Автореферат и диссертация по медицине (14.00.15) на тему:Особенности воспалительного инфильтрата, атрофии слизистой оболочки желудка и полиморфизм генов цитокинов при раке желудка кишечного типа
- Ученая степень
- кандидата медицинских наук
- ВАК РФ
- 14.00.15
Автореферат диссертации по медицине на тему Особенности воспалительного инфильтрата, атрофии слизистой оболочки желудка и полиморфизм генов цитокинов при раке желудка кишечного типа
На правах рукописи
Новиков Дмитрий Георгиевич
ОСОБЕННОСТИ ВОСПАЛИТЕЛЬНОГО ИНФИЛЬТРАТА, АТРОФИИ СЛИЗИСТОЙ ОБОЛОЧКИ ЖЕЛУДКА И ПОЛИМОРФИЗМ ГЕНОВ цитокинов ПРИ РАКЕ ЖЕЛУДКА КИШЕЧНОГО ТИПА
(14.03.02 — патологическая анатомия)
Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук
1 7 Г.1АП ¿012
Омск-2012
005044573
005044573
Работа выполнена в государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Омская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации
Научный руководитель: доктор медицинских наук, профессор Кононов Алексей Владимирович
Официальные оппоненты:
доктор медицинских наук, профессор Агеева Татьяна Августовна, Новосибирский государственный медицинский университет, профессор кафедры патологической анатомии с секционным курсом
доктор медицинских наук, профессор Перельмутер Владимир Михайлович, Сибирский государственный медицинский университет, заведующий кафедрой патологической анатомии
Ведущая организация: ГБОУ ВПО «Челябинская государственная медицинская академия» Минздравсоцразвития России
Защита состоится " 0% " _2012 г. в /2 ■ ОО часов на
заседании диссертационного совета Д208.065.04 при Омской государственной медицинской академии (644043, Омск, ул. Ленина, д. 12, тел. 8-381-2-23-32-89).
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Омской государственной медицинской академии.
Автореферат разослан " С? Ь " _2012 г.
Ученый секретарь
диссертационного совета
доктор медицинских наук, профессор
Е.А. Потрохова
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность исследования. Международным агентством по изучению рака ВОЗ Helicobacter pylori (HP) был признан канцерогеном 1-й группы в 1994 году. HP не вызывает рак желудка, однако запускает воспалительную реакцию в слизистой оболочке желудка — хронический гастрит. Хроническое воспаление, в свою очередь, изменяет эпителиальный дифферон слизистой оболочки желудка, приводит к развитию в нем определенной последовательности молекулярно-биологических и морфологических изменений, отражением которых является атрофия слизистой оболочки желудка, развитие эпителиальной дисплазии/неоплазии, а затем и рака желудка кишечного типа (Correa Р. et al., 1987-2012; Konturek P.C. et al., 2009).
Особенности течения воспалительной реакции при HP-инфекции у индивидуума могут быть обусловлены носительством полиморфных аллелей генов цитокинов, обеспечивающих повышенную продукцию белка и, следовательно, выраженный воспалительный ответ (El-Omar Е.М. et al., 2000). Установлены полиморфные аллели генов цитокинов, ассоциированные с развитием рака желудка кишечного типа (Camargo М.С. et al., 2006, Shanks A.M. et al., 2009). Эти ассоциации значительно варьировали в различных популяциях (Gianfagna F. et al., 2008). Причем в большинстве исследований биологические эффекты носительства полиморфных аллелей генов цитокинов и их роль в регуляции воспаления при развитии рака желудка оценивались только на основании сведений об уровнях экспресии генов цитокинов и содержании цитокинов в сыворотке крови. При этом особенности проявлений воспаления в слизистой оболочке желудка, связанные с носительством полиморфных аллелей генов цитокинов, изучены только на уровне установления ассоциации двух феноменов: аллельный полиморфизм и язвенный дефект, аллельный полиморфизм и эксхеликобактерный гастрит, аллельный полиморфизм и рак желудка (Маев И.В. и соавт., 2008, Кононов A.B. и соавт., 2010, Агеева Е.С. и соавт., 2011, El-Omar Е.М. et al., 2003, Achyut B.R. et al., 2008). Конкретные морфогенетические механизмы, в которых реализуется последовательность: полиморфный ген — цитокин — молекулярная или клеточная мишень структурные изменения в органе-мишени все еще мало понятны.
Цель исследования: определить особенности хронического воспаления и атрофии слизистой оболочки желудка у больных раком
желудка кишечного типа, носителей полиморфных аллелей генов цитокинов, для оценки функциональной роли генетического полиморфизма.
Задачи исследования:
1. Установить ассоциацию иммунофенотипа клеток воспалительного инфильтрата слизистой оболочки желудка с носительством полиморфных аллелей генов цитокинов (интерлейкина-1р, рецепторного антагониста интерлейкина-1, интерлейкина-10, фактора некроза опухолей-а) у больных раком желудка кишечного типа.
2. Выявить особенности атрофических изменений в слизистой оболочке желудка, ассоциированные с носительством полиморфных аллелей перечисленных генов цитокинов у больных раком желудка кишечного типа.
3. Оценить состояние слизистой оболочки желудка (характеристику атрофии, состав воспалительного инфильтрата) в ее параканкрозной и дистантной зонах у больных раком желудка кишечного типа с учетом носительства комбинаций полиморфных аллелей генов цитокинов.
Научная новизна. При раке желудка кишечного типа, ассоциированного с носительством трех и более полиморфных аллелей С+3953Т и С-511Т гена 1Ь-1р, УНТЯ в интроне 2 гена 0-1082А гена
1Ь-10, С-308А гена ТОТ-а («провоспалительная» комбинация аллелей) установлены особенности развития хронического воспаления: среди мононуклеарных клеток, инфильтрирующих собственную пластинку слизистой оболочки, доминируют СБ20+, СЭ138+ лимфоциты и плазматические клетки; атрофия слизистой оболочки желудка характеризуется стадией IV хронического гастрита и наличием распространенных очагов кишечной метаплазии III типа (неполная толстокишечная метаплазия с продукцией сульфомуцинов).
«Молчащая» комбинация полиморфизмов (носительство менее 3 идентифицированных полиморфизмов) не ассоциирована с проявлением гуморального типа иммунного ответа в слизистой оболочке желудка (отсутствует пролиферация ^С-плазмоцитов) и, вероятно, каскад канцерогенеза у носителей данного генотипа поддерживается иными механизмами.
Практическая значимость работы. Полученные данные о топографии и иммунофенотипе клеток воспалительного инфильтрата и особенностях клеточного обновления эпителия могут использоваться в практике научных исследований по расшифровке ассоциативной взаимосвязи полиморфизма генов цитокинов и канцерогенеза при НР-инфекции.
Внедрение результатов исследования. Результаты исследования были использованы при разработке новой медицинской технологии «Молекулярно-геиетическая методика прогноза и патоморфологический мониторинг риска развития рака желудка кишечного типа при Helicobacter pylori-инфекции», утвержденной Росздравнадзором (ФС № 2010/220 от 10 июня 2010 г., серия АА 0000001, авторы: Кононов А.В., Потрохова Е.А., Мозговой С.И., Поморгайло Е.Г., Новиков Д.Г.).
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 8 печатных работ, в том числе 3 — в изданиях, рекомендованных ВАК.
Апробация работы. Диссертация выполнена в соответствии с планом научных исследований ГБОУ ВПО «Омская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации. Основные положения работы доложены на конференции молодых ученых «Актуальные вопросы клинической и экспериментальной медицины - 2010» (Санкт-Петербург, 2010), Всероссийской научной конференции студентов, аспирантов, молодых ученых с международным участием «Здоровье человека и среда обитания: фундаментальные и прикладные аспекты» (Омск, 2010), Всероссийской научной школе «Превентивная медицина, вызовы XXI века» (Омск, 2011), заседании Омского отделения Российского общества патологоанатомов (Омской областной общественной организации «Ассоциация патологоанатомов») (Омск, 2011).
Основные положения, выносимые на защиту:
1. Носительство трех и более полиморфных аллелей генов цитокинов: +3953Т и -511Т гена интерлейкина-lp, IL-1RN*2 гена рецепторного антагониста интерлейкина-1, -1082А гена интерлейкина-10, -308А гена фактора некроза опухолей-а («провоспалительная» комбинация аллелей) у больных раком желудка кишечного типа фенотипически проявляется высокой долей CD20+ лимфоцитов, CD138+ IgG-продуцирующих плазмоцитов в мононуклеарном воспалительном инфильтрате и доминированием стадии IV хронического гастрита, проявляющейся распространенными очагами кишечной метаплазии III типа (неполной толстокишечной метаплазии).
2. При раке желудка кишечного типа в дистантной зоне слизистой оболочки желудка доминируют (в сравнении с параканкрозной зоной) IgG-продуцирующие плазматические клетки, численность которых коррелирует с инфильтрацией CD20+ лимфоцитами. Параканкрозная зона
характеризуется выраженной инфильтрацией С08+ лимфоцитами и СВ68+ макрофагами. В дистантной и параканкрозной зонах выявляются выраженные атрофические изменения слизистой оболочки желудка (стадии
III и IV хронического гастрита). При раке желудка диффузного типа не наблюдается различий между параканкрозной и дистантной зонами слизистой оболочки желудка: слабо выражены С020+, С04+, С08+, СЭ68+ клеточная инфильтрация, атрофические изменения слизистой оболочки желудка соответствуют I и II стадиям хронического гастрита.
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 196 страницах машинописного текста, содержит 13 таблиц, 62 рисунка. Работа состоит из 7 глав. Список литературы включает 33 отечественных и 120 зарубежных источников.
Личный вклад автора. Автором проведен анализ научных публикаций по теме диссертационного исследования, вырезка операционного материала, его гистопатологическая оценка, иммуногистохимическое и молекулярно-генетическое исследование, статистический анализ полученных результатов.
СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ
Материалы и методы исследования. Выполнено когортное одномоментное сравнительное контролируемое исследование. Объектами исследования были фрагменты слизистой оболочки желудков, резецированных по поводу наличия рака желудка кишечного и диффузного типаги венозная кровь 116 лиц, находившихся на лечении в Бюджетном учреждении здравоохранения «Омский областной клинический онкологический диспансер». Критериями включения являлись: проживание на территории юга Западной Сибири, этническая принадлежность к русским. Критерии исключения: наличие крупной опухоли, занимающей более 60% антрального отдела или тела желудка, наличие стадии опухолевого процесса
IV (Т1-4М0-1М1), которая характеризовалась наличием метастазов в другие органы брюшной полости, наличие в анамнезе аутоиммунных болезней, наличие родственных связей между лицами, включенными в исследование. В каждом случае имелось информированное согласие пациентов на проведение молекулярно-генетического исследования. Проведение молекулярно-генетического исследования было одобрено локальным этическим комитетом ОмГМА.
