Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Фармакологическая коррекция пролонгированного иммобилизационного стресс-синдрома

КЗ ОД

2 7 ШП

На правах рукописи

Зорькина Ангелина Владимировна

ФАРМАКОЛОГИЧЕСКАЯ КОРРЕКЦИЯ ПРОЛОНГИРОВАННОГО ИММОБИЛИЗАЦИОННОГО СТРЕСС-СИНДРОМА

14.00.25 - фармакология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Старая Купавна, 1997

Работа выполнена в Мордовском государственном университете им. Н.П.Огарева

Научные консультанты: доктор медицинских наук, профессор Л.Н.Сернов, доктор медицинских наук, профессор Я.В.Костин,

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор, академик РАМН М.МЛананашвили, доктор медицинских наук, профессор, член-корреспондент РАМН НЛ.Шнмановский, доктор медицинских наук, профессор Ю.Б.Розанов

Ведущая организация - Московский медицинский стоматологический институт им. Н.А.Семашко

Защита состоится "_"_ 1997 года в "_" часов

на заседании специализированного совета Д 098.01.02 ВНЦ БАВ (142450, Московская обл., пос. Старая Купавна, ул. Кирова, 23)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВНЦ БАВ

Автореферат разослан "_"_ 1997 г.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор биологических наук

Т.Н.Робакидзе

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. В последнее время проблема стресса, адаптации и постстрессорных нарушений выдвинулась в число актуальнейших задач современной биологии и медицины. Это обусловлено тем, что научно-техническая революция, усложнение профессиональной деятельности, урбанизация и ускорение темпа жизни обусловили, резкое возрастание психоэмоциональных нагрузок и числа стрессорных ситуаций, с которыми сталкиваются, члены современного индустриального общества (Тигранян P.A., 1996; Федоров Б.М., Носков В.Б., 1996).

Стресс-реакция может служить патогенетической основой повреждения миокарда, легких, желудочно-кишечного тракта, почек, сосудов и тканей мозга и других органов, нарушений ритма сердечной деятельности, подавления иммунитета (Меерсон Ф.З., Люсов В.А., 1995; Grabarevic Z et al., 1992)

Стресс расценивается как один из факторов риска возникновения и развития сердечно-сосудистых заболеваний (Жуковский Г.С. соавт., 1996), занимающих первое место в структуре причин смертности населения трудоспособного возраста, а также как вероятный фактор развития язвенной болезни, новообразований (Mausen К., 1994).

В последнее время выделен обширный класс различных форм патологии, которые начинаются не с повреждения органов, а с нарушения их регуляции (Крыжановский Г.Н., 1996). Появились новые термины "дисрегуляторные висцеропатии" (Вогралик В.Г., 1996); аутофагоцитарные свободно-радикально-зависимые болезни (Коган А.Х., Грачев C.B., 1996). К патологическим состояниям, которые они означают с полным основанием можно отнести постстрессорные нарушения в организме, так как одним из основных патогенетических механизмов развития аутофагоцитарных болезней является усиление генерации активных форм кислорода фагоцитами.

Многочисленные работы свидетельствуют о сложности и многообразии патогенетических звеньев воздействия стресса на организм (Хананашвили М.М., 1978; Jok.1 M., Wichte M., 1993; Судаков K.B., 1996; Николаев К.В., 1996; Денисенко Н.П. с соавт., 1996).

Так активация процессов перекисного окисления липидов вызывает каскад изменений, нарушающих общефизиологическую реактивность организма, сопровождается снижением индекса антиоксидантной активности сыворотки крови, формирует состояние дисферментоза, вызывающего метаболические нарушения (Гофман Э.Л., Митина Т.В., 1996).

Присутствие стресс-факторов является неизбежным условием существования любого организма и более того, способствует совершенствованию его взаимодействия с факторами внешней среды. Стресс, как универсальный си-

стемный процесс, выработанный в процессе эволюции в качестве адаптационного, может иметь двойственный по критерию биологического значения результат и играет позитивную роль, если не вызывает деструктивных изменений (Хананашвнли М.М., (978; Дыгай A.M. с соавт., 1996; Хитров Н.К., 1996).

Такая двойственность процесса ставит перед фармакологами ряд проблем, так как применение обычно назначаемых в таких случаях препаратов се-дативного, анксиолитического и снотворного ряда не всегда, приемлемо в реальной жизни в связи с профессиональными особенностями пациентов. (Миненко И.А. с соавт,, 19960.

Все это подтверждает актуальность дальнейшей разработки принципов комплексной фармакологической коррекции адаптационных процессов при стрессе. Так как в развитие повреждений включается множество патогенетических звеньев, предпочтение должно быть отдано препаратам, обладающим широким спектром фармакологического действия.

Можно полагать, что достигнуть цели можно при условии учета принципа ранней профилактики повреждений и этапности развития патологического процесса, устраняя связующее звено патогенеза на наиболее ранних этапах до развития необратимых деструктивных изменений тканей. А так как многочисленные работы последних лет свидетельствуют о том, что ведущим патогенетическим звеном вызванных стрессом нарушений функционирования живого организма, является повреждение мембран клеток в результате чрезмерной активации свободнорадикального окисления липидов (Николаев В.И., Судаков К.В., 1996), на наш взгляд наиболее оптимальными являются воздействия на ключевой патогенетический этап, к которому можно отнести процессы пере-кисного окисления липидов.

Эту задачу фармакологической коррекции - оптимизировать взаимодействие стресс-реализующих и стресс-лимитирующих систем и способно разрешить применение препаратов антиоксидантного типа действия.

Цель и задачи исследования

Целью настоящего исследования явилось экспериментальное обоснование принципов фармакологической коррекции пролонгированного стресса на модели длительной иммобилизации, а также оптимизации адаптационных процессов при последующих физических нагрузках.

В ходе исследования решались следующие задачи:

1. Изучение этапности развития патологических процессов при длительном воздействии и смене стрессирующих факторов на примере иммобилизаци-онного стресса и последующей адаптации к физическим нагрузкам.

2. Исследование воздействия ксимедона, вамина и цитохрома С на процессы липопероксидации, цитохимическую активность нейтрофильных грану-

лошпов, свертывание крови и некоторые метаболические показатели при 30 суточной иммобилизации и последующем воздействии физических нагруюк.

3. Изучение влияния антиоксияантов (эмоксипина, мексидола) и антиа-ичдотического средства ди.мефосфона на процессы перекисного окисления лн-пидов, состояние гемостаза, некоторые метаболические показатели крови при длительном иммобилизационном стрессе, изучение влияния препаратов на срочную и долговременную адаптацию к последующей физической нагрузке.

4. Исследование сочетанного влияния реланиума, мексидола и намина на перекисное окисление липидов, процессы активации нейтрофильных грануло-цитов, состояние гемостаза и некоторые метаболические показатели при длительной иммобилизации и адаптации к физической нагрузке.

Научная новизна

Применение комплексного подхода к оценке изменений, развивающихся на тканевом уровне при длительном воздействии стрессирующего фактора, позволило выявить механизмы антистрессорного действия лекарственных' средств, не обладающих нейротропной активностью.

Выполненное исследование обосновывает принципы фармакологической коррекции патологических реакций при длительном иммобилизационном стрессе с учетом этапности развития процесса, воздействия на наиболее ранние патологические звенья, что позволяет устранить или значительно снизить риск развития необратимых повреждений на тканевом уровне и создает благоприятные условия для последующей адаптации к физической нагрузке.

Показана высокая антистрессорная активность синтетических антиокси-дантов - производных 3-оксипиридина (мексидола и эмоксипина) - при длительном ограничении подвижности. Установлено адаптагенное влияние препаратов при повторном воздействии стрессирующего фактора в виде физической нагрузки.

Выявлено, что димефосфон реализует стресс-протекторное действие, предупреждая активацию ПОЛ и нейтрофильных гранулоцитов, развитие гиперкоагуляции и метаболических нарушений.

Экспериментально обосновано применение ксимедона, также в значительной степени предотвращающего нарушения, развивающиеся на тканевом уровне при длительном стрессорном воздействии и создающего позитивные условия для адаптации, к последующей физической нагрузке.

Применение электронакцепторных соединений, каковым является цито-хром С, оказывает протекторное действие на ранних сроках воздействия стрес-сорного фактора и не способствует формированию условий для долговременной адаптации.

Приоритетными являются данные о защитном эффекте вамина (комплекс

левовращающихся изомеров аминокислот) при длительном действии настоянного стрессирующего фактора.

Установлено, что длительное применение реланиума не оказывает значительного протекторного действия при долговременном влиянии нммобплиза-ционного стресса и последующей адаптации к физической нагрузке.

Экспериментально обоснована высокая эффективность в условиях пролонгированного стресса комплексного применения препаратов с различными механизмами действия с учетом последовательности развития патологических процессов.

Научно-практическая ценность

Исследование раскрывает возможности фармакологической коррекции повреждений, развивающихся при длительном воздействии стрессирующих факторов препаратами различного механизма действия.

Практическое значение имеет вывод о широком спектре влияния препаратов с антиоксидантным типом действия, что дает возможность обоснования для рациональной терапии: отчетливый антиоксидантный эффект сочетается с антитромбогенным и антиацидотическим действием, оптимизируя процессы активации нейтрофильных гранулоцитов.

Важным является вывод о возможности коррекции стрессорных повреждений препаратами не угнетающими активность центральных нейромедиатор-ных механизмов. Оптимизация их деятельности при устранении или ограничении тканевых механизмов реализации стрессорных повреждений создает благоприятные условия для адаптации.

Полученные данные явились составной частью отчета о специфичности фармакологической активности мексидола (мексикора), который разрешен фармкомитетом МЗ РФ к клиническим испытаниям в качестве антиангиналь-ного и липидрегулирующего средства (протокол №11 заседания Фармакологического государственного комитета МЗ РФ от 04. 07. 96 г.).

Практическое значение имеют данные о возможности коррекции нарушений гемостаза при длительной иммобилизации препаратами, не являющимися собственно антикоагулянтами. Применение антиоксидантов мексидола, эмоксипина, а также димефосфона, ксимедона, вамина, позволяет предупредить развитие тромбоэмболических осложнений при длительной гиподинамии.

Принципиально важными являются и данные о возможности коррекции нарушений липидного, углеводного и белкового обмена веществ, что создает перспективы для использования изученных препаратов как эффективных анти-атерогенных средств.

Данные о модифицирующем влиянии антиоксидантов и вамина на цито-

химическую активность нейтрофильных гранулошггов расширяет представления о механизме действия препаратов при длительном стрессе.

Положения, выносимые на защиту:

1. Фармакологическая коррекция повреждений при длительном воздействии стрессирующего фактора должна проводиться с учетом последовательности (этапности) и структуры звеньев патологического процесса.

2. Стресс-протекторный эффект может быть достигнут при раннем применении ингибирующих начальные проявления и предотвращающих дальнейшее прогрессирование патологического процесса препаратов с антиоксидант-ным, антш ипоксическим, метаболическим типом действия.

3. Широкий спектр фармакологического действия антиоксидантов в условиях пролонгированного иммобилизационного стресса связан с устранением основного звена - активации ПОЛ - и взаимосвязанных с ним гиперкоагуляции, активации нейтрофильных гранулоцитов и метаболических нарушений.

4. Фармакологическая коррекция стрессорных повреждений препаратами различного спектра действия оказывает превентивное влияние'при последующей смене воздействующего стрессорного фактора и создает благоприятные условия для адаптации к физической нагрузке (адаптивное воздействие препаратов).

Апробация работы

Результаты работы и основные положения диссертации были доложены и обсуждены на 2-й Всероссийской конференции по программе "Университеты России" (г. Нальчик, 1994), на II, III и IV Российских национальных конгрессах "Человек и лекарство" (г. Москва, 1995, 1996, 1997), на I и II Российской научно-практических конференциях с международным участием "Реабилитация больных с сердечно-сосудистыми заболеваниями" (г. Москва, 1995, 1997), на I съезде Российского научного общества фармакологов (г. Волгоград, 1995), на V Всероссийском съезде кардиологов (г. Челябинск, 1996), на I Российском конгрессе по патофизиологии с международным участием "Патофизиология органов и систем. Типовые патологические процессы" (г. Москва, 1996), на III Международном конгрессе "Иммунореабилитация и реабилитация в медицине" (г. Москва, 1996), на III Всероссийской конференции, посвященной проблемам лечения тромбозов, геморрагии и ДВС-синдрома (г. Москва, 1997), на Российской конференции, посвященной 75-летию профессора И.В.Заиконниковой "Фармакология и токсикология фосфорорганических и других биологически активных веществ" (г. Казань, 1996), на республиканской научно-практической конференции "Актуальные вопросы комбустологии, реаниматологии и экстремальной медицины" (г. Саранск, 1996), на XXI, XXII, XXIV Огаревских чтени-

ях (г. Саранск, 1993, 1995), на XXXI Научной конференции преподавателей и сотрудников МГПИ им.М.Е.Евсевьева (г. Саранск, 1996).

