Автореферат и диссертация по медицине (14.00.14) на тему:Патогенетические обоснования применения интерферона при комбинированном лечении рака шейки матки

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ И МЕДИЦИНСКОЙ ПРОМЫШЛЕННОСТИ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ОНКОЛОГИИ ИМЕНИ ПРОФ. Н.Н.Петрова

На правах рукописи

РГ6 од

1 5 ЛЕК Ш6

ВАСИЛЬЕВ Борис Васильевич

ПАТОГЕНЕТИЧЕСКИЕ ОБОСНОВАНИЯ ПРИМЕНЕНИЯ ИНТЕРФЕРОНА ПРИ КОМБИНИРОВАННОМ ЛЕЧЕНИИ РАКА ШЕЙКИ МАТКИ

(Клиника- экспериментальное исследование) Специальность: 14.00.14 - онкология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Санкт-Петербург 1996

Работа выполнена в Научно-исследовательском институте онкологии им. проф. Н.Н.Петрова Минздрава и Медпрома РФ

Научные консультанты:

■ действительный член Нью-Йоркской Академии наук

доктор медицинских наук, профессор Я.В.Бохман

доктор медицинских наук, профессор В.Н.Анисимов

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор В.П.Баскаков доктор медицинских наук, профессор В.Ф.Семиглазов доктор медицинских наук, профессор В.Л.Винокуров

Ведущее научное учреждение - Санкт-Петербургская медицинская академия последипломного образования МЗ и МП РФ

Защита диссертации состоится" " 1996 г.

в часов на заседании Специализированного совета

(П.074,38,01) в НИИ онкологии им. проф. Н.Н.Петрова (189646, Санкт-Петербург, Песочный-2, ул. Ленинградская, д.68)

Автореферат разослан " " 1996 г.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке НИИ онкологии им. проф. Н.Н.Петрова

Ученый секретарь Специализированного Совета чл.-корр. РАЕН, доктор мед. наук

В.В.Худолей

Актуальность исследования

Последовательное осуцествление в нашей ограде принципа активного выявления злокачественная новообразований способствовало диагностике рака шейки матки на начальных этапах его формирования, 1{ которым относятся преанвазавный и макроанвазивянй рак (,1а статая).

В настоящее время в онкогинекологиа наметилась тэшхеигш отказа от азлианей радикальноета при леченая преанваэавяого и макроинчазавного рака шейка матки. 7 больных преанвааивным раком методом выбора очдтазгоя коназаиая азяка матка - зояевая, электро-харургическая и лазерная (Новикова З.Г., 1992). При вдкроинва-зазном раке обоснованы при шипы щадящего лечения (отказ от регионарной ламфаденэктовди, пред- а послеоперационного облучения), Возможно, настало время пересмотра тактики в отноледвд лечения не только преинваэивяого но и щкроаявазивного рака шейка матки (1а стадия). Тем более, что в течение последнего десятилетия изменилась возрастная структура заболеваемости опухолями шейки матки о тенденцией зз повышения у женщин более молодого возраста. Исходя из этого дальйайшая разработка органосохраяявдего мзтода лечения макроинвазйвяого рака шейка матка является перспективным И актуальным.

Эволюция взглядов по вопросам патогенеза, биологических свойств опухоли, в частности метасазироваязя, позволила прийта к выводу с- возможности уменьшения объема лечебных воздействий при начальных формах этого заболевания как в пдаяе сокращения объема оперативного вмешательства, так и доключаидя лучевого компонента. Шуваева Н.И., 1987, Новикова 3.Г., 1991). Приципааль-нш критерием угле ныне ниф лечебных воздействий является низкая частота яимфогенного ыетастазирования, которая варьирует при

микрокарциноме от 0,&% до 2,2%, а такяе низкая биологическая активность опухоли и выраженная про ив оопухолевая реэистентность организма.

Среди всех зарегистрированных больных раком шейка матки пациентки с преинвазивяим, мнкроинвазивянм и 1в стадией составляют более 5($ .

Сведения об этиологии и патогенезе ряка шейки матки отличаются противоречивостью. В связи с этим отсутствует патогенетический подход к лечению дисплазии, преинвазивного и инвазивного рака шейки ыатки.

В последние года разрабачтааячея новые подходы к патогевеэд-ческой профилактике и терапии рака шейки ыатки. Данные ряда эпидемиологических, вирусологических и молекулярно-биологических исследований указывают на возможное участие вируса простого герпесе 2 серотипа (Н*»/" -2) и;особенно^вируса папилломы (НР|/"б, II, 16, 18 и 31 генотипов) в возникновении дисплазии и рака шейки матки. В связи с втиад данными представилось обоснованным провести экспериментальные исследования и клинические испытания возможного влияния человеческого лейкоцитарного интерферона на рак шейки матки, *ем более что интерферон наиболее отчетливо проявляет свое действие при опухолях, в этиопатогевезе которых существенную роль

Идея работ» состой? в изучении возможностей и пределов аз-лечения вачрльных стадий рака шейка матка за счет комбинированного использования интерферона с последующим минимальным оперативным вмешательством.

еЖ а £. 1985).

играет вирусная инфекция (

Цель работы

Целью исследования является разработка метода интерфероно-терапии преинвазизного и микроинвазизного рака шейки матки, позволяющего добиться стойкого излечения заболевания без проведения радикального хирургического лечения или сократить объем оперативного вмешательства и тем самым избежать риска послеоперационных осложнений. В соответствии с этим в настоящей работе планировалось вяполяеяяе следующих задач:

I) изучить в эксперименте влияние человеческого лейкоцитарного интерферона я? индуцированный -нитрозометилмочевиной плоскоклеточный рак шейки матки у мышей с учетом видоспецифичности интерферона;

2) уточнить роль вируса простого герпеса 2 серотнпа (н5/"-2) и вируса папилломы человека ШРУ' ) 6 и 16 генотипов в этиологии и патогенезе рака шейки матка;

3} исследовать действие интерферона на рак шейки матки у больных путем клинико-эндоскопичесхих и морфологических сопоставлений;

4) определить иммунный и интерфероновый статус больных до лечения интерфероном и после его завершения;

5) разработать метод лечения начального рака шейки матки интерфероном (способ подведения, разовые.суммарные дозы, продолжительность лечения, контроль за его эффективностью);

6) опенить возможности и преяелн органосохраняющего лечения (интерферон с последующей конизацяей) у женщин молодого возраста с шкроияв^з явным Раком шейки матки.

Научная новизна

Впервые устряовлены антиканцерогенное и противоопухолевое воздействие интерферона яя модели плоскоклеточного рака шейки метки,у мышей, индуцированного ннтрозаттшгаачевиной.

Впервые изучено влияние штерферонотерапии кэ. профилактику, а также регрессию преиязазяшэго, Ю1крэшзч.завного (1а) я анва-зивяого (1в) рака шейки матки.

Впервые установлены показания и обоснована возможность профилактического и лечебного местного применения интерферона и проведения сберегательных операций у больных раком шейки матки 1а стадии в качестве оргяносозсранявдего воздействия без снижения эффективности лечения.

Практическое значение работы

Выполнение доследования позволяло обосновать новый подход к проблеме начального рака шейки матки в результате разработки методики патогенетического лечебного воздействия, каким является интерферонотерапия. Основной практический результат работы -обоснование лечебного местного применения интерферона и сберегательных операций в лечении начальных форл рака шейки матки, позволяющих при определенных условиях сохранить орган и репродуктивную функцию и одновременно добиться стойкого излечения. Социально-экономический эффект исследования состоит в обеспечении ускорения и удешевления лечения, не снижая его эффективности, значительного укорочения периода нетрудоспособности и возвращения к труду клинически излеченных больных, что полностью соответствует решению зрдэч социальной,трудовой и психологической реабилитации больных.

Положение выносимые на защиту: - передающаяся половым путем вирусная инфекция, Н $>\/-2 и НР1/ играет существенную роль в патогенезе дисплазии шейки матки, а НР\/ = в патогенезе рака шейки матки; - ивтэрфрроя. оказнва©2 антиканцерогенно? воздействие на индуцирован® плоскоклеточный рак шейки матки у мышей;

- интерферон обладает противоопухолевым воздействием на рак шейки мягки у больных;

- у женщин молодого возраста с начальными формами рака шейки матки разработана и оценена возможность и установлены пределы органосохранящего лечения.

Внедрение .результатов исследования в практику здравоохранения

'Комплекс мероприятий по своевременной диагностике начальных стадий рака шейки матки и рационального лечения этих форл заболевания внедрен в НШ онкологии им.проф. Н.Н.Петрова,Ленинградском областном онкологическом диспансере, Медицинском центре Ассоциации онкологов-гинекологов России (С-Петербург).

Апробация диссертации и публикации

Материалы диссертации доложены на Мевдународяом совещании экспертов стран членов СЭВ по теме "Эпидемиология гинекологического рака и лечение ранних форм рака шейки матки (Тбилиси, 1985), на региональном симпозиуме социалистических стран по интерферону (?ига, 1988), на Всесоюзных симпозиумах по онкогинеколоташ (Псков, 1985, Кострома, 1991).

Структура диссертации

Диссертация изложена на 190 страницах машинописного текста и состоит из 7 глав, выводов и библиографического указателя. Текст содеряит 14 таблиц, 2 рисунка и 28 фотографий.

Указатель литературы включает 290 работ отечественных и зарубежных авторов.

Автор выражает сердечную благодарность научным консультантам: проф. Я.В.Бохману и проф. В.Н.Анясимову за всестороннюю помощь при выполнений настоящей работы. Искренне благодаря д.м.я. Э.Ф.Чепика за помощь и ценные советы при выполнении морфологического раздела исследования.

Материалы и методы клинических исследований

Материалы исследования представлены проспективными наблюдениями

над 203 первичными больными раком шейки матки-интраэпителиальный-97

микроинвазивным-68 и инвазивннм -38 наблюдений, которым проведено

комбинированное лечение в онкогинекологическом отделении НИИ Онколог

им.проф.H.H.Петрова в Т979-1990г.Диагноз у всех больных был подтвера ден цитологическим,кольпоскопическим и гистологическим исследование}/

После завершения клинического обследования проводился предоперационный курс интерферонотерапни. Интерферон (ИФН) поставлялся институтоь

ш.Пастерз в виде лиофилизированного стерильного порошка во флакона} разводимого перед введением в шейку мятки физиологическим раствором для инъекпий, или винилияом для мазевых аппликаций.Интерферон применяли в виде инъекций в область опухоли 1-2 раза в день (110 наблюдений) и в виде мазевых аппликаций к шейке матки (93 наблюдения), продолжительность«^ 2гх до 6 недель. Суммарная доза введенного интерферона колебалась от 20000 ед. до 15 000 000 ед. Не было отмече» токсических реакций или серьезных осложнений на введенный препарат. У 46 больных отмечена пирогенная реакция, особенно при двухкратном инъекционном введении препарата в день, при мазевых аппликациях подобных осложнений не наблюдалось. Мазевая форма применялась в аппли кациях интерферона в колпэчке Кафки приложением к шейке матки. Смен колпачка проводилась один раз в день,причем исключается травматиза ция опухоли и в отличие от локального воздействия, наблюдаемого при инъекционном введении, при мазевых аппликациях шейка подвергается воздействию интерферона целиком. "Такой способ подведения интерферона к шейке матки представляется нам более целесообразным и эффект яш.

