Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Особенности состояния пролиферативных процессов в условиях возрастной инволюции организма

РГб од

2 О СЕН 1999

На правах рукописи

САЗОНОВ Сергей Владимирович

5СОБЕННОСТИ СОСТОЯНИЯ ПРОЛИФЕРАТИВНЫХ ПРОЦЕССОВ В УСЛОВИЯХ ВОЗРАСТНОЙ ИНВОЛЮЦИИ ОРГАНИЗМА

14.00.16 - патологическая физиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Челябинск 1999

Работа выполнена на кафедре патологической физиологии и Центральной научно-исследовательской лаборатории Уральской государственной медицинской академии

Научный консультант:

Заслуженный деятель науки РФ, академик РАЕН, доктор медицинских наук, профессор А.П.Ястребов

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор В.Т.Долгих

Заслуженный деятель науки Республики Башкортостан, доктор медицинских наук, профессор ДАЕникеев

доктор медицинских наук, профессор Г.В.Брюхин

Ведущее учреждение:

Санкт-Петербургский медицинский университет им. академика И.П.Павлова, 197089, г.Санкг-Петербург, ул.Льва Толстого, 6/8

Защита состоится "_"_1999г. в _часов на заседании

специализированного диссертационного совета Д 084.04.01 Челябинской государственной медицинской академии по адресу: 454092, г.Челябинск, ул. Воровского, 64

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Челябинской государственной медицинской академии.

Автореферат разослан "_"_1999г.

Ученый секретарь диссертационного совета

доктор медицинских наук, профессор Л.В.Кривохижина

Р^ГА 1 С6/ О

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы

В настоящее время уже выяснены многие закономерности и механизмы южного и многостороннего процесса старения. Репарация ДНК в клетках тесно 1язана с процессами ее синтеза и митозом, причем эта связь основывается на 1инстве ферментативных систем, участвующих в различных актах «недеятельности клетки, репликации ДНК, рекомбинации, репарации и других, громное значение синтеза ДНК для стареющих клеток подтверждается опытами, в торых продолжительность жизни культуры клеток ткани увеличивалась под ¡йствием факторов, стимулирующих синтез ДНК и деление клеток (Красильников А., 1990; Dimri G, 1996).

После прохождения клетками митотического цикла, периодов роста, 1фференцировки и осуществления ими специфических функций жизненный цикл [канчивается их старением, за которым в конечном счете наступает разрушение и бель. При этом процессы, определяющие старение, неразрывно связаны с ютивоположно направленным процессом - восстановлением утраченных и >врежденных структур, или клеточной регенерацией. Единство этих двух явлений, »-видимому, и определяет исход жизненного цикла клетки, а также интерес следователей к клеточному уровню развития возрастных изменений и ¡генераторных процессов в организме.

Показано (Hayflick L.,1980), что на уровне клеток имеются определенные раничения числа клеточных делений. При этом существует обратная связь между орастом донора клеток и потенциалом удвоения клеточной популяции в опытах in го. При серийной трансплантации нормальных (не опухолевых) клеток in vivo по-зано, что клетки старых организмов обладают ограниченной репликативной юсобностъю. Обнаружено наличие положительной корреляции между юдолжительностью жизни вида и потенциалом удвоения клеточной популяции.

Однако поведение единичной клетки или группы клеток в стареющем организме язано не только с первичными изменениями и повреждениями в самой клетке, а висит от межклеточных взаимодействий различного уровня, которые запускают ^существующие внутриклеточные механизмы (Бугенко Г.М., 1990). В культуре же ани полностью исключаются или значительно искажены влияния на клетки со ороны регулирующих систем организма, тогда как возрастные изменения акционирования тканей ¡n vivo всегда несут на себе отпечаток регуляторных здействий со стороны организма (Красильников М.А., 1.990; Ястребов А.П. и др., I97; Macieira-Coelho А.,1995).

Несмотря на значительное число исследований, посвященных изучению !зрасшых особенностей пролиферативных процессов в различных органах, общие едставления о их течении в органах до сих пор не сложились. В тоже время, итывая изменения реактивности организма с возрастом, в его регулирующих стемах, непосредственно в клетках и тканях этот вопрос может играть ключительное значение в понимании механизмов развития возрастной инволюции. ;нако при анализе многочисленного накопленного материала оказалось трудно

дать однозначный ответ на вопрос о том, падает или повышается с возрастем восстановительная способность у млекопитающих и сформировалось мнение, чт< какого-либо общего правила, приложимого ко всем тканям и органам скорее всего Hf существует (Сидорова В.Ф., 1976). Анализ современных работ, показывает, что часп исследователей при возрастной инволюции организма обнаруживает снижена синтетических и пролиферативных процессов в различных органах и тканях (Данило! Р.К. и др.,1997; Зуфаров К.А.,1984; Саркисов Д.С. и др., 1990; Тодрия Т.В.,1992; Blakt D.,1997; Burns Е.,1994; Chen S., 1995; Engwerda C.R.1996; Higami Y.,1997; Haratake A., 1997; Haynes L.,1997; Kato H.,1995; Proust J.J.,1996; Pollak C., 1997; Tanaki H.,1996; Tanno M.,1996; Taguchi T.,1996; Vaziri H.,1996 и др.)

Другие исследователи с увеличением возраста обнаружили активации пролиферативных процессов или отсутствие изменений этого показателя (Кудрявце! Б.Н., и др., 1991; Solmi R.,1996; Nijhuis Е., 1994 и др.), стимуляцию активносп эндомитоза (Бродский В.Я., 1995;. Саркисов Д.С. и др., 1990; Северин М.В., 1993 Кодолова Г.И.,1997; Basso А.; 1996 идр.).

Таким образом, до настоящего времени нет единого мнения в вопросе о том, ка: изменяется с возрастом восстановительная способность у млекопитающих, какие особенности этих процессов появляются в организме при возрастной инволюции нг фоне действия экстремальных факторов, остается также неясным и роль отдельны; регуляторных механизмов в обеспечении пролиферативных процессов в органах t этих условиях.

Все изложенное выше и явилось основанием для постановки основной цели i задач настоящего исследования:

Цель исследования. Изучить состояние пролиферативных процессов в тканя; в условиях возрастной инволюции организма при действии экстремальных факторов.

Задачи исследования:

1. Исследовать возрастные особенности состояния пролиферативных процесса в органах с разной скоростью клеточного обновления.

2.0харакгеризовать возрастные особенности состояния пролиферативньв процессов при экстремальных воздействиях на организм.

3. Сопоставить вклад различных способов клеточной регенерации в изменение состояния регенераторных процессов в тканях в условиях возрастной инволюцм организма.

4. Выявить возрастные особенности прохождения клетками митотическогс цикла, его временных параметров и механизмы изменений состояни! пролиферативных процессов.

5. Оценить морфо-функциональное состояние клеточной популяцт микрорайона (тучных и лимфоидных клеток) в тканях с различной интенсивность« течения процессов регенерации.

6. Исследовать возрастные особенности морфо-функционального состояни! тучных и лимфоидных клеток.

7. Выяснить роль тучных клеток в обмене биологически активных веществ i тканях (гепарина и гистамина) и изменении состояния регенераторных процессов ! тканях.

8. Изучить роль лимфоидных клеток в регуляции регенераторных процессов в условиях возрастной инволюции организма.

9. Исследовать возможности коррекции возрастных изменений состояния регенераторных процессов при применении геропротекторов и веществ, влияющих на функциональную активность лимфоидных и тучных клеток.

Научная новизна.

В работе впервые дана качественная и количественная оценка состояния пролиферативных процессов в тканях при возрастной инволюции, что позволило выявить закономерности их изменений в различных органах. Показано, что при старении во всех изученных органах в тканях снижается активность пролиферативных процессов, обеспечиваемых делением клеток митозом. При наличии еще одного способа клеточной регенерации в ткани - эндомитоза во всех случаях при старении обнаружена стимуляция последнего, что сопровгаедается усилением процессов полиплоидизации. Угнетение процессов клеточного деления в тканях определяется замедлением выхода клеток в митотический цикл и не связано с изменением скорости прохождения синтетического периода. В органах, имеющих среди способов регенерации эндомитоз, при старении организма обнаружена задержка клеток в премитотическом периоде цикла, что сопровождается развитием полиплоидизации их ядер. Впервые показано, что среди источников поступления кислых гликозаминогликанов (кГАГ) в основное вещество ткани наибольшее значение имеет тучная клетка. При этом они располагаются преимущественно у генеративных зон органов. Обнаружена прямая связь числа тучных клеток и активности состояния процессов физиологической регенерации в органе. При индукции регенераторных процессов тучные клетки обеспечивают определенный баланс биологически активных веществ (гистамина и гепарина) в основном веществе ткани, изменение в котором связано со стадийностью развития пролиферативного ответа. Получены новые данные о значительном увеличении представительства и стимуляции активности морфо-функционального состояния тучных клеток в органах при возрастной инволюции организма и на фоне снижения активности процессов клеточного деления. При этом не обнаружено изменений в расположении тучных клеток. Впервые установлена возрастные особенности проявления морфогенетической функции лимфоцитов в системе адоптивного переноса. Показана принципиальная возможность коррекции возрастных изменений состояния пролиферативных процессов. Установлены возрастные особенности изменения морфо-функционального состояния тучных и лимфоидных клеток при развитии патологического процесса и индукции регенерации в печени (больные хроническим гепатитом) и коже (больные атопическим дерматитом).

Теоретическая и практическая значимость работы.

Разработана и обоснована концепция об особенностях состояния пролиферативных процессов в органах и тканях в условиях возрастной инволюции организма. Для это были проведены комплексные исследования позволяющие качественно и количественно оценить динамику изменений процессов клеточного деления (митоз), полиплоидизации (эндомитоз) и внутриклеточной регенерации (клеточная гипертрофия).

Обнаружены новые закономерности представительства клеточных компонентов микрорайона (тучных и лимфоидных клеток) при старении организма. Выявленная корреляция .между числом, функциональной активностью тучных клеток и лимфоцитов и состоянием регенераторных процессов в тканях позволяют сделать вывод о несомненном их участии в механизмах старения ткани.

Применение экспериментальных моделей индуцированной регенерации и воздействия экстремальных факторов на организм позволили определить значение изменений морфо-функционапьного состояния тучных и лимфоидных клеток, их участие в поддержании определенного взаимоотношения между гистамином и гепарином в основном веществе микрорайона ткани в динамике развития пролиферативного ответа.

Обоснована возможность коррекции возрастных изменений состояния пролиферативных процессов при использовании веществ, изменяющих морфо-функциональное состояние тучных и лимфоидных клеток.

Установленные закономерности изменений в клеточном компоненте микрорайона позволили оценить его роль при развитии патологических процессов в коже больных атопическим дерматитом, печени больных хроническим гепатитом, узловых образованиях^ щитовидной железы, раке молочной железы, у больных с гемобластозами.

