Автореферат и диссертация по медицине (14.00.15) на тему:Патоморфологическая оценка стрессорных и алкогольиндуцированных повреждений семенников и щитовидной железы и влияния на них милдроната (экспериментальное исследование)

На правах рукоинси

епхиев александр алибекович

патоморфологическая оценка стрессорных и

алкогольиндуцированных повреждений :еменников и щитовидной железы и влияния на них милдроната ( экспериментальное исследование)

14.00.15 - патологическая анатомия

Автореферат диссертации на соискание учёной степени кандидата медицинских наук

Москва 2002 г.

Работа выполнена в Северо-Осетинской государственной медицинской академии. Научные руководители: доктор медицинских наук, профессор

Ю.Л. Сутулов

кандидат медицинских наук, старший научный сотрудник Л.В. Логунова

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор, Заслуженный деятель науки РСФСР Г.Г. Автандилов

академик РАЕН, доктор медицинских наук, профессор А.П. Милованов

Ведущее учреждение

Российский государственный медицинский университет

Защита состоится 27 июня 2002 года в 1400 на заседании Диссертационного совета Д. 001.004.01 при Научно-исследовательском институте морфологии человека Российской академии медицинских наук (117418, Москва, ул. Цюрупы 3).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института.

Автореферат разослан «_» мая 2002 года

Р 9Я / Ждгч^

Ученый секретарь Диссертационного ' '

совета кандидат медицинских наук Л.П. Михайлова

Актуальность проблемы.

Социально - экономические реформы последних лет имеют выраженный «побочный эффект» так как оказывают пролонгированное стрессорное воздействие на организм человека. В связи с этим стресс из необходимого звена адаптации превращается в фактор, приводящий к прямому и опосредованному повреждению органов [Меерсон Ф.З., 1983 ,1984; Меерсон Ф.З., Пшенникова М.Г.,1988]. Одновременно вследствие ухудшения социально-экономического положения возрастает потребление населением этанола [Кошкина Е.А.,2001], который, как известно, отягощает течение всех без исключения заболеваний и обуславливает развитие характерных для хронического алкоголизма висцеропатий [Серов В.В., Лебедев С.П., 1985; Лисицын Ю.П., Копыт Н.Я., 1983;]. Таким образом резко возрастает число потерь в связи с алкогольной смертностью [Немцов А.В., Школьников В.М„ 2001]. Между этими явлениями существует патогенетическая связь, подтвержденная социологически [Leon et al., 1997, Shkolnikov V.M. et al. 1998] и экспериментально [MezeyE etal. 1980].

В связи с этим изучение механизмов патогенеза стрессорных и алко-гольиндуцированных структурных изменений и поиск лекарственных препаратов для их профилактики и коррекции является одной из актуальных проблем современной медицины.

Так, при изучении алкогольных висцеропатий морфологами преимущественное внимание уделяется таким жизненно важным органам как сердце, печень, почки, поджелудочная железа [Серов В.В., Лебедев С П., 1985; Лисицын Ю.П., Копыт Н.Я., 1983;] . Те же органы, включая надпочечники, детально изучаются при экспериментальных стрессорных воздействиях [Меерсон Ф.З., 1983 ,1984; Меерсон Ф.З.,Пшенникова М.Г.,1988].

Щитовидная железа и семенники, как органы эндокринной системы совместно с нервной и иммунной принимают участие в координации и регу-

ляции деятельности организма, что позволяет ему адекватно реагировать постоянно изменяющиеся условия окружающей среды [Балаболкин М. 1 1997]. По данным литературы [Меерсон Ф.З., 1983 ,1984; Буров Ю.В., Е дерникова H.H., 1985] в условиях стрессорного воздействия и алкогольн интоксикации щитовидная железа и семенники в зависимости от фаз адг тации находятся в функционально различных состояниях. Однако, сраш тельного морфологического изучения данных органов в эксперименте п алкогольной интоксикации и стрессорных воздействиях не проводилось.

Среди фармакологических средств, которые могут быть использо! ны для коррекции повреждений, вызванных стрессорным воздействием алкоголем, особое внимание привлекает лекарственный препарат «Милдр нат» - триметилгидразиний пронионат (ТГП), в отношении которого до! зано корригирующее действие на гормональный фон при стрессе и ал! гольиндуцированные повреждения миокарда [Сутулов Ю.Л. с соавт. 199 Для обоснования применения милдроната при стрессорных и ал ко годьин; цированных повреждений щитовидной железы и семенников необходи изучение влияния ТГП на их развитие, выраженность и восстановление.

Цель и задачи исследования.

Целью настоящей работы явилось патоморфологическое изучен особенностей структурных повреждений семенников и щитовидной желе при экспериментальном эмоционально-болевом стрессе и алкогольной i токсикации, а так же влияния на них милдроната.

Исходя из поставленной цели исследования, решали следующие :

дачи:

- изучение особенностей структурных повреждений семенников щитовидной железы при экспериментальном эмоционально-болев стрессе и острой алкогольной интоксикации с применением ингибитор

острой алкогольной интоксикации с применением ингибиторов алко-го л ь м ста б о л из и рую щи х ферментов;

проведение сравнительного анализа результатов морфологического исследования семенников и щитовидной железы;

изучение протекторного и корригирующего воздействия милдроната на развитие структурных повреждений семенников и щитовидной железы на указанных экспериментальных моделях.

Научная новизна результатов работы.

В проведенной работе впервые представлена сравнительная морфомет-ческая характеристика щитовидной железы и семенников крыс при экспе-ментальной алкоголизации с применением ингибитора алкогольметаболи-ругащих ферментов и эмоционально-болевом стрессе, а гак же влияния на гявленные изменения милдроната. Впервые благодаря морфометрическо-' анализу, получены новые количественные данные об изменении струк-рной организации щитовидной железы и семенников в период срочной аптации при стрессе, а так же при алкогольной интоксикации, и доказан ютекторный и коррегирующий эффект милдроната в отношении этих из-,'нений

Положения, выносимые на защиту.

При эмоционально-болевом стрессе и острой алкогольной интоксикации морфологические изменения, происходящие в семенниках и щитовидной железе, свидетельствуют об угнетении функциональной активности этих органов.

Милдронат оказывает выраженное протекторное и корригирующее влияние при эмоционально-болевом стрессе и алкогольной интоксикации.

Практическая значимость.

Проведённое исследование позволяет рекомендовать милдронат клинических испытаний как средства профилактики и коррекции стреа ных и алкогольиндуцированных повреждений семенников и щитовид железы.

Апробация работы.

Результаты исследования были доложены на заседании кафедры талогической анатомии с курсом судебно-медицинской экспертизы Севе Осетинской государственной медицинской академии (СОГМА) (Владш каз, ноябрь 2000 г.) и межлабораторной конференции НИИ морфологии ловека РАМН (Москва, октябрь 2001 г.).

Объём и структура работы.

Работа изложена на страницах машинописного текста и сост из введения, глав материалы и методы исследования, собственных иссле ваний (2 главы), заключения, выводов и списка литературы - 188 источ ков, (98 - отечественных и 90 - иностранных).

Диссертация иллюстрирована 15 таблицами и 47 рисунками.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 4 работы.

