Автореферат и диссертация по медицине (14.03.06) на тему:Патогенетическое обоснование новых подходов к метаболической коррекции стрессорных и химически индуцированных повреждений

004612312

Савлуков Александр Иванович

ПАТОГЕНЕТИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ НОВЫХ ПОДХОДОВ К МЕТАБОЛИЧЕСКОЙ КОРРЕКЦИИ СТРЕССОРНЫХ И ХИМИЧЕСКИ ИНДУЦИРОВАННЫХ ПОВРЕЖДЕНИЙ

14.03. 06 - фармакология, клиническая фармакология 14. 03. 03 - патологическая физиология

Автореферат диссертация на соискание ученой степени доктора медицинских наук

1 1 НОЯ 2010

Уфа-2010

004612312

Работа выполнена в ГОУ ВПО «Башкирский государственный медицинский университет» Росздрава

Научные консультанты:

доктор медицинских наук, профессор

доктор медицинских наук, профессор

Дамир Ахметович Еникеев Владимир Александрович Мышкин

Официальные оппоненты:

Заслуженный деятель науки РФ,

доктор медицинских наук, Зарудий Феликс Срульевич

профессор

доктор медицинских наук, профессор Ларионов Леонид Петрович

доктор медицинских наук, профессор Долгих Владимир Терентьевич

Ведущая организация:

ГОУ ВПО Челябинская государственная медицинская академия, г. Челябинск.

Защита диссертации состоится «_»_2010 г. в_часов на заседании Диссертационного совета Д 208.102.03 при Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Башкирский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию РФ» по адресу:450000, г. Уфа, ул. Ленина, д. 3.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО УГМА Росздрава по адресу: 450000, г. Уфа, ул. Ленина, д. 3. с текстом автореферата на сайте академии www.usma.ru

Автореферат разослан «_»_2010 г.

Ученый секретарь совета по защите докторских диссертаций,

профессор, доктор медицинских наук Г.Х. Мирсаваева

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования. Известно, что деятельность современного человека осуществляется в условиях возрастания экстремальности общей и профессиональной экологической среды, когда организм нередко подвергается воздействию значительных колебаний газового состава вдыхаемого воздуха, вредных химических веществ и других факторов, среди которых центральное место занимает острый стресс (Гусев Е.И., 2009; Крыжановский Г.Н., 2002, 2004, 2009; Курляндский Б.А. и соавт., 2002; Меерсон Ф.З., 1993; Новиков B.C. и соавт., 1998; Новицкий В.В. и соавт., 2004; Останенко Ю.Н. и соавт., 2002; Саноцкий И.В., 2004; Сафронов Б.А. и соавт., 2002; Судаков К.В., 2007).

Ответная реакция организма на действие чрезвычайного фактора характеризуется специфическими и неспецифическими проявлениями. Специфическая активация функций организма возникает, как следствие изменения параметра внутренней среды, в пределах допустимого генофенотипически закрепленного диапазона регулирования (Горизонтов П.Д. и соавт., 1993; Медведев В.И., 1982; Гусев Е.И., Крыжановский Г.Н., 2009). К неспецифическим относят механизмы, независящие от вида действующего фактора и являющиеся наиболее общей чертой компенсаторно-приспособительных реакций (Власов В.В., 1994; Крыжановский Г.Н., 2002; 2004; Меерсон Ф.З., 1993; Новиков B.C. и соавт., 1998).

Разрегуляция компенсаторной реакции с развитием экстремального состояния в условиях токсического поражения организма сопряжена, помимо энергетического дисбаланса, с неконтролируемой интенсификацией (или, напротив, подавлением активности) процессов свободно-радикального окисления и ПОЛ, нарушением систем АОЗ и повреждением биологических мембран (Голиков С.Н. и соавт., 1989; Куценко С.А., 2004; Лужников Е.А. и соавт., 2000; 2001; Метью Дж. Элленхорн, 2003; Мышкин В.А. и соавт., 2007; Sergeeva et all., 2003). В некоторых работах показана зависимость переносимости экстремальных воздействий (гипоксии, вредных химических веществ) от степени напряжения механизмов «ПОЛ - АОЗ»: количества ДК, ТК, ШО, ТБК-РП, активности каталазы, СОД, ГП, Г-SH (Новиков B.C. и соавт., 1998; Луйк М.А., 2002; Мышкин В.А. и соавт., 2005; 2007; Sergeeva et all., 2003; Алимов Н.И. и соавт., 2005; 2007; Меньшикова и соавт., 2006; 2008). В частности, установлено, что прогрессирующая интенсификация ПОЛ или подавление его активности сопряжены с ослаблением интегральной устойчивости организма к действию экстремального фактора среды (как правило, увеличением смертности). Наряду с этим, низкая переносимость экстремальных воздействий связана с возрастанием в крови активности трансаминаз - АлАТ, АсАТ, ЛДГ и ЩФ (Новиков B.C. и соавт., 1998; Мышкин В.А., 1998; Мышкин В.А. и соавт., 2005; 2007).

В то же время, применение в условиях гипоксии/ишемии для защиты организма (органов и систем) антиоксидантов - «ловушек радикалов» тонарола, а-токоферола, цистамина, некоторых производных пиримидина и бензимидазо-ла приводит к значительному падению содержания свободных радикалов и, как следствие, продуктов липопероксидации в поврежденных тканях. Однако ука-

занные препараты не устраняют угнетения ферментов АОЗ, что особенно ярко проявляется при длительном применении этих средств (Биленко М.В., 1989; Лукьянова Л.Д., 2004; Мышкин В.А. и соавт., 2001; 2002; 2007). Предполагалось, что компенсировать данный недостаток «ловушек радикалов» удастся применением препаратов - ферментов АОЗ, в частности - СОД и каталазы. Однако в ходе клинических испытаний эффективность таких препаратов, первоначально высокая в экспериментах in vitro и in vivo, оказалось далекой от ожидаемой, предположительного из-за их быстрого разрушения в крови и трудности проникновения в очаги поражения (Виноградов В.М. и соавт., 1982). Поэтому в данной работе для определения новых подходов к коррекции системы «ПОЛ - АОЗ» было принято решение, наряду с известными антиоксидантами, использовать комплексные препараты либо сочетания (комбинации) антиокси-дантов со специфическими антигипоксантами «прямого энергизующего действия».

Работа выполнялась в ГОУ ВПО «Башкирский государственный медицинский университет» (№ государственной регистрации 01200804869) и Уфимском НИИ медицины труда и экологии человека в рамках научно-исследовательской работы «Фармакология и токсикология перекисных повреждений мозга и печени» (1999-2001 г.г.), «Экспериментальное моделирование и поражение печени экотоксикантами» (2002-2004 г.г.), «Коррекция неблагоприятного воздействия эколого-профессиональных факторов» (стресс, гипоксия, экотоксиканты) (2005-2007 г.г.) по Государственной научно-технической программе Республики Башкортостан «Здоровье населения Республики Башкортостан: профилактика заболеваний, медицинские технологии, здоровый образ жизни» утвержденной Постановлением Правительства Республики Башкортостан № 250 от 23 декабря 2004 г. Раздел Vz «Окружающая и производственная среда и здоровье населения». Подраздел 126 «Экспериментальная коррекция переносимости эколого-профессиональных факторов».

Цель работы. Разработать эффективную метаболическую коррекцию стрессорных и химически индуцированных видов повреждений на основе комплексной оценки значимости нарушений ПОЛ, систем АОЗ и биоэнергетики в неспецифических составляющих патогенеза (токсогенеза). Задачи исследования:

1. Оценить влияние препаратов и соединений на свободно-радикальное окисление в модельных системах.

2. Изучить влияние сукцината оксиметилурацила на процессы перекисного окисления липидов, функционально-метаболические сдвиги в организме при остром иммобилизационном стрессе.

3. Исследовать антиоксидантные свойства и противогипоксическую активность тиетазола, сукцината 1,3,6-триметил-5-гидроксиурацила, референтных препаратов и их влияние на состояние систем перекисного окисления липидов, антиоксидáHTHOñ защиты при острой гипоксической гипоксии.

4. Разработать рациональный метод коррекции метгемоглобинемии, нарушений функционирования систем перекисного окисления липидов, анти-оксидантной защиты, митохондриальных ферментов и некоторых мета-

болических реакций при острой гемической гипоксии, моделируемой натрия нитритом.

5. Изучить гепатозащитную активность тиетазола и его защитно-восстановительную эффективность при совместном использовании с атропином при интоксикации фосфорорганическими соединениями.

6. Разработать модель свободно-радикальной патологии печени и способ коррекции выявленных повреждений.

7. Оценить перспективность использования исследованных препаратов при изучаемых видах повреждений.

Положения выносимые на защиту:

1. Фармакологическая коррекция стрессорных и химически индуцированных повреждений должна производиться с учетом патофизиологической значимости неспецифических составляющих патогенеза (токсогенеза).

2. ПОЛ представляет собой ключевое звено патогенеза (токсогенеза) в цепи: повреждение мембран - нарушение метаболизма и требует соответствующей фармакологической коррекции антиоксидантным действием независимо от того является ли оно первичным или носит вторичный характер.

3. Стресс-протекторный эффект достигается при раннем применении препаратов с антиоксидантным и метаболическим типом действия, предотвращающих начальные проявления патологического процесса.

4. Протекторный эффект производных бензимидазола и пиримидина (сукци-натпиримидиновьтх комплексов) связан с ослаблением (устранением) неспецифических составляющих патогенеза (токсогенеза) - ПОЛ и взаимосвязанных с ним нарушений функционирования антиоксидантных систем, ферментов цикла Кребса, глюкозомонофосфатного шунта, МАО, СДГ, систем молекул регуляторов и положительным влиянием на интегральную устойчивость организма к острому (подострому) действию стресс-факторов.

Научная новизна работы. Впервые в рамках комплексного подхода изучены процессы ПОЛ, АОЗ, целостности мембранного аппарата клеток, непосредственно после действия острой гемической/гипоксической гипоксии, острого иммобилизационного стресса, однократного и/или многократного введения в организм различных химических веществ - ГТХБ, трихлорбензола, этанола, карбофоса, трихлорметафоса и эффективности их коррекции фармакологическими средствами. Показано, что сочетанное применение производных пиримидина, обладающих антиоксидантными свойствами, с антигипоксантами прямого энергизующего действия имеет преимущество перед референтными антиоксидантами (тонарол, а-токоферол) и антигипоксантами (сукцинат натрия, мексидол), проявляющееся в большей эффективности и полноте коррекции метаболических нарушений.

Впервые выевлена взаимозависимость нарушений активности ферментов АОЗ и основных патофизиологических эффектов ПОЛ в печени при повреждающем действии гепатотоксических ядов, острого иммобилизационного стресса, острой гемической и отчасти острой гипоксической гипоксии, что доказывает его значимость, как общего звена патогенеза при действии факторов токсико-гипоксической природы.

Впервые обнаружено, что в условиях ОГеГ и метгемоглобинемии в полушариях головного мозга крыс подавление активности СДГ и МАО предшествует максимальному усилению интенсивности ПОЛ, что подтверждается соответствующим увеличением количества первичных и вторичных продуктов ПОЛ. На основе выявленной временной последовательности включения указанных механизмов в патофизиологический процесс, моделируемый нитритом натрия, разработан эффективный метод их коррекции, который заключается в сочетан-ном применении сукцината оксиметилурацила с цистамином.

Впервые установлено, что литиевая соль оксиметилурацила, в отличие от антиоксиданта тонарола, потенцирует защитный эффект метиленового синего при ОГеГ, моделируемой нитритом натрия. Обнаружен высокий противогипок-сический эффект комплексного соединения 1,3,6-триметил-5-гидроксиурацила с сукцинатом (коэффициент защиты препарата равен 3,15). Получены данные о стресс-протекторной активности комплексного соединения сукцината оксиметилурацила, сопоставимой по эффективности с мексикором.

Разработана модель цирроза печени, соответствующая критериям свободно-радикальной патологии. Впервые проведено сравнительное изучение ге-патопротекторной активности совместного применения оксиметилурацила с сукцинатом натрия (комплекс I) и мексикором (комплекс II) по сравнению с референтными препаратами. Применение препаратов ослабляет воспалительно-некротическое поражение печени, стабилизирует процессы ПОЛ, в значительной степени предупреждает прогрессирующее нарушение проницаемости мембран гепатоцитов, ослабляет гиперферментемию, снижение общего уровня АТФ, сопряженные с выживаемостью животных. Впервые на модели цирроза печени обнаружена более высокая метаболическая эффективность комплекса II по сравнению с гепатопротектором силимарином, оксиметилурацилом, мекси-долом (мексикором), сукцинатом натрия. Установлено, что применение комплекса II более эффективно восстанавливает активность ферментов АОЗ, окисление некоторых субстратов цикла Кребса, количество митохондриального белка и оказывает корригирующее действие на процессы ПОЛ в гепатоцитах.

Новым является установление возможности корригировать тиетазолом прооксидантное действие карбофоса в эритроцитах и гепатотоксический эффект трихлорметафоса. Среди комплексных соединений производных 6-метилурацила с янтарной, фумаровой, лимонной и аскорбиновой кислотами обнаружены препараты, обладающие антигипоксической активностью. В ряду производных 6-метилурацила выявлены вещества, обладающие антиоксидант-ной, антигипоксической и гепатопротекторной активностью.

Практическое значение работы. На основе изучения нарушений ПОЛ, активности ферментов АОЗ и метаболических процессов в органах и тканях экспериментально обоснованы рациональные методы коррекции стрессорных и химически индуцированных повреждений.

Полученные результаты могут быть использованы при разработке клинических рекомендаций по включению комбинаций оксиметилурацила с сукцинатом натрия или мексидолом в алгоритмы лечения токсических поражений печени при остром и хроническом течении патологического процесса.

Полученные результаты представляют интерес для дальнейших исследований по уточнению патофизиологических эффектов ПОЛ у животных с экспериментальной химической патологией.

Внедрение результатов исследования. Результаты исследования используются в лекционном курсе и практикуме на кафедрах патологической физиологии, биологической химии, фармакологии № 1 с курсом клинической фармакологии, общей хирургии, курсе токсикологии и медицинской защиты кафедры мобилизационной подготовки здравоохранения и медицины катастроф ГОУ ВПО «Башкирский государственный медицинский университет» Росздра-ва в следующих разделах обучения: патофизиология экстремальных состояний; механизм действия, патогенез и проявления токсического процесса при поражении токсичными модификаторами пластического обмена (полихлорирован-ные бифенилы); патофизиология гипоксии, стресса, печени, крови; механизм действия, патогенез и проявления токсического процесса при поражении ядовитыми техническими жидкостями; перекисное окисление липидов и антиокислительная защита; механизм действия, патогенез и проявления токсического процесса при поражении токсичными химическими веществами нейротоксиче-ского действия; антиоксиданты и антигипоксанты.