Результаты проведенного исследования внедрены и используются в практике работы Уральского научно-исследовательского института венеро-дерматологии и иммунопатологии МЗ РФ (Директор - д.м.н. Н.В.Кунгуров), Межрегионального детского онко-гематологического центра (зав. центром - Л.Г.Фечина), Городского гастро-энтерологического центра (зав. центром - Э.А.Максимова), Городского маммологического центра (зав. центром - к.м.н., до цент С.М.Демидов), Городского эндокринологического центра.

Результаты - работы используются при обучении студентов в курсах "Патологическая физиология", "Гистология человека", "Клиническая лабораторная диагностика", "Внутренних болезней", "Онкология" на соответствующих кафедрах Уральской государственной медицинской академии (ректор - Заслуженный деятель науки РФ, академик РАЕН, доктор медицинских наук, профессор А.П.Ястребов), на кафедре физиологии животных Уральской сельскохозяйственной академии (зав.курсом - д.в.н., профессор Н.В.Садовников).

Апробация работы и публикации.

По теме диссертации опубликовано 86 работ.

Основные положения диссертации доложены и обсуждены на научно-практических конференциях (Екатеринбург, 1994,1995,1996,1997, 1998,1999); конференции патофизиологов Урала "Системные и клеточные механизмы адаптации организма к действию повреждающих факторов" (Челябинск, 1991); Первом международном конгрессе патофизиологов (Москва, 1991); 5 Европейском конгрессе патофизиологов (Будапешт, 1993); международной конференции "Атопический дерматит у детей" (Екатеринбург, 1994); 3 Международной конференции по компьютерной цитологии и гистологии (Чикаго, 1994); научно-практической конференции "Проблемы медицинской реабилитации населения, подвергшегося радиационному воздействию" (Екатеринбург, 1994); научно-практическом совещании

J

и научно-практической конференции "Перспективы развития специализированной медицинской помощи детям с дерматозами" (Сочи, 1994); Международной научно-практической конференции "Радиационная безопасность и защита населения" (Екатеринбург, 1995); I Российской гастро-энтерологической неделе (Москва,1995); научной конференции "Вопросы онкологической помощи на этапе реформирования здравоохранения" (Екатеринбург, 1996); научно-практической конференции 'Актуальные вопросы современной медицинской науки и здравоохранения" (Екатеринбург, 1996); III Всероссийском съезде гематологов и трансфузиологов (Санкт-Петербург, 1996); Межобластной научно-практической конференции 'Актуальные проблемы геронтологии и гериатрии" (Екатеринбург, 1997); научной сессии "Актуальные вопросы современной медицинской науки и здравоохранения" [Екатеринбург, 1998); научно-практической конференции "Актуальные вопросы педиатрии и хирургии детского возраста, анестезиологии и реаниматологии" [Екатеринбург,1998); Юбилейных Пашутинских чтениях "Клиническая медицина, эеабилитация и патофизиология" Санкт-Петербург,1999). По материалам диссертации сделаны сообщения на заседаниях Уральского отделения общества татофизиологов, на совместном заседании кафедр патологической физиологии, ■истологии, биохимии, клинической лабораторной диагностики, Центральной научно-исследовательской лаборатории Уральской государственной медицинской академии ¡1999).

Объем и структура диссертации.

Диссертация изложена на 372 машинописных страницах и состоит из введения, збзора литературы, описания материалов и методов исследования, трех глав х>бственных исследований, общего заключения, выводов и списка литературы, зключающего 352 отечественных и 259 иностранных источников. Работа иллюстрирована 83 таблицами и 7 рисунками.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования.

Эксперименты проведены на 334 крысах-самцах линии Вистар и 108 мышах ^ВА из разных возрастных групп. В группу зрелых вводили животных через 8-12 мес. госле рождения (крысы массой 0,2-0,3 кг), в группу старых - в возрасте от 18 до 20 лес. ( крысы массой 0,4-0,5 кг). Масса мышей СВА колебалась от 0,02 до 0,03 кг и не 1мела прямой зависимости от их возраста. Обследовано 72 больных с хроническим епатитом вирусной этиологии в возрасте от 17 до 62 лет и 18 больных с циррозом ючени. Также исследованы биогттаты кожи 44 больных с атопическим дерматитом. Зольные распределялись на три группы, соответствующие периодам жизни: первая руппа - период развития (до 20 лет), вторая - период зрелости (до 55 лет), третья -юриод старения (после 55 лет).

Состояние регенераторных процессов в тканях изучали на моделях физиологической и индуцированной (репаративной) регенерации. Индукцию >егенераторных процессов вызывали путем выполнения: односторонней юфрэктомии; частичной гепатэкгомии (ЧГЭ), при которой удаляли 2/3 массы печени

в соответствии с основными принципами G.M. Higgins, R.E.Anderson; резекции половины общей длины тонкой кишки; путем создания в слизистой желудка острых салициловых язв; в костном мозге путем выполнения животным острой кровопотери, которую вызывали у крыс путем извлечения крови из яремной вены в объеме 2% от массы животного.

Экстремальные воздействия на организм изучали при постоянном охлаждении при температуре 0°С по 23 часа в сутки (исключая время кормления - 1 час) в климатокамере TU-1000 (Германия) с приточно-вытяжной вентиляцией и щелочным поглотителем влаги и углекислоты; трехкратном облучении крыс по 0,5 Гр (суммарная доза 1,5 Гр) на установке ИГУР-1; дыхании гипоксической газовой смесью с 10% кислорода (модель нормобарической гипоксии).

Состояние лролиферативных процессов оценивали с помощью комплекса методов. Кроме определения величины митотического индекса (МИ), рассчитывали продолжительность митоза (Дондуа А.К.,1990) и с помощью проточного цитометра (ЛОМО-ГОИ) определяли количество ДНК (Розанов Ю.М.,1988) в ядрах клеток с одновременным распределением анализируемой клеточной популяции по плоидности и фазам клеточного цикла. Рассчитывались временные параметры митотического цикла (Givan А., 1992). Активность синтеза ДНК в клетках определяли по включению Н-тимидина методом жидкостной сцинтилляции, вычисляли долю клеток, находящихся в S-фазе.

На срезах тканей толщиной 5-8 мкм подсчитывали количество тучных клеток, выявляемых с помощью их селективной окраски основным коричневым (Шубич М.Г. и др.,1979), индекс их дегрануляции, измеряли клеточные размеры, изучали тинкториальные свойства. Содержание кислых гликозаминогликанов в тучных клетках и межклеточном веществе определяли цитофлуориметрическим способом (Козинец Г.И. и др.,1986) с помощью комплекса ЛЮМАМ И-3 (ЛОМО) на срезах, окрашенных акридиновым оранжевым при рН=2,1 (Зеленин A.B., 1967). На свежезамороженных срезах также цитофлуориметрическим способом определяли содержание в тучных клетках и межклеточном веществе гистамина (Гордон Д.С., 1990).

Дозы и способы введения лекарственных препаратов: мелатонин (Sigma, США): кетотифен (Ketasma, Индия), циннаризин (Мосхимфармпрепараты, Россия) давали в виде раствора в питьевой воде в концентрациях 20, 10 и 0,5 мг/л соответствено. Тимоген (Цитомед, Россия) вводили внутримышечно в течение 3 суг в суточной дозе 1 мг/кг массы тела на 0,5 мл изотонического раствора натрия хлорида в утренние часы (Анисимов В.Н. и др., 1996; Nagler А., е.а., 1995; Хмельницкий O.K. и др., 1991; Юрина НА и др., 1985).

Способность лимфоцитов стимулировать пролиферативные процессы в тканях изучали в системе адоптивного переноса (Бабаева А.Г. и др., 1997). В качестве доноров спленоцитов использовали животных из разных возрастных групп, подвергавшихся односторонней нефрэкгомии. Донорский интервал составлял 19 _ч после выполнения операции.

Степень инфильтрации органа лимфоидными клетками оценивали при подсчете количества находящихся между клетками основной ткани лимфоцитов с помощью цветного анализатора изображений фирмы SIAMS.

Для иммуногистохимических исследований применяли моноклональные антитела (CD45, CD45RO, CD45RA, CD3, CD20, CD68) и визуализационную систему для проведения пероксидазно-антипероксидазной (ПАП) методики (Shandon, USA), выполняемой на автомате "Cadensa" (Shandon, USA).

Для каждого ряда значений показателя вычисляли среднюю арифметическую, ошибку средней, определяли коэффициент вариации. Достоверность отличий между группами оценивали с помощью t-критерия Стъюдента. Критерием достоверности различий сравниваемых величин считали Р<0,05.

Результаты и их обсуждение.

Проведенные исследования позволили определить особенности состояния пролиферативных процессов в тканях различных органов при возрастной инволюции организма. Было установлено, что активность процессов клеточного деления при старении организма снижается в лимфоидной ткани тимуса, лимфатических узлов, селезенки, миелоидной ткани костного мозга, эпителии тонкой кишки. Все перечисленные ткани относятся к одной группе - с высокой скоростью клеточного обновления и используют на клеточном уровне один основной способ регенерации - митотическое деление. При возрастной инволюции во всех органах обнаружено снижение активности пролиферативных процессов, что связано с уменьшением величины пролиферативного пула (Рис.1) и митотической активности

Рис. 1. Изменение величины пролиферативного пула клеток : при возрастной инволюции организма

0»р*лы» животные ■ стары* жя«отии#

клеток. Пролиферативный пул уменьшается в первую очередь за счет клеток, находящихся в синтетической фазе митотического цикла. Изучение временных параметров клеточного цикла позволило установить и основной механизм уменьшения пролиферативного пула ткани - замедление выхода клеток в цикл. При этом не обнаружено достоверных изменений со стороны продолжительности синтетического и премитотического периодов цикла.

При изучении особенностей состояния пролиферативных процессов в органах с низкой скоростью клеточного обновления (печень, почки, легкие, щитовидная железа)

обнаружены несколько другие изменения в состоянии пролиферативных процессов при возрастной инволюции организма. В первую очередь в этих органах не обнаружено достоверного снижения числа ДНК-синтезирующих клеток в тканях органов старых животных В тоже время одновременно в органах увеличивается доля полиплоидных клеток (Рис. 2), происходит накопление клеток в премитотическом периоде цикла за счет чего увеличивается пролиферативный клеточный пул (Рис. 1). Расчет временных параметров. клеточного цикла показывает на отсутствие достоверного изменения продолжительности синтеза ДНК клетками. В тоже время отмечается более продолжительное нахождение клеток в премитотическом периоде и значительно возрастает время периода покоя и пресинтетической фазы цикла.

Рис. 2. Изменение числа полиплоидных клеток в медленно обновляющихся органах при возрастной инволюции организма

□ зрелые животные В старые животные

Анализ полученных результатов позволяет говорить о связи процессов синтеза ДНК в тканях старых животных не с клеточным делением, так как не обнаруживается соответствующий уровень митотической активности, а с процессами эндомитоза, что сопровождается не делением клеток, а их полиплоидизацией.

