Автореферат и диссертация по медицине (14.03.06) на тему:Сравнительное изучение гастропротекторных свойств антигипоксантов разного химического строения (экспериментальное исследование)

ИИ461

591

На правах рукописи

КРЮКОВА Надежда Олеговна

СРАВНИТЕЛЬНОЕ ИЗУЧЕНИЕ ГАСТРОПРОТЕКТОРНЫХ СВОЙСТВ АНТИГИПОКСАНТОВ РАЗНОГО ХИМИЧЕСКОГО СТРОЕНИЯ (экспериментальное исследование)

14.03.06 - фармакология, клиническая фармакология

2 8 ОКТ ?ою

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата медицинских наук

Смоленск - 2010

004611591

Работа выполнена в ГОУ ВПО «Смоленская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

НАУЧНЫЙ РУКОВОДИТЕЛЬ

ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ:

доктор медицинских наук, профессор НОВИКОВ Василий Егорович

доктор медицинских наук, профессор УРАКОВ Александр Ливиевич

доктор медицинских наук, профессор ЛИТВИНОВ Александр Васильевич

ВЕДУЩАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ:

Учреждение Российской академии медицинских наук «Научно-исследовательский институт фармакологии им. В. В. Закусова», г. Москва

Защита состоится « » /£££^^¿/2010 года в //^"Часов на заседании диссертационного совета Д 208.097^)2 при ГОУ ВПО «Смоленская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» (214019, г. Смоленск, ул. Крупской, д. 28).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО «Смоленская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Автореферат разослан « Г? 2010 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

Доктор медицинских наук, профессор Яйленко А. А.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы

Симптоматические язвы желудка и двенадцатиперстной кишки (симптоматические гастродуоденальные язвы) - группа патологических состояний, объединённая общим признаком: образованием язвенного дефекта слизистой оболочки желудка и двенадцатиперстной кишки в ответ на воздействие ульце-рогенных факторов. Симптоматические гастродуоденальные язвы возникают в стрессовых ситуациях, на фоне других заболеваний или в результате приёма лекарств, алкоголя, токсических веществ, у больных пожилого возраста, при травмах, инфекциях и т. д. В последние годы с развитием гастроэнтерологии научились четко разграничивать язвенную болезнь как самостоятельное заболевание и симптоматические гастродуоденальные язвы.

При стрессовых ситуациях эрозивно-язвенные поражения слизистой оболочки желудка (СОЖ) и двенадцатиперстной кишки развиваются у 65-80% больных (Гельфанд Б. Р. и соавт., 2004; Калинин А. В., 2008). К сожалению, вопрос о диагностике и лечении острых «стрессовых язв», в том числе и осложненных кровотечениями, изучен недостаточно, что в отдельных случаях ведет к тяжёлым осложнениям, а иногда и летальным исходам (Кубышкин В. А, Ши-шин К. В., 2004; Абуладзе И. О., 2009). Это объясняется тем, что до сих пор нет обоснованных стандартных подходов к их профилактике и лечению (Стукален-ко Д. О., 2006; Верхулецкий И. Е., Луценко 10. Г., 2008).

Не менее актуальной проблемой во всём мире является развитие гастро-патий при приёме нестероидных противовоспалительных препаратов (НПВП). Несмотря на введение в клиническую практику новых лекарственных средств этой группы, селективно ингибирующих циклооксигеназу-2 вопрос остаётся открытым (Finckh A., Aronson М. D., 2005; Маев И. В., Вьючнова Е. С., Лебедева Е. Г., 2006).

Для терапии гастропатий, индуцированных НПВП, применяют две группы лекарственных средств, эффективность которых подтверждена большим числом исследований и клинической практикой, - ингибиторы протонной помпы и синтетические аналоги простагландинов (Шептулин А. А., 2006). Однако терапевтическое действие ингибиторов протонной помпы зависит от инфици-рованности слизистой оболочки Н. pylori: препараты более эффективны при наличии этого микроорганизма (Маев И. В., Вьючнова Е. С., Стасева И. В., 2004). Высокая стоимость, нежелательные эффекты и неудобная схема применения ограничили широкое использование синтетических аналогов простагландинов (Шварц Г. Я., 2003). Поэтому поиск и разработка новых способов профилактики НПВП-гастропатии является актуальной задачей.

Известен механизм развития острых симптоматических язв в результате активации процессов перекисного окисления липидов. Образующиеся в результате реакционные продукты свободнорадикального окисления принимают участие в поражении СОЖ. В ряде работ (Ямашкина Е. И., 2002; Зорькин В. И., 2003; Лосенкова С. О., 2005) продемонстрировано положительное влияние пре-

паратов с антиоксидантным/антигипоксантным типом действия на процессы регенерации и эпителизации острых язв и эрозий.

Сегодня в клинической практике применяется несколько лекарственных препаратов антиоксидантов, синтезирован ряд новых оригинальных соединений с антигипоксантными и антиоксидантными свойствами. Их изучение на экспериментальных моделях ульцерогенеза позволит расширить знания в области патогенеза, а также профилактики и фармакотерапии симптоматических язвенных поражений желудочно-кишечного тракта.

Цель исследования

Поиск эффективных гастропротекторов среди антигипоксантов различного химического строения и их сравнительное изучение.

Задачи исследования

1. Изучить влияние мексидола, гипоксена, бемитила и диосмина на мор-фогистологическую картину слизистой оболочки желудка в условиях стресс-индуцированного и НПВП-индуцированного ульцерогенеза.

2. Оценить гастропротекторную эффективность препаратов на экспериментальных моделях ульцерогенеза при однократном и курсовом лечебно-профилактическом применении.

3. Исследовать влияние изучаемых лекарственных веществ на массу надпочечников, тимуса и селезёнки экспериментальных животных в условиях им-мобилизационного стресса и НПВП-гастропатии.

4. Изучить активность перекисного окисления липидов в ткани желудка и сыворотке крови при экспериментальном стресс-индуцированном и НПВП-индуцированном ульцерогенезе и его коррекции лекарственными веществами.

5. Изучить биохимические показатели сыворотки крови животных (ала-ниновую и аспарагиновую аминотрансферазы, лактатдегидрогеназу, щелочную фосфатазу и общий белок) в условиях стресс-индуцированного и НПВП-индуцированного ульцерогенеза и влияния на них исследуемых веществ.

6. Провести сравнительную оценку гастропротекторной активности изученных веществ по влиянию на морфологические и биохимические показатели в условиях стресс-индуцированной гастропатии и гастропатии, индуцированной кислотой ацетилсалициловой.

Научная новизна исследования

Впервые:

• проведено сравнительное изучение гастропротекторных свойств отечественных лекарственных препаратов мексидола, гипоксена, бемитила и диосмина на стрессовой модели ульцерогенеза и при НПВП-гастропатии;

• установлено, что перечисленные антигипоксанты/антиоксиданты оказывают гастропротекторноедействие, которое более выражено при курсовом лечебно-профилактическом введении препаратов;

• выявлено, что выраженное защитное действие изученных веществ на слизистую оболочку желудка при экспериментальном ульцерогенезе сочетается с высокой антиоксидантной активностью;

• показано, что изученные лекарственные вещества, особенно мексидол, в условиях иммобилизационного стресса проявляют достоверные стресспротек-торные свойства;

• впервые доказана возможность применения биоимпедансометрии СОЖ для оценки степени морфофункциональных изменений в слизистой оболочке желудка и эффективности их коррекции фармакологическими веществами.

Практическая значимость работы

Полученные новые научные сведения по фармакодинамике мексидола, гипоксена, бемитила и диосмина позволяют экспериментально обосновать возможность их применения в гастроэнтерологии для профилактики симптоматических гастродуоденальных язв, а также комплексного лечения язвенной болезни желудка.