Результаты диссертационной работы внедрены в Республиканском центре хирургической гепатологии на базе Республиканской клинической больницы им. Г.Г. Куватова (г. Уфа). Комплексный патофизиологический подход используется в реабилитации пациентов с патологией печени после хирургических операций на органах гепато-билиарной системы. Оксиметилурацил и его комбинации с препаратами, содержащими сукцинат, применяются для коррекции нарушений уровня ПОЛ и функционально-метаболического состояния печени.

Апробация работы. Результаты исследования и основные положения диссертации доложены на: IX Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2002); Межрегиональной научно-практической конференции, посвященной 70-летию профессора Сафина И.А. (Уфа, 2002); VI Конгрессе международной ассоциации морфологов (Уфа, 2002); II съезде Российского научного общества фармакологов (Москва, 2003); X Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2003); Научной конференции «Основные общепатологические и клинические закономерности развития критических, терминальных и постреанимационных состояний. Принципы их коррекции» (Москва, 2003); 2-ой Международной конференции «Патофизиология и современная медицина» (Москва, 2004); VIII Международной научной конференции «Здоровье семьи - XXI век» (Гоа, Индия, 2004); Научной конференции «Реанимация и ее роль в современной медицине» (Москва, 2004); Российской научной конференции «Медико-биологические проблемы противолучевой и противохимической защиты» (Санкт-Петербург, 2004); Межрегиональной конференции, посвященной 70-летию кафедры патологической анатомии и патофизиологии БГМУ «Актуальные вопросы патологии» (Уфа, 2004); III Российском конгрессе по патофизиологии с международным участием «Дизрегуляци-онная патология органов и систем» (Москва,2004); Республиканской научной

конференции «Гигиена производственной и окружающей среды, охрана здоровья рабочих в нефтегазодобывающей и нефтехимической промышленности» (Уфа, 2004); IX Международной научной конференции «Здоровье семьи - XXI век» (Далянь, Китай, 2005); Всероссийской научно-практической конференции «Современные проблемы фармакологии и фармации» (Новосибирск, 2005); Межрегиональной научно-практической конференции с международным участием, посвященная 100-летию основателя кафедры патофизиологии БГМУ профессора В.А. Самцова «Типовые патологические процессы» (Уфа, 2005); 4-ой Российской конференции с международным участием «Гипоксия. Механизмы, адаптация, коррекция» (Москва, 2005); Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Современные проблемы медицины труда», посвященной 50-летию образования Уфимского НИИ медицины труда и экологии человека (Уфа, 2005); Юбилейной научной конференции Курского ГМУ и Черноземного научного центра РАМН, посвященной 70-летию КГМУ (Курск, 2005); Научно-практической конференции молодых ученых «Актуальные вопросы клинической и экспериментальной медицины» (Санкт-Петербург, 2006); Объединенном пленуме Российского и Московского научных обществ патофизиологов, Научного совета по общей патологии и патофизиологии РАМН и Минздравсоцразвития РФ, посвященный 85-летию Г.Н. Крыжановского (Москва, 2007); 5-ой Российской конференции с международным участием «Гипоксия. Механизмы, адаптация, коррекция» (Москва, 2008); 6-ом Всероссийском симпозиуме по проблемам боевого стресса «Механизмы стресса в экстремальных условиях деятельности» (Москва, 2008); Международном симпозиуме «Адаптационная физиология и качество жизни: проблемы традиционной и инновационной медицины», посвященной 80-летию H.A. Агаджаняна (Москва, 2008); Научной конференции «Новые технологии в анестезиологии - реаниматологии» (Москва, 2008).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 76 работ, в том числе: 7 статей в рецензируемых научных журналах и изданиях, 6 монографий, получены 5 патентов РФ на изобретения.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 323 страницах компьютерного текста, иллюстрирована 50 рисунками, содержит 49 таблиц. Состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, собственных данных, их обсуждения, выводов и списка литературы, включающего 663 источника, из которых 183 зарубежных.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Исследования выполнены на половозрелых крысах-самцах (6-8 месяцев), массой 200-250 грамм, а также мышах-самцах зрелого (6-8 месяцев) возраста массой 18-22 грамма.

Характеристика животных использованных в различных разделах работы представлена в таблице 1.

7/Таблица 1.

Характеристика животных, использованных для исследования

Раздел исследования Вид животных Количество животных

Опыт Контроль Всего

Моделирование экстремальных воздействий. Отработка методов исследования. мыши 18 18 36

крысы 24 24 48

Исследование антирадикальной, антиоксидантной активности производных пиримидина и их молекулярных комплексов в модельных системах крысы 17 12 29

Исследование выживаемости животных при интоксикациях, в условиях защиты организма: • ПХБ; • ФОС крысы крысы 64 72 30 35 94 107

Исследование системы «ПОЛ-АОЗ» в печени при иммобилизационном стрессе на фоне коррекции сукцинатом-ОМУ и мексидолом крысы 16 10 26

Исследование устойчивости организма, системы «ПОЛ-АОЗ» в органах при ОГГ на фоне коррекции производными пиримидина и бензимидазола мыши 84 88 172

крысы 72 32 104

Изучение резистентности организма, системы «ПОЛ-АОЗ», ОГеГ, моделируемой натрия нитритом на фоне комплексной коррекции мыши 324 146 470

крысы 146 78 224

Изучение системы «ПОЛ-АОЗ» в условиях хронической интоксикации крыс-самцов смесью совтола и этанола, коррекции антиоксидантами крысы 50 20 70

Исследование системы «ПОЛ-АОЗ» в условиях острой интоксикации крыс карбофосом и комплексной терапии крысы 70 36 106

Изучение системы «ПОЛ-АОЗ» и метаболических процессов в печени в условиях подострой интоксикации трихлорметафосом и фармкоррекции крысы 40 20 60

ВСЕГО мыши 426 252 678

крысы 571 297 868

Острый стресс воспроизводили путем иммобилизации животных в пластиковых цилиндрических «домиках» в течение 1-24 часов. Тяжесть системных и соматических проявлений стресса оценивали по изменению весовых коэффициентов надпочечников, печени (отношение массы органа к массе тела) и количеству лейкоцитов крови.

Модель ОГеГ создавали путем введения под кожу спины 4% раствора натрия нитрита мышам в дозах 180 и 250 мг/кг и крысам в дозе 90 мг/кг веса. Выбор доз был обусловлен предварительным титрованием натрия нитрита, а защитная эффективность препаратов изучалась на модели ОГег в соответствии с рекомендациями Фармакологического комитета РФ (Руководство по экспериментальному/доклиническому изучению новых фармакологических веществ. -М., 2005). Использовались следующие препараты: сукцинат натрия, порошок (производство ОАО «Реактив», Уфа); аминоянтарная кислота, порошок (лабо-

раторный синтез Института органической химии Уфимского НЦ РАН, Уфа); димеркаптоянтарная кислота, порошок (производство ОАО «Реактив», Уфа); фумаровая кислота, порошок (производство ОАО «Реактив», Уфа); лимонная кислота, порошок (производство ОАО «Реактив», Уфа); 2,3-дигидрогулоновая кислота, порошок (производство ОАО «Фармстандарт», Уфа); мексидол (этил-метилгидроксипиридина сукцинат), 5% раствор в ампулах по 2 мл (производство ООО МЦ «Эллара»); мексикор (этилметилгидроксипиридина сукцинат), в капсулах по 100 мг (ОАО МосХимФармПрепараты им. H.A. Семашко по заказу и лицензии ООО «ЭкоФармИнвест»); метилурацил, порошок белого цвета (ОАО «Октлово», Санкт-Петербург); 5-окси-6-метилурацил (ОМУ), порошок (лабораторный синтез Института органической химии Уфимского НЦ РАН, д.х.н. В.П. Кривоноговым, Уфа); комплекс сукцината с ОМУ, порошок (лабораторный синтез Института органической химии Уфимского НЦ РАН, д.х.н. В.П. Кривоноговым, Уфа); 1,3,6-триметил-5-гидроксиурацил, порошок (лабораторный синтез Института органической химии Уфимского НЦ РАН, д.х.н. В.П. Кривоноговым, Уфа); комплекс сукцината с 1,3,6-триметил-5-гидроксиурацилом, порошок (лабораторный синтез Института органической химии Уфимского НЦ РАН, д.х.н. В.П. Кривоноговым, Уфа); метиленовый синий - тетраметилтионина хлорид, кристаллический порошок (производство ОАО «Реактив», Уфа); цистамина гидрохлорид [бис-(0-аминоэтил) дисульфида гидрохлорид], порошок (лабораторный синтез Института органической химии Уфимского НЦ РАН, д.х.н. В.П. Кривоноговым, Уфа); тонарол (2,6-ди-трет-бутил-4-метилфенол), порошок (производство ОАО «Тонар», Нижнекамск, Республика Татарстан), соответствует стандартам химической чистоты «Bayer».

ОГГ (гипобарическую) моделировали путем «подъема» крыс в проточной барокамере с поглотителем С02, со скоростью 25 м/сек на высоту 11000 метров с последующим 30-минутным пребыванием животных на данной «высоте». Регистрировали продолжительность выживания (резервное время в минутах) и количество (процент) выживших животных. Основным критерием противоги-поксического эффекта в условиях данного вида гипоксии являлось увеличение продолжительности жизни животных по сравнению с контролем, который проводили параллельно для каждого опыта. При исследовании биохимических показателей на фоне гипоксии животных поднимали на «высоту» 8000 метров с пребыванием на ней в течение 30 минут. После спуска (со скоростью 50 м/сек) с высоты 8000 метров, крыс забивали путем погружения в жидкий азот с последующим выделением мозга, печени, миокарда. Органы сохранялись в сосуде Дьюара с жидким азотом до определения биохимических показателей, характеризующих активность процессов ПОЛ и состояние антиоксидантной системы. Препараты вводили внутрибрюшинно за 30 минут до подъема на высоту. Кроме производных пиримидина и их комплексов с дикарбоновыми кислотами использовали некоторые актопротекгоры - производные бензимидазола, в том числе известные, обладающие противогипоксической активностью: этомерзол (5-этокси-2-этилмеркаптобензимидазол гидрохлорид) - лабораторный синтез в Башгосмедуниверситете доц. М.В. Диановым, Уфа; соединение Б-16 [2-(3,4-дигидроксифенацилтио)-бензимидазол] - лабораторный синтез в Башгосмеду-

ниверситете проф. Ю.В. Строкиным, доц. М.В. Диановым, Уфа; бемитил (2-этилмеркаптобензимидазол гидробромид) - ФГУ СГТБ «Технолог», Санкт-Петербург; тиетазол калиевая соль 2-[1-(1,1-диоксотиетанил-бензимидазолил)-2-тио] уксусной кислоты - лабораторный синтез в Башгосмедуниверситете проф. В.А. Катаевым, Уфа; тиетазол литиевая соль 2-[1-(1,1-диоксотиетанил-бензимидазолил)-2-тио] уксусной кислоты - лабораторный синтез в Башгосмедуниверситете, проф. В.А. Катаевым, Уфа.

Для моделирования экстремальных токсических воздействий использовали химические вещества, обладающие выраженной гепатотоксичностью -смесь полихлорированных бифенилов, трихлорбензола и этанола, карбофос, трихлорметафос.

В качестве экспериментального воздействия, вызывающего цирротиче-ское поражение печени, использовали коммерческую смесь ПХБ («Совтол-10») и 10% этанол. На оливковом масле готовили 50% раствор «Совтола-10» и вводили крысам внутрижелудочно, из расчета 0,25 мл на 100 грамм массы тела, дважды в неделю в течение 28 суток. На протяжении всего опыта для питья животным давали 10% раствор этанола (патент РФ на изобретение № 2197018 от 16.02.2000 г.). В качестве средств коррекции использовали следующие препараты: оксиметилурацил (50 мг/кг), сукцинат натрия (50 мг/кг), мексидол (50 мг/кг), а также комплексы I (оксиметилурацил + сукцинат натрия) и II (оксиметилурацил + мексидол). Препараты и комплексы I и II вводили животным в режиме восстановительной коррекции через 7 суток после введения совтола 2 раза в неделю в течение 28 дней. Тестирование проводили по всему спектру показателей.

Экстремальное состояние, вызванное введением ФОС, моделировали карбофосом и трихлорметафосом. Карбофос вводили в дозе 320 мг/кг (0,9 ЛД50). Для этого использовали 50% препарат карбофоса. При тестировании определяли активность процессов ПОЛ, состояние антиоксидантной системы в эритроцитах у интактных и отравленных крыс на фоне коррекции бемитилом, этомер-золом, тиетазолом и атропином. Тестирование проводили на 14 сутки в постинтоксикационном периоде. В другой серии опытов исследовали эффективность коррекции нарушений в системе «ПОЛ - АОЗ» при острой интоксикации карбофосом. В качестве средств коррекции использовались производные бензими-дазола - бемитил (50 мг/кг), этомерзол (50 мг/кг), препарат Б-16 (50 мг/кг), тиетазол (50 мг/кг) и литиевую соль тиетазола (50 мг/кг). Дозы препаратов подбирались по результатам тестирования с учетом литературных данных.

Кроме карбофоса, из группы ФОС, использовался 50% раствор трихлор-метафоса (0-метил-0-этил-0,2,4,5-СН30 трихлорфенилтиофосфат). Токсикант вводили крысам через рот в дозе 47 мг/кг (0,2 БЬзо) ежедневно в течение 28 дней. Учитывая выраженное гепатотоксическое действие трихлорметафоса, ан-тиоксидантный эффект исследуемых препаратов сравнивали с действием сили-марина (карсила), проявляющего гепатопротекторную активность. В качестве средств коррекции системы «ПОЛ - АОЗ» и метаболических реакций печени были исследованы оксиметилурацил (50 мг/кг), сукцинат натрия (50 мг/кг), а также комплекс -1 (оксиметилурацил + сукцинат натрия).

Механизмы и эффективность фармакологической коррекции системы «ПОЛ - АОЗ» и метаболических нарушений оценивали по следующим показателям: антирадикальной активности соединений в модельных системах различной сложности; антиоксидантной эффективности соединений в модельных системах природного происхождения; накоплению продуктов ПОЛ в липидных экстрактах (ткани) головного мозга, миокарда, печени и эритроцитов; активности СОД, ГП и каталазы головного мозга, печени и эритроцитов; активности Г-6-ФДГ в цитоплазматической фракции печени и мозга; активности Na+-, К+-АТФ-азы в микросомальной фракции мозга; количественному гистохимическому выявлению активности СДГ, НАДФ-Н-ДГ, ЛДГ, Na+-, К+-АТФ-азы в ткани печени, МАО в ткани мозга и миокарда; активности сывороточных транса-миназ - АлАТ, АсАТ, а также активности ЛДГ; выживаемости животных при различных видах острой гипоксии и интоксикации химическими веществами.

