Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Иммунобиологические механизмы действия гипербарической оксигенации на организм в условиях измененной реактивности

г в од

На правах рукописи

1 О ЯИП ШЗ

ДЬЯЧКОВА СВЕТЛАНА ЯКОВЛЕВНА

ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКИЕ МЕХАНИЗМЫ ДЕЙСТВИЯ ГИПЕРБАРИЧЕСКОЙ ОКСИГЕНАЦИИ НА ОРГАНИЗМ В УСЛОВИЯХ ИЗМЕНЕННОЙ РЕАКТИВНОСТИ

14.00.16 — Патологическая физиология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Москва — 1995

Работа выполнена на кафедре патологической физиологии и в Центральной научно-исследовательской лаборатории Воронежской государственной медицинской академии имени H.H. Бурденко.

Научные консультанты: доктор медицинских наук, профессор, заслуженный деятель науки РФ А.Н.Леонов доктор медицинских наук, профессор, член-корреспондент РАМН А.Я.Кульберг

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор Е.А.Демуров доктор медицинских наук, профессор Г.В.Порядин академик АМТН РФ, доктор медицинских наук, профессор, лауреат Государственной премии СССР В.Л.Лукич

Ведущая организация: Институт общей реаниматологии АМН РФ

Защита диссертации состоится "_"_1996 г.

в "_" часов на заседании диссертационного совета

Д.053.22.01 при Российском Университете дружбы народов (117198, Москва, ул.Миклухо-Маклая, д. 8).

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке Российского Университета дружбы народов

Автореферат разослан " _1995 г

Ученый секретарь диссертационного совета,

доктор медицинских наук, профессор Г.А.Дроздова

Актуальность исследования. В настоящее время при расширении диапазона применения гипербарической оксигенации (ГБО) в клинической практике возникает необходимость фундаментального исследования механизмов действия гипербарического кислорода на различные стороны жизнедеятельности организма в условиях измененной реактивности.

Многолетнее изучение основ гипербарической кислородной терапии позволяет ряду исследователей рассматривать гипербарический кислород с разных позиций: как стрессорный фактор (Г.Л.Зальцман, 1979, 1984), фармакологический агент (В.Л.Лукич, 1973; Б.В.Петровский, С.Н.Ефуни, 1976) и как универсальный адап-тогён (А.Н.Леонов, 1982, 1987, 1994).

Отдельные наблюдения последних лет свидетельствуют об эффективности ГБО-терапии при патоиммунных состояниях (А.М.Поздняков, 1989; Л.А.Киреева, 1991), системных заболеваниях с аутоиммунным синдромом (В.В.Иванов, 1986; В.Л.Лукич с соавт., 1984,1990; Р.С.Сайковская, З.С.Алекберова, 1986), болезнях крови (А.М.Поздняков с соавт.,1994; G.В.Hart et al.,1990), различных видах сепсиса (Б.Р.Бабаджанов с соавт., 1985; М.Л.Введенский, В.А.Романов, 1983; В.Е.Вольф, 1985; А.Б.Граменицкий,'1983; S.R.Thom, 1986) и о влиянии гипероксии на аллергическое состояние (Ю.Н.Белокуров с соавт., 1984; М.В.Даниленко с соавт., 1984; K.UIewicz, D.Zannini, 1986). Отмечая иммуномодулирующий эффект гипероксии, чувствительность лимфоцитов и их популяций к действию гипербарического кислорода, авторы не исследуют иммунобиологические механизмы гипероксического воздействия на организм в условиях измененной реактивности и не создают целостного представления о функционировании физиологической системы иммунного ответа при ГБО.

Проблема динамичности иммунобиологической реактивности — одна из актуальнейших в медицинской науке и практике. Слож-йость функционирования системы иммунного ответа в организме, наличие различных уровней регуляторных связей, многообразие проявлений с вовлечением неспецифических реакций клеток требуют ■научной разработки иммунобиологического обоснования терапевтических возможностей ГБО, определяют актуальность, практическую и теоретическую значимость проведенных исследований.

Исследования выполнены в соответствии с планом научных ра^-бот Воронежской государственной медицинской академии на 19911995 г.г. по комплексной программе (тема: 03.02.02 N гос. регистрации — 01.910 034 535), являющейся частью общероссийской программы (С.01). '

Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы явилось изучение основных закономерностей развития и составных звеньев иммунобиологических механизмов измененной реактивности организма в условиях ГБО.

Для достижения цели были поставлены следующие задачи:

1. Исследовать особенности антителогенеза при первичном Т-зависимом и Т-независимом иммунном ответе гуморального типа после однократного действия ГБО на различных уровнях проявления (рецепторном, клеточном, органном, организменном) и в разные сроки формирования: в индуктивную фазу, на пике иммунного ответа и в поздние сроки иммунизации.

2. Изучить влияние ГБО на факторы иммунной ауторегуляции при различных видах иммунного ответа (Т-зависимом, Т-независимом, противоинфекционном).

3. Определить влияние ГБО на 02-зависимые и 02-независимые процессы в нейтрофилах периферической крови при различных видах измененной иммунобиологической реактивности.

4. Изучить влияние ГБО на процессы перекисного окисления липидов и антиперекисной защиты в иммунокомпетентных клетках селезенки при различных видах иммунобиологически измененной реактивности,

5. Выяснить механизмы лечебного эффекта ГБО при септическом шоке сальмонеллезного генеза.

Научная новизна. Впервые экспериментальная работа посвящена фундаментальному исследованию механизмов действия ГБО при измененной иммунобиологической реактивности организма. Применение ГБО в индуктивную фазу иммуногенеза обеспечивает иммуномодулирующее последействие, которое продолжается после декомпрессии в условиях формирования специфического иммунного ответа. Показано, что при разных видах иммунитета (Т-зависимый, Т-независимый, противоинфекционный) раннее использование ГБО вызывает различный иммунобиологический эффект. Установлена ранее неизвестная взаимосвязь иммунокорригирующего эффекта ГБО с процессами окислительного метаболизма в иммунокомпетентных клетках. Выявлена новая закономерность функциональной чувствительности аутоиммунных регуляторов, связанная с периодом гипероксического воздействия и обусловленная наличием в этот период конкретных регуляторов, а также их взаимным действием на иммуногенез. Получены новые данные, свидетельствующие о значительном влиянии ГБО на 02-зависимые и 02-независимые системы клеточного звена естественной иммунобиологической защиты организма в процессе формирования специфического иммунного ответа. Установлены иммунные механизмы лечебного действия ГБО при эн-

дотоксиновом шоке сальмонеллезного генеза, сущность которых состоит в стимулирующем действии кислорода под повышенным давлением специфических и естественных факторов иммунобиологической защиты организма.