После завершения предоперационного курса интерферонотерапии по одной из схем у всех больных было выполнено хирургическое лечение: широкая диргермононизация шейки матки у 102(50,250, простая экстирпация у 63(31,т%) и операция Вертгейма у 38(18,75?).

Умерших среди оперированных больных не было. Все они завершили лечение й были выписаны для амбулаторного наблюдения. Для оценки влияния интерферонотерапии на отдаленные результаты лачения проведен анализ историй болезни, амбулаторных карт и журналов прослеживания отдаленных результатов у всех 203 больных,получавших комбинированное лечение.

Оценка эффективности интерферонотерапии проводилась по цито-морфологическим критериям путем сопоставления данных биопсий и цитологического исследования до начале, в процессе леченая и исследования операшонного препарата. Исследования проведены в цитологической лаборатории £ Завлабораторией д.м.н. В.И.Новик). и морфологической лаборатории НИИ онкологии им.дроф. Н.Н.Петрова (Зав.лабор. - д.ы.н., проф. К.М.ПокарисскиЮ.д.м.н. О.Ф.Чепиксм и д.м.н. В.И.Новиком, за что автор внракает им искреннюю благодарность.

Метода исследования.

При серологических исследованиях применялась реакция связывания комплемента (РСК) в ыикроварианте. Использовалась готовая гемолитическая сыворотка против эритроцитов барака и оухой комплемент, выпускаемые предприятием по производству бактериальных препаратов Московского НИИ вакцин и сывороток им.М.И.Мечвинова. Сыворотка для проведения РСК готовилась в 4-х разведениях (1:20, 1:40, 1:80, 1:160). Кавдое разведение сыворотка исследовалось о 2-мя антигенами (" ^ " - лизат клеток \/сГО ,инфицированных ВПГ-2 и "п " - лазат этих же нормальных клеток, РСК ставилась на холоду при 4°С в течение 18 часов, Макросвязнвание комплемента проводилась в объеме 0,125 мл на платах. На одном плато исследовались 4 с«воротки в 4-х разведениях с обязательным определением титра антител в сыворотке кролика, содержащего антитела к вирусу

герпеса 2-го серотипа (положительный контроль) и сывороток, где антитела отсутствовали (отрицательный контроль). Исследование проводили совместно с к.м.н, Г.Ф.Плукниковой, ка что автор ей искренне благодарен.

Метод точечной молекулярной гибридизации был использован для молекулярно-биологического -исследования вируса папилломы человека 6 и 16 генотипов.

Для выявления в ДНК опухолевых тканей последовательностей вирусов папилломы проводили молекулярную точечную гибридизацию с зоедаш, содержащими последовательности вирусов Н?1/б , и НР1/& любезно предостазленйнми проф. /-/СШ^С-И (Германия).

В качестве положительного контроля при гибридизации использовали сами зонди с чирусспецифическими последовательностями, отрицательного - пробы ТЩК из нормальных тканей, а также пробы ДНК из клеток инфицированных вирусами, не дащимя перекрестных реакций при гибридизации с НР^ "- .Молекулярная гибридизация последовательностей ДНК НР\/и сопостявлеяия с клиническими данными проводились совместно с к.м.н, Б.В.Мигуновой, за что автор ей признателен

3 иммунологических исследованиях был использован тест спонтанного рэзеткообррзовряия с эритроцитами барана (Во-РСК): мононуклеары из крови выделяли в гтзадиеяте плотности фиколл-верографияа и ставили реакцию по методу П (1972).

Выявление уровня "активных" Ео-РСЖ (Ва-РЖ) проводили по методу

ГС)П, Й. 1974).лимфоциты предварительно инкубировали

в среде 199 содержащей 5С$ телячей сыворотки,в течение одного часа при 37°С, затем смесь лимфоцитов с ЭБ инкубировали при температуре 37°С в тэчеяие 10 минут, после чего подсчитывали число Ба-РЖ. Работа проводилась совместно с к.м.н, Л.Я.&шгаае'тгбй

за что автор ей признателен.

В биохимических исследованиях ДНК из опухолей больных, оперированных по поводу рака шейки метки, и ядер клеточных культур выделяли по методу Георгиева. В дальнейшем стерильные препараты ДНК испольоовгли т> экспериментах по трансфекции и молекулярной гибридизации. Работа проводилась совместно с д.м.н. П.Г.Князевым за что автор ему благодарен.

В исследованиях по определению иятерферонового статуса больных применяли микрометод титрования человеческого интерферона. Использовали перевиваемые клетка /(/ -41 ( клоновнй вариант тканевой культуры ^ -96; полученный из костного мозга больного лейкозом.)

Индикаторным вирусом служили ВВС (штамм Индиана), адаптированный в репродукции в клетках -41.

Титрование ИФН производили с помощью восьмиканальной микропипетки фирмы (Финляндия). Титром ИФН считали последнее его разведение, которое вызывало 5СЙ подавление ЦГЩ БВС (ттопэттескоё действие вируса везикулярного стоматита) по сравнению с контролем вируса,Активность проб вычисляли в международных единицах по формуле

Ао= Ар Го

~Тр

где А о— активность исследуемого образна ИФН; Ар-активность референс-препарата, выраженная в 13; То- титр исследуемого ИФН в опыте; Тр-титр референо - препарата э опыте. Работа проводилась з ШИ ам. кластера оошчзтъ с проф. Ля.А.Смородштевнм, к.м.н. В.И.Иовлевш и к.м.н'. I.Н.Степановым, за чг'го автор им искренне благодарен.

Статистическую обработку полученных результатов проводили методами вариационной статистики с использованием критериев Стьздента.

В экспериментальных исследованиях по изучению влияния интерфероне терапии на индуцированные опухоли шейки матки у мотей использовались:

Еизотные. Всего в опытах было использовано 160 самок мышей разводки питомника "Рапполово" РАМН, Животных содержали на обычной лабораторной диете, воду давали без ограничений.

Канцерогены. 7,12-даметилбенз (а) антрацен (ДИВА) фирмы FiuJlo, QuicJi (Швейцария) и дГ-нитрозометилмочевину (НШ), синтезированную в лаборатории органического синтеза НИИ онкология им.проф. Н.Н.Петрова, растворяли в днмемлсульфокавде (да-ыексид, официнальный препарат) в концентрации 1:100.

Препараты интерферона. Вазелиновые мази, содержащие Ж - интерферон, полученный из лейкоцитов мышей, с активностью 5000 ме/г, мази (ЕИМ-5), оО -интерферон, полученный из лейкоцитов человека, с активноешо 20000 ме/г (ИФЧ-20), ^-интерферон, полученный из лейкоцитов человека, с активность® 5000 ме/г (ИФЧ-5), s также плацебо (мазе^ея основа, не содержащий интерферон) были представлены лабораторией интерферона НИИ эпидемиобиологии и микро-<5ио:огии им. Л.Пастера Минздрава РФ.

Охема экспериментов.

В 1-ой серии опытов с целью разработки наиболее адекватной модели рака шейки мртки был использован подход, описанный Н.И.Вольфеоном (1974). 1% растворы ШБА или EMM в диметилсульфокса де вводили мышам интраввгинально на полиуретансвой губке 3 раза в нед. в течение 4 нед. Губка с ррстеором канцерогена удалялась через I час после введения.

Во 2-ой оерии опытов мышам интравагинально вводили 1% раствор ЮМ на полиуретановой губке также 3 раза в неделю в

течение 4 недель. Через I чвс после введения губки с канцерогеном ее заменяли на губку с нанесенной мазью, содержащей один из указанных интерферонов, или плацебо, которые оставляли до следующего введения НММ. Йведения мазей продолжали еще в течение 4 недель после окончания воздействия канцерогена .

опыта мышам интравагинально вводили раствор ШМ по такой же схеме, как и в 1-й серии опытов, однако после- окончания введения канцерогена мышам вводили в последующие 8 недель мази с одним из интерферонов или плацебо.

Во всех сериях опытов в каждой группе было по 20 мышей. Все павшие животные подвергались аутопсии. Опыт был прекращен через 280 суток после начале введений канцерогенов. Дожившие до этого срока животные были убитн парами з$ира. Матку, влагалище, а также все обнаруженные новообразования вырезали и фиксировали в 10$ формалине и после обычной гистологической обработки заливали в парафин. Гистологические срезы 5-7 мкм окрашивали геиггооксдаи— ном и эозином^а при необходимости«-' по Ван-Гизону и изучали микроскопически. Экспериментальные исследования проводились совместно с З.Х.Нахушевнм, за что автор приносит ему искреннюю благодарность.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫ! ИССЛЕДСВАНИЙ

ИЗУЧЕНИЕ АНТШШШВРОГЕННОЙ И ПРОТИВ ОШУХСИНВ ОЙ АКТИВНОСТИ ИНТЕРФЕРСНА НА МОДЕЛИ РАМ Ш2ЙКИ МАТКИ У МЬШЕВЙ

Разработка модели индуцируемого рака шейки матки у мыпей.

1о возникновения 1-ой опухоли (63 и 72-ой '"день опыта) дожили 19 мышей 1-ой группы, получившие ШМ и 18 мышей 2-ой группы, которым вводили ДМБА (табл.Г)

Таблица I

Сведения о частоте и локализации опухолей индуцировгнных у мышей химическими канцерогенами

Канцероген ■ Общее число мышей.под-вергнутых , воздействию канцерогена Числс всего мышей с ГЛГлоскок шейка опухолями леточный^ра влагалище наружные половые органы

нш 19 14 (73,7$) 8х 5 I

ДШ '18 7 (38,92) 4 3 , -

х- одна опухоль шейки матки была классифицирована как базальноклеточная каршшома

Злокачественные новообразования шейки.матки,.влагалища и наружных половых органов развились у 14 из 19 особей из подвергшихся интравагинальному воздействию НММ (73,7$). Опухоли локализовались преимущественно в иейке матки (8 случаев), влагалище (5 случаев), области наружных половых органов (I). По гистологическому строению 13 опухолей были классифицированы как плоскоклеточный ороговевающий рак. В одном случае был обнаружен базально-клеточный рак. Под влиянием ДМБА новообразования.шейки матки и влагалища развились у 7 из 18 особей (38,9$). ^се они

оказались плоскоклето^ными ороговевавдими раками. Опухоли лока-

1

лизоврлись преимущественно в шейке матки в 4 случаях и во влагал! ще - в 3 случаях.