Продукты ПОЛ (кетодиены, шиффовы основания) исследовали в липидных экстрактах головного мозга, миокарда, печени (May Н.Е. et Reed D.I., 1973; Tappel A.L., 1973; Fletcher B.L. et all, 1973), ТБК-РП по реакции с тиобарбиту-ровой кислотой (Стальная И.Д., Гаришвили Т.Г., 1977). Кетодиены определяли спектрофотометрически, шифровы основания - спектрофлуориметрическим методом (Волчегорский И.А. и соавт., 2000). Диеновые конъюгаты в эритроцитах определяли по 3. Плацеру и соавт., (1970). Антирадикальную активность соединений регистрировали методом хемилюминесценции в модельной системе инициированного окисления этилбензола по В.Я. Шляпинтоху и соавт., (1966). Метгемоглобин в крови оценивали по М.С. Кушаковскому (1966). Оценивали активность ряда ферментных систем в организме крыс. Каталазу определяли по М.И. Королюку и соавт., (1988); Г-6-ФДГ по I. Hock et Mclean, (1953); СОД по С. Beanchhamp et S. Fridovich, (1971); ГП по И.М. Мосолевой и соавт., (1975). Уровень Г-SH по методу Ф.Е. Путилиной (1982). Белок определяли по О. Lowry, (1951). Об активности Na+-, К+-АТФ-азы судили по разности неорганического фосфата полной среды и среды без ионов Na+ и К+ в присутствии строфантина (Т.Н. Толстухина, 1982). Для выделения субклеточных фракций гепатоцитов использовали метод дифференцированного центрифугирования, разработанный D. Jonson et all., (1967). Определение активности СДГ осуществляли по методу I. King, (1965), МДГ по S. Ochoa (1955). В органах крыс методами количественной гистохимии определяли следующие показатели: активность СДГ (КФ 1.3.99.1) по методу Нахлас (Берстон М., 1965; Пирс Э„ 1962), активность МАО (КФ 1.4.3.4), НАД-диафоразы (КФ 1.6.99.3) по методу Бер-стона (Берстон М.,1965; Журавлева Т.Б., 1978). Выявление Na+-, К+-АТФ-азы (КФ 3.6.1.4) проводили свинцовым методом по Wachstein et Meisell в модификации Fakguhar et Palade (Луппа X.,1980).

Статистическую обработку полученных результатов проводили с использованием стандартных методов по программе «Statistica-5,0» Windows-98. Для каждого ряда значений показателей вычисляли среднюю арифметическую, стандартную ошибку среднего. Различия считали достоверными при Р<0,05. Среднесмертельные дозы препаратов рассчитывали по методу Литчфилда-Уилкоксона.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Исследовано влияние нового комплексного соединения 5-гидрокси-6-метилурацила с сукцинатом (сукцинат-ОМУ) на некоторые системные эффекты острого иммсбилизационного стресс-синдрома, активность процессов ПОЛ, ферменты АОЗ печени, а также некоторые метаболические показатели крови в сравнении с референтным препаратом мексидолом. Через 1 час от начала иммобилизации наблюдается уменьшение массы надпочечника, сменяющееся в последующем прогрессирующим развитием его гипертрофии через 24 часа от начала тестирования. Напротив, со стороны печени с первых часов иммобилизации наблюдается снижение её массы с максимальным значением весового коэффициента органа через сутки (рис. 1 А, Б). Указанное изменение массы органов, сопровождается развитием лейкопении на 6 час иммобилизации, которое через 24 часа возвращается к контрольным значениям. В экспериментах на здоровых крысах мексидол повышал, а сукцинат-ОМУ несколько снижал массу печени. В фазу тревоги сукцинат-ОМУ усиливает, а мексидол сдерживает развитие компенсаторной гипертрофии печени. В то же время, оба препарата задерживают развитие гипертрофии надпочечников. Протекторный эффект препаратов сохраняется через 6 часов и 24 часа от начала иммобилизации. Сукци-нат-ОМУ и мексидол предупреждают стрессорную лейкопению через 1 час, но не через 6 часов иммобилизации. Сукцинат-ОМУ повышает количество лейкоцитов через 24 часа, а мексидол практически не влияет на развитие лейкопении. Развитие стресс-синдрома характеризуется повышением в ткани печени уровня ДК, падением активности СОД, развитием гиперферментемии, что выражалось повышением активности АлАТ, АсАТ, ЩФ, концентрации мочевины, повышением количества общего белка, при незначительных колебаниях показателей ЛДГ, креатинина, холестерина и триглицеридов (табл. 2). Применение сукци-ната-ОМУ и мексидола предупреждает стрессорную активацию ПОЛ, что подтверждается снижением в печени крыс количества ДК и частичного восстановления активности СОД - на 26,6% и 47,7% соответственно (табл. 2).

Рис. I.A. Влияние мексидола на динамику весовых коэффициентов печени

и надпочечника крыс при иммобилнзационном стрессе %

Рис. 1.Б. Влияние сукцината-ОМУ на динамику весовых коэффициентов печени и надпочечника крыс при иммобилизационном стрессе

Обозначения:

• К - контроль (здоровые крысы-100%);

• 1,3,5-печень; 2,4,6-надпочечник;

• * - Р<0,05 по сравнению с группой «контроль».

Таблица 2.

Влияние сукцината-ОМУ и мексидола на процессы ПОЛ и биохимические маркеры повреждения гепатоцитов при остром иммобилизацион-

иом стрессе

Параметры Норма Контроль Сукцинат-ОМУ Мексидол

М±ш Кратность отличия от нормы М±ш Кратность отличия от нормы М±ш Кратность отличия от нормы

ДК, Х=Д232 0,45±0,02 0,81 ±0,08* 1,78 0,46±0,03** 1,02 0,53±0,04** 1,17

ТБК-РП, нмоль/г 90,4±4,1 138,5±10,6* 1,53 102,3±8,8** 1,13 98,8±9,5** 1,09

СОД, отн.ед. /мг белка 3,83±0,13 1,02±0,12* 0,26 2,04±0,11** 0,53 2,84±0,06** 0,74

КАТ, ммоль/ мин/г белка 328±24 383±52 1,16 309±94,2 0,94 286±14 0,87

АлАТ, ммоль/ч ■ л 0,79±0,05 1,24±0,11* 1,56 0,87±0,04** 1,10 0,84±0,09** 1,06

АсАТ, ммоль/ч • л 2,17±0,09 3,41±0,1* 1,57 2,47±0,09** 1,13 2,52±0,07** 1,16

лдг, ммоль/ч • л 14,3±0,82 16,9 ±0,95 1,18 13,7±0,76** 0,81 15,2±0,87 1,06

ЩФ, ммоль/ч ■ л 2,77±0,12 3,94±0,09* 1,42 2,99±0,08** 1,08 3,12±0,10** 1,12

Мочевина, ммоль/л 180,7±13,2 290±13,8* 1,60 192,4±9,2** Д 1,15 225,5±8,8** Д 1,24

Общий белок, г/л 65,4±2,9 57,5 ±1,7* 0,87 63,2±1,5** 0,96 60,7±1,4 0,93

Креатинин, ммоль/л 47,4±2,2 49,1 ±2,4 1,03 51,5±1,6 1,08 46,6±2,7 0,98

Холестерин, ммоль/л 3,62±0,23 2,9±0,36 0,8 4,3±0,32 1,18 3,3±0,42 0,91

Триглнцериды, ммоль/л 1,23±0,07 1,0 ±0,12 0,87 0,88±0,09 0,71 1,10±0,14 0,89

Примечание:

• * - достоверное отличие показателя от нормы (Р<0,05);

• ** - достоверное отличие от контроля (Р<0,05);

• Д - достоверное отличие между группами ( Р<0,05). Сукцинат-ОМУ снижает увеличенную стрессом активность АлАТ, АсАТ

и ЩФ, приближая их к показателям интактных животных. Препарат оказывает корригирующее влияние на содержание в крови мочевины и общего белка: мочевина снижается, а белок возрастает, приближаясь к показателям здоровых крыс. Аналогичное действие оказывает мексидол.

Благоприятное действие сукцината-ОМУ на процессы ПОЛ в печени животных, подвергнутых стрессу, можно объяснить его антиоксидантными и мем-браностабилизирующими свойствами, а также способностью непосредственно

регулировать активность СОД в гепатоцитах. Выявленное под влиянием сукци-ната-ОМУ уменьшение гиперферментемии является следствием ингибирования ПОЛ и стабилизации мембран гепатоцитов. Предупреждение увеличения сывороточной активности ЩФ, возможно, обусловлено холекинетическим действием препарата и уменьшением отека печени.

Среди фармакологических средств, обладающих протекторными видами активности, важное место занимают производные бензимидазола, некоторые производные пиримидина и сукцинатпиримидиновые комплексы. Для исследования были выбраны актопротекторы - производные бензимидазола: бемитил, этомерзол, тиетазол, соединение Б-16 (2-[3,4-дигидроксифенацилтио]-бензимидазол), литиевая соль тиетазола; - пиримидина (ОМУ, соединение 1136), а также сукцинатпиримидиновые комплексы. Использована модель острой гемической (гипобарической) гипоксии.

В эксперименте на белых мышах-самцах, массой 18-24 г установлено, что по критерию продолжительности жизни высокой противогипоксической активностью обладают литиевая соль тиетазола и этомерзол (табл. 3).

Таблица 3.

Противогипоксический эффект (резервное время выживания мышей)

производных бензимидазола п Du ОГГ (М±ш, п=12)

Препараты Доза, Резервное время, % выживших жи-

мг/кг мин вотных

Контроль 8,8±1,32 13,3

Этомерзол 50 15,6±4,7* 55

Контроль 8,8±1,32 13,3

Бемитил 50 12,3±3,3 33,3

Контроль 8,8±1,32 13,3

Тиетазол 50 10,4±3,8 13,3

Контроль 6,4±2,0 12,5

Тиетазол литиевая соль 50 12,0±1,5* 33,3

Контроль 6,5±3,1 12,5

Соединение Б-16 50 11,6±4,0 27,2

Контроль 6,4±3,1 12,5

Оксибутират натрия 100 18,8±4,0** 50

Примечание:

• * - Р<0,05 достоверно по сравнению с группой «контроль»;

• ** - Р<0,01 достоверно по сравнению с группой «контроль».

Действие препаратов сопоставимо по эффективности с оксибутиратом натрия. В то же время, бемитил (50мг/кг), калиевая соль тиетазола (50 мг/кг) и соединение Б-16 (50 мг/кг) в данных условиях опыта оказались малоэффективными.

Механизм противогипоксического действия этомерзола, также как и других актопротекторов - производных бензимидазола, изучен пока недостаточно, однако, общность и однонаправленность их основных противогипоксических эффектов, позволяет предполагать и общий базальный механизм их действия.

Как известно, эти вещества обладают мембраностабилизирующими свойствами (Бобков Ю.Г и соавт., 1984 г.; Смирнов A.B., 1998; Семиголовский Н.Ю., 2000, 2004).

Производные пиримидина - ОМУ, литиевая соль ОМУ, соединение-1136 (1,3,6-триметил-5-гидроксиурацил), сукцинатпиримидиновые комплексы: сук-цинат-ОМУ, сукцинат 1,3,6-триметил-5-гидроксиурацил (соединение 1137) и комбинация пиримидинов с мексидолом оказывают различное влияние на «резервное время жизни» мышей в условиях ОГГ. (табл. 4)

Установлено, что литиевая соль ОМУ, соединение-1137, совместное применение ОМУ с мексидолом, в отличии от сукцината-ОМУ достоверно увеличивают «резервное время» жизни мышей. Так «резервное время жизни» на фоне литиевой соли ОМУ в 2,2 раза превышает контроль. Аналогичный показатель для соединения-1137 и мексидола выше чем в контроле в 3,3 раза и в 1,7 раза соответственно.

Таблица 4.

Продолжительность выживания (резервное время) мышей на фоне введения сукцината, мексидола, производных пиримидина и их сочетаний при

ОГГ (М±ш, п=12)

Препараты Доза, Резервное время, % выживших жи-

мг/кг мин вотных

Контроль 5,05±2,7 11,1

ОМУ литиевая соль 100 11,1±3,3* 27,2

Контроль 8,8+1,9 20

Сукцинат оксиметилурацила 100 8,6±2,4 20

Контроль 6,4±2,0 13,3

Препарат 1136 100 10,6±3,1 13,1

Контроль 6,4±2,0 11,1

Препарат 1137 100 21,4±2,5** 13,3

Контроль 6,6±0,88 27,2

Мексидол 50 11,2±0,9** 33,3

Оксиметилурацил 50 6,2±2,5 0

Мексидол+оксиметилурацил 50+50 18,6±3,0** 55

Контроль 6,6±0,88 27,2

Сукцинат 50 6,9±1,2 20

Оксиметилурацил 50 6,2±2,5 0

Сукцинат оксиметилурацила 50+50 10,0±5,5 33,3

Примечание:

• * - Р<0,05 достоверно по сравнению с группой «контроль»;

• ** - Р<0,01 достоверно по сравнению с группой «контроль».

Введение животным мексидола и ОМУ по-разному влияет на продолжительность жизни мышей. Мексидол увеличивает её почти в 2 раза, а оксиметилура-цил её не изменяет. В то же время эффективность сочетания двух препаратов (мексидол + оксиметилурацил) была самой высокой и достигала 55%. На фоне

литиевой соли ОМУ установлена 50% выживаемость, что свидетельствует о высокой активности препарата.

В экспериментах на крысах-самцах установлено, что пребывание животных в условиях высотной гипоксии (8000 метров) приводит к увеличению количества КТД и ТБК-РП. Действие ОГГ изменяет также показатели АОЗ в органах крыс - снижается активность СОД, особенно в печени (в 5 раз против контроля). В то же время каталазная активность практически не изменяется. В полушариях головного мозга снижение активности СОД у «гипоксических» крыс по сравнению с контрольными показателями достигает 2,4 раза.

Таблица 5.