Теоретическое значение работы заключается в развитии новых представлений об общих иммунобиологических закономерностях действия ГБО в условиях измененной реактивности организма. Полученные результаты позволили расширить и детализировать понимание механизмов терапевтического эффекта ГБО, выявить особенности иммунокорригирующего действия кислорода под повышенным давлением в зависимости от периода иммуногенеза, что отражено в положениях, выносимых на защиту;

1. Использование ГБО (303,9 кПа, 1 час) в различные фазы (индуктивная, продуктивная, поздние сроки) Т-зависимого иммунитета приводит к ингибированию, либо стимуляции иммунного ответа, что характеризуется изменением активности специфических процессов иммуногенеза.

2. Использование ГБО в различные фазы (индуктивная, продуктивная, поздние сроки) Т-независимого иммунитета приводит к стимуляции, либо не изменяет интенсивность иммунного ответа.

3. ГБО, примененная непосредственно после иммунизации Т-зависимым или Т-независимым антигенами, активизирует клеточное звено естественной иммунобиологической защиты организма путем оптимизации 02-зависимых ферментативных процессов.

4. ГБО, проведенная непосредственно после заражения Б.аЬоЯиэ ечш, оказывает выраженный лечебный эффект посредством усиления естественной иммунобиологической защиты организма и стимуляции специфического иммуногенеза.

5. Адаптация иммунной системы организма к гипероксии при различных видах иммунитета (Т-зависимый, Т-независимый, проти-воинфекционный) определяется ее состоянием на момент оксигена-ции, а также характером метаболических реакций оксидативного профиля, происходящих в лимфоидном органе и в организме в целом.

Практическая значимость работы. Практическое значение работы заключается в обосновании перспектив применения ГБО при заболеваниях с нарушением иммунного статуса, а также при иммунизации различными антигенами. Полученные данные определяют целесообразность использования ГБО в комплексе неотложных мероприятий при эндотоксикоэе бактериального генеза, создают предпосылки для дальнейшей разработки патогенетически обоснованной ГБО-терапии в зависимости от иммунного состояния организма. Отдельные показатели (уровень Р-белков в плазме, активность 02-

зависимых ферментных систем фагоцитов, содержание продуктов ПОЛ,в сыворотке/плазме) можно использовать как прогностические критерии индивидуальной эффективности гипербарической кислородной терапии.

Реализация результатов исследования. Материалы диссертации составили главу информационного письма МЗ РФ "Теоретические основы гипербарической кислородной терапии" и внедрены в учебный процесс кафедры патологической физиологии (Акт о внедрении от 25.11.93 г.), кафедры педиатрии ФУВ {Акт о внедрении от 14.12.93 г.), кафедры нормальной физиологии (Акт о внедрении от 20.01.94 г.) Воронежской государственной медицинской академии им.Н.Н.Бурденко. Полученные данные послужили основой для разработки методических рекомендаций МЗ РФ "Комплексная лабораторная оценка влияния гипербарической оксигенации на иммунные процессы организма" и внедрены в лечебно-диагностическую работу отделений Воронежской Областной детской клинической больницы (Акт о внедрении от 12.07.94 г.), в отделении ГБО Воронежской Областной клинической больницы (Акт о внедрении от 10.11.94 г.).

По материалам работы оформлено изобретение "Способ определения индивидуальной эффективности ГБО-терапии при остром лейкозе" (К заявки 94-003829/14(003373), на которое получено положительное решение о выдаче патента.

.Апробация работы. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на итоговых и юбилейных научных конференциях ВГМА. (Воронеж. 1988, 1990, 1992, 1993, 1995); IV Всесоюзном симпозиуме по ГБО (Москва, 1989); Всесоюзном симпозиуме "Новые методы прЬгноза патологического процесса" (Курск, 1991); Всероссийской научно-практической конференции "Иммунный статус организма при инфекционной и неинфекционной патологии. Иммунокор-рекция" (Воронеж, 1991); Научно-практической конференции "Путь науки" (Липецк, 1991); Международном симпозиуме "Физико-химические основы функционирования белков и их комплексов" (Воронеж, 1995); Всероссийской научной конференции "Проблемы гипербарической медицины и физиологии" (Санкт-Петербург, 1995).

Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, 6 глав (обзор литературы, описание материала и методик, 3-х глав — результаты собственных исследований, обсуждение полученных данных), заключения, выводов и списка литературы общим объемом 262 страницы машинописного текста, включая 34 рисунка, 23 таблицы в тексте и 28 таблиц в приложении. Библиография содержит 408 источников.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Экспериментальные исследования выполнены на 1110 беспородных, 1220 линейных (BALB/c) мышах-самцах, массой 18 - 24 г и 330 белых крысах-самцах, массой 170 - 200 г.

Изучение адаптационных механизмов действия ГБО при измененной иммунобиологической реактивности проводили на 3-х моделях: Т-зависимого, Т-независимого иммунного процесса и зндоток-синового (септического) шока сальмонеллезного генеза. Т-зависимый антиген (АГ) (эритроциты барана — ЭБ) вводили однократно, внутрибрюшинно (в/бр) в дозе 1-2*108 клеток в объемеДб мл/мышь или 1,0 мл/крыса. Т-независимый АГ (Vi-АГ S.typhi) вводили однократно, внутривенно (в/в) в дозе 1-5 мкг/ мышь/крыса. Эндо-токсиновый шок (ЭШ) вызывали в/бр заражением мышей S.abortus equi в дозах: 0,375 - 0,75 - 1,5 - 3,0 - 6,0 млрд.микр.тел/мышь. ГБО проводили в барокамере при давлении кислорода равном 303,9 кПа (3 ата) в течение 60 минут. ■ т.

Работа выполнена в 12 сериях опытов. 1-я серия — интактные животные; 2-я серия — интактные животные, подвергшиеся ГБО; 3-я серия — животные, которым вводили ЭБ, исследованные в динамике; 4-я серия — животные, получившие ЭБ и подвергшиеся ГБО сразу после их введения, исследованные в динамике; 5-я серия — животные, получившие ЭБ, подвергшиеся ГБО на 2-en 5-е, 7-е, 10-е или 14-е сутки после их введения, и исследованные однократно сразу после воздействия; б-я серия — животные, которым, инъецировали Vi-АГ S.typhi, исследованные в динамике; 7-я серия — животные, получившие Vi-АГ. S.typhi, подвергшиеся ГБО сразу после его введения и исследованные в динамике; 8-я серия — животные, получившие Vi-АГ. S.typhi;.подвергшиеся ГБО на 2-е, 5-е, 7-е, 10-е или 14-е сутки после его введения и исследованные однократно сразу после воздействия; 9-я серия — животные, зараженные различными дозами S.ab.equi, исследованные на выживаемость в динамике по часам; 10-я серия — животные, зараженные различными дозами S.ab.equi, подвергшиеся ГБО при различных параметрах и исследованные на выживаемость в динамике по часам; 11-я серия — животные, зараженные S.ab.equi в дозе 0,375 млрд. микр. тел/мышь и исследованные в динамике в течение 4-х дней; 12-я серия — животные, зараженные S.ab.equi в дозе 0,375 млрд.микр. тел/мышь, подвергшиеся ГБО (3 ата, 1 час) сразу после заражения и исследованные в динамике в течение 4-х дней.