В исследуемую группу - были включены 82 больных раком желудка кишечного типа, средний возраст которых составил 60,3 ± 8,6 лет. Частой
6
локализацией опухоли был угол желудка (54,9%), реже встречалась локализация опухоли по малой кривизне антрального отдела (37,8%). Редкой локализацией опухоли были малая и большая кривизна тела желудка (2,4% и 4,9% соответственно). Статистически значимых различий при оценке степени и стадии хронического гастрита при различных локализациях опухоли обнаружено не было (р=0,32 и р—0,16 соответственно). В группе больных раком желудка кишечного типа наиболее частыми вариантами опухоли по классификации ТЫМ были ТЗЬ'ОМО и Т4Ы0М0 (суммарная частота 45,1% и 39,0% соответственно), относящиеся к II стадии опухоли по классификации ВОЗ. III стадия (Т1-4Ы1М0) встречалась в 12,2% случаев. В 3,7% случаев наблюдалась опухоль, характеризовавшаяся по данной классификации как Т2 N0 МО (стадия I).
С целью исключения влияния субъективных факторов на результат морфологической оценки применялся метод «ослепления» патолога: материал, полученный от одного больного, был закодирован двумя различными номерами для морфологического и генетического исследования, которые сопоставлялись только на заключительном этапе исследования.
В группу сравнения были включены 34 больных раком желудка диффузного типа, средний возраст которых составил 53,8 + 5,2 года. Генетическое исследование у больных этой группы не проводилось, так как роль носительства полиморфных аллелей генов цитокинов, в патогенезе заболевания не доказана.
В контрольную группу были включены 104 здоровых донора средним возрастом 52,3±7,1 года, не имеющие онкологических заболеваний в анамнезе и не состоящие в родстве. Группа была сформирована для оценки частот полиморфных аллелей генов цитокинов в исследуемой популяции, что является необходимым требованием при проведении молекулярно-генетических исследований. Морфологических исследований в ней не проводили.
Гистологические методы исследования. Объектом исследования был операционный материал резецированного по Бильрот-1 и Бильрот-П желудка. От резецированного желудка отделяли большой сальник, вскрывали желудок по большой кривизне, расправляли на листе фанеры и фиксировали в 10%-ном забуференном формалине 12-24 часа. Забор фрагментов слизистой оболочки желудка проводили из параканкрозной зоны (на расстоянии 5 мм от границы слизистой оболочки желудка с опухолью) и из дистантной зоны: малая, большая кривизна, передняя, задняя стенки антрального отдела; угол
желудка; малая, большая кривизна, передняя, задняя стенки тела желудка. Дополнительно вырезали фрагмент опухоли.
Подразделение слизистой оболочки желудка на дистантную и параканкрозную зоны весьма условно и представляет методический прием, с помощью которого мы хотели по возможности отдельно рассмотреть иммунный ответ на опухоль (параканкрозная зона) и собственно интересующую нас дистантную зону, которую условно принимали как отражение каскада Р.Соггеа до этапа неопластических изменений эпителия. В дистантной зоне, мы полагаем, можно оценить особенности воспалительного ответа и изменений клеточного обновления у лиц с аллельным полиморфизмов генов цитокинов, ассоциированных с раком желудка кишечного типа.
Проводку биоптатов, заливку в парафин и приготовление парафиновых срезов проводили общепринятыми методами с помощью аппарата STP-120, заливочной станции ЕС-350 и ротационного микротома НМ 340Е (Microm, Германия).
Гистологические препараты окрашивали гематоксилином и эозином.
Для оценки атрофии и выраженности воспаления в слизистой оболочке желудка использовали визуально-аналоговую шкалу Российского пересмотра Международной классификации хронического гастрита OLGA, разработанного сотрудниками кафедры патологической анатомии Омской государственной медицинской академии и утвержденного III съездом Российского общества патологоанатомов (Самара, 2009) (Аруин Л.И. и соавт., 2009).
Гистохимические методы исследования использованы для верификации типа кишечной метаплазии (Мозговой С.И., 2009). Использовали сочетание красителей альцианового синего (при рН=2,5) и ШИК -реакции для верификации I и II типа кишечной метаплазии, сочетание диамина железа и альцианового синего (при рН=2,5) - III типа кишечной метаплазии. Соотношение типов кишечной метаплазии оценивалось в процентах при подсчете желез в каждом фрагменте в 10 полях зрения при 400-кратном увеличении микроскопа. Распространенность очагов кишечной метаплазии оценивалась полуколичественно, в соответствии с Модифицированной Сиднейской системой (Dixon М. et al., 1996).
Иммуногистохимическое исследование выполняли на парафиновых срезах. Демаскировку антигенов осуществляли в цитратном буфере (рН=6,0) при кипячении на водяной бане на протяжении 1 часа. Использовали
первичные ready to use (готовые к использованию, без разведения) мышиные моноклональные антитела к CD4 (клон - 1F6), CD8 (клон - 144В), CD138 (клон - MI15) («DAKO», Дания), CD20 (клон - L26), CD68 (клон - КР1) («Diagnostic Biosystems», США) и кроличьи политональные антитела к IgA, IgG («DAKO», Дания). Ядра докрашивали гематоксилином Майера. Биотинилированные антитела второго слоя и стрептавидин, меченный пероксидазой, входили в систему визуализации КР-500 («Diagnostic Biosystems», США). Определяли относительное количество позитивно окрашенных клеток, подсчитывая при 400-кратном увеличении долю (в %) положительно окрашенных клеток мононуклеарного воспалительного инфильтрата в собственной пластинке слизистой оболочки желудка в 10 случайно выбранных полях зрения (не менее 1000 клеток). Подсчет CD138+, IgA+, IgG+ клеток проводился в 1 мм2 среза.
Просмотр и фотографирование микропрепаратов осуществляли на микроскопе Axioskop 40 с цифровой фотокамерой Axiocam MRc5 («Carl Zeiss», Германия).
Генетический метод исследования (метод полимеразнои цепной реакции) применяли для исследования полиморфизма следующих генов интерлейкина-lß (IL-lß С+3953Т, С-511Т), рецепторного антагониста интерлейкина-1 (IL-1RN VNTR во 2 интроне), фактора некроза опухолей-а (TNF-а G-308A), интерлейкина-10 (IL-10 G-1082A) в лейкоцитах периферической крови.
Для определения полиморфных локусов С+3953Т, С-511Т гена IL-lß и VNTR-полиморфизма во 2 интроне гена IL-1RN использовали коммерческие наборы, производимые Институтом химической биологии и фундаментальной медицины СО РАН (Новосибирск). Для определения полиморфных локусов G-308A гена TNF-a и G-1082A гена IL-10 использовались наборы «SNP-экспресс» (НПФ «Литех», Москва). Этапы выделения, амплификации ДНК, рестрикции и детекции продуктов амплификации выполнялись в соответствии с требованиями, указываемыми производителем. Этап амплификации выполнялся на термоциклере «Терцик» (ДНК-технология, Москва). Исследование выполнено в лаборатории кафедры патологической анатомии Омской государственной медицинской академии.
Статистические методы исследования. Минимальный размер выборки определялся по формуле F. Lopez-Jimenez с соавт. (Lopez-Jimenez F. et. al., 1998) и составил 32 наблюдения. Для анализа достоверности различий использовались критерии: хи-квадрат (%2), Манна — Уитни (U),
Краскела-Уоллеса (H), точный критерий Фишера (Гланц С., 1998). Пороговая величина вероятности ошибки считалась на уровне 0,05. Значения показателя отношения шансов (OR), оценку соответствия частот аллелей и генотипов закону Харди-Вайнберга проводили на онлайн-калькуляторе: http://ihg2.helmholtz-muenchen.de/cgi-bin/hw/hwal.pl. Для остальных вычислений и построения диаграмм использовали Microsoft Office Excel 2003 и Statistica 7.0.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Результаты оценки степени хронического гастрита (выраженность воспалительного инфильтрата слизистой оболочки желудка) показали, что у больных раком желудка кишечного типа наиболее распространенной была степень III хронического гастрита, соответствующая значительной мононуклеарной инфильтрации собственной пластинки слизистой оболочки, наблюдалась у 48,8% больных (рис 1).
Рис. 1. Частота выявления степени I-1V хронического гастрита (выраженность воспалительного инфильтрата собственной пластинки слизистой оболочки желудка) в группах больных раком желудка кишечного и диффузного типа.
Было установлено, что степень хронического гастрита у больных раком желудка кишечного типа коррелирует с количеством исследуемых полиморфных аллелей (rs=0,66; р=0,03). Обнаруженная корреляция, вероятно, обусловлена функциональной ролью исследуемых полиморфных аллелей в регуляции интенсивности воспалительного ответа в слизистой оболочке желудка. Ранее установлено, что носительство этих полиморфных аллелей приводит к повышенной продукции цитокинов (Persson С. et al., 2009, Murphy G., et al., 2009), как на начальных этапах хронического
гастрита, так и при персистенции воспалительного инфильтрата в слизистой оболочке желудка (Кононов А.В. и соавт., 2010, Smith A.J. et al., 2009).
Таким образом, если у носителей полиморфных аллелей имеется предрасположенность к развитию выраженного провоспалительного ответа, это является важным фактором прогрессирования каскада Р.Соггеа, который берет свое начало на этапе воспаления слизистой оболочки желудка, с дальнейшим развитием атрофических изменений, дисплазии/неоплазии эпителия и инвазивной карциномы кишечного типа (Correa P. et al., 2012).
В наших исследованиях высокий уровень мононуклеарной воспалительной инфильтрации слизистой оболочки желудка (степень хронического гастрита III-IV) у больных раком желудка кишечного типа ассоциирован с сочетанием полиморфных аллелей: +3953Т и -511Т гена 1L-ip, -1082А гена IL-10, -308А гена TNF-a, IL-1RN*2. В связи с изложенным, операционный материал больных раком желудка кишечного типа был разделен на две подгруппы, в зависимости от носительства комбинации полиморфных аллелей. Подгруппа носителей «провоспалительной» комбинации аллелей сформирована на основании преобладания в их генотипе исследуемых полиморфных аллелей генов цитокинов, то есть наличия 3 и более полиморфных аллелей. Правомерность такого подхода была показана Е.М. El-Omar и соавторами (2003), обнаружившими повышенный риск развития рака желудка именно у носителей 3-4 полиморфных аллелей генов цитокинов и применивших к подобным комбинациям аллелей дефиницию «провоспалительный генотип».
