Автореферат и диссертация по медицине (14.00.14) на тему:Оценка липидного обмена и иммуногенетических факторов у больных раком эндометрия

| I V V г**

3 с НОВ 13М

Министерство здравоохранения Российской Федерации

На правах рукописи

САФИНА Наталия Саматовна

ОЦЕНКА ЛИПИДНОГО ОБМЕНА И ИММУНОГЕНЕТИЧЕСКИХ ФАКТОРОВ У БОЛЬНЫХ РАКОМ ЭНДОМЕТРИЯ

специальность 14. 00.14 - онкология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Санкт - Петербург

Работа выполнена

в Санк - Петербургской Медицинской Академии Последипломного Образования МЗ РФ

Научные руководители:

доктор медицинских наук, профессор А. Ф. Урманчеева доктор биологических наук, профессор Н. В. Томилин

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Л. М. Берштейн доктор медицинских наук А. В. Семеновский

Ведущее научное учреждение:

Центральный научно - исследовательский рентгено -радиологический институт МЗ РФ

Защита диссертаци состоится « »_________ г. в 14

часов на заседании Специализированного совета (К.074.38.01) в НИИ онкологии им. проф. Н. Н. Петрова (189646, Санкт - Петербург, Песочный - 2, ул. Ленинградская, д. 68)

Автореферат разослан « <3»1999 г.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке НИИ онкологии им. проф. Н. Н. Петрова

Ученый секретарь Специализированного совета

доктор медицинских наук Е. В. Демин

Актуальность проблемы. В структуре онкологической )болеваемости женщин в России рак эндометрия (РЭ) (нимает четвертое место, составляя 6,2% (Двойрин В. В., <сель Е. М., Трапезников Н. Н., 1996); смертность от рака ;ла матки (РТМ) в России в 1995 году зарегистрирована а уровне 3,1 на 100000 женщин, в США - 2,6 на 100000 энщин (Cancer Statistics, 1996).

В Санкт-Петербурге рак эндометрия также занимает структуре онкологической заболеваемости у женщин гтвертое место. С 1980 по 1994 годы число больных РЭ )зросло на 80%, а смертность - увеличилась на 21,8% 1ерабишвили В. М., 1996).

В многочисленных работах, посвященных проблеме зка эндометрия, указывается, что больные раком тела атки имеют нарушения липидного обмена по типу тел ипопротеидемии, нередко в сочетании с (сулинонезависимым сахарным диабетом (ИНСД) и сериальной гипертензией (Бохман Я. В., 1972, 1979; ниневский А. С., 1989; Максимов С.Я., 1994; Берштейн Л. ., 1996; Schottenfeld D., 1995).

Известно, что рак эндометрия наиболее часто :тречается в возрастной группе женщин, находящихся в >стменопаузе, причем пик заболеваемости приходится на )-74 года, хотя 25% случаев регистрируется у пациенток в >еменопаузе, а 5% заболевания развивается у женщин эложе 40 лет, но все же опухоль в 2,85 раза чаще ввивается у больных старше 50 лет (Бохман Я. В.,1989, )92; Максимов С.Я.,1994). Таким образом, около трети )льных РТМ находится в трудоспособном возрасте, а жазатели смертности при распределении по стадиям ¡утешительны (Brun G., 1992; Zaino R., 1995; Pecorrelli S., »97).

Я. В. Бохманом (1978,1990) разработана концепция двух патогенетических вариантах течения рака !Дометрия. Первый гормонозависимый вариант РТМ, |блюдаемый у 60-70% больных, характеризуется более

- г-

благоприятным клиническим течением заболевания. При первом варианте течения заболевания у больных отмечаются нарушения липидного и углеводного обмена по типу дислипопротеидемии, ожирения, а также ИНСД, артериальная гипертензия и атеросклероз.

Регуляция обмена липидов находится под влиянием многочисленных генов, что связано с особенностями транспорта жиров в виде липопротеинов.

Различия в структуре генов липопротеинов, ответственных за уровень общего холестерина и триглицеридов в крови, были отмечены не только при дислипопротеидемии, но также и при нормолипидемии (Ильинский Б. В., Клюева С. К., 1985; Титов В. Н., 1998).

Современными методами молекулярной биологии можно оценить уровень экспрессии генов липопротеинов и, следовательно, генетическую предрасположенность к ожирению.

Экспрессия эукариотических генов контролируется, главным образом, специфическими ДНК связывающими белками, транскрипционными факторами, которые связываются с относительно короткими значащими последовательностями ДНК, локализованными как до, так и после последовательностей, кодирующих белки, а также внутри интронов. Все эти регуляторные

последовательности представляют собой сайты связывания транскрипционных факторов. Для регуляции генной экспрессии очень важно присутствие данных сайтов и количество их копий внутри гена. Относительно короткие значащие последовательности ДНК встречаются и в транспозонах, способных к перемещению. Примером модуляции генной экспрессии является инсерционная инактивация гена транспозонами, или Alu-последовательностями, присутствующими в геноме !эловека в количестве миллиона копий (Kazakov V., Tomilin 19 96).