Результаты исследования свидетельствуют о возможности эффективной профилактики стрессорного поражения СОЖ и НПВП-гастропатии с помощью лекарственных веществ, обладающих антигипоксантной и антиоксидантной активностью, что даёт основание рекомендовать изученные лекарственные средства для клинических испытаний в качестве эффективных гастропротекторов и при положительных данных расширить показания к их клиническому применению.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Антигипоксанты/антиоксиданты мексидол, гипоксен, бемитил и диос-мин в условиях экспериментальной гастропатии (стресс-индуцированной и НПВП-индуцированной) оказывают гастропротекторное действие. Эффект более выражен при курсовом профилактическом введении веществ. Наиболее выраженную гастропротекторную активность на обеих моделях гастропатии проявляет мексидол.

2. Гастропротекторное действие веществ проявляется улучшением мор-фогистологической картины слизистой оболочки желудка, нормализацией биохимических показателей крови и подтверждается методом импедансометрии.

3. Механизм гастропротекторного действия изученных веществ во многом определяется их антиоксидантной активностью. При стресс-индуцированной гастропатии защитное действие мексидола, гипоксена и диосмина связано также со стресспротекторной активностью.

Реализация результатов исследования

Полученные результаты используются в учебном процессе на кафедре фармакологии и кафедре клинической фармакологии Смоленской государственной медицинской академии (СГМА) при проведении лекций и практических занятий по следующим темам: «Лекарственные средства, влияющие на функции органов пищеварения», «Антиоксиданты и антигипоксанты», «Профилактика и лечение язвенной болезни желудка», а также в научных исследованиях, проводимых в центральной научно-исследовательской лаборатории и лаборатории кафедры фармакологии СГМА.

Апробация работы

Результаты и основные положения диссертации доложены и обсуждены на заседании кафедры фармакологии СГМА (2006, 2010), заседаниях проблемной комиссии по гастроэнтерологии и проблемной комиссии по внутренним болезням СГМА (2006, 2008,2010), на III Съезде фармакологов России (Санкт-Петербург, 2007), на конференции «Медицинская наука, молодежь и современность» (Смоленск, 2007), на V научно-практической конференции «Активные формы кислорода, оксид азота, антиоксиданты и здоровье человека» (Смоленск, 2007), на очно-заочной конференции «Взаимодействие медицинской науки и практики» (Новополоцк-Смоленск-Белгород, 2007), на симпозиуме «Свободнорадикапьная медицина и антиоксидантная терапия» (Волгоград, 2008), на XV, XVI и XVII конгрессах «Человек и лекарство» г (Москва, 2008, 2009, 2010), на 36, 37 и 38 конференциях молодых учёных (Смоленск, 2008, 2009, 2010), на Всероссийской научно-практической конференции «Здоровый образ жизни - основополагающий фактор укрепления здоровья, профилактики и лечения заболеваний» (Смоленск, 2009, 2010), на совместном заседании кафедр фармакологии с курсом фармации ФПК и ППС, общей и медицинской химии, клинической фармакологии, нормальной физиологии, патологической физиологии, анатомии человека, патологической анатомии, центральной научно-исследовательской лаборатории СГМА (2010).

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 23 научные работы, из них в журналах, рекомендуемых ВАК - 2, получены 2 патента на изобретение.

Объём и структура диссертации

Материалы диссертации изложены на 147 страницах машинописного текста. Работа включает введение, обзор литературы, материалы и методы исследования, 3 главы результатов собственных исследований, обсуждение, выводы, научно-практические рекомендации и список литературы. Диссертация документирована 32 таблицами и иллюстрирована 22 рисунками. Список литературы включает 210 научных источников, из них 149 отечественных и 61 работу иностранных авторов.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы исследования

Эксперименты выполнены на 256 белых лабораторных крысах линии Вистар обоего пола массой 180-220 г в осенне-зимний период. Все крысы были разделены на следующие группы: интактная (без введения лекарственных веществ и воздействия этиологических факторов язвообразования), 2 контрольные (с введением воды очищенной 1,5 мл и воздействием этиологических факторов язвообразования), опытные (с введением лекарственных веществ перед воздействием этиологических факторов язвообразования). Количество животных в каждой серии составляло не менее 10 особей.

В работе изучены вещества с антиоксидантной и антигипоксантной активностью, относящиеся к разным химическим группам. Из производных 3-оксипиридина изучено лекарственное вещество мексидол - 2-этил,-6-метил,-3-гидроксипиридина сукцинат (фирма «Фармасофт» г. Москва). Из полифеноль-ных производных 4-тиосульфокислоты — гипоксен - натриевая соль [поли-{-2,5-дигидрокси-фениленИ"4-тиосульфокислоты («Корпорация Олифен» г. Москва). Из производных аминотиола изучен бемитил (2-этилтиобензимидазол гидробромид), субстанция которого была предоставлена сотрудниками кафедры фармакологии Военно-медицинской академии им. С. М. Кирова*. В работе использовали также субстанцию растительного флавоноида диосмина, выделенную из травы вики изменчивой на кафедре органической химии Пятигорской государственной фармацевтической академии*.

Все лекарственные вещества вводили крысам внутрижелудочно через зонд в виде водного раствора: мексидол, гипоксен и бемитил в дозе 50мг/кг, диосмин в дозе 100 мг/кг 1 раз в сутки. Лекарственные вещества вводились в двух режимах. При стрессорном воздействии: 1) за 30 мин до стресса однократно; 2) профилактически в течение 7 дней до стресса. При НПВП-индуцированной гастропатии: 1) за 30 минут до кислоты ацетилсалициловой в течение 3 дней; 2) профилактически в течение 5 дней, затем 3 дня - параллельно с кислотой ацетилсалициловой. Контрольным животным внутрижелудочно вводили воду очищенную в тех же объемах и с той же кратностью.

В опытах использовали 2 экспериментальные модели язвенного повреждения слизистой оболочки желудка. Стресс-индуцированную гастропатию моделировали у крыс, подвешивая их с помощью зажимных инструментов за кожную дорсальную шейную складку (Аряев В. Л., Кресюн В. И., 1990). По истечении 24 часов животных декапитировали под лёгким эфирным наркозом. НПВП-индуцированную гастропатию моделировали путем внутрижелудочного введения крысам кислоты ацетилсалициловой (АСК) в виде водной суспензии в дозе 150 мг/кг 1 раз в день в течение 3 дней (Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. Под редакцией Р. У. Хабриева, 2005). В последний день крысы лишались пищи при свободном доступе к воде. Спустя 4 часа после последнего введения АСК, крыс декапитировали под лёгким эфирным наркозом.

После вскрытия желудка проводили морфометрическую оценку слизистой оболочки (количество и площадь язвенных дефектов, наличие признаков кровотечения). Площадь язвенных дефектов определяли, используя прозрачную миллиметровую пленку. Индекс Паулса (ИП), или индекс изъязвления, определяли по формуле: ИП = А х В /100, где А - среднее количество язв на 1 животное; В - количество животных с язвами в группе (в %). Противоязвенную активность (ПА) препаратов определяли как отношение ИП контрольной группы к опытной. Препарат считали активным, если ПА в терапевтической дозе равен 2 и более (Пулыкина К. А., Басченко Н. Ж., Макара Н. С., 2006).

' Выражаем благодарность заведующему кафедрой фармакологии Военно-медицинской академии им. С. M. Кирова профессору П. Д. Шабанову и заведующему кафедрой органической химии Пятигорской государственной фармацевтической академии профессору Э. Т. Оганесяну за предоставленные соединения.