Публикации.

По результатам диссертации опубликовано 33 работы.

Структура и объем работы.

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, главы "Материалы и методы", трех глав собственных наблюдений, заключения, выводов и указателя литературы. Текст изложен на 359 страницах машинописного текста, иллюстрирован 32 рисунками и 67 таблицами. Список использованной литературы включает 829 источников, из них 520 отечественных и 309 иностранных.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Возможности фармакологической коррекции повреждений, возникающих при длительном стрессе, изучены на модели 30 суточной иммобилизации при помещении животных в клетки малого объема, ограничивающие их перемещение, но не затрудняющие доступа к воде и пище (Тявокин В.В.. 1975).

Исследование проведено на 190 половозрелых кроликах-самцах породы "шиншилла" массой 2-3 килограмма.

Первый раздел экспериментов составили 9 серий, в которых было изучено влияние вводимых ежедневно фармакологических препаратов на динамику малонового диальдегида, активности ферментов антиоксидантной защиты в плазме и эритроцитах и функциональной активности нейтрофильных грануло-цитов на 7, 14 и 30 сутки иммобилизации, а также процессы срочной адаптации к физической нагрузке после 30 суток ограничения подвижности.

Учитывая данные о разобщении процессов тканевого дыхания и фосфо-рилирования, нарушении перфузионно-вентиляционных отношений и функции внешнего дыхания при длительном ограничении подвижности, которые в итоге приводят к возникновению тканевой гипоксии: для профилактики патологического процесса при длительном иммобилизационном стрессе нами был выбран цитохром С, один из наиболее изученных и нашедших широкое применение препаратов антигипоксического действия.

В экспериментах использовался цитохром С, полученный биотехнологическим путем. Доза была рассчитана исходя из рекомендуемой для однократного внутривенного введения терапевтической дозы 10 мл (4 мл) на инъекцию (Машковский М.Д., 1993).

Результатами ряда работ подтверждается эффективность цитохрома С при различных гипоксических процессах (Гацура В.В., Лыско А.И., 1994)

Учитывая данные о повышении толерантности к физической нагрузке иод воздействием цитохрома С у больных со сниженным функциональным резервом сердца при-ИБС (Яшина Е.Р. с соавт., 1993) было изучено и влияние препарата на срочную адаптацию к физической нагрузке после завершения иммобилизации.

Учитывая развиваюшееся поражение желудочно-кишечного тракта при стрессе, катаболическую направленность метаболических процессов в организме, гипоальбуминемию и нарушение белковосинтетической функции печени (Федоров И.В., 1982; Инчина В.И., 1982) при длительном ограничении подвижности мы использовали для коррекции развивающихся патологических изменений сбалансированный раствор аминокислот вамин N (Швеция, фирма "Pharmacia"). В состав вамина N входят левовращающие изомеры аминокислот (аланин 3,0 г; аргинин 3,3 г; аспарагиновая кислота 4,1 г; валин 4,3 г; гистидин 2,4 г; глицин 2,1 г; глутаминовая кислота 9,0 г; изолейцин 3,9 г; лейцин 5,3 г; лизин 3,9 г; метионин 1,9 г; пролин 8,9 г; серии 7,5 г; треонин 3,0 г; триптофан 1,0 г; фенилаланин 5,5 г; тирозин 0,5 г; цистеин 1,4 г; электролиты натрий 50 ммоль/л, калий 20 ммоль/л, кальций 2,5 ммоль/л, магний 1,5 ммоль/л, хлориды 55 ммоль/л). Содержание аминокислот составляет 862 г/л, из которых доля незаменимых 37,6 г/л (43%), общий азот раствора равен 12,0 г/л, из которых на L-аминный азот приходится 9,7 г/л (81,7%). Белковый эквивалент около 75 г/л.

Большинство работ посвящено анализу фармакологического действия отдельных аминокислот при различных патологических состояниях.

Отмечено эндотелиопротекторное действие вводимого извне L-аргинина (Nakanishi К. et al., 1992), стимулирующего влияния L-аргинина и L-лизина на фагоцитарную активность изолированных нейтрофилов периферической крови доноров без возрастания продукции супероксидного аниона даже при стимуляции (Adel Rio А., 1992).

Аденозин, как метаболит клеточного пуринового обмена, высвобождается в интерстиций при неадекватных снабжениях сердца кровью и питательными веществами, приводит к снижению потребности в кислороде и питательных веществ при ишемии миокарда, а также к повышению снабжения этими субстратами, торможению агрегации тромбоцитов и адгезии лейкоцитов к клеткам эндотелия, ингибируя возникающие при этом перекисные анионы (Richard! G. et al., 1993).

Альбумин способен предотвращать образование свободных радикалов (Симишкина A.A. с соавт., 1993). Выводы авторов указывают на необходимость дальнейшего изучения механизма действия аминокислот при различных патологических состояниях, в развитии которых стрессорное повреждение имеет существенное значение.

Таким образом, изучение отдельных аминокислот и их комплексов в ряде

экспериментачьных работ и длительное клиническое наблюдение показали перспективность их использования в клинической практике. Спектр действия аминокислот в организме довольно широкий и полностью не изучен, а сведения о влиянии их на течение хронического стресса отсутствуют. Поэтому одними из выбранных нами для исследований в условиях пролонгированного иммобилизацнонного стресса препаратов явился сбалансированный комплекс аминокислот - вамин (Швеция, "Fharmacia"). Препарат применяли в дозе 5 мл на 1 кг массы внутривенно ежедневно со 2-го дня иммобилизации-до окончания эксперимента. Эксперментальная доза рассчитывалась в соответствии с терапевтическим объемом препарата, вводимого при внутривенной инфузии (Vidal, 1996).

Следующим препаратом, вызвавшим интерес в плане изучение его влияния на течение патологических процессов при пролонгированном иммобнли-зационном стрессе, явился ксимедон. Ксимедон синтезирован в Институте органической и физической химии им. А.Е.Арбузова КФАН РФ группой д.х.н. В.С.Резника. Среди различных классов химических соединений пиримидины обладают наибольшей способностью стимулировать клеточную регенерацию. Механизм действия производных пиримидина связан с блокированием синтеза уридинмонофосфата из оротовой кислоты и усилением синтеза (по запасному пиридинкиназному пути) фосфатов уридина и пиримидина - основных компонентов нуклеиновых кислот Билич Г.Д., Колла В.Э., 1975). В итоге возрастает концентрация ДНК и РНК в ядре и, как следствие, концентрация структурных и ферментных белков в цитоплазме клетки. Этот анаболический эффект пиримидинов лежит в основе стимуляции клеточной регенерации и иммуногенеза (Хамитов Х.С. с соавт., 1986).

СН3 .

Н3С

CHi-CHjOH

Ксимедон - 1,2-дигидро-4,6-диметил-Ы-(Р-оксиэтил) пиримидон-2 был внесен в реестр лекарственных средств, разрешенных к применению в медицинской практике и к производству приказом МЗ МП РФ N 287 от 7.12.1993 г.

Препарат действует как синтетический аналог регуляторов пептидов

(Измайлон Г.Л. с соавт., 1995). Обнаружено ангиопротекторное и гипохолесте-ринемическое действие (Ибрагимов О.Б., 1994; КатЬигц Я. « а1., 1992).

Данные экспериментальных исследований свидетельствуют о низкой токсичности ксимедона: ЬЭ5о при пероральном введении для мышей составила 4,2 г/кг, для крыс - 3,8 г/кг (Горбунов С.М., Измайлов С.Г., 1986). Экспериментально и клинически подобранная терапевтическая доза составляет 30 мг/кг, то есть 1/130 от 1ЛЭ5().

Ибрагимовым О.Б. (1994) отмечена неспецифическая стимуляция ан-тиоксидантной системы организма ксимедоном при моделировании гипокинезии у крыс в течение 7 суток.

Интерес к применению ксимедона при пролонгированном иммобилиза-ционном стрессе возник в связи с тем, что препарат оказывает регенерирующее действие на эндотелий артериальных сосудов, связанное, по мнению И.КатЬиге е1 а1. (1992) с активацией пролиферации эндотелиоцитов или с усилением их миграции. А также то,, что ксимедон нормализует соотношение между содержанием фибриногена и показателями фибринолиза (В.И. Погорельцев, 1996), оказывает выраженное иммуностимулирующее действие на лимфопоэз и Т-клеточное звено иммунитета (Валимухаметова Д.А. с соавт., 1986), повышает окислительную способность митохондрий, усиливает биоэнергетическое обеспечение адаптогенных реакций, индуцирует синтез белка, уменьшает проницаемость сосудистой стенки, улучшает общее и региональное кровообращение (Горбунов С.М., Измайлов С.Г., 1986; Хасанова М.И. с со авт.,

Одним из препаратов антиоксидантного типа действия , выбранного нами для изучения в условиях длительного иммобилизационного стресса, был димефосфон, малотоксичное фосфорорганическое соединение, не проявляющее антихолинэстеразной активности.

Димефосфон, как химическое соединение, впервые был синтезирован А.Н.Пудовиком (1952). Химико-технологические исследования и разработки: направленные на создание димефосфона выполнены в институте органической и физической химии им. Б.А.Арбузова Казанского научного центра РАН под руководством к.м.н. А.О.Визеля, А.А.Муслимкина и Э.А.Гурылева.

Димефосфон относится к фосфорорганическим соединениям и представляет собой диметиловый эфир 1,1-диметил-З-оксибутилфосфоновой кисло-

1996).

сн3о сн3 о

/

сн3о сн3

ты. Экспериментальные и клинические исследования выявили широкий спектр биологической активности днмефосфона. Препарат был внедрен в клиническую практику в качестве антиацидотинеского п мембраностабилизирую-шего средства (Студенцова И.А. с соавт., 1990).

Препарат малотоксичен. ЬО50 = 2300-2500 мг/кг для крыс, ЬО50 = 1500 мг/кг для кроликов. Используемая в эксперименте доза составила 50 мг/кг.

Гистохимические исследования И.А.Студенцовой и соавт. (1974) выявили способность димефосфона вмешиваться в ферментативные процессы. В частности, было отмечено стимулирование ключевого фермента пешозо-фосфатного цикла - глкжозо-6-фосфатдегидрогеназы, которая является основным поставщиком в НАДФ Н2, играющего роль в трансмембранном транспорте калия. Доказана способность димефосфона снижать уровень пировиноградной кислоты крови, усиливать эндогенное дыхание, внешний путь окисления в митохондриях. Нормализация кислотно-основного состояния димефосфоном осуществляется также за счет интенсификации почечного и легочного механизма регуляции кислотно-основного состояния, усиления тканевого метаболизма и внутриорганного кровотока (Визель А.О., 1974)..

Мембраностабшшзирующий эффект днмефосфона реализуется за счет связывания ионов кальция (Зернов И.Н., 1985).

Антиоксидантная активность димефосфона показана в исследованиях И.А.Студенцовой, Р.Х.Хафизьяновой (1992), Р.Х.Хафизьяновой. Нормализующее влияние димефосфона на ПОЛ опосредовано через стимуляцию антиокислительной системы, ведущим компонентом которой является глутатионо-вый буфер клетки (Зиганшина Л.Е. с соавт., 1990). Препарат способствует интенсивному переходу восстановленной формы глутатиона в окисленную, за счет чего может реализоваться его защитное действие при липидной перокси-дации.

Для проведения фармакологической коррекции патологических изменений при пролонгированном иммобилизационном стрессе нами был использован 3-окси-6-метил-2-этил-пиридина-гидрохлорид (эмоксипин).

ОН

НС1

ЛД50 для эмоксипина 241 мг/кг (270-212). Препарат малотоксичен и без-

опасен при длительном применении (Гуськова Г.Л., 1992).

