксоназину и 3-метоксиналтрексону, что указывает на участие pi-опиатных и морфин-6-/?-глюкуронидных рецепторов (Sakurada et al., 2002; Mizoguchi et al., 2006). В наших исследованиях установлено, что анальгетическое действие Туг-Рго не блокируется антагонистом pi-OP налоксоназином и антагонистом морфин-6-(3-глукуронидных рецепторов 3-метоксиналтрексоном, следовательно, анальгетическое действие при периферическом введении Туг-Рго не опосредовано эндоморфином-2.
Выполненный нами анализ первичной структуры атипичных ОП показал, что опиоидная активность не зависит от положения пары -Туг-Рго- в последовательностях этой выборки и сохраняется, как при его перемещении в JV-конец молекулы (эндоморфины, геморфины), так и внутрь цепи (глютеновые экзорфины А, геморфины, дерморфины), и в С-концевое положение (глютеновый экзорфин А, геморфин-(1-5)). Это указывает на возможность сохранения анальгетической активности при модификации -Туг-Рго- с С- и N-концов природными аминокислотами.
На основании полученных результатов были синтезированы и изучены соединения общей формулы A-Tyr-Pro(D-Pro, APro, Z)-APro, Нур)-В-Х, где А, В - природные аминокислоты, а X - метильная или амидная группа. Среди протестированных 22 оригинальных синтетических пептидов наиболее эффективными оказались Tyr-Pro-[AZJSer-NH2 и Tyr-D-Pro-Ser-NH2. Анализ литературных источников показал, что свойства пептидов
Tyr-Pro-D-Ser-NKb и Tyr-APro-Ser-NH2 ранее не изучались, а трипептид Tyr-Pro-L-Ser-NH2 был изучен только при внутримозговом введении в тесте горячей пластины, где продемонстрировал отсутствие анальгетической активности (Broccardo et al., 1981). В наших исследованиях было установлено, что в изучаемой нами смеси стереоизомеров Туг-Рго-[AL]Ser-NH2 (1:1) анальгетической активностью при в/б введении обладает именно Туг-Рго-ASer-Ni Ь. а не Tyr-Pro-Z,-Ser-NH2. Установлено, что Т у г-1 'го- [ /), L ] S е г- N Н 2 и Tyr-APro-Ser-NH2 в дозах 0.1-10.0 мг/кг проявляют активность в широком наборе тестов оценки болевой чувствительности и на моделях воспалительной боли. Tyr-APro-Ser-NH2 подавляет частоту импульсации в А5- и С-волокнах ноцицепторов. Tyr-Pro-[A^]Ser-NH2 оказывает обезболивающее действие на модели нейропатической боли, но не при моделировании центрального болевого синдрома. Анальгетическое действие пептида зависит от температуры окружающей среды (в холодной и жаркой среде ослабляется). Анальгетический эффект Tyr-Pro-[A,L]Ser-NH2 и Tyr-APro-Ser-NH2 (в/б) блокируется неселективными антагонистами центральных и периферических ОР, однако пептиды проявляют слабое сродство к периферическим р- и не связываются с 8-ОР на препаратах изолированных органов ПКМС и СПМ, но взаимодействуют с «высокоаффинными» местами связывания ДМ в головном мозге крыс.
Таким образом, выявлен новый класс пептидных соединений, обладающих анальгетической активностью. Отобранные для дальнейших исследований пептиды Туг-Рго-[ALjSer-Nlb и Tyr-APro-Ser-NH2 проявляют анальгетическую активность и обладают рядом преимуществ по сравнению с морфином: 1) имеют большую терапевтическую широту и не оказывают влияния на частоту дыхания при превышении терапевтической дозы в 500 раз; 2) у пептидов не отмечено развития толерантности по анальгетическому действию при их хроническом введении; 3) у пептидов не выявляется проявлений синдрома отмены после прекращения их длительного введения (28 дней) и наблюдается достоверно менее выраженные проявления острой физической зависимости при провокации налоксоном. По сравнению с диклофенаком пептиды активны в более широком диапазоне тестов и в меньших дозах.
Список использованной литературы по медицине, диссертация 2009 года, Гузеватых, Людмила Сергеевна
1. Ашмарин, И.П. Регуляторные пептиды, функционально-непрерывная совокупность Текст. / И.П. Ашмарин, М. Р. Обухова // Биохимия. 1986. - Т. 51, №4. - С.531-544.
2. Бабаян, Э. А. Правовые аспекты оборота наркотических, психотропных, сильнодействующих, ядовитых веществ и прекурсоров. Текст. / Э. А. Бабаян,
3. A. В. Гаевскпй, Е. В. Бардин // М.: МЦФЭР, 2003. 302 с.
4. Батурина, Е.Ю. Пародоксальная корреляция эффективности интраназального и внутрибрюшинного введения дерморфина крысам Тескт. / Е. Ю. Батурина, Н. Ю. Сарычева,
5. B. Ю. Дейгин, Е. П. Ярова, А. А. Каменский // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 1988. - Т.105, №2. - С.177-179.
6. Белоусов, Ю.Б. Эффективность и безопасность применения нестероидных противовоспалительных средств: мелоксикам (мовалис) Текст. / Ю.Б. Белоусов, А.Н. Грацианская // Фарматека. 2008. - Т.2. - С.10-15.
7. Беспалов, А. Ю. Нейропсихофармакология антагонистов NMDA-рецепторов Текст. / А.Ю. Беспалов, Э.Э. Звартау //СПб.: Невский Диалект,2000. 297 с.
8. Буреш, Я. Электрофизиологические методы исследования Текст. / Я. Буреш, М. Петрань, И. Захар / Пер.с чеш. И.А.Кедер-Степановой; Под ред. Г.Д.Смирнова. // М.: Издательство иностранной литературы, 1962. 456 с.
9. Воронина, Т.А. Методические указания по изучению транквилизирующего (анксиолитического) действия фармакологических веществ Текст. / Т.А. Воронина,
10. C.Б. Середенин // Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. М: ОАО Издательство «Медицина», 2005. - С.253 - 263.
11. Громова, Е.А. Роль моноаминергических систем мозга в противоалкогольном действии динорфина и пептида дельта-сна Текст. / Е.А. Громова, Н.В. Бобкова,
12. JI. А. Плакхинас, В.И. Дейгин, Е.П. Ярова, И.И. Михалева // Физиологический журнал имени И.М. Сеченова 1989. - Т.75, № 5. с. 633-636
13. Громовых, П.С. Синтез и исследование биологических эффектов С-концевых фрагментов дерморфина Текст. / П.С. Громовых // Дис. канд. хим. наук. М.: Институт молекулярной генетики РАН, 2008. - 178 с.
14. Гудашева, Т. А. Новая стратегия пептидного дизайна на примере создания оригинальных ноотропов и нейролептиков Текст. / Т.А. Гудашева // Дис.,, докт. биол. наук. М.: НИИ фармакологии РАМН, 1998. - 71 с.
15. Динзбирг, А. Л. Стресс протективный эффект нейропептидов у обезьян Текст. / А. Л. Динзбирг, А. М. Чирков, С. К. Чиркова // Патологическая физиология и экспериментальная терапия.- 1995.-Т. 1.-С.19-21.
16. Емельянова, Т.Г. Поиск новых средств фармакологической регуляции температурного гомеостаза на основе структурно-функционального изучения семейств эндогенных пептидов Текст. / Т.Г. Емельянова // Дис.докт. биол. наук. М.: ИХФ РАН, 2005. 381с.
17. Звартау, М.В. Опиоидные анальгетики: пути совершенствования терапии болевых синдромов Текст. / М.В. Звартау, Э.Э. Пчелинцев, А.Н. Кубынин // Анестезиология. 2007. -Т.5.-С. 417.
18. Игнатов, Ю.Д. Современные аспекты терапии боли: опиаты Текст. / Ю.Д. Игнатов,
19. A.A. Зайцев // Качественная клиническая практика. 2001. - Т.2. - С.2-13.
20. Игнатьев, Д.А. Влияние некоторых коротких пептидов, выделенных из мозга зимоспящего суслика, на ЭЭГ и поведение крыс Текст. / Д.А.Игнатьев, В.В.Воробьев, Р.Х.Зиганшин // Журнал высшей нервной деятельности. 1996. - Т.46, № 6. - С.1049-1058.
21. Ковальзон, В.М. Дельта-сон индуцирующий пептид тридцать лет спустя Текст. /
22. B.М.Ковальзон, Т.В.Стрекалова // Нейрохимия. 2006. - Т.23, № 4. - С. 276-282.
23. Коршунова, Г. А. Дерморфин: синтез аналогов и структурно-функциональные отношения Текст. / Г.А. Коршунова, Н.В. Сумбатян // Биоорганическая химия. 1989. - Т. 15, № 7. - С.869-903.
24. Крыжановский, Г.Н. Болевой синдром у крыс после повреждения седалищного нерва Текст. / Г.Н. Крыжановский, В.К. Решетняк, M.JI. Кукушкин, М.П. Горизонтова,
25. B.C. Смирнова // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. 1991. - Т.6.1. C. 8-9.
26. Крыжановский, Г.Н. Центральные механизмы патологической боли Текст. / Г.Н. Крыжановский// Журнал неврологии и психиатрии. 1999. - Т.99, № 12. - С.4-7.
27. Кукушкин, М. J1. Общая патология боли Текст. / M.J1. Кукушкин, Н.К. Хитров // М.: «Медицина», 2004. 144с.
28. Кукушкин, М. Л. Механизм патологической боли Текст. / М.Л. Кукушкин, В.К. Решетняк // Боль и ее лечение. 1999. - Т.П. - С.2-6.
29. Кукушкин, М.Л. Молекулярные механизмы боли Текст. / М.Л. Кукушкин, A.A. Тихоновский // Боль. 2006. - Т. 1, № 10. - С.43-47.
30. Кукушкин, М.Л. Феномен хронической боли особенности патогенеза Текст. / М.Л. Кукушкин // Боль. 2009. - №3 (24). - С.35-36.
31. Любимов, Б.И. Методические указания по оценке аллергезирующих свойств фармакологических веществ Текст. / Б.И. Любимов, Л.П. Коваленко, В.Н. Федосеева,
32. A.C. Иванова, Т.Б. Мастернак, A.C. Ларин, Г.П. Кудрина, Л.Ф. Шашкина, В.М. Иванова, A.B. Никитин, А.Н. Николаева, Е.В. Арзамасцев, Т.А. Гуськова, И.Б. Жоголева,
33. Л. Верстакова // Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. М.: ОАО Издательство «Медицина», 2005. - С.54 - 69.
34. Маклакова, A.C. Поведенческие эффекты бета-казоморфина-7 и его des-Tyr-аналогов Текст. / A.C. Маклакова, В.А. Дубынин, Н.Г. Левицкая Н.Г // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 1993. - Т.8. - С.155-158.
35. Молодавкин, Г.М. Многоканальная установка для поиска транквилизаторов и изучения механизма их действия по методу конфликтная ситуация Текст. / Г.М. Молодавкин, Т.А. Воронина // Экспериментальная и клиническая фармакология. 1995. -Т. 58, №2.-С. 54^56
36. Молодавкин, Г.М. Особенности влияния фармакологических веществ разных классов на вынужденное плавание у крыс Текст. / Г.М. Молодавкин, Т.А. Воронина,
37. A.Л. Мдзинаришвили // Экспериментальная и клиническая фармакология. 1994. - Т. 57, №1.-С. 3-5.
38. Насонов, Е. Л. Специфические ингибиторы циклооксигеназы-2 и воспаления: перспективы применения препарата целебрекс Текст. / Е. Л. Насонов // Российская ревматология. 1999. - № 4. - С. 2-13.
39. Новиков, А. В. Комплексный регионарный болевой синдром как вариант хронической нейропатической боли Текст. / A.B. Новиков, H.H. Яхно // Русский медицинский журнал. -2001. Т.25.- 1152-1162.
40. Осипова, Н. А. Нерешенные проблемы противоболевой лекарственной помощи в России Текст. / H.A. Осипова // Боль. 2009. - Т.З, №> 24. - С.8-9.
41. Осипова, Н. А. Нестероидные противовоспалительные препараты (ацелизин) в послеоперационном обезболивании и интенсивной терапии Текст. / H.A. Осипова, В.А. Беренев, Г.Р. Арбузова и др.// Анастезиология и реаниматология. 1994. - № 4. - С. 41-56.
42. Осипова, Н. А. Опыт использования анальгетиков периферического действия в системе комплексной защиты пациента от операционной травмы Текст. / H.A. Осипова,
43. B.А. Береснев, В. В. Петрова, М.С. Ветшева, Т.В. Долгополова, C.B. Свиридов // Анестезиология и реаниматология. 2002. - № 4. - С. 23-26.
44. Павленко, С. С. Фармакотерапия хронической боли и наркотики Текст. /
45. C.С. Павленко // Вопросы наркологии. 1999. - Т.6. - 30-35.
46. Пиотровский, JI. Б. Протон-чувствительные ионные каналы — новая мишень для терапии боли Текст. / Л.Б. Пиотровский, М.А. Думпис, C.B. Куликов, Е.В. Литасова // Психофармакология и биология наркология. 2007. - Т. 7, № 2. - С. 1542-1547.
47. Радивоз, М.И. Действие дерморфина на процессы деления клеток эпителия глотки и языка белой крысы Текст. / М.И. Радивоз, Е.И. Мельник, С.С.Тимошин, В.И. Дейгин // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 1991. - Т.112, № 8. - С.162-164.
48. Решетняк, В.К. Механизмы регуляции боли Текст. / В.К. Решетняк // Боль. 2009. -№3 (24). - С.38-40.
49. Савюк, В. Я. Боль и обезболивание Текст. / В.Я. Савюк //Сибирский государственный медицинский университет. Томск. 1997. - С. 1-2.
50. Соллертинская, Т.Н. Роль дерморфина в регуляции процессов гибернации у млекопитающих Текст. / E.H. Нуритдинов, М.Ф. Обухова // Физиологический журная имени И.М.Сеченова. 1992. - Т.78, №4. - С.1-13.
51. Уранова, М.Г. Структурно-функциональные особенности в ряду природных и синтетических дерморфинов Текст. / М.Г. Уранова // Дисс. канд. биол. наук. 2000. - 213 с.
52. Форина, Л. Некоторые эффекты опиоидных пептидов Текст. / Л. Форина, С. Гурьянов, И. Назимов, О. Яновский // Доклады Академии наук. 1991. - Т.319. - 755-757.
53. Харкевич, Д.А. Фармакология Текст. / Д.А. Харкевич // М. Изд-во ГЭОТAP-Медиа . -2005. 735 с.
54. Чурюканов, В. Фармакология болеутоляющих средств Текст. / В. Чурюканов, М. Чурюканов // Врач. № 4. - 2002. - С. 29-33.