Таким образом, при интравагинальной аппликации НММ новообразования шейки мятни а влагалища развивались с большей частотой, чем при использованииДМБА (р<^ 0,05). Учитывая гистологическое строение индуцированных НММ опухолей (плоскоклеточный ороговеваю-щий рак), простоту методики, скорость индукции опухолей, малый расход'канцерогена и достаточно высокую частоту развития новообразований, можно полагать, что указанная модель удобна для проведения опытов по экспериментальной терапии рака шейки матки.

Изучение влияния интерферона на индуцированный //•китрозометилмомочевикой плоскоклеточный рак шейки матки у мышей с учетом видоспецифмчности интерферона

В этой серии опытов интравагинальные аппликации мазей, содержащие интерферона, производили непосредственно после каждого введения НММ и были продолжены еще в течение 4 недель после окончания воздействий канцерогена. В такой постановке опыта оценивалось антиканцерогенное действие интерферона. В контрольной группе, то есгь, у мышей, которым вводили наряду с НШ плацебо, новообразования шейки матки и влагалища развились в 42,9^, тогда как при применении мази с мышиным интерфероном (ЙШ-5) они развились лишь в 5,9$ случаев (р ^ 0,05).

Применение мазей с интерферонами, полученными из лейкоцитов человека (ИФЧ-20 и ЙФЧ-5), не оказали выраженного влияния на индукцию новообразований шейки матки и влагалища. Их частота составила, соответственно, 31,4 и 47,45? (р 0,05). Интраваги-нальяое применение любого из иягерферонов не оказало статистически значимого эффекта на развитие новообразований любой другой локализа ции у мышей, подвергшихся воздействию НММ.

Рас. I Влияние различных- интерфероне® на развитие опухолей шейки матки у мышей

%

70

60

50 40 30

20 10

1-ШМ+плацебо

2-НММ+ИШ -5

3- НММ'+ШЧ -20

4- НММ+ ИФЧ - 5 * р<0,05

2 3

(виды антерферонов) • На рис.1 можно видеть, что при применений мази с интерфероном, начатом одновременно с началом аппликаций канцерогенов выделяется отчетливый антиканцерогенный эффект видоспецифичесз препарата.

Влияние местной аппликации интерферона на развитие индуцированных опухолей шейки матки и влагалище у мышей

В 3-й серии опытов пришкение мазей с интерферонами начина после завершения штравагинальных введений канцерогенов, что лядо изучить эффективность терапевтического действия этих' пр ратов на рост? уже развившихся новообразований шейки матки влагалища.

Было установлено, что у мышей контрольной группы, которым вводила плацебо, злокачественные новообразования шейки матки и влагалища развились в 61,&% случаев. На один из примененных нами интерферонов яе оказал существенного влияния на развитие опухолей этой локализации. Частота опухоли в каждой подопытной группе сост; вили соответственно 46,3, 50,08 и 48,2/5, р ^>0,05.

Таким образом, пиименение мазей с интерферонами хотя и оказнва, некоторое противоопухолевое воздействие на рост уже сформировавши: опухолей шейки матки и Влагалища у мышей,;-однако.до.ковда их изла чить не смогло. Очевидно в условиях "запущенного" опухолевого про пассА использование интерферона уке не столь эффективно, как пр: воздействии на ранних стадиях процесса, как это наблюдалось во 2-ой серии опнтов. Результаты наших экспериментальных исследований позволили обосновать проведены е исследования клинической эффективности интерфероков при лечении ранних форл рака шейки матки у женщин, превде всего, внутриэпигелваяьных, микроинвазив-ных 1а и возможно 1в стадии.

Роль вируса герпеса 2-го се со тиса (Н -2>\/~-2) и вируса папилломы (НРуО в развитии рака шейки матки

Нами бнло выполнено серологическое обследование онкологически больных и здоровых женщин с целью выявления различий в состоянии гуморального иммунитета к вирусу герпеса I и 2 серологических тивов (Н £>*/ -I и Н 3 / -2) (табл.2), а гакке изучение представленности генома Н&/ -2 в ДрК клеток рака шейки матки методом трянсфекиии, т.е. переноса генетической информации Нй^-2 с помощью ДНК опухолевых клеток в нормальные.

В реакции связывания комплемента (РОК) установлено, что в сиво ротке крови большинства обследованных женщин содержатся специфические актитеяа ппотив антигенов вируса герпеса 1-го и 2-го се~ ротипов.

Доля серопозитивных и средние геометрические титрн к вирусу герпеса 1-го и 2-го серологических типов по данным РСК в различных группах

т Группн обследован- Количество обсле- И з них серопозитивных к Средние геомет-

ных С клиническим диагнозом на/ -I -2 рические значения титров антител в крови оболе-дованных к антигенам

дованных в группах общее число в % ко всем обсле- ± общее число в % ко " всем обсле- +

дованным дованным на*/ -I Н&\/ -2

т. Рак шейки матки 7« 63 82,9 4,3 67 88.1 - 3,7 1:21,1 1:24,2

2. Рак теля матки 55 46 83,6 4,9 45 81,8 5,2 1:18,4 1:24,2

3. Миома матки 25 18 72,0 8,9 18 72,0 8,9 1:17,1 1:28,0

4. Рак вульвн 18 1« 77,7 9,8 16 88,8 7,4 1:22,6 1:22,6

5. Прочие онкологические экстрягениталь-ные заболевания 19 10 52,6 11,4 1В 84,2 8,3 1:13,0 5:16.0

В. Контрольная группа (здоровые женщины) 36 20 55,5 8,3 21 58,3 8,2 1:18,4 1:17,1

Итого: 229 171 74,в 2,8 183 79,9 2,6 1:18,4 1;21,1

Статистически лосточерно установлено, что число лиц, содержащих в крови антитела к HS</ -2 в группе больных раком шейки матки (88,1%) существенно превшеет количество серопози-тивннх в контрольной грутше здоровых венщин (58,3^) { р 0,05). Средние геометрические титры антител к вирусу герпеса 2-го типа

'.■..у онхогинекологических больных примерно в 1,5 раза превн-шают аналогичные показатели в контр^ьной группе и среди болйдах с зкстрагенитальннми опухолями.

Таким образом, получены данное, подтверждающие предположение о более йысоком уровне иифицированности онкогинекологических больных HSV/ -2, особенно в группе с клиническим диагнозом "рак шейки матки", по сравнению с контрольной ггущюй здоровых кенщия и группой больных с опухолями экстрагеяигальной локализации. Эти материалы поддерживают гипотезу об участии вируса герпеса простого 2-го серо типа (HiLt/-2) в эгиопатогенезе рака шейки матки. Они указывают на возможную связь между инфекцией, вызываемой гениталь-ной формой вируса герпеса и злокачественной трансформацией эпителия шейки матки.

Поэтому далее было проведено комплексное обследование больных раком шейки матки (клиническое, цитологическое, морфологическое и серологическое) и женщин контрольных групп с целью выявления возможности инфицирования больных НИМ вирусом простого герпеса 2-го серотип?, изучения содержания у них в крови индуцированных антигенами BSV" -2 антител и патологией женских гениталий. Это могло способствовать установлению групп риска возникновения рака шейки матки. Для решения поставленных задач нами были обследованы 242 кенщины: 29 здоровых женщин клинически и цитологе чеоки-патологии не имели. Из 73 больных раком шейки матки у 31 больной был прэиявазизяый, а у 47- инвазнвный рак ia и 1в стадии,

135-пациенткй венерологического диспансера . Этих женщин характе зовало раннее начало половой жизни и частая смена сексуальных пар неров (провдюкуитетная группа). Кроме того, обследовано и 28 дев веннип 12-13 лет.

И» 135 женщин провдскудтетцой группы, клинически ж цитологически обследованных, патология тела матки и ее придатков была выявлена у 9 иа 135 или 6,5^, а патология шейка - у 78 из 135 или 65£, т.е. в 10 раз чаща.

В реакции связывания комплемента было исследовано 166 сыэорс ток больных и здоровых кенщав (табл.3). Как доказывают данные табя.З кошиементсвяянваадие антитела выявлены в 81& обследована больных инвазявнш ИМ. Аналогичная картина имеет место у бодьныз раком Са Сп а в промискуичетной группе, причем почта нож

вина обследованных имела высокий тигр антител (1:80) и выше.

В .отличие от больных указанных трех групп у гинекологически адорочнх женщин а девочек антитела выявлены у 452 и 39$ соотвек веяно, а титры антител 1:160 не встречались на у одной аз них, причем больше половины аз них тазли низкий тигр (1:20).

Таким образом, результаты проведенного исследования говорят о том, что у женщин промискуитетяой группы и больных раком шейки ма^ки (Са оц S(.' Жи в инвазивяня форма опухоли) наблюдается ка-достоверное увеличение числа женщин с антителами к Н ¿\/~2, так : повышение татра антител к атому вирусу.

Полученные данные позволяют сформировать группу риска по забо, ванию раком шейки матки. Это женщины, рано начавшие половую та»н дмечпше боль'лоа количество половых партнеров, а в крови антите, Н3 V/ -2 с титром 1:80 и выше.

Кроме серологического обследования, нами проведено изучение

Определение антител к НЛ^-2 реакцией связывания комплемента (РСК)

№ Объект .(--------, Кол-во обелед. ■ Наличие Титры антител*

пп исследования абс. % 1:160 1:80 1:40 1:20

абс. % абс. % абс. Г н Л" абс. %

I. НИМ (инвазившж) 47 38 81 15 40 9 24 12 31 2 5

2, Са ^ !преинвазивный) 31 25 81 3 12 9 36 7 28 6 24

3. Промискуитет-ная группа 31 25 81 II 44 5 20 7 28 2 8

4. Здоровые женщины 29 13 45 - - 6 46 3 23 4 ■ 31

5. Девствегрщы . 28 II 39 - - 2 18 3 27 6 55

х- приведены величины обратных титров активности сыворотки

представленноета генома в ДНК клеток рака шейки матки ме-

тодом траясфекции, то-есть переноса генетической информации с помощью ДНК из опухолевых клеток в нормальные.

Из 10 изученных нами препаратов ДНК РШМ дщлш один ИЕ^уцировал морфологические изменения решпаентной культуры диплоидных клет эмбриона человека (ДКЭЧ). Они квалифицировались как трансформация и были обнаружены нр 3-ем пассаже культивирования. Изменения были стойкими и сохранялись от пассаяа к пассатку. Однако, введение эта клеток новорожденным мышам не индуцировало у них роста опухоли. Это факт свидетельствует об отсутствии злокачественной трансформа ции исследуемой культуры.

Введение в ДКЭЧ ДНК опухолей других локализаций не приводило к изменению морфологии культуры.

