Автореферат и диссертация по медицине (14.03.06) на тему:Особенности иммунного статуса и иммунобиологических реакций при применении антиоксидантов (экспериментальное исследование)

На правах рукописи

БУБИНЕЦ 4848854

Ольга Владимировна

ОСОБЕННОСТИ ИММУННОГО СТАТУСА И ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКИХ РЕАКЦИЙ ПРИ ПРИМЕНЕНИИ АНТИОКСИДАНТОВ (ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ)

14.03.06 — фармакология, клиническая фармакология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

2 11 ЮН 2011

Владивосток 2011

4848854

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Амурская государственная медицинская академия Министерства здравоохранения и социального развития России»

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор Доровских Владимир Анатольевич Официальные оппоненты:

Доктор медицинских наук, профессор кафедры общей и клинической фармакологии ФПК и ППС Елисеева Екатерина Валерьевна, Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Владивостокский государственный медицинский университет Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации»

Доктор медицинских наук, профессор Гвозденко Татьяна Александровна, Владивостокский филиал учреждения РАМН, Дальневосточный научный центр физиологии и патологии дыхания сибирского отделения РАМН «Научно-исследовательский институт медицинской климатологии и восстановительного лечения»

Ведущая организация: Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Читинская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации

Зашита состоится « ¿¿¿^¿-(--Р2011 г. власов на заседании диссертационного совета ДМ 208.007.03 при ГОУ ВПО «Владивостокский государственный медицинский университет Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации» по адресу: 690002, г. Владивосток, ГСП, проспект Острякова, 2 (главный корпус)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО «Владивостокский государственный медицинский университет Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации»

Автореферат разослан «

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования

Одной из актуальных задач медико-биологических исследований является создание новых лекарственных препаратов с выраженными антиоксидантными свойствами.

По современным представлениям молекулярный кислород инициирует развитие многих патологических состояний и острых заболеваний организма (Беляков H.A., 2005, Журавлёв А.И., 2008). Свободные радикалы мгновенно вступают в реакцию с белками, нуклеиновыми кислотами, липидами, разрушая клеточные структуры и способствуя образованию продуктов свободнорадикального окисления высокотоксичных соединений, которые обладают мутагенными свойствами (Жердев В.П.,2003; Calfee-Mason K.G., 2008).

Антиоксиданты способны связывать и нейтрализовать повреждающее действие свободных радикалов, образующихся при воздействии ионизирующего облучения (Власов А.П.., 2010; Симонян А.В..,2008;), тем самым повышать устойчивость к воздействию радиации и других вредных факторов внешней среды; усиливать иммунитет (Аклеев A.B., 2007), нормализовать функции сердечно-сосудистой и нервной систем (Зиятдинова Г.К., 2005;), обладают антиканцирогенным действием (Зорькина A.B., 2007).

Воспаление лежит в основе многих заболеваний и сопровождается комплексом системных сдвигов, известных как острофазовый ответ. Одним из таких ответов является активация процессов перекисного окисления липидов. Продукты перекисного окисления липидов повреждают клеточные структуры, органы и ткани (Saxena R.,2010). При избыточной активации эндогенных механизмов образования активных форм кислорода (воспалительные, онкологические заболевания и т.д.) интенсивность окислительных реакций в организме повышается (Громов М.И., 2006; Wanq Q, 2011). В этих условиях организму нужна помощь — применение антиоксидантов.

В динамике развития бактериальных инфекций и интоксикаций вслед за инициирующим воздействием специфических патогенных факторов инфекции, как правило, возникают неспецифические функциональные и метаболические расстройства, определяющие тяжесть течения и исход заболевания. В условиях циркуляторной гипоксии активируется свободнорадикальное окисление липидов, дестабилизирующее биологические мембраны. В связи с этим становится очевидной возможность ингибирования цитопатогенных эффектов токсических и ферментных факторов патогенности за счет активации ли-попероксидации (Косинец В.А.,2010, Нагоев B.C., 2009).

Цель исследования:

Изучить иммуномодулирующие механизмы действия антиокси-дантов: производного пиримидина (ТВ-103) и антиоксиданта флаво-ноидной природы (ДГК) в эксперименте при длительной антибактериальной терапии, общем лучевом воздействии, остром инфекционном процессе.

Задачи исследования:

1. Анализ особенностей иммунного статуса у крыс при длительной антибактериальной терапии, общем лучевом воздействии, экспериментальном остром инфекционном процессе (кишечной инфекции).

2. Провести мониторинг показателей иммунного статуса при применении производного пиримидина — препарата ТВ-103 в эксперименте на фоне длительной антибактериальной терапии и экспериментальной острой кишечной инфекции.

3. Изучить влияние антиоксиданта дигидрокверцетина на показатели иммунного статуса в экспериментальной модели хронического лучевого воздействия.

4. Сравнительная оценка протективной эффективности препаратов ТВ-103 и ДГК для микрофлоры кишечника лабораторных животных при неблагоприятных экзогенных.

Научная новизна работы:

Проведена оценка эффективности применения антиоксидантов (ТВ-ЮЗ и ДГК) в эксперименте для коррекции дисфункций иммунного статуса и микроэкологических нарушений кишечника при неблагоприятных внешних воздействиях: длительной антибактериальной терапии, общем лучевом воздействии, острой кишечной инфекции.

Изучена динамика иммунологических показателей под влиянием антиоксидантов (ТВ-103 и ДГК) при длительной антибактериальной терапии, общем лучевом воздействии, острой кишечной инфекции.

Выявлены микроэкологические особенности желудочно-кишечного тракта экспериментальных животных при длительной антибактериальной терапии и общем лучевом воздействии на фоне применения антиоксидантов (ТВ-103 и ДГК).

Научная и практическая значимость работы:

Полученные данные раскрывают новые свойства разрабатываемых препаратов, определяют подходы к системной и местной коррекции показателей иммунологического статуса и микроэкологических нарушений, возникающих под влиянием экзогенных воздействий. Могут быть .использованы в практической работе врачей онкологов, фармакологов, иммунологов, гастроэнтерологов, инфекционистов и клинических микробиологов для повышения иммунологической реактивности организма и коррекции состава микрофлоры кишечника, а соответственно повышения эффективности лечения.

Полученные результаты могут использоваться при подготовке специалистов в системе высшего профессионального медицинского образования и постдипломного образования, в частности у клинических фармакологов.

Выполненная работа является одним из этапов разрешения и внедрения в практическое здравоохранение новых антиоксидангов.

Апробация работы: Основные результаты работы были представлены на научных конференциях и симпозиумах международного, российского и регионального, уровня: научно-практической конференции Российской академии естествознания (Санкт-Петербург, 2005); Дальневосточный Медицинский журнал (Хабаровск, 2006); Всероссийское научно-практическое общество эпидемиологов, микробиологов и паразитологов (Москва, 2007);У1, VII региональная межвузовская научно-практическая конференция «Молодежь XXI века: шаг в будущее» (Благовещенск, 2005; 2006); научно-практическая конференция «Рак желудка в Амурской области» (Благовещенск, 2006); II Международный российско-китайский симпозиум (Благовещенск, 2004); Сборник тезисов докладов к 15 летнему юбилею российско-японского медицинского сотрудничества (Благовещенск, 2007).

Публикации: По теме диссертации опубликовано 9 печатных работ, в том числе 1 в издании, рекомендованном ВАК РФ.