Благодарности. Автор выражает глубокую благодарность докт медицинских наук, профессору О.В. Макаровой и доктору медицинских ук, профессору K.M. Козыреву.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования

Объектом исследования служили щитовидная железа и семенш самцов белых крыс. Все эксперименты были выполнены на 180 белых к]

х в репродуктивном возрасте массой 180-250 г. Подопытные животные ходились в условиях стационарного вивария на пищевом рационе, вклю-ющем долю пшеницы, сыворотку, воду, граву (клевер), овощи (морковь, екла) с возможностью свободного доступа к пище и воде.

Всего было проведено пять серий экспериментов. Причем первые cení были посвящены изучению структурных изменений вышеуказанных ор-нов при эмоционально- болевом стрессе и влияния милдроната на их воз-(кновение, выраженность и восстановление.

Для выполнения этой задачи нами на животных 61.1л смоделирован юционалыю- болевой стресс (ЭБС) по методике O.Desiderato и соавт 974), при этом учитывались требования организации по защите животных меется разрешение учёного совета СОГМА на проведение болевого срес-). Крыс в течение суток не получавших пищи, помещали в специальную ¡ухуровневуго клетку, через пол одного из уровней которой пропускали ток шА. Животные могли избежать действия болевого раздражителя только /тем ухода на другой уровень. В результате у них быстро вырабатывался :ловный рефлекс, и животные находились постоянно на втором уровне по-i клетки. После этого через пол второго уровня клетки начинали наносить >роткие удары тока (6 тА) в течение 2 с. Это делалось через случайные юмежутки времени в течение 6 ч.

Выбор данной модели ЭБС обусловлен тем, что степень стресс- реак-m и возникающих повреждений, по данным литературы, существенно воз-1стает, если па основной элементарный конфликт наслаиваются дополни-:льные воздействия, усиливающие активизацию аппарата эмоций [Меерсон .3., Пшешшкова М.Г., 1986]. В данной модели ЭБС имеет место конфликт гжду выработанным условным рефлексом избегания тока путем ухода на эугой уровень клетки (в оригинале на платформу, расположенную в центре шеры) и безусловным болевым раздражением на этом уровне, что сопро-

вождается напряженным, связанным с чувством страха ожиданием болевс воздействия, обусловленного тем, что удары наносились через случайн промежутки времени.

Первая серия экспериментов проводилась для изучения влияния Э на структурно-функциональное состояние семенников и щитовидной же. зы в динамике. Для решения данной задачи животные выводились из эка римента сериями по 10 животных спустя 2 ч, 24 ч, 3, 5, 7 суток, путем де) питации под эфирным наркозом. Вторая и третья серия экспериментов щ водились для изучения протекторного и корригирующего влияния милд{ ната на развитие стрессорных повреждений тех же органов. Для этого, второй серии экспериментов за 15 минут до воздействия ЭБС был ввел препарат в дозе 50 мг/кг внутрибрюшинно, а в третьей серии та же доза п] парата была введена внутрибрюшинно спустя 3 часа после прекращен воздействия. Животные выводились из эксперимента по той же схеме, чтс интактные со сходными физиологическими показателями и животные, ко! рым вместо препарата внутрибрюшинно вводилась физраствор в том : объеме.

Четвертая и пятая серии экспериментов были проведены с использо] нием модели острой алкогольной интоксикации в условиях ингибирован ацетальдегиддегидрогеназы тетурамом [Попов В.В.,1990]. Животным в " чение 30 дней ежедневно внутрижелудочно через зонд вводился 48% р; твор этилового спирта в дозе 4,2 мг/кг и один раз в четыре дня суспензия 1 турама на 48% спирте в дозе 25 мг/кг.

Особенность данной модели, разработанной для воспроизведения эксперименте алкогольной кардиомиопатии в том, что в сравнительно к роткое время позволяет воспроизвести все характерные для АКМП стр) турные повреждения за счет поддержания в течение длительного време: высокой концентрации этанола и ацетальдегида. Структурные поврежден

сардиомиоиитов являются одним из типичных морфологических проявле-гай алкогольной болезни [Пауков B.C. и др. 1981, Мухин A.C. и др. 1981, Зеров В.В., Лебедев СЛ. 1985, Вихерг A.M., Цыпленкова В.Г. 1984], поэтому данная модель была выбрана нами для изучения структурных повре-кдений семенников и щитовидной железы при алкогольной интоксикации.

Для стандартизации результатов и сокращения сроков эксперимента у зсех животных, предназначенных для двух последних серий, предваритель-10 проводилось определение длительности алкогольного наркоза. Длительность алкогольного наркоза служит показателем для определения ферментных систем [Буров Ю.В., Ведерникова H.H. 1985]. В опыт отбирались жи-зотные, находившиеся в «боковом положении» более 2-х часов и, следовательно, наиболее восприимчивые к алкогольной интоксикации из-за низкой активности ферментных систем.

Четвертая серия экспериментов проводилась для изучения алкоголь-индуцированных повреждений семенников и щитовидной железы. После 30 пней алкогольной интоксикации по вышеприведенной методике животные выводились из эксперимента в сроки от 6 ч до 24 ч после последнего введения этанола путем декапитации.

Пятая серия экспериментов проводилась для изучения протекторного и коррегирующего влияния милдроната на структурные алкоголышдуциро-ванные повреждения семенников и щитовидной железы. Для решения дайной задачи животным спустя 15 минут после каждого введения этанола вводился внутрибрюшинно милдронат в дозе 50 мг/кг. Из эксперимента животные выводились в те же сроки, что и в четвертой серии.

В качестве контроля использовали интактные животные со сходными физиологическими параметрами. Помимо этого для четвертой серии - животные, которым ежедневно внутрижелудочно через зонд вводилась водопроводная вода и 1 раз в 4 дня суспензия тетурама на водопроводной воде в

дозе 25 мг/кг, для пятой серии - животные, которым спустя 15 минут после каждого введения этанола внутрибрюшинно вводился физиологический раствор в объеме, соответствующем объему раствора милдроната у экспериментальных животных.

Для гистологического исследования семенники и щитовидная железа животных, выведенных из эксперимента путем декапитации под эфирным наркозом, фиксировали в 10% растворе нейтрального формалина, заливались в парафин, при заливке в парафин семенников, учитывалась необходимость выдерживания их в течение суток в каждом из спиртов. Толщина срезов 5-7 микрон. Применялись методики окраски: гематоксилин-эозином и методика Селье.

Для максимальной объективизации полученных данных в связи с современными требованиями [Автандилов Г.Г.,1990; Сергиенко В.И., Бондарева И.Б.,2001; Автандилов Г.Г., 1998] акцент в данном исследовании был сделан на количественную оценку выраженности структурных повреждений. Это гак же на наш взгляд более целесообразно, учитывая структурно-функциональные особенности изучаемых органов. Для вычислений и статистической обработки использовалась программа Microsoft "Excel" из пакета прикладных программ Microsoft "Office-97".