Таким образом, если в тканях органов с быстрым клеточным обновлением при старении организма основным механизмом инволюции является подавление активности пролиферативных процессов за счет торможения вступления клеток в митотический цикл, то в органах с медленным клеточным обновлением на фоне торможения процессов клеточного деления происходит стимуляция эндомитоза, что сопровождается развитием полиплоидизации клеток. Обнаруженные изменения, по-видимому, связаны с особенностями прохождения клеток тканей при возрастной инволюции через регуляторные периоды митотического цикла: и вг ^эЬап С. е.а., 1993;). Торможение клеток при прохождении этих периодов цикла приводит к их

накоплению в пресинтетическим и премитотическом периодах, удлинению всего митотического цикла, снижению активности процессов клеточного деления и усилению процессов клеточной полиплоидизации (Рис.3). Выявленные изменения временных параметров митотического цикла могут быть связаны с колебаниями концентрации модуляторов активности процессов пролиферации в межклеточном веществе тканей (Епифанова О.И. и др., 1988; Unke S.P. е.а., 1996).

Рис. 3. Механизмы изменения пролифератипных процессов при возрастной инволюции организма

Изучение возрастных особенностей состояния пролиферативных процессов при действии на организм экстремальных факторов позволяет обнаружить дополнительные данные, с учетом которых можно дать более полную их характеристику. Были обнаружены значительные различия в реакциях тканей на действие экстремальных факторов на организм со стороны животных из разных возрастных групп.

Использованный режим действия нормобарической гипоксии на организм «ивотных не привел к существенным изменения со стороны основных параметров митотического цикла у зрелых животных. В костном мозге не обнаружено достоверных различий митотического индекса в контрольной группе зрелых животных и в группе зрелых животных, подвергавшихся действию гипоксии. Анализ

распределения клеток по периодам митотического цикла подтвердил отсутствие отличий в состоянии пролиферативных процессов в изученных группах. Реакция же на гипоксическое воздействие у старых животных заметно отличалась. Действие гипоксии у этих животных приводит к подъему величины митотического индекса, одновременно происходит изменение распределения клеток по периодам цикла. Наблюдается увеличение пролиферативного пула клеток в миелоидной ткани за счет роста популяции миелокариоцитов, находящихся в синтетическом периоде цикла с соответствующим снижением числа клеток в периоде покоя. Обнаруженные особенности течения пролиферативных процессов в миелоидной ткани у старых животных связаны с изменением временных параметров клеточного цикла. Если у зрелых животных не обнаружено изменения скорости прохождения клетками периодов цикла при действии на организм гипоксии, то в группе старых животных выявлена основа изменений состояния пролиферации клеток костного мозга. Так, обнаружено уменьшение времени прохождения клетками цикла на 8,1 часов. Анализ временных параметров цикла показывает отсутствие изменений в продолжительности синтетического и премитотического периодов. Продолжительность цикла снижается за счет соответствующего уменьшения времени нахождения клеток в периоде покоя. Обнаруженный нами ранее рост величины популяции клеток, синтезирующих ДНК связан не с изменением времени прохождения клетками этого цикла, а с более активным переходом клеток из периода покоя в синтез. При этом основные временные параметры прохождения по периодам цикла достоверно не изменяются по сравнению с контрольной группой старых животных. Полученные данные не только демонстрируют отличия в реакции кроветворной ткани животных из разных возрастных групп на гипоксическое воздействие, но и позволяют сделать заключение о возможности влияния на. пролиферативные процессы с целью коррекции обнаруженных изменений в группе старых животных с помощью направленного воздействия на организм.

Действие гипоксии на организм сопровождается снижением основных показателей пролиферативной активности в тимусе зрелых животных. В основе угнетения митотической активности лежат изменения в прохождении тимоцитами периодов клеточного цикла. Достоверно снижается число клеток, находящихся в синтетическом периоде и в премитотическом периоде цикла. При этом увеличивается популяция тимоцитов в периоде покоя, что позволяет говорить о задержке выхода клеток в митотический цикл. Все указанные изменения приводят к уменьшению величины пролиферативного пула клеток и снижению активности пролиферативных процессов в органе. Последнее, по-видимому, и определяет морфологические проявления развития акцидентальной инволюции в тимусе при действии на организм зрелых животных гипоксии. В основе торможения активности процессов клеточной регенерации в органе у зрелых животных лежит увеличение продолжительности клеточного цикла в 2 раза за счет задержки выхода клеток из периода покоя в- клеточный цикл, о чем свидетельствует увеличение продолжительности последнего в 2,3 раза. Не обнаружено при действии гипоксии изменения продолжительности прохождения тимоцитами других периодов клеточного цикла. В тоже время действие экстремального фактора на организм старых животных осуществляется на фоне уже имеющейся старческой (возрастной) инволюции тимуса. Этим объясняется достаточно низкие значения показателей,

отражающих активность пролиферации в органе у контрольной группы. При действии гипоксии на организм старых животных не обнаружено достоверного изменения последних. Нет изменений и в величине МИ. Анализ временных параметров митотического цикла позволяет установить основные причины обнаруженных изменений в состоянии пролиферативных процессов в тимусе. Отсутствие различий у контрольной и опытной фупп старых животных связано с особенностями клеточного цикла тимоцитов. При действии гипоксии на организм старых крыс временные параметры митотического цикла не изменяются, что определяет сохранение уровня активности пролиферативных процессов в органе. При этом необходимо помнить, что сохраняющийся уровень пролиферативных процессов в тимусе старых животных достоверно ниже уровня контрольных значений показателей в группе зрелых крыс.

Сходная картина изменения состояния пролиферативных процессов в лимфоидной ткани тимуса обнаружена при изучении действия на организм холодового фактора: При действии холода на организм также выявлены различия в состоянии процессов клеточной регенерации в тимусе животных из разных возрастных групп. У зрелых животных в ранние сроки воздействия обнаружено подавление процессов пролиферации клеток за счет торможения их выхода в митотический цикл, что сопровождается уменьшением массы органа. В значительно более поздние сроки действия холода (к 40 суткам) клеточная регенерация в органе начинает восстанавливаться до уровня исходных значений, хотя клетки тимуса продолжают менее активно выходить в пролиферацию. Иная динамика состояния регенераторных процессов при действии холода на организм обнаружена в тимусе старых крыс. Изначально более низкий уровень активности пролиферативных процессов в органе в ранние сроки действия экстремального фактора не изменяется. Более длительное воздействие холода приводит к еще большему снижению величины пролиферативного пула клеток, увеличению времени прохождения клеточного цикла за счет замедления выхода в последний тимоцитов из периода покоя.

В тоже время не каждое экстремальное воздействие на организм приводит к торможению пролиферативных процессов в лимфоидной ткани тимуса. Так, кровопотеря у зрелых животных не сопровождается снижением уровня пролиферации в лимфоидной ткани тимуса. Однако некоторое ускорение прохождения клетками премитотического периода не ведет к достоверному изменению величины пролиферативного пула клеток и митотической активности. В тимусе старых животных при действии на организм этого экстремального фактора значительное увеличение продолжительности клеточного цикла, обнаруженное на 5 сутки постгеморрагического периода, связано исключительно с задержкой клеток в периоде покоя, что приводит к еще большему снижению числа клеток, проходящих по другим периодам цикла и снижению митотической активности.

Действие экстремальных факторов на организм приводит и к значительным изменениям в состоянии пролиферативных процессов в тканях с низкой скоростью клеточного обновления. Изучение распределения гепатоцитов печени животных, подвергавшихся действию гипоксии на организм позволило обнаружить различия в реакции на это воздействие в разных возрастных группах. Действие гипоксии на организм зрелых крыс не сопровождается достоверными перестройками структуры

распределения гепатоцитов по плоидности. В тоже время в группе старых животных выявляются достаточно существенные изменения этого показателя. Количества тетраплоидных гепатоцитов уменьшается, одновременно увеличивается доля промежуточных полиплоидных гепатоцитов и октаплоидных гепатоцитов. Существенного перераспределения гепатоцитов с ядрами более низкой плоидности не обнаружено. Механизм выявленных изменений становится понятным при анализе изменений временных параметров митотического цикла гепатоцитов животных, подвергавшихся воздействию гипоксии. В печени зрелых животных при действии на организм данного экстремального фактора не обнаружено достоверных изменений продолжительности периодов цикла диплоидных гепатоцитов. В тоже время у старых животных наблюдается сокращение времени нахождения тетраплоидных гепатоцитов в премитотическом периоде и фазе покоя цикла, что приводит к сокращению продолжительности жизненного цикла диплоидных гепатоцитов, за счет перехода их ядер в более высокий класс плоидности. В печени старых животных при действии на организм гипоксии происходит сокращение времени прохождения клеточного цикла тетраплодными гепатоцигами. При сокращении времени их нахождения в периоде покоя не изменяется продолжительность синтеза в их ядрах ДНК и не происходит последующей задержки в премитотическом периоде цикла. Таким образом, при действии гипоксии на организм старых животных происходит стимуляция процессов клеточной регенерации. При этом не обнаружено изменений пролиферативной активности со стороны диплоидных гепатоцитов. Активация регенераторных процессов в основном связана с тетраплоидными клетками, которые выходят из периода покоя, проходят синтетический и премитотический периоды клеточного цикла и делятся путем эндомитоза, что сопровождается увеличением числа полиплоидных гепатоцитов. В печени зрелых животных изменений активности пролиферативных процессов и перестройки гепатоцитов по классам плоидности не обнаружено. Подобные же изменения в состоянии пролиферативных процессов обнаружены в эпителиальной ткани почки при действии холода на организм. В группе зрелых животных экстремальное воздействие в ранние сроки приводит к сокращению пролиферативного пула клеток, за счет уменьшения числа клеток, синтезирующих ДНК. В основе этих изменений лежит замедление выхода клеток из периода покоя в митотический цикла и торможение прохождения ими премитотического периода. В поздние сроки (к 40 суткам) воздействия холода происходит восстановление величины пролиферативного пула клеток, нормализация основных временных параметров митотического цикла, обнаруживается даже несколько более активный выход нефроцитов из периода покоя в митотический цикл. В тоже время сохраняется торможение клеток при прохождении ими премитотического периода. В группе старых животных с более низким уровнем состояния пролиферативных процессов в эпителиальной ткани почки действие холода на организм в ранние сроки не приводит к достоверному изменению величины и структуры пролиферативного пула клеток. Однако при изучении временных параметров митотического цикла также обнаружен более медленный переход клеток из периода покоя в цикл. Более продолжительное воздействие на организм старых животных сопровождается дальнейшим уменьшением числа клеток синтезирующих ДНК за счет их торможения в периоде покоя и увеличение времени прохождения клетками премитотического периода, что является проявлением активации развития клеточной полиплоидии в органе.

