Автореферат и диссертация по медицине (14.03.04) на тему:Патогенетические основы медикаментозной коррекции ранних проявлений острого резорбтивного действия ипритов. Развитие концепции эндотоксикоза

На п

ШЕФЕР Тимур Васильевич

Патогенетические основы медикаментозной коррекции ранних проявлений острого резорбтивного действия ипритов. Развитие концепции эндотоксикоза

14.03.04 —токсикология

Автореферат диссертации на соискание учёной степени доктора медицинских наук

1 5 !'ЮЛ Z015 005570604

Санкт-Петербург 2015

005570604

Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном военном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Военно-медицинская академия имени С. М. Кирова» Министерства обороны Российской Федерации

Научный консультант:

доктор медицинских наук профессор Ивницкий Юрий Юрьевич Официальные оппоненты:

Иванов Вячеслав Борисович — доктор медицинских наук, профессор, заместитель начальника управления экспертизы аллергенов, цитокинов и других иммуномодуляторов Центра экспертизы и контроля медицинских иммунобиологических препаратов ФГБУ «Научный центр экспертизы средств медицинского применения» Минздрава России,

Криштопенко Сергей Владимирович — доктор медицинских наук, профессор, заместитель директора гастроэнтерологического центра ГБУЗ Нижегородской области «Нижегородская областная клиническая больница имени Н. А. Семашко»,

Сосюкин Анатолий Евгеньевич — доктор медицинских наук, профессор, заместитель директора по клинической работе ФГУП «Научно-исследовательский институт промышленной и морской медицины» ФМБА России

Ведущая организация:

ФГУП «Научно-исследовательский институт гигиены, профпатологии и экологии человека» ФМБА России

Защита диссертации состоится « 9 » октября 2015 года в « часов на заседании диссертационного совета Д 215.002.11 на базе ФГБВОУ ВПО «Военно-медицинская академия имени С. М. Кирова» МО РФ (194044, г. Санкт-Петербург, ул. Академика Лебедева, 6)

С диссертацией можно ознакомиться в фундаментальной библиотеке ФГБВОУ ВПО «Военно-медицинская академия имени С. М. Кирова» МО РФ и на сайте vmeda.org

Автореферат разослан «.¿Ц] » 2015 года

Учёный секретарь диссертационного совета

доктор медицинских наук

Общая характеристика работы

Актуальность темы исследования. Несмотря на ограничения, налагаемые «Конвенцией о запрещении применения, разработки и накопления химического оружия» (1998), иприты продолжают представлять угрозу как компонент химического оружия и как одно из возможных средств совершения террористических и диверсионных актов [Софронов Г. А. и др., 2011; Geraci М. J., 2008; Wattana М. et al., 2009]. Несмотря на выполнение Российской Федерацией обязательств по уничтожению отравляющих веществ кожно-нарывного действия, в США запасы сернистого иприта до настоящего времени остаются не уничтоженными. Известно около 160 районов Мирового океана, в которых затапливали ёмкости и боеприпасы с отравляющими веществами (ОВ), более половины массы которых составляет сернистый иприт [Missiaen Т., 2010]. Присутствие кораблей и судов Военно-Морского Флота в районах затопления ОВ сопряжено с риском поражения ими личного состава [Белевитин А. Б. и др., 2009; Валь-ский В. В. и др., 2008]. Простота химического синтеза [Франке 3., 1973] и использование в качестве полупродуктов при производстве противоопухолевых лекарственных средств [IARC, 1981; Kawashima Т., 1978] определяют возможность быстрой наработки ипритов в промышленных масштабах.

Способность впитываться в защитное обмундирование, проникать в организм различными путями, «немой» контакт с ипритами [Савицкий Н. Н., 1939] превращают защиту от них в сложную проблему. Медицинские средства противохимической защиты позволяют решать задачу профилактики [Указания по военной токсикологии, 2000] и, в меньшей степени, лечения местных поражений кожи ипритами [Riley, В., 2003]. Однако даже при нелетальных поражениях этими ОВ около 10 % случаев утраты дееспособности обусловлены не возникновением дерматита, а системными проявлениями интоксикации; их доля возрастает до трети с увеличением дозы токсиканта [Sinclair D. С., 1950].

При поступлении в организм ипритов в летальных дозах у поражённых в течение нескольких часов развиваются неврологические нарушения: атаксия и кратковременное возбуждение, сменяющееся угнетением сознания вплоть до комы [Alexander S. F., 1947; Hobbs F. В., 1944; Sinclair D. С., 1948]. При нелетальных дозах неврологические расстройства представлены тошнотой, головной болью, слабостью, рвотой, тремором, головокружением и чувством тревоги [Sinclair D. С., 1950]. Этот синдром (в настоящей работе именуемый ранними проявлениями острого резорбтивного действия ипритов) нередко наблюдался в ходе их недавнего боевого применения [Balali-Mood М. et al., 2005]; его возникновение не исключено и при авариях в ходе обезвреживания боеприпасов, содержащих иприты.

При перкутанном воздействии ипритов неврологические нарушения, как правило, возникают раньше поражений кожи, лимитируя сроки утраты дееспособности личным составом, оказывая глубокое влияние на структуру санитарных потерь и осложняя лечебно-эвакуационные мероприятия. Коррекция этих расстройств невозможна без раскрытия патогенеза ранних проявлений острого резорбтивного действия ипритов.

К настоящему времени достигнуты значительные успехи в исследовании клеточных механизмов ипритной интоксикации [Плужников Н. Н. и др., 2011; Kehe К. et al., 2005]. Однако воздействие на центральную нервную систему (ЦНС) самих ипритов и их метаболитов может дополняться эффектами эндогенных веществ, поступающих в кровь в результате нарушения функций других органов и систем. Данный аспект проблемы является в настоящее время наименее исследованным.

Эндотоксемия — накопление в крови эндогенных биологически активных веществ — характерна для реакции организма на экстремальные воздействия [Лужников Е. А. и др., 2008; Мусселиус С. Г., 2008]. Она играет центральную роль в проявлениях и исходах заболеваний печени, почек и желудочно-кишечного тракта (ЖКТ). Проблема эндотоксикоза (совокупности клинических проявлений эндотоксемии) особенно важна при массовых химических поражениях, когда в силу различных причин медицинская помощь оказывается поздно. Это обусловлено тем, что эндотоксемия отягощает поражение экзогенным токсикантом [Лужников Е. А. и др., 2008; Маткевич В. А., 2012].

В качестве маркёров эндотоксикоза в литературе упоминаются продукты перекисного окисления липидов [Глушков С. И., 2006], ферменты [Усмак-ский М. Я. и др., 1979], «средние молекулы» [Батоцыренов Б. В., 1998; Каряки-на Е. В. и др., 2004; Ливанов Г. А. и др., 2007; Лужников Е. А. и др., 2008], «среднемолекулярные пептиды» [Маткевич В. А., 2012], цитокины [Чер-ний В. И. и др., 2004] и другие. Однако «маркёры» эндотоксикоза, выбранные произвольно, не могут указать патогенетически обоснованные пути коррекции его проявлений; она возможна лишь на основе идентификации места, механизмов образования и роли конкретных веществ, вовлечённых в формирование токсемии. Нерешённость этих вопросов применительно к синдрому ранних проявлений острого резорбтивного действия ипритов определяет актуальность настоящего исследования.

Степень разработанности темы исследования. Источником эндотоксемии при поражениях ипритами считают ткани, поврежденные в месте контакта с ядом [Предтеченский Б. И., 1941]. Однако состав циркулирующих в крови эндогенных токсичных веществ не установлен, что оставляет открьггым вопрос об их происхождении. Известно, что иприты обладают выраженной способностью

нарушать регенерацию и вызывать воспалительное повреждение эпителия, подавлять энергетическое обеспечение пластического обмена. Это определяет возможность нарушения ипритами барьерной функции стенок полых органов (кишечника, мочевого пузыря), а также печени и почек, по отношению к биологически активным веществам, в высокой концентрации содержащимся в химусе и моче, с формированием эндотоксемии.

Можно предположить, что в случае возникновения эндотоксемии в ранние сроки после воздействия ипритов она модифицирует неврологические проявления интоксикации, ускоряет или обусловливает их развитие. Данная гипотеза ранее не формулировалась; следовательно, её проверка не проводилась. Ранние неврологические проявления острой ипритной интоксикации, упоминаемые лишь в единичных публикациях, либо не обсуждаются, либо объясняются исключительно прямым действием иприта на нервную систему. Вследствие этого не разработана система медикаментозной коррекции ранних проявлений острого резорбтивного действия ипритов.

Цель исследования — разработка системы медикаментозной коррекции ранних проявлений острого резорбтивного действия ипритов на основе раскрытия патогенеза этого синдрома.

Для достижения поставленной цели предполагали решить следующие задачи.

1. Выявить проявления интоксикации, лимитирующие сроки сохранения дееспособности человека при различных вариантах острого воздействия ипритов на организм, и условия, при которых такими проявлениями являются острые неврологические расстройства.

2. Разработать экспериментальные модели синдрома ранних проявлений острого резорбтивного действия ипритов, обеспечивающие возможность оценки барьерной функции кишечника и печени по отношению к веществам, содержащимся в кишечном химусе, а также почек и мочевого пузыря — по отношению к веществам, содержащимся в моче.

3. Оценить состояние энтерогематического, урогематического и гисто-гематических барьеров при экспериментальном моделировании синдрома ранних проявлений острого резорбтивного действия ипритов.

4. Выявить химическую природу факторов эндотоксемии и их роль в формировании ранних проявлений острого резорбтивного действия ипритов.

5. Оценить влияние лекарственных средств, относящихся к различным фармакологическим группам, на показатели эндотоксемии при экспериментальном моделировании острой ипритной интоксикации.

6. Оценить эффективность лекарственных средств, препятствующих развитию эндотоксемии, в качестве средств коррекции ранних проявлений острого резорбтивного действия ипритов.

Научная новизна. Раскрыт ранее неизвестный механизм острых неврологических расстройств, развивающихся в ранние сроки после воздействия на организм ипритов в инкапаситирующих дозах, включающий в себя следующую последовательность событий: повышение трансцеллюлярной проницаемости энтерогематического барьера; развитие фульминантной гипераммониемии; увеличение потока аммиака кишечного происхождения в головной мозг; истощение пула кетокислот и обусловленное этим нарушение энергетического обмена в мозговой ткани. В случае острой интоксикации циклофосфаном механизм развития гипераммониемии дополняется увеличением проницаемости уротелия для мочевины, возникновением её уроэнтерогепатической циркуляции и снижением экскреции с мочой аммиака и мочевины.

Впервые показано, что неврологический синдром, развивающийся с участием указанного патогенетического механизма, лимитирует сроки сохранения дееспособности индивидуума при перкутанном воздействии ипритов в сублетальных или летальных дозах.

Теоретическая и практическая значимость работы. Сформулирована научная концепция фульминантной гипераммониемии как ведущего звена патогенеза синдрома ранних проявлений острого резорбтивного действия ипритов. В рамках этой концепции разработана система медикаментозной профилактики ранних проявлений острого резорбтивного действия ипритов.

Результаты диссертационного исследования реализованы в «Методических рекомендациях по медикаментозной профилактике ранних проявлений острого резорбтивного действия алкилирующих веществ» (МР ФМБА России 12.51.12—2012), утвержденных заместителем руководителя Федерального медико-биологического агентства 16 ноября 2012 года.

Рекомендации, разработанные на основе полученных в ходе диссертационного исследования результатов, используются в научной работе в Институте токсикологии ФМБА России, Научно-исследовательском институте промышленной и морской медицины ФМБА России, Военно-медицинской академии имени С. М. Кирова, Научно-исследовательском испытательном институте (военной медицины).

Методология и методы работы. Для получения и систематизации новых знаний о токсическом процессе, вызываемом ипритами, руководствовались принципами исследовательской деятельности: материальности, познаваемости мира, относительности научного знания к методам, средствам исследования и характеру познавательной активности субъекта, минимизации числа допуще-

ний при формулировке гипотез [Касперович Г. И. и др., 2012; Шавров И. Е. и др., 1977], законом достаточного основания становления [Шопенгауэр А., 2011]. В исследовании использовали традиционный для отечественной школы токсикологов экспериментально-физиологический подход, предусматривающий сопоставление проявлений токсического процесса на различных уровнях биологической организации [Павлов И. П., 1950—1952; Пашутин В. В., 1952]. Применяли современные токсикологические, физиологические, биохимические, химические, физические, рентгенологические, статистические методы исследований.

Положения, выносимые на защиту.

1.При остром перкутанном воздействии на человека ипритов в сублетальных и летальных дозах неврологические расстройства носят инкапасити-рующий характер, возникают раньше местных проявлений интоксикации и лимитируют продолжительность дееспособного состояния пострадавших.

2. Неврологические проявления острой ипритной интоксикации, обусловливающие раннюю недееспособность пострадавших: заторможенность, атаксия, мышечная слабость, тремор, судороги,— причинно связаны с фульми-нантной гипераммониемией, развивающейся в это время.

3. Ведущим механизмом фульминантной гипераммониемии ипритной этиологии является интенсификация поступления в кровь аммиака вследствие повышения проницаемости для него энтерогемагического барьера. При воздействии циклофосфана в формирование гипераммониемии вовлечены также повышение проницаемости уротелия для мочевины с возникновением её уроэнте-рогепатической циркуляции и снижение экскреции с мочой аммиака и мочевины.