Чтобы быть уверенным в том, что перенос исследуемой информации

из опухолевых клеток в нормальные был успешным, а отсутствие приз

наков трансформации в изучаемых культурах с привнесенной в них ч

родной ДНК говорит об отсутствии активных онкогенов в ней, а не

является артефактом из-за возможных технических причин (инактива

пия ДНК в процессе выделения, непрояикновеяия ДНК в исследуемые ,

клетки и т.д.), наш проведены контрольные эксперименты, позволя

щие оценить биологическую активность используемых препаратов нук

ияовой кислоты. Известно, что в геноме вируса герпеса присутствуе

о

ген тишдинкиназы (ТК), который может быть легко перенесен в клет лишенные этого фермента. Обнаружение такой активности может слук доказательством интеграции чужеродной ДНК с геномом хозяина.

Для решения этого вопроса используемые клетки культивировалис в среде с бшмяеэоксиуридинам, который включается в ДНК вместо

тимидиня и приводит к инактивапии рада клеточных генов, в том чис и тимидинкиназы. Обработка таких клеток материалом, содержащим вирусный ген ТК (это^иет быть вирус, вирусная ДНК или ее фрагмен тЫпосле рестрикции различными рестриктазами), ведет к внедрению вирусного гена ТК в геном клетки-хозяина и к экспрессии привнесенного гена. Результаты проделанной работы показали» что препараты ДНК из клеток ИШ обладают способностью осуществлять биохимическую трансформацию клеток ычпей, лишенных гена тимидинкиназы (ТК-клетки, линия В-82), превращая их в ТК* фенотип (линия В-83). Способность препаратов /ЩК РЛЛ осуществлять подобный перенос свиде тельствует о биологической активности испытанных препаратов.

Следует отметить, что в этих опытах использовались ДНК и других опухолей: рака легкого, сарком мягких тканей, лейкозов) .Нб> ни в одном случае переноса гена ТК не было выявлено.

Таким образом, подученное данное свидетельствуют о том, что ДНК ШМ способны к переносу гена ТК, и предполагает наличие в ИМ нуклеотидннх последовательностей, кодирующих фермент вируса герпес Неспособность образцов ДНК РЯМ трансформировать гомологичные реципиентные клетки человека однозначно свидетельствуют о "дефектности" опытных ДНК в отношении переноса активных работающих онкогенов. Препараты ДНК НИМ в этом смысле отличаются от других образцов ЯНК, ввделеяннх из опухолей человека (рак легкогс саркомы мягких тканей, лейкозов), также не индуцирующих граясформг цию клеток ¿п . Подобные результаты были получены в исслб

ваниях других авторов, которые также не смогли озлокачествить клетки культур эмбрионов крыс с помощью ДНК различных опухолей человека."

Однако, не исключено и другое предположение: ДНЭЧ являются некомпетентными реципиентннми клетками для онкогена РШМ.

Все изложенное не позволяет сделать однозначного вывода о способности |ЩК НПМ трансформировать реципиентные клетки и требуе1 дальнейших исследований.

Другое направление наших исследований - выявление в геноме клеток РШМ последовательностей, комплементарных НЗ\f -2. С этой целью была использована техника гибридизации фрагментов ДНК HIM с меченной Р^ - дЦТФ. В проведенных опытах нам не удалось зарегистрировать нуклеотидяых последовательностей в геномной ДНК, комплементарных вирусной (исследовалось 10 препаратов.). Однако экспериментах по трансфекции два образца из 5 при введении ДНК в ДКЭЧ дали цитодеструктивные изменения культур, и была выявлена продукция Н$(/-2. Изолированный вирус по своим антигенным свойс вам был отнесен к вирусу герпеса простого 2-го серотипа. Эти данн) указывает на возможность обнаружения полного генома -2, способного к репликации в JIHK клеток рака шейки матки.

Суммируя данные наших экспериментов, можно сделать вывод о что в некоторых препаратах НИМ присутствует вирусспецифтческие по следоввтельности Н3 (/ -2, способные к репродукции вируса.

Поскольку ДНК НПМ в экспериментах иногда вызывает морфологичес: трансформацию ШЭЧ и учитывая, что ДНК ШМ содержит ген ТК вирус; герпеса, а в ряде случаев и полный вирусный геном Н $\f-2 , не исключено, что инициация неопластического процесса в эпителиальн клетках шейки матки вызывается вирусспещфической генетической информацией. Однако, процесс превращения нормальных клеток в злокачественные - многостадный и требует кооперативного воздействия различных онкогенов, участвующих на той или иной стадии онкогенез. Не исключено также, что инициация неопласти^еского процесса в эпителиальных клетках гяейки матки вызывается вирусными генами, а

для поддержания трансформированного состояния трзбуется присутств клеточных онкогенов.

Таким образом, проведенное исследование не позволяет сделать однозначного вывода о роли вируса герпеса 2-го серотипа в возникновении ряка шейки матка.

Представленные результаты по изучению трансформирующих генов (онкогенов) ЕМ в гомологической системе подтверждают ранее полученные данные о вероятной многоетадийности превращения нормальных клеток человека и животных в злокачественные. В этом пропесс необходимо участие нескольких онкогенов. Не исключено, что для инициации неопластического процесса в клетках эпителия шейки мати функцией промоторов могут, по-видимому, обладать регуляторные элементы и онкогены генома Н§\/-2, а также клеточные трансформирующие гены. Как показали каши опыты, препараты ДНК РШ могут содержать вирусную ТК и двке обеспечивать морфологическую трансформацию гомологичных реципиентных клеток. Однако для полной трансформации репипиентных культур ДКЭЧ образцами ДНК РЖ не хватает одной или несколько стадий й^ертатаза^яд.е. кооперативного взаимодейств дополнительных онкогенов. Результаты исследования позволили заключить, что в ткани шейки матки, пораженной раком, имеет место интеграция, по крайней мере, отдельных -..элементов генома Нб^/ . Это противоречит распространенному мнению об отсутствии генетичес "следов" Н$\/ в клетках РШМ человека. Обнаружение генетической информации Н -2 в ДНК НИМ (возможно более чувствительными методами) позволит более точно изучить эту ситуацйи..

Роль вирусной инфекции HSvA-2 в биологическом поведении нелеченой дисплазии шейки матки.

В исследование вошли больные дисплазией различной степени, которые были выявлен» при проведении массового цитологического скри нинга в различных районах Санкт-Петербурга.

Диагноз дисплазии был поставлен у 212 больных. Распределение в соответствии со степенью десглезие: слабая - у 76ч35,8/5; .умерен ная - у 100 (47,2$), тяжелая - у 36(17,0$). Включение в группу наблюдения 36 больных с' тяжелой дисплазией было обусловлено их отказом от лечения. 'Из общего числа 212 больных, наблюдавшихся различные сроки (от 2 до 5 лет) у 65 (30,7$ отмечена регрессия дисплазии, у 102 (48,1$) она оставалась стабильной, у 24 слабая или умеренная дисплазия прогрессировала в тяжелую (11,3$) и у 21 различные формы дисплазии прогрессировали в преинвазивный (у 18 больных) и микроинвазивный рак (всего у 21-9,9$)-табл,4.

Таблица 4

Биологическое поведение нелеченой дисплазии в различные периоды наблюдения

Степень дисплазии Число больных Биологическое поведение

регрессия стабилизация прогрессия ' в тяжелую прогресса в СаСи^, и микроинв зивныи рак

Слабая 78 ,36 ,г (46,2) 32 (41.0) 8 (10,3) 2 (2,6)

ренная 98 (2^4) ,52 (53,1) (16,3) 9 (3,2)

яяселая 36 8 (22,2) , 18 X (50,0) — 10хх (27,8)

сего 212 65 (30,7) Г 02 (48,1) 24 (11,3) 21 . (9,9)

Примечания-•о скобках-^ хх- из указанны^ 10 больных у 7-Cat'nSi у 3- аднроияв'азивный рак.

Пик риска прогрессировать дисплазии з Са прихо-

дится яя 2,5-3 год наблюдения, уменьшаясь для случаев тяжелой дисплгзии до 20,5 мес. Для прогрессирования тяжелой дисплазии в микроинвазивннй рак (по-видимому, шпуя Са ¿Ыи ) требуется в два раза больше времени (44,3 мес.).

Общая кумулятивная вероятность прогрессии лисплазии в прз- и микроинвазивнвный рак (13,9/?У представляется весьма значительной, что подтверждает представление о дисплазии как об истинном предрак шейки матки, Она невелика при слабой дисплазии (4,1), отмечается почти в каждом пятом наблюдении при углеразной (18,1) и достигает 25,1$ - при тяжелой. Отсвда вытекает практический вывод о желатель ности безотлагательного лечения не только тяжелой, но и умеренной дисплазии.

Другая особенность биологического поведения нелеченой дисплази заключается в ее регрессии. По отношению ко всем 212 больным она составила к конну 5 года наблюдения 34,2, варьируя от 45,6 при слабой, до 29,3 при умеренной и до 24,7- при тяжелой.

Далее изучена возможная связь биологического поведения нелеченой дисплазии с инфицированностыо Н,2\/ -2. У 153 больных диспла-зией отмечена инфицированность Н£\/-2 (72,2$), а у 59 (27,8$) сыворотки крови были серонзгативны по отношению к этому вирусу.

В серонегативной группе кумулятивная вероятность прогрессии составили 3,04$, без существенного различия мезду больными слабой умеренной и тяжелой дисплазией.

Складывается впечатление, что вероятность прогрессии зазисит от инфицированности Кумулятивная вероятность в серопозитивны.

случаях в два раза выше, чем в серонегатизшх.

Новые данные были получены при изучении особенностей регрессии даолл«зяа в зачаовмоста от ая^яцирэтаняоота НзВу' 2..По отношению

ко всей группе больных, серопозитизных к Н вероятность

регрессии дисплазии составил» 24,0^, а при отсутствии инфициро-ваяяооти Н£(/-2 58,0^, при статистически существенном различий (0,001^ р ^ 0,01) во все периоды наблюдения. Указанное различие сохраняется при слабой и умеренной дисплазии и отсутствует при тяжелой.

На биологическое поведение дисплазии определенное влаяйке оказывает титр антител к В группе больных с высоким»:*. титрам (1:80 и более) кумулятивная вероятность прогрессии выше, чем в группе, где объединены серонегативные наблюдения и случаи с низки титром (1:20). Титр'антител к в значительно болт-шей степек влияет нп регрессию дисплазии, кумулятивная вероятность которой более чем в три раза повышается в объединенной группе (Н&*/-2 негативные и титр 1:20) -49,1+5,9, по сравнению с больными с высоким титром антител - 15,8+4,4, при сохранении достоверного разл: чия (р^ 0,001) во всех периодах наблюдения.