Несколько отличные результаты получены при изучении состояния пролиферативных процессов в печени животных после кровопотери. При этом обнаруженные изменения также отличаются в печени группы зрелых и старых мышей. В тоже время в этой экспериментальной модели в печеночной ткани у зрелых животных регенераторные процессы переключаются преимущественно на тетраплоидные гепатоциты. Диплоидные клетки становятся менее активными в обновлении печеночной ткани, менее активно выходят из периода покоя в митоти-ческий цикл, что ведет к сохранению уровня их доли в популяции гепатоцитов. Одновременно тетраплоидные гепатоциты, выходящие из периода покоя и проходящие синтез ДНК задерживаются в премитотическом периоде, не делятся, а формируют популяцию клеток более высокой плоццноста (окгаплоидных гепатоцитов). Движение тетраплоидных клеток в сторону полиплоидизации не сопровождается их заменой со стороны диплоидных гепатоцитов. Это ведет к уменьшению популяции тетраплоидных клеток, которые у зрелых животных и обеспечивают основные' изменения со стороны пролиферативных процессов в печени. У старых животных после кровопотери не обнаружено перераспределения гепатоцитов по классам плоидности и изменений временных параметров митотического цикла диплоидных и тетраплоидных гепатоцитов.

Таким образом, использование различных экстремальных воздействий на организм показало наличие выраженных особенностей их влияния на состояние пролиферативных процессов животных из разных возрастных групп. При этом существенным является обнаруженный факт сохранения в тканях органов старых животных пролиферативных потенций, которые могут проявляться при экстремальных воздействиях на организм (миелоидная ткань при нормобарической гипоксии). При этом основные показатели, характеризующие состояние пролиферативных процессов (величина пролиферативного пула клеток, распределение клеток по периодам митотического цикла, временные параметры последнего) приближаются к уровню показателей контрольной группы животных. В тоже время во всех использованных экспериментальных моделях не обнаружено стимуляции пролиферативных процессов в лимфоидной ткани тимуса. При действии на организм гипоксии и холода уровень пролиферативных процессов в ней у зрелых животных снижался до уровня значений у старых. У последних, значения пролиферативной активности пимфоидной ткани тимуса при действии этих экстремальных факторов достоверно не изменялись, так как орган еще до воздействия на организм уже находился в состоянии возрастной инволюции. В тоже время кровопотеря сопровождалась у старых животных еще более значительным подавлением уровня пролиферации в тимусе, тогда как у зрелых животных он сохранялся на контрольных значениях. Действие экстремальных факторов на организм приводит и к изменениям со стороны пролиферативных процессов в органах с низким уровнем клеточного обновления. Так, при воздействии факторов внешней среды у старых животных в ткани этих органов (печень, почка) происходит подавление процессов клеточного деления и одновременно стимулируется полиплоидизация клеток. Важно так же отметить, что если у зрелых животных в поздние сроки воздействия происходит восстановление активности процессов клеточного деления ( в эпителиальной ткани почки к 40 суткам холодового воздействия), то у старых животных стимуляция пролиферации реализуется через активацию полиплоидизации клеток. Этот же

механизм проявляется в печени зрелых животных после действия на организм кровопотери, однако у старых животных этот механизм в указанной модели не обнаружен.

Индукция регенераторных процессов в тканях с высокой скоростью клеточного обновления показала значительные отличия в состоянии пролиферации у животных из разных возрастных групп. При старении величина индуцированного пролиферативного ответа в тканях оказалась достоверно ниже, по сравнению со зрелыми животными (миелоидная ткань после кровопотери) или индуцированный ответ практически полностью отсутствовал (инволюция тимуса). В формировании волны пролиферации принимает участие достоверно меньшее число клеток. При этом не обнаружено достоверного изменения в скорости прохождения клеток через синтетический и премитотический периоды цикла. Основным механизмом определяющим особенности регенераторных процессов после индукции у животных при старении является замедление выхода клеток из периода покоя в митотический цикл. Последнее и определяет снижение величины пролиферативного ответа на индукцию регенераторных процессов.

Изучение возрастных особенностей динамики индуцированных регенераторных процессов в медленно обновляющемся органе (почках) позволило выявить торможение развития пролиферативного ответа. Это проявляется в более поздней стимуляции пролиферации у старых животных в почечном эпителии по сравнению со зрелыми. В оставшейся после односторонней нефрзктомии почке старых животных происходит задержка выхода клеток в митотический цикл, что приводит к смещению пика пролиферативного ответа на более поздние сроки. Вышедшие в пролиферацию клетки у старых животных более медленно проходят через премитотический период цикла. Кроме того, у старых животных наблюдается достоверное уменьшение числа клеток, формирующих пролиферативный ответ в почечном эпителии, соответственно увеличивается доля полиплоидных клеток.

Таким образом, проведенные исследования состояния пролиферативных процессов в тканях с различной скоростью клеточного обновления после их индукции позволяют сделать основной вывод - при старении организма механизмы, лежащие в основе торможения пролиферации в тканях при физиологической и репаративной (индуцированной) регенерации совершенно одинаковы. Появления каких либо новых способов регенерации или переключения одних способов на другие в проведенных экспериментах не обнаружено. В основе торможения пролиферативных процессов в тканях органов с высокой скоростью клеточного обновления лежит снижение активности процессов клеточного размножения, и этот способ остается основным при старении организма несмотря на индукцию регенераторных процессов в ткани. В органах с медленным клеточным обновлением, как и при физиологической регенерации, индукция регенераторных процессов при возрастной инволюции организма вызывает на фоне снижения уровня активности процессов клеточного деления усиление полиплоидизации клеток за счет стимуляции эндомитоза.

Полученные результаты экспериментальных исследований позволили подойти к изучению и анализу индуцированной регенерации с использованием клинической модели патологического процесса. Оказалось, что состояние регенераторных процессов при хроническом гепатите в печени зависит не только от степени его активности, но и от возраста больного. В свою очередь каждая выделенная возраст-

ная группа характеризуется особенным состоянием регенераторных процессов в органе. Развитие патологического процесса в печени при ХГ приводит к повреждению и гибели гепатоцитов паренхимы органа. Процессы повреждения в печени индуцируют регенерацию, причем активность последней в прямую зависит от степени повреждения ее ткани. Анализ регенераторных процессов у больных ХГ с умеренной активностью процесса, позволил определить их возрастные особенности.

В молодом возрасте стимуляция процессов клеточной регенерации осуществляется по пути выхода клеток в митоз и эндомитоз, прохождения ими периода синтеза ДНК, за счет чего в печени поддерживается популяция диплоидных одноядерных клеток и увеличивается доля полиплоидных гепатоцитов. При этом появляются гепатоциты с полиплоидными ядрами, не встречающимися в печени здоровых людей в этом возрастном периоде. Полиплоидные клетки отличаются большими размерами, большим объемом цитоплазмы, ядра, они более функционально активны (Кудрявцев Б.Н. и др., 1991, Урываева И.В., 1997, Цвиренко C.B. и др., 1994, Chamuleau R.A. е.а., 1988, Kudryavtsev B.N. е.а., 1993). Однако в молодом возрасте роль митоза в развитии компенсаторно-приспособительного процесса в поврежденной печени остается достаточно существенной и полиплоидизация менее выражена, чем в более старших возрастных группах.

В период старения (после 55 лет) в печени нарастают склеротические изменения ткани, отмечается атрофия органа, уменьшается число клеток и снижается масса органа. Значительно уменьшается число диплоидных клеток, возрастает число двуядерных и тетраплоидных гепатоцитов. Развитие в такой печени ХГ приводит к стимуляции регенерации. На фоне ослабления синтетических процессов происходит активация полиплоидизации гепатоцитов (таблица), преимущественно за счет

Таблица

Морфометрические показатели гепатоцитов в печени больных ХГ умеренной степени активности (М±м) ___

Возрастная группа (период) Плоидность клеток, (% соотношение) Площадь клетки (мкм2)

Ядро Цитоплазма

Зрелости 2п 82,4±2,58 4п 8,8±2,21 2п2п 7,8±0,79 4п4п 8п 3,5+0,90 8п8п 82,4 ±0,55 102,7± 1,93 81,7+0,32 128,7 +1,90 637.3 ±18,06 712,1 ±14,23 765,8 ±16,08 845.4 ±30,96

Старения 2п 65,8±3,18' 4п 15,0±3,38 2п2п 24,3±2,27* 4п4п 3,3+0,95* 8п 2,4±1,08 8п8п 82,3+0,55 102,8+2,99 80,8±1,08 105,1+1,96 133,5+2,07 643,7± 6,67 804,1+18,83' 813,5± 8,43* 819,2± 4,08 845,4+11,69

Примечание: * - при Р<0,05 между показателями сравниваемой и первой возрастной группы.

тетраплоидных (одноядерных и двуядерных), появляются октаплоидные клетки, что сопровождается уменьшением числа диплоидных гепатоцитов. Эти же тетраплоидные клетки характеризуются достоверно большими размерами, что является на клеточном уровне проявлением стимуляции процессов внутриклеточной регенерации.

Значительные возрастные отличия в состоянии пролиферативных процессов обнаружены и в коже больных атопическим дерматитом. В эпидермисе больных более старшего возраста активация пролиферативных процессов выражена менее значительно, чем в коже больных молодого возраста. Это проявляется снижением числа клеток пролиферативного пула, эпидермоцитов синтезирующих ДНК и находящихся в премитотическом периоде клеточного цикла. Обнаруженные изменения связаны с менее активным выходом клеток в митотический цикл. Не обнаружено различий в скорости синтеза клетками ДНК и прохождения ими синтетического периода цикла. В обеих изученных группах обнаружено достаточно продолжительное нахождение клеток эпидермиса в премитотическом периоде цикла, что позволяет говорить, учитывая отсутствие в этой ткани истинной полиплоидизации, о развитии в популяции эпидермоцитов при прохождении митотического цикла Сг-блока.

Таким образом, индукция регенераторных процессов как в использованных экспериментальных моделях, так и при развитии патологического процесса сопровождается изменением состояния пролиферации клеток тканей, которая связана с возрастными особенностями организма. Не обнаружено появления новых способов регенерации или переключения одних способов на другие. В органах с высокой скоростью клеточного обновления с возрастом отмечается ослабление процессов клеточного деления. В тканях органов с низкой скоростью обновления на фоне торможения процессов деления клеток происходит стимуляция эндомитоза, что проявляется увеличением популяции полиплоидных клеток.

Особое внимание исследователей, изучающих регенераторные процессы, в настоящее время привлекают механизмы регуляции осуществляющиеся на клеточном уровне. Анализ накопленных данных позволяет сделать вывод, что при всей важности и значении регуляторов более высоких уровней, их состояние определяется на уровне клетки и ее микроокружения. Наиболее изученной является роль микроокружения в регуляции пролиферативных процессов при экстремальных воздействиях на организм в костном мозге. Показано, что кроветворная функция в значительной степени определяется межклеточными взаимодействиями в костномозговой ткани, а также взаимодействиями гемопоэтических клеток-предшественников с ростковыми факторами их микроокружения (Бабаева А.Г., 1997, Гольдберг Е.Д. и др., 1997, Дыгай А.М. и др., 1989, Захаров Ю.М. и др., 1997, Кривохижина Л.В., 1997, Чертков И.Л. и др., 1984, Юшков Б.Г. и др., 1994, Ястребов А.П., 1988,1999, Gallagher J.T. е.а., 1983). Среди последних показана особая роль гликопротеиновых коньюгатов в формировании гемопоэзиндуцирующего микроокружения, а так же их место в перестройке кроветворения в условиях действия экстремальных факторов (Ястребов А.П. и др., 1988, Юшков Б.Г. и др. 1994).