4. Эффективными мерами медикаментозной коррекции ранних проявлений острого резорбтивного действия ипритов являются применение энтеросор-бентов, средств, нормализующих барьерную функцию кишечной стенки и уротелия, а также функциональных антагонистов аммиака с учётом многообразия проявлений его токсического действия.

Степень достоверности и апробация результатов. Достоверность научных результатов обеспечена репрезентативностью полученных в ходе исследования данных, соблюдением принципов рандомизации при составлении выборок и повторности при планировании экспериментов, корректностью примененных методов исследования и проведённых расчётов.

Основные положения диссертации были представлены на Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные вопросы медицинской науки» (Ярославль, 2010), Всероссийской научно-практической конференции, посвя-щённой 75-летию со для основания Института токсикологии (Санкт-Петербург,

2010), пятой и шестой научно-практических конференциях «Научно-технические аспекты обеспечения безопасности при уничтожении, хранении и транспортировке химического оружия» (Москва, 2010, 2012), научно-практической конференции «Актуальные вопросы промышленной токсикологии» (Москва, 2010), Российской научной конференции с международным участием «Актуальные проблемы токсикологии и радиобиологии» (Санкт-Петербург, 2011), научно-практической конференции «Биомедицина и биомоделирование» (Москва, 2011), северо-западной секции Всероссийского общества токсикологов (Санкт-Петербург, 2013), обсуждены на заседаниях научно-технического совета НИИЦ (МБЗ) НИИИ (ВМ) ВМедА имени С. М. Кирова (2010—2014).

Личный вклад. Замысел диссертационного исследования, его план и содержание разработаны совместно с научным консультантом. Автор самостоятельно разрабатывал экспериментальные методики, планировал и выполнял теоретические и экспериментальные исследования, получал, анализировал и описывал их результаты, формулировал выводы, рекомендации и положения. Часть материалов, представленных в настоящем исследовании, получены при содействии кандидата химических наук К. А. Краснова, К. В. Сивака, кандидата биологических наук Н. П. Подосиновиковой, Н. А. Егоровой, Т. С. Горбачевой, кандидата биологических наук А. А. Сергеева, кандидата медицинских наук А. А. Тяптина, доктора медицинских наук В. Л. Рейнюка; анализу экспериментальных данных способствовало их обсуждение с доктором медицинских наук профессором В. Н. Малаховским. Автор искренне признателен им за бескорыстную помощь.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 30 работ, в том числе 15 — в рецензируемых научных изданиях, рекомендованных ВАК.

Объём и структура диссертации. Диссертация изложена на 309 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, шести глав собственных результатов, их обсуждения, заключения, списков сокращений и условных обозначений, терминов, литературы, трёх приложений. В диссертации приведено 64 таблицы и 50 рисунков. Список литературы содержит 435 библиографических источников, из них 123 отечественных и 312 иностранных публикаций.

Основное содержание работы

Материалы и методы исследования. В экспериментах использовали приобретённых в питомнике «Рапполово» РАМН шесть самцов кроликов массой тела 3,55—4,65 кг, 2500 беспородных самцов и самок крыс-альбиносов массой тела 160—220 г, а также дафний Daphnia magna Straus в возрасте 7 сут.

Иприт крысам вводили п/к в дозах 50, 75 или 100 мг/кг (5,0; 7,5 или 10 ЛД50/14сут), накожно наносили в дозах 0 (контроль), 16, 32 или 192 мг/кг (0; 0,5; 1,0 или 6,0 ЛД50/14 сут)- Кроликам иприт наносили накожно в дозах 200 или 276 мг/кг. ТТА крысам вводили п/к в дозе 25 мг/кг (5,0 ЛД50/м сут)- Циклофос-фан вводили крысам в/б, п/к или в/ж в дозах 200, 600, 1000 или 1400 мг/кг (0,7—5,0 ЛД50,Исуг).

В трихлоруксусных (ТХУ) супернатантах крови аммиак определяли с реактивом Несслера [Barrett J. F., 1935] после перегонки по Конвею [Conway Е. J., 1933], глутамин — по аммиаку после кислотного гидролиза [Whitehead, Т. Р. et al., 1955], мочевину — фотометрически с диацетилмонооксимом, пируват — фотометрически с 2,2-динитрофенолгидразином, содержание эндогенных веществ средней молекулярной массы (ВСММ) — фотометрически при длинах волн 238, 254, 260, 280 и 310 нм, метиленовый синий (MC) — фотометрически при длине волны 670 нм.

В плазме крови эндотоксин определяли в LAL-тесте фотометрически, креатинин — с помощью ЮЕА-стрипов в полуавтоматическом анализаторе Aution Eleven фирмы «Arkray» (Япония), концентрацию аммиака, лактата, активность аланинаминотрансферазы (АлАТ), аспартатаминотрансферазы (АсАТ) и лактатдегидрогеназы (ЛДГ) — фотометрически энзиматическими методами.

В моче крыс, собранной в метаболических камерах, с помощью ЮЕА-стрипов в анализаторе Aution Eleven определяли плотность, pH, содержание альбуминов, глюкозы, кетонов, гемоглобина, лейкоцитов, коллагена; аммиак определяли титрометрически модифицированным методом Конвея; маннитол и лактулозу — методом газовой хроматографии.

В ТХУ-супернатантах лаважного раствора определяли аммиак с реактивом Несслера, глутамин — по аммиаку после кислотного гидролиза.

В фильтрате ТХУ-супернатанта ткани головного мозга определяли лактат фотометрически энзиматическим методом, пируват — фотометрически 2,4-динитрофенилгидразиновым методом, аммиак — с реактивом Несслера после перегонки по Конвею в диффузионной камере, глутамин — по аммиаку после кислотного гидролиза.

Плотность и влагосодержание ткани головного мозга определяли на бромбензол-керосиновом линейном градиенте плотности [Hayazaki, К. et al., 1995; Stefansson Е. et al., 1987]. Содержание красителя Эванса голубого (ЭГ)

определяли в диметилформамидных экстрактах крови и органов фотометрически при длине волны 620 нм.

Потребление кислорода организмом определяли закрытым камерным методом [Ольнянская Р. П. и др., 1959]. Аммиак, выдыхаемый крысами в герметичных камерах, определяли с реактивом Несслера.

Рентгеновские снимки получали на цифровой рентгенографической установке Siemens Iconos R200 (Германия) после в/ж введения крысам 35 %-ной суспензии сульфата бария.

Оценку тяжести поражения кожи после аппликации сернистого иприта проводили по пятибалльной шкале.

При ежечасном обследовании крыс оценивали рефлексы избегания, позы, аудио-моторный, болевой и роговичный, тремор и судороги, мышечную выносливость в тесте «продолжительность виса на решётке спиной книзу» и атаксию в тесте «продолжительность удерживания на стеклянной сфере».

При использовании дафний условия жёсткой гипоксии создавали методом термической деаэрации культивационной воды при атмосферном давлении, что понижало концентрацию растворённого кислорода с 258 до 3 мкМ.

Для оценки влияния вводимых веществ на регистрируемые количественные показатели, как правило, использовали общие линейные модели [R, 2014]. Межгрупповое сравнение средних величин выполняли методом линейных контрастов, выбранных априорно, либо с помощью апостериорных критериев Тьюки или Дуннета [Hothorn Т. et al., 2008]. Значимость межгрупповых различий при невозможности нормализации определяли с помощью критериев Крас-кела-Уоллиса и Манна-Уитни [Mann Н. В. et al., 1947; R, 2014]; значимость межгрупповых различий выживаемости— точным методом Фишера [Ге-нес В. С., 1964; R, 2014]. Корреляционный анализ выполняли методом Спирме-на [R, 2014]. Значимость межгрупповых различий частот качественных признаков интоксикации определяли в точном биномиальном тесте [R, 2014]. Расчёт средних летальных доз (ЛД50) и концентраций (ЛК50) проводили пробит-методом [R, 2014; Venablesand, W. N., 2002]. Межгрупповые различия функций дожития оценивали с использованием критерия Гехана-Вилкоксона [Themeau Т., 2013]. Уровень значимости а приняли равным 0,05.

Результаты исследования и их обсуждение.

Клинические проявления интоксикации, лимитирующие сроки сохранения дееспособности человека при различных вариантах острого воздействия ипритов на организм, и условия, при которых такими проявлениями являются острые неврологические расстройства. Фактором, лимитирующим продолжительность сохранения дееспособности экспонированным человеком, является наиболее раннее из инкапаситирующих проявлений интокси-

кации. Поскольку современный противогаз исключает поражения ипритами глаз и органов дыхания [Sinclair D. С., 1950], роль лимитирующего фактора перешла к кожным и резорбтивным проявлениям интоксикации.

В таблице 1 суммированы литературные данные о сроках различных проявлений инкапаситирующего действия ипритов. Из них следует, что при перку-танном поступлении ипритов в сублетальных дозах в организм человека, находящегося в противогазе и снаряжении, защищающем промежность, ягодицы и подмышечные впадины, диспептический и астено-вегетативный синдромы лимитируют продолжительность сохранения дееспособности пострадавшими. При воздействии ипритов в потенциально летальных дозах наиболее ранними инкапаситирующими проявлениями интоксикации оказываются угнетение сознания, судорожный синдром и шок.

Подобная закономерность прослежена и в эксперименте. После перку-танного воздействия иприта инкапаситирующие ранние резорбтивные эффекты были представлены дозозависимыми неврологическими проявлениями интоксикации. Применение токсиканта в сублетальной дозе вызывало у крыс анорек-сию и отказ от воды; через 2 ч после аппликации иприта в дозе 1 ЛД50/14 сут наблюдали утрату рефлекса избегания, гиподинамию и атаксию; увеличение дозы до 6 ЛД5о/14Сут приводило, кроме того, к постоянному тремору и боковому положению с первого часа интоксикации. Подобную картину наблюдали и у кроликов: нанесение на кожу жидкого иприта в летальных дозах вызывало через 2—3 ч адинамию, отказ от воды и корма; через 3—5 ч развивался тремор, сохранявшийся в течение суток.

Кожные проявления интоксикации у крыс и кроликов в ранние сроки мало зависели от дозы: спустя 2—24 ч после нанесения иприта в местах контакта наблюдали участки побледнения и отёка, окружённые очагами эритемы. Некроз кожи, проявлявшийся язвами и корками, наблюдали не ранее 5 сут после воздействия. Известно, что для крыс и кроликов не характерна буллёзная стадия ипритного дерматита [Toxicological profile for sulfur mustard, 2003], сразу переходящего в язвенную стадию. Поэтому у крыс, подвергнутых перкутанному воздействию иприта в дозе 1 ЛД5ол4сут, изменения кожи, которые можно было бы определить как инкапаситирующие, возникали на 5-е сутки, а при дозе токсиканта 6 ЛД50/14 сут инкапаситирующие проявления острого ипритного дерматита не наблюдались вовсе.

Таблица 1 — Инкапаситирующие проявления острой интоксикации сернистым ипритом в виде пара или тумана и сроки их развития при использовании различных средств индивидуальной защиты (по данным аннотированной литературы)

Токсодоза, Средства Критический орган Клинические Срок развития инкапаси-

мгмин/м защиты или система проявления тирующего состояния

60—100 Нет Орган зрения Конъюнктивит, хемоз, светобоязнь, слезотечение 4—24 ч

>200 Нет Орган зрения Конъюнктивит, блефароспазм 2—12 ч

Средства Верхние Ринорея, лагингит, 3—12 ч

защиты глаз дыхательные пути бронхит

Противогаз Высокочувствительные Буллёзный 2—5 сут

участки кожи (кожа промежности, дерматит

гениталий, подмышеч-

ных впадин, ягодиц)

Противогаз Нервная система Слабость, атаксия, 6—14 ч

+ средства головокружение,

защиты головная боль,

кожи* тошнота, рвота

>400 Противогаз + средства защиты кожи* Нервная система Слабость, атаксия, головокружение, головная боль, тошнота, рвота 1—4 ч

Незащищённые Буллёзный 14—48 ч

участки кожи дерматит

Желудочно-кишечный Диарея, желудочно- 3—4 сут

тракт кишечное кровотечение, боль в животе

Кроветворная Инфекционные 4—14 сут

система осложнения интоксикации

> 10 000 Противогаз Нервная система Угнетение сознания, судорожный синдром, шок 1—4 ч

* — средства защиты высокочувствительных участков кожи

Сопоставление сроков развития неврологических и кожных проявлений отравления жидким ипритом (таблица 2) позволило сделать вывод о более раннем развитии неврологических инкапаситирующих проявлений интоксикации по сравнению с кожными.

Таблица 2 — Сроки развития неврологических и кожных проявлений интоксикации у крыс при накожном нанесении жидкого иприта_

Средний срок возникновения проявлений интоксикации ипритом, ч (медианы, п = 6)

Доза иприта, ДОЛЯ ЛД50/14 сут неврологических кожных, баллы

Анорексия Нарушения двигательной активности (гипокинезия) Арефлексия Нарушения теста «вис» (гиподинамия) Нарушения теста «сфера» (атаксия) Нарушения положения тела Тремор 1 (эритема) 2 (бледность, отек) 3 (язвы, корки)

0 (контроль) Нет Нет

0,5 2 Нет 2 2 120

1 2 Нет 2 2 120

6 2 1 2 2 Нет*

* — некроз кожи отсутствовал вследствие гибели всех крыс через 20—30 ч после нанесения иприта в дозе 6 ЛД50/14 сут

При моделировании острой ипритной интоксикации парентеральным введением ТТА или циклофосфана признаков местного действия токсикантов не отмечали. Через 0,5 ч после п/к введения ТТА в дозе 25 мг/кг (5,0 ЛД50/14сут) у крыс развивалась гипокинезия, отсутствовал рефлекс избегания, начиная с 2 ч наблюдали атаксию и мышечную слабость. Через 2—5 ч появлялся тремор, сменявшийся приступами клонико-тонических судорог у большинства крыс.