- J -

Значительное количество исследователей (Bodmer , 1996; Goedegebmere P. S. et al., 1 997; Sanjeevi С. B. et ., 1995; Gohara R. et a I., 1997; Hoshino T. et al., 1997; imeni M. et al., 1997; Ohtake N. et al., 1998) отмечает рреляцию между частотой встречаемости ряда аллелей .А и онкологическими заболеваниями. Возможно, среди iда причин, способствующих развитию рака эндометрия у >льных с нарушениями липидного и углеводного обменов, рают роль также и иммунногенетические факторы.

Целью исследования является установление аимосвязей между особенностями липидного обмена у >льных раком эндометрия и измененениями в структуре нов аполипопротеинов и ангиотензин - конвертирующего эрмента, а также особенностями распределения аллелей .А II класса у больных РТМ.

Для выполнения цели исследования поставлены едующие задачи:

оценить клинические особенности липидного обмена у тьных РТМ;

выявить изменения липидного спектра крови у больных РТМ;

определить частоту изменений в некодирующих участках нов аполипопротеинов АI, CIII и AIV и гена ангиотензин -нвертирующего фермента у больных РТМ; оценить частоту встречаемости аллелей HLA II класса RВ1, DQB1, DQA1 у больных РТМ.

Научная новизна.

При исследовании особенностей липидного обмена у 1льных РЭ выявлена неоднородность корреляции между иническими показателями и типами дислипопротеидемий.

Установлены частота встречаемости аллелей HLA II асса у больных раком тела матки, а также относительный iс к развития РЭ у носителей определенных аллелей HLA =?В1, DQB1, DQA1.

Проведена оценка распространенности делеционного теля в генах аполипопротеинов АI, CIII и AIV, а также в

- у -

гене ангиотензин-конвертирующего фермента (АКФ) у больных раком тела матки.

Практическая ценность работы.

Полученные в результате исследований данные о частоте встречаемости аллелей HLA II класса у больных РЭ представляют интерес при проведении популяционной оценки относительного риска развития злокачественных новообразований у жителей Северо - Западного региона.

Исследование инсерционно-делеционного

полиморфизма Alu - повтора в генах аполипопротеинов AI, CHI и AIV и в гене ангиотензин-конвертирующего фермента у больных РТМ и в здоровой популяции позволяет оценить структурные особенности данных элементов генома человека, а также в дальнейшем использовать полученные результаты для понимания особенностей заболеваний с мультифакториальным типом наследования и при проведении медико- генетического консультирования.

Апробация работы.

Материалы диссертации обсуждались на заседании кафедры онкологии с курсом клинической радиологии Медицинской Академии Последипломного Образования (1999), на 9й Европейской конференции студентов и начинающих докторов в клинике Шарите, университет им. Гумбольдта (Берлин, Германия, 1998), на семинаре врачей по онкологии и гематологии в Зальцбурге (Австрия, 1999), на XXV конференции Американской Асссоциации иммуногенетиков (США, 1999). По теме диссертации опубликовано 9 печатных работ.

Основные положения, выносимые на защиту: 1. При изучении параметров - липидного спектра крови у больных раком эндометрия фенотипированы

дислипопротеидемии с преимущественными изменениями уровней триглицеридов (ТГ), холестерина липопротеинов высокой плотности (ЛПВП), липопротеинов очень низкой плотности (ЛПОНП) и липопротеинов низкой плотности

-s-

1ПНП).

. При исследовании частоты встречаемости делеционного ллеля (D- аллель) в промоторе гена аполипопротеинов АI, III и AIV у больных РТМ в 100% выявлены инсерционные эмозиготы, а в 16 интроне гена АКФ частота D - аллеля оответствует таковой в европейских популяциях. . Наибольший относительный риск развития РЭ выявлен у осителей аллелей DRB1*03 и DQB1*0201, а наименьший -ля носителей аллелей HLA I! класса DRB1*04, DRB1*01, QB1 *0301 и DQA1 "0301.

. Рак тела матки представляет собой группу заболеваний мультифакториальным типом наследования, что тражается как в особенностях патогенетической груктуры, так и в специфичности нарушений липидного бмена и иммуногенетических факторов.

Структура и объем работы.

Диссертация состоит из введения, 5 глав, выводов, зключения и указателя литературы. Объем работы эставляет 116 страниц. Указатель литературы содержит 73 отечественных и зарубежных источника. Диссертация плюстрирована 19 таблицами и 18 рисунками.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ.

Материал и методы исследования.

В настоящем исследовании были проанализированы шнические, патоморфологические, биохимические энные, а также истории болезни и амбулаторные карты }9 больных раком эндометрия 1-1\/ клинических стадий, зоходивших стационарное лечение в гинекологической шнике Ленинградского Областного Онкологического

диспансера с 1996 по 1998 годы, и 33 больных без онкологической патологии из группы сравнения, лечившихся в хирургической клинике больницы №16 с 1997 по 1998 годы.

