Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Роль опиоидной системы в регуляции аритмогенеза и механизмов адаптационной защиты сердца при стрессе

ол

. о

- Н'. '.■>■

На правах рукопис

М А С Л О В Леонид Николаевич

РОЛЬ ОПИОИДНОЙ СИСТЕМЫ В РЕГУЛЯЦИИ АРИТМОГЕНЕЗА И МЕХАНИЗМОВ АДАПТАЦИОННОЙ ЗАЩИТЫ СЕРДЦА ПРИ СТРЕССЕ

14.00.16. - патологическая физиология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Томск - 1996

Работа выполнена в отделе экспериментальной кардиологии НИИ кардиологии Томского научного цента РАМН

Научный консультант: профессор,доктор медицинских наук, Ю.Б.Лишманов

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук,профессор, академик МАН ВШ В.В.Новицкий, доктор медицинских наук, профессор В.В.Удут

доктор медицинских наук,

профессор В.А.Дудко

Ведущее учреждение: Институт общей патологии и патологической физиологии РАМН

Защита состоится "_ "__ 1996г. в _

час. на заседании диссертационного совета Д 084.28.02 при Сибирском государственном медицинском университете (634050, Томск, Московский тракт, 2 )

. С диссертациёй можно ознакомиться в научной библиотеке Томского медицинского института (Томск, пр.Ленина,107)

Автореферат разослан "__ 199бг

Диссертационная работы выполнена в рамках основной темы НИР НИИ кардиологии ТНЦ СО РАМН (шифр 074) , при поддержке Российского Фонда Фундаментальных Исследований и National Institute on Drug Abuse (США)

Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук,

профессор Н.А.Бражникова

список использованных СОКРАЩЕНИЙ

СПС - стресс-лимитиругацая система ОП - опиоидные пептида СПС - стрессорное повреждение сердца ОР - опиатные рецепторы

-ПФ - технеция пирофосфат ПОЛ - перекисное окисление липидов . ГЭЗ - геыато-энцефалический барьер 2БС - эмэционально-болевой стресс as - желудочковая фибрилляция ЖТ - желудочковая тахикардия ЖЭ - желудочковая экстрасистолия Дапарпда - D-Ala2-Leu5-Arg6-enkephalin Экюефалинамид - D-Met2, Pro5-enkephalinamide DAGO - Tyr-D-Ala-61y~N-Methyl-Phe-Gly-ol . ПАША - [D-Argz,Lys'ldermorphin-(1-4)-amide DADLE - Tyr-D-Ala-Gly-Phe-D-Leu ЮТЯТ - Tyr-D-Thr-Gly-Phe-Leu-Thr DSIET - Tyr-D-Ser-Gly-Phe-Leu-Thr

DuP734-l(cyclopropylmethyl)-4-(2' - (4" -fluorophenyl)-2'-oxoethyl) piperidine

D-KtroTopisKH - Tyr-D-Arg

U-50,188-{trans-3,4-dichloro-N-methyl-N-(2-(1-pyrolidinyl)cyclohexyl]-benzeneacetamide} +SKF - К-алпилнорметазоцин

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА. РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Проблема профилактики стресс-индуцированных повреждений миокарда и адаптационной запеты сердца 6 экстремальных ситуациях становится все более актуальной. Особое значение эти вопроси приобретают для современного общества с его возросшими психоэмоциональными нагрузками, которые единодушно рассматриваются в качестве одного из ведущих факторов риска ишемической болезни сердца, артериальной гипертонии и внезапной сердечной смерти (Майзелис М.Я.' и соавт., 1982; Руда М.Я.,Зыско А.П.,1981; Чазов Е.И.,1975; Мазур H.A., 1985; Синг С.Н.,1995). Однако устоявшегося мнения о природе стрессорного повреждения миокарда до настоящего времени не существует. Спорным остается и вопрос о клинических проявлениях этого нарушения.

Вместе с тем, Г.Селье еще в конце 50-х годов заявил о возможности развития чисто стрессорного, по своему происхождению, повреждения сердца (Селье Г. ,1960; 1972; 1977; 1979; Selye Н., 1961; Selye Н., Bajusz Е., 1959).. Его идеи'впоследствии нашли свое развитие в работах Ф.З.Меерсона с соавт. (1981;1984; 1986;1988;1993), В.Löwen (1974;1978) и других исследователей, показавщих, что основным проявлением стрессорного повреждения сердца является нарушение электрической стабильности, вплоть до фибрилляции желудочков и возникновения внезапной сердечной смерти (Меерсон Ф.З.и соавт.,1981; 1984; 1986; 1988; 1993), а также мембранные повреждения кардиомэци-тов (Меерсон Ф.З. и соавт., 1981; 1984; 1986; 1988; 1993; Lown В. et al 1974; 1978;1980; Miller D.G.,Mallov S, 1977; Skinner J.,1985), способные повлечь за собой развитие "стрессорной кардиоыипатии" (Cebelin M.S.,Hirsch С.S.1980; Johansson G.,1980) и нарушения сократимости сердечной мыпл^т (Меерсон Ф.З. и соавт.1981;1984; 1986;1988;1993).

Вместе с тем, стрессу, как триггерному фактору в возникновении нарушений сердечного ритада, до сих пор уделяется незаслуженно мало внимания, хотя еще В.Löwen (1974; 1978; 1980) указывал на важную роль психоэмоционального напряжения в этиопатогенезе ари талий. С его мнением согласуются результаты других исследователей (Меерсон Ф.З. 1988; Юматов Е.А. 1982; lown В.et al, 1980; Skinner J.,1985). Более хто, названные авторы рассматривают нарушения сердечного ритма у лиц без явной коронарной патологии в качестве основных клинических эквивалентов стрессорного повреждения сердца.

Тем не менее, несмотря на актуальность данной проблемы, механизм развития и вопросы патогенетически обоснованной профилактики стрессорных нарушений электрической стабильности сердца и стресс-мндуцированных повреждений сердца остаются малоизученными.

В последнее . время исследователи склоняются к ьмсли о том, что сщаим из наиболее оптимальных и физиологичных путей повышения резистентности сердца к экстремальным воздействиям является так называемая "адаптационная зач-гга сердца" (Меерсон Ф.З. и соавт., ISil;36;1983;1993) .

Адаптационная зашита сердца - это профилактика или ослабление различных по этиопатогенезу повреждений сердечно-сосудистой системы с помощью стимуляции эндогенных механизмов неспецифической резистентности организма или фармакологической имитации адаптивных процессов.

Еще Г.Селье отмечал, что сердца животных, предварительно перенесших периодические воздействия экстремального фактора, становятся резистентными к последующему стрессорнои^ повреждению (Селье Г.,1972). Эти исследования продолжил проф, Ф.З.Меерсон, который предположил, что в основе подобной "перекрестной" адаптации сердца может лежать активация эндогенных стресс-лиштирукших систем (CJIC), к которым он относит серотонинергическую, ГйМК-ергическую системы, простаноиды, антиоксиданты и опиоидные пептиды (Меерсон Ф.3.,1986).

Вместе с тем, неопровержимых доказательств существования СПС до сих пор не существует. На наш взгляд, такими бесспорными аргументами в пользу наличия в организме СЯС могли бы послужить эксперименты с использованием ингибиторов синтеза стресс-лимитирукших соединений или блскаторов специфических рецепторов. Если бы с помощью фармакологического "в^&ключения" CJIC удалось предупредить или устранить кар-диопротекторный эффект адаптации, последние сомнения в существовании этих систем отпали бы. • К' сожалению, подобные исследования Ф.З.Меерсоном не были выполнены.

Опираясь на некоторые литературные данные (Павленко B.C. и со-авт.,1985; 1988; 1986) и, преяде всего, на результаты наших собственных исследований (Лишманов Ю.Б. и соавт., 1985; 1986; 1988; 1989; 1991; 1992; 1984), мы предположили, что на роль СЛС может претендовать эндогенная опиоидная система.

Наиболее существенным для нас представляется положение о том, что активация СЛС является фактором, определявшим устойчивость сердца к стрессорньм повреждениям и аритмэгенным воздействиям (Меерсон Ф.З.и соавт., 1986) . В связи с этим, представляется важным 'вопрос о возможности использования опиоидных нейропептидов для профилактики аритмий, а такие стрессорных и ишемических повреждений сердца, поскольку последние годы ознаменовались определенными достижениями в области изучения соресс-лимитирукщей (Лишманов Ю.Б. и соавт., 1985;1986;1988) , кардиопротекторной (Лшманов Ю.Б. и соавт., 1984; 1986; 1988; 1989; 1991; 1992), и антиаритыической (Лишманов Ю.Б. и соавт., 1991; 1992) активности опиоидных .пептидов. Однако эти сведения носят разрозненный, недостаточно систематизированный характер и не позволяют в полной мере уяснить биологический смасл наблюдаемых явлений.

В ряде работ показано, что энкефалины и эндорфины могут модули-' ровать синтез и секрецию ряда гормонов, традиционно считающихся "стрессовыми" (Бобков А.И.,1986; Славнов В.Н. и соавт. 1983; Сма-гин В.Г. и соавт.,1983; Федотов В.П. и др.,1983; Boksa P. et al, 1982; Cetel N. et al,1985; Demura R. et al, 1981; Forsling M. et al, 1981; Kem D. et al, 1985; Rabinowe S. et al, 1985). Имеющиеся в настоящее время данные позволяют говорить о тесном взаимодействии опиоидных пептидов (ОП) с вегетативной нервной .системой (Berkehnbosch

F. et al, 1981; Caffrey J., Hodges D.,1982; Fleminger G. et al,1984; La Gamma E. et al, 1984; Saiani L,,Guidotti A.,1982; Vlveros J. et al,1979), роль которой в аритмогенезе и стрессорном повреждении сердца общеизвестна.

В настоящее время не вызывает сомнения, что опиоидные пептиды играют важную роль в регуляции устойчивости сердца к аритмогенным воздействиям. Однако литературные данные по этому вопросу носят противоречивый характер и не вскрывают тонких механизмов участия огагои-дергической системы в патогенезе нарушений сердечного ритма. Так, имеются сообщения об эффективном применении агонистов ц-опиатных рецепторов (ОР) для предупреждения аритмий при введении токсических доз катехол аминов или коронароокклюзии (Fagbemi О. et al, 1983; Frey Е.1974, 1975; ttolinaroli P. et al, 1967).' Вместе с тем, согласно некоторым публикациям, блокатор ОР налоксон в экспериментах "in vitro" и "in vivo" предупреждал аричыии, обусловленные острой ишемией миокарда (Fagbemi О. et al, 1983; Wong T.M. et al,1985; Zhan Z.Y..et al, 1985; Huang X.D. et al,1986). Нередко одни и те же авторы сообщают об антиаритмической активности как агонистов (Fagbemi О. et al,1983; Pugsley М.К. et al, 1992), так и антагонистов OP (Fagbemi О. et al,1982; Wong T.M. et al, 1990). Лишь единичные статьи посвящены реши центральных ОР в аритмогенезе (Rabkin S.W., 1992).

Анализируя результаты исследований, авторы которых утверждают, что эндогенные ОП индуцируют нарушения сердечного ритма (Lee А.У.S. et al 1984;1987;1985), необходимо иметь ввиду следующие факты. Так, в этих работах, как правило, не учитывалось существование нескольких типов опиатных рецепторов: к-, ц-, 5-, а- и е-ОР (Сергеев П.В. и др., 1987; Faden A.I., 1984), активация каждого из которых ължет нередко приводить к реализации прямо противоположных эффектов в отношении сердечно-сосудистой системы (Bolme P. et al, 1978; Feldberg W., Wei E.,1978; Laubie M. et al, 1981; Schaz K. et al, 1980). В работах, посвященных доказательству аритьюгенного действия эндогенных Ш, обычно использовался неселективный антагонист ОР - налоксон (Fagbemi О.et al,1982; Lloreus-Cortes С.»Schwartz J.-С.,1984;Wong T.M. et al,1985). Однако следует иметь в виду, что налоксон, помимо своего взаимодействия с ОР, оказывает неспецифическое мембраноста-билизирупцзе действие (Koreh К. et al,1982;Sarne Y.et al, 1988), которое и обеспечивает, согласно данным У.Same (1988), антиаритмические эффекты этого препарата. Кроме того, нужно учесть, что антиарит-ьическое действие налоксона проявляется только при ' использовании больпмх доз этого препарата, позволяющих блокировать все типы ОР (Fagbemi О. et al, 1982,- Lloreus-Cortes С., Schwartz J.-С., 1984; Wong T.M. et al,1985). Такое положение вещей не позволяет говорить о роли конкретных ОР в аритмогенезе.

