Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Первая отечественная кандидатная анти- ВИЧ/СПИД- вакцина: иммунологический мониторинг и испытания

На правах рукописи

Гудима Георгий Олегович

2 О АВГ 2009

Первая отечественная кандидатная анти-ВИЧУСПИД-вакцина: иммунологический мониторинг и испытания

«14.00.36 - аллергология и иммунология»

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Москва, 2009 г.

003475361

Диссертация выполнена в ФГБУ «ГНЦ Институт иммунологии» ФМБА России Научные консультанты:

академик РАН и РАМН, доктор медицинских наук, профессор Р.М.Хаитов;

доктор биологических наук, профессор Э.В.Карамов

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор А.А.Ярилин; доктор медицинских наук, профессор З.Г.Кадагидзе; доктор медицинских наук, профессор Л.П.Сизякина.

Ведущая организация:

Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И.Мечникова РАМН.

Защита диссертации состоится « 23 » сентября 2009 г. в 14 часов на заседани Совета по защите докторских и кандидатских диссертаций Д 208.017.01 в ФГБ «ГНЦ Институт иммунологии» ФМБА России по адресу: 115478, Москва, Каширское шоссе, 24, корп.2.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБУ «ГНЦ Институ иммунологии» ФМБА России.

Автореферат разослан «¿Я^¥ » 2009 года

Ученый секретарь совета по защите докторских и кандидатских диссертаций доктор медицинских наук

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования

Пандемия ВИЧ-инфекции/СПИДа представляет собой один из величайших глобальных кризисов нашего времени и важнейшей проблемой мирового здравоохранения. Со времени выделения СПИД как самостоятельного заболевания (1981 г.) [Gottlieb, et al., 1981; Mazur et al., 1981] в мире, по оценкам ВОЗ, официально зарегистрировано около 60 миллионов ВИЧ-инфицированных человек, из них около 30 миллионов умерло от СПИДа. Ежегодно около 2,7 миллиона человек становятся инфицированными и около 2,5 миллионов умирают от этого заболевания [WHO/UNAIDS Report on the global AIDS epidemic, 2008]. По скорости прироста новых случаев ВИЧ-инфекции Россия входит в тройку лидеров (вместе со странами Юго-Восточной Азии и Африки). В 2008 году число зарегистрированных ВИЧ-инфицированных лиц в нашей стране превысило 490 тысяч человек [Информационный бюллетень Федерального центра СПИД, 2008 г.]. По оценкам экспертов ВОЗ/UNAIDS, в России общее число людей, инфицированных ВИЧ, может составлять около 930 тысяч человек [WHO/UNAIDS Report on the global AIDS epidemic, 2008].

Несмотря на огромные усилия мирового сообщества, пандемию ВИЧ-инфекции остановить не удается. ВИЧ-инфицированным требуется антиретровирусная терапия (APT) в течение всей жизни пациента. Однако APT не является средством предупреждения ВИЧ-инфекции (но препятствует передаче ВИЧ от матери к плоду) и не блокирует распространение вируса в организме человека даже в случае начала APT на ранних этапах инфекции [Fauci et al., 1998]. При этом раннее начало APT не предотвращает формирование латентного резервуара ВИЧ-инфекции. Кроме того APT, помимо тяжелых побочных эффектов препаратов, сопровождается образованием устойчивых форм вируса.

Наиболее преспективной стратегией контроля пандемии ВИЧ-инфекции/СПИДа признается создание эффективной вакцины [Хаитов P.M., 1992; Esparza J, Osmanov S., 2003; Карамов Э.В., Сидорович И.Г., Хаитов P.M., 2008]. Вакцинация является наиболее эффективной технологией здравоохранения, которая существует для контроля эпидемических инфекционных заболеваний. Применение вакцин привело к уничтожению оспы и позволило значительно приблизиться к уничтожению полиомиелита и кори. Миллионы жизней были спасены благодаря вакцинации. В этой связи для мирового сообщества в целом и для российских ученых в частности очевидна актуальность скорейшей разработки безопасной, эффективной и доступной

анти-ВИЧ/СПИД-вакцины. По оценкам экспертов International AIDS Vaccine Initiative (IAVI), создание вакцины, применение которой снизило бы число новых случаев инфицирования на 20-80%, позволило бы предотвратить около 30-70 миллионов случаев инфицирования в течение 15 лет [IAVI Policy Brief, IAVI, 2006].

Эта задача тем более важна, что достоверно не выявлено случаев выздоровления при ВИЧ-инфекции (как самопроизвольного выздоровления, так и выздоровления в результате применения APT). В случае ВИЧ-инфекции/СПИДа традиционные методы получения вакцин оказались неприменимы! Фактически создание эффективной анти-ВИЧ/СПИД-вакцины представляет собой комплексную научную проблему, неотделимыми составляющими которой являются фундаментальные исследования, биотехнологические разработки, лабораторные исследования и клинические испытания. Понимание механизмов защитного ВИЧ-специфического иммунного ответа в сочетании с возможностью быстро, стандартизованно и точно тестировать кандидатные вакцины в клинических испытаниях с участием добровольцев позволит разработать рациональный и успешный подход к созданию профилактических и лечебных анти-ВИЧ/СПИД-вакцин [Карамов Э.В., Сидорович И.Г., Хаитов P.M., 2008; AIDS Vaccine Blueprint, 2008].

Клинические испытания анти-ВИЧ/СПИД-вакцин имеют двойственный характер: с одной стороны, это регламентированное испытание вакцинных препаратов с участием добровольцев, а с другой - научное исследование, которое позволяет получить информацию, необходимую для понимания механизмов протективного иммунного ответа против ВИЧ и выявления коррелятов иммунной защиты, а также дает возможность отработать схемы иммунизации и провести необходимую доработку препарата. При этом организация клинических испытаний анти-ВИЧ/СПИД-вакцин, в частности, формирование когорт добровольцев, имеет дополнительные особенности и трудности по сравнению с испытаниями других вакцин [Jefferys, Harrington, 2004; Newman et al., 2004].

Важность клинических исследований как неотъемлемого компонента работ по созданию вакцин была в очередной раз подтверждена на международной конференции «AIDS Vaccine 2008» [AIDS Vaccine Blueprint 2008. Global HIV Vaccine Enterprise - IAVI, 2008]. В итоговых документах конференции подчеркивалось, что проведение клинических исследований в различных эпидемиологических условиях, в различных популяциях и и регионах, в которых циркулирует широкий спектр изолятов ВИЧ, является жизненно необходимым. Также важно поддерживать и развивать

инфраструктуру клинических испытаний, что обеспечило бы надлежащее проведение клинических исследований.

Необходимость создания вакцины против ВИЧ/СПИДа ставит перед исследователями беспрецедентно сложную задачу - получить протективный иммунный ответ на высоковариабельный патоген с помощью вакцинации при заболевании, когда не обнаружен естественный механизм выздоровления за счет потенциала собственной иммунной системы, а клетки самой иммунной системы являются мишенью инфекционного агента. Иначе говоря, требуются принципиально новые подходы к созданию вакцин. Это не только обусловливает особые сложности на этапе синтеза кандидатных препаратов, проверки их иммуногенности, но и создает большие проблемы при испытаниях таких вакцин. Известно, что весьма авторитетные международные научные коллективы потерпели неудачу именно на этапе клинических испытаний.

Таким образом, для противодействия ВИЧ-инфекции должна быть создана принципиально новая вакцина. Научные усилия и материальные ресурсы, направленные на создание вакцин против ВИЧ-инфекции/СПИДа, можно без преувеличения назвать чрезвычайными. В настоящее время около 30 кандидатных вакцинных препаратов включены в клинические испытания, проходящие в различных странах мира. К их числу относится и конъюгированная полимер-белковая рекомбинантная вакцина ВИЧРЕПОЛ -единственная на настоящий момент российская кандидатная анти-ВИЧ/СПИД-вакцина, которая успешно прошла доклинические исследования и была включена в клинические испытания I фазы, которые и стали предметом настоящего исследования.

«ВИЧРЕПОЛ» представляет собой оригинальный вакцинный препарат нового поколения. Он испытан в лабораторных исследованиях на животных, но его действие у человека не изучено. Клинические испытания вакцины «ВИЧРЕПОЛ» имеют важное значение для формирования методической базы клинических испытаний анти-ВИЧ/СПИД-вакцин в России, так как ранее в нашей стране испытаний вакцин этой группы не проводилось. Зарубежный опыт испытаний кандидатных анти-ВИЧ/СПИД-вакцин может быть использован лишь частично, так как вакцина «ВИЧРЕПОЛ» и принцип ее конструирования не имеют аналогов в мире. Учитывая, что в России вслед за кандидатной вакциной «ВИЧРЕПОЛ» готовятся к включению в клинические испытания и другие кандидатные вакцины, необходимость формирования комплекса приемов и методов («инфраструктуры») для оценки анти-ВИЧ/СПИД-вакцин приобретает особую актуальность и важность.

Настоящая работа посвящена важнейшей части исследований по созданию анти-ВИЧ/СПИД-вакцин - клиническим испытаниям.

Таким образом, актуальность настоящей работы определяется важностью разработки отечественной анти-ВИЧ/СПИД-вакцины, необходимостью исследования безопасности и иммуногенности оригинальной отечественной конъюгированной анти-ВИЧ/СПИД-вакцины «ВИЧРЕПОЛ» в клинических испытаниях, необходимостью формирования в России системы испытаний анти-ВИЧ/СПИД-вакцин.

ЦЕЛИ И ЗАДАЧИ РАБОТЫ

Цели работы:

1. Обобщение и анализ международного опыта проведения клинических испытаний кандидатных анти-ВИЧ/СПИД-вакцин и с учетом его - разработка рекомендаций по проведению клинических испытаний кандидатной анти-ВИЧ/СПИД-вакцины «ВИЧРЕПОЛ», в том числе подготовка пакета нормативной документации для проведения I фазы клинических испытаний.

2. Организация и проведение I фазы клинических испытаний анти-ВИЧ/СПИД-вакцины «ВИЧРЕПОЛ» в соответствии с Российскими и международными стандартами надлежащей клинической практики (GCP) и на примере этого иследования - формулировка рекомендаций по формированию основы инфраструктуры испытаний анти-ВИЧ/СПИД-вакцин в России.

3. Исследование безопасности, переносимости и иммунологической активности кандидатной вакцины «ВИЧРЕПОЛ» у человека.

Задачи работы:

1. Проанализировать международный опыт клинических испытаний кандидатных анти-ВИЧ/СПИД-вакцин.

2. На примере испытаний кандидатной вакцины «ВИЧРЕПОЛ» разработать комплект типовой нормативной документации по испытаниям анти-ВИЧ/СПИД-вакцин в соответствии со стандартами GCP с учетом результатов лабораторных исследований и доклинических испытаний.

3. Сформировать когорту добровольцев, мотивированных для участия в клинических испытаниях анти-ВИЧ/СПИД-вакцин.

4. Оценить безопасность и переносимость кандидатной вакцины «ВИЧРЕПОЛ», определить безопасную иммунизирующую дозу.

5. Исследовать уровень и продолжительность гуморального иммунног ответа на кандидатную вакцину «ВИЧРЕПОЛ».

6. Исследовать уровень и продолжительность клеточноопосредованного иммунного ответ на кандидатную вакцину «ВИЧРЕПОЛ».

7. По итогам испытаний подготовить отчет для представления в ГИСК им. Л.А.Тарасевича Роспотребнадзора на экспертизу и согласование.

8. Подготовить рекомендации по организации II фазы клинических испытаний отечественных кандидатных анти-ВИЧ/СПИД-вакцин.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА ИССЛЕДОВАНИЯ

Впервые в России осуществлены клинические исследования оригинальной отечественной конъюгированной полимер-белковой рекомбинантной анти-ВИЧ/СПИД-вакцины. Заложены основы инфраструктуры клинических испытаний новой группы вакцинных препаратов в нашей стране: кандидатных вакцин против ВИЧ-инфекции/СПИДа.

Впервые показана безопасность и переносимость конъюгированной полимер-белковой рекомбинантной анти-ВИЧ/СПИД-вакцины у человека.

Впервые получены данные об иммуногенности конъюгированной полимер-белковой рекомбинантной анти-ВИЧ/СПИД-вакцины у человека. Выявлен дозозависимый характер иммунного ответа - по мере повышения дозы вакцины возрастал титр антител и увеличивалось количество добровольцев со специфическим иммунным ответом.

Впервые показано, что конъюгированная полимер-белковая рекомбинантная вакцина «ВИЧРЕПОЛ» не вызывает при иммунизации добровольцев увеличения количества СБ4+-Т-клеток, то есть обладает дополнительными характеристиками безопасности, связанными с отсутствием -повышения возможного риска ВИЧ-инфекции у вакцинированных добровольцев. Актуальность этого аспекта безопасности анти-ВИЧ/СПИД-вакцин стала очевидной после выявления повышенной восприимчивости к ВИЧ-инфекции добровольцев, иммунизированных кандидатной анти-ВИЧ/СПИД-вакцины ММС-Ас15, активирующей пролиферацию СЭ4+-Т-лимфоцитов, в процессе клинических исследований, которые были остановлены по этой причине.

Индукция иммунного ответа против антигена р24 свидетельствует о перспективах применения вакцины «ВИЧРЕПОЛ» в качестве потенциального иммунотерапевтического средства у ВИЧ-инфицированных пациентов.

НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ

Впервые в России разработана методическая основа и подготовлен комплект нормативной документации по проведению клинических испытаний

анти-ВИЧ/СПИД-вакцин («Протокол клинических испытаний...», «Брошюра исследователя», «Информация для добровольца и Форма информированного согласия», «Индивидуальная карта добровольца» и др.), соответствующий стандартам вСР. Документация успешно прошла экспертизу в ГИСК им. Л.А.Тарасевича Роспотребнадзора, Федеральном комитете по МИБП, Федеральном Комитете по этике и утверждена Федеральной службой по надзору в сфере здравоохранения и социального развития. Разработанные документы могут быть использованы в качестве типовых для организации последующих клинических испытаний анти-ВИЧ/СПИД-вакцин в России.

Впервые в России сформирована когорта добровольцев, мотивированных для участия в клинических испытаниях анти-ВИЧ/СПИД-вакцин. Когорта включена в клинические испытания вакцины «ВИЧРЕПОЛ», стабильна, имеет перспективы для расширения. Тем самым заложены основы для дальнейших клинических испытаний анти-ВИЧ/СПИД-вакцин в Российской Федерации.

Полученные данные о безопасности, переносимости и иммуногенности вакцины «ВИЧРЕПОЛ» дают основания для продолжения клинических исследований, что будет способствовать дальнейшему развитию и совершенствованию инфраструктуры клинических испытаний анти-ВИЧ/СПИД-вакцин в России.

Подготовлены методические рекомендации по организации II фазы клинических испытаний вакцины «ВИЧРЕПОЛ» (в соответствии с планом работ по выполнению Постановления Правительства Российской Федерации от 25 декабря 2007 г. №1905-р и в рамках Государственного контракта с ФМБА России №22.050.08.0 от 20 марта 2008 г. по теме «Разработка экспериментальных технологий для создания кандидатных вакцин против ВИЧ/СПИД», шифр «КВ ВИЧ - 08»).

ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ

1. Впервые в отечественной практике сделано обобщение мирового опыта клинических испытаний кандидатных вакцин против ВИЧ-инфекции/СПИДа, подготовлены рекомендации и пакет нормативных документов по проведению I фазы клинических испытаний первой отечественной кандидатной анти-ВИЧ/СПИД-вакцины «ВИЧРЕПОЛ» (подготовлена и опубликована монография).

2. Впервые в России сформирована когорта ВИЧ-неинфицированных добровольцев, мотивированных на участие в клинических испытаниях анти-ВИЧ/СПИД-вакцин. Когорта стабильна, имеет перспективы для расширения и

включена в I фазу клинических испытаний кандидатной вакцины «ВИЧРЕПОЛ».

3. Показана безопасность и хорошая переносимость кандидатной вакцины «ВИЧРЕПОЛ» во всех исследованных дозах (2,5 - 50,0 мкг по белку).

4. Кандидатная вакцина «ВИЧРЕПОЛ» при иммунизации добровольцев индуцировала образование ВИЧ-специфических антител. Эффект зависел от дозы вакцины, максимальный титр антител наблюдался после 4-й иммунизации. В качестве безопасной иммунизирующей дозы вакцины «ВИЧРЕПОЛ» может быть рекомендована доза не менее 50 мкг по белку.

5. При иммунизации вакциной «ВИЧРЕПОЛ» не наблюдалось значимых изменений показателей Т-клеточного иммунного ответа (абсолютное количество С04+-Т-клеток и СВ8+-Т-клеток, соотношение CD4+/CD8+, а также количество антиген-специфических ИФН-у-продуцирующих клеток в периферической крови не отличались от нормы). Это может рассматриваться как дополнительная характеристика безопасности вакцины «ВИЧРЕПОЛ», связанная с отсутствием повышения риска ВИЧ-инфекции после иммунизации (повышенная восприимчивость иммунизированных добровольцев к ВИЧ-инфекции была обнаружена в клинических исследованиях кандидатной анти-ВИЧ/СПИД-вакцины MRK-Ad5, активирующей пролиферацию CD4+-T-лимфоцитов).