В/б введение циклофосфана в дозе 200 мг/кг (0,7 ЛД50/14 сут) не сопровождалось видимыми проявлениями интоксикации в течение 18 ч; в дозе 600 мг/кг (0,7 ЛД5о/14сут) он вызывал прогрессирующие сомноленцию и ступор. Введение токсиканта в дозах 1000—1400 мг/кг приводило к тремору, утрате постурально-го и аудио-моторного рефлексов в ближайшие 3 ч; через 1—6 ч иногда возникали тонические судороги. Циклофосфан ни в одной из доз не вызывал указанные симптомы ранее, чем через 0,5 ч после введения. Интоксикация при п/к или в/ж введении циклофосфана в дозе 1000 мг/кг проявлялась сопором.

Следовательно, при изолированном остром перкутанном воздействии ип-ритов в сублетальных и летальных дозах неврологические расстройства носят инкапаситирующий характер, возникают раньше местных проявлений интоксикации и лимитируют продолжительность дееспособного состояния пострадавших.

Для экспериментального изучения синдрома ранних проявлений острого резорбтивного действия ипритов разработаны его экспериментальные модели. Они предусматривали в/б введение крысам циклофосфана (2,1—5,0 •ДД50/14 сут), п/к введение или накожную аппликацию сернистого иприта крысам или кроликам (0,5—6 ЛД50/Исут) либо азотистого иприта (5,0 ЛД50/14сут) крысам. Целевое патологическое состояние верифицировали путём динамического наблюдения за животными с регистрацией количественных (мышечная сила, выносливость, равновесие, координация движений) и качественных (анорексия, гипокинезия, утрата безусловных рефлексов, тремор, судороги) показателей неврологического статуса. Для оценки барьерной функции кишечника и печени по отношению к веществам, содержащимся в кишечном химусе, а также почек и мочевого пузыря — по отношению к веществам, содержащимся в моче, разработаны нагрузочные пробы — введение тестирующих веществ в просвет полых органов или в кровеносное русло с последующим определением этих веществ и (или) их метаболитов в крови и (или) тканях, пробы, основанные на определении в крови веществ, образуемых в химусе, а также на определении таких веществ в солевом растворе, введённом в брюшинную полость.

Для выявления химической природы факторов эндотоксемии и установления их роли в формировании ранних проявлений острого резорбтивного действия ипритов сопоставляли (1) сроки развития неврологических нарушений со сроками изменений химического состава крови и головного мозга; (2) изменения химического состава крови — с изменениями функционального состояния энтерогематического и урогематического барьеров; (3) симптоматику неврологических расстройств и химический состав крови экспонированных животных при функциональной нагрузке потенциальными факторами эндотоксемии и без таковой.

Существенных различий содержания эндотоксинов в крови крыс, полученной при их декапитации через 4 ч после в/б введения циклофосфана в дозе 600 мг/кг, и контрольных животных выявлено не было (1,11 ±0,43 и 0,80 ±0,34 EU/мл, соответственно, п = 10), что позволило исключить участие эндотоксинов в патогенезе рассматриваемых расстройств. Другой группой эндогенных веществ большой молекулярной массы, причастность которых к развитию эндотоксикоза при повреждении энтерогемматического барьера обсуждается в литературе, являются пищеварительные протеазы [Penn А. Н. et al., 2007; Schmid-Schönbein G. W. et al., 2005]. Однако отсутствие терапевтического влияния контрикала на вызывавшиеся циклофосфаном у крыс острые неврологические расстройства позволило отвергнуть ex juvantibus их существенную роль в патогенезе этих расстройств. Таким образом, гипотеза о ведущей роли веществ большой молекулярной массы, относящихся к пищеварительным фер-

ментам или бактериальным эндотоксинам, в патогенезе синдрома ранних проявлений острого резорбтивного действия ипритов не нашла подтверждения.

Содержание в крови ВСММ традиционно используют в качестве показателя эндотоксемии. В настоящей работе при моделировании на крысах ранних проявлений острого резорбтивного действия ипритов содержание ВСММ в крови было повышено на 19—20 % в сроки, соответствующие выраженным неврологическим расстройствам у экспонированных животных. Однако оно не изменялось под воздействием средств экспериментальной коррекции неврологических расстройств ипритной этиологии: как усугублявших, так и смягчавших эти расстройства. Это позволило отвергнуть гипотезу о существенной роли ВСММ в патогенезе исследуемого синдрома.

Повышение содержания низкомолекулярных азотистых метаболитов: аммиака, глутамина, мочевины и креатинина — в крови крыс и кроликов служило неизменным фоном для моделировавшихся у этих животных ранних проявлений острого резорбтивного действия ипритов.

Иприт, нанесенный крысам на кожу в дозах 16 или 32 мг/кг (0,5 или 1,0 ЛД5о/нсут), не вызывал изменений содержания аммиака, глутамина и мочевины в крови через 1 или 3 ч. В дозе 192 мг/кг (6 ЛД50л4сут) он повышал содержание в крови аммиака в 1,6 раза, глутамина в 1,7 раза и мочевины в 1,4 раза.

Содержание аммиака в крови кроликов, отравленных ипритом в дозе 200 мг/кг, возросло на 32 % за 2 сут, содержание глутамина и мочевины проявляло тенденцию к росту. Воздействие ипритом в большей дозе (276 мг/кг) вызывало более отчетливый рост содержания в крови азотистых метаболитов: аммиака через 48 ч — на 51 %, глутамина через 5 и 24 ч — на 41 и 86 %, соответственно, мочевины через 48 ч— в 2,1 раза. Кролики, содержание рассматриваемых веществ в крови которых было больше, чем у других, погибали в более ранние сроки.

Подкожное введение крысам иприта в дозе 50 мг/кг или ТТА в дозе 25 мг/кг приводило через 3 ч к росту содержания в крови аммиака (в 6,3 и 5,3 раза), глутамина (в 1,9 и 2,0 раза) и мочевины (в 1,6 и 1,8 раза, соответственно). Снижались отношения глутамина к аммиаку (в 4,1 и 2,9 раза) и мочевины к аммиаку (в 4,7 и 3,2 раза, соответственно).

Через 1, 3 и 5 ч после в/б введения циклофосфана в дозе 1000 мг/кг содержание аммиака в крови крыс было повышено в 2,8; 3,9 и 3,8 раза; после п/к введения —■ в 1,9; 2,6; 3,2 раза и после в/ж введения— в 2,1; 2,1 и 2,3 раза. Содержание глутамина и мочевины увеличивалось в меньшей степени. Ввиду незначительности изменений гематокрита, перечисленные изменения невозможно объяснить гемоконцентрацией (рисунок 1).

0,4 0,3 0,2 ОД 20

I 15

10

14

I* и/б т 4,5

чу*

П/к . .А* | |4,0

.А*-"' 1 ! "х* 3,5

/1 /> %...... г',-' [ г .Д*.1!м 3,0

2,5

0 1 3 5

50л

){*

В/б/ 45

уГи/к.. = 40-

I

- Н/;к.. ■у

1 35

0 3 5

30

25

5 20

15

10

140 120 5 юо З1 80

* П/к"-"* 1 60

__1 о

ЗГвТб т* £ 40

0 1 3 5 0 1 3 5

Срок после введения цнклофосфана, ч

Рисунок 1 — Содержание аммиака, глутамина и мочевины в крови и гематокрит (Ш) у крыс (М ±ш, п = 6) после в/б, п/к или в/ж введения цнклофосфана в дозе 1000 мг/кг. * — различие с контрольной группой значимо, р < 0,05

Совпадение сроков развития гипераммониемии и неврологических нарушений при экспериментальном моделировании ранних проявлений острого ре-зорбтивного действия ипритов, сходство симптомов отравлений ипритами и аммиаком позволили предположить, что ряд клинических проявлений ипритной интоксикации (заторможенность, атаксия, мышечная слабость, тремор, судороги) мог быть обусловлен гипераммониемией.

Эту гипотезу подвергли прямой проверке, исследовав влияние энтераль-ной нагрузки солью аммония на уровень аммиака в крови и головном мозгу, с одной стороны, и на проявления острых отравлений ипритами, с другой, в ус-

ловиях экспериментального моделирования синдрома ранних неврологических расстройств ипритной этиологии.

При острой интоксикации циклофосфаном (2,1—5,0 ЛД5о/мсут) усугубление гипераммониемии у крыс путём в/ж введения ацетата аммония в дозе 12 ммоль/кг, не влиявшей на внешний вид и поведение интактных животных, резко отягощало их состояние, усугубляя симптомы, характерные для отравления как ипритами, так и солями аммония: гипокинезию, адинамию, чередующуюся с периодическим возбуждением, атаксию, тремор, сменявшиеся описто-тонусом и апноэ (рисунок 2). Продолжительность жизни при этом дозозависи-мо снижалась в 1,5—6,1 раза (рисунок 3, слева).

Введенные „ „ ,п

До введения Через 30 мин

вещества

ЦФ + АА

Рисунок 2 — Влияние ацетата аммония (АА, в/ж, 12 ммоль/кг) симптоматику острой интоксикации циклофосфаном (ЦФ, в/б, 1000 мг/кг)

Внутрижелудочное введение крысам ацетата аммония (12 ммоль/кг) на фоне острой интоксикации сернистым ипритом (5—10 ЛД5о/14сут) вел0 к отягощению неврологических проявлений интоксикации и дозозависимому сокращению средней продолжительности жизни животных в 1,2—1,5 раза (рисунок 3, справа).

Рисунок 3 — Влияние ацетата аммония (АА, в/ж, 12 ммоль/кг) на СПЖ крыс (М ±ш) после последующего введения циклофосфана в/б (слева, n = 11) или сернистого иприта п/к (справа, п = 7). * — различие с группой «ацетат натрия» значимо, р < 0,05

Через 3 ч после введения циклофосфана (в/б, 600 мг/кг) или ацетата аммония (в/ж, 12 ммоль/кг) в плазме крови крыс содержание аммиака возрастало в 1,9 и 1,5 раза, соответственно. Содержание пирувата в плазме крови было в 1,5 раза меньше, чем у интактных животных, составлявших контрольную группу. После сочетанного применения токсикантов повышение уровня аммиака в плазме крови было 2,4-кратным, падение уровня пирувата — 2,4-кратным, лак-

тата— 1,5-кратным; отношение ^^у возросло в 1,6 раза. Однонаправленные изменения содержания молочной и пировиноградной кислот выявлены и в ткани головного мозга: под влиянием циклофосфана, ацетата аммония и обоих токсикантов содержание лактата было в 1,9; 1,3 и 1,5 раза, содержание пирувата— в 1,4; 1,7 и 2,2 раза, соответственно, меньше, чем в контроле. Отношение Глактзт]

[пируват] в ткани головного мозга крыс, получивших циклофосфан и ацетат аммония, возросло в 1,7 раза по сравнению с таковым у интактных животных, составлявших контрольную группу.

В головном мозгу крыс, получивших только ацетат аммония, был повышен в 1,3 раза уровень аммиака, но не глутамина. При изолированном применении и на фоне нагрузки солью аммония циклофосфан вызывал рост содержания как аммиака (в 1,3 и 1,5 раза), так и глутамина (в 1,2 и 1,3 раза, соответственно).

Плотность тканей головного мозга крыс оставалась неизменной через 3 ч после введениям им ацетата аммония. Введение животным циклофосфана приводило к увеличению плотности ткани фронтопариетальной коры на 0,94 %о, ткани коры мозжечка — на 1,55 %о. После применения циклофосфана на фоне повышенного пула аммиака в желудочно-кишечном тракте плотность фронтопариетальной коры и коры мозжечка изменилась в большей (на 1,23 и 1,86 %о, соответственно).

Как следует из этих данных, увеличение пула желудочно-кишечного аммиака на порядок, достигавшееся в/ж введением крысам ацетата аммония в дозе 12 ммоль/кг, усиливало гипераммониемический эффект циклофосфана, интенсифицировало накопление в головном мозгу аммиака и продукта его обезвреживания — глутамина — и, в эти же сроки, усугубляло основные неврологические проявления острого резорбтивного действия ипритов.

В эксперименте на дафниях токсичность ацетата аммония существенно возрастала при гипоксии (рисунок 4). Из этого следует, что роль аммонийного иона в патогенезе неврологических расстройств может возрастать в условиях энергетического дефицита, характерного для тяжёлых отравлений ипритами.

Рисунок 4 — Динамика летальных исходов у дафний при воздействии гипоксии либо её сочетаний с ацетатом натрия (АН) или ацетатом аммония (АА) в концентрациях, составляющих в нормоксических условиях 0,01 ЛК50/24Ч * — различие с группой «Гипоксия» значимо, р = 0,00001; — различие с группой «Гипоксия + АН» значимо, р = 0,0029

Для оценки состояния энтерогематнческого, урогематического и гистогематических барьеров при моделировании синдрома ранних проявлений острого резорбтивного действия ипритов исследовали их проницаемость для экзогенных красителей, лактулозы и Б-маннитола.