Влияние производных бензимидазола на показатели ПОЛ и АОЗ в полу-

шариях головного мозга и печени крыс при ОГГ (М±т, п=8,)

Препараты, группы крыс КТД.Д232, усл. ед. опт. пл. ТБК-РП, мкм оль/г ткани Каталаза, моль/мин/г белка СОД, ед/мг белка

Полушария головного мозга

1. Контроль (интактные крысы) 0,202±0,016 66,4± 1,82 1,18±0,02 2,0±0,18

2. Контроль (гипоксия) 0,418±0,077* 98,2±2,10* 1,20±0,02 0,83±0,18*

3. Этомерзол + гипоксия 0,238±0,022** 71,0±2,0** 1,34±0,02 1,78±0,22**

4. Препарат Б-16 + гипоксия 0,298±0,012** 92,5±2,2* 0,98±0,12 0,88±0,12*

5. Тиетазол калиевая соль + гипоксия 0,282±0,018** 88,3±1,88* 1,10±0,04 0,89±0,16*

6. Тиетазол литиевая соль + гипоксия 0,302±0,012** 70,0±1,78** 1,10±0,06 1,02±0,16*

Печень

1. Контроль (интактные крысы) 0,415±0,025 22,65±2,34 328±24 4,66±0,18

2. Контроль (гипоксия) 0,660*0,033* 26,88±2,75 387±32 0,93±0,12*

3. Этомерзол + гипоксия 0,406±0,022* 26,5±2,40 366±33 4,0±0,13**

4. Препарат Б-16 + гипоксия 0,418±0,030** 24,6±3,40 303±44 1,18±0,20*

5. Тиетазол калиевая соль + гипоксия 0,445±0,044** 25,6±3,30 308±52 1,06±0,18*

6. Тиетазол литиевая соль + гипоксия 0,445±0,044** 23,3±4,10 310±28 1,12±0,22*

Примечания:

• * - Р<0,05 достоверно с группой «контроль» (интактные крысы);

• ** . р<0,05 достоверно с группой «контроль» (гипоксия).

Производные бензимидазола в условиях ОГГ (табл. 5) оказывают различное влияние на систему «ПОЛ - АОЗ» в органах крыс. Этомерзол в значительной степени предупреждает активацию процессов ПОЛ и одновременно

увеличивает активность СОД: в мозге в 2 раза, в печени в 4,3 раза, незначительно снижая при этом каталазную активность (на 6 %). Сравнительное изучение антиоксидантной активности четырех актопротекторов - этомерзола, препарата Б-16, калиевой и литиевой соли тиетазола у крыс в условиях высотной гипоксии свидетельствует, что по показателю торможения активности ПОЛ препараты можно расположить в убывающей последовательности: этомерзол = литиевая соль тиетазола > препарат Б-16 « калиевая соль тиетазола. В то же время, эффективным средством коррекции нарушений активности антиокси-дантных ферментов является этомерзол.

В реализации антиоксидантных эффектов производных пиримидина и сукцинатпиримидиновых комплексов также присутствуют два компонента: торможение активности ПОЛ и предупреждение угнетения антиоксидантных систем. Исследованные препараты (соединения), с учетом действия на активности ПОЛ и факторы АОЗ, образуют убывающий ряд: препарат-1137 > сукцинат > препарат-1136 > сукцинат оксиметилурацила =оксиметилурацил.

С учетом актуальности изучения малофизиологической значимости нарушений прооксидантно-антиоксидантного равновесия в условиях гипоксии и метгемоглобинемии, а также разработки эффективных методов их коррекции, предпринята попытка комплексного исследования нарушений активности ПОЛ, состояния системы АОЗ и метаболических реакций при ОГеГ, моделируемой нитритом натрия.

Параллельно с оценкой эффективности их коррекции некоторыми лекарственными средствами, а также новыми производными пиримидина, сукцинат-пиримидиновыми комплексами и сочетанием производных пиримидина с анти-гипоксантами прямого энергезирующего действия. Защитная эффективность исследованных препаратов при ОГеГ представлена в табл. 6.

В отличие от метиленового синего (1-3 мг/кг), янтарная, димеркаптоян-тарная, фумаровая, оксиметилурацил-основание, сукцинат оксиметилурацила, соединение-1136, мексидол (мексикор) и тонарол не оказывают выраженного влияния на продолжительность жизни мышей при введении им смертельной дозы натрия нитрита. В то же время профилактическое введение мышам литиевой соли оксиметилурацила, соединения-1137, также как референтного препарата амтизола, увеличивает «резервное время» жизни животных. Противоги-поксическая активность установлена также у аминоянтарной кислоты и подтверждена для аскорбиновой кислоты. Противогипоксическая активность соединения-1137 (50 мг/кг) приближается к антидотному эффекту метиленового синего (в дозе 3 мг/кг).

Антирадикальная активность - информативная характеристика, позволяющая с физико-химических позиций существенно углубить понимание механизма действия биологически активных веществ. Поскольку окисление НЬ02 натрия нитритом происходит через взаимодействие радикала N0*2 с Ре2+ тема и регенерацией нитрит-иона (Шугалей И.В. и соавт., 1986 г.) ингибирующий эффект активных препаратов на накопление МеШЬ указывают на их антирадикальную активность.

Таблица 6.

Влияние исследуемых препаратов на продолжительность жизни мышей при ОГеГ, моделируемой натрия нитритом (М±т, п=8)

№ пп Препараты, шифры соединений Доза, Продолжительность жизни, мин

мг/кг М±т, контроль опыт %, контроль опыт Р

1. Сукцинат 50 23,0±2,5 24,1±3,16 100 102,1 <0,1

2. Аминоянтарная кислота 100 15,8±0,65 21,3±1,4 100 134,8 <0,01

3. Димеркаптоянтарная кислота 100 19,4±1,8 21,25±1,5 100 109,5 <0,1

4. Фумаровая кислота 25 25,8±1,1 20,7±2,0 100 80,2 <0,1

5. Аскорбиновая кислота 50 25,8±1,1 30,4±1,13 100 118 <0,05

6. Оксиметилурацил 25 15,4±0,9 18,3±1,6 100 118,8 <0,1

7. Сукцинат оксиметилурацила 100 15,6±1,7 16,8±0,7 100 107,6 <0,1

8. Оксиметилурацил литиевая соль 25 16,5±0,7 21,3+2,4 100 126,7 <0,05

9. Препарат-1136 триметил-5-гидроксиурацил 50 15,5±1,9 18,3±1,7 100 118 <0,1

10. Препарат-1137 триметил-5-гидроксиураццил+сукцинат 50 14,8±0,37 25,2±1,8 100 170,2 <0,001

11. Амтизол 50 17,6±0,4 20,4±0,4 100 150 <0,001

.12. Мексидол (мексикор) 50 17,6±0,4 18,3±1,2 100 103,9 <0,1

13. Тонарол 100 24,0±3,8 29,5±5,7 100 122,9 <0,1

14. Метиленовый синий 1 15,8±0,65 22,0±0,27 100 139,2 <0,001

3 15,8±0,65 30,67±5,39 100 194,1 <0,02

5 15,8±0,65 32,67±5,14 100 206,7 <0,01

Влияние препаратов на накопление МеШЬ оценивали в модельной системе окисления НЬС>2 натрия нитритом. Исследуемые препараты вводили в инкубационную смесь в конечной концентрации моль. Результаты представлены в табл. 7.

Среди 14 исследованных препаратов высокой активностью обладают аминоянтарная кислота, димеркаптоянтарная кислота, 2,3-дигидрогулоновая кислота, сукцинат-ОМУ и! соединение-1136. Препараты сравнения - метилено-вый синий и цистамина гидрохлорид проявляют наибольшую активность. Ме-тилурацил, мексидол малоактивны, а фумаровая и лимонная кислоты деметге-моглобинезирующей активностью не обладают.

Таблица 7.

Влияние исследуемых препаратов на накопление МеШЬ при окислении оксигемоглобнна натрия нитритом в модельной системе (отн. ед., М±т)

№ пп Препараты (соединения) Концентрация, моль/л Т-Т0 То

1. Сукцинат натрия МО"3 0

2. Аминоянтарная кислота 1-Ю"4 0,66±0,01

3. Димеркаптояитарная кислота 1-Ю"4 0,85±0,03

4. Фумаровая кислота МО"3 0

5. Лимонная кислота МО"3 0

6. 2,3-дигидрогулоновая кислота МО"5 0,88±0,07

7. Мексидол МО"4 0,32±0,04

8. Метилу рацил МО'3 0,39±0,08

9. Оксиметилурацил (5-окси-6-метилурацил) 5-10"6 0,47±0,05

10. Комплекс сукцинат оксиметилурацила 5-Ю"6 0,50±0,05

11. Соединение-1136 (триметил-5-гидроксиурацил) 5-10"6 0,49±0,12

12. Соединение-1137 (сукцинат + триметил-5-гидроксиурацил) 5-10"" 0,69±0,10

13. Метиленовый синий 5-Ю"6 1,32±0,03

14. Цистамина гидрохлорид 5'Ю"4 1,49±1,12

Примечание:

• Т0 - время окисления 50% НЬ в МеШЬ в контрольной пробе;

• Т - время окисления 50% НЬ в МеШЬ в опытной пробе.

В опытах на крысах исследовано деметгемоглобинезирующее действие препаратов на содержание МеШЬ в крови при ОГеГ моделируемой введением натрия нитрита (90мг/кг). Результаты представлены в табл. 8.

Таблица 8.

Влияние исследуемых препаратов на содержание метгемоглобина в крови

крыс при ОГеГ, моделируемой натрия нитритом (М±ш, п=8)

Препараты (соединения) Уровень МеШЬ (в % к общему НЬ)

1 час 3 часа

Гипоксия - контроль 59,5±1,1 46,2±1,5

Сукцинат натрия 58,2±1,2 46,8±1,8

Аминоянтарная кислота 32,6±1,4 26,1 ±2,5

Димеркаптояитарная кислота 43,6±2,0 16,5±1,6

Фумаровая кислота 56,9±2,4 44,6±2,0

Лимонная кислота 55,7±2,7 40,3±1,9

2,3-дигидрогулоновая кислота 47,2±1,3 34,0±1,4

Мексидол 52,8±3,2 39,6±2,8

ОМУ (5-окси-6-метилурацил) 46,5±1,3 25,0±1,6

Комплекс сукцинат+ОМУ 40,3±1,0 26,2±1,3

Соединение-1136 (1,3,6-триметил-5-гидроксиурацил) 40,2±1,8 18,5±1,2

Соединение-1137 (сукцинат+1,3,6-триметил-5-гидроксиурацил) 32,0±1,4 17,0±1,4

Метиленовый синий 16,2±0,9 12,5±1,2

Цистамина гидрохлорид 32,8±0,8 7,0±1,2

Примечание: * - статистически достоверное различие (Р<0,05) с контролем.

Аминоянтарная кислота, димеркаптоянтарная кислота, 2,3-дигидрогуло-новая кислота, оксиметилурацил, соединение-1136, сукцинат-ОМУ и соединение-1 137, также как референтные препараты снижают уровень MetHb (различия с контролем статистически достоверны). Активность метиленового синего и комплексных препаратов через 3 часа после введения токсиканта примерно одинакова, однако, в 1-й час тестирования она значительно выше у антидота.

При ОГеГ моделируемой натрия нитритом активируется СРО в качестве вторичного звена гипоксических расстройств. В то же время, избыточное усиление СРО может представлять и первичное звено патологии без видимых гипоксических проявлений. (Мышкин В.А., 1998; Оковитый C.B. и соавт., 2001). Антирадикальную активность соединений в системе «этилбензол - ледяная уксусная кислота» оценивали по величине константы К7, которую сопоставляли с К7 ионола - эталонного синтетического ингибитора СРО. Установлено, что оксиметилурацил, оксиметилурацил-литивая соль, сукцинат оксиметилурацила, соединения-1136, соединения-1137 проявляют высокую активность (ионольный эквивалент равен 1,13; 1,26; 3,78; 2,93 и 8,7 соответственно). В данной системе сукцинат не активен. В условиях ПОЛ инициированного аскорбатом более активны литиевая соль оксиметилурацила и соединение-1136. В системе спонтанного ПОЛ активны оксиметилурацил, сукцинат оксиметилурацила. Антиокислительная активность мексидола равна действию ионола, максимальная активность обнаружена у димеркаптоянтарной кислоты (табл. 9).

Таблица 9.

Антиоксидантная и антирадикальная активность препаратов в модельных

системах (М±т, п-6; инкубация 30 мин)

Препараты, их шифры Аскорбатзави-симое ПОЛ (ТБК-РП, мкмоль/г) Спонтанное ПОЛ (ТБК-РП, мкмоль/г) К, (л/моль/сек) к2 пр-та К? контр.

Контроле 1 0,117±0,009 0,014±0,007 -

Контроль-2 2,8±0,075* 5,35±0,04* (2,3±0,6)-104 1

Оксиметилурацил 0,668±0,02** 0,442±0,01 ** (2,6±0,3)-104 1,13

Оксиметилурацил-литиевая соль 0,134±0,004** 0,91±0,028** (2,8±0,2)-104 1,26-10"'

Сукцинат оксиметилурацила 1,264±0,02** 0,338±0,01** (8,7±0,5)-104 3,78

Препарат 1136 0,152±0,004** 0,992±0,02** (6,75±0,3)-104 2,93

Препарат 1137 1,121±0,004** 0,997±0,01** (2,0±0,6)'104 8,7

Мексидол 0,783±0,02** 0,423±0,01** - -

Димеркаптоянтарная к-та 1,057±0,05** 5,290±0,02 - -

Примечание:

• * - Р<0,05 по сравнению с «контролем-1»;

• ** . р<0,05 по сравнению с «контролем-2».

В патогенезе токсико-гипоксического поражения организма натрия нитритом, кроме метгемоглобинообразования, изменения структурно-метаболического статуса эритроцитов, активации СРО, подавления активности систем АОЗ клеток, важную роль играет прямое повреждающее действие яда на митохондриальные ферменты. Однако, в полушариях головного мозга указан-

ные нарушения протекают с различной интенсивностью, достигая максимума в различные временные интервалы после введения токсиканта в организм (Новицкий В.В. и соавт., 2004; Дерягина В.П., 2003; Мышкин В.А. и соавт., 2005). Исследование активности церебральной СДГ и МАО параллельно с количественным определением в головном мозге продуктов ПОЛ в одни и те же временные промежутки после введения натрия нитрита (90мг/кг) показало, что ферментативный сдвиг (СДГ-МАО) развивается уже через 2 часа и опережает по времени максимальный уровень накопления КТД, который выявляется через 6 часов. Возможно, это связано с локализацией основной части МАО на наружной мембране митохондрий в непосредственной близости к ферментным комплексам, катализирующих реакции тканевого дыхания и окислительного фос-форилирования (Kalaria et all, 1988) и определяется особенностями взаимодействия данных ферментных систем.

Применение сукцината перед токсико-гипоксическом воздействием не влияет на активность ПОЛ в эритроцитах, но ограничивает их в головном мозге, сердце и печени. Одновременно сукцинат активирует систему АОЗ, повышает сниженную токсикантом активность СОД у отравленных крыс, мексидол в 1,3 раза повышает активность СОД в эритроцитах и в 2,2 раза - в полушариях головного мозга, но не оказывает защитно-восстановительного эффекта в сердце и печени. Установлено стимулирующее влияние мексидола на активность Г-6-ФДГ в сердце и ингибирующее действие препарата на активность ПОЛ в эритроцитах и полушариях головного мозга у «нитритных» крыс.