6. Отчет о результатах I фазы клинических испытаний вакцины «ВИЧРЕПОЛ» успешно прошел экспертизу и согласование в ГИСК им.Л.А.Тарасевича Роспотребнадзора. Рекомендовано продолжать исследование и переходить ко II фазе клинических испытаний. Вакцина, «ВИЧРЕПОЛ» включена в международный рейтинг-лист перспективных кандидатных анти-ВИЧ/СПИД-вакцин Global HIV Vaccine Enterprise и IAVI.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ

Результаты работы доложены на V, VI, VII, VIII, IX, X Конгрессах «Современные проблемы иммунологии, аллергологии и иммунофармакологии» (2002 г., 2004 г., 2005 г., 2007 г., 2008 г. - Москва; 2009 г., Казань); II и III Объединенных иммунологических форумах (2004 г., Екатеринбург; 2008 г., Санкт-Петербург), 2-й Всероссийской школе по иммунотерапии (2005 г., Анапа); XXII-XXVII Конгрессах Европейской академии аллергологии и клинической иммунологии (EAACI) (2003, Париж, Франция; 2004 г., Амстердам, Голландия; 2005 г., Мюнхен, Германия; 2006 г., Вена, Австрия; 2007 г., Гетеборг, Швеция; 2008 г., Барселона, Испания); XVIII-XX Конгрессах

Всемирной аллергологической организации (IAACI/WAO) (2003 г., Ванкувер, Канада; 2005 г., Мюнхен, Германия; 2007 г., Бангкок, Таиланд); XII и XIII Международных Конгрессах по иммунологии (ICI/IUIS) (2004 г., Монреаль, Канада; 2007 г., Рио-де-Жанейро, Бразилия); XV-XVII Конгрессах Европейской Федерации иммунологических обществ (EFIS/ECI) (2003 г., Родос, Греция; 2006 г., Париж, Франция; 2009 г., Берлин, Германия); XV, XVI, XVII, XVIII Международных конференциях по СПИДу (2004 г., Бангкок, Таиланд; 2006 г., Торонто, Канада; 2007, Сидней, Австралия; 2008 г., Мехико, Мексика); Международной научно-практической конференции по вопросам ВИЧ-инфекции и вирусных парентеральных гепатитов (2004 г., Суздаль); 1-й Всероссийской конференции по вакцинологии «Медицинские иммунобиологические препараты для профилактики, диагностики и лечения актуальных инфекций» (2004 г., Москва); Симпозиуме «Современные иммунобиологические препараты» (2004 г., Москва); Международном конгрессе «Иммунитет и болезни. От теории к терапии» (2005 г., Москва); IV международной конференции «Высокие медицинские технологии XXI века» (2005 г., Бенидорм, Испания); 4-м Международном конгрессе «Биотехнология: состояние и перспективы развития» (2007, Москва); Международных конференциях «AIDS "Vaccine 2007» (Сиэттл, США) и «AIDS Vaccine 2008» (Кейптаун, ЮАР); Рабочем совещании по вакцинопрофилактике ВИЧ (20-21 февраля 2009 г., Новосибирск).

По материалам диссертации опубликовано 67 печатных работ, в том числе: 1 монография; 23 статьи в научной печати, из них 17 статей в научных изданиях, рекомендованных ВАК РФ для публикации материалов докторских и кандидатских диссертаций; 43 публикации в материалах отечественных и международных конференций и конгрессов.

ВНЕДРЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ РАБОТЫ

Результаты работы использованы в «ГНЦ Институт иммунологии» ФМБА России, ГНЦ социальной и судебной психиатрии им.В.П.Сербского, ГИСК им. Л.А.Тарасевича Роспотребнадзора, ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора, МСЧ №163 ФМБА России, Московского областного центра профилактики и борьбы со СПИД и инфекционными заболеваниями.

ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ

Диссертация изложена на 537 страницах машинописного текста, содержит 73 таблицы, 21 рисунок. Диссертация включает главы: «Введение», «Обзор литературы», «Материалы и методы», «Результаты исследований», «Обсуждение», «Выводы», «Список литературы», а также три приложения. Библиография включает 684 источника, в том числе 60 отечественных и 624 зарубежных.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Исследуемый препарат. Вакцина ВИЧ/СПИД полимер-белковая рекомбинантная конъюгированная жидкая для внутримышечного введения "ВИЧРЕПОЛ" представляет собой стерильный очищенный с помощью аффинной и ионообменной хроматографии и гельфильтрации химерный белок гес(24-41), полученный рекомбинантным методом, копирующий аминокислотные последовательности фрагмента внутреннего белка р17, полноразмерного внутреннего белка р24 и иммунореактивного фрагмента трансмембранного белка gp41 ВИЧ 1 типа; конъюгированный с Полиоксидонием (И-оксидированное производное поли-1,4-этиленпиперазина) - водорастворимым высокомолекулярным иммуностимулятором. Антиген получен в системе Е.соН.

Отношение белок:полиоксидоний (по весу) в препарате составляет 1:10. Консервант - мертиолят 0,01 %.

В испытаниях использована серия вакцины, проконтролированная в, ГИСК им.Л.А.Тарасевича Роспотребнадзора.

Дизайн исследования

В открытом несравнительном рандомизированном клиническом исследовании I фазы изучали безопасность, переносимость и иммуногенность возрастающих доз вакцины "ВИЧРЕПОЛ" (от 2,5 до 50 мкг по белку). Каждая доза была испытана с участием трех ВИЧ-серонегативных здоровых добровольцев (всего планировалось участие в исследовании 15 добровольцев) (табл.1). При отсутствии связанных с вакцинацией неблагоприятных явлений 3 степени и выше в течение 72 часов после 2-й иммунизации последовательно переходили к более высоким дозам (5, 10,25, 50 мкг по белку) (табл.2).

Табл.2. Клинические испытания вакцины «ВИЧРЕПОЛ» (I фаза): критерии включения в исследование / исключения из исследования._

Критерии включения

Критерии исключения

1. Граждане (жители) Российской Федерации.

2. Возраст: от 20 до 50 лет.

3. Для женщин потребуется отрицательный результат теста на беременность по моче и письменное согласие на применение мер контрацепции.

4. Отсутствие выраженных соматических заболеваний или декомпенсированных хронических заболеваний.

5. Клинико-лабораторные показатели в следующих границах:

- Лейкоциты: от 4000 до 10800 кл/мм3

- Тромбоциты: от 150000 до 400000 на мм3

6. Результат анализ мочи на белок и кровь: отрицательный или следы. Если микроскопия мочи выявит гематурию или протеинурию, доброволец должен быть исключен из исследования.

7. Негативный результат серологического теста (иммуноферментного анализа) на ВИЧ-инфекцию.

8. Возможность участия в клинических испытаниях в течение 13 месяцев.

9. Успешное выполнение теста на понимание целей и задач исследования, желание участвовать в испытаниях, подписание участником формы «Информированного согласия», одобренной соответствующими инстанциями.

1. Позитивный результат серологического теста (иммуноферментного анализа) на ВИЧ-инфекцию.

2. Первичные иммунодефицита, хронические заболевания в стадии декомпенсации, аутоиммунные и атопические заболевания.

3. Применение иммуносупрессивной терапии или противораковой химиотерапии.

4. Данные о психиатрических и медицинских проблемах и/или злоупотреблении алкоголем, наркотиками и др., которые, по мнению исследователя, могут оказать нежелательное воздействие на возможность добровольца участвовать в клинических испытаниях.

5. Наличие связанных с родом деятельности или иных обязанностей, способных помешать завершению участия в клинических испытаниях.

6. Прививка любой живой аттенуированной вакциной в течение 60 дней до начала клинических испытаний.

7. Применение экспериментальных терапевтических препаратов не менее, чем за 30 дней до начала участия в клинических испытаниях.

8. Переливание крови, ее компонентов или иммуноглобулинов позднее, чем за последние 3 месяца до начала клинических испытаний.

9. Наличие в анамнезе анафилаксии или любых нежелательных реакций на вакцины, гиперчувствительности немедленного типа.

10. Физиологические состояния: беременность, лактация.

Примечание: женщины детородного возраста должны использовать эффективные противозачаточные средства до первой иммунизации и, по крайней мере, 3 месяца после последней иммунизации.

11. Сотрудники исследовательского учреждения, проводящего испытания, привлеченные к выполнению протокола клинических испытаний, которые могут иметь прямой доступ к результатам по иммуногенности.

Табл.2. Схема иммунизации добровольцев вакциной «ВИЧРЕПОЛ».

Групп а Число добровольцев Месяцы

0 1 3 6

1 3 ВИЧРЕПОЛ 2,5 мкг по белку ВИЧРЕПОЛ 2,5 мкг по белку ВИЧРЕПОЛ 2,5 мкг по белку ВИЧРЕПОЛ 2,5 мкг по белку

2 3 . ВИЧРЕПОЛ 5 мкг по белку ВИЧРЕПОЛ 5 мкг по белку ВИЧРЕПОЛ 5 мкг по белку ВИЧРЕПОЛ 5 мкг по белку

3 3 ВИЧРЕПОЛ 10 мкг побелку ВИЧРЕПОЛ 10 мкг по белку ВИЧРЕПОЛ 10 мкг по белку ВИЧРЕПОЛ 10 мкг по белку

4 3 ВИЧРЕПОЛ 25 мкг по белку ВИЧРЕПОЛ 25 мкг по белку ВИЧРЕПОЛ 25 мкг по белку ВИЧРЕПОЛ 25 мкг по белку

5 3 ВИЧРЕПОЛ 50 мкг по белку ВИЧРЕПОЛ 50 мкг по белку ВИЧРЕПОЛ 50 мкг по белку ВИЧРЕПОЛ 50 мкг по белку

Оценка безопасности и переносимости

Оценка безопасности и переносимости вакцины «ВИЧРЕПОЛ» проводилась на основании регистрации побочных реакций, неблагоприятных явлений и отклонений от нормы результатов клинико-лабораторных анализов. Регистрировали наличие или отсутствие у добровольцев после введения вакцины субъективных жалоб и объективных проявлений (зуд, отек в месте введения вакцины, жар, повышение температуры тела, отек Квинке, анафилаксия и т.д.). Возможную связь побочных реакций и неблагоприятных явлений с применением вакцины «ВИЧРЕПОЛ» оценивали по следующим критериям:

• клинические проявления

• клинико-лабораторные показатели

• иммунологические показатели.

Оценка нммуногенности

Гуморальный иммунный ответ:

• Антитела, связывающиеся с белками гес(24-41), гес24 и гес41 в ИФА;

• Антитела, связывающиеся с твердой фазой (планшетом с сорбированными антигенами ВИЧ) лицензированного в России теста для определения антител к ВИЧ в ИФА;

• Антитела, связывающиеся с белками культурального ВИЧ-1 - р24 и р55 (предшественником р24) в иммуноблоте.

• Нейтрализующие антитела против ВИЧ-1, культивируемого в трансформированной клеточной линии.

Клеточный иммунный ответ:

• Лимфопролиферативный ответ на белки гес(24-41), гес24 и гес41;

• Определение абсолютного количества CD4+- и СВ8+-Т-лимфоцитов и соотношения CD4+/CD8+;

• Определение антиген-специфической продукции интерферона-у Т-клетками.

Формирование когорты добровольцев

Когорта добровольцев для участия в клинических испытаний вакцины «ВИЧРЕПОЛ» формировалась в соответствии со стандартами GCP и соблюдением принципов биоэтики, на основе добровольности, информированности, конфиденциальности, анонимности. К участию в клинических испытаниях привлекались здоровые ВИЧ-неинфицированные добровольцы (мужчины и женщины) в возрасте 20-50 лет, которые могли участвовать в исследовании в течение 13 месяцев (12 визитов в центр клинических испытаний). Для добровольцев были обеспечены: страхование, бесплатное медицинское сопровождение, дифференциальная диагностика ложной ВИЧ-сероположительности с выдачей индивидуального документа с подтверждением участия в клинических испытаниях анти-ВИЧ/СПИД-вакцины и отсутствия ВИЧ-инфекции, консультирование о предотвращении ВИЧ-инфекции, вознаграждение. Добровольцы включались в клиническое исследование в соответствии с критериями включения/исключения (табл.1) после подписания формы информированного согласия.

Формирование когорты добровольцев являлось одной из задач клинического исследования и более подробно описано в разделе «Результаты и обсуждение».

Клинико-лабораторное обследование добровольцев

Клинико-лабораторное обследование добровольцев было проведено в лицензированной клинико-диагностической лаборатории. Клинические исследования крови и мочи были проведены на сертифицированных приборах «АВХ Micros-60», «Horiba АВХ Diagnostic» и «PocketChem UA PU-4210 Агкгау» (Франция). Биохимические исследования проводили на сертифицированном биохимическом анализаторе «Cormay Livia» («Согтау», Венгрия). В качестве биохимических показателей безопасности были использованы уровни АсАТ, АлАТ, креатинина. Эти параметры являются общепринятыми в мировой практике оценки безопасности анти-ВИЧ/СПИД-вакцин [Belshe et al, 1994]

Получение сывороток. Забор крови проводили в сроки, указанные в Протоколе испытаний. Кровь собирали в пробирки, выдерживали 1 час при 37°С, затем переносили в холодильник на 4°С на 30 мин, центрифугировали 10 мин (1000-1500 об/мин). Отбирали сыворотку в микропробирку и помещали в на хранение при -20°С до исследования.

Определение анти-ВИЧ-антител в сыворотках крови иммунизированных добровольцев с использованием диагностической системы для определения антител к ВИЧ1/2 «ДС-ИФА-АНТИ-ВИЧ-УНИФ» (кат. 1-150) (НПО «Диагностические тест-системы», Нижний Новгород). В основе определения антител лежит непрямой твердофазный иммуноферментный анализ. В качестве твердофазного иммуносорбента в тест-системе используется смесь рекомбинантных белков: gp 160, gp 120, gp41 (env ВИЧ-1); pl7, p24 и pl5 (gag ВИЧ-1), gpl20 и gp41 (env ВИЧ-1 группы 0), pl7 и p24 (gag ВИЧ-1 группы 0), gp40 и gp38 env ВИЧ2, сорбированных в лунках полистиролового планшета.

Реакцию ставили согласно инструкции предприятия-изготовителя.

Результат считали положительным, если его оптическая плотность (ОП) превышала ОП крит., рассчитанную по формуле:

ОП крит. = ср. знач. ОП К (-) + 0,2,

где 0,2 коэффициент, определяемый методом статистической обработки результатов постановки ИФА на предприятии-изготовителе, величина которого указана в рабочей инструкции и паспорте на препарат; ОП К (-) - оптическая плотность негативного образца, входящего в состав набора.

В соответствии с международной практикой испытаний анти-ВИЧ/СПИД- . вакцин [Gilbert et al., 2005], для сравнения данных, полученных на различных этапах исследования, результаты были нормализованы и выражены в виде отношения

vy 11 иссл. /ОП крит»

Определение антител к вакцинному антигену препарата «ВИЧРЕПОЛ» в сыворотках крови иммунизированных добровольцев. Определение проводили с помощью твердофазного непрямого иммуноферментного анализа (ИФА) с использованием сорбированных на твердой фазе рекомбинантных антигенов, входящих в состав активной субстанции вакцины «ВИЧРЕПОЛ». В качестве твердофазного иммуносорбента использовали антигены гес р24, гес gp41, гес (24-41), сорбированные на твердой фазе (в лунках полистиролового планшета). Антиген гес(24-41) представляет собой активную субстанцию вакцины «ВИЧРЕПОЛ». Антиген гес р24 копирует полноразмерный белок р24

ВИЧ1 и повторяет N-концевую часть вакцинного антигена гес(24-41). Антиген rec gp41 копирует N-концевой фрагмент gp41 ВИЧ1 и воспроизводит С-концевую часть вакцинного антигена гес(24-41). Антигены в концентрации 8 мкг/мл сорбировали по отдельности на полистироловых планшетах фирмы «Greiner» (Германия) в 0,05 М растворе карбонантно - бикарбонантного буфера pH 9,5, внося по 100 мюг раствора антигена в лунку. Выдерживали 48 часов при комнатной температуре во влажной камере. После окончания инкубации содержимое лунок стряхивали. Планшеты подсушивали, постукивая по сложенной в несколько слоев фильтровальной бумаги. Готовили ряд последовательных двоичных разведений сывороток на 0,01 М фосфатно-солевом буфере, содержащем 0,05% раствора Твин-20 (ФСБ-Т) и 0,02% бычьего сывороточного альбумина (ФСБ-AT). Образцы вносили по 100 мкл в лунку в трех параллелях для каждого разведения, и выдерживали 60 мин при 37° С. По окончании инкубации, лунки пятикратно отмывали ФСБ-Т для удаления несвязавшихся антител, внося в каждую лунку не менее 350 мкл отмывающего раствора. В качестве детектирующего реагента использовали конъюгат пероксидазы хрена с моноклональными антителами мыши против IgG человека. Конъюгат в рабочем разведении на ФСБ-АТ вносили по 100 мкл в лунку. Инкубировали 60 мин при 37° С. После этого лунки вновь промывали пятикратно ФСБ-Т. Реакцию проявляли внесением в каждую лунку 0,2 % раствора ортофенилендиамина в субстратном буфере. Развитие цветной ферментативной реакции останавливали после 15-минутной инкубации в темноте, внося в каждую лунку 50 мкл 10% раствора серной кислоты. Учет реакции производили с помощью спектрофотометра-ридера при длине волны 492 нм.

Результат считали положительным, если ОП в анализируемой лунке превышала ОП крит., рассчитанную по формуле:

ОП крит. = ср. знач. ОП К(-) + 0,2,

где 0,2 - коэффициент, определяемый методом статистической обработки результатов постановки ИФА, ОП К(-) - оптическая плотность ВИЧ-негативного образца из коммерческого набора New LAV Blot I фирмы «BioRad» (США) в разведении 1:10.

Определение антител против антигенов ВИЧ-1 в сыворотках крови иммунизированных добровольцев с помощью иммуноблота. Исследование проводили с применением коммерческой тест-системы New LAV Blot I Assay (HIV-1 Ab confirmation, Western Blot) («Bio-Rad», США, кат. №72251) согласно инструкции предприятия-изготовителя, приложенной к набору. Антигенной

основой тест-системы являются белки культурального вируса ВИЧ-1, сорбированные на нитроцеллюлозе.

Реакцию учитывали, сравнивая расположение полосок на стрипе с образцом, приложенным к тест-системе.

Выявление вирусного белка р24 в сыворотках крови иммунизированных добровольцев с помощью ИФА. Определение проводили с применением коммерческих тест-систем «ВектоВИЧ-1 р24-антиген-подтверждающий тест (ЗАО «Вектор-Бест», Новосибирск). Принцип метода заключается во взаимодействии антигена р24 ВИЧ-1 из исследуемых образцов с моноклональными антителами, иммобилизованными в лунках полистиролового планшета. Связавшийся антиген выявляют с помощью биотинилированных анти-ВИЧ-1 кроличьих антител и конъюгата стрептавидина с пероксидазой хрена. Реакцию ставили согласно инструкции предприятия-изготовителя, приложенной к тест-системе.

Результат анализ считали положительным, если значение ОП в соответствующей лунке было равно или превышало критическое значение (ОПкрит), которое вычислялось по формуле: ОПкрит = ОПср К (-) + 0,07,

где ОПср К (-) - среднее значение оптической плотности негативного образца

Определение генома ВИЧ. Определение генома ВИЧ в плазме крови добровольцев проводили с помощью обратной транскрипции с последующей полимеразной цепной реакцией (ПЦР) в режиме реального времени. Определение генома ВИЧ было проведено в лицензированной лаборатории с применением набора, соответствующего по характеристикам набору «Roche Amplicor».