Распределение больных раком эндометрия по возрастным группам было следующим: до 50 лет - 23 больных (21,1%), от 51 года до 60 лет - 32 больных (29,4%), старше 60 лет - 54 больных (49,5%). Средний возраст больных составил 60,13 лет.

В группе сравнения распределение по возрастным группам было следующим: до 50 лет - 11 больных (33,3%), от 51 года до 60 лет - 6 больных (18,2%), старше 60 лет -16 больных (48,5%), соответственно. Средний возраст больных в группе сравнения составил 60 лет.

Распределение по стадиям осуществлялось согласно международной классификации рака эндометрия (FIGO, 1988): I стадия - 78 больных (71,6%), II стадия - 14 больных (12,9%), III стадия -9 больных (8,2%), IV стадия -8 больных (7,3%).

По гистологическому строению преобладали опухоли с умеренной дифференцировкой - 58 больных (53,2%); высокодифференцированные аденокарциномы эндометрия -у 29 больных (26,6%), низкодифференцированные аденокарциномы эндометрия - у 22 больных (20,2%).

Большинство больных раком тела матки (85,3%) страдали заболеваниями сердечно-сосудистой системы (ишемическая болезнь сердца, атеросклероз сосудов различной локализации), в группе сравнения - 60,6% больных.

У 75 (68,8%) больных раком эндометрия выявлена артериальная гипертензия, несколько реже - в группе сравнения - у 18 (54,5%).

У 85 больных раком эндометрия и 33 больных из группы сравнения для изучения особенностей жирового обмена определялся уровень липидов в сыворотке крови: общий холестерин, триглицериды (ТГ) и холестерин

попротеинов высокой плотности (ЛПВП), используя андартные наборы реагентов для клинической бораторной диагностики фирмы "О^ех-сНадпоэисит".

Показатели липопротеинов очень низкой плотности ПОНП) рассчитывались по формуле: ЛПОНП = ТГ/5.

Показатели холестерина липопротеинов низкой отности (ЛПНП) также рассчитывались косвенным образом формуле:

1НП = общий холестерин-(холестерин ЛПОНП + холестерин IВ П).

Атерогенный индекс (АИ) вычислялся по формуле: 1 = (общий холестерин - холестерин Л П ВП)/холестерин 1ВП

Степени ожирения определялись согласно щепринятой классификации (Балаболкин М. И., 1991): степень-превышение 20-29% от показателей идеальной ссы тела;

степень - более.30-49% от показателей идеальной массы па;

степень - более 50-99% от показателей идеальной массы

па;

степень - более 100% от показателей идеальной массы

па,

Индекс массы тела, или индекс Кетле, рассчитывался формуле: ИМТ = масса тела (кг)/рост (смг).

Для определения типа ожирения у больных гибкой нтиметровой лентой на середине расстояния между тком и мечевидным отростком измерялся объем талии Т) и по межвертельной линии - объем бедер (ОБ), доминальный тип ожирения определялся при этношении ОТ/ОБ>0,81, глютеофеморальный тип прения - при соотношении ОТ/ОБ<0,81 (Гинзбург М. М., Э7).

Исследование инсерционно-делеционного

пиморфизма в промоторной области гена элипопротеина АI, являющейся местом локализации

кластера генов аполипопротеинов AI, 0111 и А IV (11 хромосома), и в 16 интроне гена АКФ проводилось при помощи полимеразной цепной реакции (ПЦР) и последующего анализа длин рестрикционных фрагментов в 8% полиакриламидном геле, ДНК в котором окрашивалась бромистым этидием. ДНК выделяли из цельной периферической крови по стандартной методике для протеиназного метода, с последующей фенольной экстракцией и осаждением изопропанолом.

Исследование частоты генов II класса HLA (аллели DRB1, DQB1, DQA1) проводилось методом ПЦР с использованием набора сиквенс-специфических праймеров («НПФ ДНК-Технология», Москва), позволяющим определять 13 групп аллелей DRB1*01-16 (базовый уровень разрешения), 11 аллелей DQB1 *0201-0608 (средний уровень разрешения) и 8 аллелей DQA1 *0101-0601 (высокий уровень разрешения).

При сравнительной оценке распределения фенотипических частот HLA II класса были использованы данные, полученные ранее в лаборатории иммуногематологии Российского института гематологии и трансфузиологии.

При оценке результатов исследования частоты аллелей HLA II класса принимались во внимание следующие показатели: величина относительного риска (RR), этиологическая фракция (EF), превентивная фракция (PF).

Величина относительного риска (RR) рассчитывалась по формуле, (Вейр Б., 1995): RR= (а х d) * (b х с), где а - количество больных - носителей данного признака, b - количество здоровых - носителей данного признака, с - количество больных, не имеющих данного признака, d - количество здоровых, не имеющих данного признака.

Этиологическая фракция (EF) рассчитывалась при значении величины относительного риска более 2 по формуле, (Rood J., 1984): EF=[(RR-1)+RR]xF.