Операционный материал больных раком желудка кишечного типа, у которых было обнаружено носительство менее трех исследуемых полиморфных аллелей, был включен в подгруппу «молчащей» комбинации аллелей. Применение такого несколько механистического подхода при оценке генотипа и сделало возможным сформировать две сопоставимые между собой подгруппы. Понятия «провоспалительной» и «молчащей» комбинации аллелей указывают на их функциональную роль применительно не к развитию опухоли, а к оценке функционального проявления генетического полиморфизма, реализующегося хронизацией воспаления, влекущей за собой выраженное нарушение клеточного обновления слизистой оболочки желудка.
При анализе состава воспалительного инфильтрата собственной пластинки слизистой оболочки желудка у больных раком желудка кишечного типа нами было обнаружено, что в подгруппе больных с
«провоспалительной» комбинацией аллелей наблюдается достоверно более выраженная инфильтрация дистантной зоны слизистой оболочки желудка С020+ клетками (табл.1). При этом доля СБ20+ клеток в собственной пластинке слизистой оболочки желудка коррелирует с показателем степени хронического гастрита (г5=0, 83; р<0,001).
Таблица 1
Количество (%) СП20+ лимфоцитов у носителей «провоспалительной»
и «молчащей» комбинации аллелей
Комбинация аллелей Топография слизистой оболочки желудка
Дистантная зона Параканкрозная зона
Ме ь<з-Н(5 Міп-Мах Ме ь<з-нд Міп-Мах
«Провоспалительная» комбинация аллелей 9,2м 6,1-9,8 5,711,6 3,8* 2,1-4,7 1,8-5,8
«Молчащая» комбинация аллелей 5,2*А 4,7-5,9 3,9-7,8 3,1* 2,5-3,9 2,0-4,7
Условные обозначения: Ме - медиана, Ь<3-НС> - межквартильный интервал, Мт-Мах - минимальное-максимальное значения. * - р<0,05 между столбцами одной строки, л - р<0,05 между строками одного столбца.
У носителей «молчащей» комбинации аллелей инфильтрация дистантной зоны слизистой оболочки желудка СВ20+ лимфоцитами была достоверно ниже (р=0,02) по сравнению с инфильтрацией слизистой оболочки в подгруппе «провоспалительной» комбинации аллелей.
Различий СБ20+ инфильтрации в параканкрозной зоне между подгруппами выявлено не было (р=0,09).
В исследуемой популяции была выявлена ассоциация с развитием опухоли только аллелей -511Т гена 1Ь-1р и -1082А гена 1Ь-10. Вполне может оказаться, что в регуляции цитокиновой сети малозначимой является роль носительства отдельного полиморфного аллеля, тогда как комбинация нескольких провоспалительных аллелей, по-видимому, обеспечивает определенный профиль продукции цитокинов («провоспалительная» и «молчащая» комбинации аллелей), который формирует фенотип хронического воспаления в слизистой оболочке желудка. Воспалительный инфильтрат собственной пластинки слизистой оболочки желудка, в свою очередь, обусловливает нарушение клеточного обновления эпителия.
Как установлено, одной из характеристик иммунофенотипа клеток воспалительного инфильтрата является преобладание СБ20+ лимфоцитов в подгруппе с «провоспалительной» комбинацией аллелей. При этом С020+ лимфоциты являются эффекторными клетками только для 1Ь-10, тогда как остальные цитокины, полиморфные аллели которых были включены нами в «провоспалительную» комбинацию аллелей, не оказывают непосредственного влияния на СБ20+ клетки. Вероятно, у носителей «провоспалительной» комбинации аллелей выраженная инфильтрация С020+ клетками, предшественниками плазматических клеток, может рассматриваться как маркер хронического воспаления в собственной пластинке слизистой оболочки желудка.
Инфильтрация собственной пластинки слизистой оболочки желудка С020+ лимфоцитами была более выражена в ее дистантной зоне (табл.1). Количество С020+ лимфоцитов находилось в положительной корреляционной связи с количеством плазматических клеток (СО 138+) в собственной пластинке слизистой оболочки желудка (г5=0,79; р=0,003).
Данная находка указывает на уже состоявшуюся реализацию хронического воспалительного ответа. При этом параканкрозная зона слизистой оболочки желудка, также как и в случае с С020+ клетками, характеризовалась низкой плотностью плазмоцитарной инфильтрации. Эти результаты согласуются с данными, полученными И.А. Даниловой и Н.М. Аничковым, указывающими на уменьшение плотности плазмоцитарной инфильтрации параканкрозной зоны слизистой оболочки желудка у больных раком желудка кишечного типа, происходящей параллельно с ростом опухоли и ее инвазией (Данилова И.А. и соавт., 2011).
Аналогичные закономерности различия дистантной и параканкрозной зон были получены и при оценке выраженности инфильтрации слизистой оболочки желудка и ^С+плазмоцитами (табл. 2). Нами было
обнаружено, что в дистантной зоне слизистой оболочки желудка наблюдалась выраженная инфильтрация плазмоцитами, в
сравнении с параканкрозной зоной (табл. 2). Похожие результаты были получены М. (31<1т£-.1агЬппк и соавторами с помощью метода проточной цитометрии (С^сПгщ-ЛагЬппк М. й а1., 2009).
Таблица 2
Количественные показатели состава популяции плазмоцитов
Состав Топография слизистой оболочки желудка
клеточного Дистантная зона Параканкрозная зона
инфильтрата (клеток/мм2) Ме LQ-HQ Min-Мах Ме LQ-HQ Міп-Мах
«провоспалительная» комбинация аллелей
CD138+ 249*А 219-270 204-277 138* 110-160 102-165
IgA+ 226* 201-233 189-262 117* 98-132 73-158
IgG+ 55*А 48-63 28-72 21* 20-28 19-35
«молчащая» комбинация аллелей
CD138+ 183*л 178-195 166-201 145* 141-149 135-153
IgA+ 214* 197-220 192-238 105* 97-131 79-164
IgG+ 37*л 35-40 29-45 18* 20-25 16-29
Мт-Мах - минимальное-максимальное значения. * - р<0,05 между столбцами одной строки, л - р<0,05 между одноименными строками одного столбца.
При сравнении подгрупп носителей «провоспалительной» и «молчащей» комбинации аллелей достоверных различий выраженности инфильтрации дистантной зоны собственной пластинки слизистой оболочки желудка IgA-плазмоцитами обнаружено не было (р=0,11). Однако подгруппа носителей «провоспалительной» комбинации аллелей характеризовалась достоверно более высокой IgG-плазмоцитарной инфильтрацией (р<0,001). Достоверных различий инфильтрации параканкрозной зоны IgA- и IgG-плазмоцитами между носителями «провоспалительной» и «молчащей» комбинаций аллелей обнаружено не было.
Выраженная инфильтрация слизистой оболочки желудка CD20+ и CD 13 8+ клетками может наблюдаться при поляризации иммунного ответа по Th2 типу (D'Elios М.М., 2005). Однако воспалительный ответ, протекающий по Th2 типу, традиционно рассматривается как ассоциированный с низким риском развития рака желудка кишечного типа (Konturek P.C. et al., 2009). Иммунным ответом по ТИ2 типу, развивающимся в ответ на паразитарные инвазии, объясняется «африканская загадка»: низкая заболеваемость раком
14
желудка при высокой инфицированное™ HP населения экваториальной Африки (Whary М.Т. et al., 2005).
Обнаруженный нами локальный гуморальный иммунный ответ, наоборот, ассоциирован с раком желудка кишечного типа. Полагаем, что объяснить этот факт можно следующим образом. Возможно, имеет место переключение синтеза IgA в плазмоцитах слизистой оболочки желудка на синтез IgG, о чем и свидетельствует доминирование именно IgG-плазмоцитов в дистантной зоне слизистой оболочки желудка в сравнении с параканкрозной. Подобный процесс переключения синтеза IgA—»IgG плазматическими клетками как стереотипная реакция, развивающаяся при хроническом воспалении в слизистых оболочках, был описан A.B. Кононовым, обнаружившим нарастание продукции IgG в слизистой оболочке желудка, происходящее параллельно с эволюцией хронического гастрита от поверхностного до атрофического (Кононов A.B., 1993). Появление синтеза IgG приводит к изменению воспалительной реакции в слизистой оболочке желудка. В отличие от IgA, связывание IgG с любым антигеном обусловливает активацию системы комплемента и аттракцию нейтрофильных лейкоцитов (Brandtzaeg Р., 2010). Известен механизм канцерогенеза, связанный с повреждающим воздействием на ДНК эпителиоцитов генеративной зоны слизистой оболочки желудка активных форм кислорода и оксида азота, продуцируемых нейтрофильными лейкоцитами при «кислородном взрыве». Накопление мутаций в клетках-предшественниках приводит к развитию дисплазии/неоплазии эпителия, клональной пролиферации неопластических клеток, инвазивной карциноме (Correa P. et al., 2012).
При оценке параканкрозной зоны была обнаружена выраженная инфильтрация CD8+ лимфоцитами и CD68+ макрофагами (табл. 3). Это вероятно является морфологическим проявлением иммунного ответа, возникающего в ответ на развитие опухоли (Бережная Н.М. и соавт., 2005). Ряд авторов также указывают на увеличение плотности макрофагальной инфильтрации при раке желудка кишечного типа (Данилова И.А. и соавт., 2009, Wang В. et al., 2011), объясняя этот феномен не только реакцией на опухоль, но и необходимостью клеточной кооперации в опухоли (Caruso R.A. et al., 1999).
Увеличение количества CD8+ лимфоцитов (цитотоксических) в зоне опухоли при раке желудка кишечного типа показано С. Ju-gao и соавторами (Ju-gao С. et al., 2011). При сравнении количества цитотоксических
лимфоцитов и макрофагов в дистантной и параканкрозной зонах статистически значимых отличий между подгруппами носителей «провоспалительной» и «молчащей» комбинации аллелей не выявлено. Это обстоятельство убеждает нас в правильности выбранного подхода: по своему функциональному значению «провоспалительная» и «молчащая» комбинации аллелей применимы только к анализу дистантной по отношению к опухоли зоны, которая, как мы полагаем, является субстратом измененного клеточного обновления и прогрессирования воспаления, являющихся, в соответствии с каскадом Р.Соггеа, этапами канцерогенеза.