55. Шульц, Г. Принципы структурной организации белков Текст. / Г. Шульц, Р. Ширмер // Москва, Мир, 1982. 360 с.
56. Шухов, B.C. О нестероидных противовоспалительных средствах Текст. /B.C. Шухов // Лечащий врач. 2001. - Т.2. - С.26-30.
57. Abbott, J. Pelvic pain: lessons from anatomy and physiology Текст. / J. Abbott // Journal of Emergency Medicine. 1990. - V.8. - N 4. - P.441-447.
58. Aloisi, F. Central effects of dermorphin Текст. / F. Aloisi, F. Passarelli, S. A. De Carolis, V.G. Longo // Annali dell'Istituto superiore di sanita. 1982. - V. 18. -N 1. - P. 1-5.
59. Alrubaian, J. Evaluating the radiation of the POMC gene in teleosts: characterization of American eel POMC Текст. / J. Alrubaian, C. Sollars, P. B. Danielson, R. M. Dores // General and comparative endocrinology. 2003. - V. 132. - N. - P. 384-390.
60. Alrumaian, J. Cloning of a second proopiomelanocortin cDNA from the pituitary of the sturgeon, Acipenser transmontanus Текст. / J. Alrumaian, P. Danielson, M. Fitzpatrick, C. Schreck, R.M. Dores // Peptides. 1999. - Vol. 20. -N 4. - P. 431-436.
61. Ambrosio, A.F. Mechanisms of action of carbamazepine and its derivatives, oxcarbazepine, BIA 2-093, and BIA 2-024 Текст. / A.F. Ambrosio, P. Soares-Da-Silva, C.M. Carvalho, A.P.Carvalho // Neurochemical research. 2002. - V. 27. - N1-2. - P. 121-130.
62. Amemiya, Y. Sturgeon proopiomelanocortin has a remnant of gamma-melanotropin Текст. / Y. Amemiya, A. Takahashi, R. M. Dores, H. Kawauchi // Biochemical and biophysical research communications. 1997. - V. 230. - N 2. - P. 452-456.
63. Amemyia, Y. Molecular cloning of lungfish proopiomelanocortin cDNA Текст. / Y. Amemiya, A. Takahashi, H. Meguro, H. Kawauchi // General and comparative endocrinology. -1999.-V. 115.-N3.-P. 415-421.
64. Asakawa, A. Endomorphins have orexigenic and anxiolytic activities in mice Текст. / A. Asakawa, A. Inui, K. Momose, N. Ueno, M.A. Fujino, M. Kasuga // Neuroreport. 1998. - V. 9. -N 10.-P. 2265-2267.
65. Ault, B. L-proline depolarizes rat spinal motoneurones by an excitatory amino acid antagonist-sensitive mechanism Текст. / В. Ault, C.M. Wang, B.C. Yawn // British journal of pharmacology. 1987. - V.92. -N2. - P.319-326.
66. Baev, A.A. Primary structure of bovine beta-casein cDNA Текст. / A.A. Baev, I.K. Smirnov, S.I. Gorodetsky//Molecular Biology (Moscow). 1987. -V. 21. - P. 214-222.
67. Bagosi, Z. The effects of endomorphins on striatal 3H.GABA release induced by electrical stimulation: an in vitro superfusion study in rats [Текст] / Z. Bagosi, M. Jaszberenyi, G. Telegdy // Neurochemical research. 2009. - V.34 - N5. - P.905-908.
68. Bakalkin, G.Y. Relationship between primary structure and activity in exorphms and endogenous opioid peptides Текст. / G.Y. Bakalkin, H-U.Demuth, F. Nyberg // FEBS lettersers. -1992.-V.310.-N 1.-P.13-16.
69. Ballantyne, J.C. Opioids for chronic nonterminal pain Текст. / J.С. Ballantyne // The Southern medical journal. 2006. - V. 99. - N11. - P. 1245-1255.
70. Bandler R. Columnar organization in the midbrain periaqueductal gray: modules for emotional expression? Текст. / R. Bandler, M.T. Shipley // Trends in neurosciences. 1994. -V.17. - N 9. - P.379-389.
71. Banks, W.A. Peptide transport systems for opiates across the blood-brain barrir Текст. / W.A. Banks, A. J. Kastm // The American journal of physiology. 1990. - V.259. - P.E1-E10.
72. Bardin, L. Effect of intrathecal serotonin on nociception in rats: influence of the pain test used Текст. / L. Bardin, M. Bardin, J. Lavarenne, A. Eschalier // Experimental brain research. -1997.-V.113.-P. 81-87.
73. Barjavel, M.J. Enhancement of a kappa-opioid receptor agonist-induced analgesia by L-tyrosine and L-tryptophan Текст. / M.J. Barjavel, S.N. Thorat, H.N. Bhargava // European journal of pharmacology. 1994. - V. 258. - N 3. - P. 173-178.
74. Ban-era, C.M. Passage of Tyr-MIF-1 from blood to brain Текст. / C.M. Barrera, W. A. Banks, A. J. Kastm // Bram research bulletmetm. 1989. - V.23. - P.439-442.
75. Barsun, M. Human dipeptidyl peptidase III acts as a post-proline-cleaving enzyme on endomorphins Текст. / M. Barsun, N. Jajcanin, B. Vukelic, J. Spoljaric, M. Abramic // Biological chemistry. 2007. - V.388. - N3. - P.343-348.
76. Basso, N. Intrathecal dermorphine in postoperative analgesia Текст. / N. Basso, M. Marcelli, A. Gmaldi, M. De Marco // Peptides. 1985. - V. 6. - N 3. - P.177-179.
77. Beckett, A. N. Synthetic analgesics: stereochemical considerations Текст. / A. N. Beckett, A.F. Case // The Journal of pharmacy and pharmacology. 1954. - V.6. - P. 986-1001.
78. Belka'i, E. Modulation of MDMA-induced behavioral and transcriptional effects by the delta opioid antagonist naltrindole in mice Текст. / E. Belka'i, J.M. Scherrmann, F. Noble, C. Marie-Claire // Addiction biology. 2009. - V.14. - N 3. - P.245-252.
79. Ben, Y. Tolerance develops in spinal cord, but not in brain with chronic Dmtl.DALDA treatment [Текст] / Y. Ben, A. P. Smith, P. W. Schiller, N. M. Lee // British journal of pharmacology. 2004. - V. 143. - N 8. - P.987-993.
80. Benyamin, R. Opioid complications and side effects Текст. / R. Benyamin, A. M. Trescot, S. Datta, R. Buenaventura, R. Adlaka, N. Sehgal, S. E. Glaser, R. Vallejo // Pain Physician. 2008. -V. 11, Suppl. 2. - P.S105-120.
81. Berge, O.G. Response latencies in the tail-flick test depend on tail skin temperature Текст. / O.G. Berge, I. Garcia-Cabrera, K. Hole // Neuroscience letters. 1988. - V.86. - N 3. - P.284-288.
82. Berrocoso, E. Opiates as antidepressants Текст. / E. Berrocoso, P. Sanchez-Blazquez, J. Garzon, J.A. Mico // Current pharmaceutical design. 2009. - V.15. - N 14. - P. 1612-1622.
83. Bertolini, A Paracetamol: new vistas of an old drug Текст. / A Bertolini, A. Ferrari, A. Ottani, S. Guerzoni, R. Tacchi, S. Leone // CNS drug reviews. 2006. - V.12. - N 3-4. - P.250-275.
84. Bhattacharya, A. Sodium channel blockers for the treatment of neuropathic pain Текст. / A. Bhattacharya, A.D. Wickenden, S.R. Chaplan // Neurotherapeutics. 2009. - V.6. - N 4. -P.663-678.
85. Bjorkman, R. Central, naloxone-reversible antinociception by diclofenac in the rat Текст. / R. Bjorkman, J. Hedner, T. Hedner, M. Henning // Naunyn-Schmiedeberg's archives of pharmacology. 1990. - V.342. -N 2. - P. 171-176.
86. Blumstein, L. K. Neuropeptide modulation of apomorphine-induced stereotype behavior Текст. / L. K. Blumstein, J. N. Crawley, L. G. Davis, F. Jr. Baldano // Brain Research. 1987. -V. 404.-N1-2.-P.293-300.
87. Bocheva, A. Effect of diphenylhydramine on the Tyr-MIF-1 antinociception in rats Текст. / A. Bocheva, R. Zamfirova, T. Pajpanova, S. Todorov, M. Georgieva, E. Golovinsky // Archives of physiology and biochemistry. 1998. - V.106. - N 5. - P. 378-383.
88. Bodnar, R. J. Endogenous opiates and behavior: 2007 Текст. / R. J. Bodnar // N. Nicotera // Peptides. 2008. - V.29. - N 12. - P.2292-2375.
89. Bourn, S. It's Morphin time! Текст. / S. Bourn // JEMS : a journal of emergency medical services. 1995. - V. 20. - N 7. - P.69-71.
90. Boutis, K. Nephrotoxicity after acute severe acetaminophen poisoning in adolescents Текст. / К. Boutis, M. Shannon // Journal of toxicology. Clinical toxicology. 2001. -Vol. 39. - N 5. — P.441-445.
91. Bowers, C.Y. On the actions of the growth hormone-releasing hexapeptide, GHRP Текст. / C.Y. Bowers, A. O. Sartor, G. A. Reynolds, Т. M. Badger// Endocrinology. 1991. - V. 128. -N 4. - P.2027-2035.
92. Bozu, B. Synthesis and opioid binding activity of dermorphin analogues containing cyclic beta-amino acids Текст. / В. Bozu, F. Fulop, G.K Toth, G. Toth, M. Szucs // Neuropeptides. -1997. V.31. - N 4. - P.367-372.
93. Brantl, V. Novel opioid peptides derived from hemoglobin: hemorphins Текст. / V. Brantl, C. Gramsch, F. Lottspeich, R. Mertz, K.H. Jaeger, A. Herz // European journal of pharmacology. -1986. V.125. -N 2. - P.309-310.
94. Brantl, V. Novel opioid peptides derived from mitochondrial cytochrome b: cytochrophins Текст. / V. Brantl, C. Gramsch, F. Lottspeich, A. Henschen, K.-H. Jaeger, A. Herz // European journal of pharmacology. 1985. - V. 111. - P. 293-294.
95. Brantl, V. Opioid activities of beta-casomorphins Текст. / V. Brantl, H. Teschemacher, J. Blasig, A. Henschen, F. Lottspeich // Life sciences. 1981. - V.28. - P. 1903-1909.
96. Brantl, V. Opioid peptides derived from food proteins Текст. / V. Brantl, K. Neubert // Trends in pharmacological sciences. 1986. - V. 7. - N 1. - P.6-7.
97. Brix, A. E. Renal papillary necrosis Текст. / A. E. Brix // Toxicologic pathology. 2002. -V. 30. - N 6. - P.672-674.
98. Broccardo, M. Cross-tolerance between dermorphin and morphine to analgesia and catalepsy in rats Текст. / M. Broccardo, G. Improta // Peptides. 1985. - V.6, Suppl 3. - P.165-169.
99. Broccardo, M. Effect of dermorphin on body temperature in rats Текст. / M. Broccardo // Pharmacological research communications. 1987. - Vol. 19. - N 10. - P. 713-721.
100. Broccardo, M. Effects of dermorphin on gastrointestinal transit in rats Текст. / M. Broccardo, G. Improta, M. Nargi, P. Melchiorri // Regulatory peptides. 1982. - V. 4. - N 2. -P. 91-96.
101. Broccardo, M. Tolerance and physical dependence induced by dermorphin in rats Текст. / M. Broccardo, G. Improta, L. Negri, P. Melchiorri // European journal of pharmacology. 1985. -V.110.-N 1. -P.55-61.
102. Buckley, N. Paracetamol (acetaminophen) poisoning Текст. / N. Buckley, M. Eddleston // Clinical evidence (Online). 2007. - V.2007. - PII2101.
103. Bueno, L. Neuroimmune alterations of ENS functioning Текст. / L. Bueno // Gut. 2000. -V.47, Suppl. 4. - P.63-65.
104. M. Zimraermann, J. Azkue // International journal of neuropharmacology. 2008. - V.55. - N 8. -P.1376-1382.
105. Caroleo, M.C. A reappraisal of the role of the various opioid receptor subtypes in cellmediated immunity Текст. / M.C. Caroleo, M. Arbitrio, D. Melchiorri, G. Nistico // Neuroimmunomodulation. 1994. - V.l. - N 2. - P. 141-147.
106. Carr, J.A. Mu and delta opioid receptor regulation of pro-opiomelanocortin peptide secretion from the rat neurointermediate pituitary in vitro Текст. / J.A. Carr, A.T. Lovering // Neuropeptides. 2000. - V. 34. -N 1. - P.69-75.
107. Carstens, E. Rat tail flick reflex: magnitude measurement of stimulus-response function, suppression by morphine and habituation Текст. / E. Carstens, C. Wilson // Journal of neurophysiology. 1993. - V.70. - P.630-639.
108. Castellano, C. Dose- and strain-dependent effects of dermorphin and D-Ala2-D-Leu5.enkephalin on passive avoidance behavior in mice [Текст] / С. Castellano, F. Pavone // Behavioral neuroscience. 1985. - V. 99. -N 6. - P. 1120-1127.
109. Chaki, K. Antinociceptive cross-tolerance between D-Arg2.-dermorphin tetrapeptide analogs and morphine [Текст] / К. Chaki, S. Sakurada, T. Sakurada, N. Nakata, K. Kisara, H. Watanabe, K. Suzuki//Peptides. 1990. - V.l 1. - N l.-P. 139-144.
110. Chang, K.J. Mulpiple opiate receptors Текст. / K.J. Chang, P. Cuatrecasas // The Journal of biological chemistry. 1986. - V. 254. -N 8. - P. 2610-2618.
111. Chang, W-C. Isolation and characterization of beta-lipotropin and adrenocorticotropm from turkey pituitary glands Текст. / W-C. Chang, D. Chung, С. H. Li // International journal of peptide and protein research. 1980. - V. 15. -N 3. - P. 261-270.
112. Chen, J.C. Endomorphin-1 and -2 induce naloxone-precipitated withdrawal syndromes in rats Текст. / J.C. Chen, P.L. Tao, J.Y. Li, C.H. Wong, E.Y. Huang // Peptides. 2003. - V.24. - N 3. - P.477-481.
113. Chen, S-T. Molecular cloning of proopiomelanocortin (POMC) cDNA from mud turtle, Pelodiscus sinensis Текст. / S-T. Chen, L-M. Lu, J-R. Chen, J. Y-L. Yu // General and comparative endocrinology. 2003. - V. 131. - N 2. - P. 192-201.
114. Chen, T. CD26 Текст. / T. Chen, D. Smyth, C. A. Abbott // Journal of biological regulators and homeostatic agents- 2004. V. 18. - P. 47-54.