Использованная в эксперименте доза соответствует средней терапевтической дозе эмоксипина 1 мг/кг. Эмоксипин успешно применяют при лечении заболеваний, сопровождающихся усилением перекисного окисления липидов и гипоксией, таких как острая кровопотеря, кожные заболевания, глаукома и др., нестабильная стенокардия, инфаркт миокарда и др. (Сологуб A.A. с соавт., 1992; Лазебник Л.Б. с соавт., 1992; Михин В.П. с соавт.,1994).

Предположить эффективность применения эмоксипина для профилактики повреждений при пролонгированном стрессе позволило то, что препарат является антиоксидантом, обладающим антигипоксической, мембраностабили-зирующей ангиопротекторной, антиагрегационной и фибринолитической активностью (Столяров В.А. с соавт., 1993; Лазебник Л.Б. с соавт., 1994; Рясина Т.В. с соавт., 1994). Таким образом, препарат, обладая широким спектром фармакологического воздействия, способен устранить сразу несколько звеньев патогенеза длительного стресса. Важным в выборе эмоксипина явилось и улучшение под его воздействием метаболизма миокарда.

По химической структуре мексидол является соответствующей эмокси-пину солью янтарной кислоты - 3-окси-6-метил-2-этиллиримидина сукцинат. LD5o мексидола 430 мг/кг (Гуськова Г.А., 1992).

О

ОН i I

СН2- С - ОН

I

j СН2 - С - ОН

:!

Н SC N С2Н5 О

По данным анализа 500 новых химических соединений с антиоксидант-ными свойствами, мексидол является одним из наиболее активных антиокси-дантных препаратов, превосходящих по своей активности дибунол (Островский О.В. с соавт., 1996). Мексидол обладает широким спектром биологической активности: препарат повышает устойчивость организма к кисло-родзависимым патологическим состояниям (шок, нарушение мозгового кровообращения и др.), улучшает мнестические функции ЦНС, уменьшает токсические эффекты алкоголя (Смирнов Л.Д., 1993). Он ингибирует образование продуктов ПОЛ, а также образование супероксидных и гидроксильных радикалов (Островский О.В. с соавт., 1996).

Мексидол был выбран для изучения его действия на модели длительного

стресса, так как его особенностью является уннкалыюе сочетание антианш-нальных, липорегулирующих и кардиопротекторных эффектов (Сернов J1.II. с соавт., 1995). Кроме того, мексидол оказывает эффект при холодовом Агафонова О.В., Лосев A.C., 1993) и гииоксическом стрессе (Г'ерманова ЭЛ., 1994; Косолапое В.А. с соавт., 1994).

По антигипоксическому действию мексидол превосходит эмоксинин (Лукьянова Л.Д. с соавт., 1993) и, в отличие от него, оказывает прямое энерге-зирующее действие, эффект которого обусловлен освобождением сукцинага в процессе внутриклеточного гидролиза, что немаловажно в условиях нарушенного энергообмена при длительном ограничении двигательной активности.

Значимым моментом в выборе мексидола явилось также и его психотропное действие. Подобно ноотропным препаратам, он обладает антиамне-стическим и противогипоксическим действием, подобно транквилизаторам -оказывает анксиолитическое действие. Он положительно влияет на неврологические дефициты, наблюдаемые при старении, восстанавливает нарушение пространственно-временной дифференцировки, улучшает вегетативные и эмоциональные мотивационные реакции (Гарибова Г.Л. с соавт., 1992; Воронина Т. А., 1993).

В качестве препарата сравнения, учитывая стрессорный тип реагирования животных на лишение свободы перемещения, был выбран реланиум. Препарат вводился за 30 минут до ограничения подвижности и затем ежедневно 1 раз в день до 30-х суток эксперимента в дозе 0,17 мг/кг. Доза была рассчитана в соответствии со средней разовой дозой 10 мг по данным Машковского М.Д. (1993).

В зависимости от препарата, выбранного с целью коррекции, серии распределились следующим образом:

№ Препарат Доза Путь Количество

серии введения животных

1. Контроль - - 25

9 реланиум 0,17 мг/кг в/м 8

3. цитохром С 0,125мг/кг в/в 9

4. вамин 5 мл/кг в/в 7

5. эмоксипин 1 мг/кг в/в 10

6. мексидол 1 мг/кг в/в 8

7. ксимедон 30 мг/кг в/в 10

8. димефосфон 50 мг/кг в/в 10

9. Комплексная коррекция - в/м, в/в 8

В 9-й серии было проведено исследование комплексного воздействия ре-ланиу.ма в дозе 0,4 мг/кг, вводимого в/м за 2 часа до начала эксперимента и ежедневно однократно в течении первых трех суток, последующего ежедневного введения мексидола (1 мг/кг внутривенно с 3-х до 30-х суток) и вамина (5 мл/кг внутривенно с 7 до 30-х суток опыта).

После завершения иммобилизации через 1 сутки пребывания животных в условиях клеток, обычного для вивария размеров (50x40x40 см3), было изучено воздействие другого стрессирующего фактора - однократной дозированной физической нагрузки, которую обеспечивали, помещая животных в электрический третбан при скорости вращения колеса 12,5 об/мин (длина беговой дорожки составила 4,75 м, скорость пробега 50 м/мин).

Второй раздел экспериментов представлен пятью сериями опытов, в которых было изучено влияние однократного (за 2 часа до бега) введения препаратов (цитохрома С, эмоксипина, мексидола, ксимедона и димефосфона на процессы срочной адаптации к физической нагрузке после длительного (30 суток) иммобилизационного стресса. Серии распределились следующим образом:

Серии Препарат Доза Количество животных

10. цитохром С 0,125 мг/кг 8

п. димефосфон 50 мг/кг 14

12. ксимедон 30 мг/кг 7

13. эмоксипин 1 мг/кг 6

14. мексидол 1 мг/кг 9

Задачей третьего раздела экспериментов было изучение влияния препаратов на биохимические показатели и гемостаз при длительном иммобилиза-ционном стрессе, а также на последующее течение процессов долговременной адаптации к физической нагрузке. Расширение двигательного режима подопытных животных после ограничения подвижности проводили постепенно: 1-ю неделю пребывания в обычных условиях содержания вивария; 2-ю не-.делю - однократный ежедневный бег в третбане в течение 1-й минуты; 3-ю неделю - однократный ежедневный бег в течение 2-х минут; 4-я неделя - однократный ежедневный бег в третбане по 3 мин. Серии, в зависимости от применявшегося на фоне иммобилизации фармако-корригирующего препарата, распределились следующим образом:

№ серии Препарат Доза Количество животных

15. эмоксипин 1м г/кг . 6

16. мексидол 1 мг/кг 5

17. цитохром С 0, 125 мг/кг 5

18. вамин 5 мл/кг 5

19 ксимедон 30 мг/кг 8

20. димефосфон 50 мг/кг 5

21. комплексная коррекция 6

22. контроль 11

Для оценки изменений, возникающих в организме при смене стресси-рующего фактора (долговременная адаптация к физическим нагрузкам после 30 суточного ограничения подвижности) использовали ряд биохимических и электрофизиологических методов исследования, проводимых после окончания тренировок в третбане.

Для оценки изменений в метаболическом звене гемостаза проводили исследование общего холестерина сыворотки крови по методу Илька, Р-липопротеинов по методу Бурштейна, холестерина липопротеинов высокой плотности (Хс ЛПВП) по методу Абель после гепарин-марганцевой преципитации и осаждения из сыворотки Р-липопротеинов, триглицеридов и общих липидов при помощи диагностических наборов фирмы "Лахема" (Чехия). Расчет индекса атерогенности проводили по формуле:

(общий холестерин - холестерин ЛПВП) / холестерин ЛПВП. Общий белок сыворотки крови определяли биуретовой реакцией, белковые фракции - методом электрофореза на агаре, активность ферментов аланиловой и аспарагиновой трансаминаз - методом Райтмана-Френкеля, содержание калия и натрия в плазме крови - методом пламенной фотометрии, глюкозы крови - глюко-оксидазным методом по окислению О-толуидина (Меньшиков В.В., 1987).

На 7, 14 и 30 сутки иммобилизации исследовали содержание в плазме и эритроцитах конечного продукта перекисного окисления липидов - малонового диальдегида (МДА) по реакции с тиобарбитуровой кислотой (Конюхова С.Г. с соавт., 1989), определяли активность ферментов антиоксидантной системы: глутатионпероксидазы плазмы и эритроцитов (Гаврилова А.Р., Хмара Н.Ф., 1986), каталазы плазмы и эритроцитов (Королюк М.А. с соавт., 1985), супе-роксид-дисмутазы в эритроцитах (Чевари С. с соавт., 1986).

Для биохимических исследований использовали спектрофотометр "СФ-

46" и фотоэлектроколориметр "КФК-2 МП."

Для оценки гемостаза определяли время свертывания крови по Ли и Уайту, время рекальцификации плазмы, силиконовое и каолиновое время рекаль-цификации плазмы, индекс диапазона контактной активации (ИДКА), активность антитромбина III, естественный лизис сгустка по М.А. Котовщиковой и Б.А. Кузнику, фибриноген А по Рутберг, содержание фибрин-мономерных комплексов и фибриногена Б'с протаминсульфатом и ß-нафтолом (Балуда В.П. с соавт., 1980).

Цитохимическую активность нейтрофильпых гранулоцитов оценивали на 7, 14 и 30 сутки эксперимента по содержанию в них миелопероксидазы, лизо-сомально-катионных белков, теста восстановления нитросинего тетразолия (НСТ-теста). Фагоцитарную активность определяли по интенсивности поглощения нейтрофильными гранулоцитами латекса (Меньшиков В.В., 1987).

Статистическая обработка результатов исследований проведена с помощью t-критерия Стьюдента (Закс Л., 1976) при 5% уровне значимости на персональном компьютере IBM PC/AT 386 SX.

До ограничения подвижности, после окончания иммобилизации и после бега регистрировали ЭКГ при помощи игольчатых электродов'. При анализе динамики ЭКГ на фоне длительного ограничения подвижности и при длительной адаптации к физической нагрузке учитывали признаки ишемических изменений в миокарде (Тявокин В.В., 1966; Николаева Л.Ф., Аронов ДМ., 1988) в баллах: 0 - отсутствие отрицательной динамики; 1 - снижение амплитуды зубца Т; 2 - сглаженность зубца Т; 3 - инверсия зубца Т; 4 - появление признаков инфаркта миокарда.

Тест с физической нагрузкой получил широкое распространение в качестве прогностического и оценочного (Поляков с соавт., 1993). Дозированная физическая нагрузка применяется и для оценки адекватности ответа реакции сердечно-сосудистой системы на стресс. Анализ результатов такого тестирования позволяет разработать необходимые меры по обеспечению лучшей стабилизации гемодинамики, по предупреждению патофизиологических сдвигов метаболизма и обеспечению адаптационных процессов. Однако, учитывая, что одним из критериев психической адаптации в экстремальных условиях является сохранение способности к целенаправленной адаптивной деятельности (Парин Л.А., Соколов В.П., 1981), при оценке стресс-протекторного эффекта изучаемых препаратов кроме выявления их влияния на соматические показатели при длительном стрессорном воздействии, необходима оценка адаптивной поведенческой деятельности животных в стресс-ситуации (Вальдман A.B. с соавт., 1987).

Для этого, учитывая динамику ЭКГ, снятой до и после бега, мы посчитали целесообразным ввести разработанные нами критерии степеней адаптации к

однократной физической нагрузке, как к стрессорному воздействию:

I степень - физиологическая адаптация.

I а - без напряжения компенсаторных механизмов.

При анализе динамики ЭКГ до и после физической нагрузки использовали критерии физиологического типа реакции по B.C. Гасилину (отсутствие изменений на ЭКГ, учащение частоты сердечных сокращений (ЧСС) до -8% от исходного),

I б - с напряжением компенсаторных механизмов: больший рост ЧСС, на ЭКГ физиологические изменения, выделенные В.П. Лупановым и И.И. Быковым (1988) (увеличение зубцов PII и P1II с уплощением вершины, поворот электрической оси сердца вправо; мнимое смещение интервала ST вниз из-за тахикардии, т.е. наслоение отрицательного Т на S-T; динамика зубца Т в результате изменения тонуса вегетативной нервной системы или гипервентиляции, появление или более отчетливое выявление зубца U во втором стандартном отведении, конкордатного зубцам Р и Т; укорочение интервала QT пропорциональное частоте сердечных сокращений. Допускалась промежуточная реакция ЭКГ, характеризуемая B.C. Гасилиным (1986) снижением интервала ST не более, чем на 0,5 мм, снижение зубца Т, либо его небольшая инверсия, появление единичных экстрасистол.