Однократное в/б введение крысам циклофосфана в дозе 600 мг/кг вело к глубокому нарушению барьерной функции тонкой кишки в отношении гидрофильных ВСММ. На это указывало возрастание в 2,6 раза содержания МС в портальной крови через 3 ч после его введения в желудок, т. е. в сроки, когда значительная часть красителя содержалась в тонкой кишке, но ещё не достигала толстой. У животных, получивших МС на фоне введения циклофосфана, печень окрашивалась более интенсивно, чем у крыс, получавших только МС.

Вероятные механизмы ускоренного накопления МС в крови и печени раскрыты с помощью лактулозо-маннитолового теста. В течение 4 ч после в/б введения циклофосфана концентрация лактулозы и маннитола в моче животных, которым эти углеводы были введены в желудок, имела тенденцию к увеличению. У крыс, получивших циклофосфан, сумма концентраций лактулозы

и маннитола была в 1,5, а коэффициент [^^д]— в 2,2 раза выше, чем

в контроле, что отражает нарушение барьерных свойств эпителия слизистой оболочки тонкой кишки преимущественно за счёт увеличения его парацеллю-лярной проницаемости.

Моделирование синдрома ранних проявлений острого резорбтивного действия ипритов с помощью циклофосфана сопровождалось ростом концентрации в крови красителя ЭГ, введённого в/ж в дозе 50 мг/кг. Через 3 ч после введения токсиканта и красителя она в 36 раз превышала контрольный уровень. В этот же срок видимые участки кожи и слизистых оболочек крыс приобретали синий оттенок. При вскрытии крыс, получивших только краситель, было видно ярко-синее содержимое желудка и кишечника, просвечивавшее сквозь стенки этих органов, однако остальные органы были окрашены обычно. Внутренние органы и серозные оболочки крыс, получивших одновременно с ЭГ циклофосфан, приобрели синий цвет.

Для оценки проницаемости гистогематических барьеров органов сравнивали прирост содержания красителя в органах с приростом его содержания в крови под влиянием циклофосфана. Прирост содержания ЭГ во всех исследованных органах был многократным, однако, за исключением лёгких, меньшим, чем прирост содержания красителя в крови (рисунок 5).

Кровь Головной Легкие Печень Почки Подвздошная мозг кишка

Рисунок 5 —• Влияние циклофосфана (ЦФ) на содержание в крови и органах крыс красителя Эванса голубого (ЭГ), М ±т, п = 4. ЦФ (в/б, 600 мг/кг) и ЭГ (в/ж, 50 мг/кг) вводили одновременно за 3 ч до исследования.

Все различия между группами «ЭГ» и «ЭГ + ЦФ» значимы, р < 0,01

При в/в введении красителя ЭГ в той же дозе его содержание в крови через 3 ч после воздействия циклофосфана было на 33 % меньшим, чем у крыс, получавших только ЭГ. В головном мозгу и почках содержание красителя под влиянием циклофосфана уменьшилось на 23 и 46 %, соответственно. Накопление красителя интенсифицировалось лишь в подвздошной кишке и лёгких. Таким образом, вызванные циклофосфаном изменения интенсивности накопления ЭГ в головном мозгу при в/ж и в/в введении были противоположными по знаку. Из этого следует, что нарушение барьерных свойств кишечника было основным условием интенсификации накопления красителя в головном мозгу при моделировании ранних проявлений острого резорбтивного действия ипритов. Состояние гистогематических барьеров внутренних органов, исключая лёгкие и тонкую кишку, не оказывало существенного влияния на вызывавшиеся циклофосфаном изменения накопления красителя в этих органах.

В случае введения ЭГ в полость мочевого пузыря на фоне применения циклофосфана (в/б, 600 мг/кг) наблюдали пятикратную интенсификацию нако-

„ „_ мкмоль _

пления красителя в крови: 2,63 ±0,25 против 0,52 ±0,05 Л.М|Ш ■ Прирост содержания красителя в лёгких, печени и подвздошной кишке был меньшим, чем в крови, а в головном мозгу и почках отмечена лишь тенденция к росту содержа-

ния ЭГ, поэтому интенсификация его накопления в головном мозгу и внутренних органах может быть объяснена увеличением концентрации ЭГ в плазме крови, без привлечения гипотезы о нарушении проницаемости для красителя гистогематических барьеров исследованных органов.

Для проникновения через уротелий веществ средней молекулярной массы, к каковым относится ЭГ, характерен, преимущественно, парацеллюлярный механизм [Rubenwolf Р. et al., 2011], предполагающий нарушение плотных межклеточных контактов уротелиоцитов, предшествующее их десквамации [Veranic Р. et al., 2000]. Поэтому полученные данные указывают на формирование такого нарушения уже к 3 ч после введения циклофосфана в использовавшейся дозе. Причиной накопления красителя в органах было резкое повышение его уровня в крови. Следовательно, циклофосфан избирательно повреждал эн-терогематический и урогематический барьеры, существенно не влияя на проницаемость для красителя ГЭБ.

В ходе исследования выдвинута гипотеза о возможности диффузии аммиака из просвета ЖКТ не только в портальную кровь, но и в перитонеальную полость и далее в субперитонеальные сосуды бассейна задней полой вены в обход печени. На такой механизм указывает ускорявшееся под влиянием циклофосфана накопление аммиака в солевом растворе, вводившимся крысам в/б (таблица 3). Происхождение этого аммиака было скорее желудочно-кишечное, чем тканевое, поскольку его конечная концентрация в солевом растворе была выше, чем в крови. Это говорит о том, что желудочно-кишечный аммиак, попавший в брюшинную полость, имеет возможность диффундировать в субперитонеальные кровеносные сосуды. Вызванное циклофосфаном повреждение стенки пищеварительного тракта могло быть обусловлено цитолизом, на который указывает повышение уровня АлАТ, АсАТ и ЛДГ в плазме крови в 1,6; 2,1 и 4,9 раза, соответственно, после введения циклофосфана в дозе 1000 мг/кг в сочетании с недостаточным синтезом глутамина, на который указывает сни-

[глн] „

жение отношения p^+j в лаважном растворе. Таким образом, ускоренное накопление аммиака в лаважном растворе и повышенный уровень аммиака в кау-дальном сегменте задней полой вены отражают интенсификациию транспери-тонеальной диффузии аммиака у животных, отравленных циклофосфаном.

Введение крысам циклофосфана в дозах 200, 600 или 1000 мг/кг вело к развитию азотемии. Наиболее отчётливое дозозависимое нарастание аммо-ниемии отмечали через 3 ч, когда уровень аммиака в портальной крови вырос в 1,4; 1,8 и 2,5 раза, соответственно. Уровень аммиака в крови из v. cava caud. каудальнее впадения vv. renales повысился в 1,5; 2,1 и 3,3 раза, а краниальнее vv. hepaticae — в 1,8; 2,7 и 4,2 раза, соответственно.

Таблица 3 — Накопление аммиака и глутамина в изотоническом солевом растворе, введённом крысам внутрибрюшинно через 2,5 ч после циклофосфана (М ± m, п = 6)

Доза циклофосфана, мг/кг Объём раствора, мл/кг Концентрация в растворе, мМ Скорость накопления ммоль в растворе,

аммиака глутамина аммиака глутамина

0 40,2 ±2,5 0,112 ± 0,014 0,679 ± 0,051 0,146± 0,013 0,912 ± 0,097

200 42,7 ±0,6 0,099 ± 0,009 0,652 i 0,038 0,141 ¿0,014 0,929 ± 0,059

600 51,5 ±2,5* 0,235 ± 0,046* 0,890 i 0,057* 0,407 ± 0,082* 1,527 ± 0,114*

1000 59,3 ±3,3* 0,480 ± 0,054* 1,095 i 0,086* 0,927 i 0,083* 2,130 ± 0,130*

* — различие с контрольной группой значимо, р < 0,05

Через 3 ч после введения циклофосфана в дозе 600 или 1000мг/кг положительный порто-кавальный градиент концентрации аммиака исчезал, но отрицательный порто-кавальный градиент концентрации мочевины сохранялся. Накопление в крови глутамина и мочевины отставало от гипераммони-емии: в течение 3 ч после введения циклофосфана в дозах 200, 600 или 1000 мг/кг отношение концентраций глутамина и аммиака в крови из краниального сегмента v. cava caud. снижалось в 1,9; 1,6 или 2 раза, а мочевины и аммиака— в 1,5; 1,6 или 2,8 раза, соответственно.

Через 18 ч после введения токсиканта в дозе 600 мг/кг сохранялась гипе-раммониемия, которая сопровождалась значительным увеличением содержания глутамина и мочевины в крови; отношение концентраций глутамина и аммиака в крови из v. cava caud. повышалось в 1,6—1,8 раза.

Таким образом, ведущим механизмом фульминантной гипераммониемии ипритной этиологии является интенсификация поступления в кровь аммиака вследствие повышения проницаемости для него энтерогематического барьера.

Для оценки диффузионного сопротивления уротелия потокам аммиака и мочевины мочевой пузырь заполняли растворами, по концентрации аммиака или мочевины превосходившими нормальную мочу на порядок. В крови ин-тактных животных после инсталляции раствора ацетата аммония содержание аммиака быстро нарастало, через 30 мин 13-кратно превышая исходный уровень, в то время как после инсталляции раствора мочевины ни уровень мочевины, ни уровень аммиака в крови существенно не изменялись.

Вливание в мочевой пузырь раствора мочевины вело к нарастанию содержания как самой мочевины, так и аммиака в крови крыс, подвергшихся воздействию циклофосфана, на 26 и 16 %, соответственно. У животных, не полу-

чавших циклофосфан, инстилляция мочевины в мочевой пузырь не вела к существенным изменениям этих показателей азотемии.

Высокая проницаемость уротелия интактных крыс для аммиака при введении в мочевой пузырь концентрированного раствора соли аммония объясняет неожиданный, на первый взгляд, результат, заключавшийся в отсутствии существенного влияния циклофосфана на поток аммиака из просвета мочевого пузыря в кровь. Очевидно, такой результат был артефактом, обусловленным тем, что на фоне достигнутой максимальной скорости поступления аммиака через уротелий в кровь влияние на его кинетику циклофосфана могло маскироваться. В то же время отчётливо выявлялось вызывавшееся циклофосфаном нарушение барьерной функции уротелия по отношению к мочевине.

Повышение концентрации мочевины в плазме крови после инсталляции раствора мочевины в мочевой пузырь крыс, получивших циклофосфан, согласно первому закону диффузии, ускоряло её поступление по градиенту концентрации в просвет желудочно-кишечного тракта, где она служит субстратом бактериальной уреазы. В результате энтерогепатической циркуляции мочевины [Jones Е. А. et al., 1969] в желудочно-кишечном тракте крыс до 2/з всего аммиака образуется при разложении бактериальной уреазой мочевины, диффундирующей в люминальное пространство из крови; скорость уреолиза лимитирована доступностью мочевины [Kim К. et al., 1998]. На фоне острой интоксикации циклофосфаном рост продукции аммиака из мочевины в кишечном химусе в сочетании с увеличением проницаемости для аммиака энтерогематического барьера представляется одним из механизмов развития гипераммониемии. Таким образом, полученные данные отражают возникновение уроэнтерогепатиче-ской циркуляции мочевины у крыс при моделировании синдрома ранних проявлений резорбтивного действия ипритов с помощью циклофосфана.

Помимо описанных выше перераспределительных механизмов, в развитии гипераммониемии у животных при моделировании с помощью циклофосфана ранних проявлений острого резорбтивного действия ипритов определённую роль могла иметь задержка выведения аммиака из организма с мочой, калом и выдыхаемым воздухом. В частности, выявлено уменьшение экскреции с мочой мочевины и аммиака в 3,5 и 3,2 раза, соответственно, на фоне появления признаков патологической проницаемости почечных клубочков (альбуминурия, лейкоцитурия, гемоглобинурия) и деструкции канальцев (глюкозурия, коллагенурия, гиперстенурия), что может свидетельствовать о возможности ре-тенционного механизма развития гиперазотемии при этом состоянии. Однако транспорту аммиака из мочи в кровь препятствовало закисление конечной мочи в 5,6 раза, ведущее к соответствующему уменьшению доли аммиака, находящегося в высокопенетрантной неионизированной форме. Из этого следует, что на-

рушение функций почек не является ведущим звеном патогенеза гипераммо-ниемии ипритной этиологии.

В условиях резкого угнетения перистальтики кишечника нарушается его эвакуаторная функция и, возможно, экскреция с калом продуктов азотистого обмена. Как показало рентгеновское исследование, в течение 3 ч бариевая взвесь, введённая в желудок интактных крыс, успевала опуститься до бауги-ниевой заслонки. Отмена этого продвижения после в/б или в/ж введении цик-лофосфана (рисунок 6) означает, что толстая кишка недополучала некоторое количество субстратов для протекающих в ней аммиакпродуцирующих процессов. Аммониогенез в химусе тонкой кишки тоже протекает, но его интенсивность на порядок меньше, чем в химусе толстой кишки [Kim К. et al., 1998], поэтому замедление перистальтики могло оказывать тормозящее влияние на образование аммиака в кишечнике и аммониемию в рассматриваемые сроки. Гипотезе о существенном вкладе угнетения перистальтики в развитие гипераммо-ниемии при острой ипритной интоксикации противоречит следующее наблюдение. При в/ж введении циклофосфана желудочно-кишечный стаз был выражен в наибольшей мере, в то время как гипераммониемия — в наименьшей (рисунок 1). Из этого следует, что и желудочно-кишечный стаз не является ведущим звеном патогенеза гипераммониемии ипритной этиологии.