Известно, что протеогликаны синтезируются в различных клетках. В костном мозге это прежде всего мегакариоциты, тромбоциты, полиморфноядерные

лейкоциты, фибробласгы (Юшков Б.Г. и др. 1994, Ястребов А.П., 1988, 1999, Minguell J., е.а., 1989, Trelstad R.L., 1985). Однако, рассматривая протеогликаны как регуляторный фактор, представляется маловероятным его образование в клетках, на которые этот регуляторный фактор должен оказать направленное действие. Логичнее ожидать участие других, негемопоэтических клеток в направленном изменении содержания протеогликанов в костном мозгу. Такую роль могут играть прежде всего тучные клетки, известные своими большими запасами протеогликанов в гранулах (Bloom С., 1974, Irani А. е а., 1994). Последние обладают по сравнению с другими клеточными популяциями значительной морфо-функциональной гетерогенностью, участвуют в обмене веществ с разнообразными биологическими свойствами (гликозаминогликанов, гистамина), имеют все признаки местного биологического регулятора, и тонко реагируют на изменения в тканях при экстремальных воздействиях (Линднер Д.П. и др., 1976, Проценко В.А. и др. 1987, Patella V. Е.а., 1995, Reed J.A. е.а., 1996, Schwartz L.B. е.а., 1994, Selye Н, 1965). Однако нет комплексных работ, показывающих роль тучных клеток в развитии регенераторного ответа, изменение их активности в поддержании концентрации биологически активных веществ в основном веществе микрорайона в различных тканях организма.

Все исследованные органы на основании ранее полученных данных были разделены на две группы. Основным критерием для разделения служила скорость процессов клеточного обновления в органе. При этом учитывали всю совокупность полученных признаков: митотическую активность, состояние синтетических процессов, величину пролиферативного пула, соотношение между основными составляющими последнего и т.д. При таком подходе в первую группу (органы с высокой скоростью клеточного обновления) вошли: красный костный мозг, тимус, лимфатический узел, эпителий слизистой желудка и тонкой кишки, а во вторую группу (органы с низкой скорость клеточного обновления): печень, почка, щитовидная железа и легкие.

Анализ полученных данных позволяет отметить несколько принципиальных моментов. Тучные клетки присутствуют во всех исследованных органах. Однако при анализе состава выделенных трупп можно заметить их неоднородность по уровню пролиферативных процессов. Так, в группу с преимущественной локализацией тучных клеток в капсуле вошли органы и с высокой и с низкой скоростью клеточного обновления. Более продуктивным оказался количественный анализ представительства тучных клеток в исследованных органах (рис.4).

Как видно из приведенной схемы прослеживается определенная закономерность: скорость процессов физиологической клеточной регенерации пропорциональна числу тучных клеток в органе. При этом последние, как правило, обнаруживаются около генеративных зон, где происходит наиболее активное клеточное размножение. В цитоплазме тучных клеток цитохимическим методом обнаружены вещества, идентифицированные как кислые ГАГ. При этом их концентрация в этих клетках значительно превышает содержание кГАГ во всех других изученных структурах. Проведенные в нашей лаборатории исследования показали роль кислых гликозаминогликанов в регуляции гемопоэза (Ястребов А.П. и др., 1988,1999, Юшков Б.Г. и др., 1994). Полученные нами данные свидетельствуют, что роль тучных клеток, по-видимому, не ограничивается только гемопоэтической

Рис. 4. Содержание тучных клеток в органах с различной скоростью клеточного обновления

тканью, а кислые гликозаминогликаны имеют значение в регуляции пролифератив-ных процессов для более широкого круга органов и тканей. При этом изменение концентрации кГАГ, в первую очередь, зависит от морфофункционального состояния популяции тучных клеток соответствующего органа.

Проверка этого положения осуществлялась в моделях с индукцией пролиферативных процессов в тканях различных органов. При этом было обнаружено, что содержание тучных клеток в генеративных зонах органов не коррелировало с подъемом пролиферативной активности ткани. Так, после кровопотери, увеличение числа тучных клеток происходило уже после прохождения основной волны индуцированного пролиферативного ответа (Рис.5). Подобные же результаты были получены после индукция регенераторных процессов в слизистой

Рис. 5. Изменение количества тучных клеток в миелоидной нсани

{ О тучны», клетжи а дегранулированные тучные клетки"}

желудка после ее повреждения салицилатами, после частичной гепатэктомии, резекции тонкой кишки. Более того, резкое торможение пролиферативных процессов в эпителии слизистой тонкой кишки при действии холода на организм сопровождалось значительным увеличением популяции тучных клеток в собственной пластинке слизистой около генеративной зоны органа - эпителия крипт. Увеличение числа тучных клеток в органах было обнаружено и на фоне инволюция тимуса после односторонней нефрэктомии, радиационного воздействия, действия холода, гипоксии на организм, при хронических диффузных заболеваниях печени.

Все эти установленные факты не позволяли впрямую связывать число тучных клеток и уровень состояния пролиферативных процессов в органе. Поэтому потребовалось провести дополнительные исследования с целью оценки динамики изменения морфофункционального состояния тучных клеток в процессе развития индуцированного регенераторного ответа. В качестве такой модели мы выбрали миелоидную ткань крыс после выполнения им кровопотери в объеме 2% от массы

тела. Концентрацию кГАГ (гепарина) и гистамина в клетках и межклеточном веществе оценивали с помощью комплекса ЛЮМАМ-ИЗ.

Оказалось, что на фоне индукции регенераторных процессов в миелоидной ткани происходит качественные и количественные изменения со стороны тучных клеток и основного межклеточного вещества костного мозга. В цитоплазме тучных клеток в ранние сроки происходит уменьшение содержания кГАГ и гистамина. Однако в межклеточном веществе микрорайона в это же время отмечается увеличение содержания только гистамина, а концентрация кГАГ несмотря на активный выброс гранул значительно снижается. Таким образом, активация дегрануляции тучных клеток не приводит к увеличению содержания протеогликанов во внеклеточном пространстве в ранние сроки после кровопотери. Более того, количество протеогликанов вне клеток, а также их общее содержание заметно снижается. По-видимому, одновременно с увеличением освобождения ГАГ, усиливается процесс их деградации. Наиболее вероятно, что это связано с активизацией лизосомального аппарата клеток костного мозга. Через 1 сутки после кровопотери наблюдается увеличение на 40,2% (Р<0,05) доли свободной активности кислой фосфатазы (Савельев Л.И., 1989), что отражает лабилизацию лизосомальных мембран и связанное с этим освобождение гидролитических ферментов. Последующая стабилизация лизосомальных мембран и снижение их проницаемости совпадает по времени с увеличением общего количества протеогликанов и числа тучных клеток в ткани и сопровождается снижением активности пролиферативных процессов в костном мозге. Возможность угнетения процессов клеточного деления с помощью кГАГ показана и в опытах, проведенных как in vivo так и in vitro (Голенко О.Д. и др., 1998, Cidre L., е.а.,1996, Flint N., е.а., 1994), хотя, одновременно, имеются работы с противоположным эффектом действия протеогликанов (Ронечевская Г.М. и др., 1985, Flint N., е.а., 1994). Одновременно, в ранние сроки после кровопотери в межклеточном веществе увеличивается концентрация гистамина: роль которого в пролиферации тканей в настоящее время показана в многочисленных экспериментальных моделях (Вайсфельд И.Л. и др., 1981, Денисов А.В., 1994, Проценко В.А. и др., 1987, Greaves M.W. е.а., 1996, Satoh Т. е.а., 1994). В более поздние сроки концентрация указанных веществ в тучных клетках восстанавливается до уровней контрольных значений, постепенно увеличивается число этих клеток. Одновременно с формированием пролиферативного ответа в миелоидной ткани обнаружено увеличение концентрации кГАГ в межклеточном компоненте микроокружения. Максимальное увеличение содержания кГАГ в клетках и межклеточном веществе приходится на снижение пролиферативной активности миелоидной ткани на кровопотерю. Таким образом, только такое комплексное исследование всех компонентов микрорайона миелоидной ткани позволило установить истинную роль тучных клеток - с помощью своих биологически активных веществ, содержащихся в гранулах они принимают участие в регуляции состояние пролиферативных процессов в тканях. Стимуляция пролиферации в ткани сопровождается усиленной дегрануляцией тучных клеток в межклеточное вещество. Однако, при этом, в последнем поддерживается высокий уровень содержания гистамина, а уровень кГАГ снижается. Именно на этом фоне и формируется основная волна индуцированного пролиферативного ответа. В более поздние сроки снижение активности пролиферации в ткани идет на фоне увеличения числа тучных клеток, их активной

дегрануляции, повышения концентрации в основном веществе кГАГ и снижения содержания гистамина. Использованная модель позволила сделать заключение о том, что увеличение числа тучных клеток связано с участием их в торможении пролиферативных процессов. Это дало основание иначе интерпретировать данные, полученные в ранее проведенных исследованиях. Более значительное число тучных клеток в органах с высоким уровнем пролиферативных процессов связано с их участием в сдерживании активности последних. Меньшая активность пролиферации в органах с низкой скоростью клеточного обновления требует менее выраженного представительства тучных клеток в органе. С этих же позиций становится понятным обнаруженное торможение пролиферативных процессов при накоплении тучных клеток в условиях инволюции тимуса, торможение репаративной регенерации тонкой кишки при действии холода на организм, отсутствие подъема числа тучных клеток в ранние сроки индукции пролиферативного ответа в эпителии тонкой кишки, накопление этих клеток при угнетении процессов клеточного деления в ткани печени больных с ее хроническими диффузными заболеваниями и т.д.

Становится логичной постановка вопроса о наличии особенностей морфо-фуикционапьного состояния тучных клеток при возрастной инволюции организма. Проведенные исследования показали, что на фоне ослабления активности пролиферативных процессов в миелоидной ткани старых крыс одновременно происходит увеличение количества в ней тучных клеток, увеличивается доля дегранулированных форм. Происходит относительное перераспределение в сторону клеток с меньшими размерами. Интересно отметить, что по данным полученным в лаборатории проф. Е.Д. Гольдберга, при старении в миелоидной ткани происходит изменение в соотношениях между процессами пролиферации и дифференцировки в различных ростках кроветворения, что сопровождается прогрессивным увеличением числа гранулоцитарных гемопоэтичесшх островков. При этом не обнаружено усиления эритропоэза, снижается выход эритроидных гемопоэтических островков (Гольдберг Е.Д., и др., 1998). Объяснение этого феномена вероятнее всего также связано с обнаруженным нами увеличением числа и функциональной активности ТК, которое приводит к накоплению в этих условиях в основном веществе гемопоэтической ткани кГАГ. А как показано в более ранних работах, проведенных в нашей лаборатории именно кислые ГАГ поддерживают гранулоцитопоэз (Ястребов А.П. и др., 1988, Юшков Б.Г. и др., 1994).