Гистологические исследования гастробиоптатов выполнены на базе Смоленского областного института патологии при СГМА. Для приготовления гистологического препарата иссекали из стенки желудка отрезок органа, помещали в 10% раствор формалина и подвергали стандартной гистологической проводке.

После декапитации тела экспериментальных животных препарировали, извлекали оба надпочечника, селезенку и тимус. С использованием аналитических весов определяли вес органов в мг.

Оценку показателей свободнорадикалыюго окисления в супернатанте го-могената ткани желудка и сыворотке крови проводили методом хемилюминес-ценции на отечественном хемилюминометре CL-3603 фирмы «Диалог» с помощью программы <CLM>. В качестве оценочного показателя использовалась величина светосуммы, отражающая интенсивность образования свободных радикалов и участие в процессе свободнорадикального окисления антиоксидант-ных систем (Зборовская И. А., Банникова М. В., 1995; Магин Д. В. и др., 2000).

В сыворотке крови определяли активность ферментов: аспарагиновой (АсАТ) и аланиновой аминотрансфераз (АлАТ), щелочной фосфатазы (ЩФ), лактатдегидрогеназы (ЛДГ), а также общий белок. Эти исследования были выполнены на биохимическом анализаторе «Ultra» фирмы «Копе» (Финляндия) с использованием реактивов фирмы Olvex (Россия). Для определения активности лактатдегидрогеназы, аспарагиновой и аланиновой трансфераз использовался энзиматический кинетический метод. Активность щелочной фосфатазы определялась оптимизированным кинетическим методом с использованием АМП-буфера. Для определения общего белка использовали биуретовый метод (Лиф-шиц В. М., Сидельникова В. И., 1998).

Биоимпедансометрию проводили с помощью экспериментальной установки, состоящей из генератора переменного напряжения, двух регистрирующих устройств и электродов (Фёдоров Г. Н., Гумиров Р. 3., Смородинов А. В., Леонов С. Д., 2005). Импедансометрию слизистой оболочки желудка проводили под эфирным наркозом, для чего животным производили верхнесрединную ла-паротомию, измеряли импеданс слизистой оболочки малой и большой кривизны желудка. Импеданс каждой зоны замеряли трижды в разных точках (Zb Z2, Z3) на площади 5 мм2, затем вычисляли среднее значение.

Статистическую обработку цифровых данных проводили с помощью методов вариационной статистики на ПЭВМ с использованием пакета прикладных программ STATISTICA 6.0. Статистическую достоверность оценивали путём применения t-критерия Стьюдента для непарных выборок. Проверку статистических гипотез осуществляли на уровне зависимости равной 0,05.

Результаты исследования и их обсуждение

Острый иммобилизационно-болевой стресс и применение кислоты ацетилсалициловой в 100% случаев вызывали повреждение СОЖ животных, которое проявлялось появлением язв, эрозий и геморрагий. Морфологические изменения определялись не только визуально, но и были подтверждены гистологическим исследованием микропрепаратов стенки желудка (рис.1, 2). У контрольных животных также уменьшался импеданс тканей желудка.

Рис. 1. Слизистая оболочка желудка крыс при стрессорном поражении. Глубокая эрозия слизистой с кровоизлияниями и сохранением единичных фрагментов желез глубокого слоя. Крыса с?, вес 190 г. Увеличение * 100.

Рис. 2. Слизистая оболочка желудка крыс при НПВП-гастропатии. Острая язва с разрушением мышечной пластинки слизистой, реактивной воспалительной инфильтрацией под-слизистого слоя и прилежащих сосудов. Крыса вес 210г. Увеличение х 100.

Определение массы надпочечников, тимуса и селезёнки после воздействия стресса и кислоты ацетилсалициловой показало, что острый иммобилиза-ционно-болевой стресс инициирует гипертрофию надпочечников, инволюцию тимуса и селезёнки. В то же время применение АСК не влияет на вес внутренних органов.

Таблица 1

Влияние исследуемых веществ на развитие стрессорного повреждения СОЖ (М±ш)

Группа наблюдения п=10 Площадь язвенных дефектов, мм2 % к контролю Количество животных с язвенными дефектами, % Среднее количество язвенных дефектов на 1 крысу ИП ПА

Контроль 7,38±1,74 - 100 8.00±1,79 8.0 -

Диосмин 100 мг/кг однократно 5,83±0,54 Р1>0,05 79,00 100 6,17±0,89 Р1>0,05 62 1,3

Мексидол 50 мг/кг однократно 4,21 ±0,25 Р1<0,05 57,05 100 4.00±0,89 Р1<0,001 4,0 2,0

Гипоксен 50 мг/кг однократно 4,67±0,38 Р1<0,05 63,28 100 4,83±0,75 р,<0,05 4,8 1,7

Бемитил 50 мг/кг однократно 6,29±0,70 Р1>0,05 85,23 100 7,00±0,89 Р1>0,05 7,0 1,1

Диосмин 100 мг/кг 7 суток 0,83±0,20 Р1<0,001 11,25 100 1,83±0,75 Р1<0,001 1,8 4,4

Мексидол 50 мг/кг 7 суток 0,42±0,30 Р1<0,001 5,69 90 1,17±0,75 Р1<0,001 1,4 5,7

Гипоксен 50 мг/кг 7 суток 0,63±0,26 Р1<0,001 8,54 100 1,67±0,52 Р1<0,001 1,7 4,7

Бемитил 50 мг/кг 7 суток 2,58±0,41 Р1<0,001 34,96 100 2,50±0,55 Р1<0,001 2,5 3,2

Примечание, р) - достоверность по отношению к контрольной группе животных.

Обе модели гастропатии инициировали липопероксидацию и снижали активность антиокислительной системы. Это проявлялось значительным увеличением величина светосуммы как в супернатанте гомогената желудка, так и сыворотке крови экспериментальных животных.

Острое стрессорное воздействие вызывало достоверное повышение активности аспарагиновой аминотрансферазы и лактатдегидрогеназы в сыворотке крови экспериментальных животных. При АСК-индуцированной гастропатии увеличивалась активность АсАТ, АлАТ и ЛДГ. Повышение активности ферментов, вероятно, связано, в том числе, с нарушением функции печени крыс.

Эксперименты показали, что мексидол, гипоксен, бемитил и диосмин в разной степени выраженности защищают СОЖ от стрессорного повреждения и воздействия НПВП. Их гастропротекторное действие проявляется уменьшением количества эрозий, язв и геморрагий, общей площади язвенных дефектов (табл. 1 и 2). Причём более эффективно курсовое профилактическое и лечебно-профилактическое применение лекарственных веществ, чем их однократное введение непосредственно перед воздействием стресса или параллельно с кислотой ацетилсалициловой.