Раздельное применение пиримидинов или сукцината (препаратов, содержащих сукцинат) в качестве средств коррекции токсико-гипоксических повреждений в органах и тканях крыс не оказывают надежного терапевтического эффекта. В этой связи нами исследована эффективность сочетанного применения оксиметилурацила с сукцинатом (комплекс I) и мексидолом (комплекс II). Установлено, что данная комбинация препаратов имеет определенные преимущества по сравнению с раздельным их применением.

Показано, что в эритроцитах крыс, защищенных двумя препаратами, активность каталазы сохраняется на уровне здоровых крыс. Защитно-восстановительное действие комплекса I установлено также для СОД. Оно хорошо выражено также в сердце и печени, но не в полушариях головного мозга (в эритроцитах в 1,3 раза; в сердце в 3,6 раза и в печени в 2,9 раза выше, чем у «нитритных»). Активность Г-6-ФДГ, которым вводили комплекс I в 1,24 раза выше по сравнению с показателем «нитритных» крыс. Применение комплекса II перед острым токсико-гипоксическим эпизодом также оказывает более выраженный антиоксидантный эффект по сравнению с раздельным введением оксиметилурацила и мексидола. При действии комплекса II активируется система АОЗ: активность каталазы в эритроцитах повышается в 1,2 раза; в полушариях мозга - в 1,33 раза. Активность СОД повышается в эритроцитах в 1,42 раза; в полушариях головного мозга в 1,6 раза; в сердце - в 3 раза и в печени - в 3,1 раза. Активируется Г-6-ФДГ в эритроцитах. Можно констатировать, что в условиях ОГеГ замена сукцината на мексидол (мексикор) имеет преимущества (табл. 10).

Таблица 10.

Влияние сочетания сукцината с ОМУ и ОМУ с мексидолом на показатели ПОЛ и АОЗ в эритроцитах и органах крыс при ОГеГ (М±т, 11=8)

Показатели Группы крыс Эритроциты 1 Головной | мозг Сердце Печень

Сукцинат с оксиметилурацилом (комплекс I)

КТД, усл. ед. опт. пл. Контроль Гипоксия Комплекс I +ГИПОКСИЯ в 82,1±5,0 120,3±9,7* 89,014,2* 0,20±0,017 0,32±0,027* 0,17±0,02** 0,5810,02 0,9010,05* 0,8210,03* 0,41510,025 0,60210,037* 0,48210,044**

ТБК-РП, мкмоль/г ткани Контроль Гипоксия Комплекс I +ГИП0КСИЯ А0,26±0,01 0,28±0,03 0,2210,04 65,3±2,0 68,6±1,7 69,0±3,7 12,4±1,8 13,812,6 13,513,1 20,312,2 23,512,8 22,413,8

Каталаза, ммоль/мин/г белка Контроль Гипоксия Комплекс I +ГИПОКСИЯ • 34,6±1,8 25,8±1,4* 31,412,0** 1,2±0,020 0,84±0,033* 1,08±0,02** 58,212,5 66,615,8 69,0±5,2 310116,5 328112,4 330113,8

СОД, усл. ед./мг белка Контроль Гипоксия Комплекс I +ГИПОКСИЯ 1,2±0,33 0,7810,04* 0,99±0,02** 1,66±0,10 0,68Ю,06* 1,04Ю,13* 1,4210,08 0,3310,06* 1,2010,08** 4,6510,13 1,210,10* 3,4810,16**

Г-6-ФДГ, нмоль/мин/м г белка Контроль Гипоксия Комплекс I +гипоксия а 16,010,21 12,8±0,5* 15,910,22** 18,910,65 20,4Ю,23 17,0±0,33 62,5±2,4 68,813,1 70,314,4 55.412.8 58.812.9 62,014,0

Оксиметилурацил с мексидолом (комплекс II)

Кетодиены, усл. ед. опт. пл. Контроль Гипоксия Комплекс II +ГИП0КСИЯ в 82,115,0 120,3±9,7* 88,313,1** 0,20±0,017 0,32±0,027* 0,19±0,016** 0,58Ю,02 0,9010,05* 0,6010,04** 0,41510,025 0,60210,037* 0,48010,066**

ТБК-РП, мкмоль/г ткани Контроль Гипоксия Комплекс И +ГИПОКСИЯ ▲ 0,26±0,010 0,28Ю,03 0,25±0,012 65,3±2,0 68,6±1,7 бб,1±2,7 12,4±1,8 13,8±2,6 11,011,1 20,3±2,2 23,512,8 21,213,8

Каталаза, ммоль/мин/г белка Контроль Гипоксия Комплекс II +ГИПОКСИЯ • 34,6И,8 25,8±1,4* 30,511,2** 1,2±0,020 0,8410,033* 1,12±0,017** 58,212,5 66,615,8 65,516,2 310116,5 328112,4 330±15,8

сод, усл. ед./мг белка Контроль Гипоксия Комплекс II +ГИПОКСИЯ 1,210,33 0,78±0,04* 1,1110,04** 1,66±0,10 0,68±0,06* 1,0810,05** 1,4210,08 0,3310,06* 1,010,06 4,6510,13 1,210,10* 3,82±0,66**

Г-6-ФДГ, нмоль/мин/м г белка Контроль Гипоксия Комплекс II +ГИПОКСИЯ а 16,0±0,21 12,810,5* 15,210,66** 18,9±0,65 20,410,23 22,410,55 62,5±2,4 68,813,1 66,514,1 55.412.8 58.812.9 59,313,7

Примечание: ■ - нмоль/г гемоглобина; А - нмоль/мг белка; * - Р<0,05 с группой «контроль»;

• - моль/мин/г гемоглобина; о - мкмоль/мин/мг гемоглобина; ** - Р<0,05 с группой «гипоксия».

В соответствии с классификацией экстремальных факторов к разряду «экстремальных», наряду с изменением естественной газовой среды, B.C. Новиков и соавторы (1998) относят «химические ксенобиотики». Наметились два основных подхода к медицинской защите людей, подверженных повышенному риску сверхнормативных воздействий. Первый заключается в совершенствовании имеющихся в разработке новых антидотов. Второй подход основан на использовании естественных механизмов резистентности. Нами использован второй подход. Исследована эффективность производных бензимидазола (тиетазо-ла литиевой и калиевой солей, соединения Б-16, бемитила, этомерзола), пиримидина, сукцината, а также сочетания оксиметилурацила с сукцинатом (комплекс I) и мексидолом (комплекс II) в качестве средств коррекции повреждений, моделируемых ФОС, ПХБ.

Установлено, что карбофос в дозе 0,9 ЛД50 (320 мг/кг) вызывает гибель 30% крыс. В полушариях головного мозга на 14 сутки опыта установлено увеличение количества КТД и ШО, снижение активности СОД и СДГ. В миокарде крыс - повышение содержания КТД и ШО, подавление активности СОД, МАО и СДГ (табл. 11).

В полушариях мозга «карбофосных» крыс бемитил в 1,45 раза снижает количество КТД и повышает активность СДГ, но не изменяет количества ШО и активность СОД. Этомерзол в 1,6 раза снижает содержание КТД и в 1,7 раза ШО, и также как бемитил, оказывает активирующее влияние на СДГ. Соединение Б-16 ограничивает накопление КТД и ШО, но не восстанавливает активность СДГ. Тиетазол (в виде литиевой соли), в отличие от тиетазола (в виде калиевой соли), более эффективно ограничивает прооксидантное действие карбофоса, поскольку снижает не только количество КТД, но и ШО. Более высокая эффективность литиевой соли тиетазола подтверждается благоприятным действием препарата на церебральную активность МАО и СДГ.

В миокарде «карбофосных крыс» на 14 сутки опыта выявлено почти 4-х кратное увеличение количества КТД и более, чем в 2,5-кратное - ШО, при одновременном снижении активности СОД и МАО (в 2,7 раза и 1,7 раза соответственно). Бемитил уменьшает содержание КТД и ШО соответственно в 2,8 и 1,7 раза, одновременно восстанавливая до нормы активность СДГ. Этомерзол в 3,2 раза понижает количество КТД ив 1,7 раза - содержание ШО, оказывает благоприятное действие на СОД и МАО повышает их активность в 1,8 и 1,4 раза соответственно. Соединение Б-16 не изменяет активности МАО и СДГ, но достоверно повышает активность СОД (в 1,5 раза) и в 3,3 раза снижает количество КТД и в 2 раза - содержание ШО. Тиетазол (в виде калиевой соли) малоэффективен.

В печени «карбофосных» крыс (табл. 12) выявлены нарушения активности СОД, Г-6-ФДГ, АТФ-азы и СДГ. В то же время, не обнаружено изменения количества КТД и ШО, что может свидетельствовать об отсутствии проокси-дантного эффекта яда в этом органе. Последнее согласуется с результатами других исследований и требует специального изучения (Крылова Е.В., 2003; Мышкин В.А. и соавт., 2005).

Таблица 11.

Влияние производных бензимидазола на показатели ПОЛ и АОЗ, активность Г-6-ФДГ, МАО, СДГ в головном мозге и ЛДГ, МАО, СДГ в миокарде на 14 сутки после отравления карбофосом (М±ш, п=8)

Группы крыс КТД,Дш, усл. ед. опт. пл. ШО, отн. ед./мг ли-пидов СОД, усл. ед./мг белка Г-6-ФДГ, нмоль/мг белка МАО, усл. ед. СДГ, усл.ед.

В полушариях головного мозга крыс на 14 сутки после отравления карбофосом

К |-контроль (интак. крысы) 0,18±0,01 0,16±0,02 1,58±0,18 19,7±0,7 7,98±0,04 8,46±0,09

Кз-контроль (карбофос) 0,58±0,03* 0,34±0,02* 0,98±0,18* 21,5±0,92 7,99±0,26 7,82±0,11*

Бемитил 0,40±0,04** 0,30±0,03* 1,02±0,16* 20,б±0,6 7,6±0,25 8,44±0,06**

Этомерзол 0,36±0,03** 0,20±0,02** 1,0±0,2* 21,6±0,9 7,4±0,3 8,43±0,07**

Препарат Б-16 0,39±0,04** 0,19±0,01** 1,03±0,18* 21,8±0,9 7,5±0,3 7,94±0,2*

Тиетазол калиевая соль 0,33±0,08** 0,30±0,04* 0,82±0,2* 20,3±1,2 7,7±0,22 7,92±0,11*

Тиетазол литиевая соль 0,29±0,08** 0,19±0,04** 0,99±0,2* 22,2±0,7* 7,48±0,3 8,59±0,07**

Группы крыс КТДДиь усл.ед. опт. пл. ШО, отн. ед./мг ли-пидов СОД, усл. ед./мг белка ЛДГ, усл. ед. МАО, усл. ед. СДГ, усл. ед.

В миокарде крыс на 14 сутки после отравления карбофосом

К |-контроль (интак. крысы) 0,37±0,01 0,38±0,04 1,33±0,08 8,8±0,4 6,4±0,38 9,31 ±0,12

Кз-контроль (карбофос) 1,41±0,1* 1,04±0,06* 0,48±0,05* 8,8±0,19 3,82±0,2* 9,02±0,03*

Бемитил 0,51 ±0,03** 0,58±0,05** 1,0±0,88 8,0±0,3 5,9±0,22* * 9,3±0,05**

Этомерзол 0,44±0,05** 0,60±0,04** 0,89±0,07** 8,0±0,5 5,5±0,3** 8,9±0,06*

Препарат Б-16 0,42±0,06** 0,48±0,08** 0,72±0,08** 8,2±0,6 3,7±0,6* 8,84±0,09*

Тиетазол калиевая соль 0,50±0,03** 0,69±0,09* 0,66±0,06 8,5±0,12 4,2±0,9 8,8±0,09*

Тиетазол литиевая соль 0,42±0,02** 0,44±0,06** 0,88±0,08** 8,9±0,1 6,0±0,9** 9,3±0,04**

Примечание:

• * - Р<0,05 по сравнению с Кь

• Р<0,05 по сравнению с Кг-

Бемитил в 1,5 раза снижает количество ШО и восстанавливает АТФ-азную активность гепатоцитов, но не оказывает терапевтического действия на активность СОД, Г-6-ФДГ и СДГ. Этомерзол позитивно влияет на активность Г-6-ФДГ и АТФ-азы, снижая почти в 2 раза содержание ШО в гепатоцитах. Соединение Б-16 и тиетазол (в виде калиевой соли) неэффективны. В то же время

тиетазол (в виде литиевой соли) восстанавливает подавленную карбофосом активность Г-6-ФДГ и АТФ-азы, но не СДГ.

Таблица 12.

Влияние производных бензимидазола на показатели ПОЛ и АОЗ, активность Г-6-ФДГ, АТФ-азы, СДГ в печени крыс на 14 сутки после от-равлення карбофосом (М±т, п=8)

Группы крыс КТД.Д232, усл. ед. опт. пл. ШО, отн. ед./мг ли-пидов СОД, усл. ед./мг белка Г-6-ФДГ, нмоль/мг белка АТФ-аза, отн.ед. СДГ, усл. ед.

Кгконтроль (интак. крысы) 0,454±0,022 5,1б±0,13 4,6±0,16 6б,5±2,6 8,8±0,!2 8,18±0,05

Кг-контроль (карбофос) 0,416±0,07 6,0±0,12 1,8±0,09* 48,3±2,0* 5,6±0,1* 7,02±0,06*

Бемитил 0,404±0,03 4,1±0,1** 2,0±0,06* 56,6±1,8* 7,2±0,12* * 6,9±0,1 *

Этомерзол 0,380±0,04 3,3±0,11** 1,3±0,04* 60,5±3,3* * 7,0±0,1** 7,2±0,1*

Препарат Б-16 0,410±0,05 5,6±0,13 1,6±0,11* 55,0±4,0* 8,0±0,07* * 7,0±0,05*

Тиетазол калиевая соль 0,410±0,06 6,6±0,09 0,88±0,1* 55,0±4,0* 6,0±0,12* 7,08±0,1 *

Тиетазол литиевая соль 0,430±0,018 6,2±0,04 2,1±0,13* 59,4±3,1* 8,16±0,1* * 6,82±0,12*

. Примечание:

• * - Р<0,05 по сравнению с Кь « ** - р<0,05 по сравнению с К2.

Проведена оценка эффективности экспериментальной терапии острой интоксикации карбофосом в условиях применения актопротектора тиетазола (в виде литиевой соли) и атропина, применяемых раздельно и в комбинации. В качестве референтных препаратов использованы этомерзол и бемитил.