115. Chernov, H. I. Non-specificity of the mouse writhing test Текст. / H. I. Chernov, D. E. Wilson, W. F. Fowler, A. J. Plummer // Archives internationales de pharmacodynamic et de thérapie. 1967. - V.167.-N 1.-P.171-178.
116. Chiu, Т.Н. Electrophysiological effects of dermorphin on locus coeruleus neurons of rat Текст. / Т.Н. Chiu, T. Y. Chen, С. L. Ho, S. T. Chiang // Neuropharmacology. 1990. - V.29. - N 8. - P.747-755.
117. Cichewicz, D.L. Synergistic interactions between cannabinoid and opioid analgesics Текст. / D.L. Cichewicz // Life sciences. 2004. - V.74. - P. 1317-1324.
118. Clapham, D.E. G protein beta gamma subunits Текст. / D.E. Clapham, E. J. Neer // Annual review of pharmacology and toxicology. 1997. - V.37. - P.167-203.
119. Clare, D.A. Bioactive milk peptides: a prospectus Текст. / D.A. Clare, H. E. Swaisgood // Journal of dairy science. 2000. - V. 83. - N 6. - P. 1187-1195.
120. Colman, A.S. Modulation of breathing by mul and mu2 opioid receptor stimulation in neonatal and adult rats Текст. / A.S. Colman, J. PI. Miller // Respiration physiology. 2001. -V.127. -N 2-3. - P. 157-172.
121. Colman, A.S. mu-1 opioid receptor stimulation decreases body temperature in conscious, unrestrained neonatal rats Текст. / A.S. Colman, J. H. Miller // Experimental biology and medicine (Maywood, N.J.). 2002b. - V.227. - N 6. - P.377-381.
122. Corbett, A.D. 75 years of opioid research: the exciting but vain quest for the Holy Grail Текст. / A.D. Corbett, G. Henderson, A. T. McKnight, S. J. Paterson // British journal of pharmacology. 2006. - V. 147. - P.S153-S162.
123. Corne, S.J. A method for assessing the effects of drugs on the central actions of 5-hydroxythyphamine Текст. / S.J. Corne, R.W. Pickering, B.T. Warner // British journal of pharmacology. 1963. - V.20. - P.106-120.
124. Cucumel, K. The rat dermorphin-like immunoreactivity is supported by an aminopeptidase resistant peptide Текст. / К. Cucumel, D. Bagnol, D. Moinier, J. Fischer, M. Conrath, A. Cupo //Journal of neuroimmunology. 1998. - Vol. 81. -N 1-2. - P. 211-224.
125. D'Amour, F.E. A method for determining loss of pain sensation Текст. / F.E. D'Amour, D.L. Smith //The Journal of pharmacology and experimental therapeutics. 1941. - V. 72. - P. 7479.
126. D'Aniello, A. D-Aspartic acid: an endogenous amino acid with an important neuroendocrine role Текст. / A. D'Aniello // Brain research reviews. 2007. - V.53. - N 2. - P.215-234.
127. Daniel, H. Effect of casein and (3-casomorphins on castrointestmal motility in rats Текст. / H. Daniel, M. Vohwmkel, G. Rehner // The Journal of nutrition. 1990 - V. 120. - N 3. - P.252
128. Dauge, V. Effect of inhibiting enkephalin catabolism in the VTA on motor activity and extracellular dopamine Текст. / V. Dauge, P.W. Kalivas, T. Duffy, B.P. Roques // Brain research -1992. V. 599. - N 2. - P.209-214.
129. Dave, K.D. A novel behavioral model that discriminates between 5-HT2A and 5-HT2C receptor activation Текст. / K.D. Dave, J. A. Harvey, V. J. Aloyo // Pharmacology, biochemistry, and behavior. 2002. - V.72. - N 1 -2. - P.371 -378.
130. Dennis, S.G. Effects of cholinergic and dopaminergic agents on pain and morphine analgesia measured by three pain tests Текст. / S.G. Dennis, R. Melzack // Experimental neurology 1983. -V.81.-N 1. - P.167-176.
131. Dhawan, B.N. International union of Pharmacology. 12. Classification of opioid receptors Текст. / B.N. Dhawan, F. Cesselin, R. Raghubir, R. Reisine, P. B. Bradley, P. S. Portoghese, M. Hamon // Pharmacological reviews. 1996. - V. 48. - P. 567-592
132. Diedrich, M. Effects of des-Tyr-D-Phe3.beta-casomorphin (2-5) on cortical EEG power spectra in rats [Текст] / M. Diedrich, S. Schulz, W. Wetzel // Peptides. 1994. - V.15. - N 4. -P.667-670.
133. Dixon, P. Managing acute heroin overdose Текст. / P. Dixon // Emergency nurse : the journal of the RCN Accident and Emergency Nursing Association. 2007. - V.15. - N 2. - P.30-35.
134. Diz, D.I. Increases in heart rate and blood pressure produced by injections of dermorphin into discrete hypothalamic sites Текст. / D.l. Diz, J. A. Vitale, D. M. Jacobowitz // Brain research 1984. - V.294. —N 1.-P.47-57.
135. Djurovic, D. Serum (3-endorphin level in patients with depression on fluvoxamine Текст. / D. Djurovic, J. Milic-Askrabic, N. Majkic-Singh // Farmaco. 1999. - V.54. - P. 130-133.
136. Dores, R. M. Deciphering posttranslational processing events in the pituitary of a neopterygian fish: cloning of a gar proopiomelanocortin cDNA Текст. / R. M. Dores, T. R. Smith,
137. D. A. Rubin, P. Danielson, L. E. Marra, J. H. Youson // General and comparative endocrinology. -1997.-V. 107. N 3. - P.401-413.
138. Drouin, J. Most of the coding region of rat ACTH beta-LPH precursor gene lacks intervening sequences Текст. / J. Drouin, H. M. Goodman // Nature. 1980. - V. 288. - N 5791. -P. 610-613.
139. Dubuisson, D. The formalin test: a quantitative study of the analgesic effects of morphine, meperidine and brain stem stimulation in rats and cats Текст. / D. Dubuisson, S. G. Dennis // Pain. 1977. - V.4. - P.161-174.
140. Dun, N. J. Endomorphins: localization, release and action on rat dorsal horn neurons Текст. / N. J. Dun, S. L. Dun, S. Y. Wu, C. A. Williams, E. H. Kwok // Journal of biomedical science. -2000. V. 7. -N 3. -P. 213-220.
141. Dunbar, S.A. Effects of recurrent withdrawal on spinal GABA release during chronic morphine infusion in the rat Текст. / S.A. Dunbar, I. Karamian, A. Yeatman, J. Zhang // European journal of pharmacology. 2006. - V.535. - N 1-3. - P.152-156.
142. Ebell, M. Tramadol relieves neuropathic pain Текст. / M. Ebell // American family physician. 2007. - V. 75. - N 9. - P. 1335-1336.
143. Eimerl, J. The effect of mu, delta, kappa and epsilon opioid receptor agonists on heart rate and blood pressure of the pithed rat Текст. / J. Eimerl, G. Feuerstein // Neuropeptides. 1986. -V.8. - N 4. - P.351-358.
144. Emel'yanova, T.G. Effect of dermorphin on thermoregulation in rats at selected ambient temperatures Текст. / T.G. Emel'yanova, A. B. Usenko, L. S. Guzevatykh, V. I. Deigin, E. P. Yarova, A. A. Kamensky // Peptides. 1996. - V. 17. - N2. - P.241-245.
145. Emelyanova, T.G. Effect of dermorphin on thermoregulation in rats at selected ambient temperature Текст. / T.G. Emelyanova, A.B. Usenko, V.I. Deigin, E.P. Yarova, A.A. Kamensky // Biomedical Science. 1991. - V.2.-N 6.-P.601-606.
146. Erchegyi, J. Isolation of a novel tetrapeptide with opiate and antiopiate activity from human brain cortex: Tyr-Pro-Trp-Gly-NH2 (Tyr-W-MIF-1) Текст. / J. Erchegyi, A J. Kastin, J.E. Zadina // Peptides. 1992. - V.l3. - N 4. - P.623-631.
147. Erspamer, V. The opioid peptides of the amphibian skin Текст. / V. Erspamer // International journal of developmental neuroscience : the official journal of the International Society for Developmental Neuroscience. 1992. - V.l0. - P. 3-30.
148. Espejo, E. F. Antagonism of peripheral 5-HT4 receptors reduces visceral and cutaneous pain in mice and induces visceral analgesia after simultaneous inactivation of 5-HT3 receptors Текст. / E. Gil // Brain research 1998. - V.788. - P.20-24.
149. Esser, M. J. Acute amitriptyline in a rat model of neuropathic pain: differential symptom and route effects Текст. / M. J. Esser, J. Sawynok // Pain. 1999. - V.80. - P.643-653.
150. Fanciulli, G. Serum prolactin levels after administration of the alimentary opioid peptide gluten exorphin B4 in male rats Текст. / G. Fanciulli, Dettori A, Demontis MP, Anania V, Delitala G. // Nutritional neuroscience. 2004. - V.7. - N 1. - P.53-55.
151. Fernandes, M. Quantitative assessment of tolerance to and dependence on morphine in mice Текст. / M. Fernandes, S. Kluwe, H .Coper // Naunyn-Schmiedeberg's archives of pharmacology. 1977.-V. 297.-P.53-60.
152. Feuerstein, G. Central autonomic effects of dermorphin in conscious rats Текст. / G. Feuerstein, A. I. Faden //The Journal of pharmacology and experimental therapeutics. 1983. -V. 226.-N 1.-P. 151-156.
153. Feuerstein, G. Effect of dermorphin and morphine on the sympathetic and cardiovascular system of the pithed rat Текст. / G. Feuerstein, Z. Zukowska-Grojec // Neuropeptides. 1987. - V. 9. - N 2. - P. 139-150.
154. Fichna, J. Antidepressant-like effect of endomorphin-1 and endomorphin-2 in mice Текст. / J. Fichna, A. Janecka, M. Piestrzeniewicz, J. Costentin, J.-C. do Rego // Neuropsychopharmacology. 2007. - V.32. - P. 813-821.
155. Fiori, A. Deltorphin transport acroos the blood-brain barrier Текст. / A. Fiori, P. Cardelli, L. Negri, M.R. Savi, R. Strom, V. Erspamer // Proceedings of the National Academy of Sciences of the USA. 1991. - V.94. - P.9469-9474.
156. FitzGerald, R.J. Milk protein-derived peptide inhibitors of angiotensin-I-converting enzyme Текст. / R.J. FitzGerald, H. Meisel // The British journal of nutrition. 2000. - V. 84, Suppl. 1. -P.S33-S37.
157. Freeman, F.M. Inhibition of passive-avoidance memory formation in the day-old chick by the opioid cytochrophin-4 Текст. / F.M. Freeman, I. G. Young // Learning and memory . 2000. -V.7. -N 4. - P.213-219.
158. Fremeau, R.T. Jr Molecular cloning and expression of a high affinity L-proline transporter expressed in putative glutamatergic pathways of rat brain Текст. / R.T. Fremeau Jr, M.G. Caron, R.D. Blakely // Neuron. 1992. - V.8. - N 5. - P.915-926.
159. Frenk H. Pro- and anticonvulsant actions of morphine and the endogenous opioids: involvement and interactions of multiple opiate and non-opiate systems Текст. / H. Frenk // Brain research 1983. - V. 287. -N 2. - P. 197-210.
160. Fukudome, S. Effect of gluten exorphins A5 and B5 on the postprandial plasma insulin level in conscious rats Текст. / S. Fukudome, A. Shimatsu, H. Suganuma, M. Yoshikawa // Life sciences. 1995. - V.57. - N 7. - P.729-734.
161. Fukudome, S. Gluten exorphin C. A novel opioid peptide derived from wheat gluten Текст. / S. Fukudome, M. Yoshikawa // FEBS letters. 1993. - V.316. - N 1. - P. 17-19.
162. Fukudome, S. Opioid peptides derived from wheat gluten: their isolation and characterization Текст. / S. Fukudome, M. Yoshikawa // FEBS letters. 1992. - V.296. - N 1. -P.107-111.
163. Gal, T.J. Naloxone reversal of ЬиргепофЫпе-mduced respiratory depression Текст. / T.J. Gal // Clinical pharmacology and therapeutics. 1989. - V.45. - N 1. - P.66-71.
164. Galat, A. Peptidylproline cis-trans-isomerases: immunophilins Текст. / A Galat // European journal of biochemistry. 1993. - V. 216. - N 3. - P.689-707.
165. Galina, Z. H. Differential activity of the endogenous antiopiate Tyr-MIF-1 after various intensities of stress Текст. / Z. H. Galina, A. J. Kastin // Neuroscience letters. 1988. - V. 84. - N 3.-P. 312-316.
166. Galluzzi, K.E. Managing neuropathic pain Текст./ K.E. Galluzzi // The Journal of the American Osteopathic Association. 2007. - V. 10, Suppl 6. - P.ES39-48.
167. Galoyan, A. Primary structure and biological activity of hemoglobin-related hypothalamic peptides / A. Galoyan // Biopolymers. 1997. - V.43. - N 2. - P.135-137.
168. Geppetti, P. Pain treatment with opioids : achieving the minimal effective and the minimal interacting dose Текст. / P. Geppetti, S. Benemei // Clinical drug investigation. 2009. - V.29, Suppl 1.-P.3-16.
169. Gerald, C. A receptor subtype involved in neuropeptide-Y-induced food intake Текст. /
170. Gergen, K. A. Intrathecal Tyr-W-MIF-1 produces potent, naloxone-reversible analgesia modulated by alpha 2-adrenoceptors Текст. / К. A. Gergen, J. E. Zadina, A. J. Kastin, D. Paul // European journal of pharmacology. 1996. - V.298. - N 3. - P.235-239.
171. Giagnoni, G. Binding studies of dermorphin and its L-form on rat brain opioid receptors Текст. / G. Giagnoni, L. Mennuni, N. Pecora, L. Basilico, D. Parolaro, E. Gori // Pharmacological research communications. 1987. - V.19. -N 2. - P. 173-181.
172. Giagnoni, G. Dermorphin interaction with peripheral opioid receptors Текст. / G. Giagnoni,
173. D. Parolaro, L. Casiraghi, G. Crema, M. Sala, C. Andreis, E. Gori // Neuropeptides. 1984. - V. 5. -N 1-3.-P. 157-160.
174. Giniatullin R. Molecular mechanisms of sensitization of pain-transducing P2X3 receptors by the migraine mediators CGRP and NGF Текст. / R. Giniatullin, A. Nistri, E. Fabbretti // Molecular neurobiology. 2008. - V.37. - N 1. - P.83-90.