Таблица 2

Влияние исследуемых веществ на развитие АСК-гастропатии (М±т)

Группа наблюдения п=10 Плошадь язвенных дефектов, мм" % к контролю Количество животных с язвенными дефектами, % Среднее количество язвенных дефектов на 1 крысу ип ПА

Контроль 11,71±2,17 - 100 10,33±0,82 10,3 -

Диосмин 100мг/кг 3 суток 6,46±0,68 Р1<0,001 55,17 100 3,67±1,03 Р1<0,001 3,7 2,8

Мексидол 50мг/кг 3 суток 1,04±0,37 Р1<0,001 8,88 100 1,17±0,41 Р1<0,001 1,2 8,6

Гипоксен 50мг/кг 3 суток 4,42±1,16 Р1<0,001 37,74 100 2,17±1,17 Р1 <0,001 2,2 4,7

Бемитил 50мг/кг 3 суток 6,№0,70 Р!<0,001 52,69 100 3,17±1,17 р,<0,001 3,2 3,2

Диосмин 100мг/кг 8 суток 3,17±0,68 Р1 <0,001 27,07 100 1,67±0,52 Р1<0,001 1,7 6,0

Мексидол 50мг/кг 8 суток 0,54±0,29 р,<0,001 4,61 90 0,83±0,41 Р1<0.001 0,7 14,7

Гипоксен 50мг/кг 8 суток 1,58±0,38 р,<0,001 13,49 100 1,17±0,41 Р1<0,001 1,2 8,6

Бемитил 50мг/кг 8 суток 2,92±1,50 Р!<0,001 24,93 90 1,00±0,63 Р1 <0,001 0,8 12,9

При курсовом применении веществ до стрессорного воздействия, площадь язвенных дефектов существенно уменьшалась по сравнению с животными контрольной группы. Наиболее выраженное уменьшение площади деструкции слизистой оболочки желудка (в 17 раз) отмечалось у животных, получавших мексидол. В одном случае из десяти язвенного повреждения СОЖ вообще не обнаружено (10%). Также значительно уменьшали площадь дефектов гипоксен и диосмин (в 12 и 9 раз соответственно). При применении лечебно-профилактической схемы на фоне НПВП-гастропатии в группах, где животные

получали мексидол или бемитил, в 10% случаев язвенного повреждения СОЖ макроскопически выявлено не было, уменьшалась общая площадь деструкции слизистой оболочки желудка - в 22 и 4 раза соответственно по сравнению с контрольной группой.

Сравнительное гистологическое изучение срезов стенки желудка крыс опытных групп показало, что под воздействием курсового профилактического введения лекарственных веществ имеет место меньшая выраженность воспалительной реакции и более выраженная регенерация эпителия, чем в результате однократного введения веществ (рис. 3, 4).

Рис. 3. Слизистая оболочка желудка крыс при лечебном введении диосдшна при стрессорном воздействии. Десквамированный покровно-ямочный эпителий. Крыса вес 210 г. Увеличение х400.

При импедансометрии выявлено увеличение общего сопротивления СОЖ. Это объясняется тем, что исследуемые вещества предупреждают нарушения кровообращения в СОЖ, уменьшают полнокровие сосудов, стазы, тромбозы, отёк и кровоизлияния. И при стрессорном воздействии, и при НГЕВП-гастропатии наиболее значительно увеличивал импеданс СОЖ, как большой, так и малой кривизны, мексидол (более 60% по сравнению с контролем). Эти результаты хорошо согласуются с морфометрическими данными и гистологическим исследованием.

При стрессорном воздействии мы изучили влияние веществ на массу надпочечников, тимуса и селезёнки в условиях стресса при разных режимах введения. При применении лекарственных веществ однократно наиболее существенно предупреждали гипертрофию надпочечников и инволюцию тимуса и селезёнки мексидол и диосмин. Наиболее существенно уменьшал массу надпочечников экспериментальных животных мексидол - на 17% по сравнению с

контрольными животными. При применении гипоксена и диосмина, масса надпочечников уменьшалась на 9%. При применении мексидола масса тимуса в среднем достоверно увеличивалась на 46%, при введении диосмина - на 39% по отношению к контролю. При изучении массы селезёнки экспериментальных животных, получавших вещества однократно перед стрессорным воздействием, выявлено: мексидол и диосмин достоверно предупреждают её инволюцию - на 48 и 46% по отношению к контролю.

1 лч.. "т. ^шш 1 ил ииилитда ям__Д1\а жш>и(пыл ои^п^^пл ги^ху па фоНС Ле-

чебно-профилактического применения мексидола. Крыса с?, вес 200 г. Увеличение х 100.

При курсовом профилактическом введении наиболее существенно преду-

преждали гипертрофию надпочечников и инволюцию тимуса и селезёнки мексидол и гипоксен - масса надпочечников уменьшалась на 45 и 37%, масса ти-I муса увеличивалась на 73 и 70%, масса селезёнки - на 86 и 66% соответственно по сравнению с контролем.

Таким образом, наиболее выраженное стресспротекторное действие оказывал мексидол в дозе 50 мг/кг при курсовом введении, достоверно снижая степень инволюции тимуса, селезёнки и гипертрофии надпочечников.

Применение лекарственных веществ достоверно уменьшало активность ПОЛ, как в ткани желудка, так и в сыворотке крови, и активность аминотранс-фераз и ЛДГ в сыворотке крови опытных животных. Так, при остром стрессор-ном воздействии все исследуемые лекарственные вещества в обоих режимах введения достоверно уменьшали светосумму хемилюминесцентного свечения, как в супернатанте гомогената желудка, так и в сыворотке крови животных. В наибольшей степени уменьшали светосумму в супернатанте гомогената желудка животных мексидол, гипоксен и диосмин - в 2,9, 2,5 и 2,3 раза при однократном введении и в 3,5, 3,4 и 2,9 раз соответственно при курсовом по сравне-

нию с контрольной группой животных. Те же вещества более существенно уменьшали светосумму в сыворотке крови: мексидол при однократном введении - в 3,9 раза, при курсовом - в 4,5 по сравнению с аналогичными показателями у контрольных животных; гипоксен при однократном введении - в 3,8 раза, при курсовом - в 4,5 раза; диосмин при однократном введении - в 2,9 раза, при курсовом - в 4,2 раза (табл. 3).

Таблица 3

Влияние исследуемых веществ на активность ПОЛ при иммобилизационно-болевом стрессе (М±т)

Группа наблюдения п=10 Светосумма свечения, отн. ед. гомогенат желудка % к интакту Светосумма свечения, отн. ед. сыворотка крови % к интакту

Интактные животные 42 332,50±3 609,24 - 47 561,83±4 619,37 -

Контрольные животные 212 217,83±59 350,45 р<0,001 501,31 343 384,00±37 019,56 р<0,001 721,97

Диосмин 100 мг/кг однократно 91 322,00±5 102,69 р<0,001 р,<0,001 215,72 И 6 433,00± 16 183,03 р<0,001 р,<0,001 244,80

Мексидол 50 мг/кг однократно 71 047,33±8 305,14 р<0,001 Pi<0,001 167,83 89 025,83±8 221,06 р<0,001 р,<0,001 187,18

Гипоксен 50 мг/кг однократно 84 139,33±7 756,68 р<0,001 Pi<0,001 198,76 90 539,00±9 731,48 р<0,001 р,<0,001 190,36

Бемитил 50 мг/кг однократно 136 524,67±19 438,63 р<0,001 pi<0,05 322,50 209 858,00±77 503,51 р<0,001 Pi<0,05 441,23

Диосмин 100 мг/кг 7 суток 74 118,67±8 618,58 р<0,001 pi<0,001 175,09 81 683,50±6 878,64 р<0,001 р,<0,001 171,74

Мексидол 50 мг/кг 7 суток 60 803,00±5 894,87 р<0,001 Pi<0,001 143,63 75 681,17±7 474,99 р<0,001 Pi <0,001 159,12

Гипоксен 50 мг/кг 7 суток 63 045,00±9 054,57 р<0,001 Pi<0,001 148,93 76 285,33±9 630,44 р<0,001 pi<0,001 160,39

Бемитил 50 мг/кг 7 суток 101 322,00±16 910,63 р<0,001 р,<0,01 239,35 134 111,50±21 508,93 р<0,001 р,<0,001 281,97

Примечание, р - достоверность по отношению к интактной группе животных.