Объем и структура диссертации: Диссертация изложена на 151 страницах машинописного текста. Содержит введение, обзор литературы, описание материалов и методов исследования, собственные исследования, выводы, список использованной литературы, содержащий 204 источника, включая 150 отечественной и 54 зарубежной. Работа иллюстрирована 43 таблицами, 15 рисунками.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Препарат ТВ-103 (производный пиримидина) обладает выраженным иммуномодулирующим действием, и может применяться при лечении острых кишечных инфекции с целью предупреждения их хронизации, а также при длительной антибактериальной терапии.

2. Препарат ДГК (антиоксидант флавоноидной природы) может быть рекомендован как иммуномодулятор и радиопротектор при лечении онкологической патологии.

3. Применение антиоксидантов (ТВ-ЮЗ и ДГК) возможно для коррекции микроэкологических нарушений кишечника при острой кишечной инфекции, длительной антибактериальной терапии и общем лучевом воздействием.

Личный вклад автора в проведенном исследовании:

Анализ данных литературы по теме диссертации, сбор материала, комплексное исследование иммунного статуса и микробиологическое

исследование, анализ, статистическая обработка полученных-результатов и написание диссертации выполнены лично автором.

Материалы и методы исследования

Исследования проводили на белых беспородных крысах — самцах, массой тела 200-230г. Работа проводилась в соответствии с Правилами проведения работ и использования экспериментальных животных (Приложение к приказу МЗ СССР № 755 от 12.08.1977 г.) и Стандарта отрасли «Правила проведения качественных клинических испытаний в Российской Федерации» ОСТ 42-511-99 (утв. Минздравом РФ 29.12.1998 г.). Проведено исследование материалов от 180 животных, которые были разделены на группы (табл.1). Животных умерщвляли передозировкой эфирного наркоза.

В настоящем исследовании применялись вещества из группы ан-тиоксидантов: препарат ТВ — 103 (производное пиримидина) и фла-воноид дигидрокверцетин.

Таблица I

Количество исследованных лабораторных животных по группам

Группы животных Количество

животных

Здоровые животные (контроль I) К)

Здоровые животные, получающие аптиоксиданты разных групп (контроль 2) 20

Животные с экспериментальной острой сальмонеллезной 10

инфекцией

Животные с экспериментальной острой сальмоиеллсзной | 20

инфекцией, получающие аптиоксиданты разных групп ;

Животные, получающие антибиотики (канаминин. 20

доксициклип. пефалексин)

Животные, получающие антибиотики (канаминин. 30

доксициклип. пефалексин) и аптиоксиданты разных :

групп

Животные, подвергшиеся общему лучевому воздействию 20

Животные, подвергшиеся общему лучевому воздействию ; 50

и получающие аптиоксидаиты разных групп

Игого:......" ""......"...... .......... ............. ! 180 ...... ;

Дигидрокверцетин — один из представителей флавоноидов, был выделен из древесины Дугласовой ели, а затем — из древесных отходов заготовки даурской и сибирской лиственницы. Это соединение

оказалось эффективным антиоксидантом, в связи с чем, было предложено его использование в качестве лекарственных средств и пищевых добавок. В наших исследованиях ДГК применялся в виде порошка, который растворяли в воде (2,5% раствор, в 1 мл раствора — 25 мг вещества). Лабораторным животным вводили по 1 мл на 100 г веса, т.е. 2,5 мг на кг через зонд в желудок ежедневно в течение месяца. В экспериментальных работах используются в основном доза 2,5-3 мг/ кг.

Было изучено также соединение, являющееся производным пиримидина — препарат ТВ-ЮЗ. В наших исследованиях ТВ-ЮЗ применялся в виде порошка, который растворяли в воде (5% раствор, в 1 мл раствора — 50 мг вещества). Лабораторным животным вводили по 1 мл на 100 г веса, т.е. 5 мг на кг через зонд в желудок ежедневно в течение месяца. В экспериментальных работах используются в основном доза 5-10 мг/кг.

В качестве неблагоприятных внешних воздействий были выбраны: длительная антибактериальная терапия, экспериментальная саль-монеллезная инфекция, хроническое лучевое воздействие.

При проведении экспериментов по исследованию лучевого воздействия в качестве источника ионизирующего излучения использовался радиактивный изотоп кобальта (60Со). Облучение проводилось на дистанционном гамма-терапевтическом аппарате Рокус-АМ, ежедневно в течение суток, длительность одного сеанса — 11 сек., перерыв между фракциями — 24 часа. Разовая очаговая доза (РОД) составляла 0,1 Гр, мощность дозы? — 0,6 Гр/мин. Суммарная очаговая доза (СОД) за весь период облучения — 1,0 Гр. В эксперимент животных брали по окончании облучения через 3,15 и 30 суток.

Для длительной антибактериальной терапии использовали следующие антибактериальные препараты: цефалексин (цефалоспорины) в дозе 5 грамм на 1 кг массы тела в сутки; канамицин (аминогликози-ды) в дозе 1 грамм на 1 кг массы тела в сутки; доксициклин (тетра-циклины) в дозе 250 мг на 1 кг массы тела в сутки. Антибактериальные препараты вводили животным через зонд в желудок ежедневно в течение 21 дня.

В качестве материала использовались: сыворотка крови, иммуно-компетентные клетки экспериментальных животных; микрофлора, изолированная из желудочно-кишечного тракта лабораторных животных.

Для исследования применяли стандартные иммунологические и микробиологические методы. Параметры клеточного и гуморального иммунитета описывали по следующим направлениям: абсолютное и процентное содержание в крови популяций и субпопуляций имму-нокомпетентных клеток (лейкоцитов, СЭЗ+, С04+, С08+ Т-лим-фоцитов, С019+ В-лимфоцитов); соотношение С0 4+/С08+ Т-лим-

фоцитов; иммуноглобулины основных классов сыворотки крови, фагоцитарное число и фагоцитарный индекс.

Статистическую обработку проводили при помощи статистического пакета STATISTICA v. 6.0 for Windows (StatSoft Inc., 1984-2001).

Определение значимых различий между двумя независимыми выборками проводили по непарному критерию Стьюдента, между двумя зависимыми выборками по парному критерию Стьюдента. Критический уровень достоверности нулевой статистической гипотезы был принят равным 0,05.

Результаты собственных исследований и их обсуждение В группах животных с острой сальмонеллезной инфекцией получающих антиоксидантные препараты ТВ-103 и ДГК содержание лейкоцитов достоверно снижалось по сравнению с группой животных с острой сальмонеллезной инфекцией без препаратов и составило соответственно 5,7±0,ЗЫ0Ул и 6,2±0,35-Ю'/л.

Различия в обеспеченности лимфоцитами и их основными популяциями представлены на рисунке 1.

80 ' ' - 71,4 '"'"''

70 60 50 40 30 20 10 0

1 2 3

1 - контрольный инфекционный процесс, 2 - на фоне ОКИ с антиоксидантом ТВ-ЮЗ, 3 - на фоне

ОКИ с антиоксидантом ДГК '

Рисунок I. Обеспечение животных основными популяциями лимфоцитов на фоне острой сальмонеллезной инфекции и при применении разных антиоксидантных препаратов Так в группе животных с острой сальмонеллезной инфекцией получающих ТВ-ЮЗ лимфоциты были достоверно выше контроля в 1,3 раза.