При исследовании щитовидной железы применяли следующие мор-фометрические методы: измеряли высоту (h) фолликулярного эпителия и (стереологически) относительный объем (объемную долю Vv) фолликулярного эпителия, коллоида, h определялась не менее, чем в 100 фолликулах, сканируя препарат от одного края до другого края через центр; для определения Vv использовали сетку с 25 точками [Автандилов Г.Г. 1981, Быков B.JI. 1975г.]. При обработке пространственных рядов расстояние от центра железы до края условно подразделяли на 6 зон, охватывающих по радиусу: I

о - 10, II - 11 - 30, III - 31 - 50, IV - 51 - 70, V - 71 - 90, VI - 91 - 100%. Мынжанова Г.Р. 1984].

Для оценки структурных повреждений семенников производили ис-ледование их генеративной и инкретор ной активности.

При анализе генеративной активности семенника измеряли диаметр (d) I площадь (S) канальцев, а так же определяли индекс сперматогенеза (I).

Измерение d производили не менее чем в 50 канальцах. Площадь (S) 1ычисляли с помощью окулярной измерительной сетки по формуле:

Где Р - число точек, совпадающих с изображением поперечного среза ;анальца, Ао - цена одного квадрата сетки, Ркр - полуточки (проецируются ia край измеряемого контура) [Sitte М. 1967; Weber А. 1973]. Индекс сперматогенеза определяли по формуле:

Tie а - количество слоев зародышевых клеток, обнаруженных в каждом ка-1альце, N - количество подсчитанных канальцев [Fogg A., Cowing 1951].

При анализе инкреторной активности семенников определялось относительное количество эндокриноцитов.

Размеры канальцев увеличиваются при росте организма, а после полового созревания долгое время остаются постоянными [Stadtler F.,1971]. Изменение же величины канальцев находится в тесной взаимосвязи с уменьшением тесла внутриканальцевых клеток [Tonutti Е. 1953]. Следовательно, изменение данных величин можно считать достоверным критерием изменения структурно-функционального состояния данного органа.

Полученные результаты исследований были подвергнуты обработке методом вариационной статистики.

Результаты исследования и их обсуждение

При гистологическом исследовании семенников животных, подвергавшихся ЭБС, наблюдалось, по сравнению с контролем снижение кровенаполнения сосудов. Через 2 часа после воздействия уже наблюдалось уменьшение количества светлых (делящихся) сперматогоний, некоторое количество клеток - сперматоцитов имели неразличимые ядра.

По сравнению с контролем было большее количество канальцев не содержавших зрелых сперматозоидов. До начала морфологического исследования органов животных задействованных в опыте нами были проведены аналогичные измерения параметров соответствующих органов интактных животных (пассивный контроль).

Появление канальцев со спущенным сперматогенным эпителием отмечается спустя 24 часа после стрессорного воздействия. В тот же период становится выраженной фуксинофилия цитоплазмы клеток при окраске по Се-лье.

В период с третьих по седьмые сутки количество канальцев со зрелыми сперматозоидами продолжает уменьшаться. Проявления процессов репарации не отличается. В канальцах в которых еще сохранились сперматозоиды в просвете отличается скопление деструктивных масс, количество клеток Сертоли так же уменьшается. Клетки Лейдига, встречающиеся в интерсти-ции семенников контрольных животных группами по 3-4 клетки, в препаратах семенников животных выведенных их эксперимента в период с третьих по седьмые сутки встречаются гораздо реже, в близи части канальцев таких животных клетки Лейдига отсутствуют вообще.

При исследовании препаратов приготовленных из семенников живот-ых после тридцатидневной принудительной алкоголизации с параллель-ым введением тетурама признаки повреждения эпителия семенных канапь-ев визуально были выражены в большей степени, чем на препаратах жи-отных, подвергавшихся ЭБС. Фуксинофилия цитоплазмы сперматогоний и перматоцитов была выражена гораздо сильнее.

Большинство канальцев не содержат сперматозоидов и сперматид, перматоциты имеют нечеткие контуры ядра. Обращает на себя внимание [алое количество клеток всех слоев эпителия вообще на ряду с утолщенны-ш не только по сравнению с контрольными препаратами, но и препаратами рганов животных при ЭБС межканальцевыми промежутками. "Утолщенные [нтерстициальные перегородки имеют фиброзные изменения.

Данные морфометрического исследования позволяют более точно про-ледить характер данных изменений полученных в эксперименте. Давая тем амым возможность сопоставить их с данными клинических наблюдений, а ак же полученными патофизиологами и гистологами.

Уже в первые два часа после ЭБС отличается достоверное снижение ко-[ичества клеток Лейдига,. Это подтверждает экспериментальные данные видетельствующие что стрессорные воздействия даже при успешной адап-ации к ним могут приводить к снижению содержания тестостерона в плаз-ie крови у разного вида животных [Rose et al, 1972, Rekcekova D., Mikulay 1977; Jray J. et al, 1978], в том числе и у человека [Kreuz L. et al, 1972; Davidson G. et al., 1978]. В более поздних исследованиях Charpent и соавт. 1981) показано, что стресс вызывал у крыс снижение уровня тестостерона je только в плазме крови, но и в семенниках [Charpent et al., 1981].

В период от двух часов до суток с момента прекращения стрессорного юздействия изменения среднего диаметра и средней площади семенных ка-юпьцев носили характер тенденции к снижению. Затем в период от трех до

семи суток снижение становится достоверным. Это является проявлени нарушения генеративной функции семенников, так как известно, что д] метр и площадь семенных канальцев связанны с количеством внутри нальцевых клеток [Tonutti Е., 1953].

В эксперименте выявлено достоверное снижение всех показатех . функциональной активности семенников при ЭБС, достигающем максиму к седьмым суткам без тенденции к восстановлению. Это подтверждает д; ные полученные Меерсоном Ф.З. (1981) свидетельствующие о нарушен структуры и функции внутренних органов (миокард, слизистая оболоч желудка) после того, как стрессорная ситуация миновала.

Эти повреждения представляют собой не просто реакцию на стресс относительно стойкие последствия повреждения, возникшего во вре стресса. Ключевым звеном стрессорного повреждения является активан перенесенного окисления липидов (ПОЛ), чрезмерное усиление которс играет важную роль в повреждениях клеточных мембран [Меерсон Ф. 1981, 1984].

Реализация данного механизма помимо повреждений миокарда и я лудка [Меерсон Ф.З., 1981] доказана применительно слюнной железе [С коленко B.H., Силенко Ю.И., 1995] и сетчатки глаза [Шведова A.A. с соав 1995] последнее особенно важно, учитывая то, что глаз, как и семеннш щитовидная железа и мозг содержит «скрытые» аутоантигены. Если догг тить при этом, что свободнорадикальное повреждение затрагивает и стр) туры, ответственные за сохранение барьеров между этими тканями и kj вью, то возможно предположить развитие аутоимунного поражения со< ветствующих органов. Нами не было обнаружено на всем протяжении Э1 перимента круглоклеточных инфильтратов, характерных для аутоимуннс поражения семенников [Райцина В.В., 1979], но это можно объяснить те что одним из проявлений повреждающего действия стресса является депр<

сия клеточного звена иммунитета [Меерсон Ф.З., 1981]. Таким образом, необходимо было найти подтверждение в виде активации гуморального иммунитета по отношению к интересующим нас органам или схожим с ними в плане наличия скрытых антигенов. В экспериментах Богдановой Е.Д с соавторами было доказано, что активация ПОЛ возникает при ЭБС в головном мозге и сопровождается появлением в крови антител против мозговой ткани [Богданова Е.Д. ссоавт., 1981].