Следовательно, если регрессия дисплазии у больных с серонегати: ными данными и низким титром антител к закономерна, то

при высоких титрах такое биологическое поведение - скорее исключе1 чем правило. Таким образом, в настоящем исследовании подтверждена определенная ассоциация инфицированноеги с дисплазией шейк

матки. Однако факт, что частота нахождения антител к Е$\/-2 одинакова в промискуитетной группе (без патологии шейки матки), при дисплазии и РШМ,позволяет предположить, что инфшщюванность Н %\/-2 может отражать особенности сексуального поведения женщины (раннее начало половой жизни, частая смена сексуальных партнеров или ее партнера. Вместе с тем при отсутствии инфицированноети Н$\/-2 регрессия дисплазии наблюдается значительно чаще, чем при серопозитивных данных. Надо полагать, что инфекция Н5\/-2 имеет определенное значение в возникновении дисплазии и ее стабильном

существовании. Отмечена тенденция к большей частоте прогрессии всех видов дисплазии в преинвезивннй рак при высоких титрах антител к Н$\Л-2. Однако нередко такое биологическое поведение нелеченой дисплазии наблюдается и у женщин, не имеющих антител к Н$\/ -2. Следовательно, инфицированноеть Н$1/-2 имеет определенное значение в формировании условий для возникновения дисплазии (повышая ее риск) и для ее стабильного существования (отсутствие регрео сии), но ее роль в прогрессии дисплазии в инвазивнчй рак у многих больных остается сомнительной. Тем не менее высокий титр антител к Н£>ч/—2 (1:80 и более) может рассматриваться как фактор риска развития дисплазии и, возможно, рака шейки матки. Это может иметь большое практическое значение, т.к. другие факторы риска ИМ (раннее начало половой жизни, промискуитет женщины или ее парне-ра) трудно объективно учитывать. Бо всяком случае выявление инфи-цированности к Н£\/-2 может помочь в формировании группы риска, в которой показано ежегодное цитологическое и кольпоскоппческое обследование.

Влияние лечения интерфероном на содержание антител к Н$у/-2 в крови больннх НИМ

Одним из косвенных доказательств возможной роли НЯ\/-2 в канцерогенезе шейки матки явились данные об эффективности лечения интерфероном НОМ. Мы определяли у части больных леченных интерфероном, до и после его введения титр антител к -2. Из 12 больных ШМ, подвергшихся лечению интерфероном, у II титр антител к Н2\/-2 снижался, вплоть до полного исчезновения в 5 наблюдениях. Различия в уровне антител, полученные до и после применения интерферона, дястоверны (р 0,02). Это служит доказательством антивирусного действия интерферона и в случае участия вируса простого герпеса 2-го серотипа в генезе дисплазии, он может бнть использован для

профилактики рака шейки матки.

Результаты проведенного исследования позволили заключить,что выявление антител к Н$»\/-2 с большой частотой у больных раком шейки матки и женщин промискуитетной группы в совокупности с клиническими данными, по сравнению со здоровыми женщинами и девственницами может рассматриваться как один из аргументов в пользу возможной роли -2 в патогенезе дисплазии шейки матки.

Допускается также возможность синергизма HSvf-2, хламидий и питомегаловируса человека, выступающих в качестве агентов, иющш рующих развитие днсплязии.

Все же на острие проблемы вирусного канцерогенеза шейки матки сечас переместился вирус папилломы человека (НР\/ ).

С целью изучения признаков инфицированноети больных раком шейю матки и ракш вульвы вирусом папилломы человека (HPV' ) нами было проведено молекулярно-биологическое исследование вируса папилломы человека 6 и 16 генотипов.

Клинический материалы составили 17 больных раком шейки матга и Т4 больных раком вульвы. У всех больных верифицирован плоскокле1 ный рак. У 31 больной раком шейки матки и вульвы была выделена ДНИ и обследована на инфицированнооть ЕР\/6 и 76 генотипов. Результат) исследования представлены в табл. 5.

Как показали данные исследования ДНК, HPV выявлены в тканях опухоли у 23 из 31 больной или 74,2$. У 8 больных (25,8/0 не были обнаружены последовательности ДНК вируса папилломы человека ни, 6, ни 16 генотипов.

Таким образом, это подтверждает возможную роль вируса папиллом человека, в патогенезе опухолей рака шейки матки и рака вульзы.

Таблица 5

Результаты определения последовательностей вируса папилломы человека я и 16.генотипов в ДНК рака шейки матки и рака вульвы.

Локализгция опухоли

4 Вак шейки матки

Рак вульвы

Всего

Число больных

17

14

31

Последовательность вируса папилломы чело

НРу/ 6 и/или 16+

II

12

23(74,2)

НР/ 6 и 16-

8(25,8?)

В связи с тем, что вирус герпеса второго серотипа Н$\/-2 и вирус папилломы человека НР\/ 6,11,16 и 18 генотипов считаются потенциально оякогенныш факторами, а интерферон наиболее отчетлив

I

проявляет свое действие при опухолях, в этиологии и патогенезе которых существенную роль играет вирусная инфекция,представилось обоснованным провести клинические исследования его возможного влияния на рак шейки матки.

Клинико-морфологическое изучение влияния интерферона на рак шейки матки

Появившиеся в последние годы в литературе многочисленные сообщения и наши собственные наблюдения свидетельствуют о подавле нии развития ряда экспериментальных опухолей при введении интерферона. В клинике установлена эффективность интерферона при его внутримышечном введении больным с острым лейкозом, остеосаркомой,

6

2

маеломой, раком молочной железы. Представилось ваанш установить влияние.интерферона на течение опухолевого процесса у больных раком шейки матки, особенно в связи с предполагаемой ролью и НР\/ в генезе этого яабодевания.

У 208 больных с морфологический" доказанным раком шейки матки - интраэпителиальным (97 наблюдений) микроинвазивным (инвазия ^ 3 ш - 68 больных) и инвазивннм (стадия 1в - 38 наблюдения) - в качестве первого этапа лечения осуществлено подведение интерферона к тканям шейки матки с холыюмикроскопическим, цйгодогич§см: и гистологическим исследованием до лечения и после его завершена

Для наблюдения за динамикой морфологических изменений рака шейки матка в процессе леченая интерфероном у 114 больных был использован меток контактной люминесцентной щкроскоши. У всех бол вых проводилось патологическое исследование мазков с шейка матки до леченая, в процессе его и после завершения лечения интерферон Все больные после не менее 2-недедьного лечения интерфероном бш оперированы с последующим гистологическим исследованием серийно-ступенчатых срезов операционного препарата.

Результаты исследования полученные при контактной лиминесценз ной микроскошшСс увеличением х ,150) позволили разделить все) обследованных: больных на тра группа. 1-ая группа (51 человек) -вффект положительный. Отменены нзменения, свидетельствующие о регрессия опухоли, появление дистрофических изменений в опуходе клетках, большого количества многоядерных клеток, гигантских "rosi ядер. С увеличением дозы интерферона отмечалось уменьшение количества атипических клеток вплоть до полного исчезновения.'Наблюдг лось восстановление структуры многослойного плоского эпителия. 2.-я группа (35 человек) - аффект слабо выраженный. Указанные вш( изменения под влиянием интерферона нарастали медваяяо и была

нерезко выражены. 3-я группа (28 человек) - эффект отсутствовал: атипия клеток а ядер оставалась, как а до лечения.

Пря цитологическом исследовании эффект интерферона оценивался следующий образом: 1-я группа ( 78 больных) - выраженный эффект. %етки увеличиваются в размере, выявляется разряженноеть хроматина ядер, снижение интенсивности их окраска, в ядрах и цитоплазма клеток видны вакуоли, в некоторых клетках вакуолизация резко выражена. Местами отмечается выраженная лейоцатарная инфильтрация групп я комплексов опухолевых клеток, овидетельстаувдая об усилении иммунологических процессов.

2-я групп? (85 больных) - умеренный или слабый эффект: в мазках имелись отдельные груши и комплексы опухолевых клеток с нерезко выраженными признаками дистрофии. В 3-й группе (40 больных) -отсутствие эйтектв: в мазках, в процессе и в конце лечения интер-феро*? дистрофических изменений опухолевых клеток не наблюдалось.

По мере увеличения дозы вводимого интерферона наблюдали тенденцию к усилению дистрофических изменений опухолевых клеток.Отмечена прямая зависимость выраженности дистрофических изменений клеток от

дозы вводимого интерферона,( табл.6)

Ира введения в опухолевую ткань физиологического раствора

(плацебо) дистрофических изменений опухолевых клеток в мазках

обнаружено не было.

При гистологическом исследовании рак не был выявлен после

лечения интерфероном, у 69 больной из 203 (33,1^): из них у 49-

с преинвазивным рэком, у 16 больных, леченых по поводу микроинва-

зивного рака и 4 больных -Тв стадии. Эффект лечения в зависимости

от студни заболевания представлен в табл. 7.

Таблица 6

Сопоставление эффекта действия интерферона на опухолевые клетки в зависимости от дозы препарата (по результатам геологического исследования)

Доее интерферона ед.

Количество наблвдеянй

20- 000 24

20 тыс-ТОО тыс 36

120 тыс-850тыс 42 I млн. а

более 101

?.оз

Эффект интерферона

зкрая&нний

5 18

55

Ть. ' "

(38,5)

Слабей иди .умеренный

2 15 22

46

~ ~85 ~ (41,8)

Отсутствует

20 II

9

40

(19,7)

Примечание: х— в скобка«' %

Таблица 7

Сопоставление эффективности действия интерферона на опухоли в зависимости от стадии заболевания (по результатам гистологического исследования).

сределение холей шейки 'КИ по дням Общее число леченных больных йакЕлнтепЬемна

Полный регресс опухоли частичный регресс опухоли отсутствие регрессии опухоли

п п % п % п % ^

'8 'И 97 49 40 8

(50,5)х (4Т,3) (8,2)

Те оч 68 16 (23,4) 43 (63,3) 9 (13,3)

Тв ст. 38 4 27 7

(10,2) (71,4) (18,4)

[рамечания: х- в скобках %

Как видно из табл.7 далеко не всегда удавалось достичь полного клинико-морфологаческого излечения опухоли предварительными аппликациями интерферона, Это было достигнуто лишь в половине случаев преинвазивногр рака, почти в четверти случаев кцкро-анвазит-ного и лишь у кавдой 10-ой больной с раком 1в стадии. Не исключено, что эффект леченая мог бнть выше при увеличении дозн. Кроме того бяяо установлено, что суиествуют интерферон-чувстиательные и ин^ерферонразистентные опухоли шайка матки. К факторам, характеризующим чувствительность к интерферону, относятся молодой возраст пациентки а также начальные формы внсоко-дифферонхшрованяого и микроинвази?ного плоскоклеточного рака. Можно предположить, что чувствительность плоскоклеточного НИМ определяется наличием рецепторов интерферона в ткани опухоли, что определяет перспективность проведения специального исследования. Выявлены следующие критерии чувствительности рака шейка матка к интерферону: визуально определяемый регресс опухоли, дегенерация^ полное отторжение опухолевых клеток, эпителизация.