Выделение лимфоцитов. Цельную кровь собирали в пробирки с К2 ЭДТА (VACUTEST® с К2 ЭДТА, BD). Разбавляли средой RPMI 1640 в соотношении 1:1 и наслаивали на фиколл-урографин. Центрифугировали 20 мин (2000 об/мин) при комнатной температуре. По окончании центрифугирования собирали лимфоциты и переносили в среду RPMI 1640 для удаления примеси фиколла-урографина и тромбоцитов. Центрифугировали 15 мин (1000 об/мин), удаляли надосадочную жидкость, осадок ресуспендировали в среде RPMI 1640. Повторяли отмывку. Осадок ресуспендировали в полной питательной среде (ППС) (10% FCS, 2 мМ L-глютамина, 0,5 М HEPES, RPMI 1640).

Криохранение лимфоцитов. Лимфоциты в ППС центрифугировали 20 мин при 1000 об/мин. Сливали надосадочную жидкость, осадок ресуспендировали в среде для замораживания (10% DMSO в FCS), переносили в криопробирки. Помещали криопробирки в контейнер для замораживания Mr.Frosty (С 1562, «Sigma», США), контейнер помещали в морозильную камеру при - 80 "С.

Постановка реакции лимфопролиферации. Для работы были использованы свежевыделенные клетки. Клетки подсчитывали в гемацитометре. В лунку 96-луночного плоскодонного планшета вносили лимфоциты (200000/лунку) и антигены или гес (24-41), или гес р24, или гес gp41 (рабочая концентрация 10 мкг/мл) в ППС. Положительным контролем реакции служила стимуляция лимфоцитов ФГА (рабочая концентрация 20 мкг/мл). Реакцию ставили в 3-х параллелях. Инкубировали планшеты в 5% атмосфере С02 при 37 °С. Через 48 часов в лунки вносили Н-тимидин, оставляли еще на 24 часа, после чего переносили содержимое лунок на нитроцеллюлозные фильтры. Включение 3Н-тимидина определяли на Р-счетчике в толуоловом сцинтшшяторе. Индекс пролиферации (ИП) определяли по формуле:

ИП—СРМантиген/СРМспонханная пролиферация у

где СРМантш-ен - сигнал клеток, стимулированных антигеном,

СРМспонтанная пролиферация - СИГНЭЛ КЛеТОК, ИНКубирОВаННЫХ В ППС

(спонтанная пролиферация).

Определение CD4+- н СБ8+-Т-лимфоцитов и соотношения CD4+/CD8+.

Кровь для определения CD4+- и СБ8+-лимфоцитов забирали из кубитальной вены пациента в 9-10 ч утра, натощак, в гепаринизированную пробирку из расчёта 20 ME гепарина на 1 мл крови. Кровь разводили средой 199 в соотношении 1:3 и наслаивали на фиколл-пак (р= 1,077 г/мл). Центрифугировали пробирки 40 мин при 400g. Собирали интерфазное кольцо, содержащее мононуклеарные клетки (МНК). Дважды отмывали МНК средой 199 при 200g 10 мин и доводили до концентрации 5 х106/мл. МНК вносили в лунки круглодонного планшета в количестве 50 мкл на лунку, по 3 лунки на каждого пациента (№1 - контроль, №2 - CD4, №3 - CD8). В лунки №2 и №3 вносили по 5 мкл мышиных моноклональных антител против CD4 и CD8 человека, соответственно («Сорбент», Москва). Пробы инкубировали 30 мин при +4°С. Для отмывки в лунки вносили по 150 мкл среды 199 и осаждали

клетки центрифугированием в течение 5 мин при 200g. Отмывку повторяли. Во все лунки (№№1-3) вносили вторичные антитела (овечьи антитела против иммуноглобулинов мыши), меченые ФИТЦ, по 0,5 мкл на лунку (50 мкл раствора антител, разведённых в 100 раз). Инкубировали 30 мин при +4°С. Пробы двукратно отмывали, фиксировали 1% р-ром параформальдегида в ФСБ и хранили до исследования при +4°С не более 72 ч. Анализ образцов проводили на проточном цитометре FACSCalibur («Becton Dickinson», США), оснащённым аргоновым лазером с длиной волны излучения 488 нм, с использованием программного обеспечения CellQUEST. Определяли количество CD4+- и С08+-Т-клеток, а также соотношение CD4+/CD8+.

В настоящем исследовании в качестве диапазона нормальных значений были приняты: абсолютное количество CD4+-лимфоцитов - 600-1600; абсолютное количество СБ8+-лимфоцитов - 300-800; соотношение CD4+/CD8+ - 1,0-2,5 [Пинегин Б.В. и соавт., 2001].

Следует учитывать, что результаты количественной оценки субпопуляций лимфоцитов, не соответствующие нормативным показателям, еще не свидетельствуют о наличии патологии, и наоборот, нормальные показатели субпопуляций лимфоцитов могут наблюдаться у пациентов с отклонениями в функционировании иммунной системы. Поэтому в первую очередь следует обращать внимание не на отклонение показателей относительно нормальных значений, а на соответствие характера отклонения показателя клинической картине заболевания [Пинегин Б.В. и соавт., 2001].

Исследование антиген-специфической продукции интерферона-у лимфоцитами периферической крови (ELISPOT-анализ с применением набора BD № 551849, «Becton Dickinson», США). Для исследования использовали замороженные лимфоциты. Накануне проведения реакции лимфоциты, находящиеся в среде для замораживания, размораживали в водяной бане при 37 °С. Быстро переносили в ППС и ценрифугировали 20 мин при 1000 об/мин. Сливали надосадочную жидкость, осадок ресуспендировали в ППС, центрифугировали 20 мин при 1000 об/мин. Сливали надосадочную жидкость, лимфоциты разводили ППС до концентрации 1 млн/мл. Оставляли на ночь в 5% атмосфере С02при 37°С. Выживаемость лимфоцитов определяли по включению красителя трипанового синего. Содержание живых клеток определяли в гемацитометре. Реакцию проводили с применением коммерческих тест-систем BD № 551849 («Becton Dickinson», США) согласно инструкции предприятия-изготовителя, приложенной к набору. Результаты учитывали на анализаторе ELISPOT («AELVIS», ЕС).

Постановка реакции нейтрализации. В исследованиях нейтрализационных свойств образцов сывороток иммунизированных добровольцев в качестве методической основы использовали стандартные протоколы, утвержденные ВОЗ [End Point Neutralization Assay. WHO Guidelines for Standart HIV Isolation Procedures 1994, 1998 update] с небольшими модификациями. Испытания проводили в вирус-клеточной системе МТ4 - Н1У-1Шв.

Сыворотки, полученные в стерильных условиях стандартным методом, подвергали тепловой обработке при +56 °С в течение 30 мин для инактивации вирионов ВИЧ-1 и белков системы комплемента. Условия хранения сывороток: -80°С при однократном размораживании.

Перевиваемая клеточная линия МТ4 является клонированным вариантом, широко используемым для моделирования ВИЧ-инфекции. Линия была получена из коллекции NIH (National Institutes of Health, Bethesda, Maryland) и культивировалась согласно рекомендациям в пластиковых флаконах 25 см3 («Costar», США) при 37°С и 5% СОг, в ростовой среде следующего состава: RPMI-1640 с 10% FCS («Bioclot», Германия), 2мМ L-глютамина («Sigma», США).

Вирусы. В работе использовали ВИЧ-1шв - референс-штамм, активно реплицирующийся в лимфобластоидных Т-клеточных линиях.

Вирусные стоки получали в результате острой инфекции клеток МТ4 вирус-содержащими супернатантами. Полученную вирус-содержащую культуральную жидкость освобождали от клеток низкоскоростным центрифугированием, аликвотировали и хранили при температуре -70°С. Биологическую активность вирусных стоков оценивали путем титрования ТСШ50. По результатам титрования активность использованного вирус-содержащего материала составляла 5,5 х 105 TCID50.

Тест нейтрализации. Использовали модифицированную методику, позволяющую проводить более масштабный поиск ВИЧ-позитивных сывороток с подходящими нейтрализующими свойствами. При этом использовали 2 дозы заражения вирусом - 10 и 50 TCID50 и 2 разведения сывороток - 1:10 и 1:50.

После 1 часа инкубации при 37°С 75 мкл предварительно прогретой и разведенной сыворотки с 75 мкл вируса в 96-луночный планшет добавляли 75 мкл суспензии клеток МТ4 в концентрации 1,5х 10б кл/мл.

На 2-й, 3-й и 4-й дни проводили отмывание несвязавшегося вируса, удаляя 175 мкл среды и добавляя 175 мкл свежей.

Результаты учитывали на 7 сутки инфекции путем определения содержания р24-антигена ВИЧ в кулыуральной жидкости с помощью ИФА. Использовали коммерческую тест-систему «ВектоВИЧ-1 р24-антиген-подтверждающий тест» (ЗАО «Вектор-Бест», Новосибирск). Нейтрализующую активность сывороток оценивали по снижению значения оптической плотности, определяемой с помощью ИФА, в пробах культурального супернатанта, отобранного из лунок с тестируемой иммунной сывороткой по сравнению с контрольными пробами, содержащими неиммунную сыворотку.

Индекс нейтрализации (N1) рассчитывали по формуле:

NI=(ODNcgser - ODTes,edSer)/(ODNegSer- ODcellControl) X 100%

где ODnegser - средняя (из трех повторов) оптическая плотность контроля инфекции с негативной сывороткой в ИФА; ODTestSer - средняя (из трех

ПОВТОрОВ) ОПТИЧеСКаЯ ПЛОТНОСТЬ Проб С ИССЛеДуеМОЙ СЫВОрОТКОЙ; ODcellComrol -

средняя оптическая плотность контроля клеток [Burton et al., 2004].

Статистическая обработка данных. При статистическом анализе полученных результатов определяли среднее арифметическое и стандартную ошибку среднего арифметического. Достоверность различий оценивали по t-критерию Стьюдента [Гланц С. Медико-биологическая статистика. 1998 г.].

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Клинические испытания вакцины "ВИЧРЕПОЛ» представляют собой очередной этап исследований по разработке анти-ВИЧ/СПИД, начатых в нашей стране в рамках МНТП «Вакцины нового поколения и медицинские диагностические системы будущего». Научный план программы предусматривал формирование единой системы, включающей разработку, доклинические испытания и клинические испытания кандидатных вакцинных препаратов против ВИЧ-инфекции/СПИДа. Вакцина «ВИЧРЕПОЛ» стала первой российской кандидатной анти-ВИЧ/СПИД-вакциной, которая была включена в клинические испытания, а сами эти испытания стали первым в нашей стране клиническим исследованием вакцин этой группы. Фактически они стали основой формирования инфраструктуры клинических испытаний анти-ВИЧ/СПИД-вакцин в России. Эта инфраструктура включает научные институты - разработчики вакцинных препаратов; когорты добровольцев, привлекаемых к участию в клинических испытаниях; центры клинических

испытаний, которые имеют соответствующее оснащение и квалифицированный персонал, осуществляют набор и медицинское сопровождение добровольцев, их иммунизацию, проведение необходимых анализов и обработку полученных образцов. Принципиальной частью инфраструктуры клинических испытаний являются контролирующие и экспертные органы, которые осуществляют экспертизу всех этапов клинического исследования - от создания протокола клинических испытаний до приема заключительного отчета о проведенном клиническом исследовании.

В России накоплен большой опыт испытаний вакцинных препаратов, существуют соответствующие учреждения и службы, имеется нормативно-правовая база. Однако клинических испытаний вакцин против ВИЧ-инфекции/СПИДа в нашей стране ранее не проводилось. В связи с этим, важной задачей организации клинических испытаний вакцины «ВИЧРЕПОЛ» стала разработка программы испытаний, необходимой документации и методических приемов, адаптированных именно для анти-ВИЧ/СПИД-вакцин.

Это было тем более важно потому, что вакцина «ВИЧРЕПОЛ» относится к конъюгированным полимер-белковым вакцинам - новому оригинальному классу вакцинных препаратов, не имеющих аналогов в мировой практике. В процессе решения этой задачи была проведена отработка методических приемов информативного контроля экспериментальных вакцин против ВИЧ-инфекции/СПИДа, пригодных как для клинических испытаний соответствующих кандидатных препаратов, так и для их лабораторных исследований (доклинических испытаний).

Был подготовлен комплект документации, полностью соответствующий нормативным требованиям «Надлежащей клинической практики (вСР)», которая принята в Российской Федерации в качестве государственного стандарта. В комплект вошли: «Протокол клинических испытаний», «Брошюра исследователя», «Информация для добровольца», «Форма информированного согласия», «Индивидуальная карта добровольца», «СУ главного исследователя», страховой полис. Документы успешно прошли экспертизу в ГИСК им. Л.А.Тарасевича Роспотребнадзора, Комитете по медицинским иммунобиологическим препаратам, Комитете по этике при Федеральном органе контроля качества лекарственных средств и были утверждены. На основании положительных решений перечисленных инстанций Федеральной службой по надзору в сфере здравоохранения и социального развития было выдано разрешение на проведение I фазы клинических испытаний вакцины «ВИЧРЕПОЛ».

В соответствии с Российскими и международными нормативными требованиями к проведению клинических исследований с участием человека в качестве субъекта исследования, в протоколе клинических испытаний был предусмотрен полный комплекс мероприятий по защите прав добровольцев, в том числе вопросы конфиденциальности участия в клинических испытаниях и медицинское страхование исследования. Особое внимание было уделено вопросу защиты добровольцев от возможных неблагоприятных последствий, связанных с временной ложной ВИЧ-положительностью (наличие антител против ВИЧ), обусловленной действием исследуемой вакцины. С этой целью в протокол клинических испытаний был включен алгоритм дифференциальной диагностики, позволяющий отличить иммунный ответ, вызываемый вакцинацией, от иммунного ответа, вызываемого ВИЧ-инфекцией. Добровольцу выдавалась справка, в которой подтверждалось его участие в клинических испытаниях, проводимых в соответствии с официальным разрешением Росздравнадзора, а также подтверждалось отсутствие у него ВИЧ-инфекции, несмотря на наличие анти-ВИЧ-антител.

Формирование когорты добровольцев

Формирование когорт добровольцев является одним из наиболее трудных и ответственных аспектов организации клинических испытаний анти-ВИЧ/СПИД-вакцин. На этапе I фазы клинических испытаний задача привлечения добровольцев осложняется низкой мотивацией здоровых ВИЧ-неинфицированных людей для участия в испытаниях анти-ВИЧ/СПИД-вакцин, а также бытующим среди подавляющего большинства населения, настороженного или отрицательного отношением ко всему, что связано с ВИЧ-инфекцией, в том числе и к участию в клинических испытаниях. В связи с этим приобретала особую важность объективная информация об исследуемом препарате, положении дел в области исследования анти-ВИЧ/СПИД-вакцин, отсутствии опасности инфицирования через вакцину, а также о важности разработки вакцин для борьбы с эпидемией ВИЧ-инфекции/СПИДа. Кроме того, одним из необходимых условий включения добровольца в клинические испытания является возможность выполнения им протокола исследования, то есть регулярного посещения центра клинических испытаний в течение длительного времени (13 месяцев, 12 визитов в соответствии с «Протоколом клинических испытаний вакцины «ВИЧРЕПОЛ»).

В Российской Федерации уже была попытка формирования когорты добровольцев в связи с исследованиями в области ВИЧ-инфекции. Такая когорта была собрана в Санкт-Петербурге для эпидемиологических

исследований. Однако важно отметить, что при организации клинических исследований анти-ВИЧ/СПИД-вакцин характерной и принципиально важной особенностью формирования когорт является мотивация добровольцев к участию в клинических испытаниях. Как показали зарубежные исследования и наш опыт, этот фактор существенно затрудняет привлечение добровольцев.

Рис. 1. Формирование когорты добровольцев для участия в клинических испытаниях вакцины «ВИЧРЕПОЛ» (I фаза).

При формировании когорты добровольцев для клинических испытаний вакцины «ВИЧРЕПОЛ» (рис.1) только около 20% (65 человек) от общего числа обратившихся лиц (298 человек) были приглашены на собеседование. Остальные либо отказались, либо не подходили по критериям включения/исключения (например, были ВИЧ-инфицированными или по каким-либо причинам не могли выполнять протокол исследования). После личного собеседования были отобраны 17 добровольцев, которые после соответствующего медицинского обследования и подписания информированного согласия были включены в клиническое исследование.

Двое участников впоследствии (после 3-го визита) вышли из исследования по собственному желанию без объяснения причин. Остальные 15 добровольцев полностью завершили протокол клинических испытаний. Таким образом, стабильность когорты составила 87%, что является высоким показателем.

30 человек, которые принципиально были готовы к участию в I фазе клинических испытаниях вакцины «ВИЧРЕПОЛ», отложили свое участие в них по объективным причинам и выразили желение принять участие в последующих клинических испытаниях. Тем самым были заложены основы формирования когорты добровольцев на перспективу - для проведения II фазы клинических испытаний вакцины «ВИЧРЕПОЛ» (разумеется, следует понимать, что к моменту набора добровольцев в клиническое исследование желание участвовать может и измениться). Наиболее эффективным оказалось привлечение добровольцев из дискордантных пар (один партнер инфицирован ВИЧ, другой - нет).

Важным аспектом формирования когорты стало исследование мотивов участия и отказа от участия в клинических испытаниях. Основной причиной (мотивом) для участия добровольцев в клинических испытаниях было стремление помочь ВИЧ-инфицированным людям (65%), в том числе из близкого окружения (41%). Далее следовало желание внести вклад в научные исследования по созданию анти-ВИЧ/СПИД-вакцин (35%). Возможность получить иммунную защиту против ВИЧ-инфекции была отмечена как основной мотив в 18% случаев. Бесплатная страховка и медицинское обследование, а также получение вознаграждения не были определяющим причинами для участия в клинических испытаниях (4%) (табл. 3).

20% (13 из 65) отказались от участия в клинических испытаниях на этапе отбора. В качестве причин отказа названы (в порядке убывания): сомнение в безопасности вакцины и опасение получить ВИЧ-инфекцию (61%), боязнь побочных эффектов (30%), опасение ложной ВИЧ-позитивности в результате вакцинации (15%), невозможность выполнять протокол испытаний (7%), низкое вознаграждение (2%). В 15% случаев причины отказа не объяснялись. 30 человек не отказались от участия в клинических испытаниях, но приняли решение включиться в них в будущем (II фаза клинических испытаний вакцины «ВИЧРЕПОЛ» или I фаза испытаний других кандидатных вакцин против ВИЧ-инфекции/СПИДа). Преимущественными причинами такого решения были планируемая беременность или временная невозможность выполнять протокол испытаний.

Табл.3. Мотивы участия и отказа от участия в клинических испытания вакцины «ВИЧРЕПОЛ».