Среди известных экотоксикантов, оказывающих гепатотоксическое действие, важное медицинское значение имеет трихлорметафос (Мышкин В.А. и соавт., 2007; Никитин А.И., 2005). В экспериментальной медицине трихлорметафос также находит применение в качестве модельного агента (Прозоровский В.Б. 1998, 1999; Терехин Г.А., 1991, 2000). Трихлорметафос в дозе 0,2 ЛД50 (47 мг/кг) вводили крысам в желудок в течение 30 дней. Литиевую соль тиетазола применяли по той же схеме в дозе 50 мг/кг. Препаратом сравнения являлся си-лимарин. Результаты представлены в табл. 13 и 14.

Трихлорметафос активирует ПОЛ в ткани печени, снижает активность каталазы и Г-6-ФДГ. Окислительный стресс сопровождается подавлением активности СДГ и НАДН-ДГ. Профессиональный гепатопротектор силимарин практически не восстанавливает активность антиоксидантных ферментов, но позитивно влияет на количество продуктов ПОЛ. Литиевая соль тиетазола имеет преимущество перед силнмарином, поскольку препарат не только восстанавливает нарушенный баланс окислительных процессов, но и активирует СДГ. На

фоне препарата количество КТД и ТБК-РП снижается в 1,2 и в 1,4 раза соответственно. Одновременно повышается активность каталазы и Г-6-ФДГ.

Таблица 13.

Влияние препаратов на показатели ПОЛ, АОЗ, активности НАДН-ДГ и СДГ в печени крыс в условиях подострой интоксикации трихлорме-

тафосом (М±т, п-8)

Группы крыс КТД.Д232, усл. ед. опт. пл. ТБК-РП, ммоль/г ткани КАТ, ммоль/мин/ г белка Г-6-ФДГ, нмоль/мг белка НАДН- ДГ, усл. ед. СДГ, усл. ед.

К]-КОНТрОЛЬ (интак. крысы) 0,454±0,02 5,18±0,13 302±16 66,5±2,6 9,18±0,02 8,1 ±0,04

Кг-контроль трихлорметафос 0,61 ±0,02* 8,20±0,33* 202±17* 30,2±4,2* 7,5±0,03* 6,8±0,04*

Тиетазол литиевая соль 0,5±0,02** 5,8±0,22** 280±14** 5б,6±3,2** 7,8±0,11* 7,9±0,03**

Силимарин (карсил) 0,5±0,02** 6,6±0,2** 220±24* 38,6±7,7* 7,4±0,10* 6,9±0,12*

Примечание:

• * - Р<0,05 по сравнению с К|;

• ** - Р<0,05 по сравнению с Кг.

Другим подтверждением гепатозащитного действия литиевой соли тиета-зола является его благоприятное действие на активность индикаторных ферментов печени - АлАТ, АсАТ, ЩФ и КФ (табл. 14).

Таблица 14.

Биохимические показатели крови крыс в условиях интоксикации три-

Группы крыс Урокани- наза, нмоль/ч-л АлАТ, ммоль/ч-л АсАТ, ммоль/ч-л ЩФ, ммоль/ч-л КФ, ммоль/ч-л

К1-контроль (интакные крысы) 2,6±0,33 3,3±0,18 10,7±0,14 15,1±0,4 15,2±0,24

Кг-контроль (трихлорметафос) 24,5±3,4* 10,2±1,4* 18,9±2,3* 24,2±8,8* 29,5±3,4*

Тиетазол литиевая соль 18,8±1,8* 6,4±0,33** 11,0±1,1** 16,6±3,3** 18,9±3,2**

Силимарин (карсил) 19,8±9,9* 8,2±1,1* 11,2±1,2** 18,2±1,6* 26,6±4,4*

Примечание:

• * - Р<0,05 по сравнению с К,;

• ** - Р<0,05 по сравнению с Кг.

Тиетазол не влияет на активность УрН, но достоверно снижает у отравленных крыс активность АлАТ, АсАТ, ЩФ и КФ (соответственно в 1,6; 1,7; 1,5 и 1,5 раза), что свидетельствует о гепатозащитном действии препарата.

Таким образом, на ранних этапах интоксикации ФОС целесообразно применять антиоксиданты в сочетании с препаратами, действующими на «пусковой биохимический механизм» - холинолитиками, реактиваторами холинэ-стеразы и др. В наших опытах применение комбинаций атропина с актопротек-торами - тиетазолом, бемитилом оказывает позитивное влияние на развитие восстановительных процессов в органах и тканях. Данная схема комплексного применения фармакологических средств перспективна и для других липофиль-ных ФОС. Актопротекторы - производные бензимидазола могут иметь и самостоятельное значение в качестве средств коррекции метатоксического действия. Новое производное бензимидазола - тиетазол (в виде литиевой соли), синтезированное в Башкирском государственном медицинском университете сопоставимо по антиоксидантной и метаболической активности с этомерзолом. На модели повреждения печени трихлорметафосом препарат проявляет более высокую гепатопротекторную активность по сравнению с силимарином.

Факт нарушения структуры и функции печени при поражении органа токсичными химическими веществами установлен давно (Арчаков А.И. и соавт, 1988; Губский Ю.И., 1989; 1995; Матюшин Б.Н. и соавт., 1992; Серов В.В., 1989 и другие), однако, только в последующие два десятилетия стали глубоко исследоваться молекулярно-патологические нарушения в гепатоцитах, а также возможности их коррекции с помощью лекарственных средств (Венгеровский А.И. и соавт, 1996; Гайворонская В.В. и соавт, 2000; Оковитый C.B. и соавт., 2006; Мышкин В.А. и соавт., 2005; 2007).

Вместе с тем, на фоне алкоголизации организма, действие на печень многих актуальных экотоксикантов, в том числе ПХБ, практически не исследовано. Имеющиеся немногочисленные работы свидетельствуют о значительных различиях в эффективности гепатопротекторов при химическом поражении печени сочетанном с алкоголизацией (Ортенберг Э.А. и соавт., 1984; Скакун Н.П. и соавт., 1987; Мышкин В.А. и соавт, 2007).

В соответствии с задачами работы, нами исследована гепатозащитная эффективность оксиметилурацила, обладающего гепатопротекторными свойствами (Мышкин В.А. и соавт., 1998, 2005, 2007; Мирсаев Т.Р., 2002;) и антиги-поксантов прямого энергизирующего действия сукцината и мексидола, применяемых раздельно и в комбинации с оксиметилурацилом (комплексы I и II) на разработанной нами модели цирроза печени (патент РФ на изобретение №2197018 от 16.02.2000 года).

Комплексы I и II оказывают умеренное гепатопротекторное действие, причем комплекс II более эффективно, по сравнению с комплексом I, препятствует развитию цитолитического синдрома (табл. 15, 16). Комплекс I не имеет преимуществ в эффективности по сравнению с раздельным применением оксиметилурацила и сукцината по показателям активности АлАТ, АсАТ и ЛДГ, но эффективнее по сравнению с сукцинатом по показателям АлАТ и АсАТ.

Таблица 15.

Активность уроканиназы крови крыс с циррозом печени на фоне лечения комплексом I и комплексом II _

Группы крыс Активность уроканиназы, нмоль/с-л

1. Здоровые крысы 0

2. Цирроз печени 34,9 ± 3,5*

3. Цирроз печени + комплекс I 26,8 ± 3,6*

4. Цирроз печени + комплекс II 22,5± 4,4"

Примечание: - Р< 0,05 по сравнению с группой 1 - Р< 0,05 по сравнению с группой 2

Так на фоне лечения комплексом I активность АлАТ снижается в 2,3 раза, АсАТ в 2 раза, а в условиях лечения сукцинатом снижение активности ферментов не происходит. В то же время, комплекс II эффективнее комплекса I по показателям активности УрН и ЩФ.

Таблица 16.

Биохимические показатели крови крыс в условиях интоксикации

ПХБ, этанолом и действия антиоксидантов (М±ш, п=10)

Группы животных, препараты АлАТ, ммоль/ч-л АсАТ, ммоль/ч-л ЛДГ, ммоль/ч-л ЩФ, ммоль/ч-л КФ, ммоль/ч-л

К] - контроль 3,3±0,18 10,7±0,14 29,9±1,0 15,1±1,4 15,2±2,6

Кг - контроль 9,45±0,45* 25,7±0,43* 122,0±1,8* 28,5±1,9* 26,8±8,8*

ОМУ-основание 3,8±1,2" 18,2±2,б" 89,5±9,8" 30,5±6,6 23,015,6

Мексидол 5,6±1,2*" 22,0±4,5* 139,4±18,0* 27,4±6,0* 22,8±4,4*

Комплекс I (сукцинат+ОМУ) 4,0±0,88" 12,6±2,0** 88,0±11,0" 25,0±11,0* 23,4±8,0*

Комплекс II (мексидол+ОМУ) 4,4±1,0" 11,4±2,0** 69,9±8,8" 26,6±3,4* 19,813,5**

Сукцинат натрия 8,8±1,9* 20,4±3,3* 98,6±6,6** 30,4±3,3* 25,4±7,4*

Примечание:

• - Р<0,05 по сравнению с Кь

• - Р <0,05 по сравнению с Кг;

• К] - интактные крысы;

• Кг - интоксикация ПХБ и этанолом.

Результаты изучения действия комплексов I и II на ПОЛ, компоненты АОЗ и цикла Кребса представлены в таблице 17. Комплекс I активирует катала-

зу цирротической печени крыс, однако, входящие в состав комплекса препараты таким действием не обладают. Также как оксиметилурацил и сукцинат, комплекс I не влияет на активность Г-6-ФДГ, но «реактивирует» СДГ и способствует сохранению митохондриального белка. У «цирротических» крыс комплекс II позитивно влияет на активность ПОЛ, оказывает регулирующее действие на ферменты АОЗ, в митохондриях активирует СДГ, МДГ и сберегает митохонд-риальный белок (табл. 17).

Таблица 17.

Показатели ПОЛ, активность ферментов АОЗ и цикла Кребса в печени крыс при интоксикации полихлорнрованными бифенилами, три-

Группы крыс КТД,Дш, усл. ед. опт. пл. ТБК-РП, нмоль/г ткани КАТ, моль /мин/г белка Г-6-ФДГ, нкат/г белка СДГ, нкат/г белка МДГ, мккат/г белка Мх белок, мг/г

К| - контроль 0,454±0,022 30,4±4,1 328±24 528±36,9 146±12,8 7,2±0,18 9,8±0,64

К2 - контроль 0,63±0,026' 123±3,4" 236,8±17* 807±63,4* 93,2±8,9* 3,78±0,66 • 6,9±0,74'

ОМУ 0,49±0,017" 113±8,8* 268±22 810±48,8* 99±8,2* 4,2±0,41" 7,0±0,66*

Мекскдол 0,505±0,02" 118,8±12* 266±18 692±55* 102±6,6* 5,6±0,32" 7,6±0,52"

Сукцинат + ОМУ 0,49±0,033" 99,6±2,8" 304±23" 707±67" 134±П" 4,66±0,55 8,7±0,53"

Мексидол + ОМУ 0,51 ±0,026" 88,6±3,2" 312±17" 606±52" 120±6,2" 5,6±0,32" 8,5±0,44"

Сукцинат Ыа 0,606±0,07* 109±10,5* 262,0±33 808±44* 110±12,5* - 6,6±0,82"

Примечание:

• * - Р< 0,05 при сравнении с Кь

• - Р< 0,05 при сравнении с К2;

• К1 - интактные крысы;

• Кг - интоксикация ПХБ, трихлорбензолом и этанолом.

Таким образом, задача по поддержанию функции печени, поврежденной сочетанием совтола и этанола, может решаться путем коррекции метаболических нарушений в цирротически измененной ткани печени. В качестве перспективного средства такой коррекции можно рекомендовать комплекс II.

Полученные результаты позволяют заключить, что в условиях восстановительной коррекции антиоксидантами тяжелых поражений печени (цирроз, гепатит), когда упущена возможность профилактического применения лекарственных средств, преимущество имеет комплексная метаболическая коррекция, включающая препараты (фармакологические комплексы) с разным механизмом действия как для ослабления уже развившихся вторичных сдвигов (например, гиперферментемия), так и для блокирования продолжающейся активации пусковых (инициирующих) звеньев патогенеза.

Таким образом, ослабление систем антиоксидантной защиты и нарушение активности процессов ПОЛ, представляющий собой наиболее общее звено патогенеза при иммобилизационном стрессе и химически индуцированных повреждениях (ОГГ, ОГеГ, ФОС, совтол + этанол). Патогенетически общими звеньями указанных повреждений являются:

• ПОЛ - подавление активности ферментов;

• ПОЛ - энергодефицит;

• ПОЛ - цитолиз;

• ПОЛ - изменение проницаемости биологических мембран.

На схеме 1 обобщены сведения о механизмах спектрах фармакологической активности и общие неспецифические эффекты в структуре протекторного действия производных бензимидазола, пиримидина и новых фармакологических комплексов (препаратов), содержащих сукцинат. Проведенные нами исследования позволили их расширить и углубить, учитывая сложный многогранный и во многом неспецифический характер нарушений при стрессорных и химически индуцированных повреждениях, можно заключить, что для их коррекции необходимы фармакологические средства с широким спектром защитно-восстановительной активности, воздействующие на базальные клеточные процессы, определяющие резистентность клеток и способность к регенерации, восстанавливающие и повышающие общие адаптационные возможности организма. Этим требованиям отвечают новые производные бензимидазола, 6-метилурацила и сукцинатпиримидиновые комплексы.

Актопротекторы-производиые бензимида-зола (тиетазол, соединение Б-16, бемитил)

Аналоги метаболитов - производные пиримидина (ОМУ, аналоги), сукцикатпирими-диновые комплексы_

Механизмы и спектры фармакологической активности

• прямое защитное действие на мембраны*

• активизация РНК-полимеразы

• повышение КПД тканевого дыхания

• стабилизация мембран клеток и органслл, сохранение дыхательного контроля Мх

• снижение конкуренции продуктов гликолиза и липолиза за общий конечный путь окисления

• активация синтеза РНК, белка

• активация глюконеогенеза из лактата

• ускорение регенерационных процессов

• увеличение активности антиоксидантных ферментов (СОД, каталазы)*

• стабилизация ПОЛ*

• актопротекторное действие

• гепатопротекторное действие*

• церебропротекторное действие

• кардиопротекторное действие

• антигипоксическая*, антиишемическая активность

• иммуномодулирующее действие

• модулирующее действие на монооксидаз-ную систему

• стимуляция неспецифической резистентности

« стресс-протекторная активность_

• ингибирование СРО*

• активизация РНК-полимеразы

• прямое защитное действие на мембраны*

• защита от АФК и перекисных соединений

• усиление активности СОД, каталазы, глютатионпероксидазы*

• стабилизация ПОЛ*

• стабилизация мембран клеток и оргнелл*

• усиление активности АТФ-азы и др. мем-браносвязанных ферментов

• активация биоэнергетических процессов, усиление активности СДГ, НАДН-ДГ*

• антидотная активность*

• антигипоксическое действие*

• антиоксидантное действие*

• стресс-протекторная активность*

• ноотропкая активность

• антиалкогольное действие

• иммуномодулирующее действие

• стимуляция неспецифической резистентности

• гепатопротекторное действие*

• кардиопротекторное действие

• деметгемоглобинизирующее действие*

Общие неспецифические эффекты

• коррекция симптомов острого иммооилизационного стресс-синдрома, острой гипоксии, токсического(метатоксического) действия

• увеличение устойчивости к окислительному стрессу

• повышение надежности биоэнергетических и метаболических процессов

• оптимизация адаптивных реакций

• восстановление резистентности организма к острому действию стресс-факторов_

Протекторное действие

Схема 1. Механизмы, спектры фармакологической активности и общие неспецифические эффекты в структуре протекторного действия производных бензимидазола, пиримидина и сукцинатпиримидииовых комплексов

Примечание:

* - по результатам прозеденных исследований.