Объектом исследования служили: кровь, сыворотка/плазма крови, селезенка экспериментальных животных. Кровь брали из хвостовых кровеносных сосудов. Спленоциты получали общеприня-

тым методом {Г.Фримель, 1987; Дж.Клаус, 1990), устранение эритроцитов в клеточной взвеси осуществляли посредством "гипотонического шока".

Иммунологические методы. Антигениндуцированные рецепторы на спленоцитах определяли методом иммунного розеткообразования (иРОК) с ЭБ или ЭБ, сенсибилизированными Vi-АГ или экстрактом из S.ab.equi (В.М.Никитин, 1982; Г.Фримель,1987). Разновидностью метода служили "ауто-розетки" (ауто-РОК) с собственными эритроцитами (В.П.Лесков. 1984), гистамин- (Г-РОК) и ацетилхолин- (АЦХ-РОК) розетки (А.Д.Адо,1993) для исследования регуяяторных популяций иммуноцитов. Ig-рецепторы на спленоцитах определяли методом прямой иммунофлюоресценции (Н.В. Энгельгарт, 1968; B.Pernis, 1971; К.Л.Шаханина, 1974). -

Плазмобластическую реакцию в спленоцитах ставили по методу М.Г.Кишева (1968); антителообразующие клетки (АОК) в селезенке определяли прямым , (N.K.Jerne, 1963) или пассивным (А.А.Корукова, 1971) методом локального гемолиза в геле.

Макромолекулярные иммуноглобулины (IдМ) в сыворотке крови определяли методом радиальной иммунодиффузии в геле (G.Mancini, 1970); титры специфических гемагглютининов — в реакции гемагглютинации (РГА) или пассивной (РПГА) гемагглютинации (Г.Фримель, 1987). Комплементарную активность сыворотки крови исследовали гемолитическим методом (Л.С. Резникова, 1967; Е.Кэбот, 1968) и оценивали в СН50 ед/мл. Сывороточные Р-белки определяли методом торможения гемагглютинации с видовой антиг Р-сывороткой (Л.М.Бартова ссоавт., 1990, 1994).

Модельные иммунологические методы проводили на мышах линии BALB/c. Изменение специфической аутоантирецепторной (ААР)-активности при воздействии ГБО определяли in vitro по методу Н.А.Краскиной (1983). Влияние ГБО на супрессорные факторы исследовали in vivo в сравнительном аспекте с действием антису-прессорной (АСС) сыворотки (Н.А.Краскина, 1979). Далее антиген-неспецифические супрессоры определяли in vitro путем оценки су-прессорной активности иммунных клеток селезенки (ИКС) толерантных мышей по отношению к ИКС сингенных животных, примирован-ных другим антигеном (Н.А.Краскина, 1983). Антигенспецифическую супрессию исследовали in vivo в системе адаптивного переноса индуцированных супрессоров сингенным реципиентам на моделях низ-кодозовой и высокодоэовой супрессии (В.М.Писарев, 1977; Б.В.Пинегин, 1982, 1986). Дифференцировку специфических Т- и В-супрессоров (Тс и Вс) проводили путем обработки ИКС доноров специфическими видовыми анти-Т- или анти-В- сыворотками.

Цитохимические методы исследования проводили с нейтрофи-лами периферической крови. Оксидазную активность исследовали с помощью НСТ-теста (М.Г.Шубич, В.В.Медникова, 1978) в спонтанном и стимулированном вариантах с определением фагоцитарного резерва клеток. Миелопероксидазную активность оценивали в реакции с бензидином по Крейбишу (1965). Свободные катионные белки изучали по методу М.Г.Шубича (1974). Интерлейкоцитарный лизо-цим определяли с помощью Micrococcus lysodeicticus (Л.П. Бушме-лева с соавт., 1983).

Биохимические методы исследования. На спектрофотометре СФ-46 изучали в сыворотке/плазме крови гидроперекиси (ГПЛ) ли-пидов (В.Б.Гаврилов, М.И.Мишкорудна, 1983) и малоновый (МДА) диапьдегид (Т.Н.Федорова с соавт., 1983). В ткани селезенки определяли содержание МДА (И.Д.Стальная, Т.Г.Гаришвили, 1977) и активность супероксиддисмутазы (СОД) по I.Fridovich (1974), которую рассчитывали на мг белка (O.H.Lowry et а!.,1951).

Микробиологические методы исследования. Микробное число селезенки у мышей, зараженных S.abortus equi, определяли путем посева взвеси стерильно гомогенизированного органа на висмут-сульфит-агар и оценивали в колониеобразующих единицах (КОЕ) на мг ткани селезенки (М.Н.Бойченко, В.С.Левашов, 1987).

Результаты исследования обработаны статистически с применением критериев Стьюдента, LD5C, доверительных интервалов Igg и методов дисперсионного анализа (И.П.Ашмарин, А.А.Воробьев', 1962; Г.Ф.Лакин, 1973; М.Б.Славин, 1989).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Изменение иммунобиологической реактивности организма обусловлено, в частности, антигенным различием характера иммунного ответа (Р.В.Петров, 1982; А.Е.Вершигора,1990). При этом патогенетически обозначенные этапы постепенного развития иммунной реакции, как правило, одинаковы при разных видах иммунитета. В индуктивную фазу при активации иммунокомпетентных клеток происходит изменение АГ-зависимых рецепторов, микровязкости и потенциала поверхностной мембраны иммуноцита, а также активности ферментов (В.А;Ляшенко с соавт., 1988; А.Е.Вершигора, 1990; M.lnvar, M.Shinitzky,1975). Далее идет дифференциация иммуноцитов в плазмобласты, плазмоциты, АОК и в продуктивную фазу процесс иммуногенеза завершается синтезом антител (AT). Однако факторы аутоиммунной регуляции при различных антигенных раздражениях, изменяют механизм запуска антителообразования, а многообразные

процессы, происходящие в организме, создают варианты, различающиеся индивидуальностью механизмов.

Всякое внешнее воздействие в условиях измененной реактивности организма, включающее адаптационные механизмы, еще более индивидуализировано, сложно и требует экспериментального анализа. Вместе с тем, установление существенных различий между конкретными проявлениями является необходимым условием для понимания общей закономерности, если она действительно существует в изучаемом явлении. Принимая за основу иммунобиологически измененную реактивность и изучая иммунобиологические механизмы действия ГБО, можно получить фундаментальные сведения о функционировании конкретного звена в цепи общих реакций повреждения и адаптации организма.

Механизм действия гипербарической оксигенации

при Т-зависимом иммунобиологическом процессе

Введение гетерологичных эритроцитов приводит к формированию Т-зависимого иммунитета.