-в-

Превентивная фракция (РР) рассчитывалась при (ачении относительного риска менее 1,0 по формуле, ;уе]даагс! А., 1975): РР=[(1-Рт)хР]-[КНх(1-Р)+Р]

Все математические расчеты выполнялись на фсональном компьютере с применением' стандартных и зигинальных статистических программ.

При оценке полученных данных использовались этоды статистического анализа: критерий х2 К. Пирсона и аксимального правдоподобия Р. Э. Фишера. Степень юбоды у = 2, статистически достоверными считались анные при р<0,05 (Вейр Б., 1995).

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.

Изучение особенностей липидного обмена у больных Э было проведено в результате сопоставления данных о •епени выраженности ожирения, оценки индекса Кетле, феделения типа ожирения, а также биохимических фаметров.

При оценке клинических показателей жирового обмена больных РТМ в полтора раза чаще было отмечено )евышение массы тела, чем в группе сравнения (72,5% и 1,4%, соответственно, р<0,05).

больных раком тела матки более часто выявлены I и II ■епени ожирения (29,1% и 36,7%), чем в группе сравнения 3,5% и 29,4%); III степень ожирения в полтора раза реже •мечена у больных раком эндометрия (31,6%), чем в группе >авнения (47,1%); в то же время у 2,6% больных раком ¡ла матки масса тела соответствовала IV степени кирения, в группе сравнения ни у одной больной масса ¡ла не превышала показателей IV степени ожирения <0,05). Сопоставление данных о степени выраженности кирения в обеих группах представлено в таблице 1.

Таблица 1.

Показатели липидного обмена у больных РТМ и в группе сравнения._

Показатели Больные РТМ Группа

липидного обмена сравнения

N = 109 % N = 33 %

Ожирение I степени 23 21,1 4 12,1

Ожирение II степени 29 26,6 5 15,1

Ожирение III степени 25 22,9 8 24,2

Ожирение IV степени 2 1,9 0 0

Отсутствие ожирения 30 27,5 16 48,6

ВСЕГО 109 100 33 100

Более показательными являются нарушения липидного обмена , выявленные с помощью индекса Кетле. Показатели индекса Кетле, превышающие норму, выявлены у 94 больных раком тела матки (86,2%), что в 1,5 раза чаще, чем в группе сравнения - 57,6%. В группе сравнения ни у одной больной индекс Кетле не превышал значения 40, тогда как среди больных раком эндометрия у 7,2% показатели индекса Кетле превышали значение 40, у 45% - находились в пределах от 30 до 40, у 34% больных - в пределах от 25 дс 29,9, (р<0,05). Полученные данные представлены на рисунке1 и в таблице 2.

Рисунок 1 .

Сравнительная оценка показателей липидного обмена по индексу Кетле у больных РЭ и в группе сравнения.

больные

резкоги эндометрия

сравнения

<24.9

25-29,9 30-40

индекс Кетле

- -

На рисунке 2 рассмотрены суммарные данные изменения показателей липидного обмена в обеих группах.

Рисунок 2.

Изменение показателей липидного спектра крови у больных раком эндометрия и в группе сравнения.

Статистически достоверные различия (р<0,05) отмечены между группами больных РТМ и сравнения по показателям триглицеридов, холестерина ЛПОНП и ЛПНП.

Необходимо учитывать тот факт, что отдельное рассмотрение биохимических показателей вне клинических проявлений не может быть корректным. Поэтому была проведена сравнительная оценка показателей липидного спектра крови и индекса Кетле.

При показателях индекса Кетле, превышающих норму, у 65 больных раком эндометрия (90,3%) отмечена дислипопротеидемия различных типов, а нормолипидемия -у 9,7%. При этом у 84,6% больных с показателями О -

- \ч -

индекса в пределах нормы также выявлена дислипопротеидемия. Из 76 больных РТМ с различными изменениями липидного спектра крови у 65 (85,5%) индекс Кетле превышал нормальные показатели, также у 9 больных с нормолипидемией индекс Кетле был выше нормы (77,8%), (табл.4).

Таблица 4.

Особенности липидного обмена по показателям индекса Кетле у больных РТМ.

Показатели Дислипопротеидемия Нормолипидемия

липидного обмена

65 7

0-индекс>нормы * {9 0,3 %) * (9,7 %)

* * (8 5,5 %) * * (7 7,8 %)

11 2

О-индекс^нормы * (8 4,6 %) * (1 5,4 %)

**(14,5%) **(22,2)

76 9

Всего * (8 9,4 %) * (1 0,6 %)

"(100%) "(100%)

* - подсчет по горизонтали

** - подсчет по вертикали

В патогенезе атеросклероза отводят существенную роль триглицеридам и липопротеинам, подвергшимся окислению. Цитотоксический эффект окисленных липопротеинов ЛПОНП и ЛПНП - осуществляется на уровне глубоких слоев сосудистой стенки, постепенно приводя к образованию атеросклеротической бляшки'. В тоже самое время установлено, что ЛПВП имеют более важное значение в прогнозе риска сердечно - сосудистых заболеваний у женщин по сравнению с мужчинами (Репина М. А., 1999).