Что же касается изменений в щитовидной железе при ЭБС, свидетельствующих об угнетении ее функции, притом что она является одним из органов стресс-реализующий системы и следовательно функционально гипе-рактивна, то им есть два вероятных объяснения. Одно - опять таки - по аналогии с повреждениями надпочечников в условиях их гиперфункции [Skeleton, 1961].

Сходство стрессорных и алкогольиндуцированных повреждений семенников и щитовидной железы помимо общности в плане алкогольиндуциро-ванного выброса катехоламинов [Буров Ю.В., Ведерникова Н.Н., 1985] имеют патогенетическое сходство в плане развития гипоксии.

При гистологическом обследовании семенников животных данных групп эксперимента обращает на себя внимание меньшая выраженность повреждений, которые на основании изученного ранее материала, можно считать характерными для ЭБС и алкогольной интоксикации. В просветах большего числа канальцев имеются зрелые сперматозоиды. Общее количество некротизированных клеток в канальцах значительно меньше. Количество клеток Лейдига достаточное с большим количеством гранул в цитоплазме. В первые два часо и 1-е сутки среди сперматогоний отмечаются в основном темные клетки.

Затем ближе к седьмым суткам гистологическиех отличий от препаратов пассивного контроля не отмечается. При сравнении изменений в препа-

ратах алкоголизированных животных визуально отмечается значительно меньше проявления алкогольиндуцированных повреждений.

Из описанных нами выше изменений, характерных для стрессорных и алкогольиндуцированных повреждений при применении милдроната достоверными остаются лишь снижение относительного количества клеток Лей-дига при ЭБС в период 2 часа и 1 сутки после прекращения воздействия.

При анализе изменений морфометрических признаков повреждения семенников и щитовидной железы под влиянием милдроната были выявлены некоторые закономерности.

Если препарата вводился перед стрессорным воздействием, то такие показатели. Как средний диаметр и площадь семенных канальцев, достоверно не изменялись.

Индекс сперматогенеза достоверно снизился в период спустя 24 часа после прекращения воздействия. Относительное количество клеток Лейдига, как и в эксперименте с «чистым» ЭБС оказалось самым чувствительным по отношению к стрессоному воздействию параметром. Его изменение в виде достоверного снижения проявилось как на фоне предварительного введения милдроната, как и при его применении для коррекции стрессорных повреждений. Изменение остальных признаков носит характер тенденции, более выраженной в случае применения милдроната спустя 3 часа после ЭБС. Но если относительно контроля эта тенденция рассматривается как недостоверное снижение, то относительно повреждений, характерных для срока 5-7 суток после стрессорного воздействия это достоверное улучшение состояния органа.

Данный характер тенденции изменения признаков повреждения сохраняется и при изучении щитовидной железы. Здесь отчетливо видно, что наращивание высоты фолликулярного эпителия, а затем ее спад, характерные

1ля стрессорного повреждения. Менее выражены у животных II группы экс-териментов, нежели у III группы.

Подобный эффект милдроната имеет патофизиологическое подтвер-кдение в виде данных, полученных Логуновой JI.B. (1999) относительно ¡нижения стрессиндуцированного выброса гормонов щитовидной железы в 1ксперименте.

Алкогольные повреждения семенников и щитовидной железы так же 1меют положительную динамику при применении милдроната. Однако, в том случае эффективность явно более низкая, чем при ЭБС. Данный факт >бъясняется нами более тяжелой формой повреждения органов при алкого-шзме, ввиду неблагоприятного сочетания процессов нарушения энергообра-ования и гипоксии, с увеличением количества свободных радикалов.

На основании известных нам представлений о механизме действия мил-[роната и механизмов повреждающего действия стресса и алкогольной ин-оксикации рассмотрим возможное объяснение выявленным закономерно-тям.

Выраженный положительный эффект антиоксидантной терапии при трессе известен давно (Меерсон Ф.З. 1984). Это объясняется повышенным бразованием свободных радикалов при активизации ПОЛ и нарушении нергообразования.

Являясь аналогом у - бутиробетаина - прямого предшественника арнитина, милдронат сочетает в себе свойства аналогов карнитина и нгибиторов ß - окисления жирных кислот. Структурное сходство пределяет способность милдроната ингибировать - бутиробетаинги-роксилазу и тем самым приостанавливать синтез карнитина. Кроме того, илдронат по конкурентному типу ингибирует ацилкарнитинтрансферазу, в вязи с чем, тормозится транспорт в митохондрии и - метилхолина.

Изучение фармакологических свойств милдроната, показало, что он стимулирует гликолиз, предупреждает накопление лактата и уменьшает содержание АДФ в органах при гипоксии [Симхович Б.З. с соавт., 1986, 1987], усиливает репаративный и репликативный синтез ДНК [Блюм М.Б. с соавт., 1987]. Активируя путем ингибрирования -окисления жирных кислот пиру-ватдегидрогенезу и интенсифицируя окисление лактата и пирувата, милдро-нат переключает энергообеспечение клеток с жирных кислот на глюкозу и в последующем стимулирует, окислительный метаболизм и продукцию макроэргов. Таким образом, с одной стороны уменьшая количество негативно влияющих на клеточный метаболизм продуктов окисления жирных кислот, а с другой. Нормализуя энергообмен данных, препарат способствует снижению степени повреждения семенников и щитовидной железы при ЭБС и алкогольной интоксикации, приводя к репарации их структурных компонентов.

Основываясь на вышеизложеном можно предположить наметившуюся тенденцию к появленшо морфологических признаков увеличения функциональной активности семенников относительно пассивного контроля, как проявление анаболической активности милдроната, основанной на усилении репаративного и репликативного синтеза ДНК, в сочетании с высокой ми-тотической октивностью клеток сперматогенного эпителия. Возможно так же усиление продукции половых клеток за счет активности метаболита этанола - ацетальдегида, как регулятора биоэнергических процессов через аце-тилкоэнзим и цикл трикарбоновых кислот.