Установлено, что после сеанса ГБО, проведенного непосредственно по завершению иммунизации ЭБ, в сыворотке крови животных резко падает уровень специфических гемагглютининов (1од10 титра = 2,11 и 1,96 против 2,44 и 2,47 у неоксигенированных мышей; Р<0,05 - 0,001). Соответственно снижается концентрация 1дМ в сыворотке (1,19±0,10 и 1,77±0,09 мг/мл против 2,04±0,11 и 2,19±0,12 без ГБО; Р<0,01 - 0,05) и уменьшается количество 1дМ-АОК в спле-ноцитах (1од-)0 АОК/селез. 3,12±0,05 против 3,44+0,15 без ГБО; Р<0,05).

Наиболее существенным изменениям на ранней стадии индуктивной фазы иммуногенеза подвергается рецепторный аппарат им-муноцитов. Иммунизация влечет за собой резкое усиление (в 2 и более раз) рецепторной активности функционально различных клеток, доказательством чему служит активизация не только АГ-зависимых, но также и рецепторов к собственным эритроцитам (ауто-РОК), к гистамину (Г-РОК), ацетилхолину (АЦХ-РОК), присущих иммуноре-гуляторным клеткам (Тс) и их предшественникам (Б.Д.Брондз, 1987; А.С.Козлюк с соавт., 1987). Именно на ранней стадии в первые часы после ГБО-воздействия происходит снижение АГ-зависимых рецепторов на лимфоидных клетках (% иРОК = 5,18+0,46 против 7,72±0.73 у неоксигенированных мышей; Р<0,05), которое сохраняется и в дальнейшем на протяжении всего периода исследований (14 дней). В динамике с резкими колебаниями происходит увеличение ауто-РОК, Г-РОК и уменьшение АЦХ-РОК, что позволяет трактовать эти

изменения как косвенный показатель нарушения количественного соотношения клеток или их активности в иммунологическом распознавании и регуляции размножения лимфоцитов (Б.Д.Брондз, 1978, 1987), включая участие нейрогуморальных медиаторов на уровне межрецепторных взаимодействий (А.Д.Адо с соавт., 1983, 1993).

Роль мембранных рецепторов состоит в контролировании окислительно-восстановительного гомеостаза мембран (А.Я. Куль-берг, И.М.Петяев, 1988), а через них и всего метаболизма клеток, и экспрессия рецепторов различной специфичности зависит от физического состояния липидов в плазматической мембране (В.А.Ляшенко с соавт.,1988). Анализ процессов ПОЛ в спленоцитах при иммунизации ЭБ позволил определить в качестве характерных особенностей значительное повышение СОД (0,83 ед/мг белка против 0,68 у интактных) и МДА (3,13 мкМ/г против 2,97 у интактных), судя по которым можно заключить, что при переходе клетки к деятельности с увеличением интенсивности метаболизма и потребления кислорода повышается содержание в ней свободных радикалов и усиливается активность ферментов-детоксикаторов (А.Д, Браун, Т.П. Моженок, 1987). Вместе с тем, насыщение кислородом лимфоидной ткани, создаваемое ГБО, по-видимому, исключает реакцию компенсаторного повышения антиоксидантного фермента (СОД) в селезенке, в связи с чем, в отличие от неоксигенированных животных, уровень МДА в ней в течение первых 3-х дней остается высоким (8,24 и 4,36 мкМ/г против 3,13 без ГБО; Р<0,05). Одновременно во всем организме сразу после ГБО также резко возрастают процессы ПОЛ (повышение ГПЛ и МДА сыворотки), и, поэтому, в этом случае, по всей вероятности, чтобы исключить наибольшие повреждения в жизненно важных органах, компенсаторно увеличивается катаболизм и сброс рецепторов с нелимфоидных клеток, значительно повышая в сыворотке уровень Р-белков (1од2 титра = 14,54+0,18 против 12,84г0,25 у неоксигенированных животных; Р<0,05), участвующих в процессах захвата и переработки активных форм кислорода (А.Я.Кульберг, 1990; Р.Р.Оганян с соавт., 1991).

Ранние проявления адаптационных процессов, происходящих в организме после ГБО, в последующем функционально отражаются на аутоиммунной регуляции, что вполне обосновано, т.к. нарушение окислительно-восстановительного равновесия происходит во всех иммунокомпетентных клетках. Снижение синтеза антител к ЗБ на фоне некоторого уменьшения плазматизации лимфоидной ткани в ранние сроки (3-й день -» КП = 107,29 % против 122,92 у неоксигенированных мышей) происходит при усилении в те же сроки ААР-активности (ИИ = 1,29 и 0,87 против 1,04 и 0,79 без ГБО). Последнее можно объяснить тем, что иммунорегуляторные Тс в ответ на введе-

нив ЭБ появляются достаточно поздно и в небольшом количестве (в наших экспериментах.— на 5-е сутки), и, по-видимому, контролирующую роль аутоиммунного регулятора полностью принимают на себя ауто-АТ (ААТ). Это заключение соответствует известному положению, что накопление лимфоцитов с рецепторами данного идио-типа может индуцировать ААТ, которые, связываясь с лимфоцитами, ограничивают пролиферацию клона и продукцию специфических антител (Т.К.Лопатина,Н.А.Краскина, 1983).:

Постепенно в динамике, благодаря адаптационным процессам, к 14-му дню восстанавливается физиологический ход специфического гуморального иммунитета и большинство изученных критериев у оксигенированных и неоксигенированных иммунных животных не различаются.

Иммунитет в понятии единой универсальной формы самозащиты организма, включающий гуморальное и клеточное звено, дополняет возникшую эволюционно ранее естественную резистентность и на уровне фагоцитоза и системы комплемента соединяется с ней (А.Н.Коротяев с соавт.,1982). Резистентность базируется на специфических и неспецифических механизмах, ее показатели находятся в сложной зависимости от общей реактивности организма, в связи с чем они могут служить одними из основных критериев эффективности процесса адаптации.