175. Gioanni, Y. Search for the structures initiating seizures triggered by intraventricular injection of the mu opioid agonist dermorphin in rats Текст. / Y. Gioanni, B. Greco, J. Prevost // Epilepsia. 1995. - V.36. - N 9. - P.922-928.
176. Giudici, D. Dermorphin stimulates prolactin secretion in the rat Текст. / D. Giudici, R. D'Urso, P. Falaschi, L. Negri, P. Melchiorri, M. Motta // Neuroendocrinology. 1984. - V.39. - N 3. - P.236-244.
177. Gold, M. S. Tetrodotoxin-resistant Na+ currents and inflammatory hyperalgesia Текст. / M. S. Gold // Proceedings of the National Academy of Sciences of the USA. 1999. - V.96. - N 14. -P.7645-7649.
178. Goldstein, A. Dynorphin-(l-13), an extraordinarily potent opioid peptide Текст. / A. Goldstein, S. Tachibana, L.I. Lowney, M. Hunkapiller, L. Hood // Proceedings of the National Academy of Sciences of the USA. 1979. - Vol. 76. -N 12. - P. 6666-6670.
179. Goldstein, A. Multiple opioid receptors: ligand selectivity profiles and binding site signatures Текст. / A. Goldstein, A. Naidu // Molecular pharmacology. 1989. - V. 36. - P. 265272.
180. Gong, J. Endomorphins fully activate a cloned human mu opioid receptor Текст. / J. Gong, J. A. Strong, S. Zhang, X. Yue, R. N. DeHaven, J. D. Daubert, J. A. Cassel, G. Yu, E. Mansson, L. Yu // FEBS letters. 1998.-V. 439.-N 1-2. - P. 152-156.
181. Gordon, C.J. Thermal biology of the laboratory rat Текст. / C.J. Gordon // Physiology and behavior. 1990. - V.47. -N 5. - P.963-991.
182. Gorea, E. Serotonergic regulation of noradrenergic coerulean neurons: electrophysiological evidence for the involvement of 5-HT2 receptors Текст. / E. Gorea // European journal of pharmacology. 1988. - V.154. -N 3. - P.285-291.
183. Gorelick, D.A. В eta-endorphin studies in psychiatric patients Текст. / D.A. Gorelick, D. H. Catlin, R. H. Gerner// Modern problems of pharmacopsychiatry. 1981. - V.17. - P. 236-245.
184. Gray, A.M. The involvement of the opioidergic system in the antinociceptive mechanism of action of antidepressant compounds Текст. / A.M. Gray, P.S. Spencer, R.D. Sewell // British journal of pharmacology. 1998. - V.124. - N 4. - P.669-674.
185. Grecksch, G. Evidence for analgesic activity of (3-casomorphin in rats Текст. / G. Grecksch, С. Schweigert, H. Matthies //Neuroscience letters. 1981. - V.27. -N 3. -P.325-328.
186. Greco, B. Intracerebral microinjections of dermorphin: search for the epileptic induction thresholds Текст. / В. Greco, J. Prévost, Y. Gioanni // Neuroreport. 1994. - V.5. - N 16. -P.2169-2172.
187. Grond, S. Clinical pharmacology of tramadol Текст. / S. Grond, A. Sablotzki // Clinical pharmacokinetics. 2004. - V.43. - N 13. - P.879-923.
188. Guaiana, G. Amitriptyline versus other types of pharmacotherapy for depression online. / G. Guaiana, C. Barbui, M. Hotopf // Cochrane database of systematic reviews (Online). 2003. - N 2.-CD004186.
189. Guglietta, A. Indomethacin (i.c.v.) reverses the inhibitory action of peptides on gastric secretion Текст. / A. Guglietta, R. V. Nardi, L. H. Lazarus // European journal of pharmacology. -1989.-V. 170.-N 1-2. P.87-90.
190. Guglietta, A. Structure-activity relationship of dermorphin on gastric secretion Текст. / A. Guglietta, B. J. Irons, L. H. Lazarus, P. Melchiorri // Endocrinology. 1987. - V. 120. - N 5. - P. 2137-2143.
191. Guirimand, F. Effects of intravenous morphine and buprenorphine on a C-fibre reflex in the rat Текст. / F. Guirimand, M. Chauvin, J. С. Wilier, D. Le Bars // The Journal of pharmacology and experimental therapeutics. 1995. - V.273. - P.830-841.
192. Hackler, L. Isolation of a novel peptide with a unique binding profile from human brain cortex: Tyr-K-MIF-1 (Tyr-Pro-Lys-Gly-NH2) Текст. / L. Hackler, A.J. Kastin, J.E. Zadina // Peptides. 1994.-Vol. 15.-N6.-P. 945-950.
193. Hackler, L. Isolation of relatively large amounts of endomorphin-1 and endomorphin-2 from human brain cortex Текст. / L. Hackler, J. E. Zadina, L. J. Ge, A. J. Kastin // Peptides. 1997. -V.18.-N 10.-P.1635-1639.
194. Hackler, L. Isolation of Tyr-W-MIF-1 from bovine hypothalami Текст. / L. Hackler, A. J. Kastin, J. Erchegyi, J. E. Zadina // Neuropeptides. 1993. - V.24. - N 3. - P.159-164.
195. Haffner, F. Experimental prufung Schmerzstillender mittel Текст. / F. Haffner // Deutsche medizinische Wochenschrift. 1929. - V.Bd.55. - S731-733.
196. Hamza, M. Mechanisms of Non-Opioid Analgesics Beyond Cyclooxygenase Enzyme Inhibition Текст. / M. Hamza, R.A. Dionne // Current molecular pharmacology. 2009. - V.2. - N 1. - P.l-14.
197. Han, Y. Y. The analgesic effect of oral morphine or pentazocine for extracorporeal shock wave lithotripsy Текст. / Y. Y. Han, FI. С. Lu, H. J. Tsai, S. S. Hseu, К. H. Chan, S. K. Tsai // Acta anaesthesiologica Smica. 2003. - V.41. - N 1. - P.27-32.
198. Нага, С Biphasic effects of MIF-1 and Tyr-MIF-1 on apomorphine-induced stereotypy in rats Текст. / С. Нага, A. J. Kastin // Pharmacology, biochemistry, and behavior. 1986. - V. 25. -N4.-P. 757-761.
199. Hardy, J. D. Studies on pain. A new method for measuring pain threshold: observation on spatial summation of pain Текст. / J. D. Hardy, H. G. Wolff, H. Goodell // The Journal of clinical investigation. 1940. - V.l9. - P.649-657.
200. Haslach, E.M. Beta-turn secondary structure and melanocortin ligands Текст. / E.M. Haslach, J.W. Schaub, С. Haskell-Luevano // Bioorganic and medicinal chemistry. 2009. - V.l7. - N 3. - P.952-958.
201. Hayashi, T. Tyr-MIF-1 affects passive avoidance behavior but not motor activity in rats Текст. / Т. Hayashi, A. J. Kastin, D. H. Coy, R. D. Olson // Bram research bulletinetin. 1983. -V.ll. -N 6. - P.659-662.
202. He, L. Delta opioid receptor enhancement of mu opioid receptor-induced antinociception in spinal cord Текст. / L. He, N. M. Lee // The Journal of pharmacology and experimental therapeutics. 1998. - V.285. - P. 1181-1186.
203. Henriksen, G. Imaging of opioid receptors in the central nervous system Текст. / G. Henriksen, F. Willoch // Brain. 2008. - V.131(Pt 5). - P. 1171-1196.
204. Hill, R. NK1 (substance P) receptor antagonists why they are not analgesic in humans? Текст. / R. Hill // Trends in pharmacological sciences. - 2000. - V.21. - P.244-246.
205. Hirario, E. Characterization of cDNA encoding proopiomelanocortin in the frog Rana ridibunda Текст. / E. Hirario, I. Lihrmann, H. Vaudry // Biochemical and biophysical research communications. 1990. - V. 173. - N 2. - P. 653-659.
206. Horvath, G. Antinociceptive effects of intrathecal endomorphin-1 and -2 in rats Текст. / G. Horvath, M. Szikszay, C. Tomboly, G. Benedek // Life sciences. 1999. - V.65. - N 24. - P.2635-2641.
207. Houghten, R. A. alpha-Neo-endorphin: receptor binding properties of the tritiated ligand Текст. / R. Houghten, R. Houghten, S. M. Bartlett, J. M. Ostresh // Life sciences. 1983. - V.33. -N 18. - P.1811-1820.
208. Houghton, I.T. The respiratory depressant effect of morphine. A comparative study in three ethnic groups Текст. / I.T. Houghton, C. S. Aun, Y. C. Wong, K. Chan, J. T. Lau, Т. E. Oh // Anaesthesia. 1994. -V. 49. -N 3. - P. 197-201.
209. Huang, N.K. Effects of acute and chronic morphine on DOPAC and glutamate at subcortical DA terminals in awake rats Текст. / N.K. Huang, C.J. Tseng, C.S. Wong, C.S. Tung // Pharmacology, biochemistry, and behavior. 1997. - V.56. - N 3. - P.363-371.
210. Hull, K.M. L-tyrosine potentiation of opioid-induced analgesia utilizing the hot-plate test Текст. / K.M. Hull, D.E. Tolland, T.J. Maher // The Journal of pharmacology and experimental therapeutics. 1994. - V.269. - N 3. - P. 1190-1195.
211. IASP Merskey, H. Classification of Chronic Pain, Second Edition, IASP Task Force on Taxonomy, edited by H. Merskey and N. Bogduk // IASP Press, Seattle 1994, pp. 209-214.
212. Improta, G. Effect of selective mu 1, mu 2 and delta 2 opioid receptor agonists on gastric functions in the rat Текст. / G. Improta, M. Broccardo // Neuropharmacology. 1994. - V. 33. - N 8.-P. 977-981
213. Improta, G. Neural regulation of gastric acid secretion in rats: influence of dermorphin Текст. / G. Improta, M. Broccardo, A. Lisi, P. Melchiorri // Regulatory peptides. 1982. - V. 3. -N3-4.-P. 251-256.
214. Improta, G. The role of caudate nucleus in dermorphin-induced catalepsy in rats Текст. / G. Improta, A. Guglietta//Peptides. 1985. - V.6, Suppl 3. - P.161-164
215. Inui, A. Neuropeptide regulation of feeding in dogs Текст. / A. Inui, M. Okita, M. Nakajima, T. Inoue, N. Sakatani, M. Oya, H. Morioka, Y. Okimura, K. Chihara, S. Baba // The American journal of physiology. 1991. - V.261. -N 3, Pt 2. - P.R588-594.
216. Iwamoto, E.T. Characterization of the antinociception produced by intrathecally administered muscarinic agonists in rats Текст. / E.T. Iwamoto, L. Marion // The Journal of pharmacology and experimental therapeutics. 1993. - V.266. - N 1. - P.329-338.
217. Jinsmaa, Y. Enzymatic release of neocasomorphm and beta-casomorphin from bovine beta-casein Текст. / Y. Jinsmaa, M. Yoshikawa // Peptides. 1999. - V.20. - N 8. - P. 957-962
218. Johnson, S. W. Opioids excite dopamine neurons by hyperpolarization of local interneurons Текст. / S. W. Johnson, R. A. North // The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 1992. -V. 12. - P.483-488.
219. Jones, L. S. Dermorphin-induced hyperexcitability in hippocampal CA3 and CA1 in vitro Текст. / L. S. Jones, S. Y. Grooms, S. Salvadori, L. H. Lazarus // European journal of pharmacology. 1994. - V.264. -N 1. - P.39-48
220. Jourdan, D. A new automated method of pain scoring in the formalin test in rats Текст. / D. Jourdan, D. Ardid, L. Bardin, M. Bardin, D. Neuzeret, L. Lanphouthacoul, A. Eschalier // Pain. -1997. V.71. - P.265-270.
221. Kammerer, E. Action of (d-pro4)-P-casomorphin(l-5) on Processes of Synaptic Transmission Текст. / E. Kammerer, S. Koch, D.M. Leon Roque // Biomedica biochimica acta. -1985. V.44. - N 9. - P.1379-1387.
222. Kapusta, D. R. Central mu opioids mediate differential control of urine flow rate and urinary sodium excretion in conscious rats Текст. / D. R. Kapusta, E. M. Dzialowski /7 Life sciences. -1995. V.56. - N 14. - P.PL243-248.
223. Karelin, A. Isolation of endogenous hemorphin-related hemoglobin fragments from bovine brain Текст. / A. Karelin, M. Phillipova, E. Karelina, V. Ivanov // Biochemical and biophysical research communications. 1994. - V.202. - N 1. - P.410-415.
224. Kastin, A. J. Tyr-MIF-1 acts as an opiate antagonist in the tail-flick test Текст. / A. J. Kastin, E. Stephens, R. H. Ehrensing, A. J. Fischman // Pharmacology, biochemistry, and behavior.- 1984,-V.21.-N6.-P. 937-941.
225. Kastin, A.J. Differential metabolism of Tyr-MIF-1 and MIF-1 in rat and human plasma Текст. / A. J. Kastin, K. Hahn, J. Erchegyi, J. E. Zadina, L. Hackler, M. Palmgren, W. A. Banks // Biochemical pharmacology. 1994. - V. 47. - N 4. - P. 699-709.
226. Kavaliers, M. Sex differences in the effects of Tyr-MIF-1 on morphine- and stress-induced analgesia Текст. / M. Kavaliers, D. G. Innes // Peptides. 1992. - V.13. -N 6. - P.1295-1297.
227. Kawauchi, H. Isolation and primary structure of endorphin from salmon pituitary glands Текст. / H. Kawauchi, M. Tubokawa, K. Muramoto // Biochemical and biophysical research communications. 1979. -V. 88. -N 4. - P. 1249-1254.
228. Kelly, P.H. Selective 6-OHDA-induced destruction of mesolimbic dopamine neurons: abolition of psychostimulant-induced locomotor activity in rats Текст. / P.H. Kelly, S. D. Iversen // European journal of pharmacology. 1976. - V.40. -P.45-56.
229. Kissin, I. Vanilloid-induced conduction analgesia: selective, dose-dependent, long-lasting, with a low level of potential neurotoxicity Текст. /1. Kissin // Anesthesia and analgesia. 2008. -V.107.-N 1. - P.271-281.
230. Koch, G. Opioid activities of human beta-casomorphins Текст. / G. Koch, K. Wiedemann,
231. H. Teschemacher // Naunyn-Schmiedeberg's archives of pharmacology. 1985. - V.331. - N 4. -P. 351-354.
232. Korzeniewska-Rybicka, I. Analgesic effect of antidepressant drugs Текст. /
233. Korzeniewska-Rybicka, A. Plaznik // Pharmacology, biochemistry, and behavior. 1998. - V.59. - N 2. - P.331-338.
234. Kostrzewa, R. M. Tyr-MIF-1 attenuates development of tolerance to spiperone-induced catalepsy in rats Текст. / R. M. Kostrzewa, A. J. Kastin // Brain research bulletinetin. 1993. -V.31. -N 6. - P.707-712.