При однократном применении до стрессорного воздействия наиболее значительно снижал активность АсАТ и ЛДГ мексидол - на 29 и 23% соответственно. При профилактическом применении лекарственных веществ, они более существенно уменьшали активность АсАТ и ЛДГ в сыворотке крови животных. Мексидол уменьшал активность АсАТ на 31%, ЛДГ на 25%. Гипоксен при этом режиме введения уменьшал активность АсАТ и ЛДГ на 20 и 24% по

сравнению с аналогичными показателями у контрольных животных. Диосмин -на 26 и на 16% соответственно (рис. 5).

1200

юоо

800

боо

адо

978,17

825,67

334,5

8 1

-737,83--------739,5"

1 Р

а актиеность АсАТ 2 активность ЛДГ

200 153,67-

180.17

193.57

_Ш.ЗЗ_

II

1

123456789 10 11 иитакт контроль диосмин мексидол гипоксен бемитил

Рис. 5. Активность АсАТ и ЛДГ в сыворотке крови животных при яммобилизационно-болевом стрессе при курсовом применении исследуемых веществ

При НПВП-гастропатии по влиянию на активность ПОЛ все вещества были приблизительно одинаково эффективны и при лечебном, и при. лечебно-профилактическом режиме введения - достоверно уменьшали светосумму свечения супернатанта гомогената желудка и сыворотки крови по сравнению с контрольной группой животных. Это можно объяснить тем, что при лечебном режиме введения животные опытных групп получали исследуемое лекарственное средство в течение 3 суток. За этот период времени вещества, вероятно, могли проявить свои антиоксидантные свойства в той же мере, что и при лечебно-профилактическом режиме введения. Вместе с тем, при лечебной схеме введения более эффективными были мексидол и бемитил - уменьшали площадь под кривой хемилюминесценции супернатанта гомогената желудка на 29 и 23%, при лечебно-профилактическом режиме введения бемитил уменьшал плошадь светосуммы свечения супернатанта гомогената желудка крыс на 21%, мексидол, диосмин и гипоксен - на 17% в сравнении с контролем. При лечебном режиме введения бемитил и мексидол уменьшали светосумму свечения сыворотки крови более значительно - на 56 и 54%, чем диосмин, который уменьшал светосумму свечения на 41%. При лечебно-профилактическом применении мексидола светосумма уменьшалась также значительно - на 59%, ди-осмина и гипоксена - на 40 и 35% соответственно в сравнении с аналогичными данными у контрольных животных (табл. 4).

Таблица 4

Влияние исследуемых веществ на активность ПОЛ при АСК-гастрогтатии (М±гп)

Группа Светосумма свечения, отн.ед. гомогенат желудка %кин-такту Светосумма свечения, отн. ед. сыворотка крови % к ин-такгу

Интактные животные 42 332,50±3 609,24 - 47 561,83±4 619,37 -

Контрольные животные 70 070,50±9 013,05 р<0,001 165,52 129 919,00±12 715,74 р<0,001 273,16

Диосмин 100мг/кг 3 суток 57 847,00±3 039,47 р<0,001 р,<0,05 136,65 76 202,50±8 808,07 р<0,001 pi<0,001 160,22

Мексидол 50мг/кг 3 суток 49 516,00±18 666,11 р>0,05 р,<0,05 116,97 59 774,17±9 241,27 р<0,05 р,<0,001 125,44

Гипоксен 50мг/кг 3 суток 60 913,00±2 899,29 р<0,001 Pi<0,05 143,89 88 273,50±10 454,46 р<0,001 pi<0,001 185,25

Бемитил 50мг/кг 3 суток 53 597,00±6 137,99 р<0,05 р(<0.05 126,61 56 516,60±8 782,75 р=0,05 Pi<0,001 118,60

Диосмин 100мг/кг 8 суток 58 242,50±5 488,29 р<0,001 pi<0,05 137,58 78 125,50±13 397,19 р<0,001 pi <0,001 163,95

Мексидол 50мг/кг 8 суток 58 116,50±7 893,10 р<0,01 Pi<0,05 137,28 53 470,17±10 119,68 р>0,05 р,<0,001 112,21

Гипоксен 50мг/кг 8 суток 58 860,33±7 022,72 р<0,001 Pi<0,05 139,04 84 035,00±9 823,11 р<0,001 pi<0,001 176,35

Бемитил 50мг/кг 8 суток 55 604,50±9 794,79 р<0,05 Pi<0,05 131,35 47 689,40±2 803,14 р>0,05 Pi<0,001 100,07

Применение лекарственных веществ параллельно с- кислотой ацетилсалициловой приводило к снижению активности ферментов (АлАТ, АсАТ и ЛДГ) В сыворотке крови животных. Более эффективными по этому показателю были мексидол, бемитил и диосмин при лечебно-профилактической схеме введения. Мексидол уменьшал концентрацию АлАТ на 24%, АсАТ на 27%, ЛДГ на 16%. Диосмин уменьшал концентрацию АлАТ на 20%, АсАТ на 27%, ЛДГ - на 16% по сравнению с аналогичными показателями у контрольных животных. Бемитил —на 24, 25 и 14% соответственно (рис. 6).

Таким образом, наиболее значительно и при остром стрессорном воздействии, и при НПВП-гастропатии предупреждает образование продуктов ПОЛ, как в ткани желудка, так и в сыворотке крови, уменьшает активность ами-нотрансфераз и ЛДГ в сыворотке крови опытных крыс мексидол в дозе 50 мг/кг при курсовом введении.

1200

1000

300

«00

200

1062,33

833,83

890,33 889,17

922 915,33

яактивностАлАТ ¡3 активность АсАТ ЕЯ активность ДЦГ

253.1

183а

! 35

191,|

108,3® юг.;

18815

119-3| 10зз1

123456789 10 11 интакт контроль диосмин мексидол гипоксен бекдатил

Рис. 6. Активность АлАТ, АсАТ и ЛДГ в сыворотке крови животных при АСК-гастропатии при лечебно-профилактическом применений исследуемых вешеств

Проведённый анализ собственных экспериментальных данных с учётом морфометрических, гистологических, физических и биохимических показателей свидетельствует о защитном действии антигипоксантов и антиоксидантов разного химического строения при остром симптоматическом повреждении СОЖ. Установленные гастропротекторные свойства изученных веществ при стрессорном и НПВП-индуцированном повреждении СОЖ, вероятно, обусловлены не только их антиоксидантным и антигипоксантньш, но также противовоспалительным и стресспротекторным действием.

У мексидола выявлены значительные гастропротекторные свойства на обеих моделях экспериментального ульцерогенеза. Высокая антиоксидантная активность мексидола, безусловно, создаёт благоприятный фон для проявления указанного эффекта препарата (влияние как на ферментативные, так и на неферментативные процессы ПОЛ). Гастропротекторный эффект мексидола при стресс-индуцированной гастропатии можно объяснить не только выраженной антигипоксантной и антиоксидантной активностью препарата, но и его стресс-протекторным действием.

Гипоксен при курсовом введении проявлял выраженную гастропротек-торную и стресспротекторяую активность при остром иммобилизационно-болевом стрессе. Гипоксен сочетает в себе свойства антигипоксанта и антиок-сиданта за счет различных функциональных групп. Препарат нормализует процессы дыхания в тканях с наиболее высоким уровнем активности, к которым относится слизистая оболочка желудка, вследствие чего увеличивается эффективность использования кислорода (Оковитый С. В. и др., 2005).

Диосмин при курсовом введении также проявлял гастропротекторную и стресспротекторную активность при остром иммобилизационно-болевом стрессе. Растительный флавоноид диосмин стабилизирует мембраны клеток, т. к. легко окисляясь, способствует восстановлению других веществ, либо предохраняет их от окисления (Огс^её Ь. О., 2003; Шко В. ег а1., 2004; Кравченко Л. В. и соавт., 2005; Ратькин А. В. и соавт., 2005), тем самым защищая СОЖ и другие внутренние органы от стрессорного воздействия.