II степень - патологическая адаптация или адаптация с повреждением. На- с обратимым повреждением: появление признаков ишемических изменений ЭКГ, проходивших самостоятельно. Критериями ишемических изменений ЭКГ считали возникшее после бега на трет бане смещение интервала ST вверх на 1 мм и более при длительности смещенной части сегмента ST, составляющей более 50% от длительности QT; горизонтальное, косое нисходящее, либо "корытообразное" смещение интервала ST вниз на 1 мм и более; инверсию зубца Т в нескольких отведениях, появление нарушений ритма и проводимости (Лупанова В.П., Быкова И.И., 1988; Лупанова В.П., Сидоренко Б.А., 1982, Га-силин B.C. )

II б - адаптация с необратимым повреждением. Устанавливалась при появлении на ЭКГ признаков, характерных для инфаркта миокарда.

0 степень - отсутствие адаптации - выставлялась если животное прекращало активно перемещаться до истечения 1 минуты.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

В выполненных исследованиях на модели непрерывного длительного стресса выявлены его патогенетические звенья и с их учетом проведено изучение фармакологических препаратов.

Для длительной иммобилизации характерно угасание нейрогуморальной

стимуляцни, а также быстрое наступление фазы декомпенсации, о чем свидетельствуют деструктивные изменения, развивающиеся на тканевом уровне (Инчина В.И., 1994), что указывает на несостоятельность адаптационных механизмов. К числу наиболее ранних реакций (исключая нейрогормональные сдвиги) относится активация перекисного окисления липидов в плазме и эритроцитах.

Повреждающий эффект продуктов ПОЛ подтверждается исследованиями многих авторов при различных патологических состояниях (Николаев В.И., 1996; Панасюк E.H., Скакун Л.Н., 1985). Однако, вряд ли стоит трактовать данный механизм однозначно, ведь в условиях развивающейся при стрессе имму-нодепрессии эта реакция может нести в себе элементы саногенеза (Потапов В.Н. с соавт., 1996). Кроме того, реактивные оксигенные радикалы в эритроцитах стимулируют присоединение к гемоглобину молекул атмосферного кислорода (Сторожук А.П. с соавт., 1996).

Поэтому активацию ПОЛ в данном случае следует оценивать в комплексе с механизмом его ограничения - состоянием антиоксидантной системы. Можно предположить, что при длительной иммобилизации в условиях нарушенного метаболизма и энергетического обеспечения активация ПОЛ играет адаптирующую роль, учитывая повышение "текучести" липидного слоя мембран под влиянием продуктов липопероксидации. Кроме того, изменение характера метаболических процессов при стрессе, а именно, переключение энергетического обеспечения тканей с преимущественно углеводного на жировой (Федоров И.В., 1971; Шпак' С.И. с соавт., 1996), позволяет предположить возможную роль усиления ПОЛ в активации энергетических процессов.

Однако, как и всякая компенсаторная реакция при дефиците ограничивающих ее механизмов, активация перекисного окисления липидов становится патогенным фактором из-за неадекватной реакции ферментов антиоксидантной защиты.

При 30 суточном ограничении подвижности наблюдается активация процессов перекисного окисления липидов на фоне ограничения роста или угнетения активности ферментов антиоксидантной системы по сравнению с более ранними сроками эксперимента, что способствует накоплению продуктов ПОЛ, которые, в свою очередь, могут ингибировать синтез ферментов антиоксидантной системы. Возникающий порочный круг приводит к неконтролируемому росту липопероксидации, что может явиться причиной развития полиорганных повреждений в организме (Лишманов Ю.Б., Маслов Л.Н., 1994).

Применение реланиума при длительном иммобилизационном стрессе • ограничивает в определенной степени рост малонового диальдегида, но, однако, приводит к стойкому ингибированию активности всех изученных ферментов антиоксидантной системы.

Таблица 1.

Уровень МДА и активности ферментов антиоксидантной системы при воздействии физических нагрузок после 30 суточной иммобилизации (М±т %)_

Контроль Реланиум Цитохром С Вамин Ксимедон

1 2 1 1 2 1 2 1 2

МДА 212,4+8 187,6±17 162,0±10 237,б±13 181,1±12 176,3±9,7 222,5± И 161,8±15,3 186,1117,3

плазмы Р>0,05 Р<0,001 Р,>0,05 Р<0,005 Р,<0,01 Р<0,01 Р,<0,01 Р>0,05

Р,<0,005 Pi>0,05 Pi>0,05 Pi>0,05

МДА 190,3±20 184,8+20 123,1±8 126,1 ±6,1 136,3±6,6 129,2±9,7 145,5+5 80,4±3,3 115,815,1

эритро- Р>0,05 Р<0,05 Р,<0,005 Р>0,05 Pi<0,05 Р>0,05 Р,<0,001 Р<0,001

цитов Р,<0,001 Р,<0,05 Pi<0,01 Р,<0,005

ГП 114,3±19 133,1±13 59,1 ±6 136,9±12 191,0±6,1 205,6±14,1 186,0±7 269,5+5,6 260,0112,0

плазмы Р>0,05 Р<0,01 Р|>0,05 Р<0,001 Р,<0,005 Р>0,05 Р,<0,001 Р>0,05

Р,<0,01 Р;<0,005 Р,<0,005 Р,<0,001

ГП 109,1+1 \ 158,0+8 46,7±6 155,6+13 236,3+24 123,3±2,9 208,0±4 30,7±1,9 34,612,0

эритроци Р<0,005 Р<0,01 . Р|<0,05 Р<0,01 Р,>0,05 Р<0,001 Р,<0,001 Р>0,05

TOB * Р,<0,001 Р,<0,01 Р,<0,001 Р,<0,001

Каталаза 39,1+4,5 44,4+5,1 98,7+12 186,717,3 112,4±5,2 70,4+9,7 85,0±7,0 81,5+13,7 56,316,1

плазмы Р>0,05 Р>0,05 Р,<0,001 Р<0,001 Р,<0,01 Р>0,05 Pi<0,01 Р>0,05

Р[<0,001 Р,>0,001 Pi<0,001 Р,>0,05

Каталаза 29,6±9 19,3±1,3 59,4±7 122,5±8,7 9,6±1,9 136,3±15,4 11,0±1,3 145,5+4,9 117,2+7,8

эритроц. Р>0,05 Р<0,001 Р,<0,001 Р<0,001 Pi<0,001 Р<0,001 Р,<0,001 Р<0,01

Р,<0,005 Р|<0,005 Р,<0,001 Pi<0,001

СОД 105,7+6 134,3±23 59,7+5 487,1±13 412,9±18 67,5±12,6 114,7±12 248,9+10,0 246,1111,0

эритроци Р>0,05 Р<0,05 Р,<0,001 Р<0,01 Pi<0,05 Р<0,05 Р,<0,001 Р>0,05

TOB Р,<0,01 Р(>0,001 Pi>0,05 Р, <0,001

Примечание: Р - достоверность рассчитана по отношению к данным 30 суток; Р| - достоверность рассчитана по отношению к контролю.

1 - уровень показателей к 30 суткам иммобилизации; 2 - к моменту окончания тренировок.

Таблица 2.

Уровень МДА и активности ферментов антиоксидантной системы при воздействии физических нагрузок после 30 суточной иммобилизации (М±т %)_

Контроль Димефосфон Эмоксипин Мексидол Комплексная

коррекция

1 2 1 2 1 2 1 2 1 2

МДА 212,4+8,4 187,6±17 102,6+13 147,3±5,4 119,9±24 127,4±8 84,7+5,5 131,9±8,7 166,5±8,7 182,4+22

плазмы Р>0,05 Р,<0,001 Р<0,01 Р, <0,005 Р>0,05 Р1<0,001 Р<0,001 Р,<0,005 Р>0,05

Р|<0,05 Р,<0,005 Р,<0,05 Р|>0,05

МДА 190,3+20 184,8+20 65,6+6,2 117,9±8,5 46,3±9,1 116,3±15 52,7±7,5 68,4±4,5 129,4±8,4 95,1±7,9

эритро- Р>0,05 Р,<0,001 Р<0,001 Р,<0,001 Р<0,001 Р,<0,001 Р>0,05 Р,<0,01 Р<0,01

цитов Р,<0,01 Р,<0,01 Р1<0,001 Р,<0,001

ГП 114,3+19 133,1 + 13 58,3±6,8 120,9+16 94,7±8,1 195,0±6 178,5+5 215,2±7,9 128,513,1 -

плазмы Р>0,05 Р|<0,05 Р<0,005 Р|>0,05 Р<0,001 Р,<0,01 Р<0,005 Р)>0,05

Р|>0,05 Р,<0,001 Р,<0,001

ГП 109,1±П 158,0±8 27,2±4,6 164,6+11 249,0±29 357,3±10 180,9+3 104,9+8,3 161,2+4,2 -

эритро- Р<0,005 Р1<0,001 Р<0,001 Р,<0,001 Р<0,005 Р,<0,001 Р<0,001 Р)<0,001

цитов Р|>0,05 Р,<0,001 Р,<0,001

Каталаза 39,1±4,5 44,4+5,1 47,1 ±6,4 35,45±2,9 48,6+5,2 54,4+8,6 51,1±5,6 89,8±10,7 117,3+9,7 80,0±8,4

плазмы Р>0,05 Р|>0,05 Р>0,005 Р(>0,05 Р>0,05 Р|>0,05 Р<0,01 Р,<0,001 Р<0,005

Р1>0,05 Р,>0,05 Р|<0,005 Р,<0,001

Каталаза 29,6±8,9 19,3+1,3 99,7±10 64,3+6,1 92,6±6,4 184,3±15 49,1+10 140,5+9,6 39,5±3,6 27,7+1,3

эритроц. Р>0,05 Р,<0,001 Р<0,01 Р|<0,001 Р<0,001 Р]>0,05 Р<0,001 Р,>0,05 Р<0,005

Р,<0,001 Р,<0,001 Р,<0,001 Р,<0,001

СОД 105,7+6 134,3±23 254,5±18 105±10,5 227,3±13 246,7±13 198,2±5 229,4±5,4 388,7+30 65,8+5,1

эритро- Р>0,05 Р,<0,001 Р<0,001 Р|<0,005 Р>0,05 Р,<0,001 Р<0,005 Р,<0,001 Р<0,001

цитов Р|>0,05 Р|<0,005 Р,<0,005 Р,<0.001

Примечание: Р - достоверность рассчитана по отношению к данным 30 суток; Р| - достоверность рассчитана по отношению к контролю.

1 - уровень показателей к 30 суткам иммобилизации; 2 - к моменту окончания тренировок.

Препараты, регулирующие метаболические процессы, оказывают более выраженное ингибирующее воздействие, чем реланум, на рост уровня вторичного продукта ПОЛ. Наиболее оптимальной нужно считать динамику активности антиоксидантных ферментов на фоне применения мексидола и ксимедо-на, где отмечается выраженный содружественный рост активности глутатион-пероксидазы (ГП) в плазме и эритроцитах и супероксиддисмутазы (СОД). Это позволяет инактивировать не только генерируемые активные кислородные радикалы, но и перекиси и продукты пероксидации липидов. Выявлена активация СОД эритроцитов ГП в плазме и на фоне димефосфона. Введение эмоксипина предотвращает снижение ГП и обеспечивает активацию СОД.

Таким образом, применение на фоне длительного иммобилизационного стресса препаратов с антиоксидантным типом действия.позволяет, в отличие от реланиума, оптимизировать реакцию антиоксидантной системы организма.

Как один из источников генерации активных форм кислорода, были изучены нейтрофильные гранулоциты (НГ). Активированные НГ выступают как пусковой или один из ранних факторов деструктивного процесса (Fantone J., Ward P., 1980). Воспринимая нарушения гемостаза, они растормаживают последующие звенья патогенеза, которые вместе определяют патоморфологиче-ский субстрат реакции при длительном иммобилизационном стрессе.

Нами были выявлены изменения цитохимической активности НГ при длительном иммобилизационном стрессе, заключающиеся в достоверном повышении показателей НСТ-теста, уровня лизосомально-катионных белков и активности миелопероксидазы.