235. Krowicki Z. K. Cimetidine does not change the effect of Tyr-MIF-1 (Tyr-Pro-Leu-Gly-NH2) on the opiate form of footshock-induced analgesia Текст. / Z. K. Krowicki // Life sciences. -1991b.-V.49.-N 16,- P.1163-1168.
236. Krowicki Z. K. Dopamine receptor antagonists block the effect of Tyr-MIF-1 (Tyr-Pro-Leu-Gly-NH2) on the opiate form of footshock-induced analgesia Текст. / Z. K. Krowicki // Neuropeptides. 1991a. - V. 19. -N 4. - P. 281-285.
237. Krowicki Z. K. Effects of Tyr-MIF-1 (Tyr-Pro-Leu-Gly-NH2) on GH, LFI, prolactin, FSH, and TSH secretion in rats with and without morphine Текст. / Z. K. Krowicki, Kastin A. J. // Neuropeptides. 1991.-V. 18,-N l.-P. 41-47.
238. Kurek, M. Pseudoallergic skin reactions to opiate sequences of bovine casein in healthy children Текст. / M. Kurek, M. Czerwionka-Szaflarska, G. Doroszewska // Roczniki Akademii Medycznej w Bialymstoku. 1995. - V.40. - N 3. - P.480-485.
239. Lantz, I. Hemorphins derived from hemoglobin have an inhibitory action on angiotensin converting enzyme activity Текст. /1. Lantz, E.L. Glámsta, L. Talback, F. Nyberg // FEBS letters. 1991. - V.287. — N 1-2. - P.39-41.
240. Law, P.Y. Opioid properties of beta-lipotropin fragment 60-65, H-Arg-Try-Gly-Gly-Phe-Met-OH Текст. / P.Y. Law, E. T. Wei, L. F. Tseng, H. H. Loh, E. L. Way // Life sciences. 1977. -V. 20.-N 2.-P. 251-260.
241. Le Bars, D. Animal models of nociception Текст. / D. Le Bars, M. Gozariu, S. W. Cadden // Pharmacological reviews. 2001. - V. 53. - P. 597-652.
242. Lee, H. TRPV channels as thermosensory receptors in epithelial cells Текст. / H. Lee, M.J. Caterina // Pflugers Archiv : European journal of physiology. 2005. - V.451. - N 1. - P.160-167.
243. Lee, J. Potentiation of cholinergic transmission in the rat hippocampus by angiotensin IV and LVV-hemorphin-7 Текст. / J. Lee, S. Y. Chai, F. A. Mendelsohn, M. J. Morris, A. M. Allen // Neuropharmacology. 2001. - V.40. -N 4. - P.618-623.
244. Lester, P.A. Comparison of the in vitro efficacy of mu, delta, kappa and ORL1 receptor agonists and non-selective opioid agonists in dog brain membranes Текст. / P.A. Lester, J.R. Traynor//Brain research 2006. - V. 16.-N 1073-1074. - P. 290-296.
245. Levin, E. R. Endogenous opioids and opiate antagonists modulate the blood pressure of the spontaneously hypertensive rat Текст. / E. R. Levin, S. Mills, M. A. Weber // Peptides. 1986. -V.7.-N6.-P. 977-981.
246. Lewis, R. V. An about 50,000-dalton protein in adrenal medulla: a common precursor of Met.- and [Leu]enkephalin [Текст] / R. V. Lewis, A. S. Stem, S. Kimura, J. Rossier, S. Stein, S. Udenfriend // Science. 1980. - V. 208. - N 4451. - P. 1459-1461.
247. Li С. H. Isolation and structure of an untriakontapeptide with opiate activity from camel pituitary glands Текст. / С. H. Li, D. Chung // Proceedings of the National Academy of Sciences of the USA. 1976. - V.73. - P.l 145-1148.
248. Li, C.H. Isolation and primary structures of elephant adrenocorticotropm and beta-lipotropin Текст. / C.H. Li, M. M. J. Oosthuizen, D. Chung // International journal of peptide and protein research. 1988.-V. 32.-N6.-P. 573-578.
249. Li, Y. Anti-nociceptive effect of neuropeptide Y in the nucleus accumbens of rats: an involvement of opioid receptors in the effect Текст. / Y. Li, J.J. Li, L.C. Yu // Brain research -2002. V.940. - N 1-2. - P.69-78.
250. Li, Z. H. Analgesic effect of endomorphin-1 Текст. / Z. H. Li, L. D. Shan, X. H. Jiang, S. Y. Guo, G. D. Yu, T. Hisamitsu, Q. Z.Yin// Acta pharmacologica Sinica. 2001. - V.22. -N 11. -P.976-980.
251. Liebmann, C. Opioid receptor affinities of the blood-derived tetrapeptides hemorphin and cytochrophin Текст. / С. Liebmann, U. Schrader, V. Brantl // European journal of pharmacology. -1989. V.166. - N 3. - P.523-526.
252. Link, A. S. Treatment of migraine attacks based on the interaction with the trigemino-cerebrovascular system Текст. / A. S. Link, A. Kuris, L. Edvinsson // The journal of headache and pain. 2008. - V.9. - N 1. - P.5-12.
253. Litchfield, J. T. A simplified method of evaluating dose-effect experiments Текст. / J. T. Litchfield, F.A. Wilcoxon // The Journal of pharmacology and experimental therapeutics. 1949. -V.96. - P.99-113.
254. Loennerdal, B. Cloning and sequencing of a cDNA encoding human milk beta-casein Текст. / В. Loennerdal, S. Bergstroem, Y. Andersson, K. Hjalmarsson, A.K. Sundqwist, O. Hernell // FEBS letters. 1990. - V. 269. - P. 153-156.
255. Loukas, L. Opioid activities and structures of alpha-casein-derived exorphins Текст. / L. Loukas, D. Varoucha, C. Zioudrou, R.A. Straty, W.A. Klee // Biochemistry. 1983. - V.22. - P. 4567-4573.
256. Loux, J. J. Comparative analgesic testing of various compounds in mice using writhing techniques Текст. / J. J. Loux, S. Smith, H. Salem // Arzneimittel-Forschung. 1978. - V.28. -P. 1644-1647.
257. Lowry, O.H. Protein measurement with Folin phenol reagent Текст. / O.H. Lowry, N.J. Rosebrough, A.L. Farr, R.J. Randall // The Journal of biological chemistry. 1951. - V. 193. -N 1. -P. 265-275.
258. Lu, K.P. Prolyl cis-trans isomenzation as a molecular timer Текст. / K.P. Lu, G. Finn, Т.Н. Lee, L.K. Nicholson. // Nature chemical biology. 2007. - V.3. - N 10. - P.619-629.
259. Lugo, R. A. Clinical pharmacokinetics of morphine Текст. / R. A. Lugo, S. E. Kern // Journal of pain and palliative care pharmacotherapy. 2002. - V. 16. - N 4. - P. 5-18.
260. Lupica, C. Dissociation of p and 5 receptor-mediated reduction in evoked and spontaneous synaptic inhibition in the rat hippotalamus in vitro Текст. / С. Lupica, W. Proctor, T. Dunwiddie // Brain research 1992. - V.593. - N 2. - P.226-238.
261. Magnus-Ellenbroec, B. Morphin-induced hyperactivity in rats a rebound effect? Текст. / В. Magnus-Ellenbroec, U. Havemann-Reinecke // Naunyn-Schmiedeberg's archives of pharmacology. - 1993. - V.347. - N 6. - P.635-642.
262. Malec, D. Central action of narcotic analgesics. VIII. The effect of dopaminergic stimulants on the action of analgesics in rats Текст. / D. Malec, R. Langwinski // Polish journal of pharmacology and pharmacy. 1981. - V.33. -N 3. - P.273-282
263. Mallet, C. Endocannabinoid and serotonergic systems are needed for acetaminophen-induced analgesia Текст. / С. Mallet, L. Daulhac, J. Bonnefont, C. Ledent, M. Etienne, E. Chapuy, F. Libert, A. Eschalier // Pain. 2008. - V. 139. -N 1. - P. 190-200.
264. Mamoon, A.M. Comparative rewarding properties of morphine and butorphanol Текст. / A.M. Mamoon, A. M. Barnes, I. К. Ho, B. Hoskms // Brain research bulletinetin. 1995. - V. 38. -N5.-P. 507-511.
265. Mansour, A. Anatomy of CNS opioid receptors Текст. / A. Mansour, H. Khachaturian, M. E. Lewis, H. Akil, S. J. Watson //Trends in neurosciences. 1988. -V. 11. - N 7. - P. 308-314.
266. Marastoni, M. Synthesis and opioid activity of tyrosine sulfate containing dermorphin and deltorphm peptides Текст. / M. Marastoni, S. Salvadori, G. Balbom, V. Scaranari, P. A. Borea, A. Tomatis // Arzneimittel-Forschung 1995. - V.45. -N 2. - P.116-11
267. Marchioni, E. Quantitative EEG and autonomic patterns of synthetic peptides related to dermorphin Текст. / E. Marchioni, M. Maurelli, A. Tartara // Neuropsychobiology. 1992. - V. 26.-P. 81-88.
268. Marek, G. J. Behavioral evidence for mu-opioid and 5-HT2A receptor interactions Текст. / G. J. Marek // European journal of pharmacology. 2003. - V.474. -N 1. - P.77-83.
269. Maresh, G.A. Peptide transport system-1 (PTS-1) for Tyr-MIF-1 and Met-enkephalin differs from the receptors for either Текст. / G.A. Maresh, A.J. Kastin, T.T. Brown, J.E. Zadina, W.A. Banks // Brain research 1999. - V.839. - N 2. - P.336-340.
270. Martens, G. J. M. Expression of two proopiomelanocortin genes in the pituitary gland of Xenopus laevis: complete structures of the two preprohormones Текст. / G. J. M. Martens // Nucleic acids research. 1986. -V. 14. - N 9. - P. 3791-3798.
271. Martinez J. L., Jr. D-Phe2-D-Phe5.-enkephalin impairs acquistion and enhances retention of a one-way active avoidance response in rats [Текст] / J. L. Martinez Jr., R. V. Hernandez, S. B. Rodriguez // Peptides. 1992. - V.13. -N 5. - P.885-889.
272. Martinez-Gomez, M. Assessing pain threshold in the rat: changes with estrus and time of day Текст. / M. Martinez-Gomez, Y. Cruz, M. Salas, R. Hudson, P. Pacheco // Physiology and behavior. 1994. - V.55. - P.651-657.
273. Matsuo, H. Novel C-terminally amidated opioid peptide in human phaeochromocytoma tumour Текст. / H. Matsuo, A. Miyata, K. Mizuno // Nature. 1983. - V. 305. - N 5936. - P. 721723.
274. Matthies, H. Deproseptin, Tyr-Pro-Phe-dPro-NH2, an Other Casomorphin with Remarkable Analgesic Action Текст. / H. Matthies, H-L. Ruthrick, H. Stark, A. Barth // Acta biologica et medica Germamca. 1981. - V.49. - N 9. - P.K39-K42.
275. Matthies, H. Derivatives of beta-casomorphins with high analgesic potency Текст. / H. Matthies, H. Stark, B. Hartrodt, H.L. Ruethrich, H.T. Spieler, A. Barth, K. Neubert // Peptides. -1984. V.5. - N 3. - P.463-470.
276. Mattia, С. COX-2 inhibitors: pharmacological data and adverse effects Текст. / С. Mattia, F. Coluzzi // Minerva anestesiologica. 2005. - V.71. - N 7-8. - P.461-470.
277. McCall, W. D. Formalin induces biphasic activity in C-fibers in the rat Текст. / W. D. McCall, K. D. Tanner, J. D. Levine // Neuroscience letters 1996. - V.208. - P.45^18.
278. McCleane, G. Pharmacological management of neuropathic pain Текст. / G. McCleane // CNS Drugs.-2003.-V. 17.-N 14.-P. 1031-1043.
279. McClung, C.A. The molecular mechanisms of morphine addiction Текст. / С.A. McClung // Reviews in the neurosciences. 2006. - V. 17. - N 4. - P. 393-402.
280. Meisel, H. Chemical Characterization and Opioid Activity of an Exorphin Isolated from in vivo Digests Casein Текст. / H. Meisel // FEBS letters. 1986. - V. 196. - N 2. - P.223-227.
281. Melchiorri, P. The dermorphin peptide family Текст. / P. Melchiorri, L. Negri // General pharmacology. 1996,-V. 27,-N7.-P. 99-107.
282. Meyer, M.E. DALDA (H-Tyr-D-Arg-Phe-Lys-NH2), a potent mu-opioid peptide agonist, affects various patterns of locomotor activities Текст. / M.E. Meyer, В. I. McLaurin // Pharmacology, biochemistry, and behavior. 1995. - V. 51. -N 1. - P. 149-151.
283. Micanovic, R Purification and sequence of an opioid peptide derived from ovine proenkephalin Текст. / R Micanovic, P. Ray, W. Kruggel, R. V. Lewis // Biochemical and biophysical research communications. 1984. - V. 118. - N 1. - P.299-303.
284. Miller, L. G. MIF-1 and Tyr-MIF-1 do not alter GABA binding on the GABAA receptor Текст. / L. G. Miller, A. J. Kastin // Brain research bulletmetm. 1990a. - V.25. - N 6. - P.917-918.
285. Miller, L. G. Tyr-MIF-1 augments benzodiazepine receptor binding in vivo Текст. / L. G. Miller, A. J. Kastin, D. J. Greenblatt // Pharmacology, biochemistry, and behavior. 1987. - V.28. -N 4. - P.521-524.
286. Miller, L.G. Current issues in NSAID therapy Текст. / L.G. Miller, J.G. Pnchard // Primary care. 1990b. -V. 17. -N 3. - P. 589-601.
287. Million, M. Oral administration of Tyr-MIF-1 stimulates gastric emptying and gastrointestinal motility in rodents Текст. / M. Million, J. Fioramonti, L. Bueno // Peptides. -1992. V.13. -N 3. -P. 469-474.
288. Minamino, N. A new opioid octapeptide related to dynorphin from porcine hypothalamus Текст. / N. Minamino, K. Kangawa, A. Fukuda, H. Matsuo, M. Iagarashi // Biochemical and biophysical research communications. 1980. -V. 95. -N 4. - P. 1475-1481
289. Minkiewicz, P. BIOPEP database and other programs for processing bioactive peptide sequences Текст. / P. Minkiewicz, J. Dziuba, A. Iwaniak, M. Dziuba, M. Darewicz // Journal of AO AC International. 2008. - V.91. -N 4. - P.965-980.