выводы

1. В рамках единого концептуального подхода исследованы нарушения в системе «перекисное окисление липидов - антиоксидантная защита» при острой гипоксии, иммобилизационном стрессе, интоксикации химическими веществами. Определены подходы к их метаболической коррекции, выявлены эффективные препараты проявляющие антирадикальную, антиоксидантную, противогипоксическую активность и деметгемоглобинизирующее действие.

2. Использование сукцината оксиметилурацила и мексидола позволяет осуществить коррекцию нарушений в системе «перекисное окисление липидов - антиоксидантная защита» и предупредить функционально-метаболические сдвиги в организме при остром иммобилизационном стрессе - гипопротеинемию, гиперферментемию, уратемию, лейкопению и гипертрофию надпочечников.

3. Изученные препараты (тиетазол, сукцинат, сукцинатпиримидиновые комплексы) проявляют антиоксидантные свойства и противогипоксическую активность: в условиях острой гипоксической гипоксии тиетазол увеличивает «резервное время жизни», нормализуя активность пе-рекисного окисления липидов, не купируя, однако, падение активности ферментов антиоксидантной защиты. Сукцинат 1,3,6-триметил-5-гидроксиурацила тормозит активацию перекисного окисления липидов и предупреждает депрессию антиоксидантной защиты, в отличие от сукцината сохраняет уровень восстановленного глутатиона не только в печени, но и в полушариях головного мозга.

4. На основе выявленной последовательности включения повреждающих механизмов при острой гемической гипоксии разработан рациональный метод их коррекции, который заключается в совместном применении сукцината оксиметилурацила с цистамином. Установлена высокая противогипоксическая активность комплексных соединений 1,3,6-триметил-5-гидроксиурацила, 6-метилурацила с янтарной кислотой и 1,3-бис-2-(2-гидрокси)-5-гидрокси-6-метилурацила с фумаровой кислотой.

5. Тиетазол в условиях подострого отравления трихлорметафосом снижает гиперферментемию, устраняет депрессию активности каталазы, глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы, НАДФ-Н-дегидрогеназы, сукцинат-дегидрогеназы, стабилизирует активность перекисного окисления липидов в печени, проявляя тем самым гепатопротекторные свойства. Включение тиетазола в схему лечения, наряду с атропином, является эффективным методом коррекции гематотоксического действия карбофоса.

6. Разработана модель экспериментального цирроза печени, вызванная смесью пентахлорбифенила, трихлорбензола и этанола. Установлено гепатозащитное действие оксиметилурацила применяемого совместно с сукцинатом натрия (комплекс I) и мексидолом (комплекс II), превос-

ходящее эффекты референтного препарата (силимарина) на активность уроканиназы, сукцинатдегидрогеназы, малатдегидрогеназы, ка-талазы, глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы и перекисное окисление ли-пидов.

7. Патогенетически обоснованное применение фармакологических препаратов позволяет осуществить коррекцию стрессорных и химически индуцированных повреждений. В качестве средств коррекции целесообразно использовать актопротекторы - производные бензимидозола, а также комплексы содержащие пиримидины и сукцинат.

СПИСОК ОСНОВНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ:

Статьи в ведущих рецензируемых научных журналах, рекомендованных

ВАК РФ:

1. Мышкин В.А., Гуляева И.Л., Ибатуллина Р.Б., Савлуков А.И., Енике-ев Д.А., Сергеева С.А. Влияние актопротекторов на переписное окисление липидов и состояние мембран эритроцитов у крыс при отравлении карбофосом // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. - М. - 2004. -№3.- С. 10-12.

2. Мышкин В.А., Ибатуллина Р.Б., Гуляева И.Л., Савлуков А.И., Волкова Е.С., Сергеева С.А. Применение силимарина и а-токоферола для коррекции метаболических и морфофункциональных нарушений в печени крыс при интоксикации полихлорированными бефинилами // Токсикологический вестник. - М. - 2004. - № 3. - С. 30-33.

3. Срубилин Д.В., Мышкин В.А., Исакова М.А., Еникеев Д.А., Савлуков А.И. Гепатозащитная эффективность производных пиримидина при острой интоксикации дихлорэтаном // Общая реаниматология. - М. -2006.-Т. 2.-№5-6.-С. 136-141.

4. Кривоногов В.П., Мышкин В.А., Козлова Г.Г., Чернышенко Ю.Н., Савлуков А.И., Плечев В.В., Ибатуллина Р.Б. Алкилирование производных пиримидина этиленхлоргидрином // Журнал органической химии. -М. - 2006.-Т. 42. -Вып. И.-С. 1723-1726.

5. Чернов В.Н., Мышкин В.А., Ибатуллина Р.Б., Савлуков А.И., Еникеев Д.А. Влияние оксиметилурацила на перекисное окисление липидов и функционально-метаболические показатели печени при интоксикации старых крыс тетрахлорметаном // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. - М. - 2007. - № 4. - С. 29-30.

6. Мышкин В.А., Савлуков А.И., Гуляева И.Л., Еникеев Д.А., Ибатуллина Р.Б., Сергеева С.А. Коррекция нарушений прооксидантно-антиоксидантного равновесия после тяжелых острых отравлений // Общая реаниматология. - М. - 2007. - Т. III. - № 5-6. - С. 69-74.

7. Мышкин В.А., Савлуков А.И., Ибатуллина Р.Б., Еникеев Д.А. Коррекция острого иммобилизационного стресс-синдрома сукцинатом оксиметилурацила и мексидолом // Медицинский вестник Башкортостана. - Уфа. - 2010. - № 1. - С. 59-62.

Журнальные статьи:

8. Еникеев Д.А., Мышкин В.А., Савлуков А.И., Срубилин Д.В., Ибатуллина Р.Б., Идрисова Л.Т. Протекторная активность мексидола и комплексного соединения оксиметилурацила с янтарной кислотой при острой нитритной интоксикации. - М. - Патогенез, 2006. - № 3. - С. 39-41 (представлена акад. РАМН Кубатеевым A.A.).

9. Мышкин В.А., Ибатуллина Р.Б., Савлуков А.И., Срубилин Д.В., Еникеев Д.А. Антиоксидантные эффекты сукцинатпиримидинового ком-

плекса при острой гипоксии. - Уфа. - Медицинский вестник Башкортостана, 2008. - № 2 приложение. - С. 49-51.

Ю.Мышкин В.А., Еникеев Д.А., Савлуков А.И., Ибатуллина Р.Б., Сру-билин Д.В. Антиоксидантное действие оксиметилурацила, сукцината и мексидола, применяемых раздельно и в комбинации. - Уфа. - Медицинский вестник Башкортостана, 2008. -№ 2 приложение. - С. 51-53.

П.Мышкин В.А., Савлуков А.И., Катаев В.А., Ибатуллина Р.Б., Еникеев Д.А., Сергеева С.А. Противогипоксические и антиоксидантные свойства некоторых производных бензимидазола. - Уфа. - Медицинский вестник Башкортостана, 2008. - № 2 приложение. - С. 53-55.

12.Мышкин В.А., Срубилин Д.В., Ибатуллина Р.Б., Савлуков А.И., Еникеев Д.А. Эффективность пиримидинов, сукцинатпиримидиновых комплексов и некоторых лекарственных средств при острой гемиче-ской гипоксии (метгемоглобинемии). - Уфа. - Медицинский вестник Башкортостана, 2008. - № 2 приложение. - С. 56-58.

13.Мышкин В.А., Савлуков А.И., Катаев В.А., Еникеев Д.А., Фасхуди-нов Ш.Ф., Сергеева С.А. Влияние тиетазола на функционально-метаболическое состояние печени при подострой интоксикации три-хлорметафосом. - Уфа. - Медицинский вестник Башкортостана, 2008. - № 3 приложение. - С. 49-52.

14.Мышкин В.А., Фасхудинов Ш.Ф., Срубилин Д.В., Еникеев Д.А., Катаев В.А., Савлуков А.И., Сергеева С.А. Антиоксидантные эффекты то-нарола, мексидола, оксиметилурацила, тиетазола и атропина при острой интоксикации карбофосом. - Уфа. - Медицинский вестник Башкортостана, 2008. - № 5 приложение. - С. 83-56.

Монографии:

15.Мышкин В.А., Ибатуллина Р.Б., Савлуков А.И., Бакиров А.Б., Сергеева С.А. Антиоксидантные эффекты производных пиримидина и бензимидазола при острых отравлениях (молекулярные механизмы и эффективность коррекции перекисного окисления липидов). - ООО ПКП «ДАР». - Уфа, 2003. - 191 с.

16.Мышкин В.А., Ибатуллина Р.Б., Мирсаев Т.Р., Савлуков А.И., Сергеева С.А. Коррекция перекисного окисления липидов при экспериментальной химической патологии (общие механизмы токсического действия и их коррекция). - Издательство «Диалог». - Уфа, 2003. - 190 с.

17.Мышкин В.А., Савлуков А.И., Ибатуллина Р.Б., Кривоногов В.П. Токсическая гепатопатия (экспериментальная разработка моделей и методов коррекции). - Издательство БГПУ. - Уфа, 2004. - 118 с.

18.Мышкин В.А., Савлуков А.И., Хуснутдинов Т.Р. Хирургия печени и желчных путей / Под редакцией проф. Нартайлакова М.А. - Издательство «Здравоохранение Башкортостана». - Уфа, 2005. - С. 174-180.

19.Игбаев Р.К., Савлуков А.И., Ибатуллина Р.Б. Экспериментальная коррекция пост-интоксикационных нарушений / Под редакцией проф.

Мышкина В.А. и проф. Еникеева Д.А. - Издательство «Чурагул». -Уфа, 2005.-С. 167-284.

20.Савлуков А.И., Мышкин В.А., Еникеев Д.А. Патогенез и коррекция токсико-гипоксических поражений печени. - ООО «Издательство «Диалог». - Уфа, 2007. - 244 с.

Патенты:

21. Мышкин В.А., Ибатуллина Р.Б., Савлуков А.И., Симонова Н.И., Ба-киров А.Б. Способ моделирования токсической гепатопатии // Патент РФ на изобретение № 2188457 от 27.08. 2002 г. - 6 с.

22.Мышкин В.А., Ибатуллина Р.Б., Савлуков А.И., Волкова Е.С., Симонова Н.И. Способ моделирования цирроза печени // Патент РФ на изобретение № 2197018 от 20. 01. 2003 г. - 6 с.

23.Кривоногов В.П., Мышкин В.А., Ибатуллина Р.Б., Чернышенко Ю.Н., Козлова Г.Г., Савлуков А.И., Гуляева И.Л., Сергеева С.А. Комплексное соединение 6-метилурацила с янтарной кислотой, проявляющее антигипоксическую активность и способ его получения // Патент РФ на изобретение № 2259357 от 27. 08. 2005 г. - 6 с.

24.Кривоногов В.П., Мышкин В.А., Ибатуллина Р.Б., Мустафин А.Г., Ги-мадиева А.Р., Чернышенко Ю.Н., Савлуков А.И., Срубилин Д.В. Комплексное соединение 1,3-бис-(2-гидроксиэтил)-5-гидрокси-6-метилура-цила с фумаровой кислотой, проявляющее антигипоксическую активность и способ его получения // Патент РФ на изобретение № 2330025 от 27. 07. 2008 г. - 6 с.

Методические рекомендации:

25-Мышкин В.А., Ибатуллина Р.Б., Мустаев Л.Н., Савлуков А.И., Сергеева С.А., Крылова К.В. Полихлорированные бифенилы: медицинские аспекты (методические рекомендации) // Изд-во Министерства здравоохранения РБ, Уфимский НИИ медицины труда и экологии человека. - Уфа, 2001. - 26 с.

26.Нартайлаков М.А., Мингазов P.C., Сафин И.А., Пешков Н.В., Ладанов Б.Б., Самоходов С.Ю., Сатаева Н.М., Савлуков А.И., Багаманова Р.К., Чингизова Г.Н. Стандарты (протоколы) диагностики, консервативного и хирургического лечения больных с хроническим гепатитом и его осложнения (методические рекомендации) // Изд-во Министерства здравоохранения РБ, Башкирский государственный медицинский университет,- Уфа, 2001.-20 с.

Остальные публикации:

27.Мышкин В.А., Сергеева С.А., Елькин А.И., Савлуков А.И. Влияние бромантана, хлодантана, бемитила и этомерзола на перикисное окисление липидов в модельных системах и при экспериментальной интоксикации карбофосом. - Сборник республиканской конференции

«Экология и здоровье женщин и детей в РБ». - Уфа, 1998. - С. 155158.

28.Мышкин В.А., Савлуков А.И., Вакарица А.Ф. Отсроченный летальный эффект карбофоса и его фармакологическая коррекция. - Сборник республиканской конференции «Экология и здоровье женщин и детей в РБ». - Уфа, 1998.-С. 165-166.

29.Мышкин В.А., Волкова Е.С., Ибатуллина Р.Б., Савлуков А.И., Кай-бышев В.Т., Симонова Н.И. Влияние полихлорированных бифенилов на морфофункциональное состояние печени в экспериментальных условиях. - Материалы 3-й республиканской научной конференции «Человек и окружающая среда». - Рязань. - 1999. - С. 223-226.

30.Савлуков А.И., Зырянов С.К., Мышкин В.А., Вакарица А.Ф. Изучение гепатопротекторного действия оксиметилурацила на моделях острого и хронического токсического гепатита. - Сборник республиканской конференции «Актуальные вопросы диагностики и лечения заболеваний органов гепатопанкреато-билиарной зоны». - Уфа, 2000. - С. 47-48.

31. Савлуков А.И. Влияние некоторых метилпроизводных пиримидина, тонарола, пиридоксина и янтарной кислоты на выживаемость животных при острой интоксикации 1,2-дихлорэтаном. - Сборник научно-практической конференции «Роль внешне-средовых и генетических фак-торов в формировании здоровья». - Уфа, 2000. - С. 81-83.