Мотивы участия: Мотивы отказа:

• Помощь ВИЧ-инфицированным людям (65%), включая лиц из ближайшего окружения (муж, жена, дети, знакомые) (41%) • Вклад в научные исследования по созданию анти-ВИЧ/СПИД-вакцин (35%) • Возможность получить иммунную защиту против ВИЧ-инфекции (18%) • Бесплатная страховка и медицинское обследование, получение вознаграждения (4%) • Сомнения в безопасности вакцины и боязнь получить ВИЧ-инфекцию (61%) • Боязнь побочных эффектов (30%) • Боязнь ложной ВИЧ-серопозитивности (15%) • Невозможность выполнять протокол испытаний (7%) • Низкое вознаграждение (2%) • Необъясненные причины (15%)

Некоторые ВИЧ-инфицированные добровольцы, которые не могли быть включены в клинические испытания I фазы, высказали желание принять участие в испытаниях терапевтических свойств вакцины «ВИЧРЕПОЛ». Таким образом, создается основа когорты для клинических исследований в области терапевтической вакцинации. Однако необходимо отметить, что для подобных исследований потребуется тщательная проработка критериев включения/исключения, связанная, в частности, с такими параметрами, как динамика вирусной нагрузки, состояние иммунной системы, прием антиретровирусных препаратов.

Таким образом, в процессе проведения I фазы клинических испытаний вакцины «ВИЧРЕПОЛ» была создана первая в России стабильная когорта добровольцев для клинических испытаний анти-ВИЧ/СПИД-вакцин, а также заложены основы формирования когорт добровольцев для участия в дальнейших клинических исследованиях как вакцины «ВИЧРЕПОЛ», так и других кандидатных анти-ВИЧ/СПИД-вакцин и микробицидов.

Безопасность и переносимость вакцины «ВИЧРЕПОЛ»

Основным результатом I фазы клинических испытаний вакцины «ВИЧРЕПОЛ» следует считать достижение первичной конечной точки исследования: была продемонстрирована безопасность и хорошая переносимость исследуемого препарата для человека.

В процессе проведения испытаний ни у одного добровольца не было зарегистрировано кратковременных и отсроченных неблагоприятных явлений,

которые могли бы быть связаны с иммунизацией и послужить причиной вывода добровольца из клинического исследования.

Все добровольцы отмечали хорошую переносимость вакцины. Неприятных субъективных ощущений в результате вакцинации не отмечалось, за исключением небольшой болезненности в момент инъекции. Также не были отмечены такие неблагоприятные явления, как боль в месте введения вакцины, покраснение в месте введения вакцины; затвердение в месте введения вакцины, повышение температуры, озноб, тошнота, недомогание, миалгия, артралгия, головная боль, сыпь, лихорадка и др. (перечень включен в Протокол клинических испытаний).

На протяжении всего срока исследования отклонения клинических лабораторных показателей от нормы обнаруживались достаточно редко (табл.4). При клиническом анализе мочи отмечено 4 случая появления оксалатов (у 2 добровольцев) и фосфатов (у 4 добровольцев). При биохимическом анализе крови у некоторых добровольцев были зафиксированы случаи транзиторного повышения уровня трансаминаз (повышение уровня АлАТ - 16 случаев у 7 добровольцев; повышение уровня АсАТ - 16 случаев у 4 добровольцев).

Выявленные отклонения не имели связи с вакцинацией, не нарастали прогрессивно в течение вакцинации и не потребовали исключения добровольцев из исследования. Важно отметить, что средние значения основных биохимических показателей безопасности (уровни креатинина в сыворотке крови, уровни трансаминаз) в каждой группе во время каждого визита соответствовали диапазону нормальных величин или же были близки к ним (рис. 2).

Табл.4. Частота зафиксированных отклонений общеклшшческих показателей от нормы при иммунизации добровольцев вакциной «ВИЧРЕПОЛ»._

Выявленные отклонения в общеклинических анализах Количество отклонений от нормы / количество визитов Процент от общего количества визитов Число добровольцев Процент от общего числа добровольцев

Повышение уровня АлАТ 16/188 8,51% 7 41,1%

Повышение уровня АсАТ 16/188 8,51% 4 23,5%

Оксалатурия 4/188 2,13% 2 11,7%

Фосфатурия 4/188 2,13% 4 23,5%

(а) Средние уровни креатинина

140 -, 120 -100 -80 -60 -40 -20 -0

Ммоль/л

□

а в

ж

о 1-я группа

о 2-я группа

д 3-я группа

о 4-я группа

■ 5-я группа

1 !ШП

■ тах

-1-1-1-1-1-1-1-1 визиты / недели /

2(1 3(4,2 4(6) 5(12,3 7(24,4 8(25) 10(36) 11 (48) иммунизация

имм) имм)

имм) имм)

(б) Средние уровни АлАТ

80 Е/Л 70 -60 -50 -40 30 20 10 -0

6

8 6 в

о

-Од ■

О

А

О

ш

о

2(1 имм)

3(4,2 имм)

4(6)

5 (12, 3 имм)

7(24,4 имм)

8 (25) 10 (36) 11 (48)

О 1-я группа

□ 2-я группа

Л 3-я группа

О 4-я группа

■ 5-я группа

щщ глах

1 визиты / недели / иммунизация

(в) Средние уровни АсАТ

1-я группа

2-я группа

3-я группа

4-я группа

5-я группа

11 (48)

визиты / недели / иммунизация

Рис. 2. Средние значения основных биохимических показателей безопасности при иммунизации добровольцев вакциной «ВИЧРЕПОЛ».

Таким образом, вакцина «ВИЧРЕПОЛ», вводимая в дозах 2,5,5,10, 25 и 50 мкг по белку, обладает высоким профилем безопасности, хорошо переносится добровольцами, и ее можно характеризовать как безопасную н переносимую.

Вопросы безопасности являются первостепенно важными для вакцинных препаратов. Требования безопасности находятся в числе приоритетных и применительно к кандидатным анти-ВИЧ/СПИД-вакцинам. В этом случае подтверждение безопасности важно не только как необходимый этап клинических испытаний кандидатного препарата, но также имеет особое значение для организации клинических исследований анти-ВИЧ/СПИД-вакцин как таковых. Это связано с существующим стойким массовым представлением о том, что в состав вакцин входит ВИЧ или его компоненты, и, следовательно, существует опасность заражения добровольца через вакцину. Международные исследования показали, что причиной около 60% случаев отказа от участия в клинических испытаниях является боязнь получить ВИЧ-инфекцию через вакцинацию. В настоящем клиническом исследовании при формировании когорты добровольцев 61% случаев отказа были обусловлены этой причиной.

Демонстрация безопасности вакцины «ВИЧРЕПОЛ» была вполне ожидаемым результатом. Безопасность полиоксидония в качестве иммуностимулятора-носителя вакцинных антигенов была ранее подтверждена как в клинических исследованиях, так и многолетней практикой его медицинского применения. Безопасность этого соединения в составе вакцины была подтверждена клиническими испытаниями и практикой применения вакцины «Гриппол», которой вакцинировано уже более 80 миллионов человек. Безопасность рекомбинантных белков ВИЧ как вида антигенов, которые используются при конструировании субъединичных анти-ВИЧ/СПИД-вакцин, также была продемонстрирована в многочисленных клинических исследованиях. Безопасность и ареактогенность вакцины «ВИЧРЕПОЛ» была показана в доклинических испытаниях и подтвердилась в клинических исследованиях.

Наблюдаемая в клинических испытаниях безопасность и хорошая переносимость вакцины «ВИЧРЕПОЛ» является основой для планирования дальнейших клинических исследований этого препарата.

Иммуногенность (антигенная активность) вакцины «ВИЧРЕПОЛ»

Также важным итогом I фазы клинических испытаний является достижение вторичной конечной точки исследования: получены данные, указывающие на иммуногенность вакцины «ВИЧРЕПОЛ» у человека.

Гуморальный иммунный ответ

Образование антител в ответ на иммунизацию вакциной «ВИЧРЕПОЛ» в различной степени было отмечено во всех исследуемых группах (рис.3). По мере повышения дозы вакцины возрастал титр антител и увеличивалось количество добровольцев со специфическим иммунным ответом. Наиболее выраженный гуморальный иммунный ответ наблюдался после иммунизации высокими дозами вакцины (25 и 50 мкг по белку). При этом важно отметить, что значимые уровни антител были выявлены после иммунизации даже низкими дозами вакцины (2,5 и 5 мкг по белку). В ряде случаев иммунореактивность в иммуноблоте регистрировалась даже тогда, когда антитела не выявлялись в ИФА.

Иммунизация вакциной «ВИЧРЕПОЛ» приводила к индукции антител, которые были специфичны к рекомбинантным антигенам (гес(24-41), гес р24, rec gp41). Кроме того, индуцированные вакциной антитела специфически взаимодействовали с соответствующими антигенами ВИЧ (р24, р55, gp41). Максимальный уровень образования антител наблюдался после 4-й иммунизации. Антительный ответ был достаточно продолжительным и наблюдался в течение б месяцев после последней иммунизации.

При создании протокола иммунизации вакциной «ВИЧРЕПОЛ» был использован накопленный опыт международных клинических испытаний кандидатных анти-ВИЧ/СПИД-вакцин. В частности, как было показано ранее [Belshe et al., 1994; Gorse et, al., 1995; Graham et al., 1996, 2001], увеличивающиеся промежутки между иммунизациями приводят к более выраженному эффекту, чем частые (ежемесячные) иммунизации. При этом, если 4 последовательные иммунизации приводили к усилению иммунного ответа, 5-я иммунизация иммунный ответ не усиливала. В схеме иммунизации вакциной «ВИЧРЕПОЛ» промежуток между 1-й и 2-й иммунизациями составлял 4 недели, между 2-й и 3-й иммунизациями - 8 недель, между 3-й и 4-й иммунизациями - 12 недель.

Рис. 3. Динамика образования антител при иммунизации добровольцев различными дозами вакцины «ВИЧРЕПОЛ».

а). Группа 1 (2,5 мкг)

2.1.1

3.1.1

cut-off

5.1.1

f г ; ? е

Ж

U М tt t t tt t t

Иммунизация Иммунизация Иммунизация

cut-off

П,П|п,П,П

б). Группа 2 (5,0 мкг)

9.1.2

14.1.2

.1,1.1.1,1,1,1,I.I,rt.«,

tt t t

Иммунизация

tt t t

Иммунизация

tt t t

Иммунизация

cut-off

в). Группа 3(10 мкг)

15.1.3

21.2.3

■-■.И,I,■,■,■.I.I,1.1

b

tt t t

Иммунизация

tt t t

Иммунизация 31

tt t t

Иммунизация

Рис. 3 (продолжение). Динамика образования антител при иммунизации добровольцев различными дозами вакцины «ВИЧРЕПОЛ».

18.1.4

cut-off

.п.Я.

г). Группа 4 (25 мкг)

20.1.4

30.1.4

■Д,м.и.И,И

it

|,и,■.■,■.■.■,■,■,■,Ж,h

tt t t

Иммунизация

ft t t

Иммунизация

tt t t

Иммунизация

14

24.1.5

cut-off

-В-ЛВ-Я-Д-Д,

д). Группа 5 (50 мкг)

26.1.5

29.1.5

.■■■.■■Д.и.

Jul

v> <• г- м * о -> m г- •• о — . »j * г» • ® —

tt t t "" tt t t "" tt t t ""

Иммунизация Иммунизация Иммунизация

Титры антител, индуцированных при иммунизации добровольцев вакциной «ВИЧРЕПОЛ» (среднее геометрическое титра антител, GMT, составляло 10 - 100,8) (табл.5), превышали таковые, обнаруженные в зарубежных клинических исследованиях кандидатных субъединичных анти-ВИЧ/СПИД-вакцин на основе рекомбинантных антигенов ВИЧ-1 (значение GMT составляло 11-32) [Keefer et al., 1996; Graham et al., 1996, 2001], или соответствовали им. Важно отметить, что наличие в составе вакцины

«ВИЧРЕПОЛ» иммуностимулятора полиоксидония, химически связанного с белком-антигеном, позволяет использовать для иммунизации низкие дозы вакцины. Максимальная доза вакцины, используемая в настоящем клиническом исследовании, составляла 50 мкг по белку. Эта доза в 5-10 раз ниже тех, которые применялись в зарубежных исследованиях при иммунизации субъединичными анти-ВИЧ/СПИД-вакцинами. В частности, в III фазе клинических испытаний кандидатной вакцины AIDSVAX доза препарата составила 600 мкг (по 300 мкг каждого рекомбинантного белка), а в ряде других клинических исследований были применены дозы 500 и даже 1000 мкг [Graham, 2000]. При этом в состав кандидатных вакцин входили различные адъюванты (гидроокись алюминия, MF59 - сквален в виде водной эмульсии, QS21 - соединение из группы сапонинов, интерлейкины, факторы роста), но ни в одном препарате адъювант не был химически соединен с антигеном.

Табл. 5. Минимальный и максимальный титры антител, индуцированных при иммунизации добровольцев вакциной "ВИЧРЕПОЛ» в ИФА для антигенов гес(24-41), гес р24 и гес ар41.__

Антиген Титры антител (min - max) Среднее геометрическое титра антител (GMT) (min - max)

гес(24-41) 1:10-1:320 10-100,8

гес р24 1:10-1:160 10-80

гес gp41 1:10 10

Таким образом, вакцина «ВИЧРЕПОЛ» индуцировала образование специфических антител, взаимодействующих как с антигенами вакцины, так и с антигенами ВИЧ. Так как при этом практически не наблюдалось образования антител против антигенов ВИЧ, не входящих в состав вакцины, спектр индуцируемых антител легко позволял отдифференцировать эффект вакцинации от антителообразования, индуцируемого ВИЧ-инфекцией.

В процессе исследования образцов сывороток иммунизированных добровольцев были выявлены в основном антитела, которые связывали рекомбинантные белки гес(24-41), гес р24 (в ИФА), а также белки культурального вируса - р24 и его предшественник р55 (в иммуноблоте). Одной из задач последующих клинических исследований будет совершенствование протокола иммунизации с целью усиления образования антител против £р41.

Индукция образования антител против р24 при иммунизации вакциной «ВИЧРЕПОЛ» заслуживает специального внимания. р24-специфическому иммунному ответу придается особое значение при разработке терапевтических вакцин против ВИЧ-инфекции. Терапевтическая вакцинация представляет

собой важное направление в исследованиях анти-ВИЧ/СПИД-вакцин. Основной целью терапевтической вакцинации является элиминация ВИЧ-инфицированных клеток, что приводит к уничтожению вируса в резервуарах, которые недоступны для действия антиретровирусных препаратов. Несмотря на ряд первоначальных неудач, исследования в этой области значительно расширились. В качестве терапевтических вакцинных препаратов исследуются кандидатные вакцины на основе рекомбинантных белков и пептидов, вирусные векторы и ДНК-вакцины, вакцины на основе дендритных клеток, а также препараты, содержащие инактивированный ВИЧ (например, Remune). В частности, было обнаружено, что индукция р24-специфических CDS+-T-клеток при терапевтической иммунизации ВИЧ-инфицированных пациентов рекомбинантной анти-ВИЧ-вакциной на основе вируса оспы канареек (vCP1433) могла приводить к продолжительному сохранению низкой вирусной нагрузки после планового прерывания APT и существенному увеличению периода времени между курсами APT [Tubian et al., 2005]. Важность и перспективность исследований терапевтической вакцинации против ВИЧ-инфекции/СПИДа подчеркнул лауреат Нобелевской премии Л.Монтанье [MontagnierL., 2008].

Индукция иммунного ответа против антигена р24 свидетельствует о потенциальной возможности применения вакцины «ВИЧРЕПОЛ» в качестве иммунотерапевтического средства у ВИЧ-инфицированных пациентов. В пользу этого говорит также успешное использование полиоксидония для превенции ВИЧ-инфекции в дискордантных парах [Кузина Т.Н. и соавт., 2002, 2008; Сизякина Л.П. и соавт., 2004].

Исследование нейтрализующей активности антител, индуцированных вакциной «ВИЧРЕПОЛ»

Нейтрализующая активность образцов сывороток добровольцев, иммунизированных вакциной «ВИЧРЕПОЛ», была проверена выборочно - в 4-й и 5-й группах. В образцах сывороток добровольцев 20.1.4, 24.1.5, 26.1.5, 29.1.5 была выявлена нейтрализующая активность, которая составляла соответственно 44,4%, 26,4%, 26,0%, 29,7% при разведении сыворотки 1:10. Ранее, в доклинических исследованиях вакцины «ВИЧРЕПОЛ» было обнаружено, что сыворотки иммунизированных животных были способны нейтрализовать ВИЧ в культуре in vitro (индекс нейтрализации составил 54,9%). Одной из задач последующих клинических исследований будет совершенствование протокола иммунизации с целью усиления образования антител против gp41.

Клеточный иммунный ответ

Иммунизация всеми исследованными дозами вакцины «ВИЧРЕПОЛ» не сопровождалась достоверным изменением индекса антиген-специфической пролиферации лимфоцитов периферической крови у вакцинированных добровольцев. Хотя в отдельных случаях и были выявлены относительно высокие значения индекса лимфопролиферации (3,2-3,5), в целом его значения до и после иммунизации не отличались достоверно (рис.4). Это наблюдение является важным свидетельством в пользу безопасности вакцины «ВИЧРЕПОЛ», так как чрезмерная активация пролиферации существенно увеличивает вероятность инфицирования лимфоцитов ВИЧ.

а). Группа 1 (2,5 мкг)

3« +

511,5 4.

5 i

3,5 т

б). Группа 2 (5 мкг)

5" 2,5 ■ •

Визиты

§. 1,5 с

о 1

а

Ч 0.5

"В 5 I i i

Визиты

Н-1-1-1

2 3 4 6 9 11

§ 1.5

с.

§ 0,5 S

о

в). Группа 3 (10 мкг)

1-. о

f!{

Визиты

Ч

г). Группа 4 (25 мкг)

§1.5"

1-. П

5 5

Визиты -»-1-1

д). Группа 5 (50 мкг)

§2,5 п.

4 1,5

о

& 1

а 0,5 ■ ■

■ ■ в 1

Визиты

Ч

Рис.4. Антиген-специфический лимфопролиферативный ответ при иммунизации добровольцев вакциной «ВИЧРЕПОЛ» (индекс пролиферации, М±т).

а). Группа 1 (2,5 мкг).

< 11 Визиты

в). Группа 2 (5,0 мкг).

О 6,1.2 (С 04+)

А 1.1.2 (С 04+)

С 14.1.2 {С04+)

♦ Средне«

■шах

Визиты

б). Группа 1 (2,5 мкг).

