Автореферат и диссертация по медицине (14.03.02) на тему:Патоморфологическая оценка противоопухолевого иммунного ответа при раке гортани и применении рекомбинантного интерлейкина-2 человека

ШАТАЛОВ Илья Дмитриевич

ПАТОМОРФОЛОГИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА ПРОТИВООПУХОЛЕВОГО ИММУННОГО ОТВЕТА ПРИ РАКЕ ГОРТАНИ И ПРИМЕНЕНИИ РЕКОМБИНАН ГНОГО ИНТЕРЛЕЙКИНА-2 ЧЕЛОВЕКА

14.03.02 — Патологическая анатомия 14.03.03 —Патологическая физиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Новосибирск 2012

1 8 ОКТ 2012

005053469

Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Новосибирский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации

Научные руководители:

доктор мед. наук, профессор доктор мед. наук, профессор

Надеев Александр Петрович Киселев Алексей Борисович

Официальные оппоненты:

доктор мед. наук, профессор Казачков Евгении Леонидович

(Челябинская государственная медицинская академия, заведующий кафедрой патологической анатомии)

доктор мед. наук, профессор Цырендоржиев Дондок Дамдиновнч

(Научно-исследовательский институт клинической иммунологии СО РАМН, г. Новосибирск, ведущий научный сотрудник лаборатории иммунобиологии стволовой клетки)

Ведущая организация: Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Алтайский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской федерации (г. Барнаул)

Защита состоится « » — у;: .,2012 г. в «_ґ£_>> на заседании диссер-

тационного совета Д 208.062.05, созванного на базе Новосибирского государственного медицинского университета (630091, г. Новосибирск, Красный проспект, д. 52; тел. (383) 229-10-83)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Новосибирского государственного медицинского университета (630091, г. Новосибирск, Красный проспект, д. 52)

Автореферат разослан г» г-с', - г.

Ученый секретарь диссертационного совета

А.В.Волков

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования.

Глобальный устойчивый рост заболеваемости и смертности населения стран мира от злокачественных опухолей и связанные с этим значительные социально-экономические потери позволяют рассматривать противораковую борьбу как одну из наиболее актуальных проблем здравоохранения [Антонив В.Ф., 2002; Хрусталева Е.В., 2002; Ольшанский В.О., 2008]. В Российской Федерации рак гортани в структуре онкологической патологии по частоте встречаемости занимает пятое место, более 65 % больных раком гортани - лица трудоспособного возраста [Алферов B.C., 1993; Ольшанский В.О., 2008].

Поиск новых способов лечения злокачественных опухолей основываются, в том числе, и на изучении механизмов противоопухолевого иммунитета. Известно, что растущая опухоль вырабатывает антигены, вызывающие противоопухолевый иммунный ответ. Главную роль в клеточном противоопухолевом иммунитете играют цитотоксические Т-лимфоциты, натуральные клетки киллеры (NK-клетки) и макрофаги. Гуморальные механизмы участвуют в разрушении злокачественных клеток посредством двух систем: активации комплемента и индукции реакций антителозависимой клеточной цитотоксичности (NK-клетками. [Пушкарь И.С. и соавт., 2010; Кухарев Я.В., 2010; Feiten S.Y., Feiten D.L., 1991; Hamiestad J., DellaGioia N„ Bloch M., 2011].

Согласно современным представлениям, накопление в строме опухоли Т- и B-лимфоцитов, плазматических клеток, макрофагов, обусловленное специфическими антигенами, является морфологическим выражением местного противоопухолевого иммунитета [Лапшина Т.А. и соавт., 2010; Кухарев Я.В. и соавт..

Нарушение баланса цитокиновой сети играет ведущую роль в механизмах канцерогенеза [Бережная Н.М., 1988; 2000; Thomas L. et al 2011]. С участием интерлейкинов происходит распознавание опухолевых антигенов, активация антигенпрезентирующих клеток, миграция иммунокомпетентных клеток к участку развития опухоли, генерация практически всех клонов цитотоксиче-ских клеток, индукция апоптоза опухолевых клеток и другие процессы [Филь-ченков А.А.,1998; Roinangani S., 1994; Kaptoge S., Di Angelantonio E., 2010]. К группе интерлейкинов, которые являются основными индукторами цитотокси-ческой активности различных киллерных клеток, относят иитерлейкин-2 (1L-2). При различных злокачественных новообразованиях у человека определяется снижение синтеза IL-2 лимфоцитами периферической крови (на 2-4 стадиях опухолевого процесса), что коррелирует со снижением активности киллерных клеток [Горецкий Б.А. и соавт., 1989; Бережная Н.М., Горецкий Б.А., 1992; De Vita F. et al., 1991; Elg S.A. et al., 1997; Sadri M, McMahon J., Parker A., 2006].

При опухолевых процессах большое внимание уделяется также роли про-воспалительного цитокина интерлейкина-6 (IL-6) [Thiounn N. et al., 1997]. Ин-

2010].

терлейкин-6 обладает способностью оказывать влияние на процессы дифферен-цировки В-лимфоцитов, повышение уровня синтеза антител, индуцирует цито-токсичность клеток и их ответ на IL-2; IL-6, являясь провоспалительным ци-токином, обладает способностью модулировать противоопухолевую активность макрофагов [Бережная Н.М., 1988; Galdy С. et al., 1995; Krautwald S, 1998; Islami F., Tramacere I., 2010].

Цель исследования. Изучить патоморфологические проявления местного и системного противоопухолевого иммунного ответа при местнораспростра-ненных формах рака гортани (TMN0M0) и при применении рекомбинантного ин-терлейкина-2 человека.

Задачи исследования.

1. Изучить гистологические типы и особенности клеточного состава воспалительного инфильтрата в строме опухолевого узла местнораспространенно-го рака гортани (Т 4N0M0) при использовании рекомбинантного интерлейки-на-2 человека.

2. Изучить интенсивность клеточного воспалительного инфильтрата в строме опухолевого узла местнораспространенного рака гортани (TMN0M0) при использовании рекомбинантного интерлейкина-2 человека.

3. Исследовать влияние рекомбинантного IL-2 на фагоцитарное и лимфо-цитарное звено Т-клеточного противоопухолевого иммунного ответа при раке гортани (Т,Л,М0).

4. Исследовать концентрацию IL-6 у пациентов с местнораспространен-ной формой рака гортани (T^N^Mg) при использовании рекомбинантного IL-2.

Научная новизна. Впервые показано усиление стромальной лимфоцита -плазмоцитарной инфильтрации в раковой опухоли гортани

(Т ,N0MQ) при применении рекомбинантного IL-2 человека.

Впервые продемонстрировано, что воздействие рекомбинантного IL-2 человека вызывает изменение Т-клеточного противоопухолевого иммунитета при раке гортани (Т, 3N0M0): в лимфоцитарном звене - увеличение количества CD8 - лимфоцитов, В-лимфоцитов, клеток естественных киллеров периферической крови до оперативного лечения; фагоцитарном звене - увеличение нейтрофиль-ной активности до оперативного лечения, с нормализацией исследованных показателей к 6 месяцу после оперативного вмешательства.

При применении рекомбинантного IL-2 человека при раке гортани (Ть 4N0M0) наблюдается снижение концентрации IL-6 в плазме крови, что способствует уменьшению развития воспалительных осложнений в послеоперационном периоде.

Теоретическая и практическая значимость работы. Результаты исследования используются в учебном процессе на кафедре патологической анатомии Новосибирского государственного медицинского университета в разделе «Общие вопросы опухолевого роста».

Включение в морфологический анализ опухолевого узла рака гортани, описания клеточной стромальной лимфоцитарно-плазмоцитарной инфильтрации

внедрено в практику патологоанатомического отделения Городской клинической больницы М' 1 (г. Новосибирск).