Подобные же изменения обнаружены и в тимусе крыс. При старении на фоне торможения пролиферативных процессов, замедления выхода клеток в митотический цикл, увеличения времени прохождения премитотического периода цикла наблюдается накопление тучных клеток в строме органа, с одновременным увеличением числа их дегранулированных форм. На фоне усиления процессов полиплоидизации гепатоцитов в печени у животных из старшей возрастной группы и торможения процессов клеточного деления в соединительной ткани ее портальных трактов увеличивается число тучных клеток, возрастает число дегранулированных форм. Клеточные размеры, а также содержание кГАГ в цитоплазме достоверно не изменяются. Стимуляция процессов клеточной регенерации в печени больных хроническим гепатитом из старшей возрастной группы осуществляется по пути выхода клеток в эндомитоз, в результате чего в печени увеличивается доля

полиплоидных клеток, а процессы клеточного деления тормозятся. Одновременно с этим в соединительной ткани портальных трактов пораженной печени больных из этой группы нарастает число тучных клеток и увеличивается их функциональная активность. Такая же закономерность обнаружена в коже больных атопическим дерматитом из разных возрастных групп.

Таким образом, полученные данные с полным основанием позволяют нам выделить тучные клетки как самостоятельный элемент общей системы регуляции клеточного деления, участвующий в условиях развития возрастной инволюции органов в торможении пролиферации через поддержание определенного соотношения концентрации кГАГ и гистамина в ткани.

Не менее интересным представлялся нам вопрос о роли лимфоидных клеток в регуляции пролиферативных процессов в условиях возрастной инволюции организма, так как их участив в процессах регенерации считается доказанным (Бабаева А. Г. и др., 1997, Донцов В.И., 1990, Труфакин В.А. и др., 1991, Ястребов А.П. и др., 1978, 1988).

При морфометрическом исследовании тканей старых животных было обнаружено усиление их инфильтрации по сравнению с органами более молодых животных. Иммуногистохимическое изучение фенотипа лимфоцитов, участвующих в образовании инфильтратов в коже больных атопическим дерматитом и в печени больных с хроническим гепатитом позволило нам идентифицировать их как Т-клетки (экспрессирующие CD45+, CD45RO+, CD3+, CD45RA-, CD20-.CD8-).

В настоящее время установлено, что основная роль в регуляции пролиферативных процессов и проявлении морфогенетических свойств принадлежит именно Т-лимфоцитам, а среди последних - Т-хелперам (Бляхер М.С. и др., 1996). В тоже время имеются данные, что в результате старения организма в нем снижается как общее число Т-лимфоцитов, так и клеток, относящихся к указанной популяции (Flaherty D. е.а., 1997, Proust J. е.а., 1996), а также значительно изменяются их свойства (Engwerda С. е.а., 1996, Proust J. е.а.,1996, Haynes L. е.а., 1997). В этой связи существенный интерес представляло изучение изменений морфогенетических свойств этих лимфоцитов у животных в процессе их старения. Последние изучали с использованием клеток селезенки нефрэкгомированных животных из разных возрастных групп в системе «адоптивного переноса» (Бабаева А.Г., 1997).

При трансплантации спленоцитов, полученных от старых доноров старым реципиентам не обнаружено стимуляции пролиферативных процессов в эпителии канальцев почек последних (Рис. 6). Подобные изменения в системе адоптивного переноса могут происходить как за счет изменения морфогенетических свойств лимфоидных клеток, так и за счет изменения пролиферативных потенций клеток почечного эпителия (или за счет наличия обеих причин одновременно). Однако перенос этих же спленоцитов зрелым донорам сопровождается проявлением их морфогенетической функции. При этом активность пролиферативных процессов в . почках реципиентов оказалась выражена не меньше чем в контрольной группе. Трансплантация спленоцитов от зрелых доноров старым реципиентам также приводит к проявлению морфогенетических свойств лимфоидных клеток. Однако уровень активности пролиферативных процессов в почках реципиентов оказалась значительно ниже, чем в контрольной группе. Анализ результатов проведенных

Рис. б. Проявление морфогенетических свойств лимфондных клеток п модели адоптивного перенося (рсинпиентский интервал 48 час.)

исследований позволяет сделать основной вывод - при старении организма снижение уровня пролиферативных процессов не связано с ослаблением морфогенетических свойств пимфоидных клеток, так как последние в полной мере проявляются в организме молодых животных, хотя значительно снижены у старых. Однако при старении в организме подвергаются выраженному уменьшению пролиферативные потенции тканей, что проявляется в торможении реализации морфогенетических свойств лимфоцитов зрелых животных непосредственно в паренхиме (одноименного с удаленным) органа у старых животных. Мы считаем, что один из возможных механизмов такого торможения может быть связан с ролью тучных клеток в изменении свойств основного вещества микрорайона при возрастной инволюции организма. Несмотря на то, что тучные клетки являются источником синтеза и секреции значительного числа активных веществ с часто разнонаправленным физиологическим действием (Дедух Н.В. и др., 1995, Попов Г.К. и др., 1997, Проценко В.А. и др., 1987, Ястребов А.П. и др., 1997, Burd Р. е.а., 1995, Greaves М. е.а., 1996, Nechushtan Н.е.а., 1996, Reed J. е.а., 1996), именно выделение ими кГАГ после дегрануляции может играть одну из основных ролей в определении клеточного ответа на многочисленные факторы контроля за состоянием уровня пролиферации. Именно кГАГ и их коньюгаты с белками являются основным компонентом внеклеточного матрикса костного мозга, участвуют в межклеточных взаимодействиях со стволовыми клетками и клетками-предшественниками, определяя их адгезию, миграцию, пролиферацию, дифференцировку (Бычков С.М. и др., 1996, Харченко М.Ф. и др.,1996), в тоже время могут функционировать как медиатор, взаимодействуют с элементами стромы, благодаря своим анионным свойствам, со многими факторами роста и цитокинами, обладающими высокой афинностью к ГАГ или их белковой части. Только после предварительного взаимодействия с гепарансульфатом плазматической мембраны клеток или гепарансульфатом - протеогликаном внеклеточного матрикса основной фактор роста

фибробластов способен связываться с высокоафинным рецептором и обеспечивать митогенный ответ эффекторных клеток (Голенко О.Д. и др., 1998). Синтетические поликатионы после взаимодействия с гепарином способны изменять вторичную структуру молекулы ДНК, что влияет на активность процессов репликации, транскрипции и трансляции. Интенсивность синтеза ДНК при этом может изменяться в несколько раз (Махсудова Г.Т. и др.,1994).

Не менее важным является вопрос о возможности коррекции обнаруженных нарушений состояния пролиферативных процессов в тканях органов при возрастной инволюции. С этой целью использовались, препараты оказывающие общепризнанное геропротекгорное действие (мелатонин, сгугерон); избирательно действующие на тучные клетки через подавление процесса их дегрануляции (кетотифен) и на процессы дифференцировки Т-лимфоцитов (тимоген).

При физиологическом старении организма происходит умеренная активация свободнорадикального окисления липидов в системе крови (Пименов Ю.С., 1993, Гладилов В.В., 1996), что сопровождается, как было показано выше, снижением общей пролиферативной активности клеток костного мозга. Мелатонин является корректором свободнорадикального окисления липидов в тканях. Показано (Мещанинов В.Н., 1999), что его применение у животных в ранние сроки ингибирует свободнорадикальное окисление липидов в системе крови.

Установлено, что применение мелатонина приводит к изменению состояния пролиферативных процессов в костном мозге животных из обеих возрастных групп. Однако его действие проявляется в значительно большей степени у старых животных. Так, при изучении процессов физиологической регенерации показано, что введение препарата приводит к увеличению числа синтезирующих ДНК и пролифера-тивного пула среди миелокариоцитов. Это происходит за счет ускорения выхода клеток в митотический цикл. У зрелых животных применение мелатонина не приводит к достоверному изменению состояния пролиферативных процессов в костном мозге. Обнаруженные изменения временных параметров митотического цикла носят фазовый характер и не сопровождаются соответствующими перестройками структуры и величины пролиферативного пула. Необходимо отметить, что применение мелатонина поднимает уровень пролиферативных процессов до его значений у зрелых животных контрольной группы.

При индукции регенераторных процессов в костном мозгу при помощи кровопотери ранее были обнаружены значительные отличия в реакциях гемопоэтической ткани у животных из разных возрастных групп. У старых мышей величина пролиферативного ответа на кровопотерю оказалась достоверно ниже, по сравнению со зрелыми. В формировании волны пролиферации участвовало меньшее число клеток миелоидной ткани. При этом не обнаружено достоверного изменения в скорости, прохождения клеток через синтетический и премитотический периоды цикла. Основной особенностью регенераторных процессов после их индукции в костном мозгу, возникающей у животных при их старении является замедление перехода клеток из периода покоя в митотический цикл. Этот механизм и определяет снижение величины пролиферативного ответа на индукцию регенераторных процессов в гемопоэтической ткани у старых животных. Применение мелатонина принципиально изменило состояние процессов индуцированной регенерации в обеих изученных группах. Применение используемого препарата у

старых животных при индукции регенерации сопровождается стимуляцией пролиферативных процессов в костном мозгу в значительно большей степени, чем при простой кровопотере. При этом во все исследованные сроки не только увеличивается число клеток синтезирующих ДНК, но и нарастает величина пролиферативного пула клеток. Причем значения этих показателей достигают уровней в соответствующих группах у зрелых животных.

Применение мелатонина может вызывать значительные изменения в состоянии пролиферативных процессов и в ткани печени. При этом в обеих исследованных возрастных группах наблюдается уменьшение доли полиплоидных клеток. Учитывая одновременное уменьшение числа клеток синтезирующих ДНК можно сделать однозначный вывод - в печени происходит переход гепатоцитов из классов высокой плоидности в диплоидную популяцию клеток. Обнаруженные перестройки в печеночной ткани количественно более выражены в группе старых животных и осуществляются на фоне увеличения в портальных трактах числа тучных клеток. Полученные изменения при применении мелатонина носят временный характер и проявляются непродолжительное время. Уже к пятым суткам действия препарата отмечается возврат изученных показателей к уровням контрольных значений. В печени старых животных этот процесс проявляется в большей степени, чем у зрелых.

В тоже время при применении мелатонина не было обнаружено достоверных изменений в состоянии пролиферативных процессов в тимусе старых животных.

Показана принципиальная возможность изменять состояние пролиферативных процессов в тканях при возрастной инволюции с помощью других использованных препаратов. Так, при применении стугерона было обнаружено, что введение препарата также приводит к увеличению числа синтезирующих ДНК клеток и пролиферативного пула среди миелокариоцитов. Это происходит за счет ускорения выхода клеток в митотический цикл. Обнаруженные изменения временных параметров митотического цикла носят фазовый характер и не сопровождаются соответствующими перестройками структуры и величины пролиферативного пула.