2000 15001 1000

О -

□ и

О

О 2.1.1 {СОВ*)

А 3.1 Л (С08+)

□ 5.1.1 (С08+}

♦ Среднее

-тах

г 5 « в • 11 Визиты

г). Группа 2 (5,0 мкг).

1500 1000

■—в 1 п Д~

гпт

О «.1.2 (СРВ*)

А 9.1.2 {С09+)

□ 14.1.2 (СОВ»)

♦ Среднее

*т1п

■та*

Визиты

д). Группа 3 (10,0 мкг).

Д А

2 8.5 8 В В д

О 13.1.3 (С04+)

А 15.1.3 (С 04+)

□ 21.2.3 (СМ*)

• Среднее

тех

Визиты

е). Группа 3 (10,0 мкг).

ж). Группа 4 (25 мкг).

20001

1500< 10001 £ □ $ ° 5 2 ^

5001 и д

о 18.1.4 (СП4+)

А 20.1.4 (С04+)

□ 30.1Д (С04+)

♦ Среднее

■%п(п "тех

з). Группа 4 (25 мкг).

0-2-0-0-л

ГмТТв

_п_

О 18.1.4 (С08+)

А 20.1.4 (СОВ*)

□ 30.14 (С08+)

Среднее

■тМ

■тех

Визиты

и Визиты

и). Группа 5 (50 мкг).

О 24.1Л (С04+)

А 25.1.6 (С04+)

□ 29.1.5 (С 04+)

♦ Среднее

■т!п

■тех

'Визиты

к). Группа 5 (50 мкг).

8

О 24.1.6 (С 08+)

А 26.1.5 (С08+)

□ 29.1.8 (С08+)

♦ Среднее

Визиты

Рис. 5. Динамика абсолютного количества СВ4+-Т-клеток- и С1)8+-Т-клеток при иммунизации добровольцев вакциной «ВИЧРЕПОЛ».

а) Группа 1 (2,5 мкг)

б) Группа 2 (5,0 мкг)

з

2,5 2 1.5 1

0,5 0

О 2.1.1 Q (CD4/CD8)

о ^CD4/CD8)

а □ □ (CD4/CD8) ♦ Среднее

* А * i ; * ■^■"min

о » ° п ° Z v max

■ I I 2 3

4 6

I I

9 11

3«

2,52> 1.5« 1 ■ 0,5-О-

О 6.1.2

JCD4/CD8)

О 14.1.2

(CD4/CD8) ♦ Среднее

й * ft * а —I

о о 0 а д

Среднее ■тт

"max ! Визиты-

в) Группа 3 (10 мкг) Зч

г) Группа 4 (25 мкг)

О 13.1.3

^CD4/CD8) 3-

(CD4/CD8) 2,5-

а >12.3 '

О (CD4/CD8) ♦ Среднее 1,5-

-ft min

Д

0,5-

11 Визиты

$ " ♦ * ♦

ill

2 3 4 1

О 18.1.4

Д (CD4/CD8)

□ |CD4/CD8)

♦ (CD4/CD8) Среднее

•min

■max

Визиты

д) Группа 5 (50 мкг)

О 24.1.5

Д (CD4/CD8) 26.1.5

□ (CD4/CD8) 29.1.5

♦ (CD4/CD8) Среднее

"тт

тах

Визиты

Рис.б. Соотношение С04*/С08+ при иммунизации добровольцев вакциной «ВИЧРЕПОЛ».

Иммунизация вакциной «ВИЧРЕПОЛ» не приводила в значимым изменениям показателей Т-клеточного иммунного ответа.

Несмотря на то, что в отдельных случаях у индивидуальных добровольцев обнаруживались отклонения абсолютного количества С04+-Т-клеток и С08+-Т-клеток от нормальных значений, средние уровни С04+-Т-клеток и С08+-Т-клеток в каждой группе соответствовали норме (рис.5).

Среднее значение иммунорегуляторного индекса (соотношение CD4+/CD8+) также соответствовало диапазону нормальных значений во всех группах добровольцев (рис.6).

В периферической крови иммунизированных добровольцев не было выявлено антиген-специфических ИФН-у-продуцирующих клеток.

Оценка количества С04+-Т-клеток является стандартным тестом для прогнозирования прогрессии ВИЧ-инфекции в СПИД, для формулировки дифференциального диагноза у симптоматического пациента, а также для принятия решения о применении антиретровирусной терапии и профилактике оппортунистических инфекций (патогенов). Этот параметр считается наиболее надежным индикатором для прогноза развития заболевания. Определение количества С04+-Т-клеток и С08+-Т-клеток также важно для оценки иммунного ответа, индуцируемого кандидатными вакцинами.

Опыт клинических испытаний кандидатных анти-ВИЧ/СПИД-вакцин, стимулирующих Т-клеточный иммунный ответ, показал, что индуцированное вакциной возрастание количества Т-клеток, в том числе и С04+-Т-клеток, может являться серьезным фактором риска ВИЧ-инфекции у вакцинированных добровольцев, так как создается потенциальный резервуар для вируса. Как было обнаружено в клиническом исследовании HVTN 502/Merck 023 («STEP»), количество ВИЧ-инфицированных в группе реципиентов кандидатной вакцины MRK-Ad5 было выше, чем в группе реципиентов плацебо. В качестве одной из причин такого результата эксперты рассматривают повышение уровня CD4+-T-клеток у иммунизированных добровольцев, которые имели предсуществующий иммунитет против аденовируса (рекомбинантный аденовирус серотипа 5 является вектором в кандидатной вакцине MRK-Ad5). По мере анализа материалов, собранных в процессе клинического исследования «STEP», накапливаются все новые данные в пользу этого предположения.

Вслед за остановкой клинических испытаний кандидатной вакцины MRK-Ad5 было остановлено еще несколько действующих и запланированных испытаний кандидатных вакцин, предназначенных для индукции клеточноопосредованного иммунного ответа, в том числе клиническое исследование PAVE 100 (фаза II Ь), к участию в котором предполагалось привлечь 8500 добровольцев.

На международной конференции «AIDS Vaccine 2008» (13-17 октября 2008 г., Кейптаун, ЮАР), которая была организована под эгидой Global HIV Vaccine Enterprise, активно обсуждался вопрос о необходимости с особой осторожностью подходить к клиническим испытаниям анти-ВИЧ/СПИД-

вакцин, ожидаемым эффектом которых является системная индукция ВИЧ-специфических Т-клеток. Некоторые исследователи даже ставили под сомнение целесообразность дальнейшей разработки таких кандидатных вакцин. В этой связи данные о том, что вакцина «ВИЧРЕПОЛ» не вызывала существенных изменений показателей клеточного иммунитета, могут являться важной дополнительной характеристикой безопасности этого препарата с точки зрения отсутствия риска повышения восприимчивости иммунизированных добровольцев к ВИЧ-инфекции.

Выбор безопасной вакцинирующей дозы

Как показали результаты проведенного клинического исследования, все пять исследованных доз вакцины «ВИЧРЕПОЛ» (2,5 - 50,0 мкг по белку) были безопасны и хорошо переносились добровольцами. Ни одна из дозировок вакцины не вызывала неблагоприятных побочных эффектов. Иммунный ответ, зарегистрированный при иммунизации добровольцев, зависел от дозы вакцины. В 1-й и 2-й группах (иммунизирующие дозы 2,5 и 5,0 мкг по белку соответственно) образование антител в ответ на вакцину наблюдалось у одного добровольца из каждой группы, в 3-й группе (иммунизирующая доза 10,0 мкг по белку) значимые уровни образования антител были обнаружены у двух добровольцев, а в 4-й и 5-й группах (иммунизирующие дозы 25,0 и 50,0 мкг по белку соответственно) индуцированное вакциной образование антител наблюдалось у всех добровольцев. Наиболее выраженный иммунный ответ наблюдался в 5-й группе. При этом у двух добровольцев в этой группе (24.1.5 и 29.1.5) обнаруживались наиболее высокие в настоящем исследовании титры антител против вакцинных антигенов, а также против антигенов ВИЧ. Таким образом, в качестве безопасной иммунизирующей дозы вакцины «ВИЧРЕПОЛ» может быть рекомендована доза 50 мкг по белку.

Достижение первичной и вторичной конечных точек клинических испытаний I фазы - демонстрации безопасности вакцины и получения данных о ее иммуногенности - дает основание для планирования последующих клинических исследований II фазы. Отчет о результатах I фазы клинических испытаний вакцины «ВИЧРЕПОЛ» успешно прошел экспертизу и согласован в ГИСК им. Л.А.Тарасевича Роспотребнадзора. Рекомендовано продолжить исследования и переходить ко II фазе клинических испытаний, предметом которых и станет иммуногенность вакцины «ВИЧРЕПОЛ».

Клиническое исследование вакцины «ВИЧРЕПОЛ» в 2005 году было зарегистрировано в международном Реестре клинических испытаний анти-ВИЧ/СПИД-вакцин International AIDS Vaccine Initiative (индекс регистрации -HVRF-380-131004), а вакцина «ВИЧРЕПОЛ» была включена в международный рейтинг-лист перспективных кандидатных вакцинных препаратов Global HIV Vaccine Enterprise - основной международной организации, координирующей исследования в области разработки анти-ВИЧ/СПИД-вакцин.

На международной конференции «AIDS Vaccine 2008» (13-17 октября 2008 г., Кейптаун, ЮАР), был опубликован обновленный рейтинг-лист Global HIV Vaccine Enterprise, куда вакцина «ВИЧРЕПОЛ» была включена в числе 22 перспективных кандидатных анти-ВИЧ/СПИД-вакцин, отобранных из 150 препаратов-претендентов. Также вакцина «ВИЧРЕПОЛ» вошла в обновленный международный Реестр клинических испытаний IAVI.

ВЫВОДЫ

1. Сформирована первая в Российской Федерации стабильная когорта добровольцев, мотивированных для участия в клинических испытаниях анти-ВИЧ/СПИД-вакцин. Часть когорты в соответствии с «Протоколом исследования» была включена в I фазу клинических испытаний вакцины «ВИЧРЕПОЛ», другая часть является основой для проведения последующих клинических испытаний II фазы. Когорта имеет перспективы для расширения.

2. Превалирующие мотивы участия добровольцев в клинических испытаниях имели альтруистический характер: помощь ВИЧ-инфицированным людям и вклад в научные исследования. Прагматические мотивы (бесплатное медицинское обследование и получение вознаграждения) не имели определяющего значения. Наиболее эффективным привлечение добровольцев было среди дискордантных пар (один из партнеров ВИЧ-инфицирован, другой - нет).

3. Вакцина «ВИЧРЕПОЛ» является безопасной, хорошо переносится при введении, не вызывает неблагоприятных побочных эффектов.

4. Иммунизация вакциной «ВИЧРЕПОЛ» вызывала образование ВИЧ-специфических антител, которые взаимодействовали как с рекомбинантными белками (гес(24-41), гес р24), так и с белками культурального ВИЧ-1. При этом в основном выявлялись антитела, связывающиеся с белком р24 и его предшественником р55. Антительный ответ был достаточно продолжительным и наблюдался в течение 6 месяцев после последней иммунизации.

5. Иммунный ответ, вызываемый вакциной «ВИЧРЕПОЛ», носит дозозависимый характер. С повышением дозы вакцины возрастает как

величина индивидуального иммунного ответа (уровень антител к ВИЧ в крови добровольцев), так и число добровольцев со специфическим иммунным ответом.

6. Индукция иммунного ответа против антигена р24 свидетельствует о потенциальной возможности применения вакцины «ВИЧРЕПОЛ» в качестве иммунотералевтического средства у ВИЧ-инфицированных пациентов.

7. Сыворотки добровольцев, иммунизированных вакциной «ВИЧРЕПОЛ», обладали нейтрализующей активностью. Задачей дальнейших исследований станет разработка протокола иммунизации, приводящей к индукции максимально значимых титров антител против gp41.

8. При иммунизации добровольцев вакциной «ВИЧРЕПОЛ» не выявлено антиген-специфической пролиферации лимфоцитов в периферической крови. Это является важным свидетельством в пользу безопасности вакцины «ВИЧРЕПОЛ», так как чрезмерная активация пролиферации существенно увеличивает вероятность инфицирования лимфоцитов ВИЧ.

9. При иммунизации добровольцев вакциной «ВИЧРЕПОЛ» не обнаруживалось значимых изменений показателей Т-клеточного иммунитета: абсолютное количество С04+-Т-клеток и СВ8+-Т-клеток, соотношение CD4+/CD8+, а также количество антиген-специфических ИФН-у-продуцирующих клеток в периферической крови оставались в пределах нормы. Отсутствие активации CD4+-T-mieTOK под влиянием вакцины «ВИЧРЕПОЛ», может рассматриваться как дополнительный фактор безопасности вакцины (активация С04+-Т-клеток под влиянием вакцинирующего препарата рассматривается как фактор, потенциально повышающий восприимчивость иммунизированных добровольцев к ВИЧ-инфекции и выделяется в руководящих документах B03/UNIAIDS как самостоятельный аспект безопасности анти-ВИЧ/СПИД-вакцин).

10. В качестве безопасной иммунизирующей дозы вакцины «ВИЧРЕПОЛ» может быть рекомендована доза 50 мкг по белку.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Хаитов P.M., Решетников A.B., Сидорович И.Г., Карамов Э.В., Гудима Г.О. Клинические испытания первой отечественной анти-ВИЧ/СПИД-вакцины. 2009, М., «ГЭОТАР-Медиа», 671 с.

2. Гудима Г.О., Игнатьева Г.И., Николаева И.А., Сидорович И.Г., Хаитов P.M. Пандемия ВИЧ/СПИД: контроль, анти-ВИЧ-вакцины, современное состояние проблемы и перспективы в России. Физиология и патология иммунной системы, 2004, №1, с.30-35.

3. Сидорович И.Г., Николаева И.А., Шевалье А.Ф., Коробова C.B., Игнатьева Г.А., Карамов Э.В., Корнилаева Г.В., Павлова Т.В., Апрятин С.А., Гудима Г.О., Воробьева М.С., Хаитов P.M. Перспективы контроля пандемии ВИЧ/СПИДа: вакцины и микробициды. Физиология и патология иммунной системы, 2004, №2, с.62-73.

4. Сидорович И.Г., Николаева И.А., Шевалье А.Ф., Коробова C.B., Игнатьева Г.А., Карамов Э.В., Корнилаева Г.В., Павлова Т.В., Апрятин С.А., Некрасов A.B., Пучкова Н.Г., Савинова ИВ., Иванова A.C., Гудима Т.О., Воробьева М.С. Перспективы контроля эпидемии ВИЧ/СПИДа в России: первая отечественная вакцина против ВИЧ/СПИД ВИЧРЕПОЛ готова для проведения I фазы клинических испытаний. Физиология и патология иммунной системы, 2004, №2, с.74-84.

5. Nikolaeva I., Korobova S., Chevalier A., Ignatjeva G., Karamov E., Kornilaeva G., Pavlova T., Vorobjova M., Savinova I., Nekrasov A., Ivanova A., Gudima G.O., Khaitov R., Sidorovich I. HIV Epidemie Profile in Russia and Preparing for Clinical Trials of the First Russian HIV Vaccine "VICHREPOL". XV International AIDS Conference, (July 11-16, 2004, Bangkok, Thailand). Medimond International Proceedings, 2004, v.3, p.157-160.

6. Гудима Г.О., Сидорович И.Г., Николаева И.А., Карамов Э.В., Коробова C.B., Хаитов P.M. Клинические испытания анти-ВИЧ/СПИД-вакцин: современное состояние проблемы. Цитокины и воспаление, 2005, т.4, №3, 63-69.

7. Сидорович И.Г., Николаева И.А., Гудима Г.О., Шевалье А.Ф., Карамов Э.В., Коробова C.B., Хаитов P.M. Перспективы иммунотерапии ВИЧ-инфекции и СПИДа, анти-ВИЧ/СПИД-вакцины и микробициды. Цитокины и воспаление, 2005, т.4, №3, с.82-88.

8. Сидорович И.Г., Николаева И.А., Гудима Г.О., Шевалье А.Ф., Карамов Э.В., Коробова C.B., Хаитов P.M. Иммунотерапия ВИЧ-инфекции и СПИДа. Физиология и патология иммунной системы, 2005, №8, с.80-89.

9. Гудима Т.О., Сидорович И.Г., Николаева И.А., Карамов Э.В., Коробова C.B., Хаитов P.M. Первая отечественная анти-ВИЧ-вакцина на стадии клинических испытаний. Физиология и патология иммунной системы, 2005, №8, с.107-116.

10. Гудима Г.О., Николаева И.А., Сидорович И.Г., Коробова C.B., Игнатьева Г.А., Ольховик Е.И., Воробьева М.С., Чеканова Т.А., Хаитов P.M. Формирование единой системы испытаний иммуногенов и вакцинирующих препаратов против ВИЧ/СПИД и разработка программы I фазы клинических испытаний анти-ВИЧ/СПИД-вакцины ВИЧРЕПОЛ. Физиология и патология иммунной системы, 2005, №8, с.117-121.

11. Сидорович И.Г., Шевалье А.Ф., Коробова C.B., Гудима Г.О., Николаева И.А., Гасанов В.А., Киселев A.B., Игнатьева Г.А., Скляров Л.Ю., Истамов Х.И., Карамов Э.В., Корнилаева Г.В., Павлова Т.В., Чеканова Т.А., Воробьева М.С., Хаитов P.M. Пути повышения иммуногенности вакцин против ВИЧ/СПИДа. Физиология и патология иммунной системы, 2005, №9, с.17-23.

12. Николаева И.А., Гудима Г.О., Сидорович И.Г., Шевалье А.Ф.,Игнатьева Г.А. Коробова C.B., Гасанов В.А., Киселев A.B., Истамов Х.И., Ефремов Е.Е., Карамо

Э.В., Корнилаева Г.В., Павлова Т.В., Воробьева М.С., Чеканова Т.А., Петрова Т.В., Трофимов Д.Ю., Алексеев Л.П., Хаитов P.M. Разработка тест-систем для диагностики и мониторинга результатов иммунизации и лечения больных СПИДом. Физиология и патология иммунной системы, 2005, №12, с.3-11.

13. Сидорович И.Г., Николаева И.А., Гудима Г.О., Шевалье А.Ф., Коробова C.B., Игнатьева Г.А., Карамов Э.В., Корнилаева Г.В., Павлова Т.В., Хаитов P.M. Перспективы контроля пандемии ВИЧ-инфекции/СПИДа - гуманитарной катастрофы современности. Медицина экстремальных ситуаций,2006,№2,с.5-11.