Уточнение клеточной реакции стромы раковой опухоли гортани и системной лимфоцитарной реакции в ответ на селективную активацию Т-клеточного противоопухолевого иммунитета рекомбинантным IL-2 человека позволяет обосновать введение IL-2 цитокинотерагога больным местно распространенным раком гортани Т,_3N0M0 На основании полученных данных, селективная активация Т-клеточного противоопухолевого иммунитета рекомбинантным IL-2 человека введена в практик^' предоперационной подготовки больных раком гортани T„N0M0 в оториноларингологическом отделении Городской клинической больницы № 1 (г. Новосибирск).

Положения, выносимые на защиту

1.Использование рекомбинантного IL-2 человека при раке гортани Т -Л,Ч усиливает стромальную лимфоцитарно-плазмоцитарную инфильтрацию опухолевого узла.

2.Интенсивность клеточной лимфоцитарно-плазмоцитарной инфильтрации в строме опухоли при использовании рекомбинантного TL-2 человека является критерием выраженного местного противоопухолевого иммунного ответа.

3.Применение при раке гортани рекомбинантного IL-2 человека модулирует системный противоопухолевый иммунный ответ.

Апробация материалов диссертации. Результаты работы доложены и обсуждены на Ежегодной конкурс-конференции студентов и молодых ученых «Авиценна-2009» (Новосибирск, 2009), на V Региональной конференции молодых ученых-онкологов им. академика РАМН Н.В. Васильева «Актуальные вопросы экспериментальной и клинической онкологии» (Томск, 2010), на заседании Новосибирского научного общества оториноларингологов, Межрегиональной научно-практической конференция оториноларингологов «Основные направления оториноларинголог™» (Барнаул, 2010), на Юбилейной межрегиональной научно-практической конференции оториноларингологов, посвященной 75-летию Новосибирского государственного медицинского университета и кафедры оториноларингологии (Новосибирск, 2010).

Внедрение. Результаты исследования внедрены в работу патологоанатомического отделения Городской клинической больницы № 1 (г. Новосибирск), в учебный процесс Новосибирского государственного медицинского университета.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 12 печатных работ, из них 3 - в рецензируемых научных журналах, рекомендуемых ВАК Минобрнау-ки России для публикаций основных результатов исследования.

Объем н структура диссертации. Диссертация изложена на 115 страницах компьютерного текста, иллюстрирована рисунками (30) и таблицами (15). Работа состоит из введения, обзора литературы, главы о материалах и методах исследования, глав, представляющих результаты собственных исследований и обсуждение результатов, выводов, практических рекомендаций, списка литера-

туры, включающего 178 литературных источников, из них 132 отечественных и 46 зарубежных авторов.

Личный вклад автора. Весь материал собран, обработан и проанализирован лично автором.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Исследование проведено с разрешения этического комитета Новосибирского государственного медицинского университета (протокол №14 от 21.05.2010 г.). Морфологическое исследование образцов опухоли проведено на кафедре патологической анатомии Новосибирского государственного медицинского университета (зав. кафедрой - д.м.н, академик РАМИ В.А. Шкурупий). Иммунологическое исследование проведено в иммунологической лаборатории Государственного Новосибирского областного клинического диагностического центра (зав. лабораторией - Т.В.Климова). Оперативное лечение рака гортани проводилось в оториноларингологическом отделении Городской клинической больницы №1 (зав. отделением - д.м.н., проф. А.Б. Киселев).

Объект исследования: образцы рака гортани (Т. ^'СМ0) от 65 мужчин после оперативного лечения в возрасте 65,9 ± 4,7 лет. Больные раком гортани были разделены на две группы: 1-я группа контроля 28 человек (56,9 %) и 2-я группа исследования 37 человек (43,1 %). Больные 1-й группы контроля иммунотерапии не получали. Пациенты 2-й группы исследования получали курс им-му но стимуляции препаратом Ронколейкин (интерлейкин-2 человека рекомби-нантный) по схеме: до оперативного лечения 1,25 мг подкожно. Пациенты каждой группы были разделены на подгруппы соответственно стадиям опухолевого процесса (табл. 1).

Таблица 1

Распределение больных раком гортани в зависимости от стадии опухолевого роста и возраста

Группы Подгруппы

№1 ТмК0М0 №2 Т3М0М0 №3 Т4Ы0М0

количество объектов исследования средний возраст пациентов количество объектов исследования средний возраст пациентов количество объектов исследования средний возраст пациентов

1-я (контрольная) группа 12 (43 %) 55,42 ± 4.23 10(36%) 61,0±3,69 6 (21 %) 65,17±2,71

2-я группа (исследования) 12 (33 %) 54,58 ± 3,51 15(40%) 63,0±3,96 10(2%) 62,0±4,83

Для светооптического исследования образцы рака гортани фиксировали в 10 % растворе нейтрального формалина, обезвоживали в серии спиртов возрас-

тающей концентрации и заключали в парафин. На санном микротоме готовили парафиновые серийные срезы толщиной 5-6 мкм [Перов IO.JL, Саркисов Д.С, 1996]. После депарафинизации их окрашивали гематоксилтгном Майера, эозином, п кропи ном и изучали под микроскопом Axio Star (Carl Zeiss, Германия).

Определяли гистологические типы рака гортани: альвеолярный, акантоти-ческий, трабекулярный, солидный, скиррозный (Классификация ВОЗ, 2005).

Исследовали клеточный состав воспалительного инфильтрата. По преобладанию определенного типа воспалительных клеток выделяли лимфоцитарный, плазмоцитарный, смешанный (лимфоцитарно-плазмоцитарный) инфильтрат.

Изучали интенсивность клеточной реакции стромы, которая была оценена по P. Paavolainen (1970): 1 степень (сильная) - наличие густого инфильтрата из лимфоцитов и плазматических клеток в строме и окружности опухоли во всех секторах опухоли; 2 степень (умеренная) - наличие интенсивной очаговой или умеренной диффузной клеточной инфильтрации; 3 степень (слабая) - умеренная очаговая или слабая диффузная клеточная инфильтрация; 4 степень (отсутствует) - клеточной инфильтрации в строме не выявлено.

Для сравнения иммунологического статуса проводилось иммунологическое исследование здоровых 25 мужчин возраста 65,9 ± 4,7 лет (2-я контрольная группа).

Иммунологическое исследование включало: CD - тигшрование клеток периферической крови, проводилось на тест системе «Сорбент» (Россия) с использованием стандартного набора моноклональных и поликлональных антител: Т-лимфоцитов - CD 8, В-лимфоцитов - CD 20, лимфоцитов - натуральных киллеров - CD 16, CD 56) («Вектор-бэст», Новосибирск). Определение функциональной активности нейтрофилов: в лунку планшета вносили 100 мкл ге-паринизированной крови и 50 мкл зимозана, тщательно перемешивая, выдерживали в термостате в течение 40 ми» при 37 °С. Из капли крови готовили мазок, окрашивали по Романовскому-Гимза. Подсчитывали фагоцитарный индекс: на 100 нейтрофилов - количество фагоцитировавших нейтрофилов. Определение микробицидной активности нейтрофилов проводился с помощью теста восстановления нитросинего тетразолия (НСТ-тест). По 0,05 мл гепаринизирован-ной крови вносили в две лунки планшета. В одну лунку добавляли 0,02 мл раствор Хэнкса и 0,02 мл 0,2 % раствора нитросинего тетразолия («спонтанный HCT тест»), в другую - 0,02 мл 0,02 % раствора HCT и 0,02 мл 0,01 % раствора зимозана в качестве стимулятора («индуцированный HCT тест»). Планшеты инкубировали при 37°С в течение 30 мин, делали толстые мазки на предметных стеклах. Мазки фиксировали в метиловом спирте в течение 3 мин. Ядра клеток окрашивали кармином при 37°С в течение 30 мин. В мазке под увеличением х 1000 подсчитывали число нейтрофилов (Нф), содержащих включения восстановленного HCT - диформазана. Всего считали 200 сегментоядерных и па-лочкоядерных Нф, результат выражали в проценте диформазан-позитивных Нф. Коэффициент функционально метаболической активности (КФМА) определен отношением спонтанного HCT теста к индуцированному HCT тесту.