Таблица 3
Количество (%) С08+ лимфоцитов и СЭ68+ макрофагов
у носителей «провоспалительной» и «молчащей» комбинации аллелей
Комбинация аллелей Топография слизистой оболочки желудка
Дистантная зона Параканкрозная зона
Ме Міп-Мах Ме Міп-Мах
С08+ лимфоциты
«Провоспалительная» комбинация аллелей 18,8* 17,625,8 14,730,3 27,3* 16,835,9 18,238,1
«Молчащая» комбинация аллелей 18,2* 16,122,8 14,328,7 25,8* 17,933,5 18,234,3
С068+ макрофаги
«11ровоспалительная» комбинация аллелей 16,1* 14,817,9 13,218,1 26,2* 21,328,9 19,629,1
«Молчащая» комбинация аллелей 16,9* 16,120,0 12,023,8 24,3* 19,826,5 17,328,1
Условные обозначения: Ме - медиана, Ь(}-Н(3 - межквартальный интервал, Мт-Мах - минимальное-максимальное значения. * - р<0,05 между столбцами одной строки, л - р<0,05 между строками одного столбца.
На основании полученных результатов оценки особенностей воспалительного инфильтрата в параканкрозной и дистантной зонах слизистой оболочки желудка с учетом носительства полиморфных аллелей генов цитокинов мы разработали модель регуляции воспаления при раке желудка кишечного типа у носителей «провоспалительной» комбинации аллелей (рис. 2).
Дистантная зона
Параканкрозная зона
Опухоль
Рис. 2. Регуляция воспаления в слизистой оболочке желудка у носителей «провоспалительной» комбинации аллелей при раке желудка кишечного типа (на основании собственных и литературных данных). Обозначения: -усиление/ослабление продукции, - по литературным данным, АФК -
активные формы кислорода.
Вопреки ожиданию, нам не удалось показать роль «молчащей» комбинации полиморфных аллелей в регуляции воспаления в дистантной зоне слизистой оболочки желудка. Однако была показана роль «провоспалительной» комбинации аллелей, определявшей не только выраженность воспалительного инфильтрата, но и выраженную инфильтрацию слизистой оболочки желудка CD20+ клетками. Мы полагаем, что у носителей «провоспалительной» комбинации аллелей выраженная инфильтрация CD20+ клетками может рассматриваться как косвенный маркер, отражающий их роль в развитии хронического воспаления в собственной пластинке слизистой оболочки желудка.
«Молчащая» комбинация аллелей, обнаруженная почти в половине наблюдений (42 случаях из 82), не противоречит концепции этапного канцерогенеза Р. Correa. «Молчащей» она является только для избранных
нами клеток-мишеней (эффекторов гуморального иммунитета, цитотоксических лимфоцитов и макрофагов). Возможный вариант объяснения прогрессирования воспаления и наличия мутаций, приводящих к канцерогенезу у носителей «молчащей» комбинации аллелей связан с тем, что прогрессирование воспаления могут вызывать иные полиморфные аллели генов цитокинов, имеющие молекулярные мишени, не исследованные в нашей работе.
При раке желудка диффузного типа различия в составе воспалительного инфильтрата между параканкрозной и дистантной зонами слизистой оболочки желудка отсутствовали. Это связано с принципиально иным механизмом канцерогенеза, не носящим стадийного характера и не обусловленным развитием хронического воспаления в слизистой оболочке желудка (УаиИкопеп М. е1 а1., 2006).
Оценка атрофических изменений слизистой оболочки желудка у больных раком желудка кишечного типа показала преобладание атрофического пангастрита, соответствующего стадиям III и IV. Подобные изменения в слизистой оболочке желудка обнаруживались у 76,8% больных (рис.3).
РЖ (кишечный -д
ТИП) I Ь
РЖ (диффузный тип)
О о - отсутствие атрофии; ш I а и и ш Ш IV - стадии
хронического гастрита
Рис. 3. Распространенность атрофических изменений слизистой оболочки желудка, соответствующих стадиям 0-1У хронического гастрита в группах больных раком желудка кишечного и диффузного типа.
Аналогичную распространенность стадий III и IV хронического гастрита показали К. Satoh и соавт. на японской популяции (Satoh К. et al., 2008). Эти результаты согласуются с концепцией, применявшейся при создании Международной классификации хронического гастрита OLGA, указывающей на высокий риск развития рака желудка кишечного типа у больных хроническим гастритом, атрофические изменения в слизистой оболочке желудка у которых соответствуют стадиям III и IV (Rugge М. et al., 2008).
У больных раком желудка диффузного типа атрофические изменения слизистой оболочки желудка либо отсутствовали, либо преобладали слабо выраженные атрофические изменения, соответствующие стадиям 1-И хронического гастрита (рис.3).
При оценке стадии хронического гастрита у носителей «провоспалительной» и «молчащей» комбинации аллелей было выявлено преобладание стадии IV у носителей «провоспалительной» комбинации аллелей, которая наблюдалась у 19 из 40 больных, тогда как у носителей «молчащей» комбинации аллелей стадия IV наблюдалась у 4 из 42 больных (Х2=12.8; р=0,006). Основной вклад в развитие атрофии у больных раком желудка кишечного типа принадлежал кишечной метаплазии (метапластическая атрофия), которая обнаруживалась у 93% больных. Наиболее распространенным типом метаплазии у носителей «провоспалительной» комбинации был тип III: медиана показателя ее доли по отношению к другим типам кишечной метаплазии составила 76,2%. У носителей «молчащей» комбинации аллелей обнаружены преимущественно I и II типы кишечной метаплазии.
Наличие ассоциации атрофических изменений слизистой оболочки желудка, соответствующих стадии IV хронического гастрита, с носительством «провоспалительной» комбинации аллелей может быть объяснено следующим образом. Наличие стадии IV хронического гастрита соответствует максимально выраженным атрофическим изменениям и фактически является этапом каскада Р.Соггеа, предшествующим развитию эпителиальной неоплазии или продолжающимся параллельно с ее развитием. Однако наличие рака желудка кишечного типа возможно уже на стадии III и редко на II стадии хронического гастрита (Satoh К. et al., 2008). Носительство «провоспалительной» комбинации аллелей, ассоциированное с повышенной продукцией соответствующих цитокинов (Smith A.J. et al., 2009), обусловливает развитие выраженного воспалительного ответа (El-Omar Е.М.
et al., 2000), приводящего к повреждению слизистой оболочки желудка активными формами кислорода и цитокинами, выделяемыми мононуклеарными клетками воспалительного инфильтрата слизистой оболочки желудка - TNF-a, IFN-y, IL-ip, что может способствовать прогрессии каскада Р.Соггеа. В результате у носителей «провоспалительной» комбинации аллелей чаще обнаруживается стадия IV хронического гастрита. Наряду с этим, у носителей «провоспалительной» комбинации аллелей наблюдается большая распространенность очагов кишечной метаплазии III типа.
Механизм формирования популяции клеток с фенотипом неполной кишечной метаплазии (III типа), возможно, обусловлен повышенной продукцией IgG у носителей «провоспалительной» комбинации аллелей. Предполагается, что IgG, фиксируясь Fc-фрагментом на прогениторной клетке эпителиального дифферона слизистой оболочки желудка, обеспечивает ее «ускользание» от иммунного ответа (Бережная Н.М. и соавт., 2005). Это приводит к сохранению популяции прогениторных клеток зоны перешейка желез, накапливающих генетические нарушения, которые могут завершиться запуском клональной пролиферации опухолевых клеток (McDonald S.A. et al., 2008).
Таким образом, носительство «провоспалительной» комбинации аллелей, ассоциированной с раком желудка кишечного типа, в отличие от «молчащей» комбинации аллелей имеет фенотипическим проявлением становление локального иммунного ответа с высоким количеством CD20+, CD 13 8+ клеток и IgG-плазмоцитов, что является признаком персистенции воспаления, которое приводит к развитию атрофических изменений слизистой оболочки желудка (стадии IV хронического гастрита) с преобладанием очагов распространенной кишечной метаплазии III типа.
ВЫВОДЫ
1. Выраженный мононуклеарный инфильтрат собственной пластинки слизистой оболочки желудка с высокой долей CD20+ лимфоцитов (степень III и IV хронического гастрита) ассоциирован с носительством трех и более полиморфных аллелей генов: +3953Т и -511Т гена интерлейкина-ip, IL-1RN*2 рецепторного антагониста интерлейкина-1, -1082А гена интерлейкина-10, -308А гена фактора некроза опухолей-сс («провоспалительная» комбинация аллелей) у больных раком желудка кишечного типа.
2. При раке желудка кишечного типа имеются различия между параканкрозной и дистантной зонами слизистой оболочки, характеризующиеся инфильтрацией CD8+ лимфоцитами и CD68+ макрофагами параканкрозной зоны и инфильтрацией дистантной зоны собственной пластинки слизистой оболочки желудка CD20+ лимфоцитами и IgG-продуцирующими плазматическими клетками. При раке желудка диффузного типа различия состава воспалительного инфильтрата между параканкрозной и дистантной зонами слизистой оболочки отсутствуют.
3. Рак желудка кишечного типа при наличии стадии IV хронического гастрита с распространенной кишечной метаплазией III типа ассоциирован с носительством трех и более полиморфных аллелей генов: +3953Т и -511Т гена интерлейкина-ip, IL-1RN*2 гена рецепторного антагониста интерлейкина-1, -1082А гена интерлейкина-10, -308А гена фактора некроза опухолей-a («провоспалительная» комбинация аллелей).
4. «Провоспалительная» комбинация аллелей функционально проявляется формированием в слизистой оболочке желудка доминирующего гуморального типа иммунного ответа с наличием признаков хронического воспаления — высоким уровнем IgG-плазматических клеток и формированием атрофии с кишечной метаплазией моноклонового фенотипа (III тип кишечной метаплазии).
5. При «молчащей» комбинации аллелей не реализуются механизмы хронизации за счет формирования пула IgG-плазмоцитов. Клеточное обновление характеризуется доминированием II и III стадии хронического гастрита с кишечной метаплазией I и II типа. Реализация каскада канцерогенеза обеспечивается влиянием иных аллельных полиморфизмов, не изученных в данном исследовании.
СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
1. Новиков Д.Г. Морфологические особенности хронического хеликобактер-ассоциированного гастрита, обусловленные генотипом бактерии и хозяина / Д.Г. Новиков // Бюллетень Северного государственного медицинского университета. — 2007. — №1. — С. 112.
2. Мозговой С.И. Оценка интегрального показателя атрофии слизистой оболочки при хроническом гастрите в прогнозе риска
развития рака желудка/ С.И. Мозговой, Д.Г. Новиков, A.B. Кононов // Омский научный вестник. - 2010. - № 1(94). - С. 21-24.
3. Новиков Д.Г. Оценка риска развития рака желудка кишечного типа у носителей полиморфных аллелей генов цитокинов / Д.Г. Новиков, A.B. Кононов, Е.Г. Поморгайло, С.И. Мозговой // Медицина в Кузбассе. - 2010. - № 4. - С. 21-24.