- -и -

аблица 2.

оказатели индекса Кетле у больных РЭ в группе завнения.

Нормальные Показатели,

Индекс показатели превышающие норму Всего

Кетле <20 20-24,9 25-29,9 30-40 >40

ольные 0 15 37 49 8

РЭ (13,8%) (34%) (45%) (7,2%) 109

13,8% 86,2%

Группа 4 10 3 16 0

авнения (12,1%) (30,3%) (15,2%) (42,4%) 33

42,4% 57,6%

Во всех возрастных группах у больных раком (дометрия с одинаковой частотой (более двух третей эльных) выявлены клинические признаки нарушения чпидного обмена: в возрасте до 50 лет .- 78,3%, от 51 >да до 60 лет - 78,4%, старше 60 лет -66,7%.

В группе сравнения клинические признаки нарушения чпидного обмена были выявлены только у половины эльных: до 50 лет - у 5 больных (45,4%), от 51 года до 60 5Т - у 3 больных (50%), старше 60 лет - 9 больных '6,3%).

Необходимо отметить, что у больных раком тела атки преобладал абдоминальный тип ожирения (77,7%), а группе сравнения - глютеофеморальный (52,1%), <0,05).

В таблице 3 представлены данные о показателях шидного спектра крови у больных раком эндометрия и в :уппе сравнения,а также атерогенного индекса, зссчитанного косвенным путем.

Таблица 3.

Показатели липидов крови у больных раком эндометрия и в группе сравнения.

Больные РЭ Группа

Липиды крови сравнения

Показатели (ммоль/л)

Общий 5,12+0,19 4,79±0,12

холестерин

Триглицериды 1,55±0,08 1,31 ±0,07

Холестерин 1,12*0,07 0,97±0,06

ЛПВП

Холестерин 0,31 ±0,05 0,26±0,05

ЛПОНП

Холестерин 3,43±0,1 8 3,95±0,19

ЛПНП

Атерогенный 3,82±0,27 5,1 7±0,29

индекс

При изучении биохимических параметров липидногс спектра крови повышение показателей общего холестерине одинаково часто было выявлено как у больных ракол/ эндометрия (2,4%), так и в группе сравнения (3%); при этом гипертриглицеридемия в два раза чаще определялась е группе больных раком эндометрия - 31 больная (36,5%), чек/ в группе сравнения - 6 больных (18,2%), (р<0,05). Снижение холестерина ЛПВП выявлено у больных раком тела мат^ (68,2%) с такой же частотой, как и в группе сравнения -69,7%.

Снижение ЛПОНП выявлено в полтора раза чаще } больных РТМ (31,8%), чем в группе сравнения, а повышение показателей ЛПНП в два раза чаще определялось у больны> РЭ (17,4%), в группе сравнения - 9,1%. При этол* нормолипидемия практически с одинаковой частотоС выявлены в обеих группах - 10,6% у больных РТМ и 12,1% е группе сравнения, соответственно.

-\s -

У 67 больных раком тела матки (78,8%) выявлены признаки атеросклероза, причем у 34,3% - в сочетании со снижением показателей холестерина ЛПВП. В группе сравнения атеросклероз наблюдался реже - у 57,6%, но сочетался со сниженными показателями холестерина ЛПВП у 73,7% больных, (р<0,05). Атерогенный индекс у больных раком эндометрия составил 3,82, в группе сравнения - 5,17.

В результате исследования особенностей липидного обмена у больных РТМ была выявлена неоднородность корреляции между клиническими показателями и типами дислипопротеидемий.

В патогенезе дислипопротеидемии при ожирении и артериальной гипертензии, являющимися наиболее часто сопутствующими заболеваниями у больных раком эндометрия, особую роль играют липопротеины. Современные методы молекулярной биологии позволяют обнаружить возможную ассоциацию между инсерционно-делеционным полиморфизмом (I/D) в промоторе гена аполипопротеина А1 и в гене ангиотензин конвертирующего фермента и дислипопротеидемией. Поэтому мы провели сравнительное исследование частоты распределения инсерционно - делеционного полиморфизма в гене аполипопротеина А1 и ангиотензин конвертирующего фермента у больных с нарушениями липидного обмена, а также в группе сравнения.

В работе был исследован полиморфный Alu - повтор, локализованный в 5' - фланкирующей области генного кластера аполипопротеина AI, CIN и AIV (рис.3), находящегося на 11 хромосоме человека.

Рисунок 3.

Alu - повтор в 5' - фланкирующей области кластера генов аполипопротеинов AI, CHI и AIV.

Горизонтальными стрелками показаны направления транскрипции генов, вертикальными - расположение рестрикционных сайтов фрагмента, внутри которого расположен А1и- повтор.

При определении 1/0 полиморфизма на электрофореграмме возможны три варианта: делеционная гомозигота (00), инсерционная гомозигота (II), гетерозигота (Ю).