Лри неполном излечении опухоли отмечались клеточные изменения, свидетельствующие о регрессии опухоли. Так, например, до введения интерферона - вдвазивный рак, после лечения - преинвазивный рак; до лечения преинвазивный рак, после лечения - днсплазия и т.д. У ряда больных ни визуальных, ни морфологических изменений после лечения интерфероном отмечено не бало. Эго как правило пожилые женщины с низкодифференцированным плоскоклеточньм таком шейки матки.

В опухолях шейки матка после введения интерферона особенно часто'имело место развитие истинной эрозии с плотным лимФоплаз-моштаданм инфильтратом в строме у поверхности. В так4/х случаях очаги прзинвазавного рака либо отсутствовали, либо сохранились

в цервнкальннх железах, и выявить их удалось лишь при допол&итель ном исследовании ступенчатых срезов. Часто наблюдалось обильное слупшвевне опухолевых клеток с поверхностных участков опухоли, либо в просвет эндоцервикальных келез, замещенных опухолевыми ра: растениями. Мокко предположить, что именно таким путем происходило отторжение пластов каршномн си ^ Г с развитием иста ной эрозии. При инвазивном раке чаще встречали десквамацив опухолевых клеток, либо развитие некробиотических изменений в центре опухолевых тякей (так называемые центральные некрозы). Эта некро характеризовались наличием в центре опухолевых ячеек гомогенных эозинофильных масс или дегенеративно измененных опухолевых клеток, а тякже клеток с признаками кариорексиса или кариолизнса. Наиболее ранним признаком дегенеративных изменений в опухолевн клетках была гомогенизация хроматина в ядрях части опухолевых клеток, ^редко ядра с гомогенизированным хроматином приобретали уродливую, неправильную форму, изредка встречались многоядерные гигантские опухолевые клетки.

Изменения в стооме опухоли характеризовались частым выявлением лимфо1гатэр;ю--йлязмоцитарного инфильтрата выраженной или умеренной степени плотноста, а также активной пролиферацией фиброблас-тов. Нередко в инфильтрате наблвдалось довольно большое количеств полиморфно-ядерных лейкоцитов, которые часто внедрялись непосредственно в плястн и тяжи опухолевых клеток. Подобное оживление клеточной реакции стромн следует рассматривать как местную иммуно логическую реакцию на процессы резорбции опухоли. Иногда в толще подобных инфильтратов наблюдались группы или отдельные опухолевые клетки различной степени дистрофии. Таким образом: лимфогистиош-тарный инфильтрат способствовал регрессу опухолевых клеток под влиянием интерферона. Отмеченные изменения в опухоли прогрессироЕ при увеличении дозы вводимого интерферона и пролонгирования курса лечения.

35

X

Ня основании проведенного анализа мы пришли к заключению, что при . непосредственном воздействии интерферона интенсифицируются процессы спонтанного япопгоза презявазивного или инвазивного рака шейки матки, проявляющегося в развитии некробиотических процессов в опухоли о последующим ее отторжением, чему способствует активизированная местная ишуноморфологическля реакция стромы опухоли.

Суммируя полученные данные по применению интерферона при леченш больных ракоп шейки матки, можно констатировать его выраженное действие как самостоятельного противоопухолевого агента.Отдаленные результаты лечения с применением интерферона суммированы в табл.8.

Таблица 8.

Отдаленные результаты комбинированного лечения с применением интерферона-в зависимости от стадии заболевания (1379-1990 год)

Стадия Общее Умерли от

заболевания количество ИМ

больны': к

97 -

Са Г? ст. 68 I

Са Та ст. 38 о О

Живы 5 лет и более

__._____^

п

97 67

35

10$

98.5?;

92,1%

а

Все больные после завершения лечения прослежены в сроки от 5 до 15 лет. Среди больных леченых по поводу преинвазивного рака (Са

5>('^и) умерших нет, а без рецидивная 5-летняя выживаемость с оста! ла 100$. Среди больных с инвазивным раком умерли 4. Трое лечились по поводу Са Тв стадии и одна Са 1а стадии. Все больные, при отсутствии местного рецидива умерли от множественных метастазов в регионарные лимфатические узлы. %сло излеченных больных при 1а стадии составило 98.5$, при 1в - 92,1$. В качестве контроля были взяты группы больных одноименных стадий, оперированных в клинике с предварительного лечения интерфероном в Т979-Т990 гг. Отдаленные результаты лечения суммированы в табл. 9

Таблица 9

Отдаленные результаты оперативного лечения больных раком шейки матки без предварительного лечения интерфероном

Стадия заболевания Число больных Умерли от ИМ Живы 5 лет и более %

п п

Са ¿и Swta (0) 192 3 . 189 98.5

Са Та ст. 63 2 61 96,9

Са 1в ст. Т54 12 142 92,2

Как видно из табл. 9 при чисто оперативном лечении больных этих локализаций результаты составили : Са ^^ц (0)ст-98,5* при Та стадии - 96,6$, при Тв стадии - 92,2%, Это сопоставим с данными, приведенными Международной Федерацией акушеров гинекологов (РТ60) после оперативного лечения больных раком шейки матки одноименных стадий, бе? предварительного лечения интерфероном

с1 ^Т.995. Отмечается тенденаия^^л&тшй^выниваемост! при комбинированном (интерферон-^ операция]лечений больных преинва-

зивннм и гакроинвазивным раком 1а стадии. Здесь следует подчеркнуть, что если в контрольной группе из 63 больнчх1а стадии (без лечения интерфероном) объем операции во всех наблюдениях заключал! в экстирпации матки с верхней т/3 влагалища, то в случаях полного предварительного эффективного воздействия интерферона (у тб из 68 больных) 23,45? проведена органосохраняющая операция -широкая кони; ция шейки матки ^сохранением менструальной и детородной функций,'. Что касается больныхстадии, то показатели выживаемости в значительной степени зависят от регионарного метастазирования, а предварительное лечение этих больных интерфероном не влияет на улучшение отдаленных результатов у это?, группы больных.

Следует отметить, что из 154 больных оперированных по поводу Са (1в) стадии без предварительного лечения интерфероном, где у 24 больных (15,5$) в связи с большими (.более 3 см в диаметре; опу: лжи, с целью ее девитализании проводилась предоперационная лучевая терапия, а затем операция Зертгейма - 5 летняя выживаемое составил?. 92,2%. 3 группе из 38 больных так же оперированных по повод;'- Са (1в) стадии и где опухоли размером более 3 ом, имелись в б наблюдениях (15,7$), но после предварительного лечения интерфероном приведшего к значительному уменьшению опухолевых разшета-ний - 5 летняя выживаемость составила 92,1$. Отсюда следует, что предоперационная интэрферонотерапия у этих больных может рассшгр! виться з качестве альтернативы предоперационной лучевой терапии.

Нарушение интерферонового и иммунного статуса больных раком шейки матки и пути его коррекции

Основной целью исследования являлось изучение ИФНгстатуса у больных ВЖ и способов коррекции выявленных нарушений. Бсего ЙФН-

статус был изучен у 23 больных НИМ. 3 качестве контрольной группы обследочгнно 15 практически здоровых женщин.Показатели ИФН-ста-туса у больных ЕШ определяла в динашке:походной, до начала лечения и после его завершения.Интерферон вводкди в шейку матки один

раз в день в дозе 1.000,000 ед. в течение 10 дней (суммарная доза 10 млн.ед.). Исходный статус у больных НИМ представлен в табл. ТО.

Таблица 10

Исходный ИФН - статус у больных КМ

Группы обследоврнных больных ж - ИФН Титры ИФН___ у/-ИФН Сыворот.ИФ!

Больные РШМ п-23 7,5+0,12 (201) 5,2-9,8 5,3+0,14х (60) 0,0-6,2 4,7+0,25х (18) 0,0-5,7

Здоровые женщины п-15 7,8±0,18 1.206) 5,6-9,0 7,2+0,24 ,160) 5,4-9,2 1,4+0,23 0,0-4,1

Примечание: I строка- среднегеометрического титра;

2 строка среднегеометрически! тигр;

3 строка- диапазон колебаний титров з

х- разница мевду больными и здоровыми достоверна (р 0,01

Согласно денным таблицы, у больных НИМ способность к продукции альфа - ИФН была в пределах норды, о чем свидетельствуют приблиз: тельно одинаковые тигры аль|а - ИФН- и диапазон их колебаний у больных и здоровых. В отличие от альфа - И®- уровень продуцируемо: гамма - ИФН у больных был угнетен по сравнению со здоровыми. У бол них оказался нарушенным и уровень сывороточного ИФН: который был д товерно вше, чем у здоровых. Следовательно, у больных РЖ до нача лечения отмечается нарушение двух параметров ИФН- статуса,выра^рощ

в подавлении продукции гамма-ИФН и возрастания сызорогочноХрИФН.

Данные о влиянии интерферона ня показатели ИФН-стзтуса представлены в т абл.II.

Таблица II

Влияние курса лечения интерфероном на показатели ИФН-статуса у больных раком шейки матки.

'руппы !с ледова н- ix Сроки исследо- т вания ~ "Б об-ИФН оказзтели ИФН - с £ -ИФН татуса Сывор. ИФН

>льные шучавшие лерферон :-23 до лечения после лечения интерфе- • роком 7,5+0,12 5,2-9,8 7,9+0,8 5,5-9,1 5,3+0,14х 0,0-6,2 7,8+0,6 5,6 - 9,0 4,7+0,25 0,0-5,7 4,0+0,03 -0,0-4,1

.оровыэ нщины 15 7,8+0,18 5,6-9,0 7,2+0,24 5,4-9,2 1,4+0,23 0,0-4,1

х- розница между показателями у больных до и после лечения интерфероном достоверна (р ¿^0,05)

В результате лечения интерфероном достоверно повышается прод? гамма-интерферона и несколько снижается уровень сывороточного ИФ1 что свидетельствует о нормрлизующем действии препарата на ИФН-статус.

Влияние интерферона на показатели иммунореактивности у больных раком шейки матки

С этой целью изучалось действие интерферона на ряд показателе ишг/нореактавности больных раком шейки матки а целесообразности использования интерферона как иммуномодулятора при комбинирована

лечении. В табл. 12 представлены данные о влиянии интерферона на уровень Т=- лимфоцитов и их " активной" субпопуляции по результатам теста спонтанного В-розеткообоазозания. Таблица 12

Влияние иммунотерапии интерфероном на результаты теста Е-РСК у больных НИМ

Группы обследо- ----------Ео Показатели

-РШ Иа^-РСК

ванных ода. абс. отн. абс.