Нарушения электрической стабильности сердца, как ьы уже говорили, не являются единственным показателем стрессорного повреждения сердца. Эксперимента®чые исследования и патологоанатомические наблюдения •свидетельствуют, что в миокарде пациентов и экспериментальных животных, погмСпмх от внезапной .сердечной смерти, наблюдаются пато-

морфологические изменения, весьма сходные с теми повреждениями, которые отмечаются при интоксикации катехолаыинами ' (Cebelin M.S., Hirsch С.S.,1980; Johansson et all,1974; Reichbach D.,Benditt E.P.,1970). Следует отметить, что во врачебной практике наибольший эффект в отношении профилактики внезапной сердечной смерти, являющейся "клиническим эквивалентом стрессорного повреяздения сердца" (Corbalan К. et all,1974; Löwen В. et all,1978; Kerzner J. et all,1973; Verrier R. et all, 1974), дают ß-адренобяокаторы (Синг С.H.,1995). Эти факты свидетельствует об' адренергической природе стрессорного повреждения кардиомиоцитов. Между тем, имеются публикации об антистрессорной (Лишманов Ю.Б. и соат., 1985), антиад-ренергической (Лишманов Ю.Б. и соат.,1985; 1994) и кардиопротектор-ной активности агонистов опиатных рецепторов (Лишманов Ю.Б. и соат. ,1985;1994). Однако исследования, посвященные кардиопротекторной активности опиоидных пептидов, были выполнены проф. Ю.Б.Лишмановым с использованием только одного неселективного агониста периферических ОР - даларгина (Лишманов Ю.Б., 1986"; 1994) и, следовательно, не позволяют судить о роли конкретных типов ОР в регуляции устойчиво- . сти сердца к стрессорным воздействиям.

Сопоставление этих литературных данных и результатов собственных исследований позволило лам предположить, что система эндогенных опиоидных пептидов может играть ключевую роль в регуляции механизмов адаптационной защиты сердца при стрессорных и ариамогенных воздействиях .

Цель и задачи исследования. В настоящей работе ш поставили своей целью изучить роль опиоидной системы в регуляции аритмэгенеза и механизмов адаптационной защиты сердца при стрессе.

Для достижения этой цели нужно было решить следующие задачи:

1. Оценить влияние различных способов адаптации на уровень эндогенного ß-эндорфина, лей-энкефалина, мет-энкефалина в органах и тканях и степень устойчивости сердца к аритмэгенным воздействиям.

2. Исследовать влияние фармакологических воздействий, вызывали« увеличение уровня эндогенных опиоидных пептидов, на показатели резистентности сердца к аритмиям.

3. Изучить вклад различных типов опиатных рецепторов в реализацию антиаритыического эффекта адаптации.

4. Проанализировать опиатергические механизма кардиопротекторно-го эффекта адаптации при стрессе.

5.Исследовать роль вегетативной нервной системы, горюнов, про-станоидов, процессов перекисного окисления литшов, циклических нук-леотидов в опиатергических механизмах регуляции резистентности сердца -к стрессорным повреждениям и аритмэгенным воздействиям.

Научная новизна. В работе впервые проведен комплексный анализ влияния адаптации на уровень энкефалинов и ß-эндорфина в органах' и ■ тканях экспериментальных животных-. ' Установлено, что различные способы адаптации приводят к генерализованному увеличению уровня опиоид-

кых пептидов в плазме крови, надпочечниках, сердце и структурах головного мозга.

В процессе исследования установлено, что активация центральных 5-опиатных рецепторов увеличивает устойчивость сердца к аритмогенным воздействиям, в то время как стимуляция центральных к-рецепторов увеличивает вероятность возникновения адреналовых и СаС12-индуцированных нарушений сердечного ритма. Показано, что антиариомические или про-аритмэгенные эффекта агонистов ОР при центральном введении связаны с модулирующем влиянием этих соединений на вегетативную нервную систему.

Принципиально новым является выдвинутое в работе положение о том, что активация периферических ц-ОР, системное введение агонистов к-рецепторов, и/йли блокада ст-рецепторов способствуют увеличению устойчивости сердца ' к аргамогенным воздействиям. В тоже время активация периферических 6-ОР не сказывается • на электрической стабильности миокарда. Абсолютную новизну имеют данные о том, что адаптация животных или фармакологические воздействия, вызывающие увеличение уровня эндогенных опиоидных пептидов, приводят к увеличению устойчивости сердца к аритмогенным воздействиям. Принципиально новым является выдвинутое в работе положение о том, что ц- и к-ОР играют ключевую роль в реализации антиаритмического эффекта адаптации, тогда как 5-рецепторы не играют существенной роли в регуляции адаптационного повышения устойчивости сердца к аритмогенным воздействиям. Установлено, что как центральные, так и периферические ц-опиатные рецептора участвуют в формировании антиаритмического эффекта адаптации.

Впервые установлено, что активация периферических ц- опиат-ных рецепторов приводит к повышению устойчивости сердца к стрессорным повреждениям, в то время как стимуляция центральных ц-ОР способствует возникновению "стрессорной кардиоыиопатии". Установлено, что 8-, к- и о-рецепторы не играют существенной роли в регуляции устойчивости сердца к стрессорным воздействиям.

В работе представлены новые данные об участии циклических нук-леотидов, эйкозаноидов, гормонов и вегетативной нервной системы в реализации антиариалгзеских и кардиопротекторных эффектов опиоидных плпмдов.

На основании материалов диссертации сформулирована концепция о 'ключевой роли эндогенных опиоидов и опиатных рецепторов в иерархии стрес-лииитируша»1Х систем, активация которых в процессе адаптации детерминирует степень устойчивости сердца к аритаяэгенным и стрес-сорньм воздействиям.

Научно-практическая значимость. Полученные данные расширяют и углубляют существующее представления о фундаментальных закономерностях адаптации сердечно-сосудистой системы к экстремальным воздействиям. Основные положения работы мэгут бьггь использованы в качестве, теоретической основы для прикладных исследований в области разработки

принципиально новых фармакологических препаратов, обладающих кардоо-протекторным и антиаритмическим действием.

• По материалам диссертации опубликована монография (Лишманов Ю.Б., Маслов Л.Н. Опиоидные нейропептиды, стресс и адаптационная защита сердца. Томск. Изд-во Том. ун-та, 1994. 352с.). Материалы диссертации используются при чтении лекций по курсу биологической химии для студентов лечебно-профилактического и медико-биологического факультетов Сибирского ГЪсударственного медицинского университета (г. Томск), а также при чтении- лекций по курсу Змзгологии для студентов биолого-почвенного факультета в Томском государственном университете. Результата работа используются для исследования механизмов адаптации организма к экстремальным факторам внешней среда в науно-клиническом отделе Красноярского научного центра СО РАМН.

Основные положения, выносимле на защиту■

1. Адаптация экспериментальных животных с помощью кратковременных иммобилизаций или с поьощью курсового введения адаптогена родисшы розовой сопровождается генерализованным. ' увеличением уровня лей-энкефалина, мет-энкефалина и р-эндорфина в органах и тканях экспериментальных животных.

2. Адаптация или фармакологические воздействия, вызывающее увеличение уровня эндогенных опиоидных пептидов, приводят к увеличению устойчивости сердца к аритмогенным воздействиям.

3. В реализации антиаритмического эффекта адаптации принимают участие ц- и к-опиатные рецепторы.

4. Активация центральных и периферических ц-опиатных рецепторов способствует повышению устойчивости сердца к аритмогенным воздействиям. Устойчивость сердца к аритмогенным воздействиям повышается при стимуляции центральных З-рецепторов. Периферические {»-рецепторы не участвуют в аритмогенезе. Стимуляция центральных к-опиатных рецепторов, напротив, потенцирует аритмогенные эффекты адреналина и хлористого кальция. Активация к-рецепторов путем периферического введения агонистов этих рецепторов увеличивает устойчивость сердца к ар1тмогенным воздействиям. Такой же эффект обеспечивает блокада а-рецепторов.

5. Резистентность сердца к стрессорным воздействиям повышается после стимуляции периферических ц-опиатных рецепторов. Активация центральных ц-опиатных рецепторов способствует возникновению стрес-сорных повреждений сердца. Рецепторы и-, 8- и к-типа не участвуют в рехуляции устойчивости миокарда к стрессорным воздействиям.

6. В реализации кардиопротекторного и антиаритмического эффекта опиоидных пептидов в условиях стресса, экспериментальной коронаро-окютозии и адренергического повреждения сердца важное значение имеют: а) система циклических нуклеотидов; б) система.простаноидов; в) инги-бирование процессов перекисного окисления липидов.

Апробация диссертации. Материалы диссертации обсувдались на: Всесоюзном совещшии "Оценка размера и тактика лечения инфаркта миокарда" (Томск,1986); пятой региональной научно-практической конференции "Молодежь и научно-технический прогресс" (Томск,1986); третьем симпозиуме советской секции Международного общества по изучению сердца. "Метаболизм, структура и функция сердечной клетки". (Баку, 1986); VI Всесоюзном симпозиуме "Роль циклических нуклеотидов - вторичных посредников в регуляции ферментативных реакций" (Петрозаводск, 1988); школе-конференции "Механизмы повреждения и регуляции восстановительных процессов" (Новосибирск, 1988); XV Всесоюзном съезде патофизиологов "Нарушение механизьюв регуляции и их коррекция" (Кишенев,1989). 7. Конгрессе Международного Общества Патофизиологов (Москва, 1991); региональной конференции "Механизмы патологических реакций". (Иркутск, 1991); первой научной конференции молодых ученных НИИК ТНЦ РАМН (Томск, 1992); региональной конференции "Профилактика и экспериментальная терапия экстремальных и терминальных состояний", (Омск,

1992); международноц конференция "Здоровье и Социальные Проблемы Развития Нефяных и Газовых Областей в Арктических Регионах" (Надым,

1993); VII Всероссийском симпозиуме "Эколого-физиологические проблемы адаптации",'(Москва, 1994); на семинаре "Опиоидные пептиды в адаптационных процессах" в Department of Clinical Neuroscience. Drug Dependence Research Section, (Руководитель - Профессор, Академик Шведской Королевской Академии • Наук Л.Терениус) Karolinska Institute (Стокгольм, 1994); на региональной конференции "Актуальные проблемы кардиологии в Сибири и на Крайнем Севере" (Ткмень, 1994); на II Съезде Физиологов Сибири и Дальнего Востока. (Новосибирск, 15-17 июня 1995); на Юбилейной научной конференции НИИ кардиологии "Современные проблемы кардиологии" (Томск, 1995); на региональной конференции "Новое- в практику кардиологии" (Ткмень, 1995) на II Конгрессе Кардиологов Центральной Азии, (Алыаты, 14-16 сентября 1995); на семинаре в Department of Clinical Neuroscience. Drug Dependence Research Section, (Руководитель - Профессор, Академик Шведской Королевской Академии Наук Л.Терениус) Karolinska Institute (Стокгольм, 1995) ^

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 63 работы, из них одна монография, 2 статьи - в международных журналах, 21 статья - в центральных журналах, 4 статьи - в местных сборниках, 21 публикация - в материалах международной, всесоюзных, всероссийских конференций, 14 - в материалах региональных конференций.

Объем и структура работы. Диссертация изложена на 442 стра-кицах машинописного текста и состоит из введения, трех глав, заключения, выводов и списка литературы, включающего 997 источника, из которых 250 отечественнных и 747 иностранных. Диссертация иллюстрирована 33 таблицаьи и 5 рисунками.

Автор выражает глубокую благодарность своему научна^ консультанту, профессору Ю.Б.Лишманову, директору НИИ кардиологии ТНЦ СО РАМН, академику РАМН Р.С.Карпову за поддержу в проведении научных исследований, а так же выражает глубокую признательность коллегам, принимавшим непосредствнное участие в выполнении отдельных фрагментов исследований по тематике диссертационной работы (С.А.Афанасьев, Л.В.Маслова, Т.В.Реброва, Т.В.Федотова,

Н.В.Нарыжная, И.Г.Халиулин, А.В.К^ылагов, Д.С.Угдажекова,

Е.В.Ускина). Автор выражает свою признательность Д.С.Угдыжековой, Е.В.Ускиной, Н.В.Нарыжной и Н.А.Данильченко за техническую помощь при оформлении диссертации. с

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Работа выполнена на 2982 крысах-самцах линии Вистар, массой 200250г. Для оценки нарушений ритма сердца и антиаритыической активности препаратов мэделировали острую ишемию миокарда по методу Г.Селье в модификации O.Fagbemi et al. (1983) у наркотизированных эфиром крыс.

Адреналовые и хлоридаальциевые нарушения сердечного ритма мэделировали при помощи внутривенного введения адреналина (100 мКг/кг) или СаС12 (100 мг/кг) под легким эфирным наркозом. После инъекции адреналина или СаС12 в течение 5 мин регистрировали ЭКГ во гтсром стандартном отведении и принимали во внимание только желудочковые нарушения ритма (желудочковая экстрасистолия, желудочкова тахикардия, желудочковая фибрилляция).

Антиаритмический эффект адаптации оценивали на модели острой ишемии миокарда (ОИМ), разработанной I.Lepran et al. (1983), которая позволяет воспроизводить ишемию в отсутствии наркоза при закрытой грудной клетке, то есть в условиях максимально выраженной стресс-реакции, что очень важно для изучения стресс-лиыитирукгпих систем (СЛС).