В условиях иммунизации ЭБ и ГБО метаболический профиль периферических нейтрофилоцитов подвергается изменению. Сопоставление кинетики 02-зависимых ферментативных процессов в нейтрофилах, содержания в них неферментного катионного белка и лизоцима позволило установить ряд общих и частных особенностей. Первые заключаются в повышении после иммунизации бактерицидной готовности клетки, что обусловлено резким увеличением катион-ных белков, ранней (с первых часов) миелопероксидазной и — несколько позднее (с 3-го дня) — оксидазной активизацией, низким содержанием интерлейкоцитарного лизоцима, которые свидетельствуют об интенсивности ПОЛ, лизосомальной перестройке и генерировании в клетке активированного кислорода и перекиси водорода (В.П. Казначеев, Д.Н.Маянский, 1978). Вторые определяются еще большей интенсивностью перечисленных процессов у оксигенированных животных и некоторым изменением сроков их наивысшего и меньшего проявления, что в итоге четко отражает увеличение фагоцитарного резерва клетки после ГБО в ранние (0-й - 3-й дни) и отдаленные (7-й - 10-й дни) сроки последействия. Связь со специфической иммунной реакцией, помимо функции фагоцитоза, нейтро-филы осуществляют также посредством свободных радикалов, ан-тиоксидантных ферментов и лизосомальных белков, диффундирую-

щих в окружающее межклеточное пространство и далее в кровь (В.А. Алмазов с соавт., 1979; А.Д.Браун, Т.П.Моженок, 1987; Л.Д.Лукьянова с соавт., 1982; В.Е.Пигаревский, 1978; М.гаШ е1 а1., 1965; О.С.гоэсНке, ЬШ.8!аКе, 1987), Возможность такой диффузии, по-видимому, предусматривает в условиях адаптации к ГБО создание на организменном уровне защитных механизмов жизненно более важных органов, в определенных условиях, нежели лимфоидная ткань, в связи с чем АТ-образующая функция ее в данном случае может быть объективно снижена.

Однократный сеанс ГБО, проведенный на 2-е сутки иммунизации ЭБ, также вызывает уменьшение АГ-зависимых рецепторов на мембране спленоцитов и в итоге инициирует ингибирование иммунного ответа. Доказательством служат такие факты, как снижение синтеза 1дМ-АОК на следующий день после воздействия (1од10 АОК/сел.= 2,39+0,06 против 2,80+0,09 без ГБО; Р<0,01) и в последующем — уменьшение продукции АТ (1од2 титра = 6,91±0,31 против 7,82±0,30 без ГБО; Р<0,05), а также усиление ААР-активнойтй. Вместе с тем, процесс адаптации к ГБО завершается быстрее: на 7-й день прекращается снижение специфической рецепторной активности, а подавление АТ-образующей функции (1дМ-АОК и специфические АТ) регистрируется лишь однократно в момент наибольшего их синтеза. В данном случае, поскольку, основной механизм формирования иммунной реакции запущен и метаболические процессы приведены в действие, ГБО, хотя и вносит некоторую корректировку, но, по всей вероятности, вызывает менее интенсивные преобразования в лимфоидной ткани, о чем и свидетельствует укорочение сроков адаптации.

Иная картина наблюдается при использовании ГБО на пике иммунного ответа. В период непосредственно после сеанса ГБО наблюдается усиление специфической рецепторной активности на мембране спленоцитов (% иРОК = 25,52+0,83 против 19,35±1,35 без ГБО; Р<0,01) и существенная интенсификация АТ-образования. Возрастает синтез 1дМ-АОК (1од10/селез. = 3,46+0,09 против 3,13+0,12 без ГБО; Р<0,05) и увеличивается уровень циркулирующих антител {1од2 титра = 6,10+0,35 против 5,00±0,39 без ГБО; Р<0,05).

Эти изменения происходят на фоне активных окислительных процессов. Обращает внимание факт явного преобладания антирадикальных изменений в системе ПОЛ — антиперекисная защита лимфоидного органа. Существенное повышение СОД (1,32±0,04 ед/мг белка против 1,13+0,07 без ГБО) и снижение МДА {10,59+0,77 мкМ/г против 13,23±0,79 без ГБО) в селезенке оксигенированных животных при незначительных нарушениях ПОЛ в организме (сывороточные показатели МДА и ГПЛ), а также повышенном уровне

сывороточных Р-белков, обладающих СОД-активностью, свидетельствуют об окислительно-восстановительном балансе комплекса адаптационных механизмов, способствующем стимуляции иммунного ответа:

Приспособительные реакции метаболизма под влиянием ГБО могут происходить в любых субпопуляциях иммунокомпетентных клеток, вызывая компенсаторное изменение функциональной деятельности, что подтверждает выявленное повышение активности специфических Тс. Однако аутоиммунная регуляция в этот период слагается из нескольких компонентов, определяющих функциональный уровень иммунного ответа. Поскольку специфические Тс появляются лишь на 5-й день иммунизации и, по всей вероятности, их еще недостаточно для подавления АТ-образования в этот срок, а вероятность влияния неспецифических Тс подавлена ГБО, есть основания полагать, что регуляторная функция ААР-актизности в этот период и в этих условиях имеет преобладающее значение. Подавление ААР-активности, вызванное воздействием на пике иммунного ответа ГБО, составляет, по-видимому, помимо всего прочего, основу имму-норегуляторных адаптационных механизмов.

Воздействие ГБО на 7-й день иммунизации практически не изменяет интенсивность иммунного ответа, Незначительное (Р>0,05) снижение специфической рецепторной активности на поверхности спленоцитов, синтеза 1дМ-АОК и специфических антител непосредственно после сеанса ГБО происходит при столь же несущественных колебаниях в системе ПОЛ — антиперекисная защита на уровне лимфоидного органа и всего организма. Возможно, в этот фазовый период иммунологической инертности, по аналогии с запредельным физиологическим торможением, иммуноциты не способны активно реагировать на дополнительный раздражитель. Вместе с тем, обнаруженные в модельных опытах повышение активности специфических Тс и подавление — Вс при воздействии ГБО на 7-е сутки их формирования, свидетельствуют о вероятностном их урегулировании и, в связи с этим, об отсутствии регуляторного влияния на иммунный ответ, тем более, что ГБО, примененная в этот срок, не изменяет ААР-активность.

В период непосредственно после сеанса ГБО, проведенного в отдаленные сроки (10-й - 14-й дни) Т-зависимого иммунного ответа, наблюдается стереотипный эффект стимуляции, отличающийся лишь величиной значимости отдельных критериев. На 10-е сутки воздействия влияние ГБО характеризуется усиленной АГ-зависимой рецепторной активностью (% иРОК = 26,28±1,90 против 17,47+2,54 без ГБО; Р<0,05), повышением синтеза 1дМ-АОК (1од,0АОК/Ю6кл. селез. = 1,22±0,02 против 1,16±0,02 без ГБО; Р<0,05) и незначительным

увеличением уровня АТ, что с наибольшей вероятностью указывает на быструю ответную реакцию со стороны рецепторного аппарата и метаболизма иммуноцитов. Это предположение находит аргументацию в результатах биохимических исследований системы ПОЛ — ан-типерекисная защита, свидетельствующих о существенном преобладании антирадикальных процессов в селезенке и некотором незначительном (Р>0,05) увеличении ПОЛ в организме в целом, которое, по-видимому, не нуждается в компенсаторной корректировке (уровень сывороточных Р-белков снижен).