Показателями активации НГ при ограничении подвижности является также возрастание их общего числа на ранних сроках наблюдения, снижение устойчивости лейкоцитов, их распад, изменение структуры и функциональных свойств (Джокуа A.A., 1987). '

Наиболее выраженное влияние на количественные показатели грануло-цитов концентраций адреналина, близких уровню "стрессовых воздействий", отмечено Балмасовой И.П. и Танаевой Н.И. (1996).

Параллельно с ростом цитохимической активности НГ было выявлено достоверное снижение фагоцитоза уже к 7 суткам ограничения подвижности (р<0,01), сохраняющееся до конца эксперимента.

Ослабление биоцидности отмечается как признак "функционального утомления" фагоцитов после их стимуляции (Маянский А.Н., Пикуза О.Н., 1996). У большинства людей в ответ на экстремальные воздействия мобилизация защитных сил приводит к их истощению и увеличению гетерогенности показателей (Петрова П.Г. с соавт., 1996). Это позволяет понять парадоксальные на первый взгляд наблюдения о снижении бактерицидности НГ при усилении их окислительного метаболизма. Причину авторы наблюдений видят в избы-

Таблица 3.

Цитохимическая активность нейтрофильных гранулоцитов при 30 суточном иммобилизационном стрессе (М±т %) ___

Показатели Контроль Введение на фоне иммобилизации

реланиума вамина эмоксипина димефосфона ксимедона

Фагоцитоз 44,5 ±4,6 100,5±13,1 87,2+10,6 156,9±15,2 63,4+7,9 182,1 ±10,4

Р|<0,005 Р[>0,05 Р|>0,05 Р,<0,005 Р,<0,005 Р|<0,001

Р2<0,01 Р2<0,005 Р2<0,001 Р2<0,05 Р2<0,001

нет 164,8±9,7 203±18 81,9+12 235,9±22,1 246,7+25,4 290+19

Р,<0,005 Р,<0,005 Р|>0,05 Р,<0,001 Р, <0,005 Р, <0,001

Р2<0,05 Р2<0,001 Р2<0,01 Р2<0,01 Р2<0,001

Лизосомально- 133,4±8,9 73,7±7 129,8+17,7 93,9± 11,6 86,6+4,2 105,6±4,6

катионовыс Р,<0,001 Р ,<0,00! Р|>0,05 Р,>0,05 Р|>0,05 Р|>0,05

белки Р2<0,001 Р2>0,05 Р2<0,05 Р2<0,001 Рз<0,05

Миелоперокси- 131,3±7,4 106,1+16,4 128,3+12,1 148,4±11,1 244,4+17,2 155,7±17,1

даза Р,<0,05 Р|>0,05 Р,>0,05 Р|<0,005 Р, <0,001 Р|<0,005

Р2>0,05 Р2>0,05 Р2>0,05 Р20,001 Р2>0,05

Примечание: Р) - достоверность рассчитана на отношение к исходным данным, Р2 - по отношению к контрольной серии.

точной продукции оксидантов- гиперстимулированиыми фагоцитами, повышении уровня внутриклеточных аутоокислительных процессов и подавлении активности клеток. Инициированный однократно ферментативный выброс в дальнейшем запускает цепную реакцию активации все новых и новых ферментов, в результате чего процесс начинает потенцироваться собственными продуктами (Галанкин В.Н., Токмаков A.M., 1991).

Применение в качестве корригирующих средств реланиума, вамина и комплексной коррекции позволило предотвратить падение уровня фагоцитоза НГ при длительном иммобилизационном стрессе. В сериях с введением ксиме-дона и эмоксипина выявлен достоверный рост этого показателя к 30 суткам эксперимента по сравнению с исходным уровнем. На фоне использования дн-мефосфона процент фагоцитоза снижался менее значительно, чем в контрольной серии (р <0,05).

Такая динамика соответствует и данным других авторов (Анохин В.А. с соавт., 1996; Исмагилов М.Ф. с соавт., 1996).

Рост генерации НГ активных форм кислорода при 30 суточном иммобилизационном стрессе не был выявлен только в сериях с мексидолом и вамином. На фоне введения ксимедона, димефосфона и эмоксипина показатели НСТ-теста достоверно превышали данные контрольной группы. Наибольший рост был отмечен при использовании ксимедона. Реланиум не предотвращал роста генерации активных форм кислорода нейтрофильными гранулоцитами.

В отличие от динамики лизосомально-катионных белков при длительном иммобилизационном стрессе, во всех сериях с применением корригирующих препаратов отсутствовал их рост, а на фоне введения реланиума показатель снижался по отношению к исходному уровню (р<0,001).

Активность миелопероксидазы не отличалась достоверно от исходной в сериях с применением реланиума, вамина и мексидола, соответствовала уровню контрольной серии на фоне введения эмоксипина и ксимедона и достоверно vBenHMHBanacb при использовании димефосфона и при комплексной коррекции

(Р<0,001).

Таким образом, в опытных сериях наблюдалась неоднозначная динамика показателей цитохимической активности нейтрофильных гранулоцитов.

Действие антиоксидантов в условиях, приводящих к активации НГ, по-видимому, сходно с эффектом вводимых извне антиоксидантных ферментов супероксиддисмутазы и каталазы, которые ослабляют повреждение клеток-мишеней активированными фагоцитами (Martin W., Kachel J., 1985). Однако, необходимо учитывать и возможное мембраностабилизирующее влияние изученных антиоксидантов на сами нейтрофильные гранулоциты (Cathcart M. et al., 1985). Ведь несмотря на то, что повышается их способность к генерации активных форм кислорода и биологически активных ферментов при иммоби-

лизационном стрессе и на фоне введения эмокснпина, димефосфона, ксимедо-на, это не приводит к такому же росту продуктов липопероксидации и нарушению гемостаза, как в серии без коррекции. Об этом свидетельствуют дальнейшие результаты нашей работы.

Высвобождение цитотоксических веществ из активированных НГ может вызывать деструктивные изменения в легких, повреждать эндотелий легочных капилляров (Sandborg P., Smolen J.T., 1988), повышать сосудистую проницаемость и легочное артериальное давление, участвовать в развитии спазма мнк-- ■ рососудов, отека легких, играет важную роль в развитии респираторного дистресс синдрома (Lindale М et al., 1991; Mocdal V., 1992).

Кроме того, стимулированные НГ и моноциты обладают прокоагулянт-ной активностью, что связано с синтезом в них тромбопластина, VII и VII а факторов свертывания крови (Nemerson J., 1988).

Таким образом, активация ПОЛ является триггерным механизмом в развитии цепи последующих патологических реакций. Длительный иммобнлиза-ционный стресс приводит к активации гемостаза и развитию ТГС синдрома.

Изменение гемостаза в начальный период ограничения подвижности, носит компенсаторный характер и проявляется гиперкоагулемией и активацией тромбоцитарного звена (Гладилина Г.А., 1987). При длительном иммобилизационном стрессе к 14 суткам развивается тромбо-геморрагический (ТГС) синдром, на что указывает рост продуктов паракоагуляции, фибриногена Б. О резком (в 9 раз) увеличении неполимеризующихся (заблокированных) фибрин-мономерных комплексов свидетельствует и положительный тест с протамин-сульфатом. ТГС-синдром сопровождается потреблением антитромбина III, концентрация которого резко снижается.

Дефицит антитромбина III повышает риск развития тромбозов (Mallorfe F.A. et al., 1989), особенно на фоне гиперкоагуляционных сдвигов, способствует нарушению микроциркуляции (Бизюк Л.А., 1991). Истощение запасов антитромбина III в условиях длительного ограничения подвижности обусловлено, по-видимому, не только его расходом на инактивацию факторов свертывания крови при ТГС, но и, вероятно, снижением его синтеза в печени, где выявляются глубокие дистрофические изменения, вплоть до некроза гепатоцитов (Инчина В.И., 1992).

Следует отметить, что тип реагирования на любое стрессорное воздействие системы гемостаза эволюционно закреплен и стереотипен в.виде реакции гиперкоагуляции (Горизонтова М.П., Чернух A.M., 1976). Исход данной реакции зависит от состояния системы фибринолиза - либо тромбоз при ее несостоятельности, либо - сохранение проходимости сосудистого русла или река-нализация при ее активации.

%

100 у 80 -60 -40 20 + 0

тЬ

Антитромбин III .„ -и ос «о

Ж I

в в 00

р

I

I

1

о о о о

ж ж ж л

I

I

I

Протамин-сульфатный тест

ед. 2,5 2 -1,5 -• 1 -0,5 0

во оо

О В 00

о о оо

Т « о « "1

т , Ёа , рЬ

рЬ

0 0 0 0 Ф1

5

1 2 3 4 5.6 7

Рис.1. Динамика некоторых показателей гемостаза при 30 суточном ограничении подвижности. 1 - интактная группа, 2 - контроль; иммобилизация на фоне введения: 3 - эмоксипина, 4 - мексидола, 5 - димефосфона, 6 - вамина, 7 - иммобилизация на фоне комплексной коррекции

Проведенные нами исследования свидетельствуют об иигибнровании фибринолитической активности крови при длительном иммобилизациониом стрессе.

Применение антиоксидантов на фоне длительного стресса позволяет предотвратить падение содержания антитромбина III. Наибольший уровень этого показателя отмечен в сериях с мексидолом, димефосфоном, при комплексной коррекции. На фоне введения эмоксипина содержание антитромбина III не отличается от исходного.

Время свертывания крови по Ли и Уайту под действием мексидола, эмоксипина и димефосфона не сокращается при 30 суточной иммобилизации.

Применение антиоксидантов и проведение комплексной коррекции позволяет ограничить рост фибриногена Б (более выражен эффект на фоне введения мексидола) или полностью предотвратить повышение его уровня при использовании вамина. В отличие от контроля, при введении эмоксипина, димефосфона и вамина не сокращается время рекальцификации плазмы.

Индекс диапазона контактной активации (ИДКД) не снижается, в отличие от контрольной группы, при проведении комплексной коррекции или монотерапии эмоксипином или мексидолом. На фоне же димефосфона, показатель даже растет по отношению к уровню интактной группы. Предотвращение снижения ИДКА и удлинение силиконового времени плазмы (эмоксипин, мек-сидол, димефосфон) по сравнению с контролем свидетельствуют о предупреждении повышения активности ферментов фазы контактной и фосфолипидной активации свертывания крови.

Таким образом, применение антиоксидантов в условиях длительного стресса предупреждает развитие гемокоагуляционных нарушений, предотвращая потребление антитромбина III и фибриногена в сосудистом русле, что предотвращает развитие ТГС и способствует улучшению микроциркуляции в органах.

Интересно влияние вамина на гемостаз в условиях длительного иммо-билизационного стресса. Время свертывания крови на фоне его применения значительно укорачивается так же, как в контроле. Аналогично растет показатель протамин-сульфатного теста и сокращается силиконовое время плазмы, что указывает на активацию факторов свертывания крови, особенно пусковых механизмов фосфолипидной активации. Однако, высокий уровень антитромбина III и полное предотвращение роста фибриногена Б свидетельствует о параллельной высокой функциональной активности антикоагулянтных и, косвенно, фибринолитических механизмов. Можно сделать вывод, что применение вамина способствует сохранению активации гемостаза'на стадии компенсаторной реакции и предотвращает ее переход в фазу патогенеза при длительном стрессе.

Традицнонные методы коррекции нарушений гемостаза предполагают воздействие на уже начавшийся (запущенный) каскад активации и, как правило, включают применение антикоагулянтов и фибринолитиков. Опасность геморрагических осложнений и инактивирование процессов фибринолиза при использовании антикоагулянтов, недостаточное действие гепарина при истощении запасов антитромбина III, низкая эффективность фнбринолити ческой терапии при свершившемся тромбозе и недостаточно высокой локальной концентрации препаратов (т.е. необходимость локального, например интракоро-нарного, введения) отражают сложности фармакологической коррекции нарушений гемостаза. Поэтому в условиях стрессорного воздействия целесообразен иной подход - воздействие на факторы, предшествующие каскадоподобной активации гемостаза, то есть на процессы перекисИого окисления липидов и активацию нейтрофильных гранулоцитов. Тем самым антиоксиданты, сохраняя активность антитромбина Ш и, по-видимому, предотвращая окислительную модификацию тромбопластина, оказывают антитромбогенный эффект и позволяют предотвратить само начало внутрисосудистой активации свертывания крови.