В группе с другим антиоксидантом — ДГК лимфоцитоз достигал 60,9±2,02%, что выше контроля в 1,6 раза, а по сравнению с группой животных на фоне острой сальмонеллезной инфекции с препаратом ТВ-103 выше в 1, 2 раза.

Как видно из приведенных материалов, имеет место более высокое содержание обеих популяций лимфоцитов на фоне острой саль-монеллезной инфекции при применении антиоксиданта ДГК.

Так в группах животных на фоне острой сальмонеллезной инфекцией с антиоксидантами ТВ-103 и ДГК достоверно возрастал уровень СЭЗ+лимфоцитов по сравнению с контролем (в 1,7 раза с ТВ-ЮЗ и в 1,8 раза с ДГК).

Содержание С019+лимфоцитов у животных с препаратом ТВ-103 было достоверно ниже контроля (в 1,4 раза). А у животных получающих ДГК, содержание С019+лимфоцитов было достоверно выше (в 1,3 раза) по сравнению с контролем.

Индекс соотношения С03+/С019+ в группе животных на фоне острой сальмонеллезной инфекции с антиоксидантом ТВ-103 был равен 5,55, что выше контроля в 2,3 раза.

В группе с ДГК он оказался ниже в 1,5 раза, чем в группе животных с препаратом ТВ-103, но выше контроля в 1,6 раза и составил 3,75.

Субпопуляционный состав СОЗ+лимфоцитов в группах с антиоксидантами на фоне острой сальмонеллезной инфекции представлен в таблице 2.

С04+лимфоциты у животных с препаратом ТВ-103 на фоне острой сальмонеллезной инфекции оказались достоверно выше контроля (в 2 раза). Представительство СС8+лимфоцитов в данной группе животных было выше контрольных показателей в 2,3 раза.

Таблица 2

Субпопуляции СОЗ+лимфоцитов при применении различных антиоксидантных препаратов у животных с острой сальмонеллезной инфекцией

Субпопуляции СОЗ+лимфоцитов (М±т)% Экспериментальные группы

Контрольный инфекционный процесс Экспериментальная сальмонеллезная инфекция +ТВ-103 Экспериментальная сальмо неллез! 1ая инфекция +ДГК

С 04+ 28,9±2,17 57,1±4,21* 59,8±5,16*

С О 8+ 13,4±1,03 30,6± 1.89* 13,2±1.12*

ИРИН 2,15 1.86 4,53

Примечание: * — р < 0,05, достоверность различий групп сравнения и контроля

Уровень С04+лимфоцитов у животных с ДГК возрастал в 2,1 раза по сравнению с контролем. С08+лимфоциты в группе ДГК не отличались от контрольных показателей, что в 2,3 раза ниже по сравнению с группой животных получающих ТВ-ЮЗ.

Индекс соотношения субпопуляций ИРИ II колебался в следующих пределах. Он был ниже контроля в 1,2 раза у животных с ТВ-

103 на фоне острой сальмонеллезной инфекции, и в 2,1 раза выше по сравнению с контролем у животных с ДГК, за счет низкого содержания С08+лимфоцитов.

Динамика обеспечения животных основными классами иммуноглобулинов представлена нами на рисунке 2.

Так уровень ^ М в группе животных получающих препарат ТВ-ЮЗ на фоне острой сальмонеллезной инфекции был достоверно выше контроля в 1,5 раза, а в группе с ДГК в 1,6 раза выше контроля. Обеспеченность ^Ов группе с ТВ - ЮЗ была достоверно выше контроля в 1,5 раза, а в группе с ДГК- в 1,4 раза, что несколько ниже этого показателя в группе с антиоксидантом ТВ-103. Продукция А достоверно увеличивалась, как в группе с ТВ-ЮЗ, так и в группе с ДГК.

1 • контрольный инфекционный процесс, 2 - на фоне ОКИ с антиоксидантом ТВ-ЮЗ, 3 - на фоне ОКИ с антиоксидантом ДГК

Рисунок 2. Динамика обеспечения животных экспериментальных групп основными классами иммуноглобулинов.

Максимум образования циркулирующих иммунных комплексов зарегистрирован у животных получающих антиоксидант ТВ-ЮЗ на фоне острой сальмонеллезной инфекции (88,5± 1,37), что достоверно выше контрольных показателей.

Уровень образования циркулирующих иммунных комплексов в группе животных получающих ДГК имел тенденцию к снижению по сравнению с группой животных получающих антиоксидант ТВ-ЮЗ на фоне острой сальмонеллезной инфекции и составил 85,1 ±1,97, что достоверно выше контроля.

Показатель интенсивности фагоцитоза в группе животных получающих ТВ-103 на фоне острой сальмонеллезной инфекции был равен 57,5± 1,39%, при применении ДГК — 60,4±2,38%, что достоверно выше контрольных показателей. Фагоцитарное число различалось

незначительно в группах животных с острой сальмонеллезной инфекцией на фоне применения антиоксидантон (ДГК и ТВ-103) и был выше контрольных показателей в 1,5 раза.

При применении препарата ТВ-ЮЗ на фоне длительной антибактериальной терапии у животных наблюдали достоверное увеличение общего числа лейкоцитов (в 1,4 раза) по сравнению с контролем, что составило 6,7±0,4М0'/л. В группе с ДГК они увеличились в 1,3 раза, что составило 6,1 ±0,21 • 10ч/л, это несколько ниже по сравнению с группой здоровых животных.

Различия в обеспеченности лимфоцитами и их основными популяциями у животных на фоне длительной антибактериальной терапии представлены на рисунке 3.

Примечание: 1 —при длительной антибактериальной терапии (контроль); 2 — при длительной антибактериальной терапии на фоне антиок-сиданта ТВ-103; 3 — при длительной антибактериальной терапии на фоне антиоксиданта ДГК;

80

О общие лимфоциты Я Т-лимфоциты □ В-лимфоциты

Рисунок 3. Динамика обеспеченности животных экспериментальных групп основными популяциями лимфоцитов.

Так количество лимфоцитов в группе животных с антиоксидантом ТВ-103 на фоне длительной антибактериальной терапии достоверно увеличивалось (в 2,3 раза) по сравнению с контролем, что превосходило количество лимфоцитов в группе здоровых животных в 1,7 раза.

Число лимфоцитов в группе с ДГК было в 2,4 раза выше контроля и в 1,9 раза выше показателей здоровых животных.

Достоверно увеличивалось содержание как СОЗ + , так и СО!9+лимфоцитов в группах животных на фоне длительной антибактериальной терапии получающих антиоксиданты ТВ-103 и ДГК.

Так количество СРЗ+лимфоцитов в группе с ТВ-103 оказалось в 1,4 раза выше контроля, и в 1,7 раза выше показателей здоровых животных, а в группе с ДГК выше контроля и показателей группы здоровых животных в 1,5 раза, при этом несколько ниже по сравнению с животными получающими ТВ-103. С1) 19+лимфоциты в группе с ТВ -103 были в 2 раза выше контроля, что соответствовало количеству С019+лимфоцитов у здоровых животных. В группе с ДГК содержание СО!9+лимфоцитов было выше контроля в 1,6 раза, что ниже показателей для здоровых животных.