Определение концентрации интерлейкина-6 выполнялись на тест-системах ProCon IL-6 (ООО «Протеиновый контур», С.-Петербург). Результаты имму-ноферментного анализа регистрировали на вертикальном фотометре Multiskan МСС 340 («Labsystems Оу», Финляндия) при длине волны 492 нм.

Иммунологические пробы проводились до оперативного лечения, на 15, 30 сутки и через 6 месяцев после введения рекомбинантного IL-2 человека.

Обработка статистической информации проводилась на базе персонального компьютера Pentium-IV. Все собранные в ходе исследования сведения были размещены в электронных таблицах MS Excel 2000.

Вариационные ряды для каждого признака подвергались изучению характера распределения. Проверка распределения на нормальность проводилась с использованием тестов Колмогорова-Смирнова и Шапиро-Уилка. В случае обнаружения нормального закона в распределении значений признака перед сравнением средних показателей выполнялась проверка равенства дисперсий в выборочных совокупностях, для чего вычислялся критерий Левена [Медик В.А., 2001].

При выявлении различий средних величин двух групп вычислялся критерий Стьюдента (t), критерий хи-квадрат (у?). В случае, если при вычислении критерия хи-квадрат среди ожидаемых чисел оказывались значения меньше 5, для определения достоверности различий использовался точный критерий Фишера. При сравнении параметрических показателей до и после лечения использовался Т-тест для парных значений; непараметрических — критерий Манна-Уитни.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Морфологическая структура рака гортани у пациентов обеих групп была представлена плоскоклеточным раком различной степени дифференцировки. Плоскоклеточный рак (92,3%); ороговевающий рак - 31 (47,7%), неороговева-юший рак - 29 (44,6%), рак из папилломы - 3 (4,4%), преинвазивный рак (in situ) - 2 (3,3%).

У пациентов 1-й контрольной группы в 1-й подгруппе (Т, ,N0M0) наблюдали высокую степень дифференцировки рака гортани в 11 случаях (91,7 %) и во 2-й группе исследования в 1-й подгруппе (T12N0M0) - в 9 случаях (75 %). Гистологические типы рака гортани были представлены: альвеолярным - 9 пациентов (75%), акантотическим - 3 пациента (25%) типом строения. У пациентов в 1-й (контрольной) группе, 1-й подгруппе (Т, 2N0Mq) лимфоцитарная инфильтрация была определена в 4 случаях (33,3 %), лимфо-плазмоцитарная - в 4 случаях (33,3 %), плазмоцитарная - в 2 случаях (16,7 %), в 2 случаях (16,7 %) клеточная инфильтрация в строме отсутствовала.

У больных во 2-й группе (исследования), 1-й подгруппе (Т, ,N0M0) лимфоцитарная инфильтрация была обнаружена у 6 пациентов (50 %), лнмфо-

плазмоцитарная - у 3 папиентов (25 %), плазмоцитарная - V 3 пациентов (25 %).

У пациентов в 1-й подгруппе рака гортани (Т, 2 Мс) 2-й группы (исследования), получивших цитокинотерапию, в 50 % наблюдений выявлен лимфо-цитарный характер клеточной инфильтрации стромы. Пациенты с отсутствием клеточной реакции стромы не выявлены.

Интенсивность клеточной реакции стромы опухоли у больных 1-й (контрольной) группы 1-й подгруппы (Ти2М0М0) была оценена как сильная у 3 больных (25 %), как умеренная - у 3 больных (25 %), слабая -у 4 больных (33,3 %). Интенсивность клеточной реакции стромы опухоли во 2-й группе (исследования) 1-й подгруппе (Т, 2К(1М0) была оценена как сильная у 6 больных (50 %) и как умеренная - у 6 больных (50 %). Гистологический тип опухоли был представлен - альвеолярным у 8 пациентов (66,7%), акантотическим у 4 пациентов (33,3%) типом строения.

У пациентов 2-й группы (исследования) 1-й подгруппы (Т, 2Ы0М0) после цитокинотерапии наблюдали более интенсивную клеточную инфильтрацию стромы опухоли, которая носила преимущественно лимфоцитарный характер, что морфологически демонстрировало усиление местного противоопухолевого иммунитета.

У пациентов 1-й (контрольной) группы 2-й подгруппы (Т,1\'0МП) смешанная лимфо-плазмоцитарная инфильтрация была определена в 4 случаях (40 %), лимфоцитарная - в 2 случаях (20 %), плазмоцитарная - в 2 случаях (20 %), отсутствие клеточной реакции стромы определено у 2 пациентов (20 %). Во 2-й группе (исследования) 2-й подгруппе (Т3ТЧ0М0) в 53,3 % наблюдений (8 пациентов) выявили лимфоцитарную клеточную инфильтрацию стромы, плазмоци-тарную - в 4 случаях (26,7 %), смешанную лимфо-гшазмоцитарную - у 3 пациентов (20 %).

Интенсивность клеточной инфильтрации стромы у пациентов 1-й (контрольной) группы 2-й подгруппы (Т3М0М0) была оценена как умеренная - в 4 случаях (40 %), как сильная в 2 случаях (20 %), слабая - у 2 пациентов (20 %), отсутствовала - у 2 пациентов (20 %). Гистологический тип опухоли был представлен - альвеолярным типом у 3 пациентов(30%), акантотическим - у 4 пациентов (40%), трабекулярным - у 3 пациентов (30%). Интенсивность клеточной инфильтрации стромы во 2-й группе исследования 2-й подгруппе (Т3К0М0) оценена как сильная (1 степень) у 7 пациентов (46,6 %) и как умеренная (2 степень) - у 6 пациентов (40 %), слабая (3 степень) - у 2 пациентов (13,3 %). Гистологические типы рака гортани были представлены: альвеолярным - 7 пациентов (46,7%), акантотическим - 5 пациентов (33,3%), трабекулярным - 3 пациентов (20%).

Морфологическое исследование образцов опухоли рака гортани в 1-й (контрольной) группе 3-й подгруппе (Т^СМ0) выявило смешанную (лимфо-

плазмоцитарную) инфильтрацию во всех 6 случаях (100 %). Гистологический тип опухоли был представлен — альвеолярным типом у 1 пациента (16%), акан-тотическим - у 2 пациентов (34%), трабекулярным - у 3 пациентов (50%). Во 2-й группе исследования 3-й подгруппе (Т4М0М0) в 9 случаях выявлена смешанная (лимфо-плазмоцитарная) инфильтрация (90 %), в 1-м случае выявлен лимфо-цитарный характер клеточной реакции стромы опухоли (10 %). Интенсивность клеточной реакции стромы у пациентов 1-й (контрольной) группы 3-й подгруппы (Т41М0М0) была оценена как умеренная - в 4 случаях (67 %), как сильная - в 2 случаях (33 %). Интенсивность клеточной реакции стромы во 2-й группе (исследования) 3-й подгруппе (Т41Ч0М0) была оценена как умеренная - у 6 пациентов (60 %) и как сильная у 4 пациентов (40%). Гистологический тип опухоли был представлен - альвеолярным типом у 3 пациентов (30%), акантотическим - у 4 пациентов (40%), трабекулярным - у 3 пациентов (30%).