В промоторе гена аполипопротеина А1 в группе сравнения обнаружены две делеционные гомозиготы (00 -6%), одна гетерозигота (Ю -3%), 30 инсерционных гомозигот (Ю - 91%). Частота делеционного аллеля в группе сравнения составила 0,076. Среди больных раком эндометрия делеционных алеллей не выявлено (11-100%). Критерий х2 составил 2,95, 0,1<р>0,05, у = 2, (табл. 5).

Таблица 5.

Распределение делеционного аллеля в промоторе гена аполипопротеина А1 в группе сравнения и у больных РЭ.

ОО II Ю ВСЕГО

Группа сравнения 2 (6%) 30 (91%) 1 (3%) 33

Больные РЭ 0 31 0 31

При исследовании I/О полиморфизма в гене АКФ в группе сравнения делеционные гомозиготы выявлены у 10 больных (30%), инсерционные гомозиготы - у 9 (27%), гетерозиготы - у 14 (41%). Среди больных раком эндометрия распределение делеционного аллеля следующее: 00 - 9 больных (29%), II - 8 (28%), Ю - 14 (45%). Частота делеционного аллеля в группе сравнения составила 0,485, среди больных раком эндометрия - 0,484. Критерий х2 составил 0,06, р>0,05, у = 2, (табл. 6).

- м-

Габлица 6.

Частота делеционного аллеля гена АКФ в группе сравнения и у больных РЭ.

II Ю ВСЕГО

Группа сравнения 10 (30%) 9 (27%) 14 (41%) 33

Больные РЭ 9 (29%) 8 (28%) 14 (45%) 31

Электрофореграммы с образцами II, Ю и йО ■енотипов для гена АКФ и 5'- фланкирующего фрагмента сластера генов аполипопротеинов АI, АIV и С1П тредставлены на рис.4.

'исунок 4.

Электрофореграммы с II, Ш и Ой генотипами для гена \КФ и 5'- фланкирующего фрагмента кластера генов толипопротеинбв А1, 0111 и АIV.

3.,. и4?***!

Щ п н- I >

I > и „.^1-514_

¡-339 |

4 I— 216

12 3 4

4 '

% г,*

■ е

п. н. -495 -345

■210 •162

12 3 4

-м-

На рисунке А отображена электрофореграмма с образцами II, ID и DD генотипов для гена АКФ:

1. инсерционно - инсерционный вариант;

2. делеционно - делеционный вариант;

3. инсерционно - делеционный вариант;

4. маркер ДНК, с известным фрагментом длины.

На рисунке Б отображена электрофореграмма с образцами II, ID и DD генотипов для 5'- фланкирующего фрагмента аро AI, аро AIV аро CHI:

1. инсерционно - делеционный вариант;

2. делеционно - делеционный вариант;

3. инсерционно - делеционный вариант;

4. маркер ДНК, с известным фрагментом длины.

Можно предположить, что инсерционно - делеционный

полиморфизм гена АКФ и генов аполипопротеинов AI, CIN и AIV играет роль второго порядка в генезе дислипопротеидемии у больных раком эндометрия.

Вероятно, в процессе канцерогенеза при РЭ играют роль не только факторы, регулирующие особенности липидного обмена, но и гены главного комплекса гистосовместимости (МНС). В настоящее время известно, что частота распределения аллелей HLA играет значительную роль в иммунном состоянии организма. Поэтому, принимая во внимание особенности механизмов иммунного ответа при злокачественных опухолях, мы исследовали частоту встречаемости генов HLA II класса.

В таблице 7 приведены сравнительные данные результатов определения частоты аллелей HLA II класса в группе больных раком тела матки и у здоровых пациентов.

"аблица 7.

Сравнительные данные частот встречаемости аллелей -ILA II класса у больных РЭ и в группе здоровых 1ациентов.

1лели HLA II класса Снижение частоты встречаемости. Х2, (v=2) Р RR EF PF

Здоровые, п=78. РЭ, п=46.

DRB1*01 32,1% 13,1% 5,58 <0,05 0,14 0,114

DRB1*04 26,9% 4,4% 9,76 <0,01 0,12 0,125

QB1*0301 37,2% 13,1% 8,32 <0,01 0,25 0,151

QA1*0301 25,6% 10,9% 3,92 <0,05 0,35 0,166

Повышение частоты встречаемости.

DRB1*03 12,8% 39,1% 11,46 <0,001 4,37 0,139

QB1*0201 24,4% 41,3% 3,91 <0,05 2,19 0,103

Значительное повышение частоты аллеля Н1_А-ШВ1*03 установлено у больных раком тела матки (39,1%) о сравнению с группой здоровых пациентов - 12,8%, оставил 11,46, р<0,001, превентивная фракция - 0,139, акже отмечено повышение частоты аллеля 00в1*0201 у ольных раком эндометрия, что составило 41,3%, в то время ак в группе здоровых пациентов - 24,4%, х2 = 5,58, р<0,05, тносительный риск - 2,19, этиологическая фракция - 0,103.