Индекс соотношения С04+/С019+ в группах с антиоксидантами ТВ-103 и ДГК на фоне длительной антибактериальной терапии снижался по сравнению с контролем и оказался равным 3,76 и 3,93 в группах соответственно, что было ниже контроля.

Субпопуляционный состав СРЗ+лимфоцитов в группах с антиоксидантами на фоне длительной антибактериальной терапии различался в группах сравнения.

Так при применении антиоксидантного препарата ТВ-103 у животных на фоне длительной антибактериальной терапии прослеживалось достоверное увеличение С04+лимфоцитов в 1,6 раза, как по сравнению с контролем, так и с группой здоровых животных, что составило 46,0±4,09%-

Содержание С 08+лимфоцитов характеру! зовал ось достоверным увеличением (в 2 раза) по сравнению с контролем и в 1,8 раза относительно показателей в груйне здоровых-животных, что было равно 24,0±1,59%. * ,,

У животных с ДГК количество С04+лимфоцитов оказалось достоверно ниже (в 1,5 раза) по сравнению с группой получающей ТВ-103 и составило 31,3±1,92%.|;При этом обмечена тенденция к увеличению по сравнению с контролем и с показателями здйровой группы животных. Количество СП8+лимфоцитов также достоверно увеличивалось по сравнению с контролем, и по сравнению с группой здоровых животных и было равно 18,2±2,33%.

Такие уровни основных регуляторных субпопуляций СОЗ+лимфоцитов стали основанием для низкого уровня ИРИ И причем у животных, получающих ТВ-103, ИРИ II составил 1,91, а при применении ДГК он был равен 1,72.

Содержание М при Применении антиоксиданта ТВ-103 на фоне длительной антибактериальной терапии было равно 1,70±0,96г/л, что оказалось достоверно выше контроля в 3 раза, выше показателей здоровой группы животных.

У животных получающих ДГК содержание ^ М достоверно возросло по сравнению с контролем (в 1,7 раза), что составило 0,94±0,05г/

л, и было достоверно ниже содержания ^ М в группе животных получающих ТВ-103.

^ С также обнаружил увеличение в группе с препаратом ТВ-103 и составил 10,5±0,66г/л, что в 1,8 раза достоверно выше контроля и в 1,7 раза выше показателей здоровых животных. Уровень ig й у животных с ДГК составил 7,62±0,46г/л, что достоверно выше контроля в 1,3 раза, но выше этого показателя в группе с ТВ-103. Количество ^ А составило в группе с ТВ-103 1,69±0,35г/л, что в 3,8 раза достоверно выше контроля, а в группе с ДГК 0,74±0,08г/л, что также достоверно выше контроля и ниже (в 2,3 раза) значений данного класса иммуноглобулинов в группе с препаратом ТВ-103.

Уровень образования циркулирующих иммунных комплексов в группах животных получающих антиоксидантные препараты ДГК и ТВ-103 на фоне длительной антибактериальной терапии отметил достоверное увеличение по сравнению с контролем и составил в группах соответственно 86,5±2,63 и 88,4± 1,62.

Показатель интенсивности фагоцитоза в группах животных получающих антиоксиданты ТВ-103 и ДГК на фоне длительной антибактериальной терапии имел тенденцию к увеличению по сравнению с контролем и был равен соответственно 53,6±2,11% н 57,4±2,24%, что было несколько ниже показателей здоровой группы животных, но имело тенденцию к увеличению по сравнению с контролем. Фагоцитарное число Райта различалось незначительно в группах с ан-тиоксидантами (ДГК и ТВ-ЮЗ) и был выше контроля в 1,9 раза.

При применении антиоксидантного препарата ТВ-103 у животных при длительной антибактериальной терапии отмечали незначительное снижение количества лактозопозитивных кишечных палочек по сравнению с контролем, что составило 4,1±0,6-Ю5КОЕ/гр., и увеличение частоты их высева до 100%. По сравнению с группой здоровых животных количество лактозопозитивных кишечных палочек и частота их высева достоверно увеличивалось.

Лактозонегативные кишечные палочки в группе животных получающих препарат ТВ-103 при длительной антибактериальной терапии составили 2,4±0,1-108 КОЕ/гр. в 70% случаев, что достоверно выше контроля, но несколько ниже по сравнению со здоровыми животными.

При применении антиоксиданта ДГК у животных при длительной антибактериальной терапии было зарегистрировано выделение лактозопозитивных кишечных палочек в количестве 3,4±0,3-108 КОЕ/гр. в 90% случаев, что достоверно ниже по сравнению с контролем по количеству в 1 грамме материала, но несколько выше по частоте высева.

При этом отмечали тенденцию к снижению количества и частоты высева лактозопозитивных кишечных палочек по сравнению с группой животных получающих антиоксидант ТВ-103. Лактозонегатив-

ные кишечные палочки регистрировались в группе с антиоксидантом ДГК в количестве 3,2±0,1?10!! КОЕ/гр. в 90% случаев, что достоверно выше по сравнению с контролем и с группой животных получающих препарат ТВ-103, как по своему количеству, так и по частоте высева. При применении антиоксиданта ТВ-103 на фоне длительной антибактериальной терапии регистрировалось выделение З.варгорЬупсш в 50% случаев в количестве 3,8±0,3? 104 КОЕ/гр., что было достоверно ниже контрольных показателей (в 1,7 раза) по своему количеству, и выше контроля по частоте высева, но соответствовало значениям в группе здоровых животных.

Б.аигеш выделялся В это группе сравнения в количестве 3,6±0,1-104 КОЕ/гр. в 20% случаев, что достоверно ниже контроля.

В группе животных получающих антиоксидант ДГК при длительной антибактериальной терапии количество З.БаргорИуНсш было равно 4,8±0,4? 10^ КОЕ/гр. в 80% случаев, что достоверно ниже контрольных показателей, но выше значений в группе животных с препаратом ТВ-103 и здоровых животных, как по количеству, так и по частоте высева.

Выделение 8.аигеи5 в данной группе зарегистрировано в 20% случаев в количестве 3,910,2-Ю"1 КОЕ/гр., что также достоверно ниже контроля и несколько выше показателей группы животных получающих ТВ-103.

В отношении представителей рода ЕгКегососсш следует отметить, что ЕЛаесаИз в группе животных получающих препарат ТВ-103 при длительной антибактериальной терапии выделялся в количестве 3,4±0,3-Ю8КОЕ/ гр. в 80% случаев, что достоверно ниже контрольных показателей.

Выделение ЕТаесшт в данной группе сравнения зарегистрировано в количестве 4,5±0,4ТО8 КОЕ/гр., что достоверно ниже контроля, но выше значений в группе здоровых животных по количеству в 1 грамме материала (в 1,4 раза).

В группе животных получающих антиоксидант ДГК при длительной антибактериальной терапии ЕТаесаИв выделялся в количестве 4,3±0,6-108 КОЕ/гр., что было достоверно ниже контроля (в 1,7 раза), но достоверно выше показателей здоровых животных (в 2,3 раза) и животных получающих ТВ-ЮЗ.

Выделение ЕТаесшт в данной группе сравнения составило 3,7±0,М08 КОЕ/гр. в 50% случаев, что было несколько ниже контроля по количеству, но выше по частоте высева и соответствовало показателям группы здоровых животных.