Изменение параметров при алкогольной интоксикации (в % по отношению к контролю)

■6-Ч

3 66.3-

1100

О К.^утки Лейдип^ц дд

П Средни» диаметр семенных канальцев

□ Среднаяя площадь семенных канальцев

□ Индекс спераматогенеза

□ Контроль

—г-

60

80

100

Изменение параметров при алкогольной интоксикации с параллельным парентеральным введение миллропата (в % по отношению к контролю)

□ Относительное количество клеток Лейдига

□ Индекс сперматогенеза

□ Средняя площадь семенных канальцев

□ Средний диаметр семенных канальцев

□ Контроль

-

&

□ 100

10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Изменение параметров щитовидной железы при алкогольной интоксикации (в% по отношению к контролю)

□ Высота фолликулярного эпителия

□ Объемная доля фолликулярного эпителия

Щ Относительный объем коллоида

Изменение параметров по зонам щитовидной железы при алкогольной интоксикации с парантеральным введением милдроната (в % по отношению к контролю)

□ Высота фолликулярного эпителия

□ Объемная доля фолликулярного эпителия Ш Относительный объем коллоида

Изменение параметров при ЭБС (в % по отношению к контролю)

70 -I-1-1-1-1-1

2 час 1 сут 3 сут 5 сут 7 сут

♦ Высота фолликулярного эпителия

- а- Объемная доля фолликулярного эпителия

- -А- Относительный объем коллоида

Изменение параметров при ЭБС с коррекцией повреждении при

помощи

мнлдроната (в % по отношению к контролю)

110 -

100

90 -

80 -

120

110 -

100 -

90 -

80

70

1 сут

3 сут

5 сут

7 сут

♦ Высота фолликулярного эпителия - -3- Объемная доля фолликулярного эпителия —А—Относительный объем коллоида

Изменение параметров при ЭБС на фоне предварительного введения милдроната (в % по отношению к контролю)

120 п

90 -I-1-1-.-1-

2 час 1 сут 3 сут 5 сут 7 сут

♦ Высота фолликулярного эпителия » Объемная доля фолликулярного эпителия —А—Относительный объем коллоида

Изменение параметров при ЭБС (в % по отношению к контролю)

С Средний диаметр семенных канальцев - ъЗ- Средняя площадь семенных канальцев —А—Индекс сперматогенеза —¡Я- -Клетки Лейдига

Изменение параметров при ЭБС с коррекцией милдронатом в % по отношению к контролю)

100 -1 90 • 80 70

а

1 сут

3 с/т

5 сут

7 сут

• ■ ■ Средний диаметр семенных канальцев - Средняя площадь семенных канальцев -А—-Индекс сперматогенеза

Относительное количество клеток Лейдига

Изменение параметров при ЭБС на фоне предварительного введения милдроната (в % по отношению к контролю)

120 -|

110 -

100 -

90 - а-

80 -

70 -

2 час

1 сут

3 сут

5 сут

7 сут

♦ Средний диаметр семенных канальцев - -Л- Площадь семенных канальцев —А- -Индекс сперматогенеза —Ш• -Относительное количество клеток Лейдига

Выводы

1. В эксперименте при эмоционально-болевом стрессе в период 2-24ч при морфологическом исследовании щитовидной железы выявлено увеличение высоты и объемной доли фолликулярного эпителия, что свидетельствует об усилении функциональной активности щитовидной железы.

2. В эксперименте при стрессе в фазу функционального напряжения (3-7 сут) при морфологическом исследовании щитовидной железы было выявлено прогрессирующее снижение высоты и объемной доли фолликулярного эпителия, что говорит о снижении функциональной активности.

3. В эксперименте по данным морфометрического исследования эмоционально-болевой стресс и острая алкогольная интоксикация приводят к прогрессирующему снижению диаметра, площади семенных канальцев, индекса сперматогенеза и относительного количества клеток Лейдига, что отражает угнетение как инкреторной, так и генеративной функции семенников.

4. В эксперименте при эмоционально-болевом стрессе в период с 2 до 24 часов выявлено снижение кровенаполнения сосудов семенников, индекса сперматогенеза и относительного количества клеток Лейдига.

5. Парентеральное введение милдроната при экспериментальном эмоционально-болевом стрессе вне зависимости от того вводился он до или после стрессорного воздействия приводит к изменению высоты, объемной доли фолликулярного эпителия и объемной доли коллоида щитовидной железы, а также диаметра и площади семенных канальцев, индекса сперматогенеза и относительного количества клеток Лейдига по сравнению с аналогичными показателями у экспериментальных животных при эмоционально-болевом стрессе.

6. При парентеральном введении милдроната за 15 минут до экспериментального стрессорного воздействия отмечалось меньшее количество мор-

фологических показателей имеющих достоверное отличие от контрольных показателей интактных животных, чем у животных, которым парентеральное введение милдроната производилось спустя 3 часа после стрес-сорного воздействия, что говорит о его более выраженном протекторном, чем корригирующем эффекте.

7. Введение миолдроната, при эксперименте с алкогольной интоксикацией в условиях ингибнрования алкогольметаболизирующих ферментов приводит к достоверному изменению изученных показателей семенников и щитовидной железы, что отражает нормализацию функции данных органов.

Публикации.

1. Влияние 3(2,2,2-триметилгидразиний) пропионата (ТГП) на развитие структурных повреждений внутренних органов белых крыс в условиях кислородного голодания // Всероссийская конференция «Гипоксия: Механизмы, адаптация, коррекция». Тез. докл. М., 1997.-С.73-74.(соавт.: Л.В. Логунова, ЮЛ. Сутулов, Ф.Э. Батагова, И.Г. Кудзиев).

2. Влияние милдроната на предупреждение и восстановление стрессор-ных повреждений семенников и щитовидной железы. // Научные труды IV Международного конгресса «Реабилитация в медицине и имму-нореабилитация» - (Сочи 1998г.). Международный журнал по имму-нореабилитации. (соавт.: Л.В. Логунова, ЮЛ. Сутулов, Ф.Э. Батагова, И.Г. Кудзиев).

3. Мембраностабилизирующее действие милдроната при стрессорных и токсических воздействиях. // XVII Всероссийский съезд физиологов: Тез. Докл. - Ростов - на - Дону, 1998. - С. 331. (соавт.: Л.В. Логунова, ЮЛ. Сутулов, Ф.Э. Батагова).

4. Влияние милдроната на предупреждение и восстановление алкогольных повреждений семенников и щитовидной железы - // Материалы

t. 1 .Актуальность проблемы.

Социально - экономические реформы последних лет имеют выраженный «побочный эффект»; так как оказывают пролонгированное стрессорное воздействие на организм человека. В связи с этим стресс из необходимого эвена адаптации превращается в фактор, приводящий к прямому и опосредованному повреждению органов [Меерсон Ф.З., 1983 ,1984; Меерсон Ф.З. .Пшенникова М.Г.,1988]. Одновременно вследствие ухудшения социально-экономического положения возрастает потребление населением этанола [Кошкина ЕЛ. ,2001], который, как известно, отягощает течение всех без исключения заболеваний и обуславливает развитие характерных для хронического алкоголизма висцеропатий [Серов В.В., Лебедев С.П., 1985; Лисицын Ю.П., Копыт Н.Я., 1983;]. Таким образом, резко возрастает число потерь в связи с алкогольной смертностью [Немцов А.В., Школьников В.М„ 2001]. Между этими явлениями существует патогенетическая связь, подтвержденная социологически [Leon et at., 1997, Shkolnikov V.M. et al. 1998] и экспериментально [Mezey E et al. 1980].

В связи с этим изучение механизмов патогенеза стрессорных и алкогольиндуцированных структурных изменений и поиск лекарственных препаратов для их профилактики и коррекции является одной из актуальных проблем современной медицины.

Так, при изучении алкогольных висцеропатий морфологами преимущественное внимание уделяется таким жизненно важным органам как сердце, печень, почки, поджелудочная железа [Серов В.В., Лебедев С.П., 1985; Лисицын Ю.П. Копыт Н.Я., 1983;]. Те же органы, включая надпочечники, детально изучаются при экспериментальных стрессорных воздействиях [Меерсон Ф.З., 1983 ,1984; Меерсон Ф.З., Пшенникова М. Г.,1988].