Состояния адаптации достигали путем курсового (в течение 8 дней) введения экстракта природного адаптогена - Rodiolae rosea в дозе 1 мл/кг (А.С.Саратиков и соавт.,1987) или с помэщью адаптации к холоду, физической нагрузке и сочетанию обоих этих факторов (И.Г.Халиулин и соавт.,1987). В работе было использовано две мздели стресса: 24-х часовой иммэбилизационный стресс с фиксацией крыс в положении на спине в течение суток и эмоционально-болевой стресс по O.Desiderato (1974) . Изадриновый некроз мэделировали с помэщью подкожного введения изопротеренола (изадрин) в дозе 80 мг/кг.

Для интрацеребровентрикулярного введения лигандов опиатных рецепторов за 5-7 дней до индукции аритмий в боковой желудочек мозга крыс под барбамиловым наркозом (50 мг/кг внутрибрилинно) имплантировали полую канюлю из нержавепцгй стали, которую фиксировали на поверхности черепа с помэщью зубного цемент-фосфата. Операция выполня-. лась с поьющью стреотаксического аппарата СЭЖ-5 (НПО "Конструктор", Украина) . При этом использовали следующие координаты: АР - 1.5 \лл, Ь

- +2.0 мм, V - 3.5 ш относительно брегмы (Paxinos J.,"Watson С.,1982).

Липиды экстрагировали по методу Z.Plazer (1968) . Для оценки состояния процессов ПСШ в ткани миокарда определяли содержание диеновых конгюгатов по методу J.L.Bollard и H.P.Koch (1945), а такте уровень малонового диальдегида по методу K.Yagi (1976).

Для индукции перекисного окисления in vitro использовали изолированные, перфузируемы по Лангендорфу сердца крыс. Физиологический раствор Кребса - Хензеляйта имел следукдай состав в мМоль/л: NaCl -120, KCl - 4,8., CaCl2 - 2, MgS04 - 1,2, NaHC03 - 25, KH2P04 - 1,2, глюкоза - 10. Сердца со!фадались при спонтанной частоте порядка 4,5 Гц. Для активации ПОЛ в миоцитах изолированного сердца использовали перфузию изолированного сердца раствором FeSO« (0,2 мМоль) и аскорбата -0,5 tl-fcojb, которые растворяли в растворе Кребса - Хензеляйта.

Уровень p-эндорфина, лей-энкефалина, мет-энкефалина, циклических нуклеотидов, простациклина, тромбоксана .В-2, простаглавдша Е, простагландина F2a, кортизола, инсулина, вазопрессина в крови и тканях определяли' методами радиоиммунного 'i легирования с помощью РИА-наборов на гамла-счетчике "Гамма-12" (СССР) и бета-сцинтилляционном счетчике "Mark-3" (США).

Количественно степень стрессорного повреждения сердца оценивали по аккумуляции меченого радиоактивным технецием пирофосфата (99тТс-ПФ) в миокарде согласно методу D.G.Miller и S.Mallov (1977) . Препарат вводили внутривенно в дозе 5, бх10~3 МБк на 100 г массы тела. Через 60- 90 мин после введения животных декапитировали, сердце извлекали, отььтали от крови физиологическим раствором, взвешивали и радаометрировали на отечественном гамма-счетчике "Гамма-1" (СССР).

Результаты обрабатывали методами вариационной статистики.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Влияние адаптации на уровень эндогенных опиоидных пептидов. Нами Сьио установлено, что выполнение тренировочного курса иммобилизаций сопровождалось достоверным повышением (в среднем в два раза) ба-зального уровня p-эндорфина в плазме крови, гипофизе и структурах мозга по сравнению с интактными животными. Одновременно достоверно 2'величивалось содержание лей-энкефалина в крови, миокарде и надпочечниках (в среднем в 1,5 раза) . Уровень мет-энкефалина не изменялся.

Таким образом, обнаруженные нами изменения эндогенной опио-иднсй систеьы свидетельствуют о функциональной перестройке ее звеньев, направленной на преимущественное усиление секреции р-эадорфина и лей-энкефалина, обладающих стресс-лимитируыщгаи свойст-ваш (Лийыанов Ю.Б., 1985,1986) . Результатом'этих изменений могло "Сыть ограничение интенсивности последунцай стресс-реакции. Действительно, уровень кортизола и альдостерона после 6-часового стрессировакия "тредаровакных" крыс был соответственно на 74% и 40%

выше (p<O.Ul), чем у интактных животных, но при этом на 44% и "9* меньше (р<0.05), чем в группе стресс-контроля.

Эмоционально-болевое воздействие у адаптированных крыс не вызывало, в отличие от стресс-контроля, дополнительного "аварийного" выброса (3-эндсрфина из гипофиза, что и обусловило отсутствие подъема концентрации этого пептида в плазме крови. Совершенно другую картину мы набпвдали в гипоталамусе и среднем мозге. В этих структурах содержание p-эндорфина по отношению к группе "тренированных" (но не подвергнутых стрессу) животных достоверно уменьшалось в 2 раза, оставаясь, однако, на уровне, характерном для интактных крыс. В качестве одного из механизмов, объясняющих- стрессорное снижение уровня р-эндорфина в структурах мозга, можно предположить ускоренный выход этого пептида из депо с последухшим протеолизом.

Содержание лей-энкефалина в крови после моделирования эмоционально-болевого стресса (ЭБС) у адаптированных животных увеличивалось на 30Í (р<0.05) по сравнению с группой "тренированных", но не стрес-сированных крыс. Отмеченное повышение. уровня лей-энкефалина в крови явилось, скорее всего, результатом усиленного образования данного пептида в надпочечниках, где его содержание, и без того увеличенное в результате тренировок, еще больше повышалось в ходе последующего стрессирования. Уровень лей-знкефалина в миокарде адаптированных крыс достоверно снижался после стрессируицего воздействия на 45% (р<0.05). Видимо, освобождение этого пептида из депо делает его "доступным" для энзиматического гидролиза, что в конечном итоге приводит к уменьшению его содержания в миокарде. Известно, что энкефали-ны, взаимодействуя с 8-рецепторами симпатических терминалей в сердце и сосудах, способны ограничивать освобоэдение норадреналина (Ules Р. et al,1986) и уменьшать тем самым адренергическое воздействие на миокард. Проведя параллель с вышеприведенными изменениями уровня лей-энкефалина в сердце, можно предположить, что очи также определенным образом могут обуславливать уменьшение адренергического влияния на сердце.

Концентрация мет-энкефалина в плазме крови стрессированных посте предварительной адаптации крыс продолжала оставаться несколько сниженной по отношению к интактным особям.

Механизм указанных изменений уровня энкефалинов, безусловно, требует дальнейшего изучения. Необходимо отметить известную работу L.Larsson с соавт. (1979), в которой было убедительно показано, что мет-энкефалин и лей-энкефалин синтезируются в различных нейронах. Исходя из этого, нам представляется логичным предположить, что биосинтез энкефалинов в надпочечниках, которые являются основным ме- • стом образования циркулирующих энкефалинов (Tan L.,Yu Р.,1980), происходит в разных клетках и, соотвественно, имеет различную регуляцию. Действительно, ранее нами было показано, что различные фарма- , кологические агенты неоднозначно - влияют на уровень мет-энкефалина и лей-энкефалина в плазме крови и надпочечниках (Лшманов Ю.Б. и со-

авт.,1994), поэтом/ неодинаковая динамика содержания этих энкефалинов при стрессе или адаптации нам представляется закономерной.

Интересно сопоставить характер изменений эндогенной опиоидной систеьы, прослеженных нами на достаточно известной модели адаптации, с реакцией данной системл на введение экстракта золотого корня, обладающего адаптогенной активностью (Саратиков А.С., 1973). Курсовое введение крысам экстракта золотого корня вызывало 4-кратное повышение уровня р-эндорфина в крови по сравнению с интактными животными (р<0.001), что было даже в 2.5 раза более выраженным, чем при проведении серии коротких иммобилизаций. Обнаруженный феномен мог быть следствием адаптогенной стимуляции синтеза р-эндорфина гипофизе, поскольку основным источником р-эндорфина в крови считают гипофиз (Рогоегапг В. et а1,1977; ЭдашЛга Б. et а1,1984). В русле этих рассуждений правомерно было бы в ответ на действие экстракта родиалы ожидать повышение уровня р-эндорфина в ткани гипофиза. Однако, содержание данного пептида в гипофизе после введений родиолы даже уменьшилось на 34% (р<0,05). Вместе с тем, мл не наблюдали в данной группе крыс дополнительного повыпения концентрации р-эндорфина в крови в ответ на стрессор, а в гипофизе был отмечен выраженный стресс-индударованный подъем его уровня более, чем в 2 раза (р<0,01). Видимо, экстракт золотого корня содействовал усилению секреции р-эндорфина в кровь в "предстрессовый период" и индуцировал "экстренную" активацию его биосинтеза в гипофизе в стадии тревоги стресса.

Содержание лей-энкефалина в крови крыс, получавших родиолу, фактически не изменялось, но в надпочечниках и миокарде уровень этого пептида возрастал, соответственно, на 50% и 90% (р<0,001). Уровень мет-энкефалина в плазме крови, миокарде и надпочечниках крыс, получавших адаптоген, не изменялся.

Можно предположить, что накопление лей-энкефалина в надпочечнике« направлено на ограничение чрезмерной активации адренергических механизмов и предупреждение катехоламинового повреждения сердца. Содержание лей-энкефалина в крови и надпочечниках крыс, получавших адаптоген, при ЭБС достоверно в увеличивалось как по отношению к исходным . (до стресса) значениям в этой группе (в 1,5 раза), так и по сравнению со стресс-контролем (в 2 раза). По всей видимости, наблюдаемое нами увеличение уровня лей-энкефалина является одним из важных факторов адаптации организма к экстремальным воздействиям. Так, нам удалось в своих исследованиях показать стресс-лимитирукщее влияние аналогов лей-энкефалина (Лииманов Ю.Б., 1985,1986) .

Таким образом, полученные результаты показали, что активность основных звеньев эндогенной опиоидной систеьм существенно изменялась в процессе развития адаптации, вызванной проведением тренировочного курса иммобилизаций или введением адаптогена растительного происхождения. Можно предположить, что система опиоидных нейрепептидов является универсальным механизмом, опосредующим действие различных по

природе адалтогенкых факторов, повышающих переносимость тяжелого стресса.

При исследовании уровня энкефалинов в сердечной мдпце при острой ишемии миокарда № обнаружили обратную зависимость длительности желудочковой фибрилляции от содержания лей-энкефалина в сердце • (Маг!^ Ь. N. еЪ а1.,1995). Это находка явилась для нас, в определенной степени, неожиданной и заставила думать о роли энкефалинов в аритмз-генезе.

Выводом из всего сказанного может быть тезис о возможности активного участия лигандов ОР в процессах адаптации организма к экстремальным воздействиям, а также использование опиоидов для предупреждения стресс-индуцированных повреждений сердца и аритмий. Для того, чтобы перейти из области подобных гипотез в сферу аргументированных доказательств, необходима представить результаты наших исследований по изучению опиатергических механизмов антиаритыичесюэго действия адаптации.

Опиатергические механизмы антиаригалическото действия адаптации. Роль эндогенных опиоидных пептидов. Предварительная адаптация животных с помощью кратковременных иммобилизаций, предупреждала аритмии, индуцированные адреналином или СаС1г. Так, по сравнению с контрольными животными, в группе адаптированных крыс в 3 раза (р<0.01) увеличилось число особей без аритмий после введения адреналина, и в 2 раза (р<0,05) увеличился процент крыс, устойчивых к СаС12-нарушениям ритма (рис.1). Вместе с тем'оставалась неясна природа такой адаптационной резистентности сердца к аритмогенным воздействиям.

Профессор Ф.З.Меерсон постулировал существование, эндогенных стресс-лимитирукпдех систем (СПС), ограничивающих чрезмерную стресс-реакцию и предупреждающих стрессорные, ишеиические повреждения сердца (Меерсон Ф.З.,Пшенникова М.Г.,1988). Мы предположили, что на роль СПС могут претендовать опиоидные пептиды (ОП). Выше нами было показано, что адаптация организма к стрессорным воздействиям приводит к увеличению уровеня эндогенных ОП в органах и тканях. По нашим данным, синтетический аналог лей-энкефалина даларгин обладал анти-аритыической, кардиопротекторной и антастрессорной активностью (Липмаков Ю.Б. и соавт.,1984; 1985; 1986; 1991; 1994; 1995)'.