290. Miranda, H.F. Lack of effect of naltrexone on the spinal synergism between morphine and non steroidal anti-inflammatory drugs Текст. / H.F. Miranda, G. Pinardi // Pharmacological reports : PR. 2009. - V.61. - N 2. - P. 268-274.
291. Misicka, A. Synthesis and biological properties of gamma-glutamyl-dermorphin, a prodrug Текст. / A. Misicka, I. Maszczynska, A. W. Lipkowski, D. Stropova, H. I. Yamamura, V. J. Hruby // Life sciences. 1996. - V.58. -Nil.- P.905-911.
292. Mitsuma, T. beta-Neoendorphin inhibits thyrotrophin secretion in rats Текст. / Т. Mitsuma, Т. Nogimori // Acta endocrmologica. 1983. - V. 104. - N 4. - P. 437-442.
293. Mitsuma, T. Dermorphin inhibits basal and cold induced thyrotropin secretion in rats Текст. / Т. Mitsuma, Т. Nogimori, M. Chaya // Endocrinologia experimentalis. 1985. - V.19. -N 2. - P.83-90.
294. Mizoguchi, H. Differential involvement of mu 1 -opioid receptors in dermorphin tetrapeptide analogues-induced antinociception Текст. / H. Mizoguchi, M. Yuhki, II. Watanabe, T. Hayashi, C.
295. Sakurada, A. Yonezawa, T. Sakurada, S. Sakurada // European journal of pharmacology. 2004. -Y.486. -N 1,-P. 19-24.
296. Moolchan, E.T. Therapeutic drug monitoring in methadone maintenance: Choosing a matrix. Текст. / E.T. Moolchan, A. Umbricht, D. Epstein // Journal of addictive diseases. 2001. - V.20.- P.55-73.
297. Мог, A. Identification of a D-alanine-containing polypeptide precursor for the peptide opioid, dermorphin Текст. / A. Мог, A. Delfour, P. Nicolas // The Journal of biological chemistry.- 1991.-V.266. -N 10. P.6264-6270.
298. Morgan, M.J. Dopamine receptor subtypes and formalin test analgesia Текст. / M.J. Morgan, К. B. Franklin // Pharmacology, biochemistry, and behavior. 1991. - V.40. - N 2. -P.317-322.
299. Morgan, M.M. Morphine antinociceptive potency on chemical, mechanical, and thermal nociceptive tests in the rat Текст. / M.M. Morgan, E.N. Fossum, B.M. Stalding, M.M. King // J. Pain. 2006. - V.7. - N 5. - P. 358-366.
300. Motta, M. Neuroendocrine effects of some amphibian peptides Текст. / M. Motta // Peptides. 1985. - V.6, Suppl 3. - P.131-135.
301. Motta, V. Aversive and antiaversive effects of morphin in the dorsal periaqueductal gray of rats submitted to the elevated plus-maze test Текст. / V. Motta, M. L. Brandao. // Pharmacology, biochemistry, and behavior. 1993. - V.44. - N 1. - P. 119-125.
302. Mustafa, A.K. D-Serine as a putative glial neurotransmitter Текст. / A.K. Mustafa, P.M. Kim, S.FI. Snyder // Neuron glia biology. -2004. V.l. -N 3. -P.275-281.
303. Mycroft, F. J. Pharmacological activities of the MIF-1 analogues Pro-Leu-Gly, Tyr-Pro-Leu-Gly and pareptide Текст. / F. J. Mycroft, H. N. Bhargava, E. T. Wei // Peptides. 1987. - V.8. - N 6.-P. 1051-1055.
304. Nagy, I. Taking the sting out of pain Текст. /1. Nagy, C. Paule, J. White, L. Urban // British journal of pharmacology. 2007. - V.151. - N 6. - P.721-722.
305. Narita, M. Absence of G-protein activation by endomorphin-1 and -2 in the spinal cord of p-opioid receptor knockout mice Текст. / M. Narita, H. Mizoguchi, I. Sora, G. R. Uhl, L. F. Tseng // British journal of pharmacology. 1999. - V.l 26. -P.451-456.
306. Narita, M. Endomorphin-induced motivational effect: differential mechanism of endomorphin-1 and endomorphin-2 Текст. / M. Narita, S. Ozaki, T. Suzuki // Japanese journal of pharmacology. 2002. - V.89. - 224-228.
307. Negri, L. Distribution and metabolism of dermorphin in rats Текст. / L. Negri, G. Improta // Pharmacological research communications. 1984. - V. 16.-N 12.-P. 1183-1191.
308. Negri, L. Pharmacology of amphibian opiate peptides Текст. / L. Negri, P. Melchiorri, R. Lattanzi // Peptides. 2000. - V.21. - N 11. - P. 1639-1647.
309. Negri, L. Respiratory and cardiovascular effects of the mu-opioid receptor agonist Lys7.dermorphin in awake rats [Текст] / L. Negri, R. Lattanzi, F. Tabacco, P. Melchiorri // British journal of pharmacology. 1998. - V.124. - N 2. - P.345-355.
310. Nestler, E. J. From neurobiology to treatment progress against addiction Текст. / E. J. Nestler //Nature Neuroscience suppl. 2002. - V.5. - P. 1076-1079.
311. Nestler, E. J. Molecular neurobiology of addiction Текст. / E. J. Nestler // The American journal on addictions. 2001. - V. 10. -N 3. - P.201-217.
312. Nilius, B. Transient receptor potential (TRP) cation channels: rewarding unique proteins Текст. / В. Nilius // Bulletin et mémoires de l'Académie royale de médecine de Belgique. 2007. - V. 162. - N 3-4. - P. 244-253.
313. Nishimura, К. Isolation and identification of an endogenous inhibitor of enkephalin-degrading enzymes from bovine spinal cord Текст. / К. Nishimura, Т. Hazato // Biochemical and biophysical research communications. 1993. - V.194. - P. 713-719.
314. Nistico, G. Comparative effects of beta-endorphin and dermorphin on behaviour, electrocortical activity and spectrum power in chicks after intraventricular administration Текст. /
315. G. Nistico, G. B. Desarro, D. Rotiroti, P. Melchiorri, V. Erspamer // Research communications in psychology, psychiatry and behavior. 1981. - V.6. - P. 351-363.
316. Nöda, M. Cloning and sequence analysis of cDNA for bovine adrenal preproenkephalin Текст. / M. Nöda, Y. Furutani, H. Takahashi, M. Toyosato, T. Hirose, S. Inayama, S. Nakanishi, S. Numa // Nature. 1982. - V. 295. -N 5846. - P. 202-206.
317. Nöda, Y. Loss of Antinociception Induced by Naloxone Benzoylhydrazone in Nociceptin Receptor-Knockout Mice Текст. / Y. Nöda, Т. Mamiya, Т. Nabeshima, M. Nishi, M. Higashioka,
318. H. Takeshima // The Journal ofbiological chemistry. 1998. - V.273. -N 29. - P. 18047-18051.
319. Nores, W. L. Tyr-W-MIF-1-induced conditioned place preference Текст. / W. L. Nores, R. D. Olson, G. A. Olson, A. L. Vaccarino, R. L. Bell, J. E. Zadina, A. J. Kastin // Peptides. 1999. - V.20. - N 4. - P.479-484.
320. O'Callaghan, J. P. Quantification of the analgesic activity of narcotic antagonists by a modified hot plate procedure Текст. / J. P. O'Callaghan, S. G. Holzman // The Journal of pharmacology and experimental therapeutics. 1975. - V.192. - P.497-505.
321. Oka, T. Evidence that endogenous 6-(ARG or LYS)-opioid peptides can interact with kappa-receptors as agonists Текст. / Т. Oka, К. Negishi // Life sciences. 1982. - V.31. - N 16-17. - P. 1707-1710.
322. Oka, T. The choice of opiate receptor subtype by neo-endorphins Текст. / Т. Oka, К. Negishi, M. Kajiwara, Y. Watanabe, Y. Ishizuka, T. Matsumiya // European journal of pharmacology. 1982. - V. 79. - N 3-4. - P. 301-305.
323. Okuda-Ashitaka, E. Nocistatin: a novel neuropeptide encoded by the gene for the nociceptin/orphanin FQ precursor Текст. / E. Okuda-Ashitaka, S. Ito // Peptides. 2000. - V.21. -N7.-P .1101-1109.
324. Olds, M.E. Self-administration of D-Ala2-Met-enkephalinamide at hypothalamic self-stimulation sites Текст. / M.E. Olds, K.N. Williams // Brain research 1980. - V.194. - N 1. -P.155-170.
325. Paakkari, P. Evidence for differential opioid mu 1- and mu 2-receptor-mediated regulation of heart rate in the conscious rat Текст. / P. Paakkari, I. Paakkari, G. Feuerstein, A. L. Siren // Neuropharmacology. 1992. -V. 31. -N 8. - P. 777-782.
326. Pais, A. B-casomorphin immunoreactivity in brain stem of the human infant Текст. / A. Pais, H. Mahler, N. Lansel, C. Bernasconi, F. S. Messiha // Research communications in chemical pathology and pharmacology. 1993. - V. 80. - N 3. - P.305-322.
327. Pan, W. From MIF-1 to endomorphin: the Tyr-MIF-1 family of peptides Текст. / W. Pan, A.J. Kastin // Peptides. 2007. - V.28. - N 12. - P.2411-2434.
328. Panksepp, J. Casomorphins reduce separation distress in chicks Текст. / J. Panksepp, L. Normansell, S. Siviy, J. Rossi 3rd, A. J. Zolovick // Peptides. 1984. - V.5. - P.829-831.
329. Parfitt, J.R. Pathological effects of drugs on the gastrointestinal tract: a review Текст. / J.R. Parfitt, D.K. Driman // Human pathology. 2007. - Vol. 38. - N 4. - P. 527-536.
330. Parolaro, D. Central and peripheral components of dermorphin's effect on rat intestinal propulsion in comparison to morphine Текст. / D. Parolaro, M. Sala, G. Crema, L. Spazzi, R. Cesana, E. Gon // Peptides. 1983. - V.4. - N 1. - P.55-58.
331. Parolaro, D. Cerebral sites of central action of dermorphin on intestinal motility in the rat Текст. / D. Parolaro, M. Sala, G. Crema, G. Giagnoni, E. Gori // Peptides. 1985. - V.6, Suppl. 3.- P.149-153.
332. Pasero, C. PAIN Control: IV opioid range orders for acute pain management Текст. / С. Pasero, R. C. Manworren, M. McCaffery // The American journal of nursing. 2007. - V. 107. - N 2.-P. 52-59.
333. Passik, S.D. Issues in long-term opioid therapy: unmet needs, risks, and solutions Текст. / S.D. Passik // Mayo Clinic proceedings. Mayo Clinic. 2009. - V.84. - N 7. - P.593-601.
334. Pasternak, G. W. Molecular biology of opioid analgesia Текст. / G. W. Pasternak // Journal of pain and symptom management. 2005. - V.29, Suppl.5. - P.S2-S9.
335. Pasternak, G. W. Pharmacological mechanisms of opioid analgesics Текст. / G. W. Pasternak // Clinical neuropharmacology. 1993. - V.16. - P. 1-18.
336. Pasternak, K. R. Antisense mapping KOR-1: evidence for multiple kappa analgesic mechanisms Текст. / К. R. Pasternak, G. C. Rossi, A. Zuckerman, G. W. Pasternak // Brain research 1999. - V.826. - N 2. - P. 289-292.
337. Paul, D. Naloxone benzoylhydrazone (NalBzoH) analgesia Текст. / D. Paul, J. A. Levison, D. H. Howard, C.G. Pick, E. F. Hahn, G. W. Pasternak // The Journal of pharmacology and experimental therapeutics. 1990. - V.255. - N 2. - P.769-774.
338. Pechnick, R. N. The role of opiate receptors in the potentiation of pentobarbital sleeping time by the acute and chronic administration of opiates Текст. / R. N. Pechnick, G. W. Terman // Neuropharmacology. 1987. - V.26. -N 11. - P. 1589-1593.
339. Pert, C. Opiate receptor demonstration in nervous tissue Текст. / С. Pert, S. Snyder // Science. 1973. - V.179. - P. 1011-1014.
340. Pierce, T. L. Immunoreactivity for endomorphin-2 occurs in primary afferents in rats and monkey Текст. / Т. L. Pierce, M. D. Grahek, M. W. Wessendorf // Neuroreport. 1998. - V.9. - N 3,-P. 385-389.
341. Pini, L.A. Naloxone-reversible antinociception by paracetamol in the rat Текст. / L.A. Pini, G. Vitale, A. Ottani, M. Sandrini // The Journal of pharmacology and experimental therapeutics. -1997. V.280. - N 2. - P.934-940.
342. Porsolt, R.D. Animal model of depression Текст. / R.D. Porsolt // Biomedicine. 1979. -V.30. -N 3. - P.139-140.
343. Prado, W.A. Involvement of calcium in pain and antinociception Текст. / W.A. Prado // Brazilian journal of medical and biological research. 2001. - V.34. - P. 449-456.
344. Prentice, T. W. Impact of shock on pain reactivity: III. The magnitude of hypoalgesia observed depends on test location Текст. / Т. W. Prentice, R. L. Joynes, M. W. Meagher, J. W. Grau // Behavioral neuroscience. 1996. - V.l 10. - P.528-541.
345. Przewlocka, B. Spinal analgesic action of endomorphins in acute, inflammatory and neuropathic pain in rats Текст. / В. Przewlocka, J. Mika, D. Labuz, G. Toth, R. Przewlocki // European journal of pharmacology. 1999. - V.367. -N 2-3. - P.189-196.
346. Przewlocki, R. Opioids in chronic pain Текст. / R. Przewlocki, B. Przewlocka // European journal of pharmacology. -2001. -V.429. -N 1-3. P.79-91.
347. Puglisi-Allegra, S. Behavioural data on dermorphms in mice Текст. / S. Puglisi-Allegra, C. Castellano, U. Filibeck, A. Oliverio, P. Melchiorri // European journal of pharmacology. 1982. - Y.82. - N 3-4. - P.223-227.
348. Puig, S. Formalin-evoked activity in identified primary afferent fibers: systemic lidocaine suppresses phase-2 activity Текст. / S. Puig, L. S. Sorkin // Pain. 1996. - V.64. - P.345-355.
349. Pulvirenti, L. Blockade of brain dopamine receptors antagonizes the anti-immobility effect of MIF-1 and Tyr-MIF-1 in rats Текст. / L. Pulvirenti, A. J. Kastin // European journal of pharmacology. 1988. - V.151. -N 2. - P. 289-292.
350. Quirion, R. Pain, nociception and spinal opioid receptors Текст. / R. Quirion // Progress in neuro-psychopharmacology and biological psychiatry. 1984. - V. 8. - P. 571-579.