Не были причиной развития гипераммониемии в этих условиях и нарушения газообмена. Интенсивность экскреции аммиака с выдыхаемым воздухом после в/б введения циклофосфана (600 мг/кг) существенно не изменялась, а на фоне в/ж введения ацетата аммония в дозе 12 ммоль/кг возрастала в 2,8 раза при отсутствии существенных изменений интенсивности газообмена, оценивавшихся по потреблению кислорода организмом, что указывает на отсутствие ограничений выделения аммиака лёгкими.

Таким образом, ведущими механизмами гипераммониемии в период ранних проявлений острого резорбтивного действия ипритов являются интенсификация трансперитонеальной диффузии аммиака из желудочно-кишечного тракта в бассейн каудальной полой вены в обход печени, отставание синтеза глута-мина и мочевины в печени от возросшего поступления аммиака в бассейн воротной вены. При воздействии циклофосфана в формирование гипераммониемии вовлечены также повышение проницаемости уротелия для мочевины с возникновением её уроэнтерогепатической циркуляции и снижение экскреции с мочой аммиака и мочевины.

Экспериментальная группа

Контроль

ей

6-

щ

ей Л Е-

О Ж

Л

<=з

О)

к

Оч

аз

03

а) &

К С

4 а; сс ь

О

Желудок

Двенадцатиперстная кишка

Тощая кишка

Слепая кишка

Нисходящая ободочная, и прямая кишки

В/б

П/к

В/ж

13333

зззз

3333 3333 3333 3333

1 3 5 25 1 3 5 25 1 3 5 25 1 3 5 25 Срок после введения циклофосфана и сульфата бария, ч

Рисунок 6 — Влияние циклофосфана (1000 мг/кг) на прохождение бариевой взвеси по пищеварительному тракту крысы.

Тон кружков пропорционален степени затенения на рентгенограмме, обусловленного контрастным веществом. Белые кружки — отсутствие сульфата бария в соответствующем отделе ЖКТ

Для разработки системы медикаментозной коррекции ранних проявлений острого резорбтивного действия ипритов экспериментально оценивали влияние препаратов, относящихся к различным фармакологическим группам, на показатели эндотоксемии при экспериментальном моделировании острой ипритной интоксикации и оценивали их эффективность в качестве средств коррекции ранних проявлений острого резорбтивного действия ипритов. В качестве средств экспериментальной коррекции ранних неврологических расстройств ипритной этиологии апробированы препараты, предложенные в рамках гипотез цитотоксичности ипритов; направленные на подавление образования или связывание аммиака в кишечном химусе; направленные

на восстановление барьерных функций кишечника, печени, уротелия; ослабляющие метаболические или синаптические эффекты аммиака.

Препараты, апробированные в расчёте на подавление образования аммиака в кишечном химусе (0,1 н. растворы серной, соляной, молочной, борной кислот) при отравлении циклофосфаном усугубляли гиперазотемию и оказали отрицательное влияние на симптоматику и исход интоксикации циклофосфаном в дозах 0,7—3,6 ЛД50. Введение растворов серной, соляной, молочной или борной кислот приводило к сокращению СПЖ крыс, получивших циклофосфан в дозе 3,6 ЛД50, на 15, 15, 28, 29 %, соответственно. Несмотря на то, что ожидаемое снижение аммиакпродуцирующей активности химуса действительно имело место, применение этих препаратов сопровождалось интенсификацией диффузии аммиака из просвета желудочно-кишечного трата как в портальную кровь, так и, в меньшей степени, в кровь задней полой вены. Содержание аммиака в портальной крови возрастало в 2,1—2,2 раза, уменьшалось отношение концентраций глутамина и мочевины к концентрации аммиака. Наиболее вероятной причиной этих изменений явилось усиление поражения стенки тонкой кишки за счёт увеличения скорости гидролиза альдофосфамида, транспортной формы циклофосфана, в кислой среде с образованием более активных алкили-рующих метаболитов: фосфорамидного иприта и nop-HN2 [Anderson L. W. et al„ 1996; Domeyer В. E. et al., 1980; Yu L. et al„ 1999].

Введение лактулозы, ацидифицирующее химус толстой, а не чувствительной к циклофосфану тонкой кишки, существенно не влияло на уровень эн-дотоксемии и тяжесть интоксикации отравленных циклофосфаном крыс. Полученные данные не поддерживают исходное допущение о возможности благоприятного влияния средств, снижающих pH кишечного химуса, на кинетику аммиака и функциональное состояние организма при тяжелых отравлениях ип-ритами.

Не оказывало положительного влияния на неврологический статус крыс при экспериментальном моделировании синдрома ранних проявлений острого резорбтивного действия ипритов и профилактическое в/ж введение гечтамици-на в дозе 40 мг/кг, применённого в расчёте на подавление образования аммиака в химусе; препаратов — источников интермедиатов цикла Кребса: сукцината, а-кетоглутарата или цитрата натрия (5 ммоль/кг), мексидола, цитофлафина (0,85 ммоль/кг по сукцинату), назначавшихся для восполнения пула этих метаболитов; препаратов — источников интермедиатов цикла мочевины: аргинина (5 ммоль/кг) или Гепа-Мерц (2 г/кг), назначавшихся для поддержания аммиак-обезвреживающей функции печени; серосодержащих препаратов: тиосульфата натрия (3 г/кг), унитиола (1 г/кг), цистамина (150 мг/кг), месны (600 мг/кг), предназначавшихся для химической нейтрализации ипритов и их алкилирую-

щих метаболитов, борьбы с нарушением тиол-кальциевого гомеостаза и «окси-дативным стрессом»; антиоксиданта корвитина (208 мг/кг), ингибитора протео-лиза контрикала (50 ООО АТрЕд/кг), анатагониста серотонина латрана (4 мг/кг), вазоконстриктора мезатона (1—4 мг/кг), блокатора ЫМЭА-рецепторов кетами-на (5 или 50 мг/кг). Это не позволило рекомендовать указанные препараты в качестве средств коррекции ранних неврологических проявлений резорбтив-ного действия ипритов.

На фоне применения энтеросорбента полифепана (1 г/кг в/ж) за 3 ч до циклофосфана (600 мг/кг в/б) уровень аммиака крови через 3 ч после введения токсиканта был в 1,44 раза ниже, а соотношение ^^— в 1,18 раза выше,

чем у крыс, получавших только циклофосфан. Введение полифепана увеличивало продолжительность удерживания животных на сфере на 29 % и продолжительность виса на 23 %; продолжительность жизни имела тенденцию к увеличению. Это свидетельствует о перспективности энтеросорбции в качестве мероприятия, направленного на профилактику ранних проявлений острого ре-зорбтивного действия ипритов путём коррекции гипераммониемии.

Противовоспалительные средства при отравлении циклофосфаном оказывали существенное влияние на показатели обмена аммиака в крови воротной вены: дексаметазон (1 мг/кг), преднизолон (5 мг/кг), диклофенак натрия (30 мг/кг) и Ь-карнитин (16 ммоль/кг) уменьшали содержание аммиака в 1,4; 1,6; 1,7 и 1,8 раза, соответственно, а Ь-карнитин, кроме того, увеличивал коэффициентное 1,9 раза по сравнению с животными, получившими только циклофосфан.

Дексаметазон (10 мг/кг) в трансдермальной лекарственной форме, применявшейся тотчас после введения циклофосфана в дозах 600 или 1000 мг/кг, уменьшал содержание аммиака в крови в 1,5 раза и глутамина в 1,64 раза в сравнении с животными, не получавшими лечения. Выявлено корригирующее влияние препарата на уровень мочевины, а также на суммарное содержание в крови аммиака, глутамина и мочевины при отравлении циклофосфаном.

При острой интоксикации сернистым ипритом гипераммониемию уменьшали дексаметазон, диклофенак натрия и Ь-карнитин (в 1,6; 1,3 и 1,4 раза, соответственно), а при введении ТТА — только дексаметазон (в 1,6 раза). При

отравлении ипритом дексаметазон увеличивал коэффициент в 1,5

раза, а при отравлении ТТА — 1,4 раза. Другие испытанные препараты

на указанные коэффициенты существенного влияния не оказывали. Ни одно

из испытанных профилактических средств на предотвращало повышение содержания ВСММ в крови крыс, отравленных ипритом или ТТА.

L-Карнитин, введённый в/ж за 3 ч до циклофосфана, увеличивал среднюю и суммарную продолжительность виса отравленных животных в 2,0 и 2,4 раза, соответственно. У диклофенака натрия, дексаметазона, преднизолона, пара-аминосалицилата натрия эти эффекты были представлены в виде тенденции; препараты отсрочивали на 2—3 ч сопор, у крыс, лишённых профилактики, возникавший через 3—4 ч. Ни одно из испытанных противовоспалительных средств не оказывало существенного влияния на продолжительность жизни животных.

Для оптимизации схем применения противовоспалительных средств по дозам и срокам введения были выполнены дополнительные эксперименты. Наиболее эффективными при в/ж введении крысам препараты оказались в дозах: дексаметазон — 1 мг/кг, преднизолон — 5 мг/кг, L-карнитин — 16ммоль/кг. Введение большинства препаратов за 1 ч было более эффективным, чем введение за 3 ч до токсиканта.

Зависимость неврологических проявлений интоксикации и СПЖ от дозы циклофосфана была исследована на фоне применения каждого из противовоспалительных средств (дексаметазон, преднизолон, диклофенак натрия, пара-аминосалицилат натрия, L-карнитин), вводимых в/ж за 1 ч до циклофосфана.

Циклофосфан в дозе 200 мг/кг через 20—30 мин после в/б введения вызывал у половины крыс оглушение; в дозах 600—1000 мг/кг — у всех оглушение, аза 1,5—1,0 ч до гибели — сопор; в дозе 1400 мг/кг — у всех сопор. У некоторых крыс за 0,5 ч до гибели регистрировали кому.

Дексаметазон, преднизолон, вольтарен и L-карнитин замедляли развитие угнетения ЦНС у животных, отравленных циклофосфаном в дозе 1000 мг/кг: сопор у крыс, получивших эти препараты, развивался через 4—6 ч после введения токсиканта, а у крыс без профилактики — через 3—4 ч.

Средняя продолжительность виса в ближайшие часы после введения циклофосфана в дозе 200 мг/кг не отличалась от значений, показанных интактными животными (более 2 мин). При дозе 1400 мг/кг у крыс не только наступала адинамия, но и всегда отсутствовал хватательный рефлекс; на этом фоне профилактический эффект противовоспалительных средств по использовавшимся показателям неврологического статуса не отмечали.

Положительное влияние на продолжительность виса при отравлениии циклофосфаном в дозах 600 или 1000 мг/кг оказали в разной степени все испытанные средства. Продолжительность виса была максимальной на фоне применения L-карнитина: при дозе циклофосфана 600 мг/кг она превышала кон-

трольный уровень в 1,6 раза, при дозе 1000 мг/кг — в 3,6 раза. Для других препаратов увеличение продолжительности виса проявлялось в виде тенденции.

Более сложным для выполнения оказался тест удерживания на стеклянной сфере: в первые 3 ч после введения циклофосфана в дозе 200 мг/кг её продолжительность составляла 2—4 с; в дозе 600 мг/кг — 1,0—2,5 с; в дозе 1000 мг/кг — около 0,5 с; в дозе 1400 мг/кг — совокупность атаксии и адинамии не позволяла крысам удерживаться на сфере.

Влияние испытанных противовоспалительных средств на способность сохранять равновесие проявилось в диапазоне доз циклофосфана 200— 1000 мг/кг: все различия с соответствующей контрольной группой, получившей только циклофосфан, были значимы. Наиболее выраженный эффект оказали дексаметазон, диклофенак натрия и L-карнитин, увеличившие продолжительность удерживания на сфере в 2,6; 2,4 и 2,6 раза при дозе циклофосфана 200 мг/кг, в 3,1; 3,9 и 3,7 раза при дозе 600 мг/кг и в 7,0; 6,7 и 7,9 раз, при дозе 1000 мг/кг, соответственно.

Значимого влияния средств, обладающих противовоспалительными свойствами, на продолжительность жизни животных, отравленных циклофосфаном в дозах 200—1000 мг/кг, выявить не удалось, хотя каждое из таких средств демонстрировало положительную тенденцию. Наиболее выраженной она была у L-карнитина, дексаметазона и преднизолона.

Большую эффективность при отравлении циклофосфаном дексаметазон проявлял при применении его в дозе 10 мг/кг в трансдермальной лекарственной форме. Под влиянием препарата средняя продолжительность виса отравленных крыс на перевёрнутой решётке увеличилась в 1,3 или 2,5 раза, средняя продолжительность жизни — в 1,4 раза при дозах циклофосфана 600 или 1000 мг/кг, соответственно; средняя продолжительность удерживания на стеклянной сфере возросла в 1,6; 1,6 или 3,0 раза при дозах токсиканта 200, 600 или 1000 мг/кг (рисунки 7 и 8).

Дексаметазон, применённый в трансдермальной лекарственной форме тотчас после п/к введения иприта, увеличивал продолжительность удерживания на сфере и продолжительности виса на решётке, уменьшал продолжительность эпизодов тремора (в 1,4; 1,3 и 1,6 раза, соответственно). При в/ж введении за 1 ч до иприта или ТТА дексаметазон увеличивал продолжительность удерживания на сфере (в 1,7 или 2,2 раза) и продолжительности виса на решётке (в 1,5 или 3,3 раза, соответственно), уменьшал продолжительность эпизодов тремора в случае иприта 1,8 раза, а в случае ТТА — частоту развития тремора на 50 % и судорог на 50 %; увеличение СПЖ было на грани значимости. Эти же показатели имели тенденцию к улучшению и под влиянием диклофенака натрия или L-карнитина.