Сопоставление этих данных позволило нам предположить, что любое воздействие на организм, которое способствует увеличению уровня опиоидных пептидов путем увеличения их синтеза или ограничения эн-зиматмческой деградации ОП, должно увеличивать устойчивость сердца к аритмогенным воздействиям. Такой же эффект должны оказывать фармакологические препараты, способные избирательно активировать секрецию эндогенных опиоидов. Единственным известным в настоящее время соединением с подобными свойствами является Е>-киоторфин. Оказалось, что этот пептид способен при интрацеребровентрикулярном введении оказывать выраженный антиаритмический эффект, что проявлялось' увеличением в 2 раза (р<0,01) количества животных .без аритмий и уменьшением в 3 раза частоты возникновения желудочковых экстрасистол (р<0,01) после инъекции адреналина. Этот факт "согласуется с нашей

концепций об антиаритааической роли эндогенных опиоидов. Вместе с тем, для подтверждения этой гипотезы требовались эксперименты с препаратами, которые увеличивают уровень СП.

Одним из таких препаратов является экстракт родиолы. Было показано, . что введение адреналина животным контрольной группы сопровождалось развитием желудочковых экстрасистол у 94% крыл, тогда как у адаптированных с -помощью родиолы крыс сходные изменения ЭКГ наблюдались лишь у 20% особей (р<0,01). Аналогичные данные были получены на модели СаС12-вузванных аритмий. Инъекция налоксона животным, получавшим адаптоген, устраняла антиаритмический эффект родиолы, что позволяет предполагать опиоидергическую природу последнего.

В последние года, благодаря работам группы французких ученых, возглавляемых Bernard Р. {toques (1992;1992;1993), была синтезирована группа фармакологических препаратов, являющихся ингибиторами энзима-тическэго гидролиза энкефалинов.

>

Контроль

Адаптация

1 | - Желудочковые аритмии

- Без желудочковых аритмий

РИС. 1. Влияние адаптации на устойчивость крыс к индуцированным аритмиям. Примечание. А - адреналовые аритмии, Достоверность по' отношению к группе

Р<0.001 (метод х2) •

адреналовым и СаС!?-

Б

СаС12-индуцированные аритмии.

контроля: * - Р<0,025, ** -

60

40

20

БезЖА

, ЖЭ

ЖТ

ЖФ

Контроль

$гл им

ВБ 101; 10 мг/кг

' Рис.2 . Влияние внутривенного введения RB 101 на характер адреналовых ариталий.

Цримечание. Достоверность различий ,по отношению к контролю: * -Р<0,001 (метод X2)- Контроль - внутривенное введение 0,2 мл 0.9% NaCl. Количество животных в группе не менее 20. На оси ординат указан процент животных с нарушениями и без нарушений ритма.

Эти препараты способны избирательно увеличивать уровень эндогенных энкефалинов. Один из этих препаратов - RB 101 был любезно предоставлен нам В.Р.Boques. Нами было установлено, что этот препарат оказывал вьраженный антиаритмический эффект на модели адреналовых нарушений сердечного ритма. Ингибитор энкефалиназ полностью устранял •талудочковую фибрилляцию (ЖФ), желудочковую тахикардию (ЖГ) и желудочковые экстрасистолы (ЯЭ) (рис.2).

Следовательно, избиратель ное увеличение уровня эндогенных энкефалинов приводит к увеличению устойчивости сердца к аритмогенным воздействиям. Однако оставался неясен реальный вклад эндогенных ОП в реализацию антиаритмического эффекта адаптации. Ответить на этот вопрос могли только 'эксперименты с использованием блокаторов опиатных рецепторов (ОР).

Участие мо-опиатных рецепторов в реализации антиаритмического эффекта адаптации

Нами обнаружено, что инъекция налоксона полностью устраняла ан-тнаритьмческий г>ффект адапташк; (Рис.3.) '

2 О

2 3

ДЦРЕНАЛОВЫЕ АРИТМИИ

' 4

2 3 4

СаС12-ИНДУЦИР0ВАННЫЕ АРИТМИИ

Желудочковые аритмии

ш

Вез желудочковых аритмий

Риа.З. Влияние антагонистов опиатных рецепторов на адреналовые и СаС?-индуцированные аритмии у адаптированных крыс.

Примечаииа. Достоверность по отношению к группе контроля: * -Р<0,025, ** - Р<0.001. Достоверность по отношению к группе адаптации: -(+ - Р<0.001. 1 - Контроль (интактные крысы); 2 - Адаптация путем коротких иммобилизаций; 3 - инъекция налоксона (0,2 мг/кг внутривенно) после адаптации; 4 - инъекция налтриндола (10 мг/кг внутривенно) после адаптации-

Общеизвестно, что налоксон легко проникает через гемато-эндефалический барьер, поэтому оставался открытым вопрос о локализации (центральной или периферической) ц-ОР, обеспечивающих антиаритмический эффект адаптации. Использование антагониста периферических ОР - налтрексона метилбромида приводило, в отличие от на-локсона, только к ослаблению (р<0,05), но не устранению антиаритмического эффекта адаптации. Следует отметить, что налтрексона метил-бромид не влиял на характер адреналовых аритмий у неадаптированных крыс. Следовательно, в механизмах повышения электрической стабильности сердца у адаптированных животных могут принимать участие как периферические, так и центральные ц-ОР. Однако для подтверждения нашей гипотезы о важной роли центральных и периферических ц-ОР в реализации антиаритмического эффекта адаптации требовались эксперименты с периферическим и центральным введением агонистов ц-ОР.

Роль центральных мю-рецепторов. Интрацеребровентрикулярное введение агониста ц-ОР DAGO способствовало уменьшению тяжести адреналовых аритмий: частота возникновения ЖЭ снижалась в 7 раз по сравнению с контролем, а ЖГ и Ш вообще не развивались (р<0,001). Блокада М-холинорецепторов атропином устраняла антиаритмический эффект DAGO. При этом сам по себе атропин не оказывал заметного влияния на характер адреналовых аритмий (рис.4).

Таким образом, нами установлено, что: а) активация центральных ц-опиатных рецепторов способствует повышению устойчивости сердца к аритмогенному действию адреналина; б) в основе обнаруженного анти-аритмгческого эффекта DAGO лежит его способность повышать тонус п.vagus.

Роль периферических мо-рецепторов. Ранее нами было показано, что синтетический энзиморезистентный агонист ц-и 5-рецепторов дапаргин при внутри-венном введении обладает антиаритмической активностью (Липманов Ю.Б. и соавт.,198б;1991). Согласно литературным данным, этот лиганд пронмкает через гемзто-экцефалический барьер только при использовании в дозе более 0,5 мг/кг (Полонский В.М. и соавт.,1987). Ш же применяли даларгин в дозе 0,1 мг/кг, что позволило нам предполагать участие периферических ОР в реализации антиаритмических эффектов даларгина. Однако убедительных доказательств у нас не было. Недостаток' чо понятным оставалась рецепторная специфичность этого этого эффекта и механизм его антиаритмического действия при системном введении. Нами было установлено, что агонист периферических ц-ОР DA1DA (0,1 мг/кг), любезно предоставленный нам профессором Peter W. Schiller, оказывал антиаритмический эффект на модели адреналовых аритмий. Под действием этого препарата количество животных без аритмий увеличивалось в 7 раз (р<0,001). Число крыс с ЖЭ уменьшалось в б раз (р<0,01), число животных с ЖГ снизилось в 4 раза (р<0,05). Сходные проявления антиаритмической активности ми отмечали при использовании другого агониста ц-ОР DAGO (0,1 мг/кг), который в отличии от DALDA, проникает через гемато-энцефалический барьер.

- Без желудочковых аритмий

Еис.4, Влияние блокада М-холиноредепторов на антиаритмический эффект опиоидных пептидов при интрацеребровентрикулярном введении на модели адреналовых аритмий.

Примечание: * - Р<0.01 - показатель достоверности различий по отношению к контролю (метод хг); 1 - Контроль (интактные крысы); 2 - интра-церебровентрикулярное введение DAGO (20 нмэль на крысу); 3 - внутривенное введение атропина (1 мг/кг); 4 - внутривенное введение атропина (1 мг/кг)+- интрацеребровентрикулярное введение DAGO (20 ньюль на крысу) ;

- Желудочковые аритмии

80 -

60

40

20

0

Контроль DALDA DALDA + DALDA +

атропин гексаметоний

t№ желудочковый аритмий

виз.5. Влияние атропина и гексаметония на антиаритыический эффект системного введения селективного агониста ц-опиатных рецепторов DALDA. на модели адреналовых аритмий.

Нрммананиа; #- Р<0,01, - достоверность различай по отношению к контролю (метод х2) ;

Внутривенная инъекция налоксона полностью устраняла антиаритмический эффект обоих ц-агонистов, что свидетельствует о его рецептор-най специфичности. Введение одного налоксона в не влияло на характер аритмий. Блокада М-холинорецепторов атропином не влияла на анитарит-иический эффект DAGO и ПАША (рис.5.) Сам по себе атропин не оказывал эффекта на адреналовые аритиии. Внутривенная инфузия ганглиобло-катора гексаметония не влияла на антиаритмическое действие опиоидов. Генетически идентичный антиаритамческий эффект оказывали DAGO и DALDA аа модели CaС12-индуципованных аритмий.

Следовательно, лиганды ц-ОР DAGO и DALDA обладают высокой анти-амгтемческой активностью. Антмаритьический- эффект DAGO и DALDA свя-

Всз

^J - Желудочковый

аритмии

зан с активацией периферических ц-ОР. Вегетативная нервная система не играет существенной роли в реализации антиаритыических эффектов агонистов ц-рецепторов.

Резюмируя да1шый раздел работы, мэжно сделать следующие вывода: а) в реализации антиаритмического эффекта адаптации принимают участие как центральные, так и периферические ц-ОР; б) активация как цен-^ тральных, так и периферических ц-рецепторов приводит к увеличе- >ч нию устойчивости сердца к аритмэгенным воздействиям; в) антиаритмический эффект агонистов ц-рецелторов при интрацеребровентрикулярном введении связан с повышением тонуса п.vagus; г) повышение устойчивости сердца к аритмэгенным -воздействиям при активации периферических рецепторов мэрфинового типа не связано с изменением активности вегетативной нервной системы. Антиаритмический эффект агонистов периферических ц-рецепторов может быть результатом активации ОР в миокарде с последующим изменением пула внутриклеточных мессендаеров, регулирующих транспорт ионов кальция в клетку, или же следствием увеличения уровня гуморальных фактров, определяющих резистентность сердца к аритмогенным воздействиям.

Участие дельта-ОР в реализации антиаритмического эффекта "адаптации. Роль центральных дельта-рецепторов. Интрацеребрсвентрикулярное введение агониста 8-ОР DADLE способствовало уменьшению тяжести адре-наловых аритмий: частота возникновения ЖЭ снижалась в 7 раз по сравнению с контролем (р<0,01), а Я и Ю вообще не развивались. Контролем служили животные, которым инфузировали в боковой желудочек 0,9% NaCl. Блокада М-холинорецепторов атропином полностью устраняла антиаритмический эффект этого пептида. Сам по себе атропин не оказывал влияния на характер адреналовых аритмий. Эффект DADLE агониста 5-ОР на течение СаС12-индуцированных арисаий был идентичным. Таким образом, активация центральных 5-опиатных рецепторов приводит к увеличению устойчивости сердца к аритмэгенным воздействиям. Этот эффект связан с увеличением тонуса п.vagus.

Роль периферических дельта-рецепторов. Менее эффектными оказались наши эксперименты с использованием DSLET и DTL3T (предосталены док. Paul S. Hillary из NIDA), являющихся агонистами 5-ОР (David M. et al, 1982; Zajac J-M et al,1983). Оказалось, что эти препараты не оказывали никакого эффекта на адреналовые аритааии. Об этих пептидах известно, что они не проникают через гемато-энцефалический барьер (Baamonde A. et al,1991; Puiz-Gayo M. et al,1993). Следовательно/ есть основания считать, что периферические 5-ОР не принимают участия в регуляции устойчивости сердца к аритмэгенным воздействиям. Оставалось выяснить, участвуют ли ОР 'б-типа в реализации антааритыического эффекта адаптации. Оказалось, что блокатор 5-рецепторов - налтрии-дол (предоставлен проф. P.S.Portoghese) не оказывал влияния на повышенную устойчивость- к аритмогениым воздействиям у адалтарованкых

крыс. Следовательно, эндогенные агонисты 8-ОР, по-видимому, не принимают' участия в адаптационной резистентности сердца к аритмогенным воздействиям.

Таким образом, можно сделать следующие выводы: а) активация центральных S-OP приводит к увеличению устойчивости сердца к аритмогенным воздействиям; б) антиаритмический эффект агонистов 6-рецепторов связан с повышением тонуса парасимпатического звена вегетативной нервной система;- в) периферические 6-ОР не играют существенной роли в • аритмогенезе; г) дельта-рецепторы не принимают? участия в адаптационном повышении устойчивости сердца к аритмогенным воздействиям.