4. Новиков Д.Г. Роль ядерного фактора кВ в развитии хронического гастрита и рака желудка кишечного типа / Д.Г. Новиков, A.B. Кононов // Вестник Новосибирского государственного университета. - 2010. - вып. 2, Т. 8. - С.149-159.
5. Новиков Д.Г. Использование оценки стадии хронического гастрита для прогноза риска рака желудка кишечного типа / Д.Г. Новиков, С.И. Мозговой, А.Г. Шиманская // Актуальные вопросы клинической и экспериментальной медицины: сборник тезисов юбилейной научно-практической конференции молодых ученых. - СПб, 2010. - С.126-127.
6. Новиков Д.Г. Полиморфизм генов цитокинов, ассоциированный с риском развития рака желудка кишечного типа / Д.Г. Новиков // Клинико-лабораторный консилиум.-2010.-№2-3 (33-34).- С.164.
7. Новиков Д.Г. Состав воспалительного инфильтрата в слизистой оболочке желудка и генетический полиморфизм цитокинов при раке желудка кишечного типа / Д.Г. Новиков // Молодой ученый. - 2011. - №5, Т. 2. - С. 212-215.
8. Новиков Д.Г. Особенности воспалительного инфильтрата и атрофии в параканкрозной и дистантной зонах слизистой оболочки желудка у больных раком желудка кишечного типа, носителей полиморфных аллелей генов цитокинов / Д.Г. Новиков // Молодой ученый. - 2012. - №3, Т.З. - С. 447-452.
На правах рукописи
Новиков Дмитрий Георгиевич
ОСОБЕННОСТИ ВОСПАЛИТЕЛЬНОГО ИНФИЛЬТРАТА, АТРОФИИ СЛИЗИСТОЙ ОБОЛОЧКИ ЖЕЛУДКА И ПОЛИМОРФИЗМ ГЕНОВ ЦИТОКИНОВ ПРИ РАКЕ ЖЕЛУДКА КИШЕЧНОГО ТИПА
(14.03.02 — патологическая анатомия)
Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук
Омск-2012
Подписано в печать 28.04.2012 Формат 60x84/16 Бумага офсетная Пл.-1,0 Способ печати - оперативный Тираж 100
Издательско-полиграфический центр ОмГМА 644050, г. Омск, пр. Мира, 30, тел. 60-59-08
Оглавление диссертации Новиков, Дмитрий Гергиевич :: 2012 :: Омск
Список сокращений Введение. стр. 4 стр.
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
Глава 1. Роль хронического воспаления в процессе канцерогенеза в
1.1. Роль хронического воспаления в развитии атрофических изменений и процессе канцерогенеза в слизистой оболочке желудка. Оценка воспаления и атрофических изменений СОЖ в соответствии с современными классификациями хронического гастрита.
1.2. Роль полиморфизма генов цитокинов в регуляции хронического воспаления в слизистой оболочке желудка и развитии рака желудка кишечного типа.
2.1. Дизайн исследования
2.2. Гистологические методы исследования
2.3.Гистохимические методы исследования
2.4. Иммунногистохимический метод исследования
2.5. Молекулярно - генетические методы исследования (метод полимеразной цепной реакции)
2.6. Статистические методы исследования
Глава 3. Результаты оценки воспалительного инфильтрата и атрофии в слизистой оболочке желудка у больных раком желудка кишечного типа .стр. слизистой оболочке желудка
СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
Глава 2. Материалы и методы
Глава 4. Результаты оценки воспалительного инфильтрата и атрофии в слизистой оболочке желудка у больных раком желудка диффузного типа
Глава 5. Сопоставление полученных результатов в исследуемых группах больных раком желудка кишечного и диффузного типа
Глава 6. Оценка полиморфизма генов цитокинов, ассоциированного с раком желудка кишечного типа.стр.
Глава 7. Особенности состава воспалительного инфильтрата, атрофии дистантной и параканкрозной зон слизистой оболочки желудка у больных раком желудка кишечного типа - носителей «провоспалительной» и «молчащей» комбинации аллелей (обсуждение результатов исследования) .стр.
Выводы.стр.
Введение диссертации по теме "Патологическая анатомия", Новиков, Дмитрий Гергиевич, автореферат
Актуальность исследования. Международным агентством по изучению рака ВОЗ Helicobacter pylori (HP) был признан канцерогеном 1-й группы в 1994 году. HP не вызывает рак желудка, однако запускает воспалительную реакцию в слизистой оболочке желудка - хронический гастрит. Хроническое воспаление, в свою очередь, изменяет эпителиальный дифферон слизистой оболочки желудка, приводит к развитию в нем определенной последовательности молекулярно-биологических и морфологических изменений, отражением которых является атрофия слизистой оболочки желудка, развитие эпителиальной дисплазии/неоплазии, а затем и рака желудка кишечного типа [57-59, 107].
Особенности течения воспалительной реакции при HP-инфекции у индивидуума могут быть обусловлены носительством полиморфных аллелей генов цитокинов, обеспечивающих повышенную продукцию белка и, следовательно, выраженный воспалительный ответ [100]. Установлены полиморфные аллели генов цитокинов, ассоциированные с развитием рака желудка кишечного типа [103, 140]. Эти ассоциации значительно варьировали в различных популяциях [36]. Причем в большинстве исследований биологические эффекты носительства полиморфных аллелей генов цитокинов и их роль в регуляции воспаления при развитии рака желудка оценивались только на основании сведений об уровнях экспресии генов цитокинов и содержании цитокинов в сыворотке крови. При этом особенности проявлений воспаления в слизистой оболочке желудка, связанные с носительством полиморфных аллелей генов цитокинов, изучены только на уровне установления ассоциации двух феноменов: аллельный полиморфизм и язвенный дефект, аллельный полиморфизм и эксхеликобактерный гастрит, аллельный полиморфизм и рак желудка [2, 21,
28, 29, 37, 94]. Конкретные морфогенетические механизмы, в которых реализуется последовательность: полиморфный ген - цитокин 5 молекулярная или клеточная мишень - структурные изменения в органе-мишени все еще мало понятны.
Цель исследования: определить особенности хронического воспаления и атрофии слизистой оболочки желудка у больных раком желудка кишечного типа, носителей полиморфных аллелей генов цитокинов, для оценки функциональной роли генетического полиморфизма.
Задачи исследования:
1. Установить ассоциацию иммунофенотипа клеток воспалительного инфильтрата слизистой оболочки желудка с носительством полиморфных аллелей генов цитокинов (интерлейкина-1|3, рецепторного антагониста интерлейкина-1, интерлейкина-10, фактора некроза опухолей-а) у больных раком желудка кишечного типа.
2. Выявить особенности атрофических изменений в слизистой оболочке желудка, ассоциированные с носительством полиморфных аллелей перечисленных генов цитокинов у больных раком желудка кишечного типа.
3. Оценить состояние слизистой оболочки желудка (характеристику атрофии, состав воспалительного инфильтрата) в ее параканкрозной и дистантной зонах у больных раком желудка кишечного типа с учетом носительства комбинаций полиморфных аллелей генов цитокинов.
Научная новизна. При раке желудка кишечного типа, ассоциированного с носительством трех и более полиморфных аллелей С+3953Т и С-511Т гена 1Ь-1р, УИТЯв интроне 2 гена 1Ь-1КЫ, 0-1082А гена 1Ь-10, 0-308А гена ТИБ-а («провоспалительная» комбинация аллелей) установлены особенности развития хронического воспаления: среди мононуклеарных клеток, инфильтрирующих собственную пластинку слизистой оболочки, доминируют СЭ20+, СО 13 8+ лимфоциты и плазматические клетки; атрофия слизистой оболочки желудка характеризуется стадией IV хронического гастрита и наличием б распространенных очагов кишечной метаплазии III типа (неполная толстокишечная метаплазия с продукцией сульфомуцинов).
Молчащая» комбинация полиморфизмов (носительство менее 3 идентифицированных полиморфизмов) не ассоциирована с проявлением гуморального типа иммунного ответа в слизистой оболочке желудка (отсутствует пролиферация IgG-плазмоцитов) и, вероятно, каскад канцерогенеза у носителей данного генотипа поддерживается иными механизмами.
Практическая значимость работы.
Полученные данные о топографии и иммунофенотипе клеток воспалительного инфильтрата и особенностях клеточного обновления эпителия могут использоваться в практике научных исследований по расшифровке ассоциативной взаимосвязи полиморфизма генов цитокинов и канцерогенеза при НР-инфекции.
Внедрение результатов исследования. Результаты исследования были использованы при разработке новой медицинской технологии «Молекулярно-генетическая методика прогноза и патоморфологический мониторинг риска развития рака желудка кишечного типа при Helicobacter pylori-инфекции», утвержденной Росздравнадзором (ФС № 2010/220 от 10 июня 2010 г., серия АА 0000001, авторы: Кононов А.В., Потрохова Е.А., Мозговой С.И., Поморгайло Е.Г., Новиков Д.Г.).
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 8 печатных работ, в том числе 3 - в изданиях, рекомендованных ВАК.
Апробация работы. Диссертация выполнена в соответствии с планом научных исследований ГБОУ ВПО «Омская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения и социального развития
Российской Федерации. Основные положения работы доложены на конференции молодых ученых «Актуальные вопросы клинической и экспериментальной медицины - 2010» (Санкт-Петербург, 2010), 7
Всероссийской научной конференции студентов, аспирантов, молодых ученых с международным участием «Здоровье человека и среда обитания: фундаментальные и прикладные аспекты» (Омск, 2010), Всероссийской научной школе «Превентивная медицина, вызовы XXI века» (Омск, 2011), заседании Омского отделения Российского общества патологоанатомов (Омской областной общественной организации «Ассоциация патологоанатомов») (Омск, 2011).
Положения, выносимые на защиту.
1. Носительство трех и более полиморфных аллелей генов цитокинов: +3953Т и -511Т гена интерлейкина-1 ß, IL-1RN*2 гена рецепторного антагониста интерлейкина-1, -1082А гена интерлейкина-10, -308А гена фактора некроза опухолей-a («провоспалительная» комбинация аллелей) у больных раком желудка кишечного типа фенотипически проявляется высокой долей CD20+ лимфоцитов, CD 13 8+ IgG-продуцирующих плазмоцитов в мононуклеарном воспалительном инфильтрате и доминированием стадии IV хронического гастрита, проявляющейся распространенными очагами кишечной метаплазии III типа (неполной толстокишечной метаплазии).