<а 16

Доза циклофосфана, мг/кг Доза циклофосфана, мг/кг

Рисунок 7 — Влияние дексаметазона в трансдермальной лекарственной форме, применяемого тотчас после циклофосфана, на продолжительность виса крыс на перевёрнутой решётке и удерживания на стеклянной сфере (М ±ш, п = 6) * — Различие с контрольными животными значимо, р < 0,05

—1--г '

200 600 1000

Доза циклофосфана, мг/кг

Рисунок 8 — Влияние дексаметазона в трансдермальной лекарственной форме, применяемого тотчас после циклофосфана, на среднюю продолжительность

жизни (М ±ш, п = 6) * — Различие с контрольными животными значимо, р < 0,05

Все эффективные противовоспалительные средства ослабляли вызывавшиеся циклофосфаном неблагоприятные изменения азотистого обмена: повышение содержания в крови аммиака и, в меньшей мере, мочевины и глутамина. При этом наиболее существенно снижалась концентрация аммиака в портальной крови (в 1,4—1,8 раза), что указывает на лучшую, чем у контрольных животных, сохранность барьерной функции слизистой оболочки желудочно-кишечного тракта в отношении аммиака. Помимо гипоаммониемиче-

ского действия, Ь-карнитин способен препятствовть реализации токсического действия иона аммония, что следует из уменьшения чувствительности дафний к ацетату аммония в присутствии Ь-карнитина (рисунок 9).

1,оо

■е-

§ 0,25 -

100 300 500 800 1000 1200

Концентрация ацетата аммония, мг/л

|-1-1-1-г-

100 300 500 800 1000 1200 Концентрация ацетата аммония, мг/л

Рисунок 9 — Зависимость летальности дафний от концентрации в среде ацетата аммония в присутствии Ь-карнитина в концентрации 1 г/л. Экспериментальные данные обозначены окружностями (контроль) и кружками (Ь-карнитин); графики аппроксимирующих функций — сплошными (контроль) и прерывистыми (Ь-карнитин) линиями.

Влияние Ь-карнитина значимо для срока наблюдения 24 ч, р = 0,00085

На фоне применения сока подорожника (в/ж, 4 мл/кг) и циклофосфана (в/б, 600 мг/кг, через 1 ч после средства профилактики) гипераммониемия была в 1,52 раза менее выражена, чем у крыс, получавших только циклофосфан,

а соотношения и

[мочевина] [МН4]

проявляли тенденцию к росту.

На фоне применения сока подорожника продолжительность виса отравленных циклофосфаном крыс на перевёрнутой решётке была на 20, а продолжительность жизни — на 30 % больше, чем у животных, лишённых профилактики; наблюдали тенденцию к увеличению средней продолжительности удерживания на стеклянной сфере. Такой результат согласуется с данными о профилактическом действии сока подорожника в отношении поражений ЖКТ при химиотерапии опухолей [Ярёменко К. В., 2007].

Введение иприта в дозе 50 мг/кг (5 ЛД50/14сут) или ТТА в дозе 25 мг/кг (5 ЛД50/Исут) приводило к росту содержания аммиака в крови в 6,3 и 5,3 раза, соответственно. Снижались отношения глутамина к аммиаку (в 4,1 и 2,9 раза) и мочевины к аммиаку (в 4,7 и 3,2 раза, соответственно); возрастало содержание ВСММ в крови. Панангин уменьшал уровень аммиака в 1,5 или 1,2 раза

на фоне введения иприта или ТТЛ, соответственно. Ни на коэффициенты ^"Jj

и ни на содержание ВСММ в крови крыс, отравленных ипритом или

ТТА, панангнн не оказывал существенного влияния.

В/ж введение крысам официнального раствора панангина в дозах 2,5 или 5,0 мл/кг за 1 ч до циклофосфана (600 мг/кг в/б) увеличивало продолжительность удерживания на сфере (на 55 или 63 %) и продолжительность виса (на 19 или 23 %, соответственно); при дозе панангина 1,25 мл/кг различия этих показателей с контрольными не были значимыми. Продолжительность жизни крыс, получивших панангнн, имела тенденцию к увеличению. При проверке полученных данных в условиях воздействия циклофосфана в дозе 1000 мг/кг применение панангина в дозе 2,5 мл/кг (что соответствовало 904 мг/кг аспартата калия и 800 мг/кг аспартата магния) также было эффективным: продолжительность удерживания на сфере превышала контрольное значение в 13, а продолжительность виса — в 11,7 раза; продолжительность жизни существенно не изменялась.

Через 0,5—1,0 ч после п/к введения иприта в дозе 50 мг/кг (5 ДД50/14суг) у всех крыс развивалась гипокинезия, через 2—3 ч отсутствовал рефлекс избегания, появлялся тремор, атаксия (по тесту удерживания на стеклянной сфере) и гиподинамия (по тесту виса на решётке). Профилактическое применение панангина при отравлении ипритом не предотвращало развитие тремора, но приводило к увеличению продолжительности удерживания на стеклянной сфере в 1,65 раза, продолжительности виса на решётке в 1,43 раза и продолжительности жизни в 1,81 раза.

Влияние панангина (при введении за 1 ч до токсиканта) на неврологические проявления отравлении ТТА в дозе 25 мг/кг (5 ЛД50/14сут) проявлялось в виде тенденции к увеличению продолжительности удерживания на стеклянной сфере и продолжительности виса на решётке.

На фоне применения панангина наблюдалось снижение уровня аммиака в крови крыс, отравленных сернистым или азотистым ипритом, в 1,5 и 1,2, соответственно, в сравнении с животными, не получавшими профилактики. Возможным объяснением этого эффекта служит эссенциальная роль ионов магния в глутаминсинтезной реакции, протекающей в энтероцитах [Reeds P. J. et al., 2001]. Влияние препарата на ранние проявления острого резорбтивного действия ипритов можно объяснить, кроме того, мембраностабилизирующим действием ионов магния и калия, их антагонистическими отношениями с ионами кальция, способностью регулировать моторику ЖКТ [Машковский М. Д., 2012]. Препараты магния способны устранять метаболические и синаптические

последствия гипераммониемии: проявляют противосудорожное действие, уменьшают возбудимость нейронов, устраняют дефицит магния в тканях [Машковский М. Д., 2012], связывают избыток ионов аммония в трипельфосфат [Козлов Н. Б., 1971]. L-Аспарагинат-ионы могут участвовать в транспорте ионов калия и магния в цитозоль, а также в переносе восстановительных эквивалентов через митохондриальные мембраны в малат-аспартатном шунте [Ле-нинджер А., 1985; Хочачка П. и др., 1988] и тем самым препятствовать нарушению продукции АТФ, отмечаемому при интоксикациях ипритами [Nelson М. R. et al., 2000].

Для оценки влияния ингибиторов АДФРТ на показатели эндотоксемии при отравлении ипритами никотинамид вводили в/ж в дозе 0,25 ммоль/кг в виде водного раствора в конечном объёме 20 мл/кг за 1 ч до токсиканта. Через 3 ч после введения иприта или ТТА определяли уровень азотистых метаболитов и ВСММ в крови, полученной при декапитации. Никотинамид не оказывал существенного влияния на эти показатели.

Применение никотинамида в дозе 0,25 ммоль/кг за 1 ч до введения цик-лофосфана в дозе 1000 мг/кг было высокоэффективным: продолжительность удерживания на сфере превышала контрольное значение в 16,9 раза, а продолжительность виса — в 9,6 раза, хотя продолжительность жизни существенно не изменялась.

Профилактическое применение никотинамида (за 1 ч до токсиканта) при отравлениях ипритом в дозе 50 мг/кг или ТТА в дозе 25 мг/кг не влияло на продолжительность удерживания на стеклянной сфере, продолжительность виса на решётке и продолжительность жизни, но предотвращало развитие тремора и судорог у 50 % крыс.

Учитывая, что никотинамид существенно не влиял на показатели эндотоксемии, можно предположить основную роль ингибирования поли-(АФД)-рибозилирования и предотвращения убыли НАД+ в механизме корригирующего действия этого препарата на неврологический статус при острой ипритной интоксикации.

Полученные данные свидетельствуют о том, что полифепан, сок подорожника, дексаметазон, преднизолон, диклофенак натрия, L-карнитин, панан-гин могут рассматриваться в качестве средств коррекции нарушений кинетики аммиака при острых отравлениях ипритами и ранних неврологических проявлений резорбтивного действия ипритов. Никотинамид может рассматриваться в качестве средства коррекции токсических эффектов, но не кинетики аммиака при отравлениях ипритами.

Применение каждого из средств экспериментальной коррекции, способствовавших нормализации содержания аммиака в крови животных в ранние

сроки острой тяжёлой интоксикации ипритами: полифепана, Ь-карнитина, дек-саметазона, преднизолона, диклофенака натрия, сока подорожника, пананги-на, — препятствовало снижению мышечной силы и выносливости, утрате способности поддерживать равновесие, координировать движения, уменьшало выраженность судорожного синдрома и (или) увеличивало продолжительность жизни животных. В то же время, ни одно из эффективных средств существенно не влияло на уровень ВСММ в крови отравленных животных. Эти данные поддерживают гипотезу о существенной роли аммиака, но не ВСММ, в патогенезе эндотоксикоза при острой ипритной интоксикации.

Таким образом, разработана система медикаментозной коррекции ранних проявлений острого резорбтивного действия ипритов, включающая профилактическое применение энтеросорбентов (полифепан), средств, нормализующих барьерную функцию кишечной стенки и уротелия (сок подорожника, Ь-карнитин, дексаметазон, преднизолон, диклофенак), функциональных антагонистов ионов аммония (панангин, никотинамид), а также применение декса-метазона в трансдермальной лекарственной форме в режиме экстренной профилактики.

Заключение

Итоги выполненного исследования. Анализ литературных данных показал, что в условиях применения современных противогазов и средств защиты высокочувствительных к ипритам участков кожи продолжительность дееспособного состояния поражённых лимитирована сроком развития неврологических расстройств, совокупность которых обозначена в настоящей работе как синдром ранних проявлений острого резорбтивного действия ипритов. Отсутствие доказательств рефлекторной или инфекционной природы данного синдрома, данных о накоплении ипритов в головном мозгу в ранние сроки интоксикации позволило выдвинуть гипотезу об эндотоксикозе как основной патогенетической сущности синдрома ранних проявлений острого резорбтивного действия ипритов. Вторая гипотеза заключалась в компрометации энтерогематиче-ского и (или) урогематического барьеров как ведущем механизме эндотоксемии в период развития ранних проявлений острого резорбтивного действия ипритов.

Для раскрытия патогенеза и путей профилактики ранних проявлений острого резорбтивного действия ипритов были разработаны экспериментальные модели, позволившие воспроизвести у лабораторных животных основные локомоторные проявления данного синдрома (адинамия, атаксия, тремор, судороги, снижение мышечной силы и выносливости), исследовать лежащие в его основе изменения барьерной функции кишечника, печени, почек, мочевого пузы-

ря, обосновать выбор средств медикаментозной профилактики выявленных нарушений.

Установлено, что патогенез синдрома ранних проявлений острого резор-бтивного действия ипритов включает в себя следующую последовательность событий: повышение трансцеллюлярной проницаемости энтерогематического барьера; развитие фульминантной гипераммониемии; увеличение потока аммиака кишечного происхождения в головной мозг; истощение пула кетокислот и обусловленное этим нарушение энергетического обмена в мозговой ткани. В случае острой интоксикации циклофосфаном механизм развития гипераммониемии дополняется увеличением проницаемости уротелия для мочевины, возникновением её уроэнтерогепатической циркуляции и снижением экскреции с мочой аммиака и мочевины.

В эксперименте на крысах увеличение в пределах физиологического интервала значений люминального пула аммиака пищеварительного тракта усугубляло вызванные ипритами гипераммониемию, метаболические расстройства в ткани головного мозга, ранние неврологические проявления интоксикации, резко сокращало продолжительность жизни. Снижение уровня аммиака в крови путём применения лекарственных средств, напротив, вело к ослаблению раних неврологических расстройств и увеличивало СПЖ отравленных ипритами животных. Это позволило сформулировать положение о том, что неврологические проявления острой ипритной интоксикации, обусловливающие раннюю недееспособность пострадавших: заторможенность, атаксия, мышечная слабость, тремор, судороги, — причинно связаны с фульминантной гипераммониемией, развивающейся в это время.

На основе раскрытия патогенеза ранних проявлений острого резорбтив-ного действия ипритов разработана система медикаментозной коррекции этого синдрома, включающая профилактическое применение энтеросорбентов, средств, нормализующих барьерную функцию кишечной стенки и уротелия, функциональных антагонистов ионов аммония, а также применение дексамета-зона в трансдермальной лекарственной форме в режиме экстренной профилактики.

С использованием результатов исследования разработана схема применения лекарственных средств для профилактики ранних проявлений острого ре-зорбтивного действия алкилирующих веществ у личного состава объектов по хранению и уничтожению химического оружия, Министерства по чрезвычайным ситуациям, а также при высокодозной цитостатической терапии производными азотистого иприта, изложенная в методических рекомендациях «Медикаментозная профилактика ранних проявлений острого резорбтивного действия алкилирующих веществ» МР ФМБА России 12.52.12—2012, утверждённых

и введённых в действие заместителем руководителя Федерального медико-биологического агентства России 16 ноября 2012 г.