351. Quock, R. M. A selective potentiation by naloxone of L-dopa but not atropine suppression of oxotremorine-induced tremor in mice Текст. / R. M. Quock, T. S. Lucas // The Journal of pharmacy and pharmacology. 1985. - V.37. - N 9. - P.673-674.
352. Rapaka, R. S. An update of selected topics in the biology and chemistry of opioid peptides Текст. / R. S. Rapaka, B.N. Dhawan, V. Renugopalakrishnan // NIDA research monograph. -1988. V.87. - P.217-232.
353. Rathbun, R.C. Amitriptyline and nortriptyline as antagonists of central and periferal cholinergic activation Текст. / R.C. Rathbun, J. H. Slater // Psychopharmacology. 1963. -V.Bd40(4).-P.Sl 11-125.
354. Raynor, K. Pharmacological characterization of the cloned kappa-, delta-, and mu-opioid receptors Текст. / К. Raynor, PI. Kong, Y. Chen, K. Yasuda, L. Yu, G. I. Bell, T. Reisine // Molecular pharmacology. 1994. - V.45. - P. 330 - 334.
355. Regnard, C. Severe respiratory depression and sedation with transdermal fentanyl: four case studies Текст. / С. Regnard, A. Pelham //Palliative Medicine. 2003. - V. 17. - P. 714-716.
356. Renugopalakrishnan, V. Conformational studies of dermorphin Текст. / V. Renugopalakrishnan, R. S. Rapaka // NIDA research monograph. 1988. - V.87. - P.74-82.
357. Rialas, С. M. Endomorphin-1 and -2 inhibit human vascular sympathetic norepinephrine release: lack of interaction with mu 3 opiate receptor subtype Текст. / С. M. Rialas, С. Fimiani, Т.
358. V. Bilfmger, M. Salzet, G. В. Stefano // Acta pharmacologica Simca. 1998. - V.19. - N 5. - P. 403-407.
359. Richter, K. D-alanine in the frog skin peptide dermorphin is derived from L-alanine in the precursor Текст. / К. Richter, R. Egger, G. Kreil // Science. 1987. - V. 238. - N 4824. - P. 200202.
360. Rojas-Corrales, M.O. Tramadol induces antidepressant-type effects in mice Текст. / M.O. Rojas-Corrales, J. Gilbert-Rahola, J. A. Mico // Life sciences. 1998. - V.63. - PL175-180.
361. Rosow, C.E. Butorphanol in perspective Текст. / C.E. Rosow //Acute care. 1988. - V. 12. -N l.-P. 2-7.
362. Ruthrich, H. L. Influence of р-casomorphins on apomorphine-induced hyperlocomotion Текст. / H. L. Ruthrich, G. Grecksch, H. Matthies // Pharmacology, biochemistry, and behavior. -1993.- V.44. N 1. - P.227-231.
363. Sakaguchi, M. Effects of beta-casomorphin-5 on passive avoidance response in mice Текст. / M. Sakaguchi, M. Koseki, M. Wakamatsu, E. Matsumura // Bioscience, biotechnology, and biochemistry. 2003. - V.67. -N 11. - P. 2501-2504.
364. Sakurada, S. Possible involvement of dynorphin A release via mul-opioid receptor on supraspinal antinociception of endomorphin-2 Текст. / S. Sakurada, T. Sawai, H. Mizoguchi,
365. H. Watanabe, С. Watanabe, A. Yonezawa, M. Morimoto, T. Sato, T. Komatsu, T. Sakurada // Peptides. 2008. - V.29. - N 9. - P. 1554-1560.
366. Salbert, G. One of the two trout proopiomelanocortin messenger RNAs potentially encodes new peptides Текст. / G. Salbert, I. Chauveau, G. Bonnec, Y. Valotaire, P. Jego // Molecular endocrinology (Baltimore, Md.). 1992. - V. 6.-N 10.-P. 1605-1613.
367. Salvadori, S. Opioid peptides. Synthesis and binding assays of desamino-Tyrl dermorphin analogues. XII Текст. / S. Salvadori, M. Marastoni, G. Balboni, R. Tomatis, P. A. Borea // Farmaco [Sci], 1987. - V.42.- N 12. - P.931-940.
368. Salvadori, S. Synthesis and opioid activity of Sar4.dermorphin-tetrapeptide analogues [Текст] / S. Salvadori, G. Balboni, M. Marastoni, G. Sarto, R. Tomatis // Hoppe-Seyler's Zeitschrift far physiologische Chemie. 1984. - V.365. -N 10. - P.l 199-1206.
369. Sander, G. E. Enkephalin analogs and dermorphin in the conscious dog: structure-activity relationships Текст. / G. E. Sander, T. D. Giles // Peptides. 1982. - V. 3. -N 6. - P. 1017-1021.
370. Sanderson, К. Modulation of peripheral inflammation by locally administered hemorphin-7 Текст. / К. Sanderson, F. Nyberg, Z. Khalil // Inflammation research : official journal of the European Histamine Research Society. 1998. - V.47. - N 2. - P.49-55.
371. Sandrini, G. Dermorphin inhibits spinal nociceptive flexion reflex in humans Текст. / G. Sandrini, E.C. Degli Uberti, S. Salvadori, A. Margutti, G. Trasforini, R. Tomatis, G. Nappi, R. Pansmi // Brain research 1986. - V. 23. - N 371 (2). - P. 364-367.
372. Sansone, R.A. Pain, pain, go away: antidepressants and pain management Текст. / R.A. Sansone, L.A. Sansone // Psychiatry (Edgmont). 2008. - V.5. -N 12. - P.16-19.
373. Sansone, R.A. Tramadol: seizures, serotonin syndrome, and coadministered antidepressants Текст. / R.A. Sansone, L.A. Sansone // Psychiatry (Edgmont). 2009. - V.6. - N 4. - P.17-21.
374. Sarto, G. Structure-activity relationships for dermorphin-related tetrapeptides Текст. / G. Sarto, P. A. Borea, S. Salvadori, R. Tomatis // Pharmacology. 1984. - V. 29. - N 1. - P.56-60.
375. Sato, T. A comparison of the antinociceptive and behavioral effects of D-Arg substituted dipeptides and tetrapeptides in mice Текст. / Т. Sato, S. Sakurada, Т. Sakurada, К. Kisara, Y. Sasaki, К. Suzuki // Peptides. 1985. - V.6. - N 1. - P.35-40.
376. Sato, T. Comparison of opioid properties between D-Arg-containing dipeptides and tetrapeptides Текст. / Т. Sato, S. Sakurada, Т. Sakurada, К. Kisara, К. Suzuki // Biochemical pharmacology. 1992. - V.43. -N 4. - P.717-723.
377. Savoia, G. Sufentanil: an overview of its use for acute pain management Текст. / G. Savoia, M. Loreto, E. Gravino // Minerva anestesiología. 2001. - V. 67. -N 9. - P. 206-216.
378. Sawynok, J. Peripheral antinociceptive action of amitriptyline in the rat formalin test: involvement of adenosine Текст. / J. Sawynok, A. R. Reid, M. J. Esser // Pain. 1999. - V.80. -P.45-55.
379. Sawynok, J. Topical and peripherally acting analgesics Текст. / J. Sawynok // Pharmacological reviews. 2003. - V.55. - N 1. - P. 1-20.
380. Scalia, S. Reversed-phase HPLC study on the in vitro enzymic degradation of dermorphin Текст. / S. Scalia, S. Salvadon, M. Marastoni, F. ortolotti, R. Tomatis // Peptides. 1986. -V.l.-N 2. - P. 247-251.
381. Scherrer, G. Dissociation of the opioid receptor mechanisms that control mechanical and heat pain Текст. / G. Scherrer, N. Imamachi, Y.Q. Cao, C. Contet, F. Mennicken, D. O'Donnell,
382. B.L. Kieffer, A.I. Basbaum // Cell. 2009. - V.137. -N 6. - P. 1148-1159.
383. Schlosser, B. Delta, mu and kappa opioid receptor agonists inhibit dopamine overflow in rat neostriatal slices Текст. / В. Schlosser, M. B. Kudernatsch, B. Sutor, G. ten Bruggencate // Neuroscience letters. 1995. - V.l91. -N 1-2. - P.l26-130.
384. Schmidt, R. F. The articular polymodal nociceptor in health and disease Текст. / R. F. Schmidt // Progress in brain research. — 1996. V.l 13. - P.53-81.
385. Schouenborg, J. Functional organization of the nociceptive withdrawal reflexes. I. Activation of hindlimb muscles in the rat Текст. / J. Schouenborg, J. Kalliomaki // Experimental brain research. 1990. - V.83. - N 1. - P.67-78.
386. Schreiber, S. The antinociceptive effect of mirtazapine in mice is mediated through serotonergic, noradrenergic and opioid mechanisms Текст. / S. Schreiber, T. Rigai, Y. Katz,
387. C.G. Pick // Brain research bulletin. 2002. - V.58. - N 6. - P.601-605.
388. Schusdziarra, V. Effect of beta-casomorphines and analogs on insulin release in dogs Текст. / V. Schusdziarra, A. Schick, A. de la Fuente, J. Specht, M. Klier, V. Brantl, E. F. Pfeiffer // Endocrinology. 1983. - V. 112. -N 3. - P.885-889.
389. Shacoori, V. Effect of naloxone and (3-casomorphine on the hypothalamic-pituitaryluteinizing hormone axis in vitro Текст. / V. Shacoori, J. Guerin, A. Girre, B. Saiag, B. Rault // Life sciences. 1992. - V.51. - N 12. - P. 899-907.
390. Shane, R. Modulation of endomorphin-2-induced analgesia by dipeptidyl peptidase IV Текст. / R. Shane, S. Wilk, R. J. Bodnar // Brain research 1999. - V.815. -N 2. - P.278-286.
391. Sharifi, N. Isolation and characterization of the mouse homolog of the preprodynorphin (Pdyn) gene Текст. / N. Sharifi, M. Ament, M. B. Brennan, U. Hochgeschwender // Neuropeptides. 1999. - V. 33. - N 3. - P. 236-238.
392. Simon, E. Stereospecific binding of the potent narcotic analgesic 3H-etorphine to rat brain homogenate Текст. / E. Simon, J. Hiller, I. Edelman // Proceedings of the National Academy of Sciences of the USA. 1973. - V.70. - P.1947-1951.
393. Sinclair, J. G. Spinal vs supraspinal actions of morphine on the rat tail-flick reflex Текст. / J. G. Sinclair, C. D. Mam, G. F. Lo // Pain. 1988. - V.33. - P.357-362.
394. Sindrup, S. H. Antidepressants in the treatment of neuropathic pain Текст. / S. H. Sindrup, M. Otto, N. B. Finnerup, T. S. Jensen // Basic and clinical pharmacology and toxicology. 2005. -V.96. - N 6. - P.399-409.
395. Sluka, K.A. Acid-sensing ion channels: A new target for pain and CNS diseases Текст. / K.A. Sluka, O.C. Winter, J.A. Wemmie // Current opinion in drug discovery and development. -2009. V.12. -N 5. - P.693-704.
396. Soignier, R.D. Analgesic tolerance and cross-tolerance to i.c.v. endomorphin-1, endomorphin-2, and morphine in mice Текст. / R.D. Soignier, Vaccarino AL, Fanti KA, Wilson AM, Zadina JE. // Neuroscience letters. 2004. - V.366. - N 2. - P.211-214.
397. Sora, I. p Opiate Receptor Gene Dose Effects on Different Morphine Actions: Evidence for Differential in vivo p Receptor Reserve Текст. / I. Sora, G. Elmer, M. Funada, J. Pieper, X.F. Li,
398. F.S. Hall, G.R. Uhl // Neuropsychopharmacology 2001. - V.25. - P.41-54.
399. Spiegel, K. Analgesic activity of tricyclic antidepressants Текст. / К. Spiegel, R. Kalb,
400. G.W. Pasternak // Annals of neurology. 1983. - V.13. - N 4. - P. 462-465.
401. Stevens, C. W. Spinal action of dermorphin, an extremely potent opioid peptide from frog skin Текст. / С. W. Stevens, T. L. Yaksh// Brain research 1986. - V.385. -N 2. -P.300-304.
402. Stewart, A.F. Nucleotide sequences of bovine alpha SI- and kappa-casein cDNAs Текст. / A.F. Stewart, I.M. Willis, A.G. Mackinlay // Nucleic acids research. 1984. - V.12. - P. 38953907.
403. Stillman, M. J. Appropriate use of NSAIDs: considering cardiovascular risk in the elderly Текст. / M. J. Stillman, M. T. Stillman // Geriatrics. 2007. - V. 62. - N 3. - P. 16-21.
404. Stoll, A.L. Treatment augmentation with opiates in severe and refractory major depression Текст. / A.L. Stoll, S. Rueter // The American journal of psychiatry. 1999. - V.156. - P. 2017.
405. Stucky, C.L. Roles of transient receptor potential channels in pain Текст. / C.L. Stucky, A.E. Dubin, N.A. Jeske, S.A. Malm, D.D. McKemy, G.M. Story // Brain research reviews. 2009. -V.60.-N 1. - P.2-23.
406. Sullivan, A. F. Electrophysiological studies on the spinal effects of dermorphin, an endogenous mu-opioid agonist Текст. / A. F. Sullivan, A. H. Dickenson // Brain research 1988. -V.461.-N 1. - P.182-185.
407. Sun, H. L. Tramadol reduces the 5-HTP-induced head-twitch response in mice via the activation of mu and kappa opioid receptors Текст. / H. L. Sun, J. W. Zheng, K. Wang, R. K. Liu, J. H. Liang // Life sciences. 2003. - V.72. -Nil.- P.1221-1230.
408. Sun, Z. Findings in normal rats following administration of gliadorphin-7 (GD-7) Текст. / Z. Sun, R. Cade // Peptides. 2003. - V.24. -N 2. - P.321-323.
409. Swierkosz, T.A. Actions of paracetamol on cyclooxygenases in tissue and cell homogenates of mouse and rabbit Текст. / T.A. Swierkosz, L. Jordan, M. McBride, K. McGough, J. Devlin, R.
410. M. Botting // Medical science monitor : international medical journal of experimental and clinical research. 2002. - V. 8. -N 12. - P. 496-503.
411. Szallasi, A. Vanilloid (Capsaicin) receptors and mechanisms Текст. / A. Szallasi, P.M. Blumberg // Pharmacological reviews. 1999. - V.51. -N 2. - P. 159-212.
412. Takagi, H. Isolation of a novel analgesic pentapeptide, neo-kyotorphin, from bovine brain Текст. / H. Takagi, H. Shiomi, K. Fukui, K. Hayashi, Y. Kiso, K. Kitagawa // Life sciences. -1982.-V. 31.-N 16-17.-P. 1733-1736.
413. Takahashi, H. Isolation and structural organization of the human corticotropin—beta-lipotropin precursor gene Текст. / H. Takahashi, Y. Teranishi, S. Nakanishi, S. Numa // FEBS letters.-1981.-V. 135.-N l.-P. 97-102.