Согласно полученным данным, можно заключить, что после цитокиноте-рапии у пациентов с раком гортани 2-й группы (исследования) в 1-й подгруппе (Т, 2К0М0) и во 2-й подгруппе (Т^М,,) наблюдалась более интенсивная клеточная инфильтрация стромы опухоли (1-я степень - 50 % и 2-я степень - 50 %), которая носила в 100 % лимфоцитарный характер. Таким образом, цитокинотера-пия способствовала усилению местного противоопухолевого иммунитета, которое выражалось в повышении интенсивности клеточной реакции стромы и увеличении количества лимфоцитов в составе клеточного инфильтрата.

У больных 2-ой группы (исследования) 1-й подгруппы (Т, 2М0М0) до оперативного лечения количество СО 20 - лимфоцитов было большим на 34%, клеток на 19% в сравнении с величинами аналогичных показателей у больных в 1-й (контрольной) группе, 1-й подгруппе (Т] 2М0МЦ); количество показателей СО 8-лимфоцитов было большим в сравнении с таковыми показателями у здоровых лиц на 24%, СО 20-лимфоцитов - на 34 %, ТЖ клеток - на 67%. У пациентов 2-й контрольной группы 1-й подгруппы (Т,.2М0М0) количество СО 8-лим-фоцитов было большим в сравнении с таковыми показателями у здоровых лиц на 30%, СО 20-лимфоцитов - в 2,3 раза, клеток - в 3,6 раза (рис. 1).

За период наблюдения у пациентов 1-й (контрольной) группы 1-й подгруппы (Т, „М,,М0) при стабильных показателях абсолютного содержания лейкоцитов и лимфоцитов периферической крови с 15-х суток до 6 месяцев наблюдали увеличение показателей СО 8 - лимфоцитов на 11%, СО 20 - лимфоцитов - на 25%, МК клеток - на 35%. У пациентов во 2-й группе (исследования) 1-й подгруппе (Т, ,КТ0М0) в этом же периоде наблюдения количество СО 8-лимфоцитов уменьшилось - на 16%, СО 20-лимфоцитов уменьшилось - в 2,5 раза, ЫК клеток - в 3,4 раза.

К 6 месяцу у пациентов в 1-й (контрольной) группе 1-й подгруппе (Ть 2]М0М0) наблюдали увеличение содержания СО 8 - лимфоцитов на 26%, СО 20-лимфоцитов - в 2,4 раза и МК-клеток в 2,8 раз в сравнении с величинами параметров у здоровых лиц. У больных 2-й группы (исследования) 1-й подгруп-

пы (Т] 2Ы0М0) после применения 1Ь2 все три показателя не имели достоверных отличий в сравнении с величинами аналогичных параметров у здоровых лиц.

1Ь-2 цитокинотерапии при раке гортани Т] 2К0М0

У больных 2-ой группы (исследования) 2-й подгруппы (Т3Ы0М0) до оперативного лечения количество СБ 20 - лимфоцитов было большим на 18%, МК клеток - на 19% в сравнении с величинами аналогичных показателей у больных 1-й (контрольной) группы 2-й подгруппы (Т3М0М0); у пациентов в 1-й (контрольной) группе, 2-й подгруппе (Т3ТМ0М0) количество показателей СО 8 - лимфоцитов было большим в сравнении с таковыми показателями у здоровых лиц на 42%, СО 20-лимфоцитов - на 21 %, N¡4. клеток - на 31 %. У пациентов 2-й контрольной группы 1-й подгруппы количество СО 8-лимфоцитов было большим в сравнении с таковыми показателями у здоровых лиц на 42%, СО 20-лимфоцитов - на 35%, МК клеток - на 44%.

У пациентов 1-й (контрольной) группы 2-й подгруппы (!'3М0М(.) наблюдали с 15-х суток до 6 месяцев увеличение показателей: С08 -лимфоцитов — на 34%, СО 20-лимфоцитов - на 24%, ИК клеток - на 10%. У пациентов 2-й группы (исследования) 2-й подгруппы (Т3М0М0) после применения 1Ь-2 наблюдали уменьшение показателей в период с 15-х суток до 6 месяцев СО 20-лимфоцитов - в 2 раза; ЫК клетки - на 24%. К 6 месяцу у пациентов в 1-й (контрольной) группе 2-й подгруппе (Т,К0М0) в сравнении с величинами аналогичных параметров у здоровых лиц наблюдали увеличение содержания СО 8-лимфоцитов на 36%, СО 20-лимфоцитов - на 46% и МК-клеток - на 42%.

У пациентов во 2-й группе (исследования) 2-й подгруппе (Т3Ы0М0) количество СО 8-лимфоцитов было большим на 23%, СО 20-лимфоцитов - на 43%, МК-клеток - в 2,6 раза в сравнении с величинами аналогичных параметров у

здоровых лиц, что подтверждало наличие выраженных и стойких изменений противоопухолевой иммунной реакции и позволило сделать вывод, что применение 1Ь-2 при раке гортани Т^0М0 не привело к восстановлению иммунологических показателей до таковых у здоровых лиц.

У больных 1-й группы (контроля) 3-й подгруппы (Т4М0М0) до оперативного лечения количество СЭ 8 — лимфоцитов было большим на 14%, количество СБ 20-лимфоцитов было меньшим на 49%, N К-клеток было меньшим на 18% в сравнении с величинами аналогичных показателей у больных во 2-й группе (исследования), 3-й подгруппе (Т4М0М0). У пациентов в 1-й (контрольной) группе, 3-й подгруппе (Т(Т\70М0) количество показателей СО 8 — лимфоцитов было большим в сравнении с таковыми показателями у здоровых лиц на 36%, СО 20-лимфоцитов - на 30 %, клеток на 34%. У пациентов 2-й группы исследования 3-й подгруппы (Т N„N1^ количество СО 8 - лимфоцитов было большим в сравнении с таковыми показателями у здоровых лиц на 27%, СО 20-лимфоцитов в 2.8раза, МК клеток на 46%.

У больных 1-й (контрольной) группы 3-й подгруппы (Т4Ы0М0) с 15-х суток до 6 месяцев содержание СО 20-лимфоциты увеличилось на 30%, Т<[К клетки - на 22%. У больных 2-й группы (исследования) 3-й подгруппы (Т,М0М0) с 15-х суток до 6 месяцев наблюдали увеличение количества СО 8-лимфоци-тов - на 38% и КК клеток на - 37%, уменьшение количества СО 20 — лимфоцитов - на 21%.

Таким образом, результаты СО типирования клеток периферической крови у больных раком гортани свидетельствовали об отличии реакции иммунной системы у пациентов во 2-й группе (исследования) при применении 1Ь-2 в зависимости от стадии заболевания. В 1-й подгруппе (Т] 2И0М0) применение ТЬ-2 позволяло достичь нормализации изучаемых субпопуляций Т-лимфоцитарного звена. У больных во 2-й (Т3>10М0) н 3-й подгруппе (Т4Т<Г0М0) относительное содержание клеток — эффекторов, обладающих цитолитическими свойствами, было повышено по сравнению с аналогичными показателями у здоровых лиц, что может указывать на отсутствие влияния применения рекомбинантного 1Ь-2 человека на состояние лимфоцнтарного звена противоопухолевого иммунного ответа.