Больные, 41,5+2,8 840+103 26,8+4,3 451+71

получавшие интерферон ~5Т74+275Х 980^160 "34^0+1Т8Х~ 680+91

п-23

Здоровые лица п-15 52,0+2,8 980+63 36,4+2,8 630+58

.Примечание: числитель - до назначения интерферона

АЩНчЯ

знаменатель - послтштерфероном.

х- различие показателей у больных НПМ до и после лечения интерфероном достоверно (р <^0,05)

Как видно из табл.12 у больных НИЛ по сравнению со здоровыми походные показатели Ео-РЖ и Еа-РЖ были достоверно снижены, что указывает на выраженный иммунодефицит Т-лймфоцитов. После окончани* леченая интерфероном у больных отмечено достоверное повшпенге урозр Ео-РЖ и 'Еа-РЖ.

Модулирующее действие интерферона проявляется на фоне подавлен! способности т-клеток к розеткообразованию. Сравнение индивидуальных показателей теста Е-РСК до и. после ИФ-терапия выявило различную реакцию больных на интерферон.

До начала лечения у больных РШМ выявлялся Т-клеточный иммунодефицит, выражающийся в достоверном снижении относительного содержания Т-лимфоцитов и субпопуляции "активных" Т-клеток. Интерферон при действии ¿и \jl~kco в тесге Е-РСЖ вызывает почтя у 30% обследованных больных РШМ статистически достоверное увеличение уровня Т-лимфоцитов, в основном, за счет возрастания числа высо-кодифференцировянных Т-клеток ( интерфероночувствительных).

Интерфероночувствительнне опухоли преобладали у больных молодого возраста (20-35 лет), инфицированных вирусом папилломы человека, в то же время у 20$ больных после ЙФ-терапии уровень этих клеток не изменялся (интерферононечувствителыше).

Следовательно, определение чувствительноета к действия интерферона м с помощью несложной шроко используемой в клинике иммунологической реакции Е-РСК может помочь отбору больных, которым показана терапия интерфероном.

Таким образом, у больных РШМ начальных стадий выявлено нарушение ИФН-статусэ, выражающееся в угнетении способности к продукции гамма-ИФН и увеличении уровня сывороточного ИФИ, Предоперационная иммунотерапия интерфероном зызывает у больных ГШ индукцию сывороточного ИФН, восстановление продукции гамма-ИФН и нормализацию уровня Т-лимфоцитов и их "активной" фракции.

Разработка, метода лечения рака лейка матки 1а стадии.

Разовые,суммарные дозы.продолжительность лечения."

Цель нашего исследования - сохранение органа в анатомическом и функциональном отношении. Эта цель достигается тем, что проводится предварительное лечение интерфероном путем аппликаций маз& на.шйку матки.

Способ осуществдяаой;' следующим образом. Диагноз микрзиявазив-ного рака ограниченного эктоцерзиксом,уточняется с помощью цито-

логического, кольпоскопаческого и гистологического исследования, придельной биопсии. датем приступают к лечению интерфероновой мазью. Больной с помощью зеркал обнажается шейка матки. ^ зависимости от анатомических особенностей иейки матки подбирается по размеру колпачек Кафки. Колпачек Кафки не одну треть (примерно 5 г) наполняется лейкоцитарным интерфероном - мааью активностью 60 ООО ед. в 1г мази и апшпшируется к шейке матки. На следующий день колпачек снимается, стерилизуется, в него помещается такая же доза интерферона, после чего он вновь ашшшируется к шейке матки. Длительность лечения лейкоцитатрным интерфероном от 14 до 45 дней, суточная доза интерферона - 300.000 ед.

Определение оптимальной суммарной дозы при проведении противоопухолевой терапии оказалось сложно! задачей в связи с выраженной вариабельность® чувствительности опухолей к действа« интерферона, их локализации и различной степени реактивности организма. Оптимальной дозой при проведении противоопухолевой терапии должна считаться доза, достаточная для прляого клинако-морфологаческого излеяения Б наших исследованияъ она колебалась в дозе от 3 до 15 миллионов единиц.

Возможности и пределы органосохраняющего лечения (интерферон с последующей конизацией) у женщин молодого возраста с микрошвя.зивным раком шейка матки (1а стадия).

До сих пор отсутствует единство взглядов на лечение начальных форм (преинвазивного а микроиявазивного) рака шейки матки. Существует широкий диапазон лечебных воздействий - от радикальных до щадящих..

Последние 20 лет характеризовались изменениями в частоте использования традиционных я овгаяэсохраняших методов лечения.

На фоне сокращения объема расширенных вмешательств происходило увеличение функционально-щадящих и органосохраняющих операций.

В результате проведеннмх наш исследований и клинических наблюдений, полученных в результате лечения рака шейки матки с использованием интерферона, сформировались показания и методика адекватного лечения начальных форм рака шейки матки, которые пои сокращении объема лечения, без риска для жизни и здоровья женщин, будут способствовать их реабилитации.

При выработке плана лечения яачрл^ных форм рака шзкки матки -должны учитываться клинические, гистологические щ социальные критерии.

Клинические критерии это возраст больных (до 45 лет), гинекологический статус (состояние матки, придатков, влагалища, параметров), наличие сопутствующих заболеваний.

Гистологические- это степень дифференцировки опухоли (высо-кодифференцированный плоскоклеточный ороговевашщий рак), глубина инвазии (не более 3 мм) и характер инвазиваого роста, локализация очагч опухоли (влагалищная часть шейки матки), размер опухолевого очаг? (не более 0,7 см) и предопухолевых изменений, реакция подлежащей ткани и отсутствие эмбэлов опухолевых клеток в кровеносных и лимфатических сосудах стромы.

Социальные фактода - это желание иметь ребенка, возможность последующего систематического квалифицированного наблюдения с цитологическим и кольпоскопическиы контролем. Нщ выборе объема органо-сохраняющего лечения следует иметь ввиду, что оно долшо максимально исключать опасность рецидива и в то ке здаля обеспечивать наиболее полную медицинскую, социальную и сексуальную реабилитацию больнях.

Органосохраняющая операция у больных с начальными формами рака шейки матки, после учета всех перечисленных факторов, осуществляется после предварительного лечения интерфероном с полным клини-

ческим и цитологическим эффектом^ в объеме широкой даатзрло-конизации или нояевой ампутации шейка ыатки с последующим серийн ступенчатым исследованием удаленного препарата. После органо-сохраняющих операций обязательно прозодя/дая контрольные кольпоска пические и цитологические исследования. В случае неполного кди-нико-морфологичеокого издэнения опухоли интерфероном проводится одна из типовых операций, помазашш** для этих локализаций. Типовой операцией при лечении микроинва.знвного рака шейки матки с глубиной инвазии не более 3 ш является простая экстирпация матки с оставлением яичников у аэнщин молодого возраста. При более глубокой инвазии провозится операция Вертгейма или курс внутрипо-лостной лучевой терапии, йятерферонотерэпая при РШМ 1в стадии может заменить курс предоперационного облучения. После радикального оперативного лечения этих больных (операция Вертгейма) при инвазии опухоли до I см и отсутствии метастазов в удаленных лимфатических узлах можно воздержаться и от послеоперационного облучения. Выполнение органосохраяящей операции у больных с начальными форлами рака шейки мятки предотвращает возникновение пост-кастранионного синдрома, урологических я других оряжедах осложнений, связанных с проведением полостные операций, предотвращает появление психологического синдрома ущербности, расстройства мочевой и половой функций и практически не приводит к инвалидности. После оргяносохраяяищей операции женщины полностью восстанавливают здоровье и трудоспособность. Больные, перенесшие органосохранявди операции по поводу начальных форд рака шейки матки подлежат пожизненному наблюдении в условиях специализированного учреждения. В течение первых трек лет контрольные осмотры проводятся не реже одного раза в три месяца. При отсутствии патологических изменений в последующие годы контрольный осмотр проводят не реже одного раза в шесть месяцев.

Таким обр?зом, на основании проведенных исследований наш был разработан и обоснован оптимальный метод лечения начальных стадий рака шейки матки, яа основе патогенетического лечебного воздействия интерферона с дополнением сберегательной операции, что обеспечивает стойкое выздоровление без удаления органов репродуктивной системы, снижение стоимости лечения при сохранении его эффективности и способствует ускорению медицинской и социальной реабилитации больных и возвращению их к активной жизни. Способ показан у женщин молодого возраста (до 45 лет). Запатентован.

ВЫВ ОДЫ

I. У женщин промискуитетной группы дисплазии шейки матки внявля> ется в 10 раз чаще, чем при популящюняом скрининге (1$).

2. Серологическим исследованием установлено, что у больных преинвазивной и инвази^ной формой рака шейки матки, а также в промискуитетной группе наблвдаются у 81% женщин- с.мвысоким

титром (1:80 и выше), что существенно выше чем у гинекологически здоровых женщин (45$) и девственниц (39$) преимущественно с низким титром (1:4Ю и ниже).

3. Кумулятивный риск прогрессии нелеченой дисплазии з преин-вазияный рак составляет для слабой дисплазии - 4,1$, умеренной дисплазии - 18,]% тяжелой дисплазии - 25,1%, а спонтанной регрессии - соответственно - 45,6$, 29,3$, 24,7$.

4. Инфицированноеть Н^/-2 играет несомненную роль в инициации дисплазии шейки матки и препятствует ее спонтанной регрессии, но

ее роль в прогрессии дисплазии в иявазизный рак остается до конца не ясной.

5. К группе риска по заболеванию раком шейки матки относятся пациентки венерологического диспансера рано начавшие половую жизнь, часто меняющие половых партяероз, а также серопозитдвше к Н 5д/-2' с тигром 2:80 и выше.

6. С целью профилактики рака шейки матки, а также своевременного выявления начальных форм заболеваний у этой группы женщин цитологический скрининг мазков' с поверхности эктоцервикса и эндо-цервикса должен осуществляться чаще, чем в нормальной популяции женщин (не реже одного раза в год).

7. В эксперименте при индукции опухолей шейки матки и влагалища у мышей Д^-нитрозометилмочевиной новообразования развились е 42,9$, тогда как при одновременном с канцерогеном местном применении интерферона, опухоли возникли у 5,9$ животных, что свидетельствует об отчетливом антиканцерогенном эффекте интерферона.

8. Исследовано действие интерферона на рак шейки матки у больных, в результате чего доказана возможность полного регресса начальных 1а и в ряде случаев Тв стадий рака шейки матки.

9. Разработан метод лечения микроинвазизного рака шейки матки интерфероном и определены способ подведения препарата, разовые, суммарные дозы, продолжительность лечения, контрль за его эффек-

N

тивностью.