Использование в группе старых животных тимогена и задитена не привело к изменению состояния пролиферативных процессов в миелоидной ткани у старых животных. При этом в костном мозге достоверно увеличивается число тучных клеток, однако одновременно уменьшается число дегранулированных форм, что говорит о снижении их морфо-функциональной активности.

Не удалось оказать существенного влияния на состояние возрастной инволюции тимуса и ее основу - торможение пролиферативных процессов в лимфоидной ткани. Использованные препараты (мелатонин, стугерон, задитен) не оказывают действия на изучаемые процессы, а применение тимогена приводит к еще большему подавлению процессов клеточного деления.

В органе с двумя способами пролиферации (печени) во всех случаях не обнаружено существенного изменения состояния процессов клеточного деления. В тоже время при применении задитена и тимогена выявлено изменение соотношения между гепатоцитами разных классов плоидности в сторону снижения числа полиплоидных клеток, что характерно для животных более молодого возраста.

Результаты собственных исследований и анализ литературных данных позволил нам предложить схему, демонстрирующую особенности состояния пролиферативных процессов при возрастной инволюции организма (рис.7).

Рис.7. Изменения пролиферативных процессов при возрастной инволюции организма

ВЫВОДЫ:

1. Активность процессов физиологической и репаративной регенерации тканей изменяется при возрастной инволюции организма. При старении в тканях всех изученных органов (костный мозг, тимус, лимфатический узел, тонкая кишка, печень, почки, щитовидная железа, легкие) снижается активность пролиферативных процессов, обеспечиваемых делением клеток митозом. При наличии еще одного способа клеточной регенерации в ткани - зндомитоза при старении обнаружена стимуляция последнего, что сопровождается усилением процессов полип-лоидизации клеток.

2. Торможение процессов клеточного деления в тканях при возрастной инволюции связано с замедлением вступления клеток в митотический цикл и не сопровождается изменением скорости прохождения синтетического периода. В органах, пролиферация в которых осуществляется и эндомитозом при старении организма обнаружена задержка клеток в премитотическом периоде, что сопровождается развитием полиплоидизации их ядер.

3. При экстремальных воздействиях в тканях органов с высокой скоростью клеточного обновления у старых животных сохраняются пролиферативные потенции, выявляемые после индукции регенераторных процессов. При этом основные показатели, характеризующие состояние пролиферативных процессов (величина пролиферативного пула клеток, распределение клеток по периодам митотического цикла, временные параметры последнего, митотическая активность) приближаются к уровню показателей зрелых (интактных) животных. Вместе с тем, в этих условиях, не обнаружено стимуляции пролиферативных процессов в лимфоидной ткани тимуса.

При воздействии экстремальных факторов у старых животных в тканях медленно обновляющихся органов происходит подавление процессов клеточного деления и одновременно стимулируется полиплоидизация клеток. Однако, если у зрелых животных в поздние сроки действия экстремального фактора отмечается восстановление активности процессов клеточного деления, то у старых животных стимуляция пролиферации реализуется только через активацию полиплоидизации клеток.

4. Тучные клетки являются одним из основных источников поступления в межклеточное вещество тканей кислых протеогликанов и гистамина. Они располагаются непосредственно у генеративных зон органов. Обнаружена прямая связь между количеством тучных клеток в ткани и активностью процессов физиологической регенерации в органе.

5. При индукции регенераторных процессов в ткани на ранних этапах увеличивается ее инфильтрация лимфоидными клетками, происходит дегрануляция тучных клеток, в основном веществе ткани концентрация гистамина возрастает, а кГАГ уменьшается. На фоне снижения активности пролиферативных процессов в

органе ослабевает инфильтрация лимфоцитами ткани, увеличивается число тучных клеток, возрастает концентрация кГАГ, а гистамина - снижается.

Активность процессов клеточного деления в эпидермисе кожи при атопическом дерматите и в ткани печени у больных хроническим гепатитом в условиях возрастной инволюции снижается. Однако, если в коже больных из старшей возрастной группы обнаружено только снижение активности процессов клеточного деления, то в печени одновременно наблюдается стимуляция полиплоидизации гепатоцитов. В дерме кожи и портальных трактах печени больных из старшей возрастной группы обнаружено увеличение числа тучных клеток, активация их дегрануляции, увеличение инфильтрации ткани лимфоидными клетками, относящихся к субпопуляции Т-лимфоцитов, экспрессирующих сЬ45+, С045И0+, С03+.

6. При возрастной инволюции организма происходит значительное увеличение представительства тучных клеток и лимфоцитов в органах на фоне снижения активности процессов клеточного деления. При этом функциональная активность тучных клеток возрастает, а морфогенетическая функция лимфоидных клеток достоверно не изменяется. В тоже время при старении происходит торможение реализации морфогенетических свойств лимфоцитов в тканях.

7. Введение мелатонина старым животным вызывает стимуляцию пролиферативных процессов в тканях. После индукции регенерации введение препарата сопровождается стимуляцией пролиферативных процессов в костном мозгу в значительно большей степени, чем только после кровопотери. При этом во все исследованные сроки увеличивается число клеток синтезирующих ДНК, нарастает величина пролиферативного пула клеток.

Применение мелатонина вызывает значительные изменения в состоянии пролиферативных процессов и в ткани печени. При этом в обеих исследованных возрастных группах наблюдается уменьшение доли полиплоидных клеток.

8. Увеличение, числа тучных клеток и торможение их дегрануляции при применении задитена (кетотифена) не сопровождается изменением активности пролиферативных процессов в тканях органов у старых животных, имеющих только один способ регенерации. Использование стугерона у старых животных приводит к стимуляции пролиферативных процессов в миелоидной ткани. В печени при применении этих препаратов на фоне уменьшения числа тучных клеток в портальных трактах происходит перераспределение классов плоидности гепатоцитов: снижается число полиплоидных и отмечается рост популяции диплоидных клеток.

При действии тимогена на организм животных из старшей возрастной группы не обнаружено достоверного изменения активности пролиферативных процессов в миелоидной ткани. Применение тимогена у таких животных сопровождается снижением синтетической активности клеток в лимфоидной ткани тимуса и ткани печени.

СПИСОК ОСНОВНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Изменение морфофункциональных характеристик лимфоидной ткани в процессе компенсаторной гипертрофии почки// Системные и клеточные механизмы адаптации организма к действию повреждающих факторов: Сб. научн. трудов. Челябинск, 1991.С.105.

2. Structural and metabolic changes in tissues of different types in cold adaptation//Constituent Congress of International Society for Pathophysiology. Abstracts. Moscow, 1991. P.263. (In collaboration: S.V.Tsvirenko, L.I.Savelyev, S.Y.Medvedeva).

3. Использование цитофлуориметрического метода в изучении пролифератив-ных процессов//Люминесцентный анализ в медицине и биологии и его аппаратурное обеспечение:Тез.докл. Всесоюзного совещания. Москва, 1992. С. 134.

4. Treatment of hypotrophy of chicken's with peptide bioregulators//5 th European Congress of vet. Pathophysiologists. Budapest, 1993. P. 234 . In collaboration: N.V. Sadovnikov.

5. Состояние регенераторных процессов при заболеваниях печени//30 лет Центральной научно-исследовательской лаборатории УГМИ: Тез. докл. научн.конф. Екатеринбург, 1994. С. 47-48. Соавторы: Н.А. Серов, Э.А. Максимова.

6. Structural and functional characteristics of polymorphonuclear leukocytes in atopic dermatitis//Atopic dermatitis in children: International conference. Abstracts. Ekaterinburg, 1994. P. 87-88. In collaboration: S.D. Popova, A.A. Menshikov, S.U. Medvedeva.

7. Tumor Marker Measurement and DNA Analysis of Blood from the Children from the EURT (East Ural Radiation Trace) //J. Analytical and Quantitative Cytology and Histology. 1994. Vol.16, N. 1. P. 72. In collaboration: O. Sedelnikova, S. Kazantseva, N. Isthenko.

8. Effect of the Synthetic Peptid of the Thymus on the Lymphoid Organs//! Analytical and Quantitative Cytology and Histology. 1994. Vol. 16, N 1. P. 68. In collaboration: N. Sadovnikov.

9. Динамика изменения популяции тучных клеток в слизистой оболочке тонкой кишки при холодовом воздействии на организм//30 лет Центральной научно-исследовательской лаборатории УГМИ:Тез. докл. научн.конф. Екатеринбург, 1994. С. 100-101. Соавторы: С.Ю. Медведева, А.П. Ястребов.

10. DNA Cytometry of Cholecystis Epithelial Cells in Normality and Pathology//! Analytical and Quantitative Cytology and Histology. 1994. Vol. 16, N 1. P. 69. In collaboration: M. Gruzdev.

11. Морфофункциональная гетерогенность популяции тучных клеток// 30 лет Центральной научно-исследовательской лаборатории:Тез.докл.научн.конф. Екатеринбург, 1994. С. 109-110.

12. Состояние регенераторных процессов в печени в условиях воздействия на организм экстремальных факторов//30 лет Центральной научно-исследова -тельской лаборатории УГМИ: Тез.докл.научн.конф. Екатеринбург, 1994. С.

116-117. Соавторы: C.B. Цвиренко, С.Ю. Медведева.

.13. Участие тучных клеток в регуляции регенераторных процессов в тканях// 30 лет Центральной научно-исследовательской Лаборатории УГМИ: Тез.докп.научн.конф. Екатеринбург, 1994. С. 125-126. Соавторы: А.П. Ястребов, Б. Г. Юшков.

14. Изменения в органах лимфоидной и пищеварительной систем при радиационном воздействии на организм на фоне использования препаратов растительного происхождения/ Радиационный фактор и здоровье человека на Урале; Сб.научн.трудов. Екатеринбург: Изд-во УГМИ. 1995. С. 129-138. Соавторы: С.Ю.Медведева, И.Е.Вапамина, Л.П.Ларионов.

15. Изменение состояния регенераторных процессов и содержания гликозамино-гликанов в ткани печени при экстремальных воздействиях на организм/ Радиационный фактор и здоровье человека , на Урале. Сб.научнтрудов. Екатеринбург: Изд-во УШИ. 1995. С. 158-172. Соавторы: С.В.Цвиренко, А.П.Ястребов.

16. Изменения тучно-клеточной популяции органов с различной радиочувствительностью при радиационном воздействии на организм/ Радиационный фактор и здоровье человека на Урале. Сб. научн.трудов. Екатеринбург: Изд-во УГМИ. 1995. С. 138-147.

17. Реакция тучных клеток органов с различной радиочувствительностью на радиационное воздействие на организм // Радиационная безопасность и защита населения: Тез.докл.международной научно-практической конференции. Екатеринбург Изд-во УГМИ. 1995. С. 26-29.