У пациентов 1-й группы (контроля) 1-й подгруппы (Т, ,М0М0) в сравнении с величинами аналогичных показателей у пациентов 2-й группы (исследования) 1-й подгруппы (Т] 2М,.М0) до оперативного лечения наблюдали увеличение фагоцитарного числа (ФЧ) на 15%, фагоцитарного индекса (ФИ) - на 16%; в сравнении с величинами аналогичных параметров у здоровых лиц было выявлено у пациентов 1-й группы (контроля) 1-й подгруппы (Т] 2Ы0М0) увеличение ФЧ на 44%, ФИ - на 45%; и пациентов 2-й группы (исследования) 1-й подгруппы (Т].21^0М0) увеличение ФЧ на 34%, ФИ на 35%.

У пациентов в 1-й группе (контроля) 1-й подгруппе (Т N Мд) в период с 15-х суток до 6 месяцев наблюдали увеличение ФЧ на 25%; ФИ в этот пери-

од наблюдения уменьшился на 32%. К 30 суткам наблюдали дисбаланс между фагоцитарной способностью и микробицидной активностью нейтрофилов: на фоне сохранения высокой фагоцитарной активности (фагоцитарное число-62,17±3,7%, фагоцитарный индекс - 53,5±7,6 усл.ед.) при этом микробицндная активность нейтрофилов уменьшалась (КФМА составлял 0,42±0,11).

У пациентов во 2-й группе исследования 1-й подгруппы (Т, в пе-

риод с 15-х суток до 6 месяцев фагоцитарное число было меньшим на 20%, фагоцитарный индекс - на 33%. К 30 суткам наблюдалось уменьшение функциональной активности Нф: ФЧ - 31,3±3.8%, ФИ- 48,6±10,2 усл.ед, КФМА -0,36±0,07). К 30 суткам состояние фагоцитарного звена у пациентов 2-й группы (исследования) 1-й подгруппы (ТЬ21Ч0М0) в сравнении с аналогичными параметрами у здоровых лиц не имело существенных отличий. Достигнутый результат носил стойкий характер. У пациентов 2-й группы (исследования) 1-й подгруппы (Т1,2К0М0) к 6 месяцу признаков повышения нейтрофильной активности не выявлено.

При сравнении показателей фагоцитарного звена иммунитета у пациентов

1-й группы (контроля) 2-й подгруппы (Т.К0М0) и 2-й группы (исследования)

2-й подгруппы (Т31Ч0М0) до оперативного лечения выявили: у пациентов в 1-й группе контроля увеличение ФЧ на 15%, ФИ - на 11 %. В сравнении с величинами аналогичных параметров у здоровых лиц до оперативного лечения у пациентов 1-й группы (контроля) 1-й подгруппы (ТД.М0) было выявлено увеличение ФЧ на 45%, ФИ - на 44%, у пациентов 2-й группы (исследования) 1-й подгруппы (Т3Ы0М0) увеличение ФЧ на 35%, ФИ на 37%.

У пациентов в 1-й группе контроля 2-й подгруппе (Т3К[0М0) с 15-х суток до 6 месяцев ФЧ увеличилось на 25%, ФИ за этот же период уменьшился на 32%, в сравнении с величинами аналогичных параметров у здоровых лиц и у пациентов 2-й группы (исследования) 2-й подгруппы (Т3И0М0) показатель ФЧ был увеличен в 2 раза, ФИ - на 38%.

Во 2-й группе (исследования) 2-я подгруппе (Т3М0М0) в период с 15-ти суток до 6 месяцев наблюдали уменьшение фагоцитарного числа на 36%, ФИ снизился на 31%. В сравнении аналогичными параметрами у здоровых лиц достоверных расхождений не выявили.

У пациентов 1-й группы (контроля) 3-й подгруппы (Т4ЬГ0М0) в сравнении с пациентами 2-й группы (исследования) 3-й подгруппы (Т4М0М0) до оперативного лечения было выявлено: увеличение ФЧ на 5%, ФИ - на 20%, в сравнении с величинами аналогичных показателей у здоровых лиц до оперативного лечения у пациентов 1-й группы (контроля) 3-й подгруппы (Т4К0М0) было выявлено увеличение ФЧ на 23%, ФИ - на 27%; у пациентов 2-й группы (исследования)

3-й подгруппы ('Ш0М0) увеличение ФЧ - на 27%, ФИ - на 16%.

В 1 -и группе (контроля) 3-й подруппе (Т4К0М0): в период с 15-х суток до 6 месяцев наблюдали уменьшение ФЧ на 29%, ФИ - на 25%.

Во 2-й группе (исследования) 3-й подгруппе (Т4М0М0): в период с 15-х суток до 6 месяцев наблюдали уменьшение фагоцитарного числа на 13%. Достоверного изменения фагоцитарного индекса не наблюдалось.

Таким образом, применение 1Ь-2 при раке гортани ТД1Ч0М0 оказывало активирующее влияние на фагоцитарное звено, но повышенная фагоцитарная активность не сопровождается сопоставимым увеличением микробицидной активности нейтрофилов .что свидетельствует о незавершенном фагоцитозе.

У больных раком гортани по мере прогрессирования заболевания наблюдалась тенденция к повышению микробицидной активности Нф на фоне сохранения их высокой фагоцитарной активности.

Применение 1Ь-2 при раке гортаниТ, 2Н0 М0сопровождалась достоверным уменьшением микробицидной и фагоцитозной активности Нф. При раке гортани ТИМ применение 111-2 также приводило к уменьшению функциональной и фагоцитозной активности Нф. При раке гортани Т4Ы0М0 цитокинотерапия сопровождалась активацией фагоцитоза, но без увеличения микробицидной активности фагоцитов.

Исследование концентрации 1Ь-6 при раке гортани (Т^0М0) при применении рекомбииаитного 1Ь-2 человека. У пациентов 1-й группы (контроля) 1-й подгруппы (Т^^Мц) в сравнении с величиной аналогичного параметра у пациентов 2-й группы (исследования) 1-й подгруппы (Т.2М0М0) до оперативного лечения концентрация 11,-6 была большей на 15%, в сравнении с величиной аналогичного параметра у здоровых лиц - в 6 раз; в сравнении с величиной аналогичного параметра у пациентов 2-й группы (исследования) 1-й подгруппы (Т, 2К(1М0) - в 5 раз. У пациентов в 1-й контрольной группе 1-й подгруппе к 15-м суткам наблюдалось уменьшение концентрации 1Ь-6 в сравнении с величиной аналогичного параметра у здоровых лиц в 4,4 раза, в сравнении с пациентами 2-й группы исследования 1-й подгруппы - в 3,9 раз. На 30-е сутки концентрация 1Ь-6 в обеих группах продолжала уменьшаться и соответствовала величине аналогичного параметра у здоровых лиц (табл.2).

У пациентов 1-й группы (контроля) 2-й подгруппы (Т3М0М0), концентрация 1Ь-6 в сравнении с величиной аналогичного показателя у пациентов 2-й группы (исследования) 2-й подгруппы (Т31Ч0М0) до оперативного лечения отличий не выявлено, в сравнении с аналогичным параметром у здоровых лиц до оперативного лечения у пациентов 1-й группы (контроля) 2-й подгруппы (Т3Ы0М0) было выявлено увеличение данного показателя в 9,6 раз, у пациентов 2-й группы (исследования) 2-й подгруппы (Т^0М0) - в 9,25 раз. К 15-м суткам наблюдалось снижение концентрации 1Ь-6 в обеих группах: у пациентов в

1-й контрольной группе 1-й подгруппе - в 3,8 раза, во 2-й группе исследования

2-й подгруппе — в 6 раз. На 30-е сутки концентрация 1Ь-6 в обеих группах продолжала уменьшаться, но только у пациентов во 2-й группе (исследования) 2-й подгруппы (Т3Ы0М0) она соответствовала величине аналогичного параметра у здоровых лиц.