Действие ГБО на 14-е сутки иммунизации достоверно стимулирует активность АГ-связывающих рецепторов спленоцитов, синтез IgM-AOK и продукцию циркулирующих антител, вызывая при этом, значительное усиление антирадикальных (СОД 2,76+0,32 ед/мг белка против 1,41+0,17" без ГБО; Р<0,01) и подавление (в 2 раза по МДА) перекисных процессов в селезенке при фактическом отсутствии (Р>0,05) изменений в системе ПОЛ всего организма (сывороточные показатели: МДА, ГПЛ, Р-белки).

Стимуляция, вызванная ГБО в отдаленные сроки иммунизации, отражает адаптационные процессы иммунорегуляторного звена, характеризующиеся взаимнопротивоположными функциональными изменениями, такими как повышение активности специфических Тс и подавление — Вс, сохранение возможного влияния неспецифических Тс и подавление ААР-активности. По-видимому, эффект стимуляции иммунобиологической реакции в эти сроки обусловлен интенсивностью отдельных составляющих регуляторного звена, превалирующей над остальными.

Таким образом, применение ГБО в различные периоды Т-зависимого иммуногенеза вызывает различный иммунобиологический эффект. Механизм иммуномодулирующего действия ГБО зависит от метаболического состояния различных популяций и субпопуляций иммунокомпетентных клеток, их функциональной связи между собой и оксидативных процессов в организме на момент воздействия. Преобладание антирадикальных процессов в лимфоидном органе и в организме в целом вызывает иммуностимуляцию. Напротив,' превалирование процессов ПОЛ ведет к иммунодепрессии.

Механизм действия гипербарической оксигёнации при Т-независимом иммунобиологическом процессе

Т-независимый иммунитет формируется при введении iri vivo поверхностных бактериальных полисахаридов (Р.В.Петров, 1982; А.Е.Вершигора, 1990).

Отмечено, что ГБО, проведенная сразу после иммунизации АГ БЛурЫ, стимулирует выработку специфических гемагглютининов (1од10 титра = 1,32 - 2,67 - 2,71; против соответственно 0,97 - 1,74 - 1,92 у неоксигенированных животных; Р<0,05). При этом, в спленоцитах соответственно увеличивается количество • 1дМ-АОК (1од10 АОК/седез. = 4,97+0,18 и 5,65±0,21 против 4,12+ 0,14 и 4,74±0,17 без ГБО; Р<0,01), а в сыворотке повышается уровень макромолекулярных иммуноглобулинов (2,61 ±0,20 и 2,79±0,18 мг/мл против 1,67+0,14 и 2,02±0,10 без ГБО; Р<0,01).

Ранние проявления активации спленоцитов после введения VI-АГ, связанные с реакцией различных рецепторов, отражают естественный ход начальных этапов Т-независимого иммуногенеза. Выявлено, что они характеризуются резким двухфазным увеличением АГ-зависимых рецепторов и появлением регуляторных клеток, сохраняющих эту двухфазность с максимально выраженным первым пиком на 5-е сутки иммунизации и вторым — на 10-й или 14-й дни. Рост иммунорегуляторных клеток может быть связан с увеличением их предшественников (ауто-РОК, Г-РОК), а также свидетельствовать об увеличении стрессовых медиаторов (Г-РОК), сопровождающих любое воздействие, либо регулировать (ауто-РОК, Г-РОК, АЦХ-РОК) размножение различных субпопуляций (Б.М.Гордон, 1990; В.А.Ляшенко, И.М.Молотковская, 1988; и.Ноп^ е! а!., 1983). В связи с изложенным, изменения рецепторной активности, обнаруженные уже в первые часы после сеанса ГБО, информируют о разносторонности ее действия.

Так, увеличение АГ-зависимых рецепторов (% иРОК = 10,30 -18,52 - 17,42 -10,93 -12,70 -18,10 против соответственно: 9,46 - 13,25 - 14,65 - 6,90 - 11,03 - 16,87 без ГБО) свидетельствует об активации специфических процессов, вызванных ГБО на мембране иммуноци-та; повышение ауто-РОК в первые часы (4,44+0,39 % против 2,45±0,26 без ГБО; Р<0,01), на 10-е (5,50±0,55 % против 2,46+0,51 без ГБО; Р< 0,01) и на 14-е сутки (6,24+0,46 % против 2,73+0,33 без ГБО; Р<0,001) после воздействия — о появлении значительного количества предшественников иммунорегуляторных клеток, необходимых, по-видимому, для иммуноадаптации. Существенные различия в показателях АЦХ-РОК по сравнению с иммунными животными, не-подвергавшимися ГБО, выявленные лишь на 7-е сутки после сеанса (7,10+0,60 % против 4,48±0,91 без ГБО; Р<0,05), говорят об усилении регуляции Т-клеточного звена в этот срок. Вместе с тем, отсутствие достоверных различий в показателях Г-РОК у оксигенирован-ных и неоксигенированных животных указывает на то, что действие ГБО в данном случае однотипно специфическому действию АГ и лишь несколько корригирует его. Изменения рецепторной актив-

ности после ГБО, сохраняющиеся на протяжении 14 дней, позволяют характеризовать иммунобиологческую адаптацию при Т-независимом иммунитете как процесс длительный и ступенчатый, объединяющий в виде цепной реакции многочисленные популяции иммунокомпетентных клеток и различные процессы.

Связь рецепторов с АГ может изменять активность ферментов, образующих комплекс с молекулой рецептора, что приводит к изменению метаболического настроя активированного иммуноцита (А.Я.Кульберг, 1987; В.А.Ляшенко с соавт., 1988), а активация метаболизма связана с процессами переокисления в клетке. Действительно, в наших исследованиях иммунизация \Л-АГ вызывает существенное повышение уровня МДА в селезенке (7,78±1,14 мкМ/г против 3,96+0,43 у интактных) и одновременно резкое увеличение СОД (3,50+0,22 ед/мг белка против 2,08±0,20 у интактных). Так как, процессы переокисления липидов при данном виде иммунного ответа выражены значительнее, чем при Т-зависимом иммунитете, насыщение организма кислородом вызывает компенсаторно противоположное действие и стимулирует антирадикальные процессы, в результате чего в селезенке активизируется СОД (4,27+0,24 ед/мг белка против 3,50+0,22 без ГБО; Р<0,05) и несколько снижается МДА (5,96±1,05 мкМ/г против 7,78+1,14 без ГБО), а в организме в целом резко падает уровень МДА (38,49+4,40 мкМ/л против 55,03±3,07 без ГБО; Р<0,01) и ГПЛ (0,66±0,15 ед против 0,72+0,11 без ГБО). При этом потребность в реакциях компенсаторного захвата и переработки активных форм кислорода в организме уменьшается, следствием чего является уменьшение катаболизма и сброса рецепторов, а также значительное снижение уровня сывороточных Р-белков (!од2 титра = 9,84±0,33 против 11,14+0,22 без ГБО; Р<0,01).