При применении препарата ТВ-103 на фоне хронического лучевого воздействия у животных наблюдали достоверное увеличение общего числа лейкоцитов (в 1,3 раза) по сравнению с контролем. Их содержание было равно 6,3±0,4Т0ч/л, что было несколько ниже показателей здоровых животных.

В группе с препаратом ДГК мы отмечали тенденцию к снижению количества лейкоцитов по сравнению с группой животных получающих ТВ-103 на фоне хронического лучевого воздействия. При этом уровень лейкоцитов по сравнению с контролем достоверно увеличивался (в 1,2 раза) и составил 6,1±0,3-109/л, что было несколько ниже показателей здоровых животных.

Содержание лимфоцитов и степень их дифференцировки на СОЗ+ и С019+ популяции значительно различалась в группах сравнения, что отражено на рисунке 4.

Примечание: I — на фоне хронического лучевого воздействия (контроль); 2 — на фоне хронического лучевого воздействия с антиоксидантом ТВ-103; 3 — на фоне хронического лучевого воздействия с антиоксидантом ДГК;

60 50 40 30 20 10

28,9

19.6

49,6

■ общие лимфоциты 11Т-лимфоциты а В-лимфоциты

Рисунок 4. Обеспечение животных основными популяциями

лимфоцитов при хроническом лучевом воздействии на фоне применения разных антиоксидантных препаратов.

Так количество лимфоцитов в группах с антиоксидантными препаратами у животных на фоне хронического лучевого воздействия достоверно увеличивалось. В группе с ТВ-ЮЗ лимфоцитов было в 2 раза больше по сравнению с контролем. В группе с ДГК мы наблюдали достоверное увеличение числа лимфоцитов по сравнению с группой животных получающих ТВ-103. Их содержание оказалось в 2,6 раза достоверно выше контроля, а при сравнении с показателями здоровой группы животных достоверно выше в 1,5 раза.

Содержание СРЗ+лимфоцитов у животных на фоне хронического лучевого воздействия при применении ТВ-103 было достоверно выше контрольных показателей (в 1,2 раза).

Что касается С019+лимфоцитов, то мы тэкже наблюдали достоверное увеличение их количества по сравнению с контролем, при этом .мы отмечали тенденцию к увеличению их числа по сравнению со значениями группы здоровых животных.

У животных, получающих антиоксидант ДГК на фоне хронического лучевого воздействия, обеспеченность СЬЗ+лимфоцитами была в 1,3 раза выше контроля, что составило 37,514,77%, и несколько ниже показателей здоровой группы животных.

Количественное содержание популяции СШ9+лимфоцитов у животных на фоне хронического лучевого воздействия получающих антиоксидант ДГК имело тенденцию к увеличению по сравнению с контролем, но было достоверно выше показателей здоровых животных.

Индекс соотношения С03+/С019+ в группе с антиоксидантом ТВ-103 у животных подвергшихся хроническому лучевому воздействию оказался равным 1,49, что соответствовало контрольным показателям. В группе с ДГК этот индекс имел тенденцию к увеличению по сравнению с группой животных получающих препарат ТВ-103, но он был несколько выше контроля, что составило 1,61.

Субпопуляционный состав СОЗ+лимфоцитов в группах с антиок-сидантами на фоне хронического лучевого воздействия представлен в таблице 3.

Таблина 3

Субпопуляционный состав СОЗ+лимфоцитов животных получающих антиоксидантные препараты на фоне хронического лучевого воздействия

Субпопулянни Экспериментальные группы

СОЗ+личфонитов Хроническое Хроническое ; Хроническое

<М±т) в % лучевое воздействие лучевое воздействие лучевое воздействие

(контроль) + ТВ-103 + ДГК

С134+ 21,2±2,25 23.9± 1,87 26,3±2,20*

С08+ 21,8±2,0 27,3*4,29» 1 28.9±1,95*

ИРИ и 0,97 0,88 ] 0,91

Примечание: * — р < 0,05, достоверность различий групп сравнения и контроля

При применении препарата ТВ-103 у животных на фоне хронического лучевого воздействия прослеживалась тенденция к увеличению С 04+л имфоцитов, а также отмечалась тенденция к снижению по сравнению с показателями группы здоровых животных (28,2±3,50%):

Что касается С08+димфоцитов, то в данной группе сравнения мы отмечали достоверное их увеличение, как по сравнению с контролем (в 1,4, раза), так и по сравнению с группой здоровых животных (в 2 раза).

У животных с ДГК количество С04+лимфоцитов было достоверно выше контроля (в 1,3 раза), что несколько ниже показателей здоровой группы животных.

Количество С08+лимфоцитов также достоверно увеличилось по сравнению с контролем в 1,4 раза, и было выше показателей здоровой группы животных в 2 раза.

При этом, по сравнению с группой животных получающих ТВ-ЮЗ на фоне хронического лучевого воздействия, в группе с ДГК количество С04+ и С08+лимфоцитов было несколько больше.

Дисбаланс между количеством этих клеток нашел отражение в индексе их соотношения — ИРИ II. Так, в организме животных на фоне хронического лучевого воздействия получающих препарат ТВ-103 иммунорегу-ляторный индекс составило 0,88, что несколько ниже контроля. В группе же с ДГК он оказался равен 0,91, что также шгже контроля.

При применении препарата ТВ-103 у животных на фоне хронического лучевого воздействия содержание ^ М составило 0,56±0,05г/л, что было достоверно выше контроля, но несколько ниже показателей здоровых животных (0,59±0,06г/л). У животных получающих анти-оксидант ДГК содержание М было в 1,3 выше контроля, несколько выше показателей здоровых животных и составило 0,62±0,05г/л, причем прослеживалась тенденция к увеличению при сопоставлении с показателем в группе животных получающих ТВ-103.

^ О обнаружил увеличение в группах с антиоксидантами ТВ -103 и ДГК, что составило соответственно 5,23±0,12г/л и 5,22±0,11г/л, что было достоверно выше контрольных показателей, но ниже показателей здоровых животных (6,18±0,69г/л). Достоверное увеличение в этих группах сравнения прослеживалось у иммуноглобулинов класса А, их количество составило в группе с ТВ -103 — 0,73±0,07г/л, а в группе с ДГК — 0,74±0,06г/л, что в 1,4 раза было достоверно выше контроля и несколько выше значений в группе здоровых животных.

Максимум образования циркулирующих иммунных комплексов у животных подвергшихся хроническому лучевому воздействию зарегистрирован при применении антиоксиданта ДГК (86,6+2,56), что достоверно выше контрольных показателей и несколько выше показателей здоровых животных. Уровень образования циркулирующих иммунных комплексов в группе животных получающих антиокси-дант ТВ-103 имел тенденцию к увеличению по сравнению с контролем, что составило 80,3+3,91, но оказался несколько ниже показателей группы животных получающих антиоксидант ДГК.

При применении антиоксиданта ТВ-ЮЗ у животных подвергшихся хроническому лучевому воздействию фагоцитарный показатель достоверно увеличился по сравнению с контролем (в 1,3 раза) и составил 37,5+2,86%, но оставался ниже показателей здоровых живот-

ных (54,5±3,17%). Индекс Райта также отметил достоверное увеличение (в 1,3 раза) и был равен 3,4±0,30, что соответствовало показателям здоровой группы животных.