Таблица 2

Изменение концентрации 1Ь-6 при раке гортани и применении реком-бинантного 1Ь-2 человека (иг/мл)

Группы Подгруппы

№1 Т N М 1-2 0 0 №3 ТД.М,,

До оперативного лечения 15 сутки 30 сутки До оперативного лечения 15 сутки 30 сутки До оперативного лечения 15 сутки 30 сутки

Группа здоровых лиц 29,6±2,12

1-я (контрольная) группа 175,3± 68,7* 40,7± 18,2* 26.2± 8,3* 285.2± 18,7* 76,7 ± 33,8* 58,8 ± 12,4* 267,4± 24,5* 171 ± 50,4* 188,2± 56,4*

2-я группа (исследования) 148,3+ 72,33* 38,5± 19,1* 18,5± 8,8* 273,8 ± 43.2* 44,9 ± 9,5* 28.8 ± 8,2* 250.5± 60,7* 120,8 ± 24,9* 56,2± 188,2*

Примечание:

* — р<0,05 — достоверные различия средних величин со здоровыми лицами.

У пациентов 1-й группы (контроля) 3-й подгруппы (Т4ТЧ()М0), в сравнении у пациентов 2-й группы (исследования) 3-й подгруппы (ТД;1М0) концентрации 11.-6 до оперативного лечения была большей на 7%. В сравнении с величиной аналогичного параметра у здоровых лиц до оперативного лечения было выявлено увеличение концентрации 1Ь-б у пациентов 1-й группы (контроля) 3-й подгруппы (ТДЛУ в 9,0 раз и у пациентов 2-й группы (исследования) 3-й подгруппа (Т4НЛу - в 8,5 раз. К 15-м суткам наблюдалось снижение концентрации 1Ь-6 у пациентов в обеих группах: у пациентов в 1-й контрольной группе 3-й подгруппе - в 1,6 раза, во 2-й группе исследования 3-й подгруппе - в 2,1 раз. К 30-е суткам концентрация 1Ь-6 в обеих группах продолжала уменьшаться. У пациентов во 2-й группе (исследования) 3-й подгруппы (Т3^М0) превышала величину аналогичного параметра у здоровых лиц в 1,9 раза.

Таким образом, применение 1Ь-2 при раке гортани привело к уменьшению концентрации сывороточного 1Ь-6, выявленного у пациентов 2-й группы (исследования) во 2-й (Т,1Ч0М0) и 3-й (Т4М0М0) подгруппах. Снижение концентрации провоспалительного цнтокина (1Ь-6) в сыворотке крови свидетельствовало о редукции воспалительной реакции в послеоперационном периоде, и, следовательно, к снижению риска гнойно-воспалительных осложнений в послеоперационном периоде.

выводы

1. Применение рекомбинантного IL-2 человека при раке гортани (T,_2N0M0) сопровождалось в 100% наблюдений лимфопитарным перитуморозным инфильтратом.

2. Использование рекомбинантного IL-2 человека при раке гортани

(Т NM) усиливало интенсивность клеточного воспалительного инфиль-

4 1-3 0 О7 ^

трата в строме опухоли - в 50% наблюдений наолюдалась сильная 1-я степень клеточной инфильтрации.

3. Использование при раке гортани ('Г, ,N0M0) рекомбинантного

IL-2 человека приводило к изменению системной противоопухолевой иммунной реакции:

- увеличению содержания CD 8- лимфоцитов, CD 20-лимфоцитов, NK клеток в периферической крови до оперативного лечения с последующим их уменьшением (к 6 месяцу);

- увеличению фагоцитарной и микробицидной активности нейтрофилов периферической крови до оперативного лечения, с последующей (к 6 месяцу послеоперационного периода) нормализацией этих показателей.

4. Применение рекомбинантного IL-2 человека при раке гортани

Т, 4N0M0 привело к снижению к 30 суткам концентрации сывороточного

IL-6, что уменьшало риск гнойно-воспалительных осложнений в послеоперационном периоде.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Применение рекомбинантного интерлейкина-2 человека в комплексе комбинированного лечения может быть рекомендовано при раке гортани T,_2N0M0.

2. Применение при раке гортани рекомбинантного интерлейкина-2 человека целесообразно в предоперационным период с целью усиления лимфоцитар-нарной инфильтрации опухолевого узла.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Шаталов И.Д., Киселев В.В., Репьев A.A., Киселев А.Б. Оказание специализированной помощи при злокачественных опухолях гортани в г. Новосибирске // Российская оториноларингология. 2010. №2. С.140-143, автора - 0,13 п. л.

2. Шаталов И.Д., Киселев А.Б., Андриенко JI.A. Особенности иммунологической реактивности у больных местно-распространёнными формами рака гортани (Tj 3N0M0)//Российская оториноларингология. 2010. № 3. С. 163-166, автора —0,17 пл.

3. Шаталов И.Д., Надеев А.П., Киселев А.Б. Патоморфологическая характеристика рака гортани при использовании рекомбинантного пнтерлейкина-2

человека /У Медицина и образование в Сибири: электронный журнал. 2012. №3.4 с., автора -0,17 п.л.

4. Шаталов И.Д., Киселев А.Б., Андриенко Л.А. Особенности иммунологической реактивности у больных местно-распространенными формами рака гортани (T1-3N0M0) // Российская оториноларингология. 2010. Приложение № 1. С.418-421, автора-0,17 п.л.

5. Шаталов И.Д., Киселев А.Б. Восприимчивость к иммуностпмулирую-щей терапии больных местнораспространенными формами рака гортани (Т1-3N0M0) // Сибирский онкологический журнал. Приложение № 1. Томск, 2010. С. 114, автора-0,06 п.л.

6. Шаталов И.Д., Надеев А.П., Киселев А.Б. Лимфоплазмоцитарная реакция стромы опухоли при раке гортани при применении цитокинотерапии // Проблемы саногенного и патогенного эффектов эндо- и экзоэкологического воздействия на внутреннюю среду организма : материалы XI Евразийского симпозиума по вопросам фундаментальной и прикладной медицины. Чолпон-Ата, 2012. С. 165-167, автора - 0,13 п.л.

7. Шаталов И.Д., Киселев А.Б. Отдаленные результаты хирургического лечения больных раком гортани в Новосибирске и Новосибирской области // Ави-ценна-2009 : сборник материалов ежегодной конкурс-конференции студентов и молодых ученых. Новосибирск.2009. С. 302 - 303, автора - 0,13 п.л.

8. Шаталов И.Д., Киселев А.Б. Эффективность иммуностимулирующей терапии в условиях in vitro у больных местно-распространенными формами рака гортани (T1-3N0M0) // Перспективы научно-практической оториноларингологии : сборник материалов межрегиональной научно-практической конференции оториноларингологов Сибири и Дальнего востока. Благовещенск, 2010 (выпуск 8). С.144-146, автора-0,19 п.л.

9. Шаталов И.Д., Киселев А.Б. Иммуностимулирующая цитокин-терапия больных местно-распространенными формами рака гортани(Т1-ЗЫ0М0) // Основные направления оториноларингологии : сборник статей межрегиональной научно-практической конференции оториноларингологов. Барнаул, 2010. С.136-139, автора-0,25 п.л.

10. Шаталов И.Д., Киселев А.Б., Ефремов A.B. Влияние IL-2 цитокинотерапии на лимфоплазмоцитарную инфильтрацию опухолевого узла при раке гор-таниалов // Сборник материалов межрегиональной научно-практической конференции оториноларингологов, посвященной 75-летию НЕМУ Росздрава и кафедры оториноларингологии. Новосибирск, 2010. С.93-97, автора-0,21 п.л.

11. Шаталов И.Д. Киселев А.Б., Кожевников B.C. Лимфоплазмоцитарная инфильтрация местно распространенного рака гортани Т, 2N(jM0 после цитокинотерапии рекомбинантным IL-2 человека // Современные технологии в оториноларингологии : сборник статей межрегиональной научно-практической конференции оториноларингологов. Барнаул, 2011. С. 145-150, автора-0,25 п.л.