Выводы.

1. Неврологические проявления острого резорбтивного действия ипритов на человека: нарушения сознания (сомноленция, сопор или кома), двигательные (атаксия, адинамия, тремор, судороги) и вегетативные нарушения (астения, тошнота, рвота, диарея, головная боль, головокружение, шок) предшествуют инкапаситирующим проявлениям местного действия ипритов на кожу; при воздействии ипритов в потенциально летальных дозах эти симптомы могут быть единственными клиническими проявлениями острой интоксикации. При перку-танном поступлении ипритов в сублетальных дозах в организм человека, находящегося в противогазе и снаряжении, защищающем промежность, ягодицы и подмышечные впадины, наиболее ранними инкапаситирующими проявлениями интоксикации являются диспептический и астено-вегетативный синдромы, а при воздействии токсикантов в потенциально летальных дозах — угнетение сознания, судорожный синдром и шок.

2. При остром перкутанном воздействии иприта в интервале доз 0,5— 6,0 ДД5о/14суг на крыс у них развивались дозозависимые острые неврологические расстройства, проявлявшиеся анорексией, гипокинезией, угасанием безусловных рефлексов, тремором, судорогами, снижением мышечной силы и выносливости, нарушением равновесия и координации движений; перечисленные расстройства возникали через 1—6 ч после воздействия, т. е. задолго до некроза кожи, начальные проявления которого наблюдали не ранее чем через 5 сут после воздействия.

3. Моделирование на крысах и кроликах синдрома ранних проявлений острого резорбтивного действия ипритов подкожным или перкутанным введением сернистого, азотистого ипритов в летальных дозах или парентеральным введением циклофосфана сопровождалось возрастанием содержания в крови экспериментальных животных аммиака (в 1,5—6,3 раза), глутамина (в 1,4—2,0 раза), мочевины (в 1,4—2,1 раза) и эндогенных веществ средней молекулярной массы (в 1,2—1,3 раза) при отсутствии существенных изменений содержания бактериальных эндотоксинов в плазме крови.

4. При острой интоксикации циклофосфаном в дозах 2,1—5,0 ЛД50/|4Сут усугубление гипераммониемии у крыс путём внутрижелудочного введения им ацетата аммония в дозе 12ммоль/кг, не изменявшей внешнего вида и поведения интактных животных, резко отягощало их состояние, усугубляя симптомы, характерные для отравления как ипритами, так и солями аммония в летальных дозах: гипокинезию, адинамию, чередующуюся с периодическим возбуждением, атаксию, тремор, сменявшиеся опистотонусом и апноэ; продолжительность

жизни экспонированных животных при этом дозозависимо снижалась в 1,5— 6,1 раза. Внутрижелудочное введение крысам ацетата аммония в дозе 12 ммоль/кг на фоне острой интоксикации сернистым ипритом в дозах 5— 10ЛД5о/14суг вело к отягощению неврологических проявлений интоксикации и дозозависимому сокращению средней продолжительности жизни животных в 1,2—1,5 раза.

5. Введение крысам циклофосфана в дозе 2,1 ЛД50/14 Сут> позволявшей моделировать синдром ранних проявлений острого резорбтивного действия ипри-тов, сопровождалось накоплением в крови и в ткани головного мозга аммиака и глутамина, увеличением плотности ткани мозга при одновременном снижении содержания в ней пировиноградной и молочной кислот; одновременно увеличивались отношения содержания лактата и пирувата в крови и ткани мозга; накопление аммиака в ткани мозга отставало от повышения его концентрации в плазме крови. Перечисленные изменения, свидетельствующие об интенсификации поступления в головной мозг аммиака из крови, истощении тканевого пула пирувата и развитии гипоксии, усугублялись при одновременном внутрижелу-дочном введении животным ацетата аммония в дозе 12 ммоль/кг.

6. В эксперименте на дафниях продемонстрирована возможность потенцирования острого нейротоксического действия аммиака в условиях острой гипоксии. Внесение в инкубационную среду пирувата натрия (0,1 ЛК50ТОч) или Ь-карнитина (1 г/л), на треть снижало значение ЛК5од4ч ацетата аммония для дафний, не оказывая существенного влияния на величину ЛК50/72ч ацетата аммония.

7. При моделировании на крысах синдрома ранних проявлений острого резорбтивного действия ипритов путём ввведения циклофосфана в дозе 2,1 ЛД50/14 сут краситель метиленовый синий, введённый внутрижелудочно, поступал в портальную кровь в 2,6 раза более интенсивно, чем у интактных животных, что сопровождалось более интенсивным накоплением красителя в печени. Внутрижелудочное введение красителя Эванса голубого крысам, отравленным циклофосфаном в дозе 2,1 ЛД5о/14Сут, сопровождалось накоплением красителя в крови со скоростью, в 36 раз большей, чем у интактных животных. При этом накопление красителя в головном мозгу было обусловлено повышением его концентрации в плазме крови и лимитировалось проницаемостью для красителя энтерогематического барьера при отсутствии существенных изменений гематоэнцефалического барьера. На фоне воздействия циклофосфана в дозе 2,1 ЛД50/14сут внутрижелудочное введение крысам лактулозы и маннитола сопровождалось более интенсивным накоплением этих углеводов в моче, чем у интактных животных. Накопление в моче лактулозы интенсифицировалось более значительно, чем маннитола что указывает на сочетанный характер на-

рушения барьерной функции кишечной стенки с преимущественным увеличением парацеллюлярной проницаемости.

8. При моделировании на крысах ранних проявлений острого резорбтивного действия ипритов путём введения циклофосфана в дозе 3,6 ЛД50д4сут азотемия, проявлявшаяся повышением содержания в крови аммиака, глутамина и мочевины в 4,0; 1,9 и 1,8 раза, соответственно, развивалась на фоне умеренных проявлений цитолиза (повышения активности АлАТ, АсАТ и ЛДГ в плазме крови в 1,6; 2,1 и 4,9 раза, соответственно) и гемоконцентрации (повышение гематокри-та в 1,3 раза), однако не являлась следствием гемоконцентрации.

9. Введение крысам циклофосфана в дозах 0,7; 2,1 или 3,6 ЛД50/14сут вело к дозозависимому нарастанию содержания аммиака, глутамина и мочевины в крови воротной (до 2,5 раз) и задней полой вен (до 4,2 раз) в сроки, соответствующие быстрому нарастанию у экспонированных животных тяжести неврологических расстройств; при дозах 2,1 или 3,6 ЛД5ол4сут положительный порто-кавальный градиент концентрации аммиака исчезал, но отрицательный порто-кавальный градиент концентрации мочевины сохранялся; накопление аммиака в изотоническом солевом растворе, введённом в/б, при дозе 3,6 ЛД50/14сут превышало контрольный уровень в 6,4 раза, что отражало преимущественно трансперитонеальный механизм интенсификации поступления аммиака из желудочно-кишечного тракта в кровь.

10. Через 3 ч после воздействия циклофосфана в дозе 2,1 ЛД5о/14суг инсталляция в мочевой пузырь крыс низкомолекулярных веществ сопровождалась более интенсивным, чем у интактных животных, поступлением этих веществ в бассейн задней полой вены: накопление в крови красителя Эванса голубого интенсифицировалось в 5 раз; появлялась проницаемость уротелия для мочевины, отсутствовавшая у интактных животных. У крыс, отравленных цшслофос-фаном, инсталляция в мочевой пузырь мочевины сопровождалось дальнейшим повышением уровня аммиака в крови.

11. В течение 4 ч после воздействия циклофосфана в дозе 2,1 ЛД50/|4сут у крыс появлялись признаки нарушения функции урогематического барьера почек: повышение проницаемости почечных клубочков (концентрация альбуминов в моче превышала контрольный уровень в 2,5 раза, содержание в моче лейкоцитов — более чем в 31 раз, появлялась гемоглобинурия) и деструкции канальцев (концентрация в моче коллагена возросла в 352 раза, глюкозы — в 134 раза, плотность мочи — на 1 % по сравнению с контролем).

12. В ближайшие часы после введения циклофосфана в дозах 2,1 или 3,6 ЛД50/14сут У крыс наблюдали рентгенологические признаки желудочно-кишечного стаза, а также изменения экскреторной функции почек, разнонаправленно влияющие на уровень аммиака в крови животных: с одной стороны,

трёх-четырёхкратное торможение выведения с мочой из организма аммиака и мочевины, а с другой — шестикратное снижение доли аммиака мочи, пребывающего в высокопенетрантной неионизированной форме. В это же время не выявлены ограничения поступления аммиака из организма в атмосферный воздух, которые могли бы способствовать развитию гипераммониемии.

13. Внутрижелудочное введение соляной, серной или борной кислот в дозах, не влиявших на уровень аммиака в крови, внешний вид и поведение интактных крыс, усугубляло гипераммониемию, потенцировало проявления острой интоксикации и сокращало продолжительность жизни у крыс, экспонированных цик-лофосфану в дозах 2,1 или 3,6 ЛД5о/и сут- Введение лактулозы в этих условиях не изменяло вызванной циклофосфаном интенсификации утечки аммиака и ВСММ из желудочно-кишечного тракта в кровь и не влияло на тяжесть интоксикации.

14. Профилактическое внутрижелудочное введение энтеросорбента полифе-пана в дозе 1 г/кг или сока подорожника в дозе 4 мл официнального раствора на 1 кг массы тела ограничивало развитие гиперамониемии у крыс при острой интоксикации циклофосфаном в дозе 3,6 ЛД50/14сут; при этом у экспонированных животных улучшались показатели мышечной силы, выносливости, координации движений, увеличивалась продолжительность жизни.

15. Профилактическое применение противовоспалительных средств (декса-метазона в дозе 1 мг/кг, преднизолона в дозе 5 мг/кг, диклофенака в дозе 30 мг/кг, Ь-карнитина в дозе 16 ммоль/кг внутрижелудочно) или терапевтическое применение дексаметазона в дозе 1 мг/кг в трансдермальной лекарственной форме улучшало показатели мышечной силы, выносливости, координации движений, увеличивало продолжительность жизни животных при моделировании ранних проявлений острого резорбтивного действия ипритов. Применение перечисленных лекарственных средств вело к снижению содержания в крови экспонированных животных аммиака, но не веществ средней молекулярной массы.

16. Профилактическое внутрижелудочное введение крысам панангина в дозе 2,5 мл официнального раствора на 1 кг массы тела частично предупреждало развитие гипераммониемии при острой интоксикации сернистым или азотистым ипритом в дозе 5,0 ЛД50/,4сут, не влияя на содержание веществ средней молекулярной массы в крови; при этом частично предупреждались вызванные ипритами острые неврологические расстройства: снижение мышечной силы и выносливости, нарушение равновесия и координации движений; увеличивалась продолжительность жизни животных. Профилактическое внутрижелудочное введение крысам никотинамида в дозе 0,25 ммоль/кг, но не бензамида или никотиновой кислоты, препятствовало нарушениям равновесия и координации

движений у крыс при острой интоксикации циклофосфаном, сернистым или азотистым ипритом в дозах 2,1—5,0 ЛД5о/и сут-

Пракгические рекомендации.

1. Для медицинского обеспечения работ, сопряжённых с повышенным риском воздействия ипритов на личный состав, в комплекты медицинского имущества, предназначенные для оказания первой и доврачебной помощи (аптечки АППС-ТХИ, АППИ, АППГ, сумки СПП и СФВ), включать средства экстренной профилактики ранних проявлений острого резорбтивного действия ипритов: полифепан, таблетированные формы дексаметазона (или преднизолона, или диклофенака).

2. Лицам, в плановом порядке привлекаемым к работам, сопряжённым с повышенным риском воздействия ипритов, назначать внутрь панангин (по 3 таблетки 3 раза в день) или никотинамид (по 100—150 мг 3 раза в день).

3. Лицам, в экстренном порядке привлекаемым к работам, сопряжённым с повышенным риском воздействия ипритов, за 1—3 ч до либо тотчас после предполагаемого контакта с токсикантом назначать внутрь дексамегазон (6— 8 мг) или преднизолон (40 мг) или, при наличии противопоказаний к применению глюкокортикоидов, — диклофенак (75 мг) либо полифепан (40—80 г, размешав в 100—200 мл воды) за 3 ч до либо тотчас после предполагаемого воздействия. С целью экстренной профилактики целесообразно назначение дексаметазона в дозе 10—15 мг в трансдермальной лекарственной форме (после его включения в Государственный реестр лекарственных средств).

4. Пациентам в период подготовки к применению лекарственных средств, относящихся к ипритам, в режиме миелоабляции, назначать внутрь лекарственные средства согласно пунктам 2, 3 и сок подорожника (по 1 столовой ложке, разведённой в V* стакана воды, 3 раза в день за 15—30 мин до еды) либо препараты Ь-карнитина (8 г в день).

5. Разработанную экспериментальную модель ранних проявлений острого резорбтивного действия ипритов следует использовать для скрининга инновационных лекарственных форм средств фармакопрофилактики и фармакотерапии острой ипритной интоксикации.

Перспективы дальнейшей разработки темы. На основе концепции патогенеза ранних проявлений резорбтивного действия ипритов, с использованием экспериментальных моделей, разработанных в настоящей работе, возможно выявление других факторов эндотоксемии, причастных к формированию неврологических или иных расстройств ипритной этиологии.