14. Чеканова Т.А., Воробьева М.С., Николаева И.А., Гудима Г.О., Карпенко Л.И., Расщепкина М.Н., Волкова P.A., Коробова C.B., Некрасова H.A., Бажан С.И., Сидорович И.Г., Ильичев A.A., Бектимиров Т.А. Разработка информативных методов контроля на доклиническом уровне первых отечественных вакцин-кандидатов против ВИЧ/СПИД. Физиология и патология иммунной системы, 2006, №3, с.21-28.

15. Чеканова Т.А., Карпенко Л.И., Плясунова O.A., Воробьева М.С., Некрасова H.A., Бажан С.И., Расщепкина М.Н., Гудима Г.О., Николаева И.А., Коробова C.B., Бектимиров Т.А., Ильичев A.A., Карамов Э.В., Сидорович ИГ. Изучение специфических показателей иммунного ответа у мышей при введении первых отечественных экспериментальных вакцин против ВИЧ/СПИД. Физиология и патология иммунной системы, 2006, №4, с. 15-19.

16. Чеканова Т.А., Воробьева М.С., Расщепкина М.Н., Бектимиров Т.А., Гудима Г.О., Сидорович И.Г., Николаева И.А., Коробова C.B. Кандидат-вакцина против ВИЧ/СПИД «ВИЧРЕПОЛ». Адаптация различных модификаций ИФА и иммунного блоттинга для отработки и стандартизации тестов подлинности и специфической активности препарата. Вопросы вирусологии, 2006, т.51, №4, с.42-45.

17. Петров Р.В., Хаитов P.M., Сидорович И.Г., Карамов Э.В., Николаева И.А., Гудима Г.О. Приматы как модель для создания и оценки анти-ВИЧ/СПИД-вакцин. Использование других экспериментальных моделей. Перспективные1 направления использования лабораторных приматов в медико-биологических исследованиях. Материалы Всероссийской научной конференции (8-10 августа 2006 г., Сочи-Адлер). Краснодар, «Наука Кубани», 2006, с.27-32.

18. Хаитов P.M., Гудима Г.О. Основные тенденции современной иммунологии и новые подходы к созданию вакцин против опасных и широко распространенных заболеваний (ВИЧ-инфекция, малярия, туберкулез). Российский Аллергологический Журнал, 2007, №6, с.49-56.

19. Хаитов P.M., Решетников A.B., Сидорович И.Г., Карамов Э.В., Гудима Г.О. Подготовка когорт добровольцев для клинических испытаний анти-ВИЧ/СПИД-вакцин: настоящее и будущее. Физиология и патология иммунной системы, 2007, №11, с. 3-16.

20. Гудима Г.О., Сидорович И.Г., Карамов Э.В., Решетников A.B., Хаитов P.M. Клинические испытания и их вклад в совершенствование анти-ВЙЧ/СПИД-вакцин. Физиология и патология иммунной системы, 2007, №12, с. 3-19.

21. Хаитов P.M., Гудима Г.О. Перспективные подходы к разработке вакцин против опасных и широко распространенных заболеваний (ВИЧ-инфекция,

малярия, туберкулез) и основные направления современной иммунологии. Физиология и патология иммунной системы, 2007, №12, с.20-27.

22. Хаитов P.M., Решетников А.В., Сидорович И.Г., Карамов Э.В., Гудима Г.О. Подходы к формированию когорт добровольцев для участия в клинических испытаниях анти-ВИЧ/СПИД-вакцин. Иммунология, 2008, т.29, №2, с.68-79.

23. Гудима Г.О., Сидорович И.Г., Карамов Э.В., Решетников А.В., Хаитов P.M. Опыт клинических испытаний анти-ВИЧ/СПИД-вакцин. Иммунология, 2008, т.29, №5, с.252-263.

24. Хаитов P.M., Решетников А.В., Гудима Г.О., Сидорович И.Г., Карамов Э.В. Анализ проведения клинических испытаний вакцин против ВИЧ-инфекции/СПИДа в зарубежных странах и в России. Социология медицины, 2008, №1 (12), с.32-44.

25. Апрятин С.А., Рубан С.В., Николаева И.А., Вазыхова Ф.Г., Запорожко JI.B., Мамчик Т.А., Гудима Г.О., Сидорович И.Г. Влияние генетических факторов ВИЧ1 и человека на течение ВИЧ-инфекции. Современные проблемы аллергологии, иммунологии и иммунофармакологии. М., ВИНИТИ, 2002, т.П, с.565

26. Nikolaeva I.A., Apiyatin S.A., Ruban S.V., Vazykhova F.G., Gudima G.O. Sidorovich I.G. Association between CCR5 genotype (heterozygous 32-bp deletion an m303 mutation) and the course of HIV disease. Allergy, 2003, v.58,, suppl.74, p.320.

27. Sidorovich I., Apryatin S., Nikolaeva I., Ruban S., Vazykhova F., Zaporozhko L., Gudima G.O. Molecular and immunological profile of current HIV1 epidemic in Russia. Immunology Letters, 2003, v.87, no.1-3, p.194.

28. Бектемиров T.A., Воробьева M.C., Расщепкина M.H., Чеканова Т.А., Сидорович И.Г., Николаева И.А., Гудима Г.О., Коробова С.В., Игнатьева Г.А. Доклиническое изучение кандидат-вакцины против ВИЧ/СПИД «ВИЧРЕПОЛ». Аллергия, астма и клин, иммунол., 2003, №9, с.136-140.

29. Чеканова Т.А., Воробьева М.С., Расщепкина М.Н., Николаева И.А., Коробова С.В., Сидорович И.Г., Карпенко Л.И., Ильичев А.А., Гудима Г.О., Бектимиров Т.А. Адаптация комплекса лабораторных методов для контроля кандидатных вакцин против ВИЧ/СПИД. Russian J. of Immunol., 2004, v.9, suppl.I, p.191.

30. Гудима Г.О., Богова A.B., Николаева И.А., Сидорович И.Г. Эпидемия ВИЧ-инфекции/СПИД и начало клинических испытаний анти-ВИЧ/СПИД-вакцины ВИЧРЕПОЛ в России. Russian J. of Immunol., 2004, v.9, suppl.I, p. 192.

31. Gudima G.O., Bogova A.V., Nikolaeva I.A., Sidorovich I.G. Recent HIV/AIDS epidemic profile and the start of clinical trials of anti-HIVl/AIDS vaccine VICHREPOL in Russia. Allergy, 2004, vol.59, no.6, suppl., p.247.

32. Chekanova T.A., Nikolaeva I.A., Karpenko L.I., Korobova S.V., Sidorovich I.G., Gudima G.O., Ilichev A.A., Vorobieva M.S., Raschepkina M.N., Bektimirov T.A. Comparative studies of the specific activity of Russian candidate vaccines against HIV/AIDS. Clinical and Investigative Medicine, 2004, v.27, no.4, p. 193A.

33. Трубченинова Л.П., Ильина Н.И., Гудима Г.О., Трефильева Н.Ф., Баранова И.В., Ищенко М.Е., Николаева И.А., Сидорович И.Г. Мониторинг ВИЧ-инфекции в Москве и Московской области в 1999-2003 годах. Материалы

Международной научно-практической конференции по вопросам ВИЧ-инфекции и вирусных парентеральных гепатитов (29 сентября - 1 октября 2004 г., Суздаль). М., МЗ РФ, стр.8-9.

34. Сидорович И.Г., Гудима Г.О., Николаева И.А., Игнатьева Г.А., Шевалье А.Ф., Коробова C.B., Карамов Э.В., Хаитов P.M. Оценка кандидатных анти-ВИЧ-вакцин методом ELISPOT. Материалы Международной научно-практической конференции по вопросам ВИЧ-инфекции и вирусных парентеральных гепатитов (29 сентября - 1 октября 2004 г., Суздаль). М., МЗ РФ, стр. 10-11.

35. Трубченинова Л.П., Ильина Н.И., Гудима Т.О., Трефильева Н.Ф., Баранова И.В., Ищенко М.Е., Николаева И.А., Сидорович И.Г. Мониторинг ВИЧ-инфекции в Москве и Московской области в 1999-2003 годах. Материалы Международной научно-практической конференции по вопросам ВИЧ-инфекции и вирусных парентеральных гепатитов (29 сентября - 1 октября 2004 г., Суздаль). М., МЗ РФ, стр. 18-19.

36. Сидорович И.Г., Гудима Г.О., Николаева И.А., Игнатьева Г.А., Шевалье А.Ф., Коробова C.B., Карамов Э.В., Киселев A.B., Гасанов В.А., Хаитов P.M. Анти-ВИЧ/СПИД-вакцины и микробициды: создание и клинические испытания. Материалы Международной научно-практической конференции по вопросам ВИЧ-инфекции и вирусных парентеральных гепатитов (29 сентября -1 октября 2004 г., Суздаль). М., МЗ РФ, стр. 177-179.

37. Сидорович И.Г., Гудима Г.О., Николаева И.А., Игнатьева Г.А., Шевалье А.Ф., Коробова C.B., Карамов Э.В., Киселев A.B., Гасанов В.А., Хаитов P.M. Микробициды - новое направление в борьбе с ВИЧ-инфекцией. Материалы Международной научно-практической конференции по вопросам ВИЧ-инфекции и вирусных парентеральных гепатитов (29 сентября - 1 октября 2004 г., Суздаль). М., МЗ РФ, стр. 180-181.

38. Чеканова Т.А., Николаева И.А., Карпенко Л.И., Коробова C.B., Сидорович И.Г., Гудима Г.О., Ильичев A.A., Воробьева М.С., Расщепкина М.Н., 4 Бектимиров Т.А. Сравнительное изучение специфической активности российских кандидатных вакцин против ВИЧ/СПИД. Материалы Международной научно-практической конференции по вопросам ВИЧ-инфекции и вирусных парентеральных гепатитов (29 сентября - 1 октября 2004 г., Суздаль). М., МЗ РФ, стр. 181-182.

39. Сидорович И.Г., Николаева И.А., Коробова C.B., Шевалье А.Ф., Грачев С.А., Гудима Г.О., Игнатьева Г.А., Карамов Э.В., Воробьева М.С., Хаитов P.M. Анти-ВИЧ/СПИД-вакцина «ВИЧРЕПОЛ» готова к проведению клинических испытаний. Материалы 1-й Всероссийской конференции по вакцинологии «Медицинские иммунобиологические препараты для профилактики, диагностики и лечения актуальных инфекций. 2004, М., МЗ РФ, с.63.

40. Чеканова Т.А., Воробьева М.С., Расщепкина М.Н., Бектимиров Т.А., Сидорович И.Г., Николаева И.А., Гудима Г.О., Коробова C.B., Карпенко Л.И., Ильичев A.A., Некрасова H.A. Разработка и стандартизация лабораторных тестов оценки подлинности и специфической активности вакцин-кандидатов против ВИЧ/СПИД. Материалы 1-й Всероссийской конференции по вакцинологии

«Медицинские иммунобиологические препараты для профилактики, диагностики и лечения актуальных инфекций. 2004, М., МЗ РФ, с.75-76.

41. Trubcheninova L.P., Ilina N.I., Gudima G.O., Trefilieva N.I., Baranova I.V., Gorbunova Z.A., Ischenko M.E., Nikolaeva I.A., Sidorovich I.G. Analysis of epidemic profile of HIV infection in Moscow and Moscow region during 1999-2004. Allergy and Clinical Immunology International, 2005, suppl.l, p. 130.

42. Gudima G.O., Nikolaeva I.A., Sidorovich I.G., Korobova S.V., Chekanova T.A., Vorobieva M.S., Raschepkina M., Bektimirov T.A. Clinical trials of HIV/AIDS vaccine started in Russian Federation. Allergy and Clinical Immunology International, 2005, suppl. 1, p. 131.

43. Трубченинова Л.П., Гудима Г.О., Трефильева Н.Ф., Баранова И.В., Горбунова З.А., Ищенко М.Е., Милочкина Ю.Н., Николаева И.А., Сидорович И.Г. Особенности распространения ВИЧ-инфекции в Москве и Московской области в 1999-2004 годах. Цитокины.и воспаление, 2005, т.4, №3, с. 146.

44. Чеканова Т.А., Карпенко Л.И., Некрасова H.A., Плясунова O.A., Николаева И.А., Коробова С.В., Сидорович И.Г., Гудима Г.О., Юдина О.С., Воробьева М.С., Расщепкина М.Н., Ильичев A.A. Анализ специфических показателей иммуногенности отечественных кандидат-вакцин против ВИЧ/СПИД. Цитокины и воспаление, 2005, т.4, №3, с. 148.

45. Трубченинова Л.П., Трефильева Н.Ф., Гудима Г.О. Стабилизация выявления положительных и сомнительных образцов в процессе мониторинга ВИЧ-инфекции. Аллергология и иммунология в педиатрии, 2005, т.6, пр.1, с. 189-190.

46. Sidorovich I.G., Nikolaeva I.A., Gudima G.O., Korobova S.V., Gornostaeva Yu.A., Trubcheninova L.P., Klimenko T.V., Pinegin B.V., Chernousov A.D., Chevalier A.F., Gasanov V.A., Kiselev A.V., Karamov E.V., Kornilaeva G.V., Pavlova T.V. Ongoing clinical trials of HIV vaccine VICHREPOL. Basic Science in Allergology and Clinical Immunology, a Prerequisite for Improving Patient Care. Proc. of XXV EAACI congress (Abstract book). EAACI publ., 2006, p.437 (al602).

47. Kiselev AV., Gasanov V.A., Toporova V.A., Shevalier A.F., Gudima G.O., Nikolaeva I.A., Korobova S.V., Sidorovich I.G. HIV/AIDS clade A DNA vaccine creation. Basic Science in Allergology and Clinical Immunology, a Prerequisite for Improving Patient Care. Proc. of XXV EAACI congress (Abstract book). EAACI publ., 2006, al600.

48. Trubcheninova L.P., Trefilieva N.F., Baranova I.V., Ishchenko M.E., Gorbounova Z.A., Gudima G.O., Ilina N.I., Sidorovich I.G. Absence of HIV-infected persons among blood donors during mass screening. Basic Science in Allergology and Clinical Immunology, a Prerequisite for Improving Patient Care. Proc. of XXV EAACI congress (Abstract book). EAACI publ., 2006, al601.

49. Chekanova T.A., Vorobieva M.S., Karpenko L.I., Ilichev A.A., Nikolaeva I.A., Gudima G.O., Korobova S.V., Chevalier A.F., Sidorovich I.G., Karamov E.V. Properties of immune response induced in mice by different HIV/AIDS Russian candidate vaccines. Basic Science in Allergology and Clinical Immunology, a Prerequisite for Improving Patient Care. Proc. of XXV EAACI congress (Abstract book). EAACI publ., 2006, p.437 (al603).

50. Сидорович И.Г., Гудима Г.О., Николаева И.А., Шевалье А.Ф., Коробова С.В., Хаитов P.M. Формирование когорт добровольцев для проведения клинических испытаний как ключевой вопрос создания вакцин против СПИДа. Материалы IV международной конференции «Высокие медицинские технологии XXI века» (30 октября - 5 ноября 2005 г., Бенидорм, Испания), с.49-50.

51. Trubcheninova L.P., Trefiliyeva N.F., Gudima G.O. Stabilization of positive and questionable samples detection in HIV monitoring. Материалы конгресса «Иммунитет и болезни. От теории к терапии» (3-7 октября 2005 г., Москва). М.,

2005, с.53-54.

52. Kofiadi I., Trofimov D., Gudima G., Alexeev L. Genetic succeptibility to HIV-1 infection in 4 populations from Russia. Proc. XVI Eur. Congr. Immunol. (Sep. 6-9,

2006, Paris). ECI, Paris, France, 2006, p. 129.

53. Troubchaninova L.P., Trefilieva N.F., Baranova I.V., Ishchenko M.E., Gorbounova Z.A., Gudima G.O., Nikolaeva I.A., Korobova S.V., Gomostaeva Yu.A., Latysheva T.V., Ilina N.I., Sidorovich I.G. Undetermined data of sera immunoblot testing for HIV-1 concerned to mass screening and HIV vaccine clinical trials. Proc. XVI Eur. Congr. Immunol. (Sep. 6-9, 2006, Paris). ECI, Paris, France, 2006, p. 173.

54. Nikolaeva I., Korobova S., Chevalier A., Gudima G., Gomostaeva J., Trubcheninova L., Klimenko Т., Pinegin В., Chernousov A., Gasanov V., Kiselev A., Karamov E., Komilaeva G., Pavlova Т., Khaitov R., Sidorovich I. Clinical trials of the first Russian HIV vaccine Vichrepol are in progress. Proc. of XVI International AIDS Conference (August 13-18,2006, Toronto, Canada), B35, p. 190.

55. Сидорович И.Г., Николаева И.А., Коробова C.B., Шевалье А.Ф., Гудима Г.О., Горностаева Ю.А., Трубченинова Л.П., Клименко Т.В., Пинегин Б.В., Черноусов А.Д., Гасанов В.А., Киселев А.В., Карамов Э.В., Корнилаева Г.В., Павлова Т.В., Хаитов P.M. Биотехнологические подходы в борьбе с ВИЧ/СПИД. Четвертый московский международный конгресс «Биотехнология; состояние и перспективы развития», Москва, 12-16 марта 2007 г.

56. Trubcheninova L., Gudima G., Baranova I., Trefilieva N., Gorbunova Z., Ischenko M., Fedenko E., Korobova S., Nikolaeva I., Ilina N., Sidorovich I. False-positivity in human sera testing on HIV 1 and 2 antibodies. Allergy, 2007, v.62, s.83, p.492.

57. Korobova S., Nikolaeva I., Chevalier A., Gomostaeva Yu., Trubcheniniva L., Gorbunova Z., Goudima G., Pinegin В., Chernousov A., Petrova Т., Trofimov D., Sidorovich I. Analysis of the safety and the immunogenicity of the gag-env HIV1 recombinant protein-based vaccine "VICHREPOL" in healthy adults. Allergy, 2007, v.62, s.83, p.493.

58. Гудима Г.О., Николаева И.А., Коробова C.B., Горностаева Ю.А., Клименко Т.В., Шевалье А.Ф., Сеславина Л.С., Трубченинова Л.П., Трефильева Н.Ф., Горбунова З.А, Ищенко М.Е., Петрова Т.В., Трофимов Д.Ю., Пинегин Б.В., Черноусов А.Д., Ильина Н.И., Латышева Т.В., Алексеев Л.П., Карамов Э.В., Сидорович И.Г. Первые клинические испытания анти-ВИЧ/СПИД-вакцин в Российской Федерации: формирование когорт добровольцев. Российский Аллергологический Журнал, 2007, №3, пр.1, с.320-321.