18. ДНК-цитометрический профиль клеток опухоли в поздние стадии рака молочной железы//Аюгуальные вопросы современной медицинской науки и здравоохранения: Тез.докл.научн.конф. Екатеринбург: Изд-во УГМИ. 1995. С.71-72. Соавторы: С.М.Демидов, А.А.Казанцев.

19. Проточная ДНК-цитометрия узловых образований и опухолей щитовидной железы //Актуальные вопросы современной медицинской науки и здравоохранения: Тез.докл.научн.конф. Екатеринбург Изд-во УГМИ. 1995. С. 145-146. Соавтор: MA Морозов.

20. Тучные клетки в тканях органов лабораторных белых крыс//Акгуальные вопросы современной медицинской науки и здравоохранения: Тез.докл.научн.конф. Екатеринбург: Изд-во УШИ. 1995. С.194-196.

21. Особенности развития клеточной регенерации в печени//Актуальные вопросы современной медицинской науки и здравоохранения: Тез.докл.научн.конф. Екатеринбург: Изд-во УШИ. 1995. С. 241.

22. Некоторые особенности структурной организации и функциональная гетерогенность кроветворной ткани//Вестник Уральской государственной медицинской академии. Екатеринбург. 1995. Вып.1. С.30-33. Соавтор: Б.Г.Юшков

23. Роль тучных клеток в регуляции процессов физиологической клеточной регенерации//Вестник Уральской государственной медицинской академии. Екатеринбург. 1995. Вып.1. С.42-48. Соавтор: А.П.Ястребов

24. Морфо-функциональные критерии дифференциальной диагностики хронических гепатитов и компенсированных циррозов печени//Вестник Уральской

государственной медицинской академии. Екатеринбург. 1995. Вып.1. С. 183185. Соавторы: НА Серов, Э.А. Максимова, И.К.Бродская, И.Е.Валамина.

25. Изучение регенераторных процессов у больных циррозом печени// Всероссийский журнал гастроэнерологии, гелатологии. Приложение 1. Материалы I Российской гастро-энтерологической недели. 1995. N 3, Т.5. С. 214. Соавтор: Н.А. Серов,

26. Состояние пролиферативных процессов и тучные клетки при опухолевой трансформации ткани молочной и щитовидной желез// Вопросы онкологической помощи на этапе реформирования здравоохранения: Тез.докл.научн.конф. Екатеринбург. 1996. С. 82-83.

27. Проточная ДНК-цитометрия при опухолевых заболеваниях молочной железы// Вопросы онкологической помощи на этапе реформирования здравоохранения: Тез.докл.научн.конф. Екатеринбург. 1996. С. 69-70. Соавторы: С.М.Демидов, ААКазанцев, С.А.Берзин.

28. Возможности проточной ДНК-цитометрии в диагностике узловых образований и опухолей щитовидной железыII Вопросы онкологической помощи на этапе реформирования здравоохранения: Тез.докл.научн.конф. Екатеринбург. 1996. С. 57-58. Соавторы: М.А.Морозов, В.М.Васьков.

29. SFIT-метод анализа ДНК-гисгограмм при изучении активности пролиферации миелоидных клеток// Актуальные вопросы современной медицинской науки и здравоохранения: Тез.докл.научн.конф. Екатеринбург Изд-во УГМА. 1996.

С. 193-194. Соавтор: О.М.Смоленкова.

30. Особенности пролиферативных процессов в узловых образованиях щитовидной железы //Актуальные вопросы современной медицинской науки и здравоохранения: Тез.докл.научн.конф. Екатеринбург: Изд-во УГМА. 1996. С. 140-141. Соавтор: М.А. Морозов.

31. Особенности регенераторных процессов и распределения гликозамино-гликанов в ткани печени// Актуальные вопросы современной медицинской науки и здравоохранения: Тез.докл.научн.конф. Екатеринбург: Изд-во УГМА. 1996. С.226-227.

32. Иммунофенотипическая характеристика гемобластозов детского возраста// ill Всероссийский съезд гематологов и трансфузиологов: Тез.докл. Ленинград. 1996. С. Соавторы:Т.Ю.Азовская,Л.Г.Фечина,Р.И. Хаитов

33. Влияние СОг-экстракта хвои пихты сибирской на состояние регенераторных процессов в слизистой желудка// В сб.: Прикладные аспекты морфогенеза и регенерации в онтогенезе и эксперименте. Екатеринбург, Изд-во УГМА, 1996. С. 116-121. Соавторы: С.А. Чемезов, С.Ю.Медведева, Л.П. Ларионов.

34. Состояние регенераторных процессов в печени больных хроническим активным гепатитом // В сб,: Прикладные аспекты морфогенеза и регенерации в онтогенезе и эксперименте. Екатеринбург, Изд-во УГМА, 1996. С. 86-90. Соавторы: Н А. Серов, О.В.Рявкина, Н.Б.Крохина, АП.Ястребов.

35. Возрастные особенности регенераторных процессов в медленно обновляющихся органах// Тез.докл.научн.конф.: Актуальные вопросы медицины. Екатеринбург, Изд-во УГМА 1996. С. 34-35. Соавторы: О.В.Костромина, М.В.Северин, АП.Ястребов.

36. Возрастные особенности регенераторных процессов в печени больных хроническим активным гепатитом//Весгник Уральской государственной медицинской академии. Вып.З. Екатеринбург, Изд-во УГМА. 1997; С. 20-24. Соавторы: НАСеров, А.П.Ястребов.

37. Реакция тучных клеток красного костного мозга на кроволотерю//Гез.докл.52 научнконф.: Актуальные вопросы современной медицинской науки и здравоохранения. Екатеринбург, Изд-во УГМА. 1997. С.239-240.

38. Регенераторные процессы в печени больных хроническим активным гепатитом в период старения организма// В сб. под ред. А.П.Яетребова,

B.С.Мякотньос Актуальные проблемы геронтологии и гериатрии. Екатеринбург, Изд-во УГМА. 1997. С. 120-122. Соавторы: НАСеров, Н.Б.Крохина

39. Возрастные особенности регенераторных процессов в фасном костном мозгу// В сб. под ред. А.П.Ястребова, В.С.Мякотных: Актуальные проблемы геронтологии и гериатрии. Екатеринбург, Изд-во УГМА. 1997. С. 123-124 Соавторы: А.П.Ястребов, В.Н.Мещанинов

40. Возрастные особенности развития компенсаторной гипертрофии почки// В сб. под ред. А.П.Ястребова, В.С.Мякотных Актуальные проблемы геронтологии и гериатрии. Екатеринбург, Изд-во УГМА. 1997. С. 159-160. Соавторы: А. П.Ястребов.

41. Особенности регенераторных процессов в органах с низкой скоростью клеточного обновления при старении организма// Цитология. 1997, Т.39, N 6.

C. 508-509. Соавтор: А.П.Ястребов

42. Возрастные особенности состояния пролиферативных процессов в миелои-дной ткани/ / В сб.: Вопросы экспериментальной физиологии. М.-Екатеринбург, Изд-во Уро РАН, 1997. С. 158-163. Соавтор: А.П.Ястребов.

43. Морфометрический анализ регенераторных процессов при хроническом активном гепатите (ХАГ) у больных разных возрастных групп//Успехи теоретической и клинической медицины. М.:РМА, 1997. N 2. С. 32-33. Соавтор: А.П.Ястребов

44. Морфометрический анализ регенераторных процессов в медленно обновляющихся органах ' при старении организма// Успехи теоретической и клинической медицины. М.:РМА, 1997. N 2. С.ЗЗ, Соавтор: А.П.Ястребов

45. Тучные клетки, протеогликаны и индуцированный гемопоэз// Вестник Уральской государственной медицинской академии. Вып.5. Екатеринбург Изд-во УГМА. 1997. С. 28-33. Соавторы: С.В.Цвиренда, А.П.Ястребов.

46. Роль свободнорадикального окисления липидов системы крови в механизмах возрастной инволюции в условиях воздействия на организм экстремальных факторов и полиорганной патологии//Вестник Уральской государственной медицинской академии. Вып.5. Екатеринбург Изд-во УГМА. 1997. С. 21-26. Соавторы: В.Н.Мещанинов, Береснева О.Ю., С.В.Костюкова.

47. Влияние противовирусной терапии на морфо-функциональное состояние печени у' больных хроническим активным гепатитом//Вестник Уральской государственной медицинской академии. Вып.5. Екатеринбург Изд-во УГМА. 1997. С. 131-133. Соавторы: Н.Б.Крохина, НАСеров, Т.Н.Постникова.

48. Особенности распределения гепатоцитов по классам плоидности в печени у старых животных// Тез. докл. научн.конф. Актуальные вопросы современной медицинской науки и здравоохранения. Екатеринбург, Изд-во УГМА, 1998. С.19. Соавтор: О.В.Костромина

49. Возможности иммуногисгохимической диагностики опухолей у детей// В сб. научн. тр.: Актуальные вопросы педиатрии и хирургии детского возраста, анестезиологии и реаниматологии. Екатеринбург, Изд-во УрГУ. 1998. С.208-212.

50. Особенности клеточного инфильтрата в дерме кожи больных с различными типами течения атопического дерматита// Вестник Уральской государственной медицинской академии. Вып.7. Екатеринбург: Изд-во УГМА.

1998. С. 22-30. Соавторы: Н.В.Кунгуров, М.М.Кохан

51. Возрастные Особенности морфогенетической функции лимфоцитов// Вестник Уральской государственной медицинской академии. Вып.7. Екатеринбург Изд-во УГМА. 1998. С. 115-117. Соавторы: А.П.Ястребов

52. Особенности морфофункционального состояния тучных клеток при узловых формах эндемического зоба/Тез.докл. 54 научн.конф.: Актуальные вопросы современной медицинской науки и здравоохранения. Екатеринбург 1999. С.314. Соавтор: М.А.Морозов.

53. Возрастные особенности влияния мелатонина на состояние пролифератив-ных процессов в миелоидной ткани/ Тез.докл. 54 научн.конф.: Актуальные вопросы современной медицинской науки и здравоохранения. Екатеринбург:

1999. С.314.

54. Роль тучных клеток в регуляции регенерации тканей в условиях возрастной инволюции// В сб.: Общая и клиническая патофизиология (Материалы юбилейных Пашутинских чтений. Клиническая медицина, реабилитация и патофизиология. 10-12 февраля 1999 года). СПб, Изд. НПЦ Технотроф, 1999. С.113-120. Соавтор: А.П.Ястребов

55. Роль тучных клеток в регуляции пролиферативных процессов в миелоидной ткани при возрастной инволюции/ В кн.: Очерки экспериментальной патофизиологии. Под ред. А.П.Ястребова. Екатеринбург, УГМА. 1999. С. 342351. Соавтор: А.П.Ястребов

56. Возрастные особенности состояния регенераторных процессов в тканях/ В кн.: Очерки экспериментальной патофизиологии. Под ред. А.П.Ястребова. Екатеринбург, УГМА. 1999. С. 352-364 .