Особенностью формирования Т-независимого иммунобиологического процесса является ауторегуляция, осуществляемая Тс с 1-го дня иммунизации, что сопоставимо с литературными данными (М.С.Бляхер, З.П.Белкин, 1983; Т.К.Лопатина, Н.А.Краскина, 1983). В то же время в условиях ГБО, проведенной сразу после иммунизации, при отсутствии в первые часы аутоантирецепторных антител, функциональное повышение активности еще небольшого количества специфических Тс, по-видимому, нивелируется подавлением возможного влияния неспецифических Тс. Вследствие этого имму-ностимуляция, по всей вероятности, обусловлена повышением ре-цепторной активности, способствующей связыванию большего количества АГ-детерминант, тем более, что Тс не препятствуют этому процессу (М.С.Бляхер с соавт., 1983), а также усилением метаболизма в клетках плазмоцитарного ряда сразу после воздействия

(КП= 170,34±14,31 % против 130,37±6,24 без ГБО; Р<0,05). Именно увеличение плазматизации лимфоидных клеток за счет молодых форм: плазмобластов (89,97+9,96 /на 1000 кл. против 79,24+6,01 без ГБО) и незрелых плазмоцитов (49,99+8,03 /на 1000 против 25,46+4,74 без ГБО) в дальнейшем способствует повышению продукции 1дМ-антител (И.Н.Кокорин, 1964; В.Г.Кондратенко, 1966).

Введение антигена меняет сопряженность обменных процессов как внутри одного и того же лимфоидного органа, так и между иммунными органами, а также органами и лимфоцитами (З.М. Михайлова с соавт., 1972). Развитие строго специфических иммунных реакций базируется на неспецифических , и от уровня последних зависит в первую очередь интенсивность специфического иммунного ответа (З.М. Михайлова, 1978). Оценивая естественную иммунобиологическую защиту организма при Т-независимом иммунитете, обнаружили, что метаболические изменения в клеточном звене, обусловленные 02-зависимыми процессами, протекают с высокой оксидаз-ной активностью (% (+)-клеток = 29,70±3,19 и 46,00+2,76 против 21,40±1,63 и 31,00+3,16 у интактных в спонтанном и стимулированном вариантах НСТ-теста) и резко сниженной на протяжении 10 дней перо'ксидазной активностью (ИАН = 0,85 - 0,75 - 0,64 - 0,68 - 0,80 усл.ед;' против соответственно: 0,90±0,06 у интактных), что косвенно свидетельствует о значительной наработке супероксидных анионов (В.А.Алмазов с соавт., 1979; А.Д.Браун, Т.П.Моженок, 1987; В.П.Казначеев, Д.Н.Маянский, 1978), способных инициировать цепные реакции ПОЛ. Что касается 02-независимой микробицидной системы периферических нейтрофилоцитов, то в условиях иммунизации \Л-АГ она проявляется, в основном, повышенным содержанием неферментных катионных белков, являющихся модификаторами ферментативных процессов в клетке (В.Е.Пигаревский, 1978;

H.^еуа, чЖ.Бр^паде!, 1971), и уменьшением количества интерлейкоцитарного лизоцима.

В этих условиях внутриклеточного окислительного метаболизма воздействие ГБО еще более усиливает оксидазную активность ней-трофилов, в результате их фагоцитарный резерв увеличивается в

I,41 раза с первых часов и на протяжении всего периода иммунизации. Характерно, что, при этом, низкая пероксидазная активность нейтрофилоцитов под влиянием ГБО существенно снижается в отдельные (5-й, 10-й) дни (ИАН = 0,45+0,05 и 0,54+0,08 усл.ед. против соответственно: 0,64±0,07 и 0,80±0,06 без ГБО ; Р<0,05). В системе 02+юзависимых критериев ГБО резко уменьшает содержание катионных белков" в течение первых 5 дней и, напротив, в те же сроки несколько увеличивает продукцию и активность лейкоцитарного лизоцима. Таким образом, функционирование клеточного звена есте-

ственной иммунобиологической защиты организма в условиях ГБО, в значительной мере зависящее от особенностей микроокружения (В.А.Алмазов с соает., 1979), осуществляется, в основном, 02-зависимой антимикробной системой, не требующей присутствия миелопероксидазы (Б.ЮеЬапоН, 1975), за счет активных форм кислорода, способных, в свою очередь, диффундировать в окружающую среду (Е.Е. Дубинина, 1989; А.Н.Осипов с соавт., 1990). Попав в плазму, активные формы кислорода гасятся ее антиоксидантной системой, обусловленной различными низко- и высокомолекулярными соединениями, носящими ферментативный или неферментативный характер (Е.Е.Дубинина, 1992; В.НаШюеИ, М.С.ОиИепс1де, 1990), о чем косвенно свидетельствует в наших экспериментах повышение с 3-го дня уровня Р-белков.

Однократный сеанс ГБО, проведенный на 2-е сутки после введения \Zi-Ar, также вызывает иммуностимуляцию, доказательством чему служат: усиление АГ-зависимой рецепторной активности на мембране спленоцитов, увеличение синтеза 1дМ-АОК уже на следующий день после воздействия <1од10 АОК/селез. = 3,56+0,14, против 2,92±0,12 без ГБО; Р<0,01) и в последующем — увеличение продукции АТ (1од2 титра = 8,71+1,04 против 7,82+0,89 без ГБО). Имму-норегуляторное действие специфических и неспецифических Тс в этот период, по-видимому, взаимноуравновешены, а вероятностное влияние появляющихся ААТ подавлено ГБО, либо еще не выражено, в силу чего, стимулирующий эффект обеспечивают неспецифические, в частности, метаболические процессы на органном и ..организм менном уровнях, "

Пик Т-независимого иммунного процесса соответствует максимальной выраженности иммунологических функций, характеризуемся повышенным синтезом 1дМ-АОК с последующей выработкой специфических АТ и сопровождается метаболическими нарушениями в организме. Результаты биохимических исследований свидетельствуют (по сравнению с интактными) об активизации окислительных процессов в селезенке (увеличение МДА более, чем в 3 раза) и в организме в целом (повышение сывороточных показателей ГПЛ и МДА), а также о формировании выраженных компенсаторно-приспособительных реакций в лимфоидном органе (СОД = 3,46+0,19 ед/мг белка против 2,08±0,20 у интактных; Р<0,001).

Воздействие ГБО в этот период вызывает непосредственно после сеанса иммуностимулирующий эффект с увеличением в спле-ноцитах числа иРОК (22,66±0,90 % против 20,03±0,77 % у неоксиге-нированных животных; Р<0,05), 1дМ-АОК (1од10 АОК/селез. = 5,72+0,11 против 4,98±0,27 без ГБО; Р<0,05) и уровня гемагглютининов (1од10 титра = 2,65±0,20 против 2,50+0,33 без ГБО),

что свидетельствует о быстроте ответной реакции. Действительно, иммунологические сдвиги сопровождаются изменением окислительных процессов. Причем, если переокисление липидов в организме (сывороточные критерии ГПЛ и МДА) и лимфоидном органе (МДА селезенки) усиливается незначительно (Р>0,05) и не требует компенсаторного вмешательства адаптационных механизмов на орга-низменном уровне (титр Р-белков неизменен), то антирадикальная защита селезенки возрастает существенно (СОД = 3,99±0,17 ед/мг белка против 3,46±0,19; Р<0,05).