59. Трубченинова Л.П., Гудима Г.О., Трефильева Н.Ф., Горбунова З.А., Ищенко М.Е., Коробова С.В., Николаева И.А., Ильина Н. И., Сидорович И.Г. Актуальность проблемы ВИЧ-инфекции у беременных женщин. Российский Аллергологический Журнал, 2007, №3, пр.1, с.325.

60. Трубченинова Л.П., Гудима Г.О., Баранова И.В., Трефильева Н.Ф., Горбунова З.А., Ищенко М.Е., Феденко Е.С., Ильина Н.И., Сидорович И.Г. Ложноположительность при тестировании сывороток на антитела к вирусам иммунодефицита человека 1-2 типов. Российский Аллергологический Журнал, 2007, №3, пр.1, с.325-326.

61. Korobova S., Nikolaeva I., Chevalier A., Gomostaeva Y., Trubcheninova L., Gorbunova Z., Gudima G., Pinegin В., Petrova Т., Trofimov D., Sidorovich I. Clinical trial of recombinant gag-env HIV1 protein based vaccine VICHREPOL in healthy adults. Conference IAS 2007 - 3rd IAS Conference on HIV Pathogenesis and Treatment, July 24-27,2007, Abstract A-042-0045-04695.

62. Сидорович И.Г., Коробова C.B., Николаева И.А., Шевалье А.Ф., Горностаева Ю.А., Гудима Г.О., Гасанов В.А., Киселев А.В., Трубченинова Л.П., Трефильева Н.Ф., Пинегин Б.В., Черноусов А.Д., Петрова Т.В, Трофимов Д.Ю. Клинические испытания первой Российской кандидатной вакцины против ВИЧ/СПИД «ВИЧРЕПОЛ». Медицина-2007.

63. Gudima G., Nikolaeva I., Korobova S., Gomostaeva J., Klimenko Т., Chevalier A., Trubcheninova L., Trefilieva N., Gorbunova Z., Ischenko M., Petrova Т., Trofimov D, Alexeev L., Pinegin В., Chernousov A., Latysheva Т., Ilina N., Karamov E., Sidorovich I. Cohort formation for first clinical trials of HIV/AIDS vaccine in Russian Federation. Antiviral therapy, 2007, v. 12, s.4, p. 131.

64. Trubcheninova L., Gudima G., Gorbunova Z., Trefilieva N., Ishchenko M., Korobova S., Nikolaeva I., Ilina N., Sidorovich I. False-positive and indeterminate Human Immunodeficiency Virus test results among blood donors during mass screening. Allergy, 2008, v.63, s.88, p.564-565.

65. Пронин А.Ю.,Каминский Г.Д., Моисеева А.В., Гудима Г.О., Коробова С.В., Николаева И.А., Карамов Э.В., Сидорович И.Г. Мониторинг ВИЧ-инфекции в Московской области. Рос. иммунол. журнал, 2008, т.2, №11, с.268.

66. Korobova S., A. Chevalier, I. Nikolaeva, G. Gudima, Y.Gornostaeva, L. Trubcheninova, A.Chemousov, B.Pinegin, E.Karamov, T.Pavlova, G.Kornilaeva, T.Petrova, D.Trofimov, I.Sidorovich. Phase I Clinical Trials of a Candidate Vaccine Based on Fusion Recombinant Gag-gp41 Protein in Healthy HIV Negative Volunteers. AIDS Research and Human Retroviruses, 2008, v.24, s.l, p.237.

67. Сидорович И.Г., Гудима Г.О., Коробова C.B., Николаева И.А., Шевалье А.Ф., Гасанов В.А., Горностаева Ю.А., Клименко Т.В., Игнатьева Г.А., Трубченинова Л.П., Трефильева Н.Ф., Горбунова З.П., Ищенко М.Е., Петрова Т.В., Трофимов Д.Ю., Алексеев Л.П., Пинегин Б.В., Черноусов А.Д., Латышева Т.В., Ильина Н.И., Карамов Э.В., Корнилаева Г.В., Павлова Т.В., Хаитов P.M. Результаты первых в России клинических испытаний первой отечественной анти-ВИЧ/СПИД-вакцины «ВИЧРЕПОЛ». Рабочее совещание по вакцинопрофилактике ВИЧ (20-21 февраля 2009 г., Новосибирск). Сборник докладов и материалов. Новосибирск, изд-во «ЦЭРИС», 2009, с.64-70.

Подписано в печать 0 7. О ?. О 9 г- ф°РМат 60x84/16. Тираж 100 экз. Заказ Ч 2 С Отпечатано в службе множительной техники РОНЦ РАМН им. Н.Н. Блохина РАМН 115478, Москва, Каширское ш., 24

Пандемия ВИЧ-инфекции/СПИДа является одним из величайших глобальных кризисов нашего времени, и важность этой проблемы для мирового сообщества не нуждается в доказательствах. Со времени выделения СПИДа как самостоятельного заболевания (1981 г.) [154, 278, 438] в мире, по оценкам ВОЗ, официально зарегистрировано около 60 млн ВИЧ-инфицированных человек, из них около 30 млн умерло от СПИДа. По данным ВОЗ/UNAIDS за 2008 г. [664], в мире насчитывается около 33 млн человек, живущих с ВИЧ/СПИДом, в 2007 г. число новых случаев инфекции составило около 2,7 млн, а 2 млн человек умерли от СПИДа [664]. Ежегодно около 2,7 млн человек становятся инфицированными и около 2,5 млн умирают от этого заболевания. Несмотря на активную образовательную профилактическую работу, разработку антиретровирусных лекарственных препаратов, расширению доступа к лечению в развивающихся странах, пандемия продолжает опережать глобальные усилия по профилактике и контролю ВИЧ-инфекции. 1

По скорости прироста новых случаев ВИЧ-инфекции Россия входит в тройку лидеров (вместе со странами Юго-Восточной Азии и Африки) [24, 25, 521, 663, 664]. В конце 2008 г. число зарегистрированных ВИЧ-инфицированных лиц в нашей стране превысило 490 тыс. человек [12, 28]. По оценкам экспертов ВОЗ/UNAIDS, в России общее число людей, инфицированных ВИЧ, может составлять около 930 тыс. человек [664]. В возрастной группе от 15 до 49 лет доля людей, инфицированных ВИЧ, составляет в России около 1,1% (0,7-1,8%), т.е. ВИЧ-инфекция в основном поражает молодое трудоспособное население и реально угрожает безопасности страны [24, 26, 27].

Еще в 1985 г. Р.М.Хаитов выступил на I Международной конференции по СПИДу и в своем докладе обратил внимание на то, что проблема СПИДа для нашей страны — далеко не научная абстракция, и что необходимо не откладывая активизировать интеллектуальный и материальный потенциал медицинской науки [350]. С 1983г. в Институте иммунологии в Москве были начаты работы по проблеме СПИДа, а с 1985г. - интенсивные исследования по созданию диагностической тест-системы * для определения специфических антител к ВИЧ-1 и ВИЧ-2 в крови людей: Эта тест-система была основана на синтетических пептидах (то есть тест-система третьего поколения) [29-32, 351, 352, 354]. К 1987-88 гг. тест-система «Пептоскрин-2» была разработана и внедрена для использования в практическом здравоохранении. К концу 1991 г. сотрудниками Института иммунологии обследовано около 300 тысяч человек на наличие анти-ВИЧ-антител с использованием тест-системы «Пептоскрин-2» в сравнении с коммерческими зарубежными иммуноферментными диагностикумами и 'двумя другими отечественными* диагностикумами («Антиген» и «Рекомбинантный ВИЧ»),

Влияние пандемии СПИДа очень велико. Это потеря человеческих жизней, страдание больных, изматывающая нагрузка на семьи и сообщества, существенное снижение продуктивности экономики, значительное возрастание стоимости медицинской помощи.

Несмотря на огромные усилия» мирового сообщества, пандемию ВИЧ-инфекции остановить не удается. ВИЧ-инфицированным требуется антиретровирусная терапия (APT) в течение всей жизни пациента. Хотя применение APT и стало важнейшим шагом на пути противодействия развитию СПИДа, тем не менее 80% пациентов, нуждающихся в APT по клиническим показаниям, не получают ее вследствие высокой стоимости лечения.

Кроме того, APT не является средством предупреждения ВИЧ-инфекции (за исключением препятствия передачи ВИЧ от матери к плоду) и не препятствует распространению вируса в организме человека даже в случае начала APT на ранних этапах инфекции. Как показали исследования, начало применения APT у инфицированных лиц в короткие сроки (до 10 дней) после появления симптомов первичной ВИЧ-инфекции не предотвращает образования латентно инфицированных покоящихся (ЕЮ4+-Т-клеток, несущих интегрированную ДНК ВИЧ или инфекционный вирус, несмотря на успешный контроль вирусной нагрузки [162]. Более того, не было выявлено корреляции между количеством инфицированных СБ4+-Т-клеток и продолжительностью APT или временем ее начала после проявления симптомов первичной ВИЧ-инфекции. Таким образом, даже раннее начало APT не предотвращает формирование резервуара ВИЧ-инфекции. Кроме того, не следует забывать, что APT, помимо тяжелых побочных эффектов препаратов, сопровождается^ образованием устойчивых форм вируса.

Несмотря на то, что в последние годы, был достигнут значительный прогресс в обеспечении доступа населения- к терапии и превентивным программам, распространение ВИЧ-инфекции по-прежнему опережает имеющиеся возможности профилактической медицины. Хотя в ряде стран, в том числе в некоторых странах Африки, наблюдается снижение темпов роста заболеваемости, эта тенденция слаба и не оказывает существенного влияния на эпидемическую ситуацию в целом [306, 362, 663].

Наиболее перспективной стратегией контроля пандемии ВИЧ-инфекции/СПИДа представляется создание эффективной профилактической вакцины [13, 50, 73, 227, 443]. Вакцинация-является наиболее эффективной технологией здравоохранения, которая существует для контроля эпидемических инфекционных заболеваний. Применение вакцин привело к уничтожению оспы и позволило значительно приблизиться к уничтожению полиомиелита и кори. Миллионы жизней были спасены благодаря вакцинации. В связи с этим для мирового сообщества в целом и для российских ученых в частности очевидна актуальность скорейшей разработки безопасной, эффективной и доступной анти-ВИЧ/СПИД-вакцины. По оценкам экспертов, создание вакцины, применение которой снизило бы число новых случаев инфицирования на 20-80%, позволило бы предотвратить около 30-70 миллионов случаев инфицирования в течение 15 лет [320].Это оказало бы глобальное положительное воздействие на здоровье населения, экономику и помогло бы радикальным образом остановить наиболее опасную в истории пандемию, которая угрожает всему человечеству. Эта задача тем более важна, что достоверно не выявлено случаев выздоровления при ВИЧ-инфекции (как самопроизвольного выздоровления, так и выздоровления в результате применения APT). В случае ВИЧ-инфекции/СПИДа традиционные методы получения вакцин оказались неприменимы. Фактически создание эффективной анти-ВИЧ/СПИД-вакцины представляет собой фундаментальную научную проблему, решение которой можно считать наиболее важной задачей в истории биологической науки [13, 50, 611].

2000 2001 2002 2003 2004 2005 2006 2007

Рис.1. Ежегодные объемы инвестиций в исследования по разработке анти-ВИЧ/СПИД-вакцин (млн. долл. США) [73].

Научные усилия и материальные ресурсы, направленные на создание вакцин против ВИЧ-инфекции/СПИДа, можно без преувеличения назвать чрезвычайными (рис.1). В настоящее время около 30 кандидатных вакцинных препаратов включены в клинические испытания, проходящие в различных странах мира [495]. К их числу относится и вакцина «ВИЧРЕПОЛ» - первая и

Млн долл. США АЛЛ 0

Годы единственная на настоящий момент- Российская кандидатная анти-ВИЧ/СПИД-вакцина, которая успешно прошла доклинические исследования, и включена в клинические испытания. Ежедневно 12-16 тыс. человек в мире становятся ВИЧ-инфицированными, и это является, еще одним свидетельством того, что скорейшее создание вакцины должно быть приоритетом высшего порядка для международного здравоохранения. ;

После того как был идентифицирован возбудитель СПИДа - ретровирус [99, 131, 255- 256], названный впоследствии вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ), начались интенсивные исследования по разработке вакцины. При этом исследователи столкнулись с целым рядом существенных проблем научного и организационного характера:

1. Стало понятно, что традиционные «пастеровские» методы получения вакцин неприменимы для создания вакцины против ВИЧ. Использовать в , качестве компонента вакцины живой, аттенуированный или убитый вирус либо его фрагменты не представляется возможным из-за опасности ВИЧинфекции для вакцинированного. В связи с этим важнейшей научной задачей *1' 1 . ' ' ' i1 стало создание принципиально новых подходов и технологий для конструирования анти-ВИЧ-иммуногенов, не содержащих компонентов вируса. Создание перспективных вакцинных иммуногенов возможно только на основе фундаментальных молекулярно-биологических, вирусологических и иммунологических исследований ВИЧ-инфекции и. патогенеза СПИДа.

Таким образом, создание вакцины против ВИЧ-инфекции/СПИДа является фундаментальной научной проблемой. Разработка ее привела фактически: к созданию новой области вакцинологии.

2. Серьезным препятствием на пути , создания анти-ВИЧ-вакцины является высокая вариабельность ВИЧ.

3. До настоящего времени не определены корреляты иммунной защиты против ВИЧ, и это также составляет предмет фундаментальных научных исследований.

4. Для ВИЧ-инфекции нет адекватной модели на животных, что в значительной мере затрудняет как исследование механизмов протективного иммунного ответа, так и создает дополнительные трудности для испытания кандидатных вакцинных препаратов.

5. Каким бы перспективным ни был кандидатный вакцинный препарат в лабораторных исследованиях, определить его безопасность, иммуногенность и эффективность для человека можно только с помощью клинических исследований [137]. Клинические испытания с участием добровольцев являются важнейшей неотъемлемой частью научных исследований, направленных на разработку анти-ВИЧ/СПИД-вакцин. В связи с тем, что отсутствует адекватная модель ВИЧ-инфекции на животных, клинические исследования представляют собой неоценимый источник научной информации, необходимой для понимания механизмов протективного иммунного ответа против ВИЧ и выявления коррелятов иммунной защиты. В клинических исследованиях изучаются не только свойства (безопасность, переносимость, иммуногенность) , и дозировка кандидатных вакцинных препаратов, но также оценивается результативность различных протоколов и методов иммунизации.

Важность клинических исследований как неотъемлемого компонента работ по созданию вакцин была еще раз подтверждена на международной конференции «AIDS Vaccine 2008» (Кейптаун, 2008 г.) [73]. В итоговых документах конференции подчеркивалось, что проведение клинических исследований в различных эпидемиологических условиях, в различных популяциях и регионах, в которых циркулирует широкий спектр изолятов ВИЧ, является жизненно необходимым. В клинических исследованиях предстоит выяснить ряд важных вопросов, к числу которых относятся: природа трансмиссионного вируса; вариант иммунного ответа, обеспечивающий контроль ВИЧ у «долговременных непрогрессоров»; роль генетических особенностей хозяина в контроле ВИЧ-инфекции. Необходимо наилучшим образом использовать полученную информацию для создания вакцины. Более тесная интеграция клинических исследований и фундаментальной науки должна привести к выработке усовершенствованных протоколов клинических испытаний, направленных на решение специфических вопросов, связанных с созданием анти-ВИЧ/СПИД-вакцин. Также необходимо поддерживать и развивать инфраструктуру клинических испытаний, в том числе потребуется приложить усилия для обучения квалифицированного персонала, который смог бы обеспечить надлежащее проведение клинических исследований.

Клинические испытания анти-ВИЧ/СПИД-вакцин имеют двойственный характер: с одной стороны, это регламентированное испытание вакцинных препаратов с участием добровольцев, а с другой — научное исследование, которое позволяет получить новые данные о биологии и иммунологии ВИЧ, патогенезе ВИЧ-инфекции/СПИДа, а также дает возможность отработать схемы иммунизации и провести необходимую корректировку препарата. При этом организация клинических испытаний анти-ВИЧ/СПИД-вакцин, в частности, формирование когорт добровольцев, имеет дополнительные особенности и трудности по сравнению с испытаниями других типов препаратов [327, 480]. Эти трудности в основном обусловлены слабой информированностью населения о работах по созданию анти-ВИЧ/СПИД-вакцин, боязнью всего, что связано с ВИЧ-инфекцией и СПИДом, негативными социальными последствиями, связанными с ВИЧ-инфекцией. Формирование когорт добровольцев является наиболее важной, трудоемкой и дорогостоящей частью клинических испытаний вакцин против ВИЧ/СПИДа [5, 6, 40, 100, 456].

В мировой практике клинических испытаний анти-ВИЧ/СПИД-вакцин отработаны методы привлечения добровольцев к клиническим испытаниям, выработана система их социальной и этической защиты, определены нормы медицинского обеспечения [309, 310, 632, 633], на проведение клинических испытаний выделяются финансовые средства из государственного бюджета и из неправительственных фондов [61, 625]. В России, однако, такие клинические испытания раньше не проводились, поэтому необходимо создавать весь комплекс мероприятий по их проведению. Очевидной является необходимость государственной поддержки разработки и испытаний анти-ВИЧ/СПИД-вакцин.К клиническим испытаниям анти-ВИЧ/СПИД-вакцин приступает все большее число стран. В 2004 г., наряду с Германией [242] и Канадой [595], они начались и в России. Клинические испытания вакцины «ВИЧРЕПОЛ» имеют важное значение для формирования методической базы клинических испытаний анти-ВИЧ/СПИД-вакцин в России. Зарубежный опыт испытаний кандидатных анти-ВИЧ/СПИД-вакцин может быть использован лишь частично, так как вакцина «ВИЧРЕПОЛ» и принцип ее конструирования не имеют аналогов в мире. Учитывая, что в России вслед за кандидатной вакциной «ВИЧРЕПОЛ» готовятся к включению в клинические испытания и другие кандидатные вакцины, необходимость формирования комплекса приемов и методов («инфраструктуры») для оценки анти-ВИЧ/СПИД-вакцин приобретает особую актуальность и важность.

Создание анти-ВИЧ/СПИД-вакцины представляет собой комплексную научную задачу, неотделимыми компонентами решения которой являются научные исследования, биотехнологические разработки, лабораторные исследования и клинические испытания. Понимание специфических особенностей иммунного ответа против ВИЧ в сочетании со способностью быстро, стандартизованно и точно тестировать кандидатные вакцины в клинических испытаниях с участием добровольцев даст возможность разработать рациональный и успешный подход к созданию профилактических и лечебных анти-ВИЧ/СПИД-вакцин [599].