Менее эффективными гипоксен и диосмин были при НПВП-гастропатии, что может быть связано с разными фармакодинамическими и фармакокинетя-ческими причинами. Это требует дальнейшего изучения, уточнения дозы, кратности и длительности введения препаратов.

Бемитил, особенно при лечебно-профилактическом режиме введения, был более эффективным при НПВП-гастропатии. Учитывая патогенез АСК-гастропатии (эрозивно-язвенное повреждение является фактически ишемиче-ским инфарктом СОЖ), важным эффектом бемитила в данном случае является его благоприятное влияние на митохондриальное окисление при экстремальных повреждающих воздействиях на клетку, в частности при ишемии и гипоксии (Зарубина И. В. и др., 2006). Вероятно, это определило высокую эффективность препарата при АСК-индуцированном ульцерогенезе.

Выводы

1. Мексидол, гипоксен, бемитил в дозах 50 мг/кг и диосмин в дозе 100 мг/кг защищают слизистую оболочку желудка от стрессорного и НПВГ1-индуцированного повреждения, что выражается в уменьшении количества эрозий, язв и геморрагий, общей площади поражения и подтверждается гистологически.

2. Гастропротекторный эффект изученных веществ лучше проявляется при курсовом профилактическом (7 дней) и лечебно-профилактическом (8 дней) их применении, чем при однократном.

3. Мексидол, и в меньшей степени гипоксен и диосмин при курсовом применении предупреждают инволюцию тимуса, селезёнки и гипертрофию надпочечников, что свидетельствует об их стресспротекторном действии.

4. Мексидол, диосмин, гипоксен и бемитил снижают активность процессов ПОЛ в ткани желудка и в сыворотке крови, инициируемых стрессом и применением кислоты ацетилсалициловой. Антиоксидантная активность имеет существенное значение в механизме гастропротекторного эффекта препаратов.

5. Стресс-индуцированная гастропатия сопровождается повышением активности АсАт и ЛДГ, АСК-индуцировакная - АсАт, АлАТ и ЛДГ в сыворотке крови. Изученные вещества нивелируют изменения активности ферментов.

6. Среди изученных веществ наиболее выраженное гастропротекторное действие по влиянию на морфологические и биохимические показатели при стрессорном поражении СОЖ оказывают мексидол, гипоксен и диосмин, при АСК-индуцированной гастропатии - мексидол и бемитил.

Научно-практические рекомендации

1. Мексидол и гипоксен рекомендуются для клинических испытаний в качестве средств профилактики стресс-индуцированной, а мексидол и бемитил -НПВП-индуцированной гастропатий.

2. Рекомендуется дальнейшее экспериментальное изучение соединений ряда аминотиолов и растительных биофлавоноидов, в том числе диосмина, как перспективных антигипоксантов/антиоксидантов с протекторными свойствами при симптоматических гастродуоденальных язвах.

Изобретения

1. Способ диагностики язвенной болезни желудка. [Текст]: пат. 2325119 Рос. Федерация: МПК А61В 10/00 Леонов С. Д., Фёдоров Г. Н., Крюкова Н. О. заявитель и патентообладатель ГОУ ВПО Смоленская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию - № 2007108122; заявл. 05.03.2007; опубл. 27.05.2008. Бюл. № 15.-3 с.

2. Способ выявления НПВП-гастропатии в эксперименте. [Текст]: пат. 2332162 Рос. Федерация: МПК А61В 5/05 Леонов С. Д., Фёдоров Г. Н., Крюкова Н. О. заявитель и патентообладатель ГОУ ВПО Смоленская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию - № 2007111414; заявл. 28.03.2007; опубл. 27.08.2008. Бюл. № 24. - 3 с.

Список научных работ по теме диссертации

1. Новиков В. Е. Гастропатия, индуцированная нестероидными противовоспалительными препаратами, и её профилактика / В. £. Новиков, Н. О. Крюкова, А. В. Крикова // Экспериментальная и клиническая фармакология. - 2008. - Т. 71. - № 5. - С. 69-72.

2. Новиков В. Е. Гастропротекторные свойства мексидола и гипоксена / В. Е. Новиков, Н. О. Крюкова, А. С. Новиков // Экспериментальная и клиническая фармакология. - 2010. - Т. 73. - № 5. - С. 15-18.

3. Крикова А. В. Фармакологическая активность синтетических антигипоксан-тов и антиоксидантов / А. В. Крикова, В. Е. Новиков, С. О. Лосенкова, Я. О. Крюкова // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: Сборник научных трудов. - Пятигорск. - 2008. - Выпуск 63.-С. 442-443.

4. Крюкова Н. О. Гастропротекторные свойства антишпоксантов при НПВС-индуцированной гастропатии / Я. О. Крюкова, В. Е. Новиков // Вестник Смоленской медицинской академии. - 2007. - № 3. - С. 26-28.

5. Крюкова Н. О. Изучение гастропротекторных свойств антигипоксантов при НПВС-индуцированной гастропатии у крыс / Н. О. Крюкова, А. В. Крикова // Медицинская наука, молодёжь и современность: Материалы конференции. - Смоленск. - 2007. - С. 47-48.

6. Крюкова Н. О. Оценка гастропротекторных свойств антигипоксантов с помощью биоимпедансометрии / Я. О.Крюкова, В. Е. Новиков, Г. Н. Фёдоров,

С. Д. Леонов // Активные формы кислорода, оксид азота, антиоксиданты и здоровье человека: Материалы пятой национальной научно-практической конференции с международным участием. - Смоленск. - 2007. - С. 233-234.

7. Крюкова Н. О. Влияние растительных и синтетических антиоксидантов на иммобилизационно-болевой стресс крыс / Я. О. Крюкова, А. В. Крикова // 60-я научная студенческая конференция и 36-я конференция молодых учёных СГМА: Сборник материалов. - Смоленск. - 2008. - С. 120-121.

8. Крюкова Н. О. Гастропротекторное действие антиоксидантов при остром язвенном поражении слизистой оболочки желудка в эксперименте / Н. О. Крюкова // Конкурс молодых учёных Администрации Смоленской области: Сборник материалов. — Смоленск. - 2008. - С. 155-158.

9. Крюкова Н. О. Изучение гастропротекторных свойств антигипоксантов при стресс-индуцированном ульцерогенезе / Н. О. Крюкова, В. Е. Новиков, А. В. Крикова, С. Д. Леонов // XV Российский национальный конгресс «Человек и лекарство»: Сборник материалов конгресса (тезисы докладов). - Москва. - 2008. - С. 647-648.

Ю.Крюкова Н. О. Эффективность мексидола и диосмина при иммобилизацион-но-болевом стрессе в эксперименте / Я. О. Крюкова, А. В. Крикова, С. Д. Леонов // Бюллетень Волгоградского научного центра РАМН и Администрации Волгоградской области: Материалы научно-практического симпозиума с международным участием. - Волгоград. - 2008. - Прил. 1. - С. 15.

М.Крюкова Н. О. Морфологические изменения слизистой оболочки желудка при воздействии кислоты ацетилсалициловой и коррекции антигипоксанта-ми / Н. О. Крюкова, В. Е. Новиков, А. В. Крикова, А. С. Новиков // XVI Российский национальный конгресс «Человек и лекарство»: Сборник материалов конгресса (тезисы докладов). - Москва. - 2009. - С. 541.

12.Крюкова Н. О. Применение антиоксидантов и антигипоксантов в качестве гастропротекторов / Н. О. Крюкова И Всероссийская научно-практическая конференция «Здоровый образ жизни - основополагающий фактор укрепления здоровья, профилактики и лечения заболеваний»: Материалы конференции. - Смоленск. - 2009. - 94-95.