Роль каппа-опиатных рецепторов в аритмогенезе и адаптационной завдгге сердца. Нами установлено, что блокатор к-ОР нор-биналторфимин (предостален док. P.S.Hillary из NIDA) полностью устранял антиаритмический эффект адаптации. Однако этот ингибитор не влиял на характер аритмий у контрольный животных (рис.б.)

Таким образом, полученные нами данные свидетельствуют о том, что эндогенные опиоидные пептиды, являющиеся агонистами к- и ц-ОР, играют ключевую роль в реализации антиаритмического эффекта адаптации. Вместе с тем, некоторые вопросы остались без ответа. Так, например, не ясно:'какова локализация к-рецепторов, обеспечивающих антиаритмический эффект адаптации? Да и к трактовке наших экспериментов с антагонистами опиатных рецепторов необходимо относиться весьма ос. торожно. Дело в том, что все они легко проникают через геыато-энцефалический барьер (исключением является налтрексона метилбромид).

Эти данные послужили основанием для проведения экспериментов, направленных на изучение роли центральных и периферических к-опиатных рецепторов в ■ аритмогенезе и адаптационном увеличении устойчивости сердца к аритмогенным воздействиям.

Роль центральных каппа-рецепторов. Интрацеребровентрикулярное введение (за 30 мян до адреналина)' селективного агониста к-ОР 0-50,488 (предоставлен проф. P.F.VonVoigtlander) или инъекция в боковой желудочек агониста к-ОР [D-Ala2]-Dynorphin А(1-13) оказывали гроаритмический эффект (р<0,001). Контролем служили животные, которые инфузировали в боковой желудочек 0,9% NaCl. Ингибитор к-ОР ' нор-бинаяторфимин (предостален док. P.S.Hillary из NIDA) при интрацеребровентрикулярном введении проявлял антиаритмические свойства. Предварительная инъекция нор-биналторфимина полностью устраняла проаритмпческие эффекты U-50,488. Для того, чтобы оценить роль вегетативной " нервной системы в механизме действия динсрфина и U-50,488 на адреналовые аритмии, использовали предварительное введение гексомето-ния. Оказалось, что этот ингибитор N-холинорецептсров полностью предупреждал гпооарзгтмгч-ский эффект агонистов к-ОР.

интактные животные"

Но р - биналторфимин

Адаптация короткими иммобилизациями

нор-виналторфимин + адаптация короткими ИММОБИЛИЗАЦИЯМИ

Желудочковые аритмии

- Без желудочковых аритмий

Рис.6. Влияние нор-биналторфимина на возникновение адреналовых аритмий у адаптированных животных.

Примзчанив, Достоверность по отношению к труппе контроля: *-р<0,001. Достоверность по отношению к группе адаптации: +- р<0,01.

Таким образом, есть все основания полагать, что проаритыиче-ский эффект Р-А1а2~Оупогр1тд.п и и-50488 связан, с активацией центральных к-ОР. Эндогенные агонисты центральных к-рецепторов принимают участие в регуляции устойчивости сердца к аритмэгенным воздействиям. ■Проарит-ыическое действие агонистов к-рецепторов связано с их мэдулируювдш влиянием на вегетативную нервную систему.

Роль периферических каппа-рецепторов. Системное введение агониста к-ОР спирадолина {предоставлен проф. Р.Е.УопУохдЫапве'г) при адреналовых аритмиях достоверно уменьшало в 2 раза частоту возникновения ЖГ (р<0,05) и в 8 раз снижало процент животных с Ю (р<0,001) по отношению к контролю.

Контроль

***

U-62066E

Нор-биналторфимин

I | - Желудочковые аритмии

Рис.7. Влияние системного введения лигандов каппа-опиатных рецепторов на частоту возникновения адреналсвых аритмий.

Примечание. Достоверность по отношению к контролю: *** - Р<0,001 (метод х2) •

Блокатор к-ОР нор-биналторфимин (предостален док. Paul S. Hillary из NXDA) полностью устранял антиаритмическое действие спира-долина, но сам по себе нор-биналторфимин не оказывал эффекта на аритмэгенную активность адреналина (рис. 7.) Атропин и гексаметоний не влияли на антиариталические эффекты спирадолина. Следовательно, вегетативная нервная система не принимает участия в реализации антиаритмического эффекта спирадолина. Можно предположить, что обнаруженные нами антиаритмические эффекты этого препарата опосредованы стимуляцией к-рецепторов в миокарде или реализуются через иные (скорее всего, гуморальные) механизмы.

На модели Ca С12 -индуциро в а н иых аритмий спирадолин также проявлял антчаритмические свойства. Предварительное введение

Нор-биналторфш.;ин + U-62066!

~ желудочковых »Äi.ii.« аритмий

блокатора к-ОР нор-биналторфимина полностью устраняло антиаритмический эффект спирадолина, что указывает на каппа-редепторную специфичность этого эффекта.

Таким образом, можно сделать следуидое выводы: а) калпа-ОР и их эндогенные агонисты принимают участие в реализации антиаритмического эффекта адаптации; б) возбуждение периферических к-ОР приводит к повышению устойчивости сердца к аритыогеннаму действию адреналина, а стимуляция центральных к-ОР, напротив, снижает резистентность сердца к аритмогенным воздействиям; в) проаритмическое действие аго-нистов к-рецепторов при центральном введении опросредуется через вегетативную нервную систему, которая, в свою очередь, не принимает участия в реализации антиаритмических эффектов, связанных со стимуляцией периферических к-ОР.

Роль сигма-опиатных рецепторов в аритмэгенезе и адаптационной зашите сердца. Внутривенное введение агониста ст-рецепторов N-аллилнорметазоцина (+SKF 10,047), предоставленного док. William К. Schmidt, способствовало достоверному (в 7 раз) увеличению процента животных, у которых после инъекции адреналина развивалась наиболее тяжелая форма нарушений сердечного ритма - желудочковая фибрилляция. Антагонист ст-рецепторов DuP734 (предоставлен док. Willian. К. Schmidt), введенный за 10 мин до +SKF устранял проаритмический эффект агониста ст-ОР. ШР734 сам по себе также обладал высокой антиаритмической активностью. Этот факт можно рассматривать как показатель участия ст-рецепторов в механизмах регуляции электрической стабильности сердца у интактных животных. Блокада М-холинорецепторов атропином не сказывалась на антиаритмической активности DuP734. "Химическая денервация" миокарда гексаметонием также не оказывала влияния на проаритмические свойства +SKF. Следовательно, есть все основания полагать, что проаритмические и антиаритыические свойства ли-гандов ст-рецепторов не связаны с их модулирукшрш влиянием на вегетативную нервную систему.

При использовании модели СаС1г-индуцированных нарушений ритма проаритмические свойства +SKF и, соответственно, антиаритмические эффекты DuP734 сохраняются.

Таким образом, можно сделать следующее заключение: а) активация ст-рецепторов снижает резистентность сердца к аритмогенным воздействиям, а их блокада повышает устойчивость миокарда к аритмогенным эффектам адреналина или СаС12; в) вегетативная нервная система не участвует в реализации эффектов ст-лигандов на устойчивость сердца к аритмогенным факторам.

Опиатергические механизмы кардиопротекторного эффекта адаптации. Нами было установлено (Лишманов Ю.Б.и соавт., 1985), что агонист пери~ ферических ц- и 5-ОР даларгин может предупреждать стрессорные повреждения сердца (СПС), а уровень эндогенных опиоидных пептидов, по-

видимому, предопределяет устойчивость миокарда к стрессорным повреждениям (Липманов Ю.Б. и соавт.,1985,1994). Однако роль конкретных типов ОР в мэханизмэ СПС оставалась невыясной.

Обнаружено, что иымобилизационный стресс приводил к увеличению аккумуляции "Тс-пирофосфата в миокарде крыс в 1,5 раза, что свидетельствует о повреждении кардиомиоцитов. Предварительное введение агониста к-рецепторов Ü-50,488Н или агониста S-рецепторов DSLET (предоставлен док. P.S.Hillary из NIQA) не отражалось на характере СПС. Агонист о-рецелторов +SKF -(предоставлен док. P.S.Hillary из OTBÄ) так»® не оказывал влияния на степень СПС. Антагонисты к-рецепторов MR2266 и 5-рецепторов ICI-174,864 (предоставлен док. P.S.Hillary из ЮТА) также не действовали на захват 9а°Тс-пирофосфата кардиоыиоцитаьи при стрессе. Следовательно, есть все основания полагать, что к-, о-, 5-рецепторы не имеют существенного значения в механизме развития СПС.

Агонист ц-рецепторов DAGO (предоставлен до к. P.S.Hillary из ШЛА) потенциировал СПС, что выражалось нарастанием аккумуляции 9а°Гс-пирофосфата в миокарде на 67% по сравнению со стресс-контролем (р<0,01). Однако агонист периферических ц-рецепторов DAT .ПА (предоставлен проф. P.W.Schiller), напротив, способствовал уменьшению СПС (рис.8.)

Таким образом, полученные данные позволили нам предположить, что ключевую роль в опиатергической регуляции устойчивости сердца к стрессу играют ц-рецепторы. Агониста этих рецепторов DAGO и DALDA имаюг сходную селективность к ц-ОР, однако DALEA не проходит через гемато-энцефалический барьер (Schiller P.W. et al, 1989, 1990), a DAGO - способен проникать в головной мозг при системном введении (Baamonde A.et al,1991; Ruiz-Gayo M. et al,1990). Исходя из этого, мы предположили, что возбуждение периферических ц-рецепторов (ПАША) играет кардиопротекгорную роль при тяжелом стрессе, в то время как активация центральных ц-рецепторов (DAGO) способствует развитию повреждения кардиомиоцитов.

Для того, чтобы подтвердить нашу гипотезу, мл использовали введени® налтрексона, который является ингибитором центральных и периферических ц-ОР (Browen D.R. et al,1983). Оказалось, что этот препарат предупреждает СПС. Блокатор периферических ц-ОР метилнал-трексон, в отличие от налтрексона, потенциировал СПС (рис.8.). Таким образом, есть основания утверждать, что: а) активация периферических ц-ОР служит фактором заняты сердца при экстремальных воздействиях; 6) возбуждение центральных ц-ОР при длительной иммобилизации является патогенетическим звеном СПС; в) дельта-, каппа- и сигма-рецепторы не участвуют в регуляции устойчивости сердца к стрессорным воздействиям.

1 -

Рис.8. Влияние лигандов опиатных рецепторов на аккумуляцию'в миокарде 9апТс-пирофосфата при иммобилизационом стрессе.

Примечание. Достоверность различий 5 по сравнению с интактными крысами: + - Р<0,05. Достоверные отличия по сравнению с стресс-контролем * -. Р<0,05; ** - Р<0,01. 1 - Интактныв крысы; 2 - иммобилизация 24 ч (стресс); 3 - Стресс + DAGO 0,1 мг/кг; 4 - Стресс + DALDA 0,1 мг/кг; 5 - Стресс + налтрексон 0,5мг/кг; б - Стресс + метилналтрексон 5 мг/кг.

Как мы уже писали выше, механизм адаптационной зашиты миокарда остаются малоизученными. В частности, неизвестна природа стресс-лимитирукших систем (СПС), определяющее устойчивость сердца к экстремальным воздействиям на организм. Ш предположили, что на роль такой СПС могут претендовать эндогенные ОП. Какие у нас для этого были основания?

Мы обнаружили, что адаптация с помощью кратковременных иммобилизаций вызывает увеличение уровня эндогенных ОП. Однако с полной уверенностью говорить об участии опиоидной системы в механизмах адаптационной защмы сердца при стрессорных воздействиях можно, с нашей точ1си зрения, лишь после оценки результатов адаптации на фоне блокады ОР, Другим подходом к изучению роли, эндогенных ОП в адаптационной за-

4

щгге сердца может быть исскуственное увеличедае их содержания в организме.

У животных, прошедших курс адаптации с помощью ежедневных иммобилизаций, степень СПС была значительно ниже, чем в группе стресс-контроля, о чем свидетельствует достоверное снижение на 26% аккумуляции в миокарде "*Гс-пирсфосфата. Напомним, что при таком способе адаптации мы наблкщали заметное повышение уровня эндогенных опиоидов в органах и тканях.

Блокада центральных и периферических ОР налтрексоном или налок-соном не привела к ожидаемому изменению кардиопротекторных эффектов адаптации, в то время как у неадаптированых животных эти препараты способствовали уменьшению степени СПС. Эти данные наводят на млсль о существовании в структурах головного мозга неких эндогенных лигандов ОР, которые активируют центральные ц-ОР, тем самым усиливая повреждающий эффект тяжелого стресса, скорее всего, путем активации симпато-адреналовой системы. Такая гипотеза находит свое косвенное подтверждение в исследованиях G.R. Van Loon (1984), который обнаружил активацию симпато-адреналовой системы после интрацереб-ровентрикулярного введения р-эндорфина. • Можно предположить, что у адаптированы* крыс происходит десенситизация центральных (i-ОР, возбуждение которых у неадаптированных крас в условиях стресса способствует усилению повреждения сердца.