32.Савлуков А.И., Мурзабаев Х.Х. Коррекция метилпроизводными пи-римидина метаболических нарушений в печени при подострой интоксикации полихлорированными бифенилами. - Сборник научно-практической конференции «Роль внешне-средовых и генетических фак-торов в формировании здоровья». - Уфа, 2000. - С. 84-85.

33.Савлуков А.И., Хуснутдинов Т.Р. Коррекция метилпроизводными пи-римидина метаболических нарушений при подострой интоксикации крыс дихлорэтаном. - Материалы симпозиума ассоциации коло-проктологов РФ «Реабилитация стомированных больных». - Уфа, 2001. -С. 356-357.

34.Савлуков А.И., Хуснутдинов Т.Р. Коррекция метилпроизводными пиримидина морфологических изменений в печени при подострой интоксикации полихлорированными бифенилами. - Материалы симпозиума ассоциации колопроктологов РФ «Реабилитация стомированных больных». - Уфа, 2001. - С. 358-360.

35.Савлуков А.И. Роль ингибиторов свободнорадикальных реакций в индивидуальной медицинской профилактике заболеваний населения и военнослужащих. - Материалы Всеросс. научно-практической конференции: «Военная служба в России: история, современное состояние и проблемы реформирования». - Уфа, 2002. - С. 147.

36.Хуснутдинов Т.Р., Савлуков А.И. Антиоксидантная система и пере-киеное окисление липидов у больных хроническим активным вирус-

ным гепатитом. - Материалы межрегиональной конференции «Актуальные проблемы гепатологии». - Ишимбай, 2002. - С. 106-109.

37.Хуснутдинов Т.Р., Савлуков А.И. Коррекция тонаролом биохимических показателей сыворотки крови у больных хроническим активным вирусным гепатитом. - Материалы межрегиональной конференции «Актуальные проблемы гепатологии». - Ишимбай, 2002. - С. 106-109.

38.Мышкин В.А., Ибатуллина Р.Б., Еникеев Д.А., Гуляева И.Л., Савлуков А.И., Сергеева С. А. О некоторых закономерностях развития ок-сидативного стресса при отравлении фосфорорганическими соединениями. - Матер, конф. «Общепатологические и клинические закономерности развития критических, терминальных и постреанимационных состояний». - М., 2003. - С. 110-112.

39.Мышкин В.А., Гуляева И.Л., Ибатуллина Р.Б., Савлуков А.И., Еникеев Д.А., Сергеева С.А. Влияние бемитила и тиетазола на состояние мембран эритроцитов при отравлении карбофосом. - Материалы VIII международ-ной научной конференции «Здоровье семьи - XXI век». -Гоа, Индия, 2004. - С. 207-209.

40.Мышкин В.А., Савлуков А.И., Гуляева И.Л., Ибатуллина Р.Б., Еникеев Д.А., Сергеева С.А. Гематопротекторное действие бемитила и атропина при экспериментальной интоксикации карбофосом. - Материалы конференции «Реаниматология. Ее роль в современной медицине» / под ред. проф. В.В. Мороза. - М., 2004. -С.154-156.

41.Мингазов P.C., Нартайлаков М.А., Савлуков А.И., Мурзабаев Х.Х., Хуснутдинов Т.Р. Патогенетические аспекты хирургической стимуляции регенерации при диффузных заболеваниях печени. - Матер, межрегиональной конф. «Актуальные вопросы патологии». - Изд-во «Здраво-охранение Башкортостана». - Уфа, 2004. - № 4. - С.141.

42-Мышкин В.А., Савлуков А.И., Гуляева И.Л., Ибатуллина Р.Б., Еникеев Д.А., Сергеева С. А. Влияние бемитила и атропина на перекисное окисление липидов и некоторые метаболические процессы в мозге и сердце крыс при остром отравлении карбофосом. - Матер, межрегиональной конф. «Актуальные вопросы патологии». - Изд-во «Здравоохранение Башкортостана». - Уфа, 2004. - № 4. - С. 169-170.

43.Мышкин В.А., Ибатуллина Р.Б., Савлуков А.И., Кривоногое В.П., Еникеев Д.А. Антитоксическая активность и антиоксидантные свойства производных пиримидина и бензимидазола. - Сборник «Гигиена производст-венной и окружающей среды, охрана здоровья рабочих в нефтехимической промышленности» УНИИ медицины труда и экологии человека. - Уфа, 2004. - С. 148-153.

44.Савлуков А.И., Гуляева И.Л., Мышкин В.А., Ибатуллина Р.Б., Сергеева С.А., Еникеев Д.А. Актопротекторы бемитил, этомерзол и производное бензимидазола Б-16: сравнительное исследование антиокси-дантного действия после острого отравления крыс карбофосом. - Матер. IX международной научной конф. «Здоровье семьи - XXI век». -Далянь, КНР, 2005. - С. 281-284.

45.Савлуков А.И., Чернышенко Ю.Н., Чернов В.Н., Мышкин В.А., Иба-туллина Р.Б., Еникеев Д.А., Абдрахманов И.Б. Влияние сукцината ок-симетилурацила на метаболические процессы в печени при экспериментальной интоксикации полихлорированными бифенилами. - Матер. Всероссийской научно-практической конф. «Современные проблемы фармако-логии и фармации». - Новосибирск, 2005. - С. 52-55.

46.Мышкин В.А., Еникеев Д.А., Савлуков А.И., ИбатуллинаР.Б. Способ моделирования токсической гепатопатии. - Матер, межрегиональной научно-практической конф. «Типовые патологические процессы». -УФА. - Здравоохранение Башкортостана. - № 7, 2005. - С. 166-167.

47.Мышкнн В.А., Еникеев Д.А., Савлуков А.И., Ибатуллина Р.Б. Способ моделирования цирроза печени. - Матер, межрегиональной научно-практической конф. «Типовые патологические процессы». - УФА. -Здравоохранение Башкортостана. - № 7, 2005. - С. 167-169.

48.Савлуков А.И., Мышкин В.А., Еникеев Д.А. Гипотетическая схема патогенеза токсической гепатопатии. - Матер, межрегиональной научно-практической конф. «Типовые патологические процессы». - Уфа. -Здравоохранение Башкортостана. - № 7, 2005. - С. 186-189.

49.Ибатуллина Р.Б., Савлуков А.И. Препараты наркотического действия: токсичность, патогенез интоксикации. - Матер. Всеросс. научно-практической конф. «Современные проблемы медицины труда». - Уфа, 2005. - С. 295-300.

50.Мышкин В.А., Ибатуллина Р.Б., Савлуков А.И. Алкопротекторная эффективность сукцината оксиметилурацила по показателям эритро-цитарной системы. - Матер. Всеросс. научно-практической конф. «Современные проблемы медицины труда». - Уфа, 2005. - С. 318-320.

Can луков Александр Иванович

ПАТОГЕНЕТИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ НОВЫХ ПОДХОДОВ К МЕТАБОЛИЧЕСКОЙ КОРРЕКЦИИ СТРЕССОРНЫХ И ХИМИЧЕСКИ ИНДУЦИРОВАННЫХ ПОВРЕЖДЕНИЙ

Цель работы - разработать эффективную метаболическую коррекцию стрессорных и химически индуцированных видов повреждений на основе комплексной оценки значимости нарушений ПОЛ, систем АОЗ и биоэнергетики в неспецифических составляющих патогенеза (токсогенеза).

Эксперименты выполнены на 868 половозрелых крысах-самцах и 678 половозрелых мышах-самцах по исследованию антирадикальной, антиоксидант-ной активности производных пиримидина, их молекулярных комплексов и производных бензимидазола в модельных системах, а также изучению системы «ПОЛ-АОЗ» при иммобилизационном стрессе, ОГГ, ОГеГ и химически индуцированных повреждениях (смесью совтола и этанола, карбофосом, трихлорме-тафосом-3) на фоне фармакологической коррекции антиоксидантами, антиги-поксантами прямого энергезирующего действия, антидотами.

Изучены процессы ПОЛ, АОЗ, целостности мембранного аппарата клеток, непосредственно после действия острой гемической/гипоксической гипоксии, острого иммобилизационного стресса, однократного и/или многократного введения в организм различных химических веществ - ПХБ, трихлорбензола, этанола, карбофоса, трихлорметафоса-3 и эффективности их коррекции фармакологическими средствами. Показано, что сочетанное применение производных пиримидина, обладающих антиоксидантными свойствами, с антигипоксантами прямого энергизующего действия имеет преимущество перед референтными антиоксидантами (тонарол, отокоферол) и антигипоксантами (сукцинат натрия, мексидол), проявляющееся в большей эффективности и полноте коррекции метаболических нарушений. Выевлена взаимозависимость нарушений активности ферментов АОЗ и основных патофизиологических эффектов ПОЛ в печени при повреждающем действии гепатотоксических ядов, острого иммобилизационного стресса, острой гемической и отчасти острой гипоксической гипоксии, что доказывает его значимость, как общего звена патогенеза при действии факторов токсико-гипоксической природы.

На основе изучения нарушений ПОЛ, активности ферментов АОЗ и метаболических процессов в органах и тканях'экспериментально обоснованы рациональные методы коррекции стрессорных и химически индуцированных повреждений. Полученные результаты могут быть использованы при разработке клинических рекомендаций по включению комбинаций ОМУ с сукцинатом натрия или мексидолом в алгоритмы лечения токсических поражений печени при остром и хроническом течении патологического процесса.

Savlukov Alexander Ivanovich

Pathogenetic Validation of New Approaches to Metabolic Correction of Stressor Injuries and Chemically Induced Lesions

The purpose of this study is to develop an effective metabolic correction of stressor and chemically induced kinds of injuries on the basis of integrated assessment of lipid peroxidation (LPO), antioxidant defense (AOD) system and bioener-getic abnormalities and their relevance to pathogenesis (toxogenesis) nonspecific components.

A series of trials have been conducted in 868 eugamic male rats models and 678 eugamic male mice models to investigate antiradical, antioxidant activity of py-rimidine derivatives, their molecular complexes, benzimidazole derivatives in model systems, as well as "LPO-AOD" systems (lipid peroxidation-antioxidant defense systems) in cases of immobilization stress, severe hypoxic and hemic hypoxia and chemically induced lesions (a mixture of 'trichlorobenzene/ phenyl trichloride1 and ethanol, dirnethyldithiophosphate of diethyl "mercaptosucci-nate/malathion, •trichlorometafos-3) amidst pharmacological correction with antioxidants, antihypoxants of direct energizing effect, antidote.

The processes of lipid peroxidation (LPO), antioxidant defense (AOD) and the continuity of the cell membrane apparatus have been studied immediately following the effects of acute hypoxic and hemic hypoxia, severe immobilization stress, single or repeated introduction of various chemical substances, i.e. polvchlorinated biphen-yis (PCB), trichlorobenzene, ethanol, dirnethyldithiophosphate of diethyl mercapto-succinate/malathion, trich!orometafos-3, and the efficacy of pharmacological correction. It has been shown that combined application of antioxidant pyramidine derivatives with antihypoxants of direct energizing effect is more preferable than reference antioxidants (2,6-di-tert-butyl-4-methylphenol (tonarol), alpha-tocopherol) and antihypoxants (sodium succinate, 4oxymethylethyIpiridine succinate ) manifested in greater efficacy and completeness of metabolic disturbances correction. An interrelation has been established between disturbances in antioxidant defense enzymes activities and basic pathophysiological effects of lipid peroxidation in the liver under the damaging effects of hepatotoxic venoms, severe mobilization stress, acute hemic hypoxia and partly acutehypoxic hypoxia, which validates their significance as the general link of patho genesis following the factors of toxicohypoxic nature.

Based on the study of lipid peroxidation disturbances, activities of antioxidant defense enzymes and the metabolic processes in the organs and tissues there have been experimentally substantiated rational correction methods of stressor and chemically induced injuries. The obtained data can be used in developing clinical recommendations in regard to the inclusion of oxymethyluracil in combination with sodium succinate or oxymethylethylpiridine succinate into therapy regimens of toxic liver injuries in cases of acute and chronic courses of a pathological process.

Примечание переводчика: Совтол - трихлорбензол trichlorobenzene/phenyl trichloride.

2 Карбоф ос — О ,0-диметил-8-( 1,2-дшшрбэтоксиэтил) дитиофосфат, малатион) dirnethyldithiophosphate of diethyl mercaptosuccinate; malathion.

3 Трихлорметафос - 3-0-метил-0-этил-0-2,4,5-трихлорфенилтиофосфат tri-chlorometafos

4 Мексидол - оксиметилэтилпиридина сукцинат Oxymethylethylpiridine succinate

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

АлАТ - аланинаминотрансфераза

АОЗ - антиоксидантная защита

АсАТ - аспартатаминотрансфераза

АТФ - аденозинтрифосфорная кислота

АТФ-аза - аденозинтрифосфатаза

АФК - активные формы кислорода

Г-БН - восстановленный глутатион

ГП - глутатионпероксидаза

Г-6-Ф-ДГ - глюкозо-6-фосфатдегидрогеназа

дк - диеновые конъюгаты

2,3-ДФГ - 2,3-дифосфоглицерат

КАТ - каталаза

КТД - кетодиены

КФ - кислая фосфатаза

лдг - лактатдегидрогеназа

ДД50 - средняя летальная доза

мдг - малатдегидрогеназа

Мх - митохондрии

МАО - моноаминооксидаза

НАДН - никотинамидадениндинуклеотид восстановленный

НАДН-ДГ - НАДФ-Н-дегидрогеназа

ОГГ - острая гипоксическая гипоксия

ОГеГ - острая гемическая гипоксия

ОМУ - оксиметилурацил

ПОЛ - перекисное окисление липидов

ПХБ - полихлорированные бифенилы

сдг - сукцинатдегидрогеназа

СОД - супероксиддисмутаза

СРО - свободно-радикальное окисление

ТБК - 2-тиобарбитуровая кислота

ТБК-РП - ТБК-реагирующие продукты

ТК - триеновые конъюгаты

ФОС - фосфорорганические соединения

ШО - шиффовы основания

ЩФ - щелочная фосфатаза

Савлуков Александр Иванович

ПАТОГЕНЕТИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ НОВЫХ ПОДХОДОВ К МЕТАБОЛИЧЕСКОЙ КОРРЕКЦИИ СТРЕССОРНЫХ И ХИМИЧЕСКИ ИНДУЦИРОВАННЫХ ПОВРЕЖДЕНИЙ

Автореферат диссертация на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Лицензия № 0! 77 от 10.06.96 г.

Подписано к печати_

Бумага офсетная. Отпечатано на ризографе. Формат 60x84 '/,6. Усл.-печ. л. 2,8. Уч.-изд. л. 2,8. Тираж 100 экз. Заказ № 92.

450000, г. Уфа, ул. Ленина, 3, ГОУ ВПО «Башгосмедуниверситет Росздрава»