2. При раке желудка кишечного типа в дистантной зоне слизистой оболочки желудка доминируют (в сравнении с параканкрозной зоной) IgG-продуцирующие плазматические клетки, численность которых коррелирует с инфильтрацией CD20+ лимфоцитами. Параканкрозная зона характеризуется выраженной инфильтрацией CD8+ лимфоцитами и CD68+ макрофагами. В дистантной и параканкрозной зонах выявляются выраженные атрофические изменения слизистой оболочки желудка (стадии III и IV хронического гастрита). При раке желудка диффузного типа не наблюдается различий между параканкрозной и дистантной зонами слизистой оболочки желудка: слабо выражены CD20+, CD4+, CD8+, CD68+ клеточная инфильтрация, атрофические изменения слизистой оболочки желудка соответствуют I и II стадиям хронического гастрита.
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 196 страницах машинописного текста, содержит 13 таблиц, 62 рисунка. Работа состоит из 7 глав. Список литературы включает 33 отечественных и 120 зарубежных источников.
Личный вклад автора. Автором проведен анализ научных публикаций по теме диссертационного исследования, вырезка операционного материала, его гистопатологическая оценка, иммуногистохимическое и молекулярно-генетическое исследование, статистический анализ полученных результатов.
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ Глава 1. Роль хронического воспаления в процессе канцерогенеза в слизистой оболочке желудка
Заключение диссертационного исследования на тему "Особенности воспалительного инфильтрата, атрофии слизистой оболочки желудка и полиморфизм генов цитокинов при раке желудка кишечного типа"
выводы
1. Выраженный мононуклеарный инфильтрат собственной пластинки слизистой оболочки желудка с высокой долей CD20+ лимфоцитов (степень III и IV хронического гастрита) ассоциирован с носительством трех и более полиморфных аллелей генов: +3953Т и -511Т гена интерлейкина-lß, IL-1RN*2 рецепторного антагониста интерлейкина-1, -1082А гена интерлейкина-10, -308А гена фактора некроза опухолей-а («провоспалительная» комбинация аллелей) у больных раком желудка кишечного типа.
2. При раке желудка кишечного типа имеются различия между параканкрозной и дистантной зонами слизистой оболочки, характеризующиеся инфильтрацией CD8+ лимфоцитами и CD68+ макрофагами параканкрозной зоны и инфильтрацией дистантной зоны собственной пластинки слизистой оболочки желудка CD20+ лимфоцитами и IgG-продуцирующими плазматическими клетками. При раке желудка диффузного типа различия состава воспалительного инфильтрата между параканкрозной и дистантной зонами слизистой оболочки отсутствуют.
3. Рак желудка кишечного типа при наличии стадии IV хронического гастрита с распространенной кишечной метаплазией III типа ассоциирован с носительством трех и более полиморфных аллелей генов: +3953Т и -511Т гена интерлейкина-lß, IL-1RN*2 гена рецепторного антагониста интерлейкина-1, -1082А гена интерлейкина-10, -308А гена фактора некроза опухолей-a («провоспалительная» комбинация аллелей).
4. «Провоспалительная» комбинация аллелей функционально проявляется формированием в слизистой оболочке желудка доминирующего гуморального типа иммунного ответа с наличием признаков хронического воспаления - высоким уровнем IgG-плазматических клеток и формированием атрофии с кишечной метаплазией моноклонового фенотипа (III тип кишечной метаплазии). л 176
5. При «молчащей» комбинации аллелей не реализуются механизмы хронизации за счет формирования пула ^О-плазмоцитов. Клеточное обновление характеризуется доминированием II и III стадии хронического гастрита с кишечной метаплазией I и II типа. Реализация каскада канцерогенеза обеспечивается влиянием иных аллельных полиморфизмов, не изученных в данном исследовании.
Список использованной литературы по медицине, диссертация 2012 года, Новиков, Дмитрий Гергиевич
1. Автандилов Г.Г. Системная стереометрия в изучении патологического процесса / Г.Г. Автандилов, Н.И., Яблучанский, В.Г. Губенко // М. Медицина, 1981.- 192 с.
2. Агеева Е.С. Популяционные особенности ассоциации полиморфизма генов интерлейкинов с патологией желудка и двенадцатиперстной кишки у хакасов / Е.С. Агеева, О.В. Штыгашева, Н.В. Рязанцева // Терапевтический архив. 2011. - Т. 83, № 2. - С. 16-19.
3. Аруин Л.И. Международная классификация хронического гастрита: что следует принять и что вызывает сомнения / Л.И. Аруин, A.B. Кононов, С.И. Мозговой // Архив патологии. 2009. - №4. - С. 11-17.
4. Аруин Л.И., Капуллер Л.Л., Исаков В.А. Морфологическая диагностика болезней желудка и кишечника / Л.И. Аруин, Л.Л. Капуллер,
5. B.А. Исаков. М.: Триада-Х. 1998; 90-100 с.
6. Банержи А. Медицинская статистика понятным языком: вводный курс: пер. с англ. / А. Банержи. М. : Практическая медицина, 1998. - 459 с.
7. Белоцкий С.М. Воспаление и иммунный ответ в таблицах и рисунках. /
8. C.М. Белоцкий, P.P. Авталион. М. : Гончаръ, 2006. - 63 с.
9. Власов В.В. Введение в доказательную медицину / В.В. Власов. М. : МедиаСфера, 2001. - 392 с.
10. Гланц С. Медико-биологическая статистика: пер. с англ. / С. Гланц. М. : Практика, 1998. - 459 с.
11. Громова А.Ю. Полиморфизм генов семейства IL-1 человека/ А.Ю. Громова, А.С. Симбирцев // Цитокины и воспаление. 2005. -№2.-С. 45-50.
12. Данилова И. А. Комплексное изучение основных морфологических форм рака желудка в связи с показателями их прогностической оценки / И.А.Данилова, Н.М. Аничков //Архив патологии. Т.71, №5. - 2009. - С. 27.
13. Данилова И.А. Паренхиматозно-стромальные взаимоотношения при раке желудка кишечного типа/ И.А.Данилова, Н.М. Аничков //Архив патологии. -№3.-2011.-С. 31-34.
14. Кононов А. В. Генетическая регуляция и фенотип воспаления при Helicobacter pylori-инфекции / А.В. Кононов // Архив патологии. 2009. - Том 71, №5.-С. 57-63.
15. Кононов А.В. Воспаление как основа Helicobacter pylori -ассоциированных болезней / А.В. Кононов // Архив патологии. 2006. -№5.-С. 3-10.
16. Кононов А.В. Местный иммунитет и регенерация слизистых оболочек при хроническом воспалении (биопсийное исследование). -Омск, 1993.-320 с.
17. Ливзан М.А. Экс-хеликобактерный гастрит: неологизм или клиническая реальность? / М.А. Ливзан, А.В. Кононов, С.И. Мозговой // Экспериментальная и клиническая гастроэнтерология. 2004. -№ 5.- С. 55 - 59.
18. Лилли Р.Д. Патологическая техника и практическая гистохимия / Р.Д. Лилли. М. : Мир, 1969. - 645 с.
19. Маев И.В. Эффективность эрадикации Helicobacter pylori у больных язвенной болезнью в зависимости от полиморфизма гена IL-1(3 -511/ И.В. Маев и др. // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. №6. - 2008. - С. 27-32.
20. Микроскопическая техника (руководство для врачей и лаборантов) / под ред. Д.С. Саркисова, Ю.Л. Перова. М. : Медицина, 1996.-542 с.
21. Мозговой С. И. Алгоритм определения типа кишечной метаплазии слизистой оболочки желудка с помощью комбинированных гистохимических методов / С. И. Мозговой // Архив патологии. 2009. -Т. 71, №4.-С. 46-47.
22. Мозговой С.И. Атрофия слизистой оболочки желудка при хроническом воспалении как общепатологический процесс и прогностический критерий канцерогенеза: автореф. дис. . д-ра мед. наук / С.И. Мозговой. Омск, 2011. - 43 с.
23. Пальцев М.А. Межклеточные взаимодействия / М.А. Пальцев, А.А. Иванов М.: Медицина, 1995. - 43-46 с.
24. Пирс Э. Гистохимия / Э.Пирс. М. : Издательство иностранной литературы, 1962. - 929 с.
25. Полиморфизм генов цитокинов в развитии Helicobacter pylori-инфекции / А.В. Кононов и др. // Вестник РАМН. 2010. - № 2. - С. 812.
26. Полиморфизм генов IL-1|3, антагониста его рецепторов и фенотип воспалительной реакции слизистой оболочки желудка при хеликобактерной инфекции / А.В. Кононов и др. // Молекулярная медицина. -2010. №1. - С. 42-45.
27. Примроуз С. Геномика: роль в медицине: пер. с англ. / Примроуз С., Тваймен Р. М. : Бином. Лаборатория знаний, 2008. - 277 с.
28. Ройт А. Иммунология: пер с англ. / А. Ройт, Дж. Бристофф, Д. Мейл М.: Мир, 2000. - 176-178 с.
29. Helicobacter pylori инфекция: генотип хозяина - фенотип гастрита / A.B. Кононов и др. // Материалы III съезда Российского общества патологоанатомов «Актуальные вопросы патологической анатомии». - Самара, 2009. - С. 29-30
30. A meta-analysis of interleukin-10-1082 promoter polymorphism associated with gastric cancer risk / P. Ni et al. // DNA and cell biology. 2012. - Vol. 31, №4.-P. 582-591.
31. A proinflammatory genetic profile increases the risk for chronic atrophic gastritis and gastric carcinoma / J.C. Machado et al. // Gastroenterology. -2003. Vol. 125, №2. - P.364-371.
32. A systematic review of meta-analyses on gene polymorphisms and gastric cancer risk / F. Gianfagna et al. //Current genomics. 2008. - Vol. 9, №6.-P.:361-374.
33. Achyut B.R. Genetic association of interleukin-1 haplotypes with gastritis and precancerous lesions in North Indians / B.R. Achyut , N. Moorchung, B. Mittal // Clinical and experimental medicine. -2008. Vol.8, №1. - P.23-29.
34. Assessment of Atrophic Gastritis Using the OLGA System / K. Satoh et al. // Helicobacter. 2008. - Vol.13, №3. - P.225-229.
35. Association between a pro-inflammatory genetic profile and the risk of chronic atrophic gastritis among older adults from Germany / L. Gao et al. // European journal of cancer. 2009. - Vol. 45, № 3. - P. 428-434.
36. Association between interleukin-1 gene polymorphisms and Helicobacter pylori infection in gastric carcinogenesis in a Chinese population / C. Li et al. // Journal of gastroenterology and hepatology. 2007. - Vol.22, №2. - P.234-239.
37. Association of gastric disease with polymorphisms in the inflammatory related genes IL-1B, IL-1RN, IL-10, TNF and TLR4 / G. Murphy et al. // European journal of gastroenterology & hepatology. 2009. -Vol. 21, №6.-P. 630-635.
38. Association of IL-10 gene polymorphisms with gastroduodenal diseases in Hubei Han population / H. Xiao et al. // Chinese journal of medical genetics. 2009. - Vol. 26, № 4. - P. 423-426.