Неблагоприятным фактором в условиях длительного иммобилизационного стресса является нарушение различных видов обмена. Негативная динамика изменений липидного обмена характеризуется повышением общего холестерина сыворотки крови, триглицеридов сыворотки крови, холестерина липопротеинов очень низкой плотности, холестерина липопротеинов низкой плотности и общих липидов. Холестерин липопротеинов высокой плотности, напротив, достоверно снижается, что приводит к значительному росту индекса атерогенности.

Анализируя динамику метаболических сдвигов при длительном воздействии стрессорного фактора, можно выделить изменения, носящие адаптационный характер. К таковым относятся гипертриглицеридемия, диагностируемая на 7 сутки опыта, повышение общего холестерина, общих липидов. Динамика данных параметров отражает энергетическую перестройку метаболических процессов в связи с переключением субстратного энергообеспечения с углеводов на липиды при хроническом воздействии стрессирующего фактора (Смирнов К.В. с соавт., 1991). Однако, в условиях активации ПОЛ происходит окисление липопротеинов с образованием их проатерогенных форм (липопротеинов низкой плотности и липопротеинов очень низкой плотности), что создает условия для возникновения и прогрессирования атеросклероза (Лобова Т.М., 1984). В свою очередь, липопротеины низкой плотности усиливают адгезию моноцитов, стимулируют секрецию ингибитора-1 активатора плазминогена (Mussoni L. etal., 1991). Таким образом, компенсаторная реакция метаболического характера становится звеном патогенеза длительного иммобилизационного стресса.

ОХ Хс ИА тригя. ВЛП ЛПВП

ксимедон

ОХ Хс ИА тригл. ВЛП ЛПВП

мексидол

эмоксипин

** 00

оо 0000 ШКЩ оооо.......... о 0000 * о ° оооо 0000

ОХ Хс ЛПВП ИА тригл. ВЛП -И'НННШ— 1.1 1 11 ы — ОХ Хс ИА тригл. ВЛП ЛПВП

димефосфон цитохром С

оо о о *»** **** **** щ

ОХ Хс ИА тригл. ВЛП ЛПВП

ОХ Хс ИА тригл. ВЛП ЛПВП

вамин

реланиум000 **

ОХ Хс ИА тригл. ВЛП ЛПВП

ОХ Хс ИА. тригл. ШШ ЛПВП

комплексное лечение ****

**** о

**** **** **

0000 -^0000

X

ОХ Хс ИА тригл. ВЛП ЛПВП

Рис.2.Изменение липидного спектра сыворотки крови лри 30 суточной иммобилизации (в % к исходному уровню)

Одним из метаболических маркеров стрессорной реакции является и повышение глюкозы крови на фоне иммобилизации.

В генезс гипергликемии играют роль ряд факторов, различных в исследуемые этапы эксперимента. Так, на ранних сроках имеют значение нейрогор-мональные сдвиги (реакция симпато-адреналовой системы), на более поздних -глюконеогенез. Если на первом этапе - до нескольких суток - гипергликемиче-ская реакция имеет компенсаторный характер, то на более поздних сроках она связана со снижением чувствительности углеводного обмена и гормональному контролю и со снижением способности тканей усваивать глюкозу крови и торможением ее распада в гликолизе, что создает предпосылки для дефицита энергообеспечения (Рыльников Ю.Л., 1984).

При длительном ограничении подвижности выявляются нарушения белкового обмена: наблюдается снижение синтеза белка во всех тканях, усиление катаболических процессов, распад высокоорганизованных белковых структур, ферментов (Тявокин В.В., 1975; Смирнов К.В., 1990).

Нарушение белкового и электролитного баланса выступает как фактор нового витка спирали патогенеза (СгаПо1отпа J. сг а1., 1991).

В условиях длительной иммобилизации нами было выявлено снижение общего белка сыворотки крови. Изменения в протеинограмме характеризуются нарастанием гипоальбуминемии и увеличением О-г, (Зр и у-глобулинов.

Проведение фармакологической коррекции во всех сериях оказало позитивное влияние на динамику метаболических показателей и позволило добиться достоверного снижения индекса атерогенности. Максимальное снижение этого показателя было отмечено в серии с проведением комплексной фармакологической коррекции. На другие показатели липидного обмена влияние испытуемых препаратов оказалось различным.

Наиболее низкие цифры (З-липопротеинов (ЛПНП) к 30 суткам иммобилизации выявлены в сериях с использованием эмоксипина, цитохрома С, вами-на и при комплексной коррекции, а общего холестерина - в сериях с комплексной коррекцией, с цитохромом С и реланиумом. Уровень общего холестерина не отличался от контрольных цифр на фоне применения димефосфона, однако, рост этого показателя по сравнению с исходным уровнем был преимущественно связан с увеличением фракции холестерина ЛПВП, что отразилось на отсутствии роста индекса атерогенности. Особенностью серий с ксимедоном, ва-мином и мексидолом также явился высокий уровень холестерина ЛПВП.

При 30 суточной иммобилизации кроликов на фоне введения реланиума отмечался самый высокий рост липопротеинов низкой плотности (В-ЛП).

При использовании в качестве фармакокорригирующего препарат^ цитохрома С на фоне позитивной динамики общего холестерина, индекса атерогенности, настораживали крайне низкие цифры холестерина липопротеинов высо-

кой плотности (8,7% от исходного уровня) при длительном ограничении подвижности.

Особенностью воздействия вамина оказался высокий уровень триглице-ридов и общих липидов, что, однако, в комплексе с достоверно более низкими, чем в контроле цифрами общего холестерина, индекса атерогенности и липо-протеинов низкой плотности, достоверным превышением контрольного уровня по содержанию холестерина липопротеинов высокой плотности, общего белка и альбуминов, ростом содержания общего белка, может быть расценено, как компенсаторная реакция, направленная на обеспечение в условиях длительного стресса достаточного энергетического резерва.

Влияние мексидола на динамику метаболических показателей при длительной иммобилизации может быть отчасти связано и с влиянием препарата на процессы энергообмена, как сукцинат-содержащего производного 3-оксипиридина (Серпов Л.Н., Смирнов Л.Д., 19%). Но, учитывая низкий уровень триглицеридов, отсутствие роста глюкозы и падения альбуминов в сериях с мексидолом и эмоксипином, а также данные о повышении под действием мексидола, сродства тканей к инсулину, о повышении экономичности использования кислорода тканями под влиянием этих препаратов (Сернов Л.Н. с со-авт., 1995; Смирнов Л.Д. с соавт., 1996), можно предположить их преимущественное нормализующее влияние на углеводный компонент энергозависимых процессов при длительном стрессе. На это указывает и отсутствие роста ферментов анаэробного цикла в сыворотке крови. Показатели белкового обмена, в том числе белковых фракций, не отличались от исходных при проведении комплексной коррекции.

В отличие от контроля, во всех опытных сериях отсутствовало достоверное изменение содержание К и № в плазме.

Таким образом, применение антиоксидантов и вамина в значительной степени предотвращает нарушение обменных процессов при длительном им-мобилизационном стрессе. Проведение комплексной коррекции с учетом этап-ности включения патогенетических звеньев'длительного стресса позволяет получить наиболее выраженный антиатерогенный эффект.

Длительное ограничение подвижности является наглядной эксперимен-татьной моделью, позволяющей изучить течение адаптационного процесса к физическим нагрузкам в условиях глубоких деструктивных полиорганных изменений организма и выявить наиболее эффективные средства фармакологической коррекции.

Задачей фармакологической коррекции адаптационных процессов в этих условиях является предотвращение перехода приспособительно-компенсаторных реакций в повреждающие и снижение цены адаптации. Проведенные исследования показывают, что одним из перспективных способов реализации

этой задачи является использование антиоксидантов.

При выполнении работы были изучены три аспекта фармакологической коррекции: 1) обеспечение возможности срочной адаптации к физической нагрузке путем предотвращения или ограничения негативных сдвигов гомеостаза и, следовательно, сохранение целостности клеточно-тканевых структур, в том числе и миокарда; 2) возможность протективного влияния на организм, подвергшийся воздействию длительной иммобилизации при однократном введении препарата перед физической нагрузкой; 3) формирование механизмов долговременной адаптации к физическим нагрузкам после длительного ограничения подвижности.

Практическое осуществление первой и третьей задач было обусловлено протективным действием антиоксидантов на обменные процессы, перекисное окисление липидов, гемостаз, биоэлектрическую активность миокарда на фоне длительного иммобилизационного стресса. То есть, к моменту выполнения физической нагрузки организм, находившийся под воздействием фармакокорри-Гирующих препаратов, имел заведомо меньшую степень повреждения тканевых структур, что свидетельствовало о формировании феномена адаптационной стабилизации структур и, следовательно, обеспечивало лучшую возможность к осуществлению дальнейших адаптационных процессов. Кроме того, в реализации третьей задачи, т.е. долговременной адаптации к физической нагрузке играло роль не только исходное (то есть на момент окончания иммобилизации) состояние структур, но и то, через какие механизмы воздействия фармакологического препарата этот эффект достигался.

Ситуация, когда адаптация организма к определенному фактору снижает его резистентность к повреждающему действию других факторов среды (Меерсон Ф.З., 1993), была смоделирована в нашем эксперименте. Эффективность изучаемых препаратов в этом случае зависела и от их способности уменьшать негативный перекрестный эффект адаптации. То есть в условиях смены стрессорного воздействия при адаптации к физической нагрузке после длительной иммобилизации эффективными должны были оказаться препараты,' влияющие на наиболее общие механизмы адаптации.

Решение второго вопроса - о возможности протективного влияния при однократном введении перед бегом - зависело от наличия или отсутствия у ис- ■ пытуемого препарата противоишемического и антигипоксического действия.

Наибольшую эффективность в обеспечении процессов срочной адаптации к физической нагрузке показали мексидол, эмоксипин и ксимедон. Применение этих препаратов при 30 суточной иммобилизации обеспечило всем подопытным животным возможность выполнения предложенной физической нагрузки в виде бега в третбане в течение 1 мин (отсутствовала "О" степень адаптации). Кроме того, при этом не возникло необратимых повреждений мио-

карда, а у части животных отмечались только преходящие ишемические явления. Применение цитохрома С и реланиума на фоне иммобилизации не оказало протекторного влияния при последующей физической нагрузке.

Однако, введение цитохрома С перед физической нагрузкой оказало про-тективное действие на состояние биоэлектрической активности миокарда, предотвратило возникновение необратимых повреждений. Это связано, по-видимому, с прямым антигипоксическим действием препарата и согласуется с данными других авторов об эффективности цитохрома С при гипоксии миокарда любого генеза (Криворучко Б.И. с соавт., 1994).

Наиболее выраженный эффект при срочной адаптации к физической нагрузке после длительной иммобилизации получен также при введении перед физической нагрузкой мексидола и димефосфона. Эффективность мексидола связана, по-видимому, с его способностью повышать устойчивость организма к острым кислородозависимым патологическим состояниям (Лукьянова Л.Д. с соавт., 1993) и кардиопротектороным действием (Сернов Л.Н. с соавт., 1995). Положительное влияние димефосфона возможно объяснимо в этих условиях, интенсификацией внутриорганного кровотока (Студенцова И.А., 1990).

Процесс долговременной адаптации к физической нагрузке после длительного иммобилизационного стресса протекает в условиях сохраняющегося, высокого уровня малонового диальдегида. Из ферментов антиоксидантной защиты отмечается достоверная активация только глутатионпероксидазы эритроцитов. На прежнем низком уровне остаются каталаза плазмы и эритроцитов, отсутствует достоверный рост активности глутатионпероксидазы плазмы и су-пероксиддисмутазы эритроцитов.

Применение корригирующих средств на фоне длительного ограничения подвижности ограничивает негативные метаболические сдвиги и повреждение тканей, тем самым обеспечивая более оптимальные возможности для последующего расширения двигательного режима.

Во всех опытных сериях процентное отношение уровня МДА эритроцитов к исходному было достоверно ниже, чем в контроле. Наиболее выраженным было влияние на динамику этого показателя на фоне применения мексидола и комплексной коррекции. Уровень же МДА плазмы после завершения тренировок был достоверно ниже соответствующих данных контроля только в сериях с применением мексидола, эмоксипина и димефосфона, где показатели существенно между собой не отличались.