Исследования иммунобиологии и патогенеза ВИЧ-инфекции, в том числе направленные на разработку анти-ВИЧ/СПИД-вакцин, привели к ряду фундаментальных научных открытий в области иммунологии и в значительной мере способствовали выходу современной вакцинологии на принципиально новый уровень. Эти аспекты подробно рассмотрены в книге «Новая вакцинология. Вакцины против ВИЧ/СПИДа» [13].

Настоящая работа посвящена важнейшей части исследований по созданию анти-ВИЧ/СПИД-вакцин - клиническим испытаниям.

Актуальность настоящей работы определяется важностью разработки отечественной анти-ВИЧ/СПИД-вакцины, необходимостью исследования безопасности и иммуногенности оригинальной отечественной конъюгированной анти-ВИЧ/СПИД-вакцины «ВИЧРЕПОЛ» в клинических испытаниях, необходимостью формирования в России системы испытаний анти-ВИЧ/СПИД-вакцин.

ЦЕЛИ И ЗАДАЧИ РАБОТЫ

Цели работы:

1. Обобщение и анализ международного опыта проведения клинических испытаний кандидатных анти-ВИЧ/СПИД-вакцин и с учетом его - разработка рекомендаций по проведению клинических испытаний кандидатной анти-ВИЧ/СПИД-вакцины «ВИЧРЕПОЛ», в том числе подготовка пакета нормативной документации для проведения I фазы клинических испытаний.

2. Организация и проведение I фазы клинических испытаний анти-ВИЧ/СПИД-вакцины «ВИЧРЕПОЛ» в соответствии с Российскими и международными стандартами надлежащей клинической практики (GCP) и на примере этого иследования — формулировка рекомендаций по формированию основы инфраструктуры испытаний анти-ВИЧ/СПИД-вакцин в России.

3. Исследование безопасности, переносимости и иммунологической активности кандидатной вакцины «ВИЧРЕПОЛ» у человека.

Задачи работы:

1. Проанализировать международный опыт клинических испытаний кандидатных анти-ВИЧ/СПИД-вакцин.

2. На примере испытаний кандидатной вакцины «ВИЧРЕПОЛ» разработать комплект типовой нормативной документации по испытаниям анти-ВИЧ/СПИД-вакцин, в соответствии со стандартами GCP с учетом результатов лабораторных исследований и доклинических испытаний.

3. Сформировать когорту добровольцев, мотивированных для участия в клинических испытаниях анти-ВИЧ/СПИД-вакцин.

4. Оценить безопасность и переносимость кандидатной вакцины «ВИЧРЕПОЛ», определить безопасную иммунизирующую дозу.

5. Исследовать уровень и продолжительность гуморального иммунного ответа на кандидатную вакцину «ВИЧРЕПОЛ».

6. Исследовать уровень и продолжительность клеточноопосредованного иммунного ответ на кандидатную вакцину «ВИЧРЕПОЛ».

7. По итогам испытаний подготовить отчет для представления в ГИСК им. Л.А.Тарасевича на экспертизу и согласование.

8. Подготовить рекомендации по организации II фазы клинических испытаний отечественных кандидатных анти-ВИЧ/СПИД-вакцин.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА ИССЛЕДОВАНИЯ

Впервые в России осуществлены клинические исследования оригинальной отечественной конъюгированной полимер-белковой рекомбинантной анти-ВИЧ/СПИД-вакцины. Заложены основы инфраструктуры клинических испытаний новой группы вакцинных препаратов в нашей стране: кандидатных вакцин против ВИЧ-инфекции/СПИДа.

Впервые показана безопасность и переносимость конъюгированной полимер-белковой рекомбинантной анти-ВИЧ/СПИД-вакцины у человека.

Впервые получены данные об иммуногенности конъюгированной полимер-белковой рекомбинантной анти-ВИЧ/СПИД-вакцины у человека. Выявлен дозозависимый характер иммунного ответа - по мере повышения дозы вакцины возрастал титр антител и увеличивалось количество добровольцев со специфическим иммунным ответом.

Впервые показано, что конъюгированная полимер-белковая рекомбинантная вакцина «ВИЧРЕПОЛ» не вызывает при иммунизации добровольцев увеличения количества С04+-Т-клеток, то есть обладает дополнительными характеристиками безопасности, связанными с отсутствием повышения возможного риска ВИЧ-инфекции у вакцинированных добровольцев. Актуальность этого аспекта безопасности анти-ВИЧ/СПИД-вакцин стала очевидной после выявления повышенной восприимчивости к ВИЧ-инфекции добровольцев, иммунизированных кандидатной анти-ВИЧ/СПИД-вакцины MRK-Ad5, активирующей пролиферацию СБ4+-Т-лимфоцитов, в процессе клинических исследований, которые были остановлены по этой причине.

Индукция иммунного ответа против антигена р24 свидетельствует о перспективах применения вакцины «ВИЧРЕПОЛ» в качестве потенциального иммунотерапевтического средства у ВИЧ-инфицированных пациентов.

НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ

Впервые в России разработана методическая основа и подготовлен комплект нормативной документации по проведению клинических испытаний анти-ВИЧ/СПИД-вакцин («Протокол клинических испытаний.», «Брошюра исследователя», «Информация для добровольца и Форма информированного согласия», «Индивидуальная карта добровольца» и др.), соответствующий стандартам GCP. Документация успешно прошла экспертизу в ГИСК им. Л.А.Тарасевича Роспотребнадзора, Федеральном комитете по МИБП, Федеральном Комитете по этике и утверждена Федеральной службой по надзору в сфере здравоохранения и социального развития. Разработанные документы могут быть использованы в качестве типовых для организации последующих клинических испытаний анти-ВИЧ/СПИД-вакцин в России.

Впервые в России сформирована когорта добровольцев, мотивированных для участия в клинических испытаниях анти-ВИЧ/СПИД-вакцин. Когорта включена в клинические испытания вакцины «ВИЧРЕПОЛ», стабильна, имеет перспективы для расширения. Тем самым заложены основы для дальнейших клинических испытаний анти-ВИЧ/СПИД-вакцин в Российской Федерации.

Полученные данные о безопасности, переносимости и иммуногенности вакцины «ВИЧРЕПОЛ» дают основания для продолжения клинических исследований, что будет способствовать дальнейшему развитию и совершенствованию инфраструктуры клинических испытаний анти-ВИЧ/СПИД-вакцин в России.

Подготовлены методические рекомендации по организации II фазы клинических испытаний вакцины «ВИЧРЕПОЛ» (в соответствии с планом работ по выполнению Постановления Правительства Российской Федерации от 25 декабря 2007 г. №1905-р и в рамках Государственного контракта с ФМБА России №22.050.08.0 от 20 марта 2008 г. по теме «Разработка экспериментальных технологий для создания кандидатных вакцин против ВИЧ/СПИД», шифр «КВ ВИЧ - 08»).

ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ

1. Впервые в отечественной практике сделано обобщение мирового опыта клинических испытаний кандидатных вакцин против ВИЧ-инфекции/СПИДа, подготовлены рекомендации и пакет нормативных документов по проведению I фазы клинических испытаний первой отечественной кандидатной анти-ВИЧ/СПИД-вакцины «ВИЧРЕПОЛ» (подготовлена и опубликована монография).

2. Впервые в России сформирована когорта ВИЧ-неинфицированных добровольцев, мотивированных на участие в клинических испытаниях анти-ВИЧ/СПИД-вакцин. Когорта стабильна, имеет перспективы для расширения и включена в I фазу клинических испытаний кандидатной вакцины «ВИЧРЕПОЛ».

3. Показана безопасность и хорошая переносимость кандидатной вакцины «ВИЧРЕПОЛ» во всех исследованных дозах (2,5 - 50,0 мкг по белку).

4. Кандидатная вакцина «ВИЧРЕПОЛ» при иммунизации добровольцев индуцировала образование ВИЧ-специфических антител. Эффект зависел от дозы вакцины, максимальный титр антител наблюдался после 4-й иммунизации. В качестве безопасной иммунизирующей дозы вакцины «ВИЧРЕПОЛ» может быть рекомендована доза не менее 50 мкг по белку.

5. При иммунизации вакциной «ВИЧРЕПОЛ» не наблюдалось значимых изменений показателей Т-клеточного иммунного ответа (абсолютное количество С04+-Т-клеток и СБ8+-Т-клеток, соотношение CD4+/CD8+, а также количество антиген-специфических ИФН-у-продуцирующих клеток в периферической крови не отличались от нормы). Это может рассматриваться как дополнительная характеристика безопасности вакцины «ВИЧРЕПОЛ», связанная с отсутствием повышения риска ВИЧ-инфекции после иммунизации (повышенная- восприимчивость иммунизированных добровольцев к ВИЧ-инфекции была обнаружена в клинических исследованиях кандидатной анти-ВИЧ/СПИД-вакцины MRK-Ad5, активирующей пролиферацию С04+-Т-лимфоцитов).

6. Отчет о результатах I фазы клинических испытаний вакцины «ВИЧРЕПОЛ» успешно прошел экспертизу и согласование в ГИСК им.Л.А.Тарасевича Роспотребнадзора. Рекомендовано продолжать исследование и переходить ко II фазе клинических испытаний. Вакцина «ВИЧРЕПОЛ» включена в международный рейтинг-лист перспективных кандидатных анти-ВИЧ/СПИД-вакцин Global HIV Vaccine Enterprise и IAVI.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ

Результаты работы доложены на V, VI, VII, VIII, IX, X Конгрессах «Современные проблемы иммунологии, аллергологии и иммунофармакологии» (2002 г., 2004 г., 2005 г., 2007 г., 2008 г. - Москва; 2009 г., Казань); II и III Объединенных иммунологических форумах (2004 г.,

Екатеринбург; 2008 г., Санкт-Петербург), 2-й Всероссийской школе по иммунотерапии (2005 г., Анапа); XXII-XXVII Конгрессах Европейской академии аллергологии и клинической иммунологии (EAACI) (2003, Париж, Франция; 2004 г., Амстердам, Голландия; 2005 г., Мюнхен, Германия; 2006 г., Вена, Австрия; 2007 г., Гетеборг, Швеция; 2008 г., Барселона, Испания); XVIII-XX Конгрессах Всемирной аллергологической организации (IAACI/WAO) (2003 г., Ванкувер, Канада; 2005 г., Мюнхен, Германия; 2007 г., Бангкок, Таиланд); XII и XIII Международных Конгрессах по иммунологии (ICI/IUIS) (2004 г., Монреаль, Канада; 2007 г., Рио-де-Жанейро, Бразилия); XV-XVII Конгрессах Европейской Федерации иммунологических обществ (EFIS/ECI) (2003 г., Родос, Греция; 2006 г., Париж, Франция; 2009 г., Берлин, Германия); XV, XVI, XVII, XVIII Международных конференциях по СПИДу (2004 г., Бангкок, Таиланд; 2006 г., Торонто, Канада; 2007, Сидней, Австралия; 2008 г., Мехико, Мексика); Международной научно-практической конференции по вопросам ВИЧ-инфекции и вирусных парентеральных гепатитов (2004 г., Суздаль); 1-й Всероссийской конференции по вакцинологии «Медицинские иммунобиологические препараты для профилактики, диагностики и лечения актуальных инфекций» (2004 г., Москва); Симпозиуме «Современные иммунобиологические препараты» (2004 г., Москва); Международном конгрессе «Иммунитет и болезни. От теории к терапии» (2005 г., Москва); IV международной конференции «Высокие медицинские технологии XXI века» (2005 г., Бенидорм, Испания); 4-м Международном конгрессе «Биотехнология: состояние и перспективы развития» (2007, Москва); Международных конференциях «AIDS Vaccine 2007» (Сиэггл, США) и «AIDS Vaccine 2008» (Кейптаун, ЮАР); Рабочем совещании по вакцинопрофилактике ВИЧ (20-21 февраля 2009 г., Новосибирск).

По материалам диссертации опубликовано 67 печатных работ, в том числе: 1 монография; 23 статьи в научной печати, из них 17 статей в научных изданиях, рекомендованных ВАК РФ для публикации материалов докторских и кандидатских диссертаций; 43 публикации в материалах отечественных и международных конференций и конгрессов.

ВНЕДРЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ РАБОТЫ

Результаты работы использованы в «ГНЦ Институт иммунологии» ФМБА России, ГНЦ социальной и судебной психиатрии им.В.П.Сербского, ГИСК им. Л.А.Тарасевича Роспотребнадзора, ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора, МСЧ №163 ФМБА России, Московского областного центра профилактики и борьбы со СПИД и инфекционными заболеваниями.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

ВИДЫ И ОСОБЕННОСТИ ВАКЦИН ПРОТИВ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ/СПИДа

Исследования по разработке анти-ВИЧ/СПИД-вакцин начались после открытия в 1983 г. ВИЧ и доказательства его связи с развитием СПИДа. Кандидатные вакцины 1-го поколения (1983-1990 гг.) в основном были предназначены для индукции образования нейтрализующих антител. 2-е поколение кандидатных анти-ВИЧ/СПИД-вакцин (1990-2000 гг.) в основном представлена препаратами, предназначенными для индукции ВИЧ-специфических ЦТЛ. 3-е поколение кандидатных вакцин против ВИЧ-инфекции/СПИДа (2000 г. - настоящее время) включает комплексные иммуногены, направленные на индукцию и гуморального, и клеточного иммунного ответа (рис.2).

Кандидатные вакцины, предназначенные для индукции ВИЧ-специфического нейтрализующего гуморального иммунного ответа (основное количество исследований - 1983-1990 гг.). Поиск иммуногенов, индукцирующнх нейтрал и руюшие антитела, продолжается (Neutralizing Antibody Consortium).

Кандидатные вакцины, предназначенные для индукции ВИЧ специфических ЦТЛ (ДНК-вакцины, вирусные векторы) (основное количество исследований - 1990-2000 гг.)

Комплексные иммуногены, направленные на индукцию и гуморального, и клеточного ВИЧ-специфического иммунного ответа (<шрайм-буст»-иммунизация) (основное количество исследований - 2000 - настоящее время).

Рис.2. Основные этапы разработки различных видов кандидатных анти-ВИЧ/СПИД-вакцин.

Рассмотрим различные виды кандидатных анти-ВИЧ/СПИД-вакцин (рис.З), их специфические особенности, а также результаты их лабораторных исследований.

Из соображений безопасности не разрабатываются для введения нейнфнцнроваиным людям

Вакцины на основе iNi^S^j

ЖИВОГО аттенуированного вич-t

Вакцины на основе инактивированного

ВИЧ-1

Комбинированные вакцины

ВИЧ-1

Реплицирующиеся вирусные и бактериальные векторы

Нереплицирую щ неся вирусные векторы

ДНК-вакцины («голая ДНК»)

ТТ

Петидные вакцины

Субъединичные вакцины

Вирусоподобные частицы

Рис. 3. Варианты кандидатных вакцин против ВИЧ-инфекции/СПИДа.

выводы

1. Сформирована первая в Российской Федерации стабильная когорта добровольцев, мотивированных для участия в клинических испытаниях анти-ВИЧ/СПИД-вакцин. Часть когорты в соответствии с «Протоколом исследования» была включена в I фазу клинических испытаний вакцины «ВИЧРЕПОЛ», другая часть является основой для проведения последующих клинических испытаний II фазы. Когорта имеет перспективы для расширения.

2. Превалирующие мотивы участия добровольцев в клинических испытаниях имели альтруистический характер: помощь ВИЧ-инфицированным людям и вклад в научные исследования. Прагматические мотивы (бесплатное медицинское обследование и получение вознаграждения) не имели определяющего значения. Наиболее эффективным'привлечение добровольцев было среди дискордантных пар (один из партнеров ВИЧ-инфицирован, другой - нет).

3. Вакцина «ВИЧРЕПОЛ» является безопасной, хорошо переносится при введении, не вызывает неблагоприятных побочных эффектов.

4. Иммунизация вакциной «ВИЧРЕПОЛ» вызывала образование ВИЧ-специфических антител, которые взаимодействовали как с рекомбинантными белками (гес(24-41), тес р24), так и с белками культурального ВИЧ-1. При этом в основном выявлялись антитела, связывающиеся с белком р24 и его предшественником р55. Антительный ответ был достаточно продолжительным и наблюдался в течение 6 месяцев после последней иммунизации.

5. Иммунный ответ, вызываемый вакциной «ВИЧРЕПОЛ», носит дозозависимый характер. С повышением дозы вакцины возрастает как величина индивидуального иммунного ответа (уровень антител к ВИЧ в крови добровольцев), так и число добровольцев со специфическим иммунным ответом.

6. Индукция иммунного ответа против антигена р24 свидетельствует о - потенциальной возможности применения вакцины «ВИЧРЕПОЛ» в качестве иммунотерапевтического средства у ВИЧ-инфицированных пациентов.

7. Сыворотки добровольцев, иммунизированных вакциной «ВИЧРЕПОЛ», обладали нейтрализующей активностью. Задачей дальнейших исследований станет разработка протокола иммунизации, приводящей к индукции максимально значимых титров антител против gp41.

8. При иммунизации добровольцев вакциной «ВИЧРЕПОЛ» не выявлено антиген-специфической пролиферации лимфоцитов в периферической крови. Это является важным свидетельством в пользу безопасности вакцины «ВИЧРЕПОЛ», так как чрезмерная активация пролиферации существенно увеличивает вероятность инфицирования' лимфоцитов ВИЧ:

9. При иммунизации добровольцев вакциной «ВИЧРЕПОЛ» не обнаруживалось значимых изменений показателей Т-клеточного иммунитета: абсолютное количество CD4+-T-mieTOK и С08+-Т-клеток, соотношение CD4+/CD8+, а также количество антиген-специфических ИФН-у-продуцирующих клеток в периферической крови оставались в пределах нормы. Отсутствие активации С04+-Т-клеток под влиянием вакцины «ВИЧРЕПОЛ», может рассматриваться как дополнительный фактор безопасности вакцины (активация СБ4+-Т-клеток под влиянием вакцинирующего препарата рассматривается как фактор, потенциально повышающий восприимчивость иммунизированных добровольцев к ВИЧ-инфекции и выделяется в руководящих документах ВОЗ/UNIAIDS как самостоятельный аспект безопасности анти-ВИЧ/СПИД-вакцин).

10. В качестве безопасной иммунизирующей дозы вакцины «ВИЧРЕПОЛ» может быть рекомендована доза 50 мкг по белку.