Разработанная экспериментальная модель ранних проявлений острого резорбтивного действия ипритов позволит ускорить скрининг инновационных ле-

карственных форм средств фармакопрофилактики и фармакотерапии острой ипритной интоксикации.

Остаётся невыясненным вопрос о действующем начале сока подорожника, обусловливающем его корригирующее действие на аммониемию и неврологический статус при острой ипритной интоксикации. Изучение состава сока подорожника и разработка способов концентрирования его действующих веществ может помочь создать новый препарат с энтеропротекторными свойствами.

Порядок применения средств коррекции неврологических расстройств у пациентов, получающих химиотерапию лекарственными средствами, относящимися к ипритам, может потребовать уточнения с учётом особенностей формирования эндотоксемии, связанных с особенностями курсовых режимов применения этих цитостатиков.

Можно предположить, что, помимо испытанных, и другие средства, препятствующие нарушению барьерной функции кишечной стенки и (или) моче-пузырного уротелия будут корригировать острые неврологические расстройства ипритной этиологии. Можно ожидать лечебной эффективности от применения в ранние сроки ипритной интоксикации перитонеального или кишечного лаважа, гемосорбции, других методов эфферентной детоксикации и их сочетаний.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

Работы, опубликованные в изданиях, рекомендованных ВАК

1 Ивницкий, Ю. Ю. Ранние резорбтивные эффекты высокотоксичных веществ алкилирующего действия / Ю. Ю. Ивницкий, В. Л. Рейнюк, Т. В. Шефер // Воен.-мед. журн. — 2012. — Т. 333, № 4. — С. 24—28.

2 Композиция для трансдермальной доставки в организм лекарственных веществ и лекарственная форма на её основе: пат. 2535095 Российская Федерация, МПК С2 А61К 9/06 А61К 9/12 А61К 47/22 А61К 47/16 / Ю. Ю. Ивницкий, К. А. Краснов, Т. В. Шефер; ФГБУН «Институт токсикологии ФМБА». — № 2013102458/15; заявл. 09.01.2013; опубл. 10.12.2014, Бюл. № 34. — 20 с.

3 Подосиновикова, Н. П. Влияние гипоксии на токсичность натриевой и аммониевой солей уксусной кислоты для дафний / Н. П. Подосиновикова, Т. В. Шефер, В. Л. Рейнюк, Ю. Ю. Ивницкий // Бюл. эксп. биол. мед. — 2010. — Т. 148, № 6. — С. 651—653.

4 Рейнюк, В. Л. Влияние циклофосфана и лактулозы на поступление аммиака и веществ средней молярной массы из кишечника в кровь у крыс /

В. Jl. Рейнюк, Т. В. Шефер, К. А. Краснов // Бюл. эксп. биол. мед.— 2012.— Т. 154, № 10.—С. 455—459.

5 Рейнюк, В. Л. Изменение острой токсичности циклофосфана при увеличении пула аммиака в пищеварительном тракте крыс / В. Л. Рейнюк, Т. В. Шефер, Ю. Ю. Ивницкий // Бюл. эксп. биол. мед.— 2010.— Т. 149, № 6. — С. 657—659.

6 Шефер, Т. В. Влияние противовоспалительных лекарственных средств или L-карнитина на азотистый обмен у крыс при острой интоксикации цикло-фосфаном / Т. В. Шефер, Ю. Ю. Ивницкий, В. Л. Рейнюк // medline.ru. — 2012, — Т. 13, ст. 86, — С. 1024-1031.

7 Шефер, Т. В. Модификация токсического действия циклофосфана ацетатом аммония на крыс / Т. В. Шефер // Биомедицина. — 2011. — № 3.— С. 25— 28.

8 Шефер, Т. В. Отягощение острых неврологических расстройств, вызванных циклофосфаном, при искусственном снижении pH химуса у крыс / Т. В. Шефер, В. Л. Рейнюк, В. Н. Малаховский, Ю. Ю. Ивницкий // Бюл. эксп. биол. мед. — 2012. — Т. 153, № 6. — С. 841—846.

9 Шефер, Т. В. Перераспределение аммиака из желудочно-кишечного тракта в общий кровоток при внутрибрюшинном введении циклофосфана крысам / Т. В. Шефер, В. Л. Рейнюк, Ю. Ю. Ивницкий // Бюл. эксп. биол. мед. — 2010, —Т. 150, № 8. — С. 170—176.

10 Шефер, Т. В. Повышение циклофосфаном проницаемости тонкой кишки крыс для содержащихся в её просвете гидрофильных веществ средней молярной массы / Т. В. Шефер, В. Л. Рейнюк, К. А. Краснов, Ю. Ю. Ивницкий // medline.ru. — Т. 12: Токсикология. — 27 декабря 2011. — С. 1437—1449.

11 Шефер, Т. В. Ранние изменения барьерной функции мочевого пузыря у крыс при моделировании миелоабляционной химиотерапии циклофосфаном / Т. В. Шефер, В. Л. Рейнюк, Ю. Ю. Ивницкий // medline.ru.— 2013.— Т. 13., ст. 2, —С. 16—27.

12 Шефер, Т. В. Роль гипераммониемии в формировании летального исхода острой интоксикации циклофосфаном у крыс / Т. В. Шефер, В. Л. Рейнюк, Ю. Ю. Ивницкий // Токсикол. вестн. — 2011. — № 3. — С. 33—37.

13 Шефер, Т. В. Роль люминального пула аммиака пищеварительного тракта в реализации токсического действия циклофосфана на крыс / Т. В. Шефер, В. Л. Рейнюк, В. Н. Малаховский, Ю. Ю. Ивницкий // medline.ru. — Т. 11: Токсикология. — декабрь 2010. — С. 526—537.

14 Ivnitsky, J. J. Promotion of the toxic action of cyclophosphamide by digestive tract luminal ammonia in rats / J. J. Ivnitsky, Т. V. Schäfer, V. L. Rejniuk // ISRN Toxicology. — Vol. 2011, Art. ID 450875. — 4 p.

15 Schäfer, Т. V. Cyclophosphamide-induced leakage of gastrointestinal ammonia into the common bloodstream in rats / Т. V. Schäfer, J. J. Ivnitsky, V. L. Rejniuk // Drug Chem. Toxicol.— 2011. — Vol. 34, No. 1, — P. 25—31.

Монография, отчёты о НИР, тезисы докладов на конференциях

16 Ивницкий, Ю. Ю. Гипераммониемия у крыс при острой интоксикации циклофосфаном / Ю. Ю. Ивницкий, Т. В. Шефер, В. JI. Рейнюк // Медицина экстремальных ситуаций, 2010.— Т. 32,— № 2,— С. 118—-121.

17 Ивницкий, Ю. Ю. Роль гипераммониемии востром летальном действии циклофосфана на крыс / Ю. Ю. Ивницкий, Т. В. Шефер, В. JI. Рейнюк // Труды Ин-та токсикологии, посвященные 75-летию со для основания / Под ред. С. П. Нечипоренко.— СПб.: ЭЛБИ-СПБ, 2010. — С. 121—127.

18 Ивницкий, Ю. Ю. Эндогенный аммиак в токсическом процессе. Развитие концепции эндотоксикоза / Ю. Ю. Ивницкий, Т. В. Шефер, В. Л. Рейнюк. — Б. м.: Palmarium Academic Publishing, 2012.— 176 с. — ISBN: 978-3-8473-9499-0.

19 Медикаментозная коррекция нарушений обмена аммиака, обусловленных резорбтивным действием алкилирующих веществ : отчёт о НИР (промежут.) «Экспериментальное исследование ранних проявлений острого резорбтивного действия алкилирующих веществ», шифр «Аммиакат» / Институт токсикологии ФМБА России ; науч. рук. Ю. Ю. Ивницкий; отв. исп. Т. В. Шефер. — С.-Пб., 2010. — 42 с. — Инв. № 391.

20 Медикаментозная профилактика ранних проявлений острого резорбтивного действия алкилирующих веществ : Методические рекомендации MP ФМБА России 12.52.12—2012 : утв. зам. рук. ФМБА России 16.11.12 : введ. в действие 16.11.12 / ФМБА России, ФГБУН ИТ ФМБА России — М., 2012. — 44 с.

21 Подосиновикова, Н. П. Влияние гипоксии на острую токсичность натриевой и аммониевой соли уксусной кислоты для дафний / Н. П. Подосиновикова, Т. В. Шефер, В. Л. Рейнюк, Ю. Ю. Ивницкий // Труды Ин-та токсикологии, по-свящённые 75-летию со для основания / Под ред. С. П. Нечипоренко.— СПб.: ЭЛБИ-СПБ, 2010. — С. 259—262.

22 Рейнюк, В. Л. Сочетанное действие гипоксии, натриевой или аммониевой солей уксусной кислоты на дафний / Н. П. Подосиновикова, Т. В. Шефер,

B. Л. Рейнюк, Ю. Ю. Ивницкий // Актуал. проблемы токсикол. и радиобиол.: Тез. докл. Рос. научн. конф. с междунар. участием, СПб. — Фолиант, 2011. —

C. 115.

23 Шефер, Т. В. Влияние ацетата аммония на острую токсичность циклофосфана для крыс / Т. В. Шефер // Актуал. проблемы токсикол. и радиобиол.:

Тез. докл. Рос. научн. конф. с междунар. участием, СПб. — Фолиант, 2011. — С. 119.

24 Шефер, Т. В. Влияние гипераммониемии на исход острого отравления ал-килирующими веществами у крыс / Т. В. Шефер // Ibid. — С. 252—255.

25 Шефер, Т. В. Влияние внутрибрюшинного введения циклофосфана на кинетику эндогенного аммиака у крыс / Т. В. Шефер, В. JI. Рейнюк, Ю. Ю. Ивниц-кий // Актуал. проблемы токсикол. и радиобиол.: Тез. докл. Рос. научн. конф. с междунар. участием, СПб. — Фолиант, 2011. — С. 114—115.

26 Шефер, Т. В. Влияние циклофосфана на азотемию у крыс / Т. В. Шефер // Актуальные вопросы мед. науки : Сб. научн. работ Всерос. научн.-практич. конф. — Ярославль: ЯрМедиаГруп, 2010. — С. 39.

27 Шефер, Т. В. Гипераммониемия у крыс при отравлении алкилирующими веществами / Т. В. Шефер // Актуальные вопросы промышленной токсикологии : материалы научн.-практич. конф. — М., 2010. — С. 222—225.

28 Шефер, Т. В. Нарушения обмена аммиака у крыс при отравлении алкилирующими веществами / Т. В. Шефер // Научн.-техн. аспекты обеспеч. безопасн. при уничтожении, хранении и транспортировке хим. оружия : тез. докл. пятой научн.-практ. конф.— М.: НИЦ ФУБХУХО при Минпромторге России, 2010, — С. 255—257.

29 Экспериментальное обоснование медикаментозной профилактики ранних проявлений острого резорбтивного действия алкилирующих веществ : отчёт о НИР (промежут.) «Экспериментальное исследование ранних проявлений острого резорбтивного действия алкилирующих веществ», шифр «Аммиакат» / Институт токсикологии ФМБА России ; науч. рук. Ю. Ю. Ивницкий; отв. исп. Т. В. Шефер. — С.-Пб., 2009. — 43 с. — Инв. № 347.

30 Экспериментальное обоснование медикаментозной профилактики ранних проявлений острого резорбтивного действия алкилирующих веществ : отчёт о НИР (заключ.), шифр «Аммиакат» / Институт токсикологии ФМБА России ; науч. рук. Ю. Ю. Ивницкий; отв. исп. Т. В. Шефер. — С.-Пб., 2011. — 90 с. — Инв. № 394.

Список сокращений и условных обозначений

АА — ацетат аммония (на рисунках)

АДФ — аденозиндифосфат

АДФРТ — аденозиндифосфатрибозилтрансфераза

АлАТ — аланинаминотрансфераза

АН — ацетат натрия

АсАТ — аспартатаминотрансфераза

АТФ — аденозинтрифосфат

в/б — внутрибрющинно; внутрибрюшинное введение

в/в — внутривенно; внутривенное введение

в/ж — внутрижелудочно; внутрижелудочное введение

в/м — внутримышечно; внутримышечное введение

ВСММ — вещества средней молекулярной массы

глн — глутамин (в формулах и на рисунках)

ЖКТ — желудочно-кишечный тракт

ЛД50 — средняя смертельная доза

ЛДГ — лактатдегидрогеназа

МС — метиленовый синий

НАД* — никотинамидадениндинуклеотид, окисленная форма

НАД-Н2 — никотинамидадениндинуклеотид, восстановленная форма

НПВС — нестероидное противовоспалительное средство

ОВ — отравляющее вещество

п/к — подкожно; подкожное введение

СПЖ — средняя продолжительность жизни

ТТА — 2,2',2"-трихлортриэтиламин, азотистый иприт

ТХУ — трихлоруксусный

ТХУК — трихлоруксусная кислота

ЦНС — центральная нервная система

ЦФ — циклофосфан (в таблицах и на рисунках)

ЭГ — Эванса голубой краситель

ЬАЬ — лизат амёбоцитов мечехвостов рода Пти1т

М — среднее арифметическое значение

т — средняя ошибка среднего арифметического значения

Подписано впечать 19.06.15 Формат 60x84/16

Обьем 2 п.л. Тираж 100 экз. Заказ №492

Типография ВМедА, 194044, СПб.,. ул. Академика Лебедева, 6.