Щитовидная железа и семенники, как органы эндокринной системы совместно с нервной и иммунной принимают участие в координации и регуляции деятельности организма, что позволяет ему адекватно реагировать на постоянно изменяющиеся условия окружающей среды [Балаболкин М. И., 1997]. По данным литературы [Меерсон Ф.З., 1983 ,1984; Буров Ю.В., Ведерникова Н.Н., 1985] в условиях стрессорного воздействия и алкогольной интоксикации щитовидная железа и семенники в зависимости от фаз адаптации находятся в функционально различных состояниях. Однако, сравнительного морфологического изучения данных органов в эксперименте при алкогольной интоксикации и стрессорных воздействиях не проводилось.

Среди фармакологических средств, которые могут быть использованы для коррекции повреждений, вызванных стрессорным воздействием и алкоголем, особое внимание привлекает лекарственный препарат «Милдронат» - триметилгидразиний пропионат (ТГП), в отношении которого доказано корригирующее действие на гормональный фон при стрессе и алкогольиндуцированные повреждения миокарда [Сутулое Ю.Л. с соавт. 1991]. Для обоснования применения милдроната при стрессорных и алкогольиндуцированных повреждений щитовидной железы и семенников необходимо изучение влияния ТГП на их развитие, выраженность и восстановление.

Цель и задачи исследования.

Целью настоящей работы явилось патоморфологическое изучение особенностей структурных повреждений семенников и щитовидной железы при экспериментальном эмоционально-болевом стрессе и алкогольной интоксикации, а так же влияния на них милдроната.

Исходя из поставленной цели исследования, решали следующие задачи:

- изучение особенностей структурных повреждений семенников и щитовидной железы при экспериментальном эмоционально-болевом стрессе и острой алкогольной интоксикации с применением ингибиторов алкогольметаболиэирующих ферментов;

- проведение сравнительного анализа результатов морфологического исследования семенников и щитовидной железы;

- изучение протекторного и корригирующего воздействия милдроната на развитие структурных повреждений семенников и щитовидной железы на указанных экспериментальных моделях.

Научная новизна результатов работы.

В проведенной работе впервые представлена сравнительная морфометрическая характеристика щитовидной железы и семенников крыс при экспериментальной алкоголизации с применением ингибитора алкогольметаболиэирующих ферментов и эмоционально-болевом стрессе, а так же влияния на выявленные изменения милдроната. Впервые благодаря морфометрическому анализу, получены новые количественные данные об изменении структурной организации щитовидной железы и семенников в период срочной адаптации при стрессе, а так же при алкогольной интоксикации, и доказан протекторный и коррегирующий эффект милдроната в отношении этих изменений.

Положения, выносимые на защиту.

1. При эмоционально-болевом стрессе и острой алкогольной интоксикации морфологические изменения, происходящие в семенниках и щитовидной железе, свидетельствуют об угнетении функциональной активности этих органов.

2. Милдронат оказывает выраженное протекторное и корригирующее влияние при эмоционально-болевом стрессе и алкогольной интоксикации.

Практическая значимость

Проведённое исследование позволяет рекомендовать милдронат для клинических испытаний как средства профилактики и коррекции стрессорных и алкогольиндуцированных повреждений семенников и щитовидной железы.

Апробация работы.

Результаты исследования были доложены на заседании кафедры паталогической анатомии с курсом судебно-медицинской экспертизы Северо-Осетинской государственной медицинской академии (СОГМА) (Владикавказ, ноябрь 2000 г.) и межлабораторной конференции НИИ морфологии человека РАМН (Москва, октябрь 2001 г.).

Объём и структура работы.

Работа изложена на страницах машинописного текста и состоит из введения, глав материалы и методы исследования, собственных исследований (2 главы), заключения, выводов и списка литературы -188 источников, (98 - отечественных и 90 - иностранных).

Диссертация иллюстрирована 15 таблицами и 47 рисунками.

Публикации.По теме диссертации опубликовано 4 работы.

Автор выражает глубокую благодарность доктору медицинских наук, профессору О. В. Макаровой и доктору медицинских наук, профессору К.М. Козыреву за всестороннюю помощь, оказанную ими в процессе работы.

Выводы

1. В эксперименте при эмоционально-болевом стрессе в период 2-24ч при морфологическом исследовании щитовидной железы выявлено увеличение высоты и объемной доли фолликулярного эпителия, что свидетельствует об усилении функциональной активности щитовидной железы.

2. В эксперименте при стрессе в фазу функционального напряжения (37 сут) при морфологическом исследовании щитовидной железы было выявлено прогрессирующее снижение высоты и объемной доли фолликулярного эпителия, что говорит о снижении функциональной активности.

3. В эксперименте по данным морфометрического исследования эмоционально-болевой стресс и острая алкогольная интоксикация приводят к прогрессирующему снижению диаметра, площади семенных канальцев, индекса сперматогенеза и относительного количества клеток Лейдига, что отражает угнетение как инкреторной, так и генеративной функции семенников.

4. В эксперименте при эмоционально-болевом стрессе в период с 2 до 24 часов выявлено снижение кровенаполнения сосудов семенников, индекса сперматогенеза и относительного количества клеток Лейдига.

5. Парентеральное введение милдроната при экспериментальном эмоционально-болевом стрессе вне зависимости от того вводился он до или после стрессорного воздействия приводит к изменению высоты, объемной доли фолликулярного эпителия и объемной доли коллоида щитовидной железы, а также диаметра и площади семенных канальцев, индекса сперматогенеза и относительного количества клеток Лейдига по сравнению с аналогичными показателями у экспериментальных животных при эмоционально-болевом стрессе.

6. При парентеральном введении милдроната за 15 минут до экспериментального стрессорного воздействия отмечалось меньшее количество морфологических показателей имеющих достоверное отличие от контрольных показателей интактных животных, чем у животных, которым парентеральное введение милдроната производилось спустя 3 часа после стрессорного воздействия, что говорит о его более выраженном протекторном, чем корригирующем эффекте.

7. Введение миолдроната, при эксперименте с алкогольной интоксикацией в условиях ингибирования алкогольметаболиэирующих ферментов приводит к достоверному изменению изученных показателей семенников и щитовидной железы, что отражает нормализацию функции данных органов.

Заключение

Социально - экономические реформы последних лет имеют выраженный «побочный эффект» в виде резкого увеличения стрессовых ситуаций, носящих пролонгированный характер. Подобное же увеличение времени воздействия превращает стресс из необходимого эвена адаптации в фактор, приводящий к прямому и опосредованному (снижение противоопухолевого иммунитета) повреждению органов [Меерсон Ф.З., 1983 ,1984; Меерсон Ф.З., Пшенникова М.Г., 1988]. Одновременно возрастает потребление населением этанола [Кошкина Е.А.,2001], который, как известно, отягощает течение всех без исключения заболеваний и обуславливает развитие характерных для хронического алкоголизма висцеропатий [Серов В.В, Лебедев С.П., 1985; Лисицын Ю.П., Копыт Н.Я, 1983;]. Таким образом резко возрастает число потерь в связи с алкогольной смертностью [Немцов А.В., Школьников В.М„ 2001].