12. Шаталов И.Д., Киселев А.Б., Кожевников B.C. Влияние IL-2 цитокинотерапии на системный и местный противоопухолевый иммунитет больных

местно распространенным раком гортани Т]-4К0Ма // Актуальные вопросы оториноларингологии : материалы межрегиональной научно-практической конференции оториноларингологов Сибири и Дальнего Востока. Благовещенск, 2011. С.176-181, автора-0,25 п.л.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

Нф — нейтрофилы

1Ь-2 — нтерлейкин-2 1Ь-6 — интерлейкпн-6

КФМА — коэффициент функциональной метаболической активности НСТ-тест — тест восстановления нитросинего тетразолия

Подписано в печать 04.10.2012 г. Формат 60 х 84 / 16 Бумага офсетная. Гарнитура Times. Ризография Усл. печ. л. 1,0. Тираж 100 экз. Изд. № 230 п. Оригинал-макет изготовлен издательством «Снбмедиздат» НГМУ г. Новосибирск, ул. Залесского, 4 Тел.: (383) 225-24-29. E-mail: sibmedisdat@rarnbler.ru Отпечатано в типографии НГМУ г. Новосибирск, ул. Залесского. 4. Тел/факс: (383) 225-24-29

Актуальность проблемы

Глобальный устойчивый рост заболеваемости и смертности населения всех стран мира от злокачественных опухолей и связанные с этим значительные социально-экономические потери обоснованно позволяют рассматривать противораковую борьбу как одну из наиболее актуальных проблем здравоохранения. Несмотря на снижение смертности от некоторых опухолей, в целом летальность от рака характеризуется медленным, но стабильным увеличением [Хрусталева Е.В.,2002 Антонив В.Ф.,2002, Ольшанский В.0.,2008,].

Согласно концепции развития здравоохранения России, злокачественные заболевания относятся к группе наиболее социально значимых болезней, в значительной степени определяющих качество трудового потенциала общества [Ушаков С.В.,1992; Антонив В.Ф.,2002; Ольшанский В.0.,2008]. В Российской Федерации рак гортани в структуре онкологической патологии по частоте встречаемости занимает пятое место и относится к распространенным злокачественным новообразованиям. Более 65% больных раком гортани - лица трудоспособного возраста [Алферов В.С.,1993, Ольшанский В.0.,2008].

Разработка эффективных методов лечения рака гортани является одной из актуальных задач современной медицины. Изучение клинической значимости ряда морфологических признаков рака гортани дает возможность использовать их при выборе метода лечения и прогноза заболевания. Установлено, что степень дифференцировки, гистологический тип опухоли, паратуморозная диссеминация, гликозаминогликаны и лимфоплазмоцитарная инфильтрация стромы опухоли являются объективными критериями злокачественности, определяющими наряду с такими клинико-анатомическими факторами как локализация и стадия процесса, результаты лечения и прогноз заболевания [Лапшина Т.А. и соавт.,2010].

Согласно современным представлениям, накопление в строме опухоли Т- и В- лимфоцитов, плазматических клеток, макрофагов, обусловленное специфическими антигенами, является местным морфологическим выражением противоопухолевого иммунитета [Лапшина Т.А. и соавт., Кухарев Я.В. и соавт.,2010].

Доказано благоприятное прогностическое значение лимфоплазмоцитарной инфильтрации стромы рака гортани [Вержбицкий Г.В., 1983; Ьагашоге С.Е., 2001], описаны наблюдения дистрофических изменений опухолевых комплексов в зоне контакта с лимфоплазмоцитарным инфильтратом [Алферов В.С.,1995; И^т СС, 2011].

Учитывая вышеуказанный феномен, представляется актуальным изучить возможности усиления лимфоцитарной инфильтрации стромы раковой опухоли гортани применением рекомбинантного интерлейкина -2 (1Ь-2) человека. Известно, что 1Ь-2 направленно влияет на рост, дифференцировку и активацию Т- и В- лимфоцитов. От присутствия 1Ь-2 зависит развитие цитолитической активности натуральных киллеров. 1Ь-2 вызывает образование лимфокин-активированных киллеров и активирует опухоль-инфильтрирующие клетки (№ЛС-001810, утверждено 06.02.08 №01-11/5-08).

В настоящее время селективная активация Т-клеточного противоопухолевого иммунитета рассматривается как наиболее перспективный подход в лечении онкологических больных [Курилин В.В. и соавт.,2010]. Успешное использование в онкологии препаратов рекомбинантного 1Ь-2 человека в качестве компонента комбинированной терапии, химиоиммунотерапии и адаптивной иммунотерапии при раке почки, мочевого пузыря, меланоме, колоноректальном раке, опухолях головного мозга послужили базой для планирования исследования.

Цель исследования Изучить патоморфологические проявления местного и системного противоопухолевого иммунного ответа при местнораспространенных формах рака гортани (Т^Г^оМо) и при применении рекомбинантного интерлейкина-2 человека.

Задачи исследования

1. Изучить гистологические типы и особенности клеточного состава воспалительного инфильтрата в строме опухолевого узла местнораспространенного рака гортани (Т^Г^Мо) при использовании рекомбинантного интерлейкина-2 человека.

2. Изучить интенсивность клеточного воспалительного инфильтрата в строме опухолевого узла местнораспространенного рака гортани (Т^ 4К0М0) при использовании рекомбинантного интерлейкина-2 человека.

3. Исследовать влияние рекомбинантного 1Ь-2 на фагоцитарное и лимфоцитарное звено Т-клеточного противоопухолевого иммунного ответа при раке гортани (Т^МоМо).

4. Исследовать концентрацию 1Ь-6 у пациентов с местнораспространенной формой рака гортани (Т].41ЧоМо) при использовании рекомбинантного 1Ь-2.

Научная новизна

Впервые показано усиление стромальной лимфоцито-плазмоцитарной инфильтрации в раковой опухоли гортани (Т]з1ЧоМо) при применении рекомбинантного 1Ь-2 человека.

Впервые продемонстрировано, что воздействие рекомбинантного 1Ь-2 человека вызывает изменение Т-клеточного противоопухолевого иммунитета при раке гортани (ТьзТЧоМо): в лимфоцитарном звене -увеличение количества СЭ 8-лимфоцитов, В-лимфоцитов, клеток естественных киллеров периферической крови до оперативного лечения; фагоцитарном звене - увеличение нейтрофильной активности до оперативного лечения, с нормализацией исследованных показателей к 6 месяцу после оперативного удаления опухоли.

При применении рекомбинантного 1Ь-2 человека при раке гортани (ТмИоМо) наблюдается снижение концентрации 1Ь-6 в плазме крови, что способствует уменьшению развития воспалительных осложнений в послеоперационном периоде.

Практическая значимость работы

Результаты исследования используются в учебном процессе на кафедре патологической анатомии Новосибирского государственного медицинского университета в разделе «Общие вопросы опухолевого роста».

Включение в морфологический анализ опухолевого узла рака гортани, описания клеточной стромальной лимфоцитарно-плазмоцитарной инфильтрации внедрено в практику патологоанатомического отделения Городской клинической больницы № 1 (г. Новосибирск).

Изучение клеточной реакции стромы раковой опухоли гортани и системной лимфоцитарной реакции в ответ на селективную активацию Т-клеточного противоопухолевого иммунитета рекомбинантным 1Ь-2 человека позволяет обосновать применение 1Ь-2 больным местно распространенным раком гортани Т].зКоМ0. На основании полученных данных, селективная активация Т-клеточного противоопухолевого иммунитета рекомбинантным 1Ь-2 человека введена в практику предоперационной подготовки больных раком гортани Т^Г^Мо в оториноларингологическом отделении Городской клинической больницы № 1 (г. Новосибирск).