Интенсивность фагоцитоза у животных при применении ДГК на фоне хронического лучевого воздействия достоверно увеличилась по сравнению с контролем (в 1,5 раза) и составила 40,9+3,81%, но была достоверно ниже показателей группы здоровых животных (в 1,3 раза). При этом отмечена тенденция к увеличению по сравнению с группой животных получающих ТВ-103 на фоне облучения. Фагоцитарное число в этой группе животных достоверно увеличилось в 1,4 раза по сравнению с контролем и составило 3,8±0,40.

В группе животных, получающих антиоксидант ТВ-103 при хроническом лучевом воздействии, лактобактерии содержались в количестве 3,3+0,5-10ч КОЕ/ф. в 80% случаев, что достоверно выше контроля и соответствует показателям группы здоровых животных по частоте высева.

Бифидобактерии были зарегистрированы в 80% случаев в ЮчКОЕ/ гр, что было достоверно выше контрольных показателей, и близко по степени роста показателям здоровых животных.

При применении антиоксиданта ДГК у животных при хроническом лучевом воздействии количество лактобактерий имело тенденцию к росту по сравнению с показателями контрольной группы, но было достоверно ниже чем у животных с антиоксидантом ТВ-103, и зарегистрировано в количестве 2,4±0,3-107 КОЕ/гр.

У животных, получающих препарат ТВ-103 при хроническом лучевом воздействии, число лактозопозитивных кишечных палочек было равно 3,4+0,7-108 КОЕ/гр. в 100% случаев, что достоверно ниже контроля. Содержание лактозонегативных кишечных палочек обнаружено у 80% животных в количестве 3,1±0,4-Ю8 КОЕ/гр. При этом и лактозопозитивные, и лактозонегативные кишечные палочки соответствовали или были близки показателям здоровой группы животных. Гемолитические кишечные палочки были зарегистрированы в данной группе сравнения в 50% случаев в 107 КОЕ/гр.

При применении препарата ДГК на фоне Хронического лучевого воздействия мы наблюдали достоверное снижение количества лактозопозитивных и лактозонегативных кишечных палочек в 1 грамме материала, что составило, соответственно, 3,6±0,9-107 КОЕ/гр. и 2,2+0,7-108 КОЕ/гр: Количество лактозонегативных кишечных палочек было близким к содержанию у здоровых животных.

По частоте высева и те, и другие популяции кишечных палочек были выше контроля и составили по 90% соответственно. Гемолитические кишечные палочки в этой группе сравнения зарегистрированы в 40% случаев в Ю7 КОЕ/гр., что ниже, как по сравнению с контролем, так и с группой здоровых животных.

У крыс, получающих аитиоксидантный препарат ТВ-103 при хроническом лучевом воздействии, в составе микрофлоры кишечника количественное содержание S.saprophyticus составило 3,3±0.7-104 КОЕ/ гр. в 60% случаев, что достоверно ниже контроля (в 1,4 раза) по количеству в I грамме материала, но несколько выше по частоте высева. По сравнению с группой здоровых животных выделение S.saprophyticus не имело достоверных различий. Выделение S.aureus в данной группе сравнения не было зарегистрировано.

У животных получающих аитиоксидантный препарат ДГК при хроническом лучевом воздействии количество S.saprophyticus было равно 4,1 ±0,2-104 КОЕ/гр. в 80% случаев, что несколько ниже контроля по количеству в 1 грамме материала, но выше по частоте высева. По сравнению с группой здоровых животных if животных, получающих препарат ТВ-103 при хроническом лучевом воздействии, зарегистрировано увеличение количества в 1 грамме материала S.saprophyticus и частоты их высева.

В данной группе сравнения зарегистрировано выделение S.aureus в 20% случаев в количестве 2,3±0,1-Ю4КОЕ/гр., что было достоверно ниже контроля по количеству в 1 грамме материала, но превосходило показатели здоровых животных.

Из представителей рода Enterococcus у животных, получающих препарат ТВ-103 при хроническом лучевом воздействии, зарегистрировано выделение E.faecalis в количестве 4,3±0,3-103 КОЕ/гр., что несколько ниже контроля, но достоверно выше показателей здоровой группы животных.

В группе с антиоксидантом ДГК при хроническом лучевом воздействии выделение E.faecalis было зарегистрировано в количестве 3,9±0,7-10s КОЕ/гр. в 60% случаев, что достоверно ниже контроля и значений в группе животных с ТВ-103 по количеству в I грамме материала и по частоте высева. По сравнению с показателями здоровой группы животных, количество E.faecalis было достоверно выше, а по частоте несколько ниже. Количественное содержание E.faecium достоверно снижалось по сравнению с контролем и составило 3,4+0,9'10s КОЕ/гр. в 30% случаев, что было без достоверных различий по количеству с группой здоровых животных.

В группе животных с препаратом ТВ-103 при хроническом лучевом воздействии грибы рода Candida выделялись в количестве 3,1 ±0,4-104 КОЕ/гр. в 40% случаев, что несколько ниже контроля по количеству в 1 грамме материала и выше по частоте высева, а также достоверно выше показателей в группе здоровых животных.

Что касается группы животных, получающих ДГК при хроническом лучевом воздействии, то грибы рода Candida в этой группе были без достоверных различий с контролем, но достоверно выше пока ta-

телей здоровой группы животных, их количество составило 3,6±0,7-10^ КОЕ/гр. в 40% случаев.

Таким образом, мы можем заключить, что при острой кишечной инфекции более предпочтительным является использование антиок-сиданта ТВ-103, так как он повышает способность макроорганизма противостоять действию патогенов. Так как антибактериальные препараты применяют при инфекционном процессе, можно предположить, что при действии такого неблагоприятного фактора, как длительная антибактериальная терапия, препаратом выбора является ТВ-ЮЗ, так как, при его применении наблюдали снижение иммунодеп-рессивного действия антибиотиков, нормализацию функций клеточного, гуморального и неспецифического звена иммунитета, применение же ДГК вызывало выраженный иммунорегуляторный дисбаланс, повышение ЦИК без явного повышения эффективности фагоцитарных реакций. При хроническом лучевом воздействии, в том числе при лечении онкологической патологии, весьма предпочтительным может оказаться применение антиоксиданта ДГК, так как он позволит противостоять действию такого неблагоприятного фактора, как радиация на макроорганизм в большей степени, чем антиоксидант ТВ-103.

При нарушениях состава микрофлоры при таких неблагоприятных внешних воздействиях, как длительная антибактериальная терапия и хроническое лучевое воздействие предпочтительней применение препарата ТВ-103, так как он оказывает выраженное антибактериальное воздействие, стимулирует бифидо- и лактофлору кишечника, снижает негативное воздействие в отношении популяций кишечных палочек, уменьшает степень колонизации кишечника лабораторных животных условно-патогенной микрофлорой.

ВЫВОДЫ:

1. При действии неблагоприятных факторов (длительной антибактериальной терапии, общем лучевом воздействии, экспериментальной кишечной инфекции) наблюдали угнетение лейкоцитарной реакции, СОЗ+лимфоцитов и их основных субпопуляций, продукции иммуноглобулинов основных классов, фагоцитарных реакций (как интенсивности, так и эффективности фагоцитоза).