Между этими явлениями существует патогенетическая связь, подтвержденная социологически [Leon et al., 1997, Shkolnikov V.M. et al. 1998] и экспериментально [Mezey E et al. 1980]. В связи с этим изучение интимных механизмов патогенеза стрессорных и алкогольиндуцированных структурных изменений и поиск лекарственных препаратов для их профилактики и коррекции является одной из актуальных проблем современной медико-биологической науки.

При изучении алкогольных висцеропатий морфологами преимущественное внимание уделяется таким жизненно важным органам как сердце, печень, почки, поджелудочная железа [Серов В.В., Лебедев С.П., 1985; Лисицын Ю.П., Копыт Н.Я., 1983;]. Те же органы, включая надпочечники, подробно изучаются в экспериментах со стрессорным воздействием [Меерсон Ф.З., 1983, 1984; Меерсон Ф.З., Пшенникова М. Г., 1988].

Щитовидная железа, как и семенники, совместно с нервной и иммунной системами принимает участие в координации и регуляции деятельности всех других систем организма, позволяя последнему адекватно реагировать на постоянно изменяющиеся условия окружающей среды [Балаболкин М. И., 1997]. В условиях стрессорного воздействия и алкогольной интоксикации данные органы находятся в функционально различных состояниях [Меерсон Ф.З., 1983,1984; Буров Ю.В., Ведерникова Н.Н., 1985]. Экспериментальные данные свидетельствуют о снижении уровня тестостерона и нарушении сперматогенеза у животных подвергающихся стрессорным воздействиям и алкогольной интоксикации [Буров Ю.В., Ведерникова Н.Н., 1985; Hoist D., 1969 и др.] Так же данные при изменении функции щитовидной железы при стрессе и алкоголизме [Амирагова М.Г. Свирская Р.И., 1976; Heinen Е. et al 1981 и др.]. Клинически постоянное нарушение половых функций регистрируется у 30-50 % больных алкоголизмом 1-2 стадий [ Шабанов П.Д., 1999].

В настоящее время для лечения алкоголизма используется несколько групп препаратов. Среди них патогенетическим действием обладает только одна [Иванец Н.Н., Кинкулькина М.А., 2001]. В нее включены препараты, которые напрямую или опосредованно влияют на катехоламиновую нейромедиацию, нормализуя его обмен (парлодел, кампрал).

Несмотря на их эффективность в плане лечения алкогольной зависимости, они не способствуют восстановлению структурных повреждений, лежащих в основе «алкогольной болезни». Стрессорные повреждения внутренних органов коррегируются с помощью антиоксидантной терапии [Меерсон Ф.З., 1981,1983,1984; Меерсон Ф.З., Пшенникова Н.Н., 1988; Судаков 2000].

Данная группа препаратов, несмотря на доказанную эффективность не влияет на механизм продукции свободных радикалов, главным источником которых является перекисное окисление липидов. Кроме того сосудистый спазм, являющийся следствием нарушения функции гладкой мускулатуры под воздействием катехоламинов, приводит к развитию гипоксии [Меерсон ОрЗ., 1984].

Ввиду вышеизложенного, проблема фармакологической коррекции стрессорных и алкогольиндуцированных повреждений внутренних органов представляется нам малоизученной.

В качестве лекарственного средства, влияющего на интимные механизмы повреждающего действия стресса и алкогольной интоксикации внимание привлекает милдронат. Препарат создан в институте органического синтеза Латвийской АН По химической структуре является аза-аналогом у-бутиробетаина - естественного метаболита в цепи биосинтеза карнитина. В эксперименте доказана его способность оказывать влияние на карнитинзависимые процессы метаболизма и регулирует соотношение окисления углеводов и жирных кислот [Шутенко Ж.В. с соавт., 1991]. Так же экспериментально подтверждена способность милдроната оказывать протекторный и корригирующий эффект при стрессорных и алкогольиндуцированных повреждениях желудка и миокарда [Германе С.К., Берзиня Д.А., 1991; Сутулов Ю.Л. с соавт., 1991].

Для воспроизведения стрессорных повреждений была использована методика Desiderato [О. Desiderata et al., 1974], которая позволяет моделировать наиболее важное сочетание болевого раздражения и эмоционального стресса [Меерсон Ф.З., 1981]. Алкогольиндуцированные повреждения моделировались по методике Попова В.В., 1991 [Попов В.В., 1991], когда параллельно с внутрижелудочным введением 48% р-ра этанола, вводился также и тетурам. Данное сочетание позволяло поддерживать в организме животного высокую концентрацию этанола и ацетальдегида, получая за короткий срок изменения органов, характерные для хронического алкоголизма. Параллельно с экспериментами по изучению стрессорных и алкогольных повреждений семенников и щитовидной железы изучался протекторный и корригирующий эффект милдроната при данных патологиях. Для этого животным вводился милдронат в дозе 50 mg на килограмм веса либо до, либо после воздействия в зависимости от цели исследования. Выбор дозы обуславливался тем, что в такой дозе милдронат оказывал в эксперименте кардиопротекторный эффект при острой алкогольной интоксикации в эксперименте [Сутулов Ю Л. с соавт., 1991].

Животные выводились из эксперимента путем декапитации с предварительным усыплением их с помощью эфира. Органы изымались и фиксировались в 10% нейтральном формалине. Время между забоем и фиксацией не превышало 2-3 минут. Из органов приготавливались парафиновые срезы толщиной 8 мкм, окрашивавшиеся гематоксилином-эозином и по Селье. Помимо гистологического исследования для объективизации данных проводилась морфометрия семенников по четырем признакам и щитовидной железы по трем признакам [Автандилов ГГ., 1981; Ухов Ю.И., Астраханцев А.Ф., 1983]. В семенниках изучали средний диаметр, среднюю площадь семенных канальцев, относительное количество клеток Лейдига, индекс сперматогенеза. В щитовидной железе измеряли высоту фолликулярного эпителия, относительный объем фолликулярного эпителия и коллоида. Изучение щитовидной железы проводили с учетом зональности ее строения [Мынжанова Г. Р., 1984].

В эксперименте с эмоционально-болевым стрессом (ЭБС) после шестичасового воздействия забой животных производился через 2 часа, 1,3,5 и 7 суток, что обеспечивало исследование динамики повреждений во время всего периода срочной адаптации [Меерсон Ф.З., 1981; 1984].

При гистологическом исследовании семенников животных, подвергавшихся стрессорному воздействию обнаруживалась тенденция к снижению кровенаполнения сосудов от 2-х часов к 7 суткам. Подобная реакция сосудов тестикул отличается от картины при экспериментальной ишемии, когда сосуды были резко полнокровны, с очаговыми кровоизлияниями [Мельман Е.П. с соавт., 1971]. В канальцах отмечалась деструкция части сперматогенной ткани с массивным отторжением ее от слоя поддерживающих клеток. В просвете канальцев отмечалось большое количество сперматогенной ткани с массивным отторжением ее от слоя поддерживающих клеток. В просвете канальцев отмечалось большое количество сперматогоний и сперматоцитов в состоянии дистрофии и некроза. Количество последних к 7-м суткам уменьшилось что, по-видимому, связано со снижением генеративной функции семенников. В период от 24 часов отмечалось снижение количества сперматогоний со светлыми ядрами (делящихся).