Частота встречаемости аллеля Н1-А-ОРВ1*01 у Зольных раком эндометрия составила -13,1% и была :нижена по сравнению со здоровыми пациентами (32,1%), ^2 = 5,58, р<0,05, относительный риск - 0,14, превентивная фракция - 0,114.

Снижение частоты аллеля Н1_А-ОНВ1*04 выявлено у ольных раком тела матки (4,4%) по сравнению с группой доровых пациентов (26,9%), х2 составил 9,76, р<0,01, тносительный риск - 0,12, превентивная фракция -

- го -

0,125. При этом отмечено снижение частоты встречаемости аллеля 00131*0301 в группе больных раком тела матки (13,1%) по сравнению со здоровыми пациентами - 37,2%, /2 = 8,32, р<0,01, относительный риск составил 0,25, превентивная фракция - 0,15 и частоты встречаемости аллеля ООА1*0301 (10,9%) по сравнению со здоровыми пациентами - 25,6%, /2 = 3,92, р<0,05, относительный риск составил 0,35, превентивная фракция - 0,166.

Т.о., снижение частоты встречаемости аллелей ОЯВ1 *01, 0!-?В 1 *04, 00в1*0301, 00 А1 *0301 у больных раком эндометрия по сравнению с группой здоровых пациентов, позволяет высказать предположение, что в данном случае имеет место протективное действие генов. В то же время повышение частоты аллелей ОРВ1*ОЭ и 00в1*0201, выявленные у больных раком тела матки, возможно, увеличивают риск раннего развития рака эндометрия в популяции Северо-Западного региона.

Следовательно, повышение частоты встречаемости аллелей Н1-А II класса в группе больных РТМ может быть принято во внимание в качестве дополнительного фактора риска развития неоплазии при оценке совокупных показателей у лиц с явлениями дислипопротеидемии, артериальной гипертензии и заболеваниями сердечно -сосудистой системы.

Наибольший риск развития рака эндометрия, как отмечено на рисунке 5, обнаружен для носителей аллелей Н1А-ОИВ1*03 и 00 В1 *0201 и составляет 4,37 и 2,19, соответственно.

Наименьший относительный риск развития рака тела матки выявлен для носителей аллелей ОКВ1*04 и ОИВ1*01 (0,12 и 0,14), а также 00в1*0301 и ООАГ0301 (0,25 и 0,35, соответственно), что связано с протективным действием генов.

На рисунке 5 представлены сводные данные величин относительного риска развития заболевания по различным аллелям Н1.А II класса.

- 2-1 -

эисунок 5.

5аспределение показателей относительного риска 1азвития заболевания раком тела матки по различным «ллелям Н1_А II класса.

*озо 1 оав-1 -озо "1

РОВ 1 *020 1 оргвт -о4 о1=гв-1 -оз *01

Риск развития

0.35 сЗЗ 0.25

^ 2.19

Й» 0.12

^иниттитшашнш'чииттинииининииинич^д 4 , 3 7

СЭ 0.14

Для дальнейших исследований, посвященных >азрешению проблемы корреляции между относительным »иском развития рака эндометрия с частотой ;стречаемости аллелей ША II класса, необходимо читывать как клиникопатоморфологические особенности, ак и то, что РТМ является заболеванием с 1ультифакториальным типом наследования.

ВЫВОДЫ.

. У больных РТМ при оценке клинических показателей жирового обмена в полтора раза чаще была выявлена дислипопротеидемия, чем в группе сравнения (72,5% и 51,4%, соответственно, р<0,05). . При изучении липидного спектра крови у 89,4% больных РЭ фенотипированы дислипопротеидемии с преимущественными изменениями уровней

. триглицеридов, а также холестерина ЛПВП, ЛПОНП и ЛПНП.

. При исследовании особенностей жирового обмена у больных РЭ выявлена неоднородность корреляции

- 2 2 -

между клиническими показателями и типами дислипопротеидемий.

4. Частота встречаемости делеционного аллеля в промоторе гена аполипопротеина AI, CHI и AIV у обследованной популяции здоровых лиц Северо -Западного региона составила в 91% - инсерционные гомозиготы, в 6% - делеционные гомозиготы и в 3% -гетерозиготы, в тоже время у больных раком эндометрия в 100% отмечены инсерционные гомозиготы (0,1 <р>0,05).

5. При исследовании частоты распространения делеционного аллеля в 16 интроне гена АКФ у больных РТМ в 28% определены инсерционные гомозиготы, делеционные гомозиготы - в 29%, гетерозиготы - в 45%, в группе здоровых лиц инсерционные гомозиготы составили 27%, делеционные гомозиготы - 30%, гетерозиготы - 41% (р>0,05).

6. Статистически достоверные различия при оценке частоты встречаемости генов HLA II класса в группах больных РЭ и здоровых лиц в популяции Северо -Западного региона определены в специфичностях аллелей DRB1 *01, DRB1 *03, DRB1 *04, DQBT0201, DQB1*0301 и DQAT0301.