Обращает на себя внимание, что в сериях с коррекцией при тренировках по сравнению с 30 сутками иммобилизации везде отмечается в той или иной степени рост МДА. В контрольной серии тенденция обратная. Это объясняется летальностью 25% животных контрольной серии (3 из 12 кроликов) на ранних сроках проведения тренировок. И, следовательно, достаточно высоким отсевом

32%

24%

контроль

50%

17%

реланиум

30%

33%

20%

50%

ксимедон

30%

10%

эмоксипин

60%

50%

25% цитохром С

33%

50%

вамин

17%

17%

66%

димефосфон 34%

мексидол

75%

25%

комплексная коррекция

Рис. 3. Срочная адаптация к физической нагрузке после 30 суточного ограничения подвижности в контроле и при фармакокоррек-ции. Степень адаптации: и - 1а, Й -16, = - Па, В -116, В - 0.

наиболее чувствительных животных. В сериях с коррекцией летальность при адаптации к физическим нагрузкам отсутствовала.

Особенностью реакции антиоксидантной системы на расширение двигательного режима в контроле, а также сериях с цитохромом, вамином, диме-фосфоном и ксимедоном является уменьшение активности каталазы эритроцитов, особенно резкое на фоне цитохрома и вамина. Правда, при этом наблюдается рост ГП эритроцитов.

Эти -два фермента, инактивируя перекись водорода, являются как бы взаимозаменяемыми в этом плане. Однако мы посчитали наиболее оптимальной реакцией преимущественную активацию каталазы в эритроцитах, а ГП в плазме, так как, в отличие от каталазы ГП, способна ииактивировать и продукты окислительной модификации липопротеинов (Биленко М.В., 1989). Что очень важно в плане антиатерогенного влияния на эндотелий сосудов. Повышение же активности каталазы эритроцитов в условиях наличия реактивных кислородных радикалов оказывает стимулирующее воздействие на присоединение молекул кислорода к гему эритроцитов (Сторожук А.П. с соавт., 1996) и, следовательно, способствует усилению антигипоксического эффекта.

Такая сочетанная динамика активации каталазы эритроцитов и глутати-онпероксидазы плазмы при адаптации к физической нагрузке после иммобилизации имеет место только в сериях с эмоксипином и мексидолом.

На фоне применения ксимедона активность вышеназванных ферментов хотя и имеет некоторую отрицательную динамику, но все же остается, как и при введении препарата, на достаточно высоком уровне.

Таким образом, на основании полученных данных, можно сделать вывод, что наиболее оптимальное влияние на динамику активности ферментов антиоксидантной защиты и уровень МДА при последующих за иммобилизацией тренировках оказывает применение на фоне ограничения подвижности мекси-дола, эмоксипина и ксимедона.

Во всех сериях с коррекцией удалось добиться значительного позитивного влияния на такие показатели, как общий холестерин, Хс ЛПНП, Хс ЛПОНП, индекс атерогенности.

При отсутствии падения содержания альбуминов в'сыворотке крови и низком уровне индекса атерогенности, рост триглицеридов по сравнению с окончанием иммобилизации и сохранение высокого содержания общих липидов в сериях с применением мексидола и комплексной коррекции свидетельствует о хороших энергетических резервах и может рассматриваться как позитивная компенсаторная реакция, обеспечивающая энергетические запросы организма.

Сходное состояние мы наблюдали при использовании с целью коррекции вамина: не снижались по сравнению с исходным уровнем общие липиды, триг-лицериды, Хс ЛПВП.

Индекс атерогенности

контроль мексидол вамин эмоксипин цитохром ксимедон димефосфон

1 - исходные данные

комплекс. » ,

2 - иммобилизация 30 суток

3 - физические нагрузки

Рис.4. Уровень индекса атерогенности при воздействии физических нагрузок после 30 суточной иммобилизации.

ХсЛПНП

800

лсход. данные

контроль мексидол вамин димефосфон

ксимедон

физич. нагрузки

Рис.5. Уровень холестерина липопротеинов низкой плотности при воздействии физических нагрузок после 30 суточной иммобилизации

Использование на фоне ограничения подвижности ксимедона обеспечило в последствии стабильное постепенное снижение общего холестерина, Хс ЛПНП, Хс ЛПОНП, В-липопротеинов, индекса атерогенности, предотвратило падение уровня Хс ЛПВП.

Цитохром, после применения его в качестве корригирующего средства при 30 суточной иммобилизации, не обеспечивал восстановления уровня Хс ЛПВП, не предотвращал тенденции роста ЛПНП и общего холестерина при дальнейшем расширении двигательного режима. Хотя положительным явилось отсутствие роста индекса атерогенности по сравнению с 30 сутками иммобилизации.

Протекторное действие на динамику метаболических процессов при адаптации к физической нагрузке после иммобилизации оказали в той или иной степени все изученные препараты, однако, наиболее оптимальным следует признать влияние мексидола, ксимедона, комплексной коррекции, вамина. .

Комплексная поэтапная фармакологическая коррекция позволяет предотвратить не только чрезмерную активацию ПОЛ, но и предупредить проатеро-генные сдвиги липидного спектра и (основываясь на других фрагментах работы) нарушение белкового обмена.

Подтверждением положительного влияния антиоксидантов и вамина является и их следовое кардиопротекторное действие. То есть, применение этих фармакопротекторов на фоне иммобилизации предотвращало в значительной степени необратимую отрицательную динамику биоэлектрической активности миокарда даже после их отмены, что указывает на формирование достаточных структурно-метаболических резервов организма подопытных животных и, следовательно, на наличие перекрестного адаптационно-протекторного действия при смене стрессовых воздействий. Что является обоснованием целесообразности дальнейшего изучения в этом на правлении монотерапии и комбинации антиоксидантов с различными механизмами действия.

Антиоксиданты, предупреждая повреждение мембран на фоне чрезмерной активации ПОЛ, обеспечивают адаптационную стабилизацию структур и возможность последующей адаптации к другому виду стрессового воздействия- периодическим физическим нагрузкам.

Незавершенность восстановительных процессов структурно-функциональных параметров при длительном стрессе является причиной прогрессиро-вания патологического процесса с вовлечением новых звеньев.

Сохранность. структурно-функциональных взаимоотношений на фоне длительно действующего стрессорного фактора может быть обеспечено ранним применением фармакокорригирующих препаратов, которые остановят прогрессирование патологического процесса на начальном этапе и тем самым предотвратят включение неуправляемой каскадоподобной активации патологических звеньев.

Так как гуморально-метаболические нарушения развиваются практически параллельно, целесообразно воздействовать на звено, являющееся точкой разветвления патологических процессов, т.е. инициирующее наибольшее количество других звеньев. Такой точкой приложения может явиться воздействие на активацию стресс-реализующих систем или перекисное окисление липидов. Наиболее эффективным для коррекции повреждений при длительном стрессе возможно будет препарат, обладающий наиболее широким спектром воздействия, например, сочетающий антиоксидантное, мембраностабилизирующее, антигипоксическое, ноотропное и энергизирующее действие.

При выборе препарата для коррекции и профилактики повреждений при длительном стрессе необходимо учитывать не только механизм его действия, но и механизм развития стресса в конкретной ситуации.

Еще в 1968 г. Mason J.W. писал о разнообразии стресс-реакций. Он связывал их наличие с реализацией через различные "начальные" звенья нервной системы и дальнейшими путями распространения стимулов.

Так, действие стресс-факторов химического или физического порядка, вызывающее "соматический стресс", осуществляется через переднюю тубе-ральную область, откуда освобождающийся кортикотропин-рилизинг-фактор через капиллярное сплетение в срединном возвышении гипоталамуса поступает в переднюю долю гипофиза. В то же время, стресс-реакция на "психический стресс" (например, на боль) осуществляется по следующему пути: кора мозга -лимбическая система - каузальный отдел подбугорной области - спинной мозг -брюшные нервы - мозговое вещество надпочечников - адреналин - нейрогипо-флз - АКТГ - кора надпочечников (Smelik P.C., 1960). То есть, четко выделены пути различного гормонального каскада при стрессе. Различные пути реализации стресс-реакции отмечены и другими авторами (Ляшко В.Н. с соавт., 1989; Судаков К.В., 1996). Мы считаем, что в целях наиболее эффективной профилактики повреждений и облегчения выбора препарата, можно в качестве упрощенной модели развития стресс-реакции выделить нисходящий путь (от ЦНС через активацию стресс-реализующих систем - до повреждения органов и тканей), примером которого может служить эмоциональный стресс (в том числе, социальный) и восходящий. Такое развитие процесса включается как' следствие первичного повреждения мембранно-тканевых структур, изменения гемостаза, к которым впоследствии присоединяется реакция вышестоящих стресс-реализующих звеньев. Примером может служить ' повреждение организма вследствие радиоактивного облучения, инфекционных заболеваний. Большинство же стрессорных реакций идет по смешанному пути развития. В качестве примеров можно-привести ожог, травму, гипоксическое воздействие, холодо-вое воздействие, иммобилизацию, невесомость и т.д. Здесь спираль стрессорных изменений начинает раскручиваться с почти одновременным повреждени-

ем тканевых структур и с реакцией гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой системы.

Для эффективной своевременной тактики необходимо учитывать эти особенности. Если патологическую цепочку вследствие эмоционального стресса на первых ступенях можно прервать применением психотропных препаратов, то на более поздних этапах выраженного превентивного эффекта они, возможно, уже не окажут даже при нисходящем пути развития стрессорной реакции.

При восходящем механизме развития психотропные препараты, по-видимому, имеет смысл рассматривать как дополнительную симптоматическую терапию. А наиболее целесообразным в этом случае, возможно, будет применение препаратов, способных прервать каскад дестабилизирующих го-меостаз реакций, одним из которых являются антиоксиданты. Смешанный механизм развития стресс-реакций предполагает применение обоих методов фармакологической коррекции. Однако, предпочтение может быть отдано препаратам, оказывающим протекторный эффект на метаболически-тканевом уровне, не снижающим координирующую роль центральных механизмов регуляции и, следовательно, обеспечивающим процесс активации собственных стресс-реализующих систем.

При выборе препарата для профилактики или коррекции повреждений при длительном стрессе необходимо руководствоваться оценкой однотипности последующего стрессорного воздействия или его смены на другое. В последнем случае более целесообразным может явиться использование препаратов, обеспечивающих перекрестную адаптацию или уменьшающих явления негативных перекрестно-адаптационных процессов. В данном случае при смене длительной иммобилизации на воздействие физической нагрузки наибольшую пластичность адаптационно-метаболических процессов обеспечило применение мексидола.

В выборе препарата необходим дифференцированный подход в зависимости от исходного состояния перекисного окисления липидов, активности нейтрофильных гранулоцитов, гемостаза, липидного спектра, показателей белкового и углеводного обмена.

Проводить фармакологическую коррекцию длительного стресса необходимо с учетом этапов развития патологического процесса во времени. Если упущена возможность прерывания патологической цепочки на ранних этапах, необходимо проведение комплексной терапии с введением препаратов разного механизма действия для купирования уже развившихся вторичных сдвигов (например гиперкоагуляции, атерогенных изменений), так и для остановки продолжающейся активации инициирующих звеньев процесса. В этом случае, возможно, только комплексная терапия явится эффективным патогенетически

обоснованным вариантом фармакологической коррекции структурно-метаболических нарушений.

При длительном стрессе, когда реакция организма переходит в стадию истощения, даже физиологическое по силе воздействие может привести к усилению повреждений. Примером чего может служить ухудшение биоэлектрической активности миокарда при беге в течение 1 минуты, который не вызывает патологических изменений в организме интактных животных. И в этом случае важной задачей является прогнозирование такого возможного повреждающего эффекта и профилактическое назначение фармакокорригирующих препаратов антиоксидантного, мембранопротекторного, антигипоксического типа действия.

Таким образом, обобщая данные обзора литературы и результаты собственных исследований, можно сформулировать принципы рациональной патогенетической фармакотерапии длительного стресса: 1) профилактическое применение корригирующих препаратов; 2) воздействие на наиболее общее звено патологического процесса или выбор препарата, обладающего наиболее широким спектром действия, включающего метаболически-тканевой уровень; 3) учет, при выборе препаратов необходимости обеспечения перекрестной адаптации к возможной смене стрессорного воздействия; 4) применение дифференцированного подхода с учетом исходного состояния параметров гомео-стаза.