Гистологические изменения структуры семенников животных, подвергшихся алкогольной интоксикации были сходны. В большой части канальцев отсутствовали сперматозоиды и сперматиды, значительно чаще по сравнению с контролем выявлялись клетки слущенного сперматогенного эпителия. Обнаруживались признаки повреждения сустеноцитов, деструкция соединительнотканных компонентов. Данные сходны по своей выраженности с изменением структуры семенников у крыс, потреблявших 15% этанол в течение 6 месяцев, которое сопровождалось значительными изменениями клеток головного мозга, миокарда, печени, поджелудочной железы [Буров Ю.В., Ведерникова Н.Н., 1985]. При окраске срезов по Селье как при ЭБС, так и при алкогольной интоксикации была отмечена фукшнофилия цитоплазмы, что можно расценивать как признак повреждения, подобно изменениям в миокарде [Попов В.В., 1991].

Морфометрия семенников при ЭБС спустя 2 часа после воздействия выявила достоверное снижение индекса сперматогенеза и относительного количества клеток Лейдига, изменения же среднего диаметра и средней площади носили характер тенденции, как и через сутки после воздействия ЭБС. Достоверное снижение этих показателей отмечается только с периода 3-х суток и в дальнейшем усугубляется. При алкогольной интоксикации у животных, выведенных из эксперимента спустя 30 дней, имелось достоверное снижение всех морфометрических показателей по сравнению с контролем. Наибольшим снижением характеризуется относительное количество клеток Лейдига, что соответствует клиническим данным об угнетении половой функции у больных алкоголизмом, сочетающееся с изменением количества и подвижности сперматозоидов, а также появлением их измененных форм [Шабанов П.Д., 1999].

Изменения в щитовидной железе при ЭБС носят неоднозначный характер. Гистологически первоначальное усиление функциональной активности выражалось в том, что железа состояла из более мелких фолликулов, среди клеток эпителия которых, часто встречались активные тиреоциты, имеющие крупное ядро, пенистовакуолизированную цитоплазму и выступающую в просвет фолликула апикальную часть. Данная картина наблюдалась на препаратах животных, выведенных из эксперимента в период от 2-х часов до 1-х суток и морфометрически подтверждалась достоверным увеличением высоты и объемной доли фолликулярного эпителия, а также снижением объемной доли коллоида в первых трех зонах, гистологически соответствующих центральной части железы. Изменения в трех остальных зонах не были достоверными, хотя и имели подобную тенденцию, за исключением шестой.

Через трое суток после воздействия ЭБС морфометрические показатели изменили характеру приобретя тенденцию к снижению средней высоты фолликулярного эпителия, его объемной доли и увеличению объемной доли коллоида. Достоверных статистических изменений не было выявлено ни в одной зоне. Гистологически в период на 5-7 сутки отмечалось увеличение размеров фолликулов и снижение структурных проявлений функциональной активности клеток фолликулярного эпителия. Морфометрически на 7-е сутки отмечается достоверное снижение высоты фолликулярного эпителия и его объемной доли, сочетающееся с увеличением объемной доли коллоида при отсутствии гистологически подтвержденного снижения кровенаполнения сосудов железы. Данные изменения по характеру схожи с проявлениями реакции щитовидной железы на иммобилизацию [Мынжанова Г. Р., 1984] и невесомость [Плахута-Плахутина Г.И, 1979]. Это, на наш взгляд, объясняется тем, что как иммобилизация, так и невесомость являются стрессорными ситуациями для животных.

Щитовидная железа крыс, подвергавшихся алкогольной интоксикации, имела как гистологические, так и морфометрические признаки повреждения и снижения функции. Клетки фолликулятрного эпителия находились в состоянии вакуольной дистрофии и некроза, фолликулы были увеличены, сосуды расширены. Высота и объемная доля фолликулярного эпителия были достоверно ниже, чем в контроле, объемная доля коллоида так же достоверно выше. Эти данные гистоструктурного анализа подтверждают эксперименты патофизиологов, доказавших снижение количества тиреоидных гормонов при хронической алкоголизации [Singh S. Et а!., 1979; Mezcy Е., Potter J, 1981 ].

Механизм развития данных изменений заключается в активации перекисного окисления липидов (ПОЛ), приводящей к развитию свободнорадикального поражения клеток и нарушению энергообразования [Меерсон Ф.З., 1984; Меерсон Ф.З., Пшенникова М.Г., 1988; Соколенко В.Н., Силенко Ю.И., 1995]. При алкогольной интоксикации данный процесс, запускаемый алкогольиндуцированным выбросом катехоламинов усугубляется гипоксией и коферментной недостаточностью [Ellis F.W., 1966; Blum, Trachtenberg, 1988].

Для изучения протекторного и корригирующего влияния милдроната на стрессорные повреждения семенников и щитовидной железы препарат вводили животным за 15 минут до и через 3 часа после воздействия. Анализ результатов показал эффективность при профилактическом введении животным милдроната. Морфометрическое исследование семенников не выявило достоверных изменений среднего диаметра и площади семенных канальцев, а также индекса сперматогенеза, хотя количество клеток Лейдига в первые 2 часа и 1-е сутки после воздействия было снижено достоверно по отношению к контролю, и затем до 7-х суток тенденция сохранялась. Если введение милдроната производилось спустя 3 часа, то средний диаметр и средняя площадь достоверно также не изменялись, но индекс сперматогенеза и относительное количество эндокриноцитов было достоверно снижено.

При алкогольной интоксикации вводимый милдронат достоверно улучшал показатели морфометрии семенников и щитовидной железы, тем не менее они были достоверно ниже контроля. В щитовидной железе в период до 3-х суток морфометрические отличия от данных в группе экспериментов с ЭБС носили недостоверный характер, но к 7 суткам морфометрические показатели экспериментальных животных приближались к контролю.

В данных литературы подобный эффект также имел место в эксперименте со стрессорными язвами желудка и алкогольными поражениями сердца [Сутулое Ю.Л. с соавт., 1991; Германе С.К., Берзиня Д.А., 1991], где это обосновывалось влиянием милдроната на обмен катехоламинов [Германе С.К., Берзиня Д.А., 1991]. Кроме того милдронат обладает выраженным эффектом при острых ишемических некрозах сердечной мышцы и стенокардии [Виноградов А. В. с соавт., 1991; Калмыкова В.И. с соавт., 1991], что, по-видимому, связано с его способностью регулировать соотношение окисления жирных кислот и углеводов в организме [Шутенко Ж.В. с соавт., 1991].

Таким образом, результаты проведенного исследования позволяют сделать вывод о преобладающей роли нарушения метаболизма в виде активации ПОЛ и гипоксии в генезе алкогольных и стрессорных повреждений, а также рекомендовать проведение клинических испытаний милдроната в качестве лекарственного средства для коррекции и профилактики алкогольных и стрессорных повреждений семенников и щитовидной железы.