7. Наибольший относительный риск развития РТМ выявлен для носителей аллелей HLA II класса DRB1*03 и DQB1*0201 (р<0,001 и 0,05, соответственно), а наименьший - для носителей аллелей DRB1*04, DRB1*01, DQB1*0301 и DQA1*0301, что связано с протективным действием генов (р<0,05).

8. Рак эндометрия представляет собой группу заболеваний с мультифакториальным типом наследования, что отражается как в особенностях патогенетической структуры, так и в специфичности нарушений липидного обмена и иммуногенетических факторов.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ.

Полученные в результате исследований данные о астоте встречаемости аллелей HLA II класса у больных Э представляют интерес при проведении популяционной ценки относительного риска развития злокачественных овообразований у жителей Северо - Западного региона.

Исследование инсерционно-делеционного

элиморфизма Alu - повтора в генах аполипопротеинов AI, III и AIV и в гене ангиотензин-конвертирующего фермента больных РТМ и в здоровой популяции позволяет оценить груктурные особенности данных элементов генома эловека, а также в дальнейшем использовать полученные эзультаты для понимания особенностей заболеваний с ультифакториальным типом наследования и при эоведении медико- генетического консультирования.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ.

Н. С. Сафина, Н. Л. Аксенов, А. Ф. Урманчеева. сследование инсерционно - делеционного полиморфизма 1и-повторов в гене ангиотензин - конвертирующего актора и кластере генов аполипопротеинов у больных эком эндометрия//Сборник научных работ II конгресса с эждународным участием 17-20 июня 1998 года, аллиативная медицина и реабилитация.-1998.-№2-3.-.154.

Н. С. Сафина, А. Ф. Урманчеева, Н. Л. Аксенов, О. В. зишен. Г. Ф. Кутушева, Н. О. Кашина. Показатели тидного обмена у больных раком

1дометрия//Современные проблемы науки и практики.-398,- С. -Петербург,- С. 35-36.

3. N. Safina, N. Aksenov, A. Ourmantcheeva. Endometrial adenocarcinoma and its association with genetic polymorphism in 5'-region of apolipoprotein Al, Clll, AIV encoding genes//Materials of 9th European Student Conference of the Charite', October 21st-24th, 1998.-P. 217.

4. N. Safina, N. Aksenov, A. Ourmantcheeva. Genetic polymorphism of some Alu-repeats: correlation with endometrial adenocarcinoma //Abstracts of 23rd Congress of the European Society for Medical Oncology. Annalls of Oncology.-1 998.- Suppl. 4. Vol. 9.-P. 124-125.

5. N. Safina, L. Bubnova, T. Zubareva, A. Ourmantcheeva. The comparison of HLA class II molecular associations with endometrial cancer in North-West Russian population //XXV Meeting of Amer. Society of histocompatibility and immunogenetics. J. Hum.lmm.-Vol. 60. Suppl. 2.-1999. -P.84.

6. N. Safina, A. Ourmantcheeva, T. Zubareva, L. Bubnova Increased phenotype frequencies of human leukocyte antigenes class II via a possible mechanism of relative risk of endometrial adenocarcinoma//Book of abstract of the Vllth Baltic Sea Congress on Obstetrics and Gynecology, St. Petersburg, 12-15 May,1999. Journal of Obstetrics and woman's desease.-1 999,- Vol. XLVIII. - P. 136.

7. N. Safina, T. Zubareva, L. Bubnova, A. Ourmantcheeva. Identification of HLA class II in patients with endometrial adenocarcinoma//Materials of the European Cancer Conference, Vienna, 12-16 September, 1999. European Journal of Cancer.-1 999,- Suppl. 4. Vol. 35. - P. 192.

8. N. Safina, T. Zubareva, L. Bubnova, A. Ourmantcheeva. Endometrial cancer relative risk: a comparative study of HLA class II in North-West Russian population//Materials of 10th European Student Conference of the Charite', October 20st-24th, 1999,- P. 221.

9. H. С. Сафина, А. Ф. Урманчеева, H. В. Томилин, О. В. Кришен, Н. Л. Аксенов, В. И. Казаков, Л. А. Шрамко, Н. О. Кашина, Н. В. Арефина. Определение показателей липидного обмена и полиморфизма генов аполипопротеина

и ангиотензин-конвертирующего фермента у больных жом тела матки//Вопросы онкологии.-1 999,- в печати.

ообую признательность и благодарность автор приносит ¡учным руководителям проф., д. м. н. А. Ф. Урманчеевой I чуткость, внимание и неизменное терпение при .толнении работы и проф., д. б. н. Н. В. Томилину за ;нные советы при оформлении данных, научному нсультанту проф. д. м. н. Л. Н. Бубновой за постоянное 1имание и помощь в организации обработки материала, ру О. В. Кришен за скурпулезную оценку биохимических фаметров, сотрудникам института цитологии РАН б. н. В. И. Казакову и Н. Л. Аксенову и института матологии и трансфузиологии РАМН Т. Зубаревой за • едоставленные'материалы и ценные рекомендации при течатании диссертации, коллегам по 1когинекологическому отделению Областного -дологического диспансера за дружескую поддержку и астие в сборе клинических данных.