Апробация результатов исследования

Результаты работы доложены и обсуждены на следующих научных конференциях:

- Ежегодная конкурс-конференция студентов и молодых ученых «Авиценна-2009» (Новосибирск, 2009)

- V Региональной конференции молодых ученых-онкологов им. академика РАМН Н.В. Васильева «Актуальные вопросы экспериментальной и клинической онкологии» (Томск, 2010) заседании Новосибирского научного общества оториноларингологов,

Межрегиональной научно - практической конференция оториноларингологов «Основные направления оториноларингологии» (Барнаул, 2010)

- Юбилейная межрегиональная научно-практическая конференция оториноларингологов, посвященная 75-летию Новосибирского государственного медицинского университета и кафедры оториноларингологии (Новосибирск, 2010).

Публикации

По теме диссертации опубликовано 12 научных работ, в том числе в изданиях рекомендованных ВАК- 3.

1. Шаталов И.Д., Киселев В.В., Репьев A.A., Киселев А.Б. Оказание специализированной помощи при злокачественных опухолях гортани в г.Новосибирске // Российская оториноларингология. 2010. №2. С.140-143, автора-0,13 п.л.

2. Шаталов И.Д., Киселев А.Б., Андриенко JI.A. Особенности иммунологической реактивности у больных местно-распространёнными формами рака гортани (Ti3NoMo) // Российская оториноларингология. 2010. № 3. С.163-166, автора - 0,17 пл.

3. Шаталов И.Д., Надеев А.П., Киселев А.Б. Патоморфологическая характеристика рака гортани при использовании рекомбинантного интерлейкина-2 человека // Медицина и образование в Сибири: электронный журнал. 2012. №3. 4 е., автора - 0,17 п.л.

4. Шаталов И.Д., Киселев А.Б., Андриенко JI.A. Особенности иммунологической реактивности у больных местно-распространенными формами рака гортани (T1.3N0M0) // Российская оториноларингология. 2010. Приложение № 1. С.418-421, автора - 0,17 п.л.

5. Шаталов И.Д., Киселев А.Б. Восприимчивость к иммуностимулирующей терапии больных местнораспространенными формами рака гортани (Tj^NoMo) // Сибирский онкологический журнал. Приложение № 1. Томск, 2010. С.114, автора - 0,06 п.л.

6. Шаталов И.Д., Надеев А.П., Киселев А.Б. Лимфоплазмоцитарная реакция стромы опухоли при раке гортани при применении цитокинотерапии // Проблемы саногенного и патогенного эффектов эндо- и экзоэкологического воздействия на внутреннюю среду организма: материалы XI Евразийского симпозиума по вопросам фундаментальной и прикладной медицины. Чолпон-Ата, 2012. С.165-167, автора-0,13 п.л.

7. Шаталов И.Д., Киселев А.Б. Отдаленные результаты хирургического лечения больных раком гортани в Новосибирске и Новосибирской области // Авиценна-2009 : сборник материалов ежегодной конкурс-конференции студентов и молодых ученых. Новосибирск,2009. С. 302 - 303, автора - 0,13 п.л.

8. Шаталов И.Д., Киселев А.Б. Эффективность иммуностимулирующей терапии в условиях in vitro у больных местно-распространенными формами рака гортани (T1.3N0M0) // Перспективы научно-практической оториноларингологии: сборник материалов межрегиональной научно-практической конференции оториноларингологов Сибири и Дальнего востока. Благовещенск, 2010 (выпуск 8). С.144-146, автора - 0,19 п.л.

9. Шаталов И.Д., Киселев А.Б. Иммуностимулирующая цитокин-терапия больных местно-распространенными формами рака гортани (T1.3N0M0) // Основные направления оториноларингологии : сборник статей межрегиональной научно-практической конференции оториноларингологов. Барнаул, 2010. С.136-139, автора - 0,25 п.л.

10. Шаталов И.Д., Киселев А.Б., Ефремов A.B. Влияние IL-2 цитокинотерапии на лимфоплазмоцитарную инфильтрацию опухолевого узла при раке гортаниалов // Сборник материалов межрегиональной научно-практической конференции оториноларингологов, посвященной 75-летию НГМУ Росздрава и кафедры оториноларингологии. Новосибирск, 2010. С.93-97, автора-0,21 п.л.

11. Шаталов И.Д. Киселев А.Б., Кожевников B.C. Лимфоплазмоцитарная инфильтрация местно распространенного рака гортани T^NoMo после цитокинотерапии рекомбинантным IL-2 человека // Современные технологии в оториноларингологии: сборник статей межрегиональной научно-практической конференции оториноларингологов. Барнаул, 2011. С. 145-150, автора - 0,25 п.л.

12. Шаталов И.Д., Киселев А.Б., Кожевников B.C. Влияние IL-2 цитокинотерапии на системный и местный противоопухолевый иммунитет больных местно распространенным раком гортани Ti.4N0M0 // Актуальные вопросы оториноларингологии: материалы межрегиональной научно-практической конференции оториноларингологов Сибири и Дальнего Востока. Благовещенск, 2011. С.176-181, автора - 0,25 пл.

Объем работы. Диссертация изложена на 115 страницах компьютерного текста, содержит 15 таблиц, 30 рисунков. В работе использованы 178 литературных источников, из них - 132 отечественных, 46 - зарубежных авторов.

Материал собран и проанализирован лично автором.

Положения, выносимые на защиту

1. Использование рекомбинантного IL-2 человека при раке гортани T1.3N0M0 усиливает стромальную лимфоцитарно-плазмоцитарную инфильтрацию опухолевого узла.

2. Интенсивность клеточной лимфоцитарно-плазмоцитарной инфильтрации в строме опухоли при использовании рекомбинантного IL-2 человека является критерием выраженного местного противоопухолевого иммунного ответа.

3. Применение при раке гортани рекомбинантного IL-2 человека модулирует системный противоопухолевый иммунный ответ.

Выводы

1. Применение рекомбинантного 1Ь-2 человека при раке гортани (Т^ИоМо) сопровождалось в 100% наблюдений лимфоцитарным перитуморозным инфильтратом.

2. Использование рекомбинантного 1Ь-2 человека при раке гортани (Т^зМоМо) усиливало интенсивность клеточного воспалительного инфильтрата в строме опухоли - в 50 % наблюдений отмечалась сильная 1-я степень клеточной инфильтрации.

3. Использование при раке гортани (Т].2^Мо) рекомбинантного 1Ь-2 человека приводило к изменению системной противоопухолевой иммунной реакции:

- увеличению содержания СБ 8-лимфоцитов, СБ 20-лимфоцитов, ИК-клеток в периферической крови до оперативного удаления опухоли с последующим их уменьшением (к 6 месяцу);

- увеличению фагоцитарной и микробицидной активности нейтрофилов периферической крови до оперативного удаления опухоли, с последующей (к 6 месяцу послеоперационного периода) нормализацией этих показателей.

4. Применение рекомбинантного 1Ь-2 человека при раке гортани ТмИоМо привело к снижению к 30 суткам концентрации сывороточного 1Ь-6, что уменьшало риск гнойно-воспалительных осложнений в послеоперационном периоде.

Практические рекомендации

1. Применение рекомбинантного интерлейкина-2 человека в комплексе комбинированного лечения может быть рекомендовано при раке гортани Т^оМо.

2. Применение при раке гортани рекомбинантного интерлейкина-2 человека целесообразно в предоперационный период с целью усиления лимфоцитарнарной инфильтрации опухолевого узла.