Косвенным подтверадением этого предположения служат наши эксперименты с использованием ацеторфана (предоставлен проф. J.-Ch.Schwartz) - Ингибитора ферментов деградации энкефал-лнов (Roques В.Р. et al,1993). Известно, что ацеторфан легко проникает через гема-то-энцефалический барьер и способствует увеличению содержания эндогенных опиоидов. Однако, в отличие от адаптации, такое фармакологическое увеличение уровня эндогенных СП, по нашим данным, не приводит к повыиению резистентности сердца к стрессорным воздействиям. Следовательно, механизм кардиопротекторного эффекта адаптации не сводится только к увеличению уровня эндогенных ОП. Видимо, второй составляющей защитного действия адаптации в отношении стресс-индуцированных повреждений сердца следует считать десенситизацию ОР, о которой мл говорили выше.

Таким образом, можно сделать следукпяе выводы: а) эндогенные ли-ганды ц-Oi* не вносят существенного вклада в механизмы формирования кардиопротекторного действия адаптации; б) степень устойчивости сердца адаптированных животных к стрессу, в определенной мере, зависит от состояния эндогенной опиоидной системы (уровень пептидов в органах и тканях, а также чувствительность рецепторов к налоксону и налтрексо-ну). ,

Гуморальные и внутриклеточные механизмы влияния опиоидных пептидов на резистентность сердца к стрессорным повреждениям и аритмоген-ньы воздействиям. Согласно современным представлениям, реализация опиатергических эффектов происходит за „счет пресинаптического инги-

бирования выхода нейро трансмиттера в синаптическую щэль (Fagbemi 0.,1982) и влияния на чувствительность постсинаптических мембран к нейромедиаторам (Helle К., 1984), а также путем ингибирования потен-циалзависимого поступления Са2+ в клетку (Кравцов Г.М. и со-авт.,1982). Имеются данные о свойстве опиоидов вызывать гиперполяризацию нейронов посредством увеличения мембранной проницаемости для К* (North R.,Williams J., 1983; Taube H. etc., 1976). Важное значение в реализации модулирующее эффектов опиоидов имеет их способность ингибировать аденилатциклазу (Klee W. et al,1976;1981).

Переходя к анализу механизмов антиаритмического и кардиопротек-торного действия ОП и их _ включения в систему адаптационной защиты сердца, необходимо отметить, что наиболее верифицированными системами, участвующими в реализации кардиопротекторных и антиаритмических эффектов опиоидов, к настоящему времени следует признать систему циклических нуклеотидов, эйко?аноидов, а также систему регуляции биосинтеза белка и нуклеиновых кислот (Лишманов Ю.Б.,Маслов Л.Н.,1994).

Циклические нукпеотиды. Наши данные свидетельствуют о существовании тесных корреляций между эффектами ОП' и уровнем -циклических нуклеотидов. Так, введение даларгина вызывало достоверное ослабление индуцированного коронароокклюзией подъема уровня цДМ® в сердечной млшце. На содержание цПЙ даларгин действовал противоположным образом. Мы полагаем, что взаимодействие ОП с системой внутриклеточных . мессендаеров осуществляется, сксрее всего, по принципу опиатергиче-ской модуляции гормональных влияний на эффекторные органы. Действительно, наши эксперименты с гексаметононием и атропином, суть которых изложена выше, убедительно свидетельствуют, что вегетативная нервная система не играет существенной, роли в реализации антиаритмических эффектов лигандов ОР при системном введении.

Следует отметить, что изменения уровня циклонуклеотидов, аналогичные эффектам даларгина, наблюдались нами и при различных видах адаптации. Так, при острой коронароокклюзии у адаптированных животных мл не отмечали подъема уровня цйМ1> и уменьшения количества цПЙ в миокарде.

Как известно, высокий уровень цАШ> является одним из факторов, способствующе развитию повреждений кардиомиоцитов и возникновению ЖФ при коронароокклюзии (Podzuweit Т. ■ et al, 1976). Исходя из этого; более низкое содержание цАШ> в кардиоыиоцитах крыс, получавших даларгин, и в миокарде адаптированных животных с высоким уровнем эндогенных опиоидов можно рассматривать в качестве механизма, опс^редующгго кардлопротекторное и антиаритмическое действие ОП.

Известно, что цГМХ> является метаболически!t антагонистом цйМФ (Goldberg N.D.,Haddox М.К.,1977; Wollenberger A., Warbanow W.,1976). Следовательно, обнаруженное нами достоверно более низкое соотношение цАШ>/цШ5 в миокарде крыс, получавших энкефалины, или адаптированных животных может способствовать увеличению устойчивости сердца к адре-нергическим воздействиям. Эти данные позволили нам предположить, что механизм действия энкефалинов на характер адренергических- процессов

при стрессе включает в себя не только торможение усиленного образования катехоламинов, но и ограничение кардиотропного действия последних на уровне эффектора (Лшманов Ю.Б., Маслов Л.Н.,1994).

В этом своем предположении мы еще более утвердились, обнаружив функциональный антагонизм опиоидов и катехаламинов на клеточном уровне. Так, оказалось, что инъекция даларгина достоверно в 2 раза уменьшает аккумуляцию '^с-пирофосфата в миокарде крыс после введения изадрина. При этом кардиопротекторный эффект даларгина был связан с ограничением синтеза цДМ$ - основного внутриклеточного мессендаера действия изадрина на сердце.

Способность опиоидов вызывать снижение уровня цАШ> была показана ранее на примере нейронов (Chang K.et al,1982;Sharma S. et al,1977). Наши эксперименты свидетельствуют, что подобные эффекты могут отмечаться и на уровне сердца, что позволяет предположить прямое опиатергическое ингибирование активности аденилатциклазы. Вместе с тем, согласно нашим данным, энкефалины через возбуждение ОР могут индуцировать повышение уровня цГМ1>. Поскольку в наших опытах мы не обнаружили in vitro влияния опиоидов на активность очищенной фос-фодиэстеразы циклонуклеотидов (Лишманов Ю.Б.,Маслов Л.Н.,1994), то наблюдаемое при введении даларгина повышение концентрации цГМ1> и снижение уровня цАМ® у крыс с' коронароокклюзией или изадриновым некрозом можно бьио бы объяснять прямым стимулирукиим действием препарата на гуанилатциклазу и, соответственно, ингибирукииим эффектом по отношению к аденилатииклазе.

Таким образом) мзжно с достаточной долей увере"ности считать, что спиатергическое уменьшение уровня цАМХ>, подъем концентрации цГМV и снижение коэффициента цАШ>/ цШ1> в миокарде способствуют своеобразной десенситизации кардиомиоштов к адренергическим воздействиям, повышая тем самым толерантность сердца к адреналовым, стрессорным и, вероятно, ишемическим повреядениям, имеющим тесные патогенетические взаимосвязи.

Как известно, катехоламины через систему циклических нук-леотидов и другие регуляторные механизмы приводят к реализации, так называемой, " липидной триады" повреядекия биомембран, слагающейся из активации фосфолипаз и липаз, детергентного действия лизо-фосфатидов, активации супероксидных процессов и образования избыточного количества свободных жирных кислот (Меерсон Ф.З. и со-авт.,1985), в том числе, эйкозатетраеновой кислоты, служащей субстратом для синтеза простаноидов и продуктов перекисного окисления липидов (ПОЛ).

Эйкозаноиды. После б-часового эмэционально-болевого стресса (ЭБС) в штазме крови крыс мы зарегистрировали увеличение количества тромбоксана и снижение иммунореактивности простациклина. Предварительное введение даларгина при ЭБС вызывало достоверный подъем содержания простациклина и снижение продукции тромбоксана. Сходные изменения уровня этих эйкозаноидов были отмечены нами и в миокарде стрессированных животных после введения даларгина.

Мл склонны думать, что стимуляция синтеза простациклина должна снижать риск возникновения и тяжесть стрессорных и ишемических повреждений миокарда в силу вазодилататорных, антикоагуляционных и антиаритмических свойств данного простаноида (Moneada S.,Vane J.R.,1980; Schror К.,1986; Slotkin Т. et al., 1980). Тромбоксан Аг, являясь функциональным антагонистом простациклина, вызывает освобождение норадреналина из периферических симпатических нервов (Trachte J.M., Stein Е.,1988) и обладает аритмогенной активностью (Thaulow Е. et al, 1984), что, по нашему мнению, может способствовать усилению СПС. Таким образом, есть все основания считать, что увеличение содержания простациклина и снижение уровня тромбоксана Аг У стрессиро-ванных животных после инъекции ОП отражает активацию одного из важных механизмов кардиопротекторного действия опиоидов, опосредованного через систему простаноидов.

В ходе дальнейших исследований нами было установлено, что ЗБС вызывает достоверное снижение содержания простагландина Е в миокарде и плазме крови, а предварительное введение энкефалинов не только предупреждает указанное изменение, но и способствует повышению уровня этого простагландина даже выше, чем у интактных животных.

Известно, что простагландин Е ограничивает адренергичеекме влияния на миокард, ингибируя высвобождение норадреналина из симпатических нервных терминалей в миокарде (Hedqvist Р.et al,1971). Этот феномен лежит в основе антиаритадического действия простагландина Е (Au T.S.L. et al,1979;1980). Принимая во внимание эти сведения, мы, с определенной долей уверенности, можем рассматривать обнаруженные изменения уровня простагландин Е под влиянием энкефалинов тагске как фактор кардиопротекторного и антиаритмического действия ОП.

Общеизвестно, что повреждения миокарда при действии экстремальных факторов во многом обусловлены гьперпродукцией катехоламинов. Мы уже писали, что даларгин способен предупреждать не только стрес-сорные, но и изадриновые повреждения сердца. Если кардиопротекторный эффект ОП связан с модуляцией биосинтеза простаноидов, то у животных с изадриновым некрозом миокарда даларгин должен оказывать такой же эффект на уровень простаноидов, как и у стрессированных животных.

Действительно, введение даларгина (р<0,001) ингибировало адре-нергическое повышение содержания тромбоксана в сердце л препятствовало снижению уровня простациклина после инъекции изадрина. Подобные изменеш!я детерминировали увеличение индекса простациклин/тромбоксан у крыс с изадриновым повреждением сердца.

Кроме того, даларгин способствовал увеличению в 4 раза (р<0,001) уровня простагландина Е и снижению в 2 раза (р<0,001) концентрации простагландина F-2a в плазме крови по сравнению с группой изадринового контроля. Соотношение простагландина Е/ простагландина F-2a при этом увеличивалось на всех сроках исследования в среднем в 2 раза.

Сопоставляя литератури^е данные о вазодилататорных и антаритми- -ческих эффектах простагландина Е (Au T.S.L. et al,1979; 1980; Martinez Т.Т. et al,15dl) с полученными нами результатами, можно

предположить, что указанное увеличение индекса простагландина Е/простагландана F-2a вносит определенный вклад в кардиопротекторный эффект даларгина. Простагландин F-2a, согласно данным литературы, наоборот, вызывает вазоконстрикцию коронарных сосудов (Kawasaki К. et al,1985; Martinez T.T., Crampton J.M.,1981). Эти факты укладываются в нашу концепцию о том, что кардиопротекторный эффект ОП частично может быть опосредован и через изменения уровня простагландинов Е и F-2a.

Таким образом, как при стрессорном повреящении сердца, так и при изадриновом некрозе даларгин оказывал кардиопротекторное действие, в механизме которого определенная роль должна быть отведена увеличению соотношения простациклин/тромбоксан и подъему индекса простагландина'- Е/простагландина F-2a. Следовательно, есть все основания считать, что модуляторный эффект энкефалинов реализуется на уровне ферментов, синтезирукших простаноида. В связи с этим ыы хотели бы обратиться к работам, в которых показано, что продукты ПОЛ ингибируют простациклинсинтетазу (Beitz Y.,Forster W., 1981;1987) .

Все излаженное выше позволило нам предположить, что ОП могут оказывать существенное влияние не только на уровень простаноидов, но и на содержание продуктов перекисного окисления эйкозатетраеновой кислоты и других полиненасыщйнных жирных кислот. Действительно, надо Сыло установлено, что стресс приводит к достоверному увеличению в миокарде и плазме !фови экспериментальных животых содержания малонового диальдегида, диеновых конизгатов, а предварительная инъекция даларгина или энкефалинамида полностью нивелирует стресс-индуцированную пероксидацию липидов.

Оставалось неясным, могут ли ОП оказывать прямое влияние на процессы ПОЛ в миокарде или их эффекты носят опосредованный характер и реализуются только на уровне целого организма. Ответить на эти вопросы нам помогли эксперименты на изолированном перфузируемом по Лангендорфу сердце. Перфузия изолированного сердца раствором Fe-аскорбата приводит к активации ПОЛ, что проявляется в достоверном увеличении в миокарде малонового диальдегида (в 4 раза) и диеновых кониагатов (в 2'раза). Предварительное внутривенное введение экспериментальным животным даларгина или энкефалинамида (0,1 мг/кг) досто-рерно ингибировало пероксидацию липидов in vitro. Перфузия изолированного сердца раствором, содержащим даларгин или энкефалиамид, при-■ водила к снижению интенсивности свободнорадикального окисления липидов в изолированном сердце. Однако "антиоксидантный" эффект энкефалинов при перфузии изолированного сердца был существенно слабее, чем при введении этих пептидов in vivo.