39. Association of IL-IB and interleukin 1 RN polymorphism with gastric cancer in a high-risk population in Costa-rica / P. Alpisar et al. // Clinical and experimental medicine. - 2005. - Vol.5. - P. 169-176.
40. Association of interleukin-IB (IL-1B) gene polymorphisms with risk of gastric cancer in Chinese population / W.H. Zhang et al. // Cytokine. -2005. Vol.30, №6. - P.378-381.
41. Association of Intra-tumoral Infiltrating Macrophages and Regulatory T Cells Is an Independent Prognostic Factor in Gastric Cancer after Radical Resection / B. Wang et al. // Annals of surgical oncology. 2011. - Vol. 18, №9.-P. 2585-2593.
42. Association of polymorphism of IL-10 and TNF-A genes with gastric cancer in Korea / J.Y. Zhou et al. // Cancer letters. 2005. - Vol. 225, № 2. -P. 207-214.
43. Atherton J.C. Coadaptation of Helicobacter pylori and humans: ancient history, modern implications / J.C. Atherton, M.J. Blaser // The Journal of clinical investigation. 2009. - Vol.119, №9. - P.2475-2487.
44. Atrophic gastritis and Helicobacter pylori infection in patients with reflux esophagitis treated with omeprazole or fundoplication/ E.J. Kuipers et al. // N. Engl. J. Med. 1996. - Vol. 334. - P. 1018-1022.
45. B (CD20+) lymphocytes in the antrum mucosa of children with Helicobacter pylori infection / E. Maciorkowska et al. // Roczniki Akademii Medycznej w Bialymstoku. 2004. - Vol. 49 № 1. P. 222-224.
46. Biopsy strategies for endoscopic surveillance of pre-malignant gastric lesions / A.C. de Vries et al. // Helicobacter. 2010. - Vol. 15, № 4. - P. 259-264.
47. Brandtzaeg P. Update on mucosal immunoglobulin A in gastrointestinal disease / P. Brandtzaeg // Current opinion in gastroenterology. 2010. - Vol.26, №3. - P. 554-563.
48. Cancer risk to the gastric corpus in Japanese, its correlation with interleukin-lbeta gene polymorphism (+3953*T) and Epstein-Barr virus infection / K. Sakuma et al. // Journal of clinical gastroenterology.- 2005,-Vol.l 15, № 1. P.93-97.
49. Cell lineage dynamics in the process leading to intestinal metaplasia / H. Sakamoto et al. // Journal of gastroenterology. 2011. - Vol. 46, № 5. -P. 620-628.
50. Characterization of tumor antigen peptide-specific T cells isolated from the neoplastic tissue of patients with gastric adenocarcinoma / A. Amedei et al. // Cancer immunology, immunotherapy. 2009. - Vol. 58, № 11. - P. 1819-1830.
51. Correa P. Carcinogenesis of Helicobacter pylori / P. Correa, J. Houghton // Gastroenterology. 2007. - Vol. 133, № 2. - P. 659-672.
52. Correa P. Helicobacter pylori and gastric carcinogenesis / P. Correa // The American journal of surgical pathology. 1995. - Vol. 19, № 1. - P. 3743.
53. Correa P. The gastric precancerous cascade / P. Correa, M.B. Piazuelo // Journal of digestive diseases. 2012. - Vol.13, №1. - P. 2-9.
54. Correlation of interleukin-10-1082G/a single nucleotide polymorphism to the risk of gastric cancer in north China: a case-control study / X.L. Bai et al. // Chinese journal of cancer. 2008. - Vol. 27, № 1. - P. 3540.
55. Cytokine gene polymorphisms in gastric cancer patients from two Italian areas at high and low cancer prevalence / F. Perri et al. //Cytokine. -2005. Vol.30, №.5. - P.293-302.
56. Decreased IgA antibody production in the stomach ofgastric adenocarcinoma patients / M. Quiding-Jarbrink et al. // Clinical immunology. 2009. - Vol. 131, № 3. - P. 463-461.
57. Development of gastric carcinoma from intestinal metaplasia in Cdx2-transgenic mice / H. Mutoh et al. // Cancer research. 2004. - Vol. 64, № 21.-P. 7740-7747.
58. DNA copy number amplification profiling of human neoplasms / S. Myllykangas et al. // Oncogene. 2006. - Vol. 25, № 55. - P. 7324-7332.
59. Eaton K.A. The role of T cell subsets and cytokines in the pathogenesis of Helicobacter pylori gastritis in mice. / K.A. Eaton, M. Mefford, T.Thevenot // Journal of immunology. 2001. Vol. 166, № 12. - P.: 7456-7461.
60. Effect of polymorphisms ofIL-ip and TNF-a genes on CpG island hyper methylation (CIHM) in the nonneoplastic gastric mucosa / T. Tahara et al. // Molecular carcinogenesis. 2011. - Vol. 50, № 11. - P. 835-845.
61. Evaluation of Gastric Atrophy. Comparison between Sidney and OLGA Systems / P. Ramírez-Mendoza et al. // Revista médica del Instituto Mexicano del Seguro Social. 2008. - Vol.46, №2. - P.135-139.
62. Evaluation of malignant and benign gastric biopsy specimens by mRNA expression profile and multivariate statistical methods / O. Galamb et al. // Cytometry. Part B, Clinical cytometry. 2007. - Vol. 72, № 5. - P. 299309.
63. Follow Identification of a metaplastic cell lineage associated with human gastric adenocarcinoma / P.H. Schmidt et al. // Laboratory investigation; a journal of technical methods and pathology. 1999. - Vol. 79, № 6. - P. 639-646.
64. Gastric cancer risk in a Mexican population: role of Helicobacter pylori CagA positive infection and polymorphisms in interleukin-1 and -10 genes / L.A. Sicinschi et al. // International journal of cancer. 2006. - Vol. 118, №3. - P.649-657.
65. Gastric cancer risk in patients with premalignant gastric lesions: a nationwide cohort study in the Netherlands / A.C. de Vries et al. // Gastroenterology. 2008. - Vol. 134, № 4. - P. 945-952.
66. Gastritis OLGA-staging and gastric cancer risk: a twelve-year clinico-pathological follow-up study / M. Rugge et al. // Journal of gastroenterology.-2010. -Vol. 31, № 10. P. 1104-1111.
67. Gastritis staging in clinical practice: the OLGA staging system / M. Rugge et al. //Gut. 2007. - Vol.56, №5. - P.631-636.
68. Genetic factors associated with intestinal metaplasia in a high risk Singapore-Chinese population: a cohort study / F. Zhu et al. // BMC gastroenterology. 2009. - Vol. 9, № 76. - P. 1-9.
69. Gutiérrez-González L. Biology of intestinal metaplasia in 2008: more than a simple phenotypic alteration / L. Gutiérrez-González, N.A. Wright // Digestive and liver disease. 2008. - Vol.40, №7. - P.510-522.
70. Handa O. Redox biology and gastric carcinogenesis: the role of Helicobacter pylori / O. Handa, Y. Naito, T. Yoshikawa // Redox report: communications in free radical research. 2011. - Vol.16, № 1. - P.: 1-7.
71. Helicobacter pylori and Interleukin 1 Genotyping: An Opportunity to Identify High-Risk Individuals for Gastric Carcinoma / C. Figueiredo et al. // Journal of the National Cancer Institute. 2002. - Vol.94, №22. - P.1680-1687.
72. Helicobacter pylori heat shock protein 60 antibodies are associated with gastric cancer / A. Tanaka et al. // Pathology, research and practice.2009.-Vol. 205, № 10.-P. 690-694.
73. Helicobacter pylori increases expression of proapoptotic markers Fas and FasL on CD4 lymphocytes in children / A. Kotlowska-Kmiec et al. // Acta biochimica Polonica. 2009. - Vol. 56, № 3. - P.433-438.
74. Helicobacter pylori infection activates FOS and stress-response genes and alters expression of genes in gastric cancer-specific loci / S. Myllykangas et al. // Genes, chromosomes & cancer. 2004. - Vol. 40, № 4. - P. 334-341.
75. Helicobacter pylori promotes the production of thymic stromal lymphopoietin by gastric epithelial cells and induces dendritic cell-mediated inflammatory Th2 responses / M. Kido et al. // Infection and immunity.2010.-Vol. 78, № l.-P. 108-114.
76. Helicobacter pylori-induced mucosal inflammation is Thl mediated and exacerbated in IL-4, but not IFN-gamma, gene-deficient mice / L.E. Smythies et al. // Journal of immunology. 2000. - Vol. 165, № 2. -P.:1022-1029.
77. Histological classification of gastritis and Helicobacter pylori infection: an agreement at last? The International Workshop on the Histopathology of Gastritis / M.F. Dixon et al. // Helicobacter. 1997. - Vol. 2, № l.-P.: 17-24.
78. Host factors are important in determining clinical outcomes of Helicobacter pylori infection / T. Chiba et al. // Journal of gastroenterology. -2006.-Vol. 41, № l.-P. 1-9.
79. Host-bacterial interaction in the development of gastric precancerous lesions in a high risk population for gastric cancer in Venezuela / I. Kato et al. // International journal of cancer. 2006. - Vol. 119, № 7. - P. 1666-1671.
80. Hurme M. IL-1 receptor antagonist (IL-IRa) plasma levels are co-ordinately regulated by both IL-IRa and IL-1 beta genes / M. Hurme, S.Santtila // European journal of immunology. 1998. - Vol.28, № 8. - P.2598-2602.
81. Identification of spasmolytic polypeptide expressing metaplasia (SPEM) in remnant gastric cancer and surveillance postgastrectomy biopsies / H. Yamaguchi et al. // Digestive and liver disease. 2002. - Vol.47, №3. -P.573-578.
82. IL1B promoter polymorphism regulates the expression of gastric acid stimulating hormone gastrin / M. Chakravorty et al. // The international journal of biochemistry & cell biology. 2009. - Vol.41, № 7. - P. 1502-1510.
83. Increased risk of noncardia gastric cancer associated with proinflammatory cytokine gene polymorphisms / E.M. El-Omar et al. // Gastroenterology.-2003.-Vol. 124, №5.-P. 1193-1201.
84. Inflammatory cytokine gene polymorphisms in gastric cancer cases' and controls' family members from Chinese areas at high cancer prevalence / F. Yunxia et al. // Cancer Letters. 2008. - Vol. 270, № 2. - P.250-259.
85. Interleukin 1-beta gene polymorphisms and risk of gastric cancer in Sweden / C. Persson et al. //Scandinavian journal of gastroenterology. -2009. Vol. 44, №3. - P.339-345.