2. Применение препарата ТВ-103 при длительной антибактериальной терапии приводит к направленной стимуляции популяции СОЗ+лимфоцитов, без достоверного преобладания одной из субпопуляций; нормализации ИРИ и повышению функциональной активности В-кледок, при сохранении их количества; нормализует фагоцитарную активность ю эффективность фагоцитарных реакций. При острой кишечной инфекции применение препарата ТВ-103 (произ-

водное пиримидина) приводит к восстановлению Т-звена иммунитета, за счет стимулирования субпопуляций Т-клеток при сохранении их соотношения; повышает эффективность В-клеток в обеспечении организма животных иммуноглобулинами основных классов и повышает интенсивность фагоцитарных реакций.

3. Препарат дигидрокверцетин может быть препаратом выбора при хроническом лучевом воздействии, так как его применение приводит к восстановлению лимфоцитарной реакции, снижению дефицита CD4+ лимфоцитов, стимуляции В-клеток и повышению их активности в обеспечении организма иммуноглобулинами основных классов, повышению эффективности фагоцитарных реакций (интенсивность фагоцитоза достоверно увеличилась по сравнению с контролем (в 1,5 раза), но была достоверно ниже показателей группы здоровых животных (в 1,3 раза), фагоцитарное число достоверно увеличилось в 1,4 раза по сравнению с контролем).

4. Применение антиоксидантов ТВ-103 и ДГК возможно для коррекции микроэкологических нарушений кишечника при длительной антибактериальной терапии и общем лучевом воздействии, так как его применение снижает негативное воздействие в отношении популяции кишечных палочек при более выраженном эффекте препарата ТВ-ЮЗ, уменьшает степень колонизации кишечника условно-патогенной микрофлорой, а именно представителями рода Staphylococcus, Enterococcus и грибами рода Candida, при более выраженном антибактериальном воздействии ТВ-103 и фунгистатическом действии ДГК.

Список научных работ, опубликованных по теме диссертации:

1. Доровских В.А., Чубенко Г.И., Гордиенко В.П., Бубинец О.В. Коррекция иммунологического статуса производными пиримидина (ТВ-ЮЗ) при хроническом лучевом воздействии //Дальневосточный медицинский журнал. 2006. № 3. С. 65—67.

2. Доровских В.А., Чубенко Г.И., Бубинец О.В. Действие дигид-рокверцетина на микрофлору кишечника в эксперименте //Материалы Всероссийского научно — практического общества эпидемиологов, микробиологов, паразитологов. Москва, 2007. — С. 294-295.

3. Доровских В.А., Чубенко Г.И., Бубинец О.В. Перспективы применения дигидрокверцетина как иммунотропного средства //Сборник тезисов докладов к 15 летнему юбилею российско-японского медицинского сотрудничества. Благовещенск, 2007. С. 41—42.

4. Доровских В.А., Чубенко Г.И., Бубинец О.В. Динамика показателей иммунологического статуса и микрофлоры кишечника у крыс при длительной антибиотикотерапии на фоне применения производного пиримидина препарата ТВ-103 //Тезисы докладов II Меж-

дународного российско-китайского симпозиума. Благовещенск, 2004. С. 48-50.

5. Бубинец О. В. Динамика показателей иммунологического статуса у крыс на фоне применения производного пиримидина препарата ТВ-103 // «Молодежь XXI века: шаг в будущее» Тезисы докладов VI межвузовской региональной научно-практической конференции. Благовещенск, 2005. С. 65—67.

6. Бубинец О.В., Сергеевич А.А. Изменение культуральных свойств микрофлоры в эксперименте под влиянием антиоксидантов // «Молодежь XXI века: шаг в будущее»: тезисы докладов VII межвузовской региональной научно-практической конференции. Благовещенск, 2006. С. 16-17.

7. Доровских В.А., Чубенко Г.И., Бубинец О.В. Динамика показателей микрофлоры кишечника животных на фоне применения производного пиримидина (ТВ-103) при хроническом лучевом воздействии // Материалы конференции «Рак желудка в Амурской области». Благовещенск, 2006. С. 76—79.

8. Бубинец, О.В. Применение антиоксидантов при хроническом лучевом воздействии //»Молодежь XXI века: шаг в будущее»: тезисы докладов X межвузовской региональной научно-практической конференции. Благовещенск, 2009. С. 133-134.

9. Доровских В.А., Чубенко Г.И., Бубинец О.В. Повышение иммунологической реактивности организма с помощью антиоксидант-ного препарата дигидрокверцетина при хроническом лучевом воздействии // Информационное письмо. Благовещенск, 2009. — 13 с.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

— иммуноглобулин ФИ — фагоцитарный индекс ФЧ — фагоцитарное число ПОЛ — перекисное окисление липидов ИРИ — иммунорегуляторный индекс ЦИК — циркулирующие иммунные комплексы АОС — антиокислительная система РОД — разовая очаговая доза СОД — суммарная очаговая доза ДГК — дигидрокверцетин АО — антиоксиданты

БУБИНЕЦ

Ольга Владимировна

ОСОБЕННОСТИ ИММУННОГО СТАТУСА И ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКИХ РЕАКЦИЙ ПРИ ПРИМЕНЕНИИ АНТИОКСИДАНТОВ (экспериментальное исследование)

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Подписано в печать 4.05.2011 Формат 60x84/16. Усл. печ. л. 1,4. Уч. изд. л. 1,33. Тираж 100 экз. Заказ %

Издательство Дальневосточного федерального университета 690950, г. Владивосток, ул. Октябрьская, 27

Отпечатано в типографии Издательско-полиграфического комплекса ДВФУ 690950, г. Владивосток, ул. Алеутская, 56

Одной из актуальных задач медико-биологических исследований является создание новых лекарственных препаратов с выраженными антиоксидантными свойствами.

По современным представлениям молекулярный кислород инициирует развитие многих патологических состояний и острых заболеваний организма [14,48]. Свободные радикалы вступают в реакцию с белками, нуклеиновыми кислотами, липидами, разрушая клеточные структуры и способствуя образованию продуктов свободнорадикального окисления высокотоксичных соединений, которые обладают мутагенными свойствами [22,77,135,162].

Антиоксиданты замедляют процессы старения и износа клеточных мембран и самих клеток, а, следовательно, и всего организма в целом. Они способны связывать и нейтрализовать повреждающее действие свободных радикалов, образующихся при воздействии ионизирующего облучения [66,93,124], усиливать иммунитет, нормализовать функции сердечнососудистой и нервной систем [25,72,122], обладают антиканцирогенным действием [56].

В условиях нормального функционирования организма его антиоксидантная система обеспечивает сбалансированное протекание окислительных и антиокислительных процессов [55]. Воспаление лежит в основе многих заболеваний и сопровождается комплексом системных сдвигов, известных как острофазовый ответ. Одним из таких ответов является активация процессов перекисного окисления липидов. Продукты перекисного окисления липидов повреждают клеточные структуры, органы и ткани [78,93]. При избыточной активации эндогенных механизмов образования активных форм кислорода (воспалительные, онкологические заболевания и т.д.) интенсивность окислительных реакций в организме повышается [125]. В этих условиях организму нужна помощь — применение антиоксидантов.