Таким образом, • мы можем заявить, что энкефалины оказывают как ■прямое "антмоксидантное" действие на процессы ПСЛ в миокарде, так и опосредованное, гроявляиввеся в их более выраженной способности подавлять ПОЛ при введении in vivo, чем при добавлении в перфузионньй раствор изолированного сердца. Основываясь на литературных данных о важней роли ПСЛ в патогенезе СПС (Меерсон Ф.З.,Пшенникова М.Г.,1988),

можно предположить, что подавление процессов ПОЛ энкефаЛииами вносит несомненный вклад в кардиопротекторный эффект этих пептидов.

Вместе с тем следует отметить, что вопрос о механизме такого "антиоксидантного" действия энкефалинов по-настоящему не решен и является предметом наших дальнейших исследований. В качестве альтернативного механизма "антиоксидантного" действия ОП можно предположить их свойство ограничивать освобождение депонированных в симпатических терминалях катехоламинов, которые, как известно, являются "активаторами" ПОЛ (Меерсон Ф.З., ГЬпенникова М.Г., 1988). Так, в работах i\ider Н. и соавт. (1988) было показано, что энкефалины, действуя на пресинаптические 8-ОР,. ингибируюг освобождение норадреналина из симпатических нервных окончаний в миокарде. Нами также были получены данные о способности энкефалинов предупреждать стрессорное увеличение секреции катехоламинов (Лишманов К1.Б. и соавт., 1985; 1989).

Мы уже отмечали, что процессы пероксидации липидов тесно взаимосвязаны с циклооксигеназным каскадом обмена арахидоновой кислоты, что находит свое проявление в депрессии биосинтеза простациклина при активации ПОЛ в препаратах изолированного перфузируемого сердца. Индукция ПОЛ in vitro на изолированном перфузируемом сердце не влияет на уровень тромбоксана. Однако содержание простациклина при этом уменьшается в 3 раза (р<0,001). Предварительное внутривенное введение даларгина или энкефалинамида сопровождалось достоверным подъемом уровня простациклина в препаратах изолированного сердца. Перфузия изолированного сердца раствором энкефалинамида или даларгина не влияла на Fe-аскорбат-индуцированное снижение биосинтеза простациклина, но в то же время способствовала уменьшению биосинтеза тромбоксана (р<0,001) .

Итак, полученные данные убедительно свидетельствуют о том, что системное введение энкефалинов предупреждает последукшую in vitro-активацию ПОЛ. Такое "антиоксидантное" действие энкефалинов сопровождается увеличением синтеза простациклина и снижением уровк' тромбоксана. Эти эффекты реализуются преимущественно на уровне цеяо1Л организма, так как перфузия изолированного сердца агонистами ОР вызывает весьма умеренные "антиоксидантные" эффекты, а стимуляции синтеза простациклина при этом вообще не наблюдается. Все сказанное позволяет предполагать важную роль нейроэндокринных систем организма в реализации защитных эффектов опиоидов. Представленные данные заставляют думать, что в основе обнаруженного нами свойства лигандов ОР активировать биосинтез простациклина лежит их способность предупреждать образование продуктов ПСЛ, являкшихся ингибиторами простациклинсинтета-зы (Moneada S.,Vane J.R.,1980).

Полученные данные свидетельствуют о сложном характере взаимодействия различных представителей стресс-лимитируяних систем. Результаты данной работы позволяют думать о возможной реализации кардиопро-текторного эффекта энкефалинов через активацию систем антиоксидан-тов и простаноидов.

Таким образом, подводя итоги данному разделу рабоды, можно сделать следующие выводы: а) энкефалины способны предупреждать не только

стрессорные повреждения сердца, но и уменьшать изадриновое повреждение миокарда; б) антиадренергический эффект даларгина связан не только с уменьшением секреции катехоламинов, но и с угнетением синтеза цАМ$ в миокарде; в) энкефалины увеличивает уровень цШФ в миокарде в условиях стресса,_ изадринового повреждения, экспериментальной коронароокклюзии; г) энкефалины увеличивают синтез проста-циклина и угнетают образование трсмйоксана в миокарде в условиях стресса, изадринового повреждения и при индукции ПОЛ in vitro на изолированном перфузируемом сердце; д) опиоидаые пептиды супрес-сируют процессы ПОЛ in vivo при стрессе и повышают устойчивость изолированного перфузируемэго сердца к индукции ПОП in vitro; ж) все вышеперечисленные эффекты мэгут иметь отношение к антиаритмическим и кардиопротекторньы эффектам опиоидов. (Рис.9.)

ЦЕНТРАЛЬНЫЕ ОПИАТНЫЕ РЕЦЕПТОРЫ

ПЕРИФЕРИЧЕСКИЕ ОПИАТНЫЕ РЕЦЕПТОРЫ

Изменение | тонуса симпатического и парасимпатического звена вегетативной нервной системы

Уменьшение уровня стресс-гормонов

Снижение отношения цАМФ/цГМФ в миокарде

Увеличение синтеза ПЦ

и ПГЕ и уменьшение уровня Тхи ПГРга

Супрессия ПОЛ

1

1

1 I

Активация синтеза белков миокарда

1

УСТОЙЧИВОСТЬ СЕРДЦА К СГРЕССОРНЫМ И АРИТМОГЕННЫМ ВОЗДЕЙСТВИЯМ

Рис. 9. Возможные механизмы влияния опиоидной системы на устойчивость сердца к стрессовым й аритмогенным воздействиям.

1. Адаптация экспериментальных животных с помощью кратковременных иммобилизаций или с помощью курсового введения адаптогена родиолы розовой сопровождается увеличением уровня лей-энкефалина, мет-энкефалина и р-эндорфина в органах и тканях экспериментальных животных.

2. Адаптация или фармакологические воздействия, вызывавшие увеличение уровня эндогенных опиоидных пептидов, приводят к увеличению устойчивости сердца к аритмзгенным воздействиям.

3. В реализации антиаритмического эффекта адаптации ключевую роль играет д- и к-опиатные рецепторы центральной и периферической локализации. Опиатные рецепторы 5-типа не определяют повышение устойчивости к аритмэгенным воздействиям у адаптированных животных.

4. Активация центральных ц- и 5-опиатных рецепторов способствует повышению устойчивости сердца к аритмзгенным воздействиям. Стимуляция центральных к-опиатных рецепторов, напротив, потенцирует аритмогенные эффекты адреналина и хлористого кальция. В реализации антиаритмических или проаритмических эффектов агонистов ОР при центральном введении ключевую роль играет вегетативная нервная система.

5. Активация периферических ц-опиатных рецепторов повышает резистентность сердца к аритмэгенным воздействиям. Стиь^ляция к-рецепторов путем системного введения селективных агонистов этих рецепторов способствует увеличению устойчивости миокарда к аритмзгенным эффектам адреналина или хлористого кальция. Такой же эффект обеспечивает блокада а-рецепторов. Вегетативная нервная система не.принимает участия в реализации антиаритмических или проаритмических эффектов лигандов опиатных рецепторов при их периферическом введении.

6. Резистентность сердца к стрессорным воздействиям повышается после стимуляций периферических ц-опиатных рецепторов. Активация центральных ц-опиатных рецепторов способствует возникновению стрес-сорных повреждений сердца. Рецепторы о-, б- и к-типа не участвуют в регуляции устойчивости миокарда к стрессорным воздействиям.

7. В реализации кардиопротекторного и антиаритмического эффектов опиоидных пептидов в условиях стресса, экспериментальной коронароокк-люзии и адренергического повреждения сердца важное значение имеют: а) система циклических нуклеотидов; б) система простаноидов в) ингибиро-вание процессов перекисного окисления липидов.

СПИСОК РАБОТ, ОПУШ1КОЁАНШК ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

!. О механизме антистрессорного действия Д - ana2 -лей5 - aprf- энкефа-'шна// Бкщ. экспер. Ополотой и медицины.- 1985,- Н 9,- С. 268 - 270. (с Ю.Б.Лишмановыи .¡ il il.Титовым)

2. Уменьшение степени ишемического повреждения мюкарда путем воздействия на метаболизм циклических нуклеотадов в сердечной шаце// Сменка размера и тактика лечения инфаркта миокарда. Тезисы Всессюз. совещания.- Томск.- 1986.- С.68-69 (с Ю.Б.Липыановьм)

3. Влияние энкефалинов на степень стрессорных и пикал гческлх псЕреж-дений миокарда// Метаболизм, структура и функция сердечной клетт. Тезисы III симп. советской секции Метдунар. общества по изучению сердца,- Баку.- 1986.- С.65. (с Ю.Б.Лшыановг-м, Л.В.Мзслоесй и И.А.Феоктистовым)

4. Влияние Д-ала'-лей~-аргъ-энкефалика на уровень тореоидных rop.s. нов при стрессе, вызванном острой ишемией миокарда// Молодце учение и специалисты - ускорению НТП.- Томск, Изд-во ТГУ.- 1986.- С.40 (с Л.В.Масловой)

5. Об участии циклических нуклеотццов в регуляции уровня энкефалинов в миокарде// Роль циклических нуклеотнцов и вторичных посредников в регуляции ферментативных реакций. Тезисы YI Всесоюз. симпозиума. Петрозаводск, 1988.- С.133 (с Ю.Б.ЛиаианОЕым, А.В.Харьковским) '•

6. Изменение энкефалинов, циклонуклеотидов и простагландинов в шо-карде при его стрессорных и циклических повреадениях// Биохщ.г:я-. медицине. Молекулярные механизмы формирования патологических состояний. Тез. конф. Ленинград, 1988.- С.124 (с Ю.Б.Лшыановым, Л.Й.Масловои, Т.В.Федотовой)

1 7. Уровень энкефалинов и циклических нуклеотидов в сердечной млце при фибрилляции желудочков, вызванной экспериментальные инфарктом миокарда// Бгал. экспер. биологии и медицины 1988,- N10.- С.408-410 (с Ю.Б .Лишлановым)

8. К вопросу об адренергической регуляции метаболизма энкефалинов в миокарде при фибрилляции// Механизмы повреждения и регуляции восстановительных процессов. Тезисы школы-конфер. молодых ученых. Новосибирск, 1988.- С.23 (с А.В.Харьковским и Ю.Б.Липыановьы)

9. Использование радиоизотопных методов для оценки эффективности фармакологической коррекции ишемических и стрессорны: повреждений сердца// Рентгенорадиологические методы исследования при различных патологических состояниях.- Томок,1988.- С.28-32.

10. Некоторые показатели гуморальной регуляции стресса при острой и хронической коронарной // Нарушение механизмов регуляции и их коррекция. Тезисы IV Всесоюз. съезда патофизиологов. Кишинев,1989.- М.,1989.- С.978 (с Ю.Б.Лимоновым)

11. Патогенетическое значение пептидных нейрогормзнов при фибрилляции миокарда, вызванной его острой ишемией// Патология миокарда и аритмии сердца.- Саранск,1989.- С.41-46 (с Ю.Б.Липмановым)

12. Система опиоидных пептидов и адаптация сердца к стрессу// Нарушение механизмов регуляции и их коррекция. Тез. Всесоюз. съезда патофи-

зиологов. Кишинев, 1989. - М., 1989. - С. 613 (с Ю. Б. Лишмановым, Л. В. Масловой, Т. В. Федотовой)

13. К вопросу об адренергической регуляции уровня энкефалинов в миокарде// Вопр. мед. химии.- 1989,- N1,- С.26-29 (с Ю.Б.Липмановым и А. В. Харь ковским)

14. Possible adrenergic and cholinergic mechanisms of myocardial encephalin levels regulation// XIII Congress of Internet. Soc. for Heart Research. The Univ. of Michigan. Ann Arbor. Michigan 48109. May 14-18 1989. Abstr. No.306. Post. No.67. (с Ю.Б.Лшмановым и А.В.Харьковским)

15. Опиоидные пептида в динамике физиологического и "патологического" стресса// Пат. физиология и эксперим. терапия.- 1990. - N4. - С. 7 -9 (с Ю.Б.Липыановым, Л.В. Масловой)

16. Влияние энкефалинов на- активность периферических стресс-лимитируквих систем в процессе развития аритмий, вызванных острой ишемией миокарда// Bonn. ТНЦ. АМН СССР. -1991. - вып. 3. - С. 3-14 (с Ю.Б.Липыановым и Т.¡0.ребровой) .