10. Адеквагннм хирургическим вмешательством при микрэяязазазнс раке шейки матки у женщин репродуктивного возраста является широкая конизация шейки матки, после предварительного полного шщнико-морфологического излечения опухолевого процесса интерфероном.

11. В случае неполного предварительного излечения микроинвазизного рака шейки матки или отсутствие его эффекта больны® подвергаются гистерэктомии с оставлением яичников у женщин до 45 лет.

12. йнтерферонотерапия при НИМ 1в" стадии и размере опухоли более 3-х см в диаметре, где показана предоперационная девитали-зация опухоли, может заменить курс предоперационного облучения,

g после радикального оперативного лечения этих больных (операция Вертгейма) при инвазии опухолйИ; см и отсутствии метастазов в удаленных лимфатических узлах- и послеоперационное облучение.

13. Определен иммунный и интерфероновый статус больных до лечения интерфероном и после его завершения. Выявлено нарушение ИФН - статуса, выражгщее в угнетении способности к продукции гамма-ИФН 5,3+0,14 и увеличении уровня сывороточного ИФН 4,7+0,25.

14. Выполнение органосохраняющего лечения у больных с микроин-вазивным раком шейки матки (1а стадия) у молодых женщин, предотвращает возникновение кастрационного синдрома, урологических и других тяжких осложнений, связанных с проведением полостных операций, предотвращая появление психологического синдрома ущербности, расстройства мочевой и половой функций.

15. Социальный и экономический эффект состоит в обеспечении ускорения и удешевления лечения, не снижая его эффективности, значительного укорочения периода нетрудоспособности и возвращения к труду клинически излеченньхгбольных, что полностью соответствует социальной, трудовой и психологической реабилитации больных начальными формами рака репродуктивной системы.

16. Больные перенесшие органосохраняющее лечение по поводу начальных Та форм рака шейки матки, подлежат пожизненному наблюдению в условиях специализированного учреждения.

Практические рекомендации (форма внедрения)

Т. У женщин промискуитетной группы дисплазия шейки матки выявляется в ТО раз чаще, чем при популяционном скрининге, поэтому

у этой группы женщин цитологический скрининг мазков с поверхнос эктоцервикса и эндоцервикса должен осуществляться не реже одного раза в год.

2. К группе риска по заболеванию раком шейки матки относятся пациентки венерологического диспансера рано начавшие половую жиз часто меняющие половых партнеров, а также серопозитивные к Н$\А с титром 1:80 и выше.

3. Адекватным хирургическим вмешательством при микроинвазивно раке шейки матки у женщин репродуктивного возраста является широ конизация шейки матки, после предварительного полного клинико-морфологического излечения опухолевого процесса интерфероном.

4. В случае неполного предварительного клинико-морфологическ излечения микроинвазивного рака шейки матки или отсутствие его эффекта больные подвергаются гистерэктомии с оставлением яичнико у женщин до 45 лег.

5. йнтерферонотерапия при ИР Тв стадии и размере опухоли более 3-х см в диаметре,где показана предоперационная девита-лизрция опухоли, может заменить курс предоперационного облучения а после радикяльного оперативного лечения этих больных (операция Вертгейма) при инвазии опухоли до Т. см . и отсутствии метасг зов в удаленных лимфатических узлах - и послеоперационное облуч ние.

6. Больные перенесшие органосохраняющее лечение по поводу начальных Та форм рака шейки иаткя, подлежат пожизненному яаблк дению в условиях специализированного учреждения. »

СПИССК ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ В.Васильев. Возможности контрастной и изотопной лимфографии в агностике лшфогещшх метастазов рака ма^ки.Вести, рентгенол и ра-ол. 1974,«, 53-57.

>.В.Кузнецов, Я.В.Бохмэн, В.И.Иовлев, Е.Г.Князев, Б.В.Васильев, .Я.Линденберг, Г.А.Севостьянов. Поиски генетической информации ви-усэ простого гер1еса в опухолевой ткани больных раком шейка матки сб. "Вирусы рака и лейкоза". М.1978,с.157-158. .В.Васильев, А.Ф.Урнанчеева,Я.В.Бохыан,А.Т.Волкова, Л.И.Декстер, .В.Ильин,Н.Л.Яцковская,Р.И.Пашкявнчус. Значение адекватного опреде-я клинической и "биологической" стадии для прогноза и реабилитации логических больных. Тезисы Всесоюзного симпозиума "Совершенствование [втодов реабилитации онкологических больных"Л.1978,с.22-23. ¡.П.Тобилевич, Л.Й.Декстер, В.В.Кузнецов, Б.В.Васильев,Н.В.Ильин, ..П.Крищюнас.Усовершенствование методов лечения больных раком шейка 1?тки с регионарными метастазами.Матер.Ш.Всесойзн.съезда онкологов 'ашкент,1979,с.187-188.

[.В.Бохман,С.Ф.Вантергальтер.Б.В.Васильев.Рентгеяоконтрастная дззмфо-

'рафия в комплексной диагностике лиыфогенных метастявов у онкогине-

сологических больных.Методические рекомендации. Л.1979.

[.В.Бохман,Д.Р.Зельдович,Л.П.Кузьмина,Б.В.Васильев; Н.В.Гарманова,

г.й.Декстер,Н.В.Ильия, А.Ф.Урманчеева, О.Ф.Чепик, В.И.Новик.Лечение

граинвазивного рака шейки матки. П.Всероссийский съезд онкологов.

Омск,1980.Теянсы докладов о.101-104. ¡.Г.Князев, Б.В.Васильев, В.И.Иовлев, А.И.Жудина.Г.Ф.Плужникова, г.И.Чернина, В.К.Габер, А.М.Дядькова,Я.В.Бохман,Ал.Смороданцев, Т.Ф.Сейц Поиски методом трэисфекции генетической информации вируса .-•ерпеса в опухолевой ткани больных раком шейки матки. Вопр.онкол. [981, №7,51-56.

3.В.Васильев,В.И.йовлев,П.Г.Князев,Я.В.Бохман, Ал.А.Смородинцев !) возможной роли вируса герпеса 2-го серотапа в развитии рака шейки латки.Акуш.н гин.1981,да,20-21.

З.В.Васильев.Л.Я.Николвева, В.Б.Лвшсий.Иммунологические показатели 7 больных раком шейки матки до и после лечения интерфероном.В сб.: ^специфические стимулятор» противоопухолевого иммунитета".Рига,1983,

с.160-161,

Ю. Я.В.Бохман,Б.В.Ваоильев. Вирусная гшо»еза генева рака шейка метки и ин^егферон.Материалы совещания экспертов стран членов СЭВ по теме: " Эпидемиология гинекологического рака и лечение ранних форм рака шейки матки" Тбилиси,1983, 47-49.

11. Я.В.Бо2мен, Б.В.Ваоильев, В.К.Габер, Н.Б.Румель. Серо-эхшдемиолс ческов научение возможной рода вируса герпеса 2 серотипа в генеае рака шейки матки. Там же, с.63-65.

12. Б.В.Васильев, Я.В.Бохман, В.Т.Курныгина. Хромолимфографая в онкологии (методические рекомендации) Л,1984.

13. Б.В.Ваоильев, Н.В.Гарманова, В.й.Новик, О.Ф.Чепик. Лейкоцитарный интерферон при лечении предрака и рака шейки матки. Матер.Всесоп;

сиыпов. "Ранняя диагностика, лечение предопухолевых и опухолевых еаболвваний шейки матки и диспансеризация кенского неселения".

Псков,1985, 42-43.

14. Б.В.Васильев, И.Ф.Баранский, Г.Ф.Пдукникова, В.й.Новик, Л.В.Арсе! Роль вируса просюго герпеса П серотипа -2) в патогенезе

рака шейки матки. Там Ее. с. 45-47.

15. Л.Я.Николаева, Б.В.Васильев, В.Б.Лецкий, Ал.А.Смородинцев Оценка иммунологического состояния больных раксал шейки матки до и после леченая инзерферояом. Иммунология, 1985 02, с.50-52.

16. Я.В.Бохман, Б.В.Васильев. Вирусная гипотеза геяеза рака шейки ма1 и интерферон. Мате. Ш.Всероссийск.съезда онкологов,1979,с.306-3О

17. Б.В.Васильев, Я.В.Бохман, О.Ф.Чепик, Н.В.Гарманова, В.й.Новик, В.И.Йовлев, А.Н.Степанов, Ал.А.Смородинцев, Л.Й.Декстер. Опыт клинического применения лейкоцитарного интерферона у больных рак-шейки матки. Вопр. онкол. 1886,М2,35-38.

18. Б.В.Васильев, 3>Х.Нвхушев. Сберегательное лечение больных пре- : ыикроинвэзивным раком шейка матка у больных молодого возраста. № Всесоюзн. ..симпоа. " Скрининг в раннем выявлении опухолей ренро

дуктивной системы и проведение органосохраняющего лечения".

г.Кострома, 1991,0.15.

19. B.V.Vasiliev, Ja.V.Bohman, A.A.Smorodintsev, O.f.Chepik, V.I.Novik, N.V.Garmanova, A.N.Stepanov, V.l.lovlev. An experience with application

of human leucocyte interferon for cervical treatment. Eur.J.Gynecol.Oncology, 1990, Vol.11, No4, P.108-111.

20. Ja.V.Bohman, O.K.Kuznetsov, B.V.Migunova, P.A.Aron, B.V.Vasiliev. Study of sequences of DNA of the human papilloma virus genotypes б and 16 in patients with cancer of vulva and cervix. Clin.Exp.Obstetr.Gynecol., 1990, Vol.17, No3-4, P.117-120.

21. B.V.Vasiliev, Z.H.Nahushev, Ja.V.Bohman. Efficacy of interferon treatment in patients with pre- and microinvasive cervical cancer. Proc.Ann.Meeting of Interferon International Society, 1991, November 3-8, Nice, France, P.38.

Изобретения:

Б.В.Ваоильев, С.А.Черноморский, В.Т.Курннгина. Средство для лимфографии. Патент M254I6 от 20.IX.197От.

Я.В.Бохман, А.Л.Ремизов, В.П.Тобилевич, А.Н.Стуков,Б.В.Васильед Средство для избирательного окрашивания лимфатических узлов Патент №4743,43 от 28.П. 1975.

Б.В.Васильев, Я.В.Бохман, В.И.йовлев, А.Н.Степанов, Ал.А.Смородин-дев. Способ лечения микроинзази^ного рака шейки матки.Патент на изобретение И454410 от 24.ХП.1986г.

А.П.Барчук, М.Д.Гельфонд, В.Б.Некрасова, Т.В.Никитина, З.Т.Нурныгина, З.П.Лебедева, Л.Н.Данилоз,А.И.Фрагина, Б.В.Васильев Средство "Фиталон" и "Фиталон-М" для профилактики злокачественных новообразований.Патент на изобретение №2031654 от 27.!Д.1995г.