13.Крюкова Н. О. Стресс-индуцированное поражение желудка крыс и его коррекция диосмином / Я О. Крюкова, А. В. Крикова, В. Е. Новиков // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: Сборник научных трудов. - Пятигорск. - 2009. - Выпуск 64. - С. 457-458.

14.Крюкова Н. О. Экспериментальное изучение гастропротекторных свойств мексидола и диосмина / Я О. Крюкова, А. С. Новиков // Вестник Смоленской медицинской академии: Материалы 37-й конференции молодых учёных и 61-й студенческой научной конференции СГМА (с международным участием). - Смоленск. - 2009. - № 2. - С. 42.

15.Крюкова Н. О. Гастропротекторные свойства антигипоксантов / Я О. Крюкова II Всероссийская научно-практическая конференция «Проблемы здоровья и методы его сохранения»: Материалы конференции. - Смоленск. -2010.-80-81.

16.Крюкова Н. О. Эффективность антиоксидантов/антигипоксантов при иммо-билизадионно-болевом стрессе / Н. О. Крюкова, В. Е. Новиков // XVII Российский национальный конгресс «Человек и лекарство»: Сборник материалов конгресса (тезисы докладов). - Москва. - 2010. — С. 652.

17.Крюкова Н. О. Эффективность гипоксена и бемитила при стрессе у крыс / Н. О. Крюкова II Вестник Смоленской медицинской академии: Материалы 38-й конференции молодых учёных и 62-й студенческой научной конференции СГМА (с международным участием). - Смоленск. - 2010. - Спецвыпуск. -С. 53-55.

18.Новиков В. Е. Изучение гастропротекторных свойств гипоксена при НПВС-индуцированных гастропатиях / В. Е. Новиков, Н. О. Крюкова, С. Д. Леонов // Психофармакология и биологическая наркология. - Фармакология практическому здравоохранению: Материалы III съезда фармакологов России. - Санкт-Петербург. - 2007. - Том 7. - Ч. 2. - С. 1878.

19.Новиков В. Е. Изучение гастропротекторных свойств синтетических антиги-поксантов / В. Е. Новиков, Н. О. Крюкова, А. В. Крикова, С. Д. Леонов // Взаимодействие медицинской науки и практики: Материалы очно-заочной конференции. - Новополоцк-Смоленск-Белгород. - 2007. - С. 29.

20.Новиков В. Е. Лекарственная НПВП-гастропатия: патогенез, факторы риска, профилактика / В. Е. Новиков, Н. О. Крюкова, А. В. Крикова // Медицинские вести регионов. - 2008. -№ 3. - С. 28-32.

21.Новиков В. Е. НПВП-индуцированные гастропатии и их профилактика / В. Е. Новиков, Н. О. Крюкова, А. В. Крикова // Обзоры по клинической фармакологии и терапии. - 2008. - № 1. - С. 26-30.

22.Новиков В. Е. Гастропротекторные свойства гипоксена / В. Е. Новиков, Н. О. Крюкова И Всероссийская научно-практическая конференция «Здоровый образ жизни - основополагающий фактор укрепления здоровья, профилактики и лечения заболеваний»: Материалы конференции. - Смоленск. — 2009.-120-121.

23 .Новиков В. Е. Эффективность мексидола и бемитила при стрессе у крыс / В. Е. Новиков, Н. О. Крюкова И Экспериментальная и клиническая фармакология: Материалы 5-ой Международной конференции «Биологические основы индивидуальной чувствительности к психотропным средствам». - Москва. - 2010. - № 5. - Приложение. - С. 69.

Формат 60x84/16. Тираж 100. Печ. листов 1. Заказ № 6387/1. Дата сдачи в печать 27.09.2010 г.

Отпечатано в ООО «Принт-Экспресс», г. Смоленск, проспект Гагарина, 21. Тел.: (4812) 32-80-70

Актуальность проблемы. Симптоматические язвы желудка и двенадцатиперстной кишки (симптоматические гастродуоденальные язвы) — группа патологических состояний, объединенная общим признаком: образованием язвенного дефекта слизистой оболочки желудка и двенадцатиперстной кишки в ответ на воздействие ульцерогенных факторов. Симптоматические гастродуоденальные язвы возникают в стрессовых ситуациях, на фоне других заболеваний или в результате приёма лекарств, алкоголя, токсических веществ, у больных пожилого возраста, при-травмах, инфекциях и т. д. В последние годы с развитием гастроэнтерологии научились четко разграничивать язвенную болезнь как самостоятельное заболевание и симптоматические гастродуоденальные язвы.

При стрессовых ситуациях (распространённые ожоги и травмы, обширные операции) эрозивно-язвенные поражения слизистой- оболочки желудка (СОЖ) и двенадцатиперстной кишки развиваются у 65-80% больных [20]. К сожалению, вопрос о диагностике и лечении острых «стрессовых-язв», в том числе и осложнённых кровотечениями, изучен недостаточно, что в отдельных случаям ведёт к тяжёлым осложнениям, а иногда и- летальным исходам [2, 64, 67]. Это объясняется тем, что до сих пор нет обоснованных стандартных подходов к. их. профилактике и. лечению [16, 114, 126]. Причём, необходимо отметить,'что таким стрессорным повреждениям подвержены все слои населения, разного, возраста, поэтому проблема своевременного выявления, прогнозирования течения и лечения подобных осложнений является в настоящее время одной из актуальных и социально значимых для развития общества.

Не менее актуальной проблемой во всём мире является развитие гастропатий при приёме нестероидных противовоспалительных препаратов (НПВП). Несмотря на введение в клиническую практику новых лекарственных средств этой группы, селективно ингибирующих циклооксигеназу-2, вопрос остаётся открытым [15, 77].

Для терапии гастропатий, индуцированных НПВП, применяют две группы лекарственных средств, эффективность которых подтверждена большим числом исследований и клинической практикой, - ингибиторы протонной помпы и синтетические аналоги простагландинов [145]. Однако терапевтическое действие ингибиторов протонной помпы зависит от инфицированности слизистой оболочки Н. pylori: препараты более эффективны при наличии этого микроорганизма [78]. Высокая стоимость, нежелательные эффекты и неудобная схема применения ограничили широкое использование синтетических аналогов простагландинов [142]. Поэтому поиск и разработка новых способов профилактики НПВП-гастропатии является актуальной задачей.

Известен механизм развития острых симптоматических язв в результате активации процессов перекисного окисления липидов. Образующиеся в результате реакционные продукты свободнорадикального окисления принимают участие в, поражении СОЖ. В ряде работ [39, 73, 149] продемонстрировано положительное влияние препаратов с антиоксидантным/антигипоксантным типом действия на процессы регенерации и эпителизации острых язв и эрозий.

Сегодня в клинической практике применяется несколько лекарственных препаратов антиоксидантов, синтезирован ряд новых оригинальных соединений с антигипоксантными и антиоксидантными свойствами. Их изучение на экспериментальных моделях ульцерогенеза позволит расширить знания в области патогенеза, а также профилактики и фармакотерапии симптоматических язвенных поражений желудочно-кишечного тракта.

Всё выше изложенное явилось предпосылкой к проведению настоящего исследования. Работа выполнена по плану научно-исследовательской работы Смоленской государственной медицинской академии. Тема исследования утверждена на заседании Учёного совета Смоленской государственной медицинской академии (протокол №5 от 23.05.06), номер государственной регистрации 01200608916.

Цель работы. Поиск эффективных гастропротекторов среди антигипоксантов различного химического строения и их сравнительное изучение.

Задачи исследования.