17. The stress-reaction .jnodulators and anti-arrythmic effect of adaptation to cold and physical training in acute myocardial ishemia in rats// Abstt. of Constituent Congress Intern. Soc. for Pathophysiology.тМ.,1991.-P.241. (abstr.10.1. 02) (c H. А. Барбараш, Ю.Б. Литвиновым, И.Г.Халиулиным)

18. Участие простацикпин/тромбоксановой системы в механизмах предупреждения аритмий, вызванных коронароокклюзией у адаптированных крыс// Boil. экспер. биологии и медицины.- 1991.- N1.-С.16-18 (с И.Г.Халиулиныл, 1\Я.Двуреченской, Н.А, Барбараш, Ю.Б.Липыановым)

19. Об участии' центральных, и периферических мо~ и дельта-опиатных рецепторов В механизмах антааритмического действия энкефалинов// Ехт. экспер. биологии и медицины.- 1991.- N8.- С.124-126 (с Ю. Б.Лишмановым)

20. Опиатные механизма 'адаптационной залиты сердца// Тез. первой науч. конф', молодых ученных НИИК {ТНЦ 'РАМН.- Томск, 1992.- Вып.1.-С.27-29. .

21. Энкефалиновое звено адаптации сердца к аритмзгенному действию ко-ронароокклюзии//Бкш. СО АМН .СССР.-1991.-N2.- С.5-8 (с Липыановым Ю.Б., Филиповым Э.А.,. Масловой Л.В.) •

22. Рси,ь энкефалинов в механизме антиаритмических эффектов адаптации при острой.ишемии миокарда// Вестник РАМН.- 1992.- N3.- С.5-8 (с Лиш-мановым Ю.Б,, Халиулияым И.Г., Барбараш Н.А.)

23. Изменение .уровня опиоидных пептидов в сердце и плазме крови при острой ишемии миокарда, осложненной фибрилляцией желудочков//Вопр. мед. химии.- 1992.- Т.38, N2.- С.21- 23' (С Липмановым Ю.Б.)

24. Использование агониЬтов опиатных рецепторов для профилактики и терапии, экспериментальных ■ аритмий при коронароокклюзии и кардиосклерозе// Профилактика и экспериментальная терапия экстремальных и терминальных состояний.- Омск,1992.- С.77-78 (с Лгсгаановым Ю.Б.)

25. Влияние энкефалинов на активность периферических стресс-лиыитируквдхх ' систем в процессе развития стрессорных и ишемических повреждений сердца// Профилактика и экспериментальная терапия экстре-

мальных и терминальных состоянии.- Сыск,1992.- С.72-74 (с Лишмановым Ю.Б., Реброва Т.Ю.)

26. Одаатергические механизмы предупреждения аритмий при огрессорных и ишеыичгесяих повреждениях сердца// Механизмы патологических реакций.-Гфкутск, 1991.-С.55-56

27. К механизму антиаритмического действия даларгина при экспериментальной ишемии миокарда// Экслерим. и клин, фармакол.- 1992.- T.55,N 2.- С.25-28 (с Липмановым Ю.Е.)

28. Adaptation to cold - risk factor or prophylaxis of ischemic heart disease// Health and Social Problems of the Development of Oil and Gas Fields in Arctic Regions. Abstracts of Iter. Conference (March 28-April 3,1993), Nadym, Russia, 1993.- P.222 (с Халиулиным И. Г., Лишмановым Ю. Б., Барбараш Н. А.)

29. Антиаритмический эффект родиолы розовой и его возможный механизм// Вал. экспер. биологии и медицины.- 1993.- N 8,- С. 175 -176 (с Ю.Б.Лишмановым, Л. В.Масловой, Е.Н.Даньшиной)

30. Cardioprotective and antiarrhythmic activity of enkephalins// XV Annual Scientific Sessions. International'Society for Heart Research, American Section. June 20-24, University of Missuri- Columbia School of Medicine.- 1993.- P59 (с Ю.Б. Лишановым, Т.Ю.Ребровой)

31. Роль опиоидной систеьм в предупреждении ишемических нарушений ритма сердца при адаптации к холоду и • физической нагрузке у крыс// Патол. физиол. и экспер. терапии,- 1992.- N2.- С.25-27- (с Лишмановым Ю.Б., Халиулиным И.Г., Барабаш Н.А., Евтушенко С.Я., №шяевой М.В., Меерсоном Ф.З.)

32. The anti-arrhythmic effect of D-Ala-2,Leu-5,Arg-6- enkephalin and its possible mechanism// Int. J. Cardiol.- 1993.- Vol.40,-N 2.- P.89-94 (с Лишмановым Ю.Б.) .

33. Сравнительный анализ влияния агони^тов' и антагонистов опиатных рецепторов на уровень кортизола, инсулина, тестостерона, при стрессе// Ред. жур. "Проблемы эндокринол." депонирована 23.03.1993г в ВИНИТИ N 734-В (с Ю.Б.Лишмановым) . "

34. Ограничение интенсивности стресс-реакиии в условкйк теста открытого поля посредством адаптации крыс к холоду и физической нагрузке// Я^рнал высшей нервной деятельности им. И.П.Павлова.- 1993.-Т.43,N6.- С.1218-1224 (с Халиулиным И.Г., Лишмановым Ю.В., Барбараш Н.А. )

35. К механизму антиаритыического действия агонистов и антагонистов опиоидных рецепторов//Бюл. экспер. биологии и медицины.-1993.-N8.-С.169-171 (с Лишмановым Ю.Б. и Щзкели Й.И.)

36. Опиатергические механизма антиаритмических эффектов адаптации к стрессу// Тез. докл. VII Всероссийского симпозиума "Эколого-физиологические проблема адаптации", 26-28 апреля 1994, Москва,1994.- С.171 (с Лишмановым Ю.Б., Масловой Л.В., Угдыжековой Д.С.)

37. Кардиопротекторные эффекты адаптогенов растительного происхождения// Бюл. экспер. биологии и медицины.- 1993.- N3.- С.269-271 (с' Масловой Л.В. и Лишмановым Ю.Б.)

38. Опиоидные нейропеп-теды, стресс :t адаптационная зашита сердца.-Томск, Изд-во ТГУ,1994.- 352 с (с Лишмановым Ю.Б.)

39. Иаруизенле биосинтеза белка в миокарде крыс при остром холодо-всм воздействии и его опиоидергическая коррекция// Актуальные пройле-ыы кзрдаололш в 01йири и на Крайнем Севере. Тез. док. региональной конф,- Темень, 1994.- С. 10"? (с Нарыгной Н.В. и Лишмановым Ю.Б.)

40. Некоторые показатели углеводного метаболизма миокарда крыс при остром холояовом воздействкч разной интенсивности// Актуальные проблема кардиолопш в Сибири и на Крайнем Севере, Тез. докл. региональной конф.- Темень,1994.- С.105 (с Ласуковой Т.В. и Лишмановым Ю.Б.)

41. Ро. j центральны;', и периферических опиатных рецепторов в аритмоге-нез<?// Актуальные вопросы кардиологии.- Томск,Иэд-во ТГУ, 1994.-Еып.8.- С.101-104.

42. с<5 участии центральных, опиатных рецепторов в аритмогенезе// Вестник аритмолоши.- 1994.- 113,- С.48-50 (с Линмановым Ю.Б. и Угдьикко-вой Д.С.)

43. о мрдиопротекторной и антиадренергической активности экстракта роднолы розовой при стрессе// Экспертов, и кттинич. фармакол.- 1994. -Т.57, N6. - С. 61-63 (с Массовой Л.В., Кондратьевым Б.Ю., Лишмановым Ю.Б.)

44. Participation of endogenous opioid-peptides in the mechanism of antiarrhythmic effect of adaptation to stress// J. Heart Failure.-1595.- Vol.2, tl 1.- Abstract II 527 (с Липиановым Ю.Б. и К£ылатовым А.В.)

45. Participation of central opiate receptors in the arrhythmogenesis//J. Heart Failure.- 1995,- Vol.2,H 1.- Abstract N 528 (с Ю.Б.Ллнг.иновкм, А.В.Крылатовым и Д.С.Угдыкековс-"!)

46. The antiarrhythmic effect of D-Ala2,Leu5,Arg'i-enkephalin and its possible mechanism// J. Heart Failure.- 1995.- Vol.2,Nl.- Abstract N 803 (с Ю.Б.Лишлановым)

47. Экспериментальное изучение фармакологической активности лигандов опиатных рецепторов на модели адреналовых аритмий// Экспер. и клин, фармакол.- 1995.- Т.58,Н4.~ С.26-28 (с Литвинов Ю.Б. и Угдыжаковой Д.С.)

48. Об участии центральных опийгкых рецепторов в патогенезе адреналовых аритмий// Бол. экспер. биологии и медицины.- 1994.-N9.-Р.143-146 {с Лишмановым Ю.Б. и Угдыгековой Д.С.)

49. Changes in opioid peptide level in the heart and blood plasma during acute myocardial ischaemia complicated by ventricular fibri lation// Clin. Exp. Pharmacol. Physiol. 1995.- Vol.22.- 812-816 (с Лшыановым Ю.Б.)

50. Об антиаритмическом эффекте агонистов ыю-опиатных рецепторов при системном введении// II Съезд Физиологов Сибири и Дальнего Востока. Новосибирск, 15-17 июня 1995 года. Тезисы научных сообщений. Часть X. Новосибирск, 1995.- С.234-235 (с Крьшатовым А.В.)

51. Модуляция энкефалинами биосинтеза миокардиальных белков при остром охлаждении// II Съезд Физиологов Сибири и Дальнего Востока. Новосибирск, 15-17 июня 1995 года. Тезисы научных сообщений. Часть II. Новосибирск, 1995.- С.308-309 (с Нарьшной Н.В.)

52. Влияние опиоидных пептидов на патогенез аритмий// II Съезд Оизио-логов Сибири и Дальнего Востока. Новосибирск, 15-17 июня 1995 года. Тезисы научных сообщений. Часть II. Новосибирск, 1995.- С.442-443 (с Угдыжековой Д.С.)

53. О возможной роли ыю-опиатных рецепторов в аритмзгенезе// Тез. докл. Юбилейной научной конф. НИИ кардиологии. Современные проблемы кардиологии, Томск,1995.- С.57 (с К^ыпатовым А.В.)

54. Об участии центральных и периферических мю- и дельта-опиатных рецепторов в аритаюгенезе//Тез. конф. "Новое- в практику кардиологии", Тюмень,1995.-С.156 (с Угдыжековой Д.С.)

55. Участие лигандов мю- и дельта-опиатных рецепторов в аритмогенезе при системном введении// Тез. конф. "Новое'— в практику кардиологии, Ткмэнь,1995.- С.187 (с К^ылатовым А.В.)

56. Даларгин в условиях острого холодового воздействия предотвращает катаболические нарушения в миокарде// Тез. докл. XI Конгресса Кардиологов Центральной 'Азии, Алматы, 14-16 сентября 1995 г, Алматы, 1995.-С.39 (с Нарьнсной Н.В.)

57. Disturbance of protein synthesis in myocardium of rats in cold stress condition and its correction by enkephalins// 55th World Congress of Pharmacy and Pharmaceutical Scienses,Stockholm, Sweden, August 27-September 1,1995 .- abstr N 582 (с Нарыжной Н.В. и Лишмано-вым Ю.Б.)

58. The antiarrhythmic effect of D-Ala2, Leu5, Ar g6-enkephalin and possible mechanism//J. Heart Failure, Abstracts of the 3rd Inter. Congress on Heart Failure - Mechanisms and Managment, Geneva,May 2125,- 1995.- Vol.2.,N 1.- P.801 (с Лишмановым Ю.Б.)

59. Participation of endogenous opioid peptides in the mechanism of antiarrhythmic effect of adaptation^ to stress// J. Heart Failure, Abstracts of the 3rd Inter. Congress on Heart Failure - Mechanisms and Managment, Geneva,May 21-25, 1995.- Vol.2.,N 1,- P.527 (с Лишма1"! новым Ю.Б., Крылато'вым А.В.)

60. Paticipation of central opiat receptors in the arrhythmogenesis// J. Heart Failure, Abstracts of the 3rd Inter. Congress on Heart Failure -Mechanisms and Managment, Geneva, May 21-25,1995.- Vol.2.,N 1.- P.528 (с Угдыжековой Д.С., Лишмановым Ю.Б.)

61. Influence of opioid receptor ligands on the beginning of arrhythmias during intracerebroventriculas administration// 55th World Congress of Pharmacy and Pharmaceutical Scienses, Stockholm, August 27-Sept. 1,1995.- N abstr 437.

62. Influence agonists of mu- and delta-opioid receptors on the arrhythmogenesis in the systemic administration//55th World Congress of Pharmacy and Pharmaceutical Scienses, Stockholm, August 27-Sept.1,1995.- N abstr 465^ (с А.В.Крьшатовым)

63. об участии эндогенных агонистов мо- и дельта-опиатных рецепторов в механизмах антиариталического эффекта адаптации// Бюл. экспер. биологии и медицины.- 1996.- N 1.-С.24-25 (с К^рьшатовым А.В. и Лшмано-

ЕЫМ Ю.Б. )