Со стороны иммунорегуляторного звена, способствующего стимуляции иммунного ответа в этот срок, под влиянием ГБО компенсаторно-приспособительные реакции метаболизма, вызывающие изменение функциональной деятельности клеток-регуляторов регистрируется на уровне Тс и ААТ. Выявленное в модельных опытах повышение активности специфических Тс, однако, может быть уравновешено подавлением вероятностного влияния неспецифических Тс, и, в таком случае, снижение под действием ГБО ААР-активности является определяющим в аутоиммунных адаптационных механизмах.

Воздействие ГБО на 7-й день иммунизации УнАГ практически не изменяет интенсивность иммунного ответа. Несущественное (Р>0,05) повышение АГ-зависимых рецепторов на мембране спле-ноцитов, синтеза 1дМ-АОК и специфических АТ непосредственно после сеанса ГБО проходит, тем не менее, на фоне активизации окислительных процессов. Значительное усиление ПОЛ в организме (МДА сыворотки = 37,83±3,39 мкМ/л против 27,13+0,62 без ГБО; Р<0,01; ГПЛ сыворотки = 0,98±0,13 усл.ед. против 0,67+0,09 без ГБО) влечет за собой компенсаторное увеличение уровня сывороточных Р-белков (1од2 титра = 11,24+0,16 против 9,94±0,37 без ГБО; Р<0,01) и повышает антирадикальную защиту в селезенке (СОД = 4,06±0,52 ед/мг белка против 2,87±0,30 без ГБО; Р<0,05). В системе аутоиммунной регуляции в этот период главенствующая роль принадлежит ААТ, т.к. количество Тс и Вс невелико (Н.А.Краскина с со-авт., 1983), что подтверждают и наши исследования (ААР-активность: ИИиРОк = .3,18; ИИАОК = 1,31), Поэтому изменения, вызванные в этот срок ГБО и обнаруженные в модельных опытах, такие как повышение активности специфических Тс и подавление — Вс, ААТ, действия неспецифических Тс, по-видимому, уравновешены функционально, либо в количественном соотношении клеток-регуляторов и не оказывают существенного влияния на интенсивность иммунного ответа.

В период непосредственно после сеанса ГБО, проведенного в отдаленные сроки (10-й, 14-й дни) Т-независимого иммуногенеза, существенных изменений иммунного ответа не наблюдается. Тем не

менее, незначительные <Р>0,05) колебания интенсивности иммунной реакции в отдельные дни происходят на фоне резкой активизации ПОЛ в организме в целом.

На 10-й день иммунизации воздействие ГБО вызывает сразу после сеанса несущественное (Р>0,05) увеличение АГ-зависимой рецепторной активности, синтеза !дМ-АОК и уровня специфических АТ, что сопровождается столь же незначительным (Р>0,05) повышением МДА и СОД-активности в селезенке. Вместе с тем, судя по сывороточным показателям ПОЛ {ГИДА = 46,82+2,47 мкМ/л против 34,47±2,22 без ГБО; Р<0,01; ГПЛ = 1,50±0,17 усл.ед. против 0,53±0,08 без ГБО; Р<0,001) в организме прогрессируют процессы переокисления, в результате чего компенсаторно увеличивается уровень Р-белков (1од2 титра = 11,84±0,25 против 11,14±0,17 без ГБО; Р<0,05), снижающих в биологических жидкостях содержание активных форм кислорода (А.Я.Кульберг, 1990). Эта мобилизация антиоксидантной защиты плазмы крови, в свою очередь, важна и для клеток, фосфолипидные мембраны которых проницаемы к супероксидным радикалам (Е.Е.Дубинина, 1992; В.К.Кольтовер, 1987). Аутоиммунная регуляция в этот срок осуществляется, в основном, за счет Тс и Вс, т.к. ААР-активность минимальна (Н.А.Краскина с со-авт., 1983), что сопоставимо с нашими данными (ААР-активность: ИИаРСЖ = 1,09; И И док = 0,69). Если учесть стереотипный эффект ГБО: подавление активности ААТ, Вс, неспецифических Тс и повышение специфических Тс, а также количественное соотношение ре-гуляторных компонентов, то становится очевидным незначительный перевес в сторону устранения негативных факторов иммунного контроля, что, по-видимому, поддерживает тенденцию к повышению специфического иммунного процесса.

На 14-й день иммунизации действие ГБО фактически не изменяет интенсивность иммунного ответа. Незначительное (Р<0,05) уменьшение АГ-специфической рецепторной активности, синтеза 1дМ-АОК и уровня циркулирующих АТ сопровождается столь же несущественным (Р>0,05) снижением перекисных (МДА) и антирадикальных (СОД) процессов в селезенке. В то же время в целом организме ПОЛ значительно увеличивается (МДА сыворотки = 47,74±2,30 мкМ/л против 24,46±1,35 ; Р<0,001; ГПЛ = 0,66+0,08 усл.ед. против 0,49+0,09 без ГБО). Механизмы компенсации имму-но-регуляторного звена в условиях ГБО взаимноуравновешены и обусловлены подавлением активности специфических Вс и повышением Тс, действие которых, по-видимому, взаимно уравновешено. Однако несколько возросшая к этому сроку иммунизации активность ААТ (ИИиР0К = 1,17; ИИА0К = 0,98), не измененная воздействием

ГБО, по всей вероятности, может способствовать тенденции к снижению интенсивности иммунного ответа.

Таким образом, применение ГБО в различные периоды T-независимого иммуногенеза вызывает различный по интенсивности, но, в основном, стереотипный иммуностимулирующий эффект, что можно связать с преобладанием антирадикальных процессов в лим-фоидном органе, а также фазными функциональными изменениями в иммунокомпетентных клетках.

г- '

Механизм действия гипербарической оксигенации при сальмонеллезном эндотоксиновом шоке

Эндотоксиновый шок возникает при заражении массивными дозами Гр(-) бактерий. При этом, в несмертельных случаях происходит формирование противоинфекционного иммунитета. В классическом варианте зндотоксинового шока сальмонеллезного генеза возможны бактериемия и эндотоксинемия (С Г.Пак с соавт., 1988).

Комплексное исследование эффективности различных параметров и режимов ГБО ггри эндотоксиновом шоке, индуцированном различными дозами S.ab'ortus equi, позволило выделить режим 3 ата 1 час,, проведенный сразу после заражения, что аргументируется увеличением продолжительности жизни животных на 12,5 часов, ускорением самоочищаемости организма от возбудителя