ВЫВОДЫ

1. Пролонгированный иммобилизационный стресс сопровождается активацией перекисного окисления липидов, снижением активности каталазы плазмы и эритроцитов, изменением цитохимической активности нейтрофиль-ных гранулоцитов, гиперкоагуляцией, нарушением липидного, белкового и углеводного обмена. Патогенетически обоснованное применение фармакологических препаратов позволяет осуществить коррекцию изменений, развивающихся при длительном ограничении подвижности.

. 2. Изученные препараты (мексидол, эмоксипин, димефосфон, ксимедон, вамин, цигохром С) устраняют депрессию антиоксидантных ферментов при длительном иммобилизационном стрессе, оптимизируя соотношение проокси-. дантных - антиоксидантных механизмов. Наиболее активная реакция ферментов антиоксидантной системы отмечается на фоне введения мексидола, ксиме-дона, димефосфона.

3. Использованные лекарственные средства позволяют модифицировать цитохимическую активность нейтрофильных гранулоцитов при длительном иммобилизационном стрессе: ограничивают рост генерации активных форм

кислорода (эмоксипин, ксимедон, реланиум), повышают фагоцитарные свойства нейтрофильных гранулоцитов (эмоксипин, ксимедон).

4. Ограничивая активацию перекисного окисления липидов производные 3-оксипиридина (эмоксипин, мексидол), димефосфон и ксимедон оказывают антитромбогенный эффект при длительном иммобилизационном стрессе, ин-гибируя фазу контактной активации гемостаза, сохраняя высокий уровень антитромбина III, предотвращая рост продуктов паракоагуляции.

Применение вамина повышает фибринолитическую активность крови и препятствует снижению антитромбина III.

5. Производные 3-оксипиридина, димефосфон, ксимедон, цитохром С коррегируют метаболические нарушения, развивающиеся при длительной иммобилизации, снижают уровень общего холестерина и липопротеинов низкой плотности (эмоксипин, мексидол, ксимедон, цитохром С), увеличивают содержание холестерина липопротеинов высокой плотности (димефосфон, ксимедон, вамин), альбумина сыворотки крови (ксимедон), проявляя тем самым ан-тиатерогенное действие.

6. Производные 3-оксипиридина и ксимедон, устраняя основные патогенетические звенья иммобилизационного стресса, проявляют протекторный эффект при срочной адаптации к физической нагрузке после длительного ограни-, чения подвижности.

7. Фармакологическая коррекция длительного иммобилизационного стресс-синдрома (мексидол, эмоксипин, ксимедон, димефосфон, вамин, цитохром С) повышает адаптационные возможности организма при последующем расширении двигательного режима. Применение при длительном иммобилизационном стрессе мексидола и ксимедона обеспечивает перекрестную адаптацию к последующей смене стрессорного фактора и тренирующий эффект физических нагрузок.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Тявокин В.В., Инчина В.И., Мосина Л.М., Зорькина A.B. Применение АУФОК и инфузионнойтерапии в условиях гиподинамии. Применение ультрафиолетового облучения крови в медицине: Межвуз. сб. науч.тр. Саранск.: Изд-во Мордов. ун-та. 199i. - С.38-44.

2. Зорькина A.B. Изменение сосудов малого круга кровообращения в условиях гиподинамии. XXI Огарев, чтения: Тез. докл. науч. конф. Саранск Изд-во Мордов. ун-та. 1993.-С.63.

3. Скипетров В.П., Инчина В.И., Зорькина A.B., Мартынова В.В. Влияние люстры Чижевского на систему гемостаза при гиподинамии. МГУ. Деп. ВНИ-ИМИ № Д-23140 от 22.02.93.

-404. Инчнна В.И., Зорькина Л.В. Немедикаментозные методы профилактики и коррекции нарушений гемостаза в условиях гиподинамии. //Кардиология. 1993. № 10.-С.79-80.

5. Зорькина A.B. Свертывание крови и функциональная активность лейкоцитов гиподинамии. XXII Огарев, чтения: Тез. докл. науч. конф. Саранск 1993.-С.54.

6. Инчина В.И., Зорькина A.B. Патогенез полиорганной патологии при воздействии гиподинамии. Фундамент, основы жизн-ти организм, в норме и патологии. Материалы 2-й Всеросийск. конф. по программе "Университеты России". Нальчик, 1994., - С.70-74.

7. Инчина В.И., Зорькина A.B., Скипетров В.П. Аэроионотерапия эндо-токсикоза при пролонгированном иммобилизационном стрессе. Эфферентная терапия. Том 1. 1994. №4. Санкт-Петербург. - С.48-54.

8. Скипетров В.П., Еникеев O.A., Зорькина A.B., Инчина В.И., Мартынова В.В. Аэроионы и жизнь (монография). Саранск: Изд. МГУ, 1995. - С.96.

9. Зорькина A.B., Инчина В.И., Кудашкин С.С. Фармакологическая коррекция атерогенных изменений, развивающихся при пролонгированном иммобилизационном стрессе. II Российск. нац. конгресс "Человек и лекарство", Тез. докл.: Москва. - 1995. - С.40.

10. Зорькина A.B., Инчина В.И. Кудашкин С.С. Профилактика полиорганной патологии при пролонгированном иммобилизационном стрессе. Все-росс. симп. и рабочее совещан. "Соврем, состоян. и перспект. реабил. больных с сердечно-сосуд. заболев, в России". Тез. докл.: М. - 1995. - С.64.

11. Зорькина A.B., Инчина В.И., Кудашкин С.С. Фармакологическая коррекция метаболических нарушений при пролонгированном иммобилизационном стрессе. Фундамент, иссл. как основа создан, лекарств, ср. Сб. тез. 1-го съезда Росс, научн. общ-ва фармакологов Волгоград, 9-13 окт. 1995. - С. 178.

12. Барнашова Г.С., Гераськина М.А., Зорькина A.B., Влияние эмокси-пина на перекисное окисление липидов при пролонгированном иммобилизационном стрессе. XXIV Огарев, чтения: Тез. докл. научн. конф.: Саранск, Изд-во МГУ, 1995.-С.9.

13. Зорькина A.B., Гераськина М.А., Горшкова Е.В. Профилактика пост-стрессорных повреждений при пролонгированном иммобилизационном стрес-: се. XXIV Огарев, чтения: Тез. докл. научн. конф.: Саранск, Изд-во МГУ, 1995.-С.81-82.

14. Кудашкин С.С., Зорькина A.B., Гераськина М.А. Влияние димефос-фона на активность процессов перекисного окисления липидов и динамику атерогенных сдвигов при длительной гиподинамии. XXIV Огарев, чтения: Тез. докл. научн. конф.: Саранск, Изд-во МГУ, 1995. - С.94.

15. Инчина В.И., Зорькина A.B., Костин Я.В. Адаптация к физическим

нагрузкам после воздействия иммобилизационного стресса. Вестник Росссийск. академ. мед. наук. Москва. Медицина, 1996, №¡9. - С.18-20.

16. Зорькина А.В, Инчина В.И., Кудашкин С.С., Костин Я.В. Фармакологическая коррекция повреждений сердечно-сосудистой системы при пролонгированном иммобилизационном стрессе. V Всеросс. съезд Кардиол. Тез. докл. 1996. Челябинск, Россия. - С.71.

17. Зорькина A.B., Кудашкин С.С., Гераськина М.А., Дубовскяя Т.Н., Подсеваткин В.Г., Госткина И.П. Фармакологической действие димефосфона при пролонгированном иммобилизационном стрессе. III Российск. нац. конгресс "Человек и лекарство" Тез. докл. Москва, 1996. - С.265.

18. Зорькина A.B., Сернов J1.H., Горшкова Е.В., Винтин H.A., Соколова В.В., Родькина Ю.Г. Влияние эмоксипина на перекисное окисление липидов и артериальные сдвиги при пролонгированном иммобилизационном стрессе. III Российск. нац. конгресс "Человек и лекарство" Тез. докл. Москва, 1996. - С.265.

19. Инчина В.И., Зорькина A.B., Винтин Н.И., Горшкова Е.В., Подсеваткин В.Г. Защитный эффект мексидола при хроническом стрессе. 111 Российск. нац. конгресс "Человек и лекарство" Тез. докл. Москва, 1996. - С. 266.

20. Инчина В.И., Скипетров В.П., Зорькина A.B., Мартынова В.В. Влияние аэроинов кислорода на гемостаз и развитие артериосклероза при гиподи,-намии. Патологическая физиологическая и экспериментальная терапия; 1996 №2, М. "Медицина". - С.32-35.

21. Гераськина М.А., Зорькина A.B., Инчина В.И., Ламбина С.А. Фармакологическая коррекция эндотоксикоза при пролонгированном иммобилизационном стрессе. XXXI Научная конф. препод, и студ. МПТИ им. М.Е. Евсевьева. Материалы выступлений, ЧII, Саранск, 1996. - С.94-96.

22. Зорькина A.B., Родькина Ю.Г., Ширшикова О.В., Гераськина М.А., Инчина В.И. Механизмы защитного действия цитохрома С в условиях хронического стресса. Вестник Мордовского университета 1996, №2, Изд. Морд, ун-та. - С. 119.

23. Винтин H.A., Зорькина A.B. Влияние вамина на перекисное окисление липидов и гемостаз при длительной иммобилизации. Актуальные вопросы комбустиологии, реаниматологии и экстремальной медицины. Тезисы докладов республиканской научно практической конференции, Саранск, Изд-во Морд, ун-та, 1996. - С.252.

24. Зорькина A.B. Комплексная профилактика и терапия полиорганной патологии при пролонгированном иммобилизационном стрессе. Актуальные вопросы комбустиологии, реаниматологии и экстремальной медицины. Тезисы докладов республиканской научно практической конференции, Саранск, Изд-во Морд, ун-та, 1996. - С.258-259.

25. Зорькина A.B., Инчина В.И., Гераськина М.А., Кудашкин С.С., Ду-бовская Т.Н., Костин Я.В., Подсеваткин В.Г. Стресс-протекторное действие

эмоксипина и мексидола при пролонгированном иммобилизационном стрессе. Патофизиология органов и систем. I Росс, конгр. по патофизиологии с международ участием. Тез. докл., M., 1996. - С.210.

26. Инчина В.И., Зорькина A.B., Кудашкин С.С., Гераськина М.А., Мин-нёбаев М.М., Подсеваткин В.Г. Оптимизация адаптационных процессов при пролонгированном иммобилизационном стрессе. Патофизиология органов и систем. I Росс, конгр. по патофизиологии с международ участием. Тез. докл., M., 1996.-С.328.

27. Инчина В.И., Винтин H.A., Зорькина A.B., Сернов Л.Н., Костин Я.В. Фармакологическая реабилитация в условиях пролонгированного иммобилиза-ционного стресса. Internetional journal on immunorehabilitation, May 1996 №2, M. - P.90.

28. Тявокин B.B., Инчина В.И., Зорькина A.B. Заявка №93046010/14 на выдачу патента на изобретение "Способ моделирования гипертонии в легочной артерии". Положительное решение от 20.11.95 г.

29. Зорькина A.B., Инчина В.И., Кудашкин С.С., Гараев P.C. Влияние ди-мефосфона на метаболические процессы при длительной гиподинамии. Фарма-

' кол. и токсик. фосфорорган. и др. биол. акт. веществ. Вып. 3. Тез. докл. Росс, конф. Казань. - 1996. - С.71.

30. Зорькина A.B. Влияние некоторых производных 3-оксипиридина на гемостаз при длительной гиподинамии /III Всерос. конференция "Тромбозы и геморрагии, ДВС-синдром. Проблемы лечения''. Сборн.тез.- Москва. 1997. - С.57.

31. Инчина В.И., Зорькина A.B. Влияние димефосфона на гемостаз при гиподинамии /III Всерос. конференция "Тромбозы и геморрагии, ДВС-синдром. Проблемы лечения". Сборн.тез,- Москва. 1997. - С.65-66.

32. Зорькина A.B. Патофизиологические принципы фармакотерапии длительного стресса. IV Российский нац. конгресс "Человек и лекарство". Тез. докл.: Москва, 1997. - С.162.

33. Зорькина A.B., Сернов JI.H., Гараев P.C., Родькина Ю.Г., Ширшикова О.В., Ведяшкина И.А., Скоробогатова Л.Н., Госткина И.П. Профилактика нарушений липидного обмена при длительном иммобилизационном стрессе. IV Российский нац. конгресс "Человек и лекарство". Тез. докл.: Москва, 1997. - С.50.