86. Interleukin lbeta-511T gene (ILlbeta) polymorphism is correlated with gastric cancer in the Caucasian population: results from a meta-analysis / B. Vincenzi et al. // Oncology reports. 2008. - Vol.20, №5. - P. 1213-1220.
87. Interleukin-1 and TNF-a polymorphisms and Helicobacter pylori in a Brazilian Amazon population / H.P. Melo Barbosa et al. // World journal of gastroenterology : WJG. 2009. - Vol. 15, № 12. - P. 1465-1471.
88. Interleukin-1 gene family polymorphisms from paraffin-embedded archival tissue of Chinese patients with gastric ulcer and gastric cancer / G.F. Yang et al. // Hepatogastroenterology. 2008. - Vol.55, № 86-87. - P. 18781881.
89. Interleukin-1 polymorphisms associated with increased risk of gastric cancer/ E. M. El-Omar et al. // Nature. 2000. - Vol. 404. - P.398-402.
90. Interleukin-10 (-819 C/T) and tumor necrosis factor-alpha (-308 G/A) gene variants influence gastritis and lymphoid follicle development / B.R. Achyut et al. // Digestive diseases and sciences. 2008. - Vol. 53, № 3. - P. 622-629.
91. Interleukin-10 -1082 promoter polymorphism associated with gastric cancer among Asians / Y. Zhou et al. // European journal of cancer. 2008. -Vol. 44, № 17. - P. 2648-2654.
92. Intratumoral expression of IL-17 and its prognostic role in gastric adenocarcinoma patients / J.G. Chen et al. // International Journal of Biological Sciences. 2011. - Vol. 7, № 1. P. 53-60.
93. Is interleukin-1 genotyping useful for the clinical management of patients with atrophic body gastritis? / E. Lahner et al. // Alimentary pharmacology & therapeutics. 2008. - Vol.27, №4. - P.355-365.
94. Konturek P.C. Helicobacter pylori infection in gastric cancerogenesis / P.C. Konturek, S.J. Konturek, T. Brzozowski // Journal of physiology and pharmacology. 2009. - Vol. 60, №3.-P. 3-21.
95. Kundu J.K. Inflammation: gearing the journey to cancer / J.K. Kundu, Y.J. Surh // Mutation research. 2008. - Vol.659, № 1-2. - P. 15-30.
96. Lack of association between pro-inflammatory genotypes of the interleukin-1 (IL-1B -31 C/+ and IL-1RN *2/*2) and gastric cancer/duodenal ulcer in Korean population / S.G. Lee et al. //Cytokine. 2003. - Vol.21, №4. - P.167-171.
97. Laurén P. The two histological main types of gastric carcinoma: diffuse and so-called intestinal-type carcinoma. An attempt at a histo-clinical classification / P. Laurén // Acta pathologica et microbiologica Scandinavica. -1965.-Vol. 64.-P. 31-49.
98. Lochhead P. Helicobacter pylori infection and gastric cancer / P. Lochhead, E.M. El-Omar // Best practice & research. Clinical gastroenterology. 2007. - Vol. 21, № 2. - P. 281-297.
99. Marshall B.J. Unidentified curved bacilli in the stomach of patients with gastritis and peptic ulceration / B.J. Marshall, J.R. Warren // Lancet. -1984.-Vol. 1, № 8390.-P. 1311-1315.
100. McCracken V.J. The Helicobacter felis model of adoptive transfer gastritis / V.J. McCracken, S.M. Martin, R.G. Lorenz // Immunologic research. -2005.-Vol. 33, № 2. P.:183-194.
101. McGill R. Variations of Box Plots / R. McGill, J. W. Tukey, W. A. Larsen // American Statistician. 1978. - Vol. 32, No. 1. - P. 12-16.
102. McLean M.H. Genetics of inflammation in the gastrointestinal tract and how it can cause cancer / M.H. McLean, E.M. El-Omar // Recent results in cancer research. 2011. - Vol. 185. - P. 173-183.
103. Mechanisms of field cancerization in the human stomach: the expansion and spread of mutated gastric stem cells / S.A. McDonald et al. // Gastroenterology.-2008.-Vol. 134, №2.-P. 500-510.
104. Meta-analysis of the relationship between Helicobacter pylori seropositivity and gastric cancer / J.Q. Huang et al. // Gastroenterology. -1998. Vol. 114, № 6. - P. 1169-1179.
105. Microsatellite instability in gastric intestinal metaplasia in patients with and without gastric cancer / W.K. Leung et al. // The American journal of pathology. 2000. - Vol. 156, № 2. - P. 537-543.
106. Nardone G. Helicobacter pylori and molecular events in precancerous gastric lesions / G. Nardone, A. Rocco, P. Malfertheiner // International journal of surgical pathology. 2004. - Vol. 20, № 3. - P. 261-270.
107. OLGA gastritis staging in young adults and country-specific gastric cancer risk / M. Rugge et al. // International journal of surgical pathology. -2008. Vol.16, №2. -P.150-154.
108. OLGA staging for gastritis: A tutorial / M. Rugge et al. // Digestive and liver disease. 2008. - Vol.40, №8. - P.650-658.
109. Operative Link for Gastritis Assessment gastritis staging incorporates intestinal metaplasia subtyping / M. Rugge et al. // Human pathology. 2011. - Vol. 42, № 10. - P. 1539-1544.
110. Oxidative and nitrative DNA damage in animals and patients with inflammatory diseases in relation to inflammation-related carcinogenesis / S. Kawanishi et al. // Biological chemistry. 2006. - Vol. 387, № 4. - P. 365372.
111. Peek R.M. Helicobacter infection and gastric neoplasia. / R.M. Peek, J.E. Crabtree // The Journal of pathology. 2006. - Vol.208, №2. -P.233-248.
112. Polymorphisms in Thl-type cell-mediated response genes and risk of gastric cancer / L. Hou et al. // Carcinogenesis. 2007. - Vol. 28, № 1. - P. 118-123.
113. Polymorphisms of interleukin-1 and interleukin-2 genes in patients with gastric cancer in Korea / W.G. Shin et al. // Journal of gastroenterology and hepatology. 2008. -Vol.23, №10,- P.1567-1573.
114. Polymorphisms of tumor necrosis factor-alpha are associated with increased susceptibility to gastric cancer: a meta-analysis / J. Zhang et al. // Journal of human genetics. 2008. - Vol. 53, № 6. - P. 479-489.
115. Purification of human genomic DNA from whole blood using sodium Perchlorate in place of phenol / M.B. Jr. Johns, J.E. Paulus-Thomas // Analytical biochemistry. 1989. - Vol.180, №2. - P.276-278.
116. Reactive nitrogen species mediate DNA damage in Helicobacter pylori-infected gastric mucosa / M. Katsurahara et al. // Helicobacter. 2009. -Vol. 14, №6. P.: 552-558.
117. Re-evaluation of histogenesis of gastric carcinomas: a comparative histopathological study between Helicobacter pylori-negative and H. pylori-positive cases / R. Kakinoki et al. // Digestive diseases and sciences. 2009. -Vol. 54, № 3.-P. 614-620.
118. Relation of atrophic gastritis with Helicobacter pylori-CagA+and interleukin-1 gene polymorphisms / R. Sierra et al. // World journal of gastroenterology. 2008. - Vol. 14, № 42. P.: 6481-6487.
119. Rugge M. Staging and grading of chronic gastritis / M. Rugge, R.M. Genta // Human pathology. 2005. - Vol.36, №3. - P.228-233.
120. Schistosomes, liver flukes and Helicobacter pylori. IARC Working Group on the Evaluation of Carcinogenic Risks to Humans. Lyon, 7-14 June 1994 // IARC Monographs on the Evaluation of Carcinogenic Risks to Humans. 1994. -Vol.61. -P. 1-241.
121. Seroconversion for Helicobacter pylori / E.J. Kuipers et al. // Lancet. 1993. -Vol.342, №7. - P.328-331.
122. Shanks A.M. Helicobacter pylori infection, host genetics and gastric cancer / A.M. Shanks , E.M. El-Omar // Journal of digestive diseases. 2009. -Vol.10, №3.-P.157-164.
123. Small early gastric cancer with special reference to macrophage infiltration / R.A. Caruso et al. // Mod Pathol. 1999. - Vol. 12, № 4. - P. 386-390.
124. Smith A.J. Cytokine and cytokine receptor gene polymorphisms and their functionality / A.J. Smith , S.E. Humphries // Cytokine & growth factor reviews. 2009. - Vol.20, № 1. - P.43-59.
125. Staging gastritis: an international proposal / M. Rugge et al. // Gastroenterology. -2005. Vol. 129, № 5. p. 1807-1808.
126. T-bet knockout prevents Helicobacter felis-induced gastric cancer / C. Stoicov et al. // The Journal of immunology . 2009. - Vol. 183, № 1. - P. 642-649.
127. The role of interleukin DNA polymorphisms in gastric cancer / A. Yuzhalin et al. // Human immunology. 2011. - Vol. 72, № 11. - P. 11281136.
128. Topographic patterns of intestinal metaplasia and gastric cancer / M. Cassaro et al. // The American journal of gastroenterology. 2000. - Vol. 95,№6.-P. 1431-1438.
129. Tumour-necrosis factor-A polymorphisms and gastric cancer risk: a meta-analysis / F. Gorouhi et al. // British journal of cancer. 2008. - Vol. 98, № 8.-P. 1443-1451.
130. Vannella L. Risk factors for progression to gastric neoplastic lesions in patients with atrophic gastritis / L. Vannella, E. Lahner // Alimentary pharmacology & therapeutics. 2010. - Vol. 31, № 9. - P. 1042-1050.
131. Vannella L. Risk for gastric neoplasias in patients with chronic atrophic gastritis: A critical reappraisal / L. Vannella, E. Lahner, B. Annibale // World journal of gastroenterology. 2012. - Vol.18, №12. - P. 1279-1285.
132. Vauhkonen M. Pathology and molecular biology of gastric cancer / M. Vauhkonen, H. Vauhkonen, P. Sipponen // Best Prac & Res Clin Gastroenterol. 2006. - Vol. 20, № 4. - P.651-674.
133. Vieth M. Elevated risk for gastric adenocarcinoma can be predicted from histomorphology / M. Vieth, M. Stolte // World journal of gastroenterology. 2006. - Vol. 12, № 38. - P. 6109-6114.
134. Weis V.G. Current understanding of SPEM and its standing in the preneoplastic process / V.G. Weis, J.R. Goldenring // Gastric Cancer. -2009. Vol.12, №4. - P. 189-197.
135. World Health Organization Classification of Tumours. Pathology and Genetics of Tumours of the Digestive System. I ARC / ed. by S.R. Hamilton, L.A. Aaltonen. Lyon : IARC Press, 2000. - 314 p.