Для достижения поставленной цели были сформулированы следующие задачи:

1. Изучить влияние мексидола, гипоксена, бемитила и диосмина на морфогистологическую картину слизистой оболочки желудка в условиях стресс-индуцированного и НПВП-индуцированного ульцерогенеза.

2. Оценить гастропротекторную эффективность препаратов на экспериментальных моделях ульцерогенеза при однократном и курсовом лечебно-профилактическом применении.

3. Исследовать влияние изучаемых лекарственных веществ на массу надпочечников, тимуса и селезёнки экспериментальных животных в условиях иммобилизационного стресса и НПВП-гастропатии.

4. Изучить активность перекисного окисления липидов в ткани желудка и V сыворотке крови при экспериментальном стресс-индуцированном и НПВП-индуцированном ульцерогенезе и его коррекции лекарственными веществами.

5. Изучить биохимические показатели сыворотки крови животных (аланиновую и аспарагиновую аминотрансферазы, лактатдегидрогеназу, щелочную фосфатазу и общий белок) в условиях стресс-индуцированного и НПВП-индуцированного ульцерогенеза и влияния на них исследуемых веществ.

6. Провести сравнительную оценку гастропротекторной активности изученных веществ по влиянию на морфологические и биохимические показатели в условиях стресс-индуцироваиной гастропатии и гастропатии, индуцированной кислотой ацетилсалициловой.

Научная новизна исследования.

Впервые проведено сравнительное изучение гастропротекторных свойств отечественных лекарственных препаратов мексидола, гипоксена, бемитила и диосмина на стрессовой модели ульцерогенеза и при НПВП-гастропатии.

Установлено, что перечисленные антигипоксанты/антиоксиданты оказывают гастропротекторное действие, которое более выражено при курсовом лечебно-профилактическом применении препаратов. Выраженное защитное действие изученных веществ на слизистую оболочку желудка при экспериментальном ульцерогенезе сочетается с высокой антиоксидантной активностью. Показано, что изученные лекарственные вещества, особенно мексидол, в условиях, иммобилизационного стресса проявляют достоверные стресспротекторные свойства.

Впервые доказана возможность применения биоимпедансометрии^ СОЖ для оценки степени морфофункциональных изменений в слизистой желудка и эффективности их коррекции фармакологическими веществами.

Научно-практическая значимость работы.

Получены новые научные сведения по фармакодинамике мексидола, гипоксена, бемитила и диосмина, позволяющие обосновать возможность их применения в гастроэнтерологии для профилактики симптоматических гастродуоденальных язв, а также комплексного лечения язвенной болезни желудка.

Результаты работы свидетельствуют о возможности эффективной профилактики стрессорного поражения СОЖ и НПВП-гастропатии с помощью лекарственных веществ, обладающих антигипоксантной и антиоксидантной активностью. Эти результаты- дают основание рекомендовать изученные лекарственные средства для клинических испытаний в качестве новых гастропротекторов и при положительных результатах расширить показания к их клиническому применению.

Внедрение результатов исследования.

Результаты работы используются в учебном процессе на кафедре фармакологии и кафедре клинической фармакологии Смоленской государственной медицинской академии при проведении лекций и практических занятий по следующим темам: «Лекарственные средства, влияющие на функции органов пищеварения», «Антиоксиданты и антигипоксанты», «Профилактика и лечение язвенной болезни желудка», а также в научных исследованиях, проводимых в центральной научно-исследовательской лаборатории и лаборатории кафедры фармакологии Смоленской государственной медицинской академии.

Апробация работы.

Результаты и основные положения диссертации доложены и обсуждены на заседании кафедры фармакологии Смоленской государственной медицинской академии (2006, 2010), заседаниях проблемной5 комиссии* по гастроэнтерологии и. проблемной комиссии по внутренним' болезням Смоленской государственной медицинской академии (2006, 2008, 2010), на III Съезде фармакологов России (Санкт-Петербург, 2007), на конференции «Медицинская наука, молодёжь и современность» (Смоленск, 2007), на V научно-практической конференции «Активные формы кислорода, оксид азота, антиоксиданты и здоровье человека» (Смоленск, 2007), на очно-заочной конференции «Взаимодействие медицинской науки и практики» (Новополоцк-Смоленск-Белгород, 2007), на симпозиуме «Свободнорадикальная медицина и антиоксидантная терапия» (Волгоград, 2008), на XV, XVI и XVII конгрессах «Человек и лекарство» (Москва, 2008, 2009, 2010), на 36, 37 и 38 конференциях молодых учёных (Смоленск, 2008, 2009, 2010), на Всероссийской' научно-практической конференции «Здоровый образ жизни - основополагающий фактор укрепления здоровья, профилактики и лечения заболеваний» (Смоленск, 2009, 2010).

По материалам диссертации опубликовано 23 научные работы, из них в журналах, рекомендуемых высшей аттестационной комиссией, — 2, получены 2 патента на изобретение.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Антигипоксанты/антиоксиданты мексидол, гипоксен, бемитил и диосмин в условиях экспериментальной гастропатии (стресс-индуцированной и НПВП-индуцированной) оказывают гастропротекторное действие. Эффект более выражен при курсовом профилактическом введении веществ. Наиболее выраженную гастропротекторную активность на обеих моделях гастропатии проявляет мексидол.

2. Гастропротекторное действие веществ проявляется улучшением морфогистологической картины слизистой оболочки желудка, нормализацией биохимических показателей крови и подтверждается. методом импедансометрии.

3. Механизм гастропротекторного действия изученных веществ во многом определяется их антиоксидантной активностью. При* стресс-индуцированной гастропатии защитное действие мексидола, гипоксена и диосмина связано также со стресспротекторной активностью.

Структура и объём диссертации.

ВЫВОДЫ

1. Мексидол, гипоксен, бемитил в дозах 50 мг/кг и диосмин в дозе 100 мг/кг защищают слизистую оболочку желудка от стрессорного и НПВП-индуцированного повреждения, что выражается в уменьшении количества эрозий, язв и геморрагий, общей площади поражения и подтверждается гистологически.

2. Гастропротекторный эффект изученных веществ лучше проявляется при курсовом профилактическом (7 дней) и лечебно-профилактическом (8 дней) их применении, чем при однократном.

3. Мексидол, и в меньшей степени гипоксен и диосмин при курсовом применении предупреждают инволюцию тимуса, селезёнки и гипертрофию надпочечников, что свидетельствует об их стресспротекторном действии.

4. Мексидол, диосмин, гипоксен и бемитил снижают активность процессов ПОЛ в ткани желудка и в сыворотке крови, инициируемых стрессом и применением кислоты ацетилсалициловой. Антиоксидантная активность имеет существенное значение в механизме гастропротекторного эффекта-препаратов.

5. Стресс-индуцированная гастропатия сопровождается повышением активности АсАТ и ЛДГ, АСК-индуцированная - АсАТ, АлАТ и ЛДГ в сыворотке крови. Изученные вещества нивелируют изменения активности ферментов.

6. Среди изученных веществ наиболее выраженное гастропротекторное действие по влиянию на морфологические и биохимические показатели при стрессорном поражении СОЖ оказывают мексидол, гипоксен и диосмин, при АСК-индуцированной гастропатии — мексидол и бемитил.

НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Мексидол и гипоксен рекомендуются для клинических испытаний в качестве средств профилактики стресс-индуцированных, а мексидол и бемитил - НПВП-индуцированных гастропатий.

2. Рекомендуется дальнейшее экспериментальное изучение аминотиоловых соединений и растительных биофлавоноидов, в том числе диосмина, как перспективных антигипоксантов/антиоксидантов, обладающих протекторными свойствами при формировании симптоматических гастродуоденальных язв.