В динамике развития бактериальных инфекций и интоксикаций вслед за инициирующим воздействием специфических патогенных факторов инфекции, как правило, возникают неспецифические функциональные и метаболические расстройства, определяющие тяжесть течения и исход заболевания. В условиях циркуляторной гипоксии активируется свободнорадикальное окисление липидов, дестабилизирующее биологические мембраны. В связи с этим становится очевидной возможность потенцирования цитопатогенных эффектов токсических и ферментных факторов патогенности за счет активации липопероксидации [101,106]. ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ:

Изучить иммуномодулирующие механизмы действия антиоксидантов: производного пиримидина (ТВ-103) и антиоксиданта флавоноидной природы (ДГК) в эксперименте при длительной антибактериальной терапии, общем лучевом воздействии, остром инфекционном процессе. ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ:

1. Анализ особенностей иммунного статуса у крыс при длительной антибактериальной терапии, общем лучевом воздействии, экспериментальном остром инфекционном процессе (кишечной инфекции).

2. Провести мониторинг показателей иммунного статуса при применении производного пиримидина - препарата ТВ-103 в эксперименте на фоне длительной антибактериальной терапии и экспериментальной острой кишечной инфекции.

3. Изучить влияние антиоксиданта дигидрокверцетина на показатели иммунного статуса в экспериментальной модели хронического лучевого воздействия.

4. Сравнительная оценка протективной эффективности препаратов ТВ-ЮЗ и ДГК для микрофлоры кишечника лабораторных животных при неблагоприятных экзогенных воздействиях.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА РАБОТЫ

Проведена оценка эффективности применения антиоксидантов (ТВ-103 и ДГК) в эксперименте для коррекции дисфункций иммунного ответа и микроэкологических нарушений кишечника при неблагоприятных внешних воздействиях: длительной антибактериальной терапии, общем лучевом воздействии, острой кишечной инфекции.

Изучена динамика иммунологических показателей под влиянием антиоксидантов (ТВ-103 и ДГК) при длительной антибактериальной терапии, общем лучевом воздействии, острой кишечной инфекции.

Выявлены микроэкологические особенности желудочно-кишечного тракта экспериментальных животных при длительной антибактериальной терапии и общем лучевом воздействии на фоне применения антиоксидантов (ТВ-ЮЗ и ДГК).

НАУЧНАЯ И ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ

Полученные данные раскрывают новые свойства разрабатываемых препаратов, определяют подходы к системной и местной коррекции дисфункций иммунной системы и микроэкологических нарушений, возникающих под влиянием экзогенных воздействий. Могут быть использованы в практической работе врачей фармакологов, иммунологов, гастроэнтерологов, инфекционистов и клинических микробиологов для повышения иммунологической реактивности организма, а соответственно и повышения эффективности лечения. Полученные результаты могут использоваться при подготовке специалистов в системе высшего профессионального медицинского образования и постдипломного образования. Выполненная работа является одним из этапов внедрения в практическое здравоохранение новых антиоксидантов.

ЛИЧНЫЙ ВКЛАД АВТОРА В ПРОВЕДЕННОМ ИССЛЕДОВАНИИ: Сбор материала производился лично диссертантом. Самостоятельно проводился анализ иммунологических показателей: фагоцитарная активность нейтрофилов, иммуноглобулины основных классов, абсолютное и относительное количество СОЗ+лимфоцитов, общее количество CD 19+лимфоцитов, степень дифференцировки лимфоцитов, содержание циркулирующих иммунных комплексов. Микробиологическое исследование, отраженное в работе, также было проведено автором самостоятельно: выделение чистой культуры микроорганизмов и их идентификация. Статистическая обработка полученного материала, включая построение диаграмм, графиков, была произведена лично автором.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ

Основные результаты работы были представлены на научных конференциях и симпозиумах международного, российского, и регионального уровня: II Международном российско-китайском фармацевтическом форуме (Благовещенск, 2004), Всероссийском съезде научно-практического общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов (Москва, 2007); научно-практической конференции «Рак желудка в Амурской области» (Благовещенск, 2006); VI, VII региональной межвузовской научно-практической конференции «Молодежь XXI века: шаг в будущее» (Благовещенск, 2005; 2006);

Публикации: По теме диссертации опубликовано 9 печатных работ, в том числе 1 в издании, рекомендованном ВАК РФ.

СТРУКТУРА И ОБЪЕМ ДИССЕРТАЦИИ

Работа состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, заключения, выводов, указателя литературы. Диссертация изложена на 151 листах, иллюстрирована 43 таблицами и 15 рисунками.

выводы.

1. При действии неблагоприятных факторов (длительной антибактериальной терапии, общем лучевом воздействии, экспериментальной кишечной инфекции) наблюдали угнетение лейкоцитарной реакции, СБЗ+лимфоцитов и их основных субпопуляций, продукции иммуноглобулинов основных классов, фагоцитарных реакций (как интенсивности, так и эффективности фагоцитоза).

2. Применение препарата ТВ-103 при длительной антибактериальной терапии приводит к направленной стимуляции популяции СОЗ+лимфоцитов, без достоверного преобладания одной из субпопуляций; нормализации ПРИ и повышению функциональной активности В-клеток, при сохранении их количества; нормализует фагоцитарную активность и эффективность фагоцитарных реакций. При острой кишечной инфекции применение препарата ТВ-103 (производное пиримидина) приводит к восстановлению Т-звена иммунитета, за счет стимулирования субпопуляций Т-клеток при сохранении их соотношения; повышает эффективность В-клеток в обеспечении организма животных иммуноглобулинами основных классов и повышает интенсивность фагоцитарных реакций.

3. Препарат дигидрокверцитин может быть препаратом выбора при хроническом лучевом воздействии, так как его применение приводит к восстановлению лимфоцитарной реакции, снижению дефицита СЭ4+ лимфоцитов, стимуляции В-клеток и повышению их активности в обеспечении организма иммуноглобулинами основных классов, повышению эффективности фагоцитарных реакций (интенсивность фагоцитоза достоверно увеличилась по сравнению с контролем (в 1,5 раза), но была достоверно ниже показателей группы здоровых животных (в 1,3 раза), фагоцитарное число достоверно увеличилось в 1,4 раза по сравнению с контролем).

4. Применение антиоксидантов ТВ-103 и ДГК возможно для коррекции микроэкологических нарушений кишечника при длительной антибактериальной терапии и общем лучевом воздействии, так как его применение снижает негативное воздействие в отношении популяции кишечных палочек при более выраженном эффекте препарата ТВ-103, уменьшает степень колонизации кишечника условно-патогенной микрофлорой, а именно представителями рода Staphylococcus, Enterococcus и грибами рода Candida, при более выраженном антибактериальном воздействии ТВ-103 и фунгистатическом действии ДГК.

РЕКОМЕНДАЦИИ ДЛЯ ВНЕДРЕНИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ В МЕДИЦИНСКУЮ НАУКУ И ПРАКТИЧЕСКОЕ

ЗДРАВООХРАНЕНИЕ.

Результаты проведенных исследований, рекомендуемые для внедрения:

I. В клиническую практику:

1. Антиоксиданты флавоноидной природы могут быть рекомендованы к применению у лиц, подвергшихся острому и хроническому лучевому воздействию, так как оказывают выраженное протекторное действие.

2. Антиоксидантные препараты из группы пиримидиновых производных могут применяться при острых кишечных инфекциях и при длительной терапии антибиотиками.

II. В учебный процесс медицинских ВУЗов:

1. Материалы внедрены в учебный процесс кафедр микробиологии, иммунологии, фармакологии, лучевой диагностики и лучевой терапии ГОУ ВПО Амурской государственной медицинской академии Росздрава.