414. Talaie, H. Dose-independent occurrence of seizure with tramadol Текст. / H. Talaie, R. Panahandeh, M. Fayaznouri, Z. Asadi, M. Abdollahi // Journal of occupational medicine and toxicology (London, England). 2009. - V.5. -N 2. - P.63-67.
415. Tenenbein, M. Acetaminophen: the 150 mg/kg myth Текст. / M. Tenenbein // Journal of toxicology. Clinical toxicology. 2004. - V. 42. - N 2. - P. 145-148.
416. Teschemacher H. // Atypical opioid peptides. Handbook of Exp. Pharmacol / H. Teschemacher: Ed. Herz A. Berlin: Springer-Verlag, 1993. P. 499-528.
417. Teschemacher, H. Milk protein-derived opioid receptor ligands Текст. / H. Teschemacher,
418. G. Koch, V. Brantl // Biopolymers. 1997. - V.43. -N 2. - P.99-117.
419. Teschemacher, H. Opioid receptor ligands derived from food proteins Текст. /
420. H. Teschemacher // Current pharmaceutical design. 2003. - V.9. -N 16. - P.1331-1344.
421. Tomboly, C. In vitro quantitative study of the degradation of endomorphins Текст. / С. Tomboly, A. Peter, G. Topth // Peptides. 2002. - V. 23. - P. 1573-1580.
422. Treede, R. D. Evidence for two different heat transduction mechanisms in nociceptive primary afferents innervating monkey skin Текст. / R. D. Treede, R. A. Meyer, S. N. Raja, J. N. Campbell // The Journal of physiology. 1995. - V.483. - P.747-758.
423. Trescot, A. M. Opioid pharmacology Текст. / A. M. Trescot, S. Datta, M. Lee, H. Hansen // Pain Physician. -2008. V.ll, Suppl. 2. - P.S133-S153.
424. Trevino, S.R. Increasing protein conformational stability by optimizing beta-turn sequence Текст. / S.R, Trevino, S. Schaefer, J.M. Scholtz, C.N. Pace // Journal of molecular biology. -2007.-V. 373,-N 1. P.211-218.
425. Ukai, M. Dynorphin A(l-13) modulates apomorphine-induced behaviors using multidimensional behavioral analyses in the mouse Текст. / M. Ukai, T. Toyoshi, T. Kameyama // Brain research 1989. - V.499. - N 2. - P.299-304.
426. Ukai, M. Effects of beta-neo-endorphin on behaviors in mice using multi-dimensional behavioral analyses Текст. / M. Ukai, T. Kameyama // Peptides. 1984. - V.5. - N 5. - P. 10111014.
427. Ukai, M. Nonopiate effects of alpha-neo-endorphin on mouse behavior using multidimensional behavioral analyses Текст. / M. Ukai, T. Kameyama // Peptides. 1984. - V.5. - N 1. -P. 129-131.
428. Ukai, M. Tyr-D-Arg-Phe-beta-Ala-NH2, a novel dermorphin analog, impairs memory consolidation in mice Текст. / M. Ukai, K. Mori, S. Hashimoto, T. Kobayashi, Y. Sasaki, T. Kameyama // European journal of pharmacology. 1993. - V.239. -N 1-3. - P.237-240.
429. Urban, B.W. Mechanisms of action of narcotics on various levels of the central nervous system Текст. / B.W. Urban // Klinische Anasthesiologie und Intensivtherapie. 1994. - V.46. -P.277-292.
430. Vadivelu, N. Buprenorphine: a unique opioid with broad clinical applications Текст. / N. Vadivelu, R.L. Hines // Journal of opioid management. 2007. - V.3. - N 1. - P.49-58.
431. Van Dorp, E. Naloxone reversal of buprenorphine- induced respiratory depression Текст. / E. Van Dorp, A. Yassen, E. Sarton, R. Romberg, E. Olofsen, L. Teppema, M. Danhof, A. Dahan // Anesthesiology. 2006. - V. 105.-N l.-P. 51-57.
432. Vane, J.R. The mechanism of action of aspirin Текст. / J.R. Vane, R. M. Botting // Thrombosis research. 2003. - V. 110. - N 5-6. - P. 255-258.
433. Vonhof, S. Characterization of binding kinetics of 3H.Tyr-D-Arg2-Phe-Sar4 at opioid receptors [Текст] / S. Vonhof, G. Feuerstein, A. L. Siren // European journal of pharmacology. -2003. V.473. -N 2-3. - P.127-134.
434. Vonhof, S. Reversal of mu-opioid-mediated respiratory depression by alpha 2-adrenoceptor antagonism Текст. / S. Vonhof, A. L. Siren // Life sciences. 1991. - V.49. - N 2. - P. 111-119.
435. Vonhof, S. Tolerance and dependence following chronic intracerebroventricular infusions of Tyr-D-Arg2-Phe-Sar4 (TAPS) Текст. / S. Vonhof, B. D. Gudka, A. L. Siren // European journal of pharmacology. 2003b. - V.459. - N 1. - P.41-48.
436. Walker, J. M. Cannabinoid mechanisms of pain suppression Текст. / J. M. Walker, A. G. Hohmann // Handbook of experimental pharmacology. 2005. - V.168. - P.509-554.
437. Wang, T. Adverse effects of medical cannabinoids: a systematic review Текст. / Т. Wang, J. P. Collet, S. Shapiro, M. A. Ware // CMAJ : Canadian Medical Association journal. 2008. -V.178.-N 13. - P.1669-1678.
438. Watanabe, H. A Tyr-W-MIF-1 analog containing D-Pro2 acts as a selective mu2-opioid receptor antagonist in the mouse Текст. / H. Watanabe, D. Nakayama, K. Ito, C. Watanabe,
439. H. Mizoguchi, Т. Fujimura, К. Murayama, S. Kawamura, Т. Sato, С. Sakurada, Т. Sakurada, S. Sakurada // The Journal of pharmacology and experimental therapeutics. 2005. - V. 312. - N 3. - P.l075-1081.
440. Wegener, K. Sympathetic noradrenergic fibers as the source of immunoreactive alpha-neoendorphin and dynorphin in the guinea pig heart Текст. / К. Wegener, W. Kummer // Acta anatómica.- 1994,-V. 151.-N2.-P. 112-119.
441. Widdowson, P.S. Ethanol-induccd increase in endogenous dopamine release may involve endogenous opiates Текст. /P.S. Widdowson, R. B. Holman // Journal of neurochemistry. 1992. -V.59.-P. 157-163.
442. Winter C.A. The potentiating effect of antihistaminic drugs upon the sedative action of barbiturates Текст. / C.A. Winter // The Journal of pharmacology and experimental therapeutics. -1948.-V.94.-P.7-11.
443. Wintle, D. Pain management for the opioid-dependent patient Текст. / D. Wintle // The British journal of nursing. -2008. V. 17. -N 1. - P.47-51.
444. Wirkner, К. P2X3 receptor involvement in pain states Текст. / К. Wirkner, В. Sperlagh, P. Illes // Molecular neurobiology. 2007. - V.36. - N 2. - P.165-183.
445. Woolf, C.J. Generation of acute pain: central mechanisms Текст. / C.J. Woolf // British medical bulletin. 1991. - V.47. -N 3. - P.523-533.
446. Woolf, C.J. Neuronal plasticity: increasing the gain in pain Текст. / C.J. Woolf, M.W. Salter // Science. 2000. - V.288. - N 5472. - P.1765-1769.
447. Woolfe, G. The evaluation of the analgesic action of pethidine hydrochloride (Demerol) Текст. / G. Woolfe, A. D. Macdonald // The Journal of pharmacology and experimental therapeutics. 1944. - V.80. - P.300-307.
448. Wu, К. K. Control of COX-2 and iNOS gene expressions by aspirin and salicylate Текст. / K.K. Wu // Thrombosis research. 2003. - V. 110. - N 5-6. - P. 273-276.
449. Yajiri, Y. Actions of endomorphins on synaptic transmission of Adelta-fibers in spinal cord dorsal horn neurons Текст. / Y. Yajiri, L. Y. Huang // Journal of biomedical science. 2000. -V.7.-N3.-P. 226-231.
450. Yamamoto, N. Antihypertensive effect of the peptides derived from casein by an extracellular proteinase from Lactobacillus helveticus CP790 Текст. / N. Yamamoto, A. Akino, T. Takano // Journal of dairy science. 1994. - V. 77. - P.917-922.
451. Yamamoto, Y. Characterization of tynorphin, a potent endogenous inhibitor of dipeptidyl peptidaselll Текст. / Y. Yamamoto, J. Hashimoto, M. Shimamura, T. Yamaguchi, T. Hazato // Peptides. 2000. - V.21. - P. 503-508.
452. Yang, S. Effect of rubiscolin, a delta opioid peptide derived from Rubisco, on memory consolidation Текст. / S. Yang, Y. Kawamura, M. Yoshikawa // Peptides. 2003. - Y.24. - N 2. -P.325-328.
453. Yang, S. Rubiscolin, a delta selective opioid peptide derived from plant Rubisco Текст. / S. Yang, J. Yunden, S. Sonoda, N. Doyama, A. W. Lipkowski, Y. Kawamura, M. Yoshikawa // FEBS letters. 2001. - V.509. - N 2. - P.213-217.
454. Yang, Y. R. Electrophysiological and behavioral effects of Tyr-D-Arg-Phe-Sar on locus coeruleus neurons of the rat Текст. / Y. R. Yang, E. H. Lee, Т. H. Chiu // European journal of pharmacology. 1998. - V.351. -N 1. - P.23-30.
455. Yang, Y. R. Structure-activity relationships of naturally occurring and synthetic opioid tetrapeptides acting on locus coeruleus neurons Текст. / Y. R. Yang, Т. H. Chiu, C. L. Chen // European journal of pharmacology. 1999. - V.372. -N 3. -P.229-236.
456. Yeh, S. Y. Urinary excretion of meperidine and its metabolites Текст. / S.Y. Yeh, H.A. Krebs, A. Changcht // Journal of pharmaceutical sciences. 2006. - V.70. - P.867-870.
457. Yeomans, D. C. Nociceptive responses to high and low rates of noxious cutaneous heating are mediated by different nociceptors in the rat: electrophysiological evidence Текст. / D. C. Yeomans, H. K. Proudfit// Pain. 1996. - V.68. -P.141-150.
458. Yoshikawa, M. Delta opioid peptides derived from plant proteins Текст. / M. Yoshikawa, M. Takahashi, S. Yang // Current pharmaceutical design. 2003. - V.9. -N 16. - P.1325-1330.
459. Zadina, J. E. A potent and selective endogenous agonist for the mu-opiate receptor Текст. / J. E. Zadina, L. Hackler, L. J. Ge, A. J. Kastin // Nature. 1997. - V. 386. - N 6624. - P. 499-502.
460. Zadina, J. E. Binding of Tyr-W-MIF-1 (Tyr-Pro-Trp-Gly-NH2) and related peptides to mu 1 and mu 2 opiate receptors Текст. / J. E. Zadina, D. Paul, K. A. Gergen, L. J. Ge, L. Hackler, A. J. Kastin//Neuroscience letters. 1996. - V.215. - N 1. -P.65-69.
461. Zadina, J. E. Characterization of binding sites for N-Tyr-MIF-1 (Tyr-Pro-Leu-Gly-NPI2) in rat brain Текст. / J. E. Zadina, A. J. Kastin, E. F. Jr. Krieg, D. H.Coy // Pharmacology, biochemistry, and behavior. 1982. - V.l7. - N 6. - P. 1193-1198.
462. Zadina, J. E. Interactions between the antiopiate Tyr-MIF-1 and the mu opiate morphiceptm at their respective binding sites in brain Текст. / J. E. Zadina, A. J. Kastin // Peptides. 1985. -V.6. -N 5. - P.965-970.
463. Zadina, J. E. Interactions of Tyr-MIF-1 at opiate receptor sites Текст. / J. E. Zadina, A. J. Kastin // Pharmacology, biochemistry, and behavior. 1986. - V.25. - N 6. - P.1303-1305.
464. Zadina, J. E. Mu, delta, and kappa opiate receptor binding of Tyr-MIF-1 and of Tyr-W-MIF-1, its active fragments, and two potent analogs Текст. / J. E. Zadina, A. J. Kastin, L. J. Ge, L. Hackler // Life sciences. 1994. - V.55. - N 24. - P.PL461-466.
465. Zadina, J. E. Prolonged analgesia after intracerebroventricular Tyr-W-MIF-1 (Tyr-Pro-Trp-Gly-NH2) Текст. / J. E. Zadina, A. J. Kastin, V. Kenigs, C. Bruno, L. Hackler // Neuroscience letters. 1993. - V. 155. - N 2. - P.220-222.
466. Zadina, J. E. Tyr-MIF-1 binding in brain is not altered by ligands selective for the GABAA/benzodiazepine receptor Текст. / J. E. Zadina, A. J. Kastin, L. J. Ge // Neuroscience letters. 1990. - V.110. -N 1-2. - P.143-147.
467. Zadina, J. Tyr-MIF-1 and hemorphin can act as opiate agonists as well as antagonists in the guinea pig ileum Текст. / J. E. Zadina, A. Kastin, D. Kersh, A. Wyatt // Life sciences. 1992. -V.51. - P.869-885.
468. Zagon, I. S. Zeta (zeta), a growth-related opioid receptor in developing rat cerebellum: identification and characterization Текст. / I. S. Zagon, D. M. Gibo, P. J. McLaughlin // Brain research. 1991. - V.551. - N 1-2. - P.28-35
469. Zahn, P. K. Effect of systemic and intrathecal morphine in a rat model of postoperative pain Текст. / P. K. Zahn, D. Gysbers, T. J. Brennan // Anesthesiology. 1997. - V.86. - P.1066-1077.
470. Zakarian, S. beta-Endorphin is processed differently in specific regions of rat pituitary and brain Текст. / S. Zakarian, D.G. Smyth // Nature. 1982. - V. 296. - N 5854. - P. 250-252.
471. Zamfirova, R. Involvement of H2-receptors in the mechanism of analgesic action of Tyr-MIF-1 Текст. / R. Zamfirova, A. Bocheva, S. Todorov // Archives of physiology and biochemistry. 2003. - V. 111. - N 5. - P.443-447.
472. Zamyatnin, A. A. EROP-Moscow: Specialized data bank for endogenous regulatory oligopeptides Текст. / A. A. Zamyatnin // Protein Sequence and Data Analysis. 1991. - V.4. - N 1. - P.49-52.
473. Zioudrou, C. Opioid peptides derived from food proteins. The exorphins Текст. / С. Zioudrou, R. A. Streaty, W. A. Klee // The Journal of biological chemistry. 1979. - V. 254. -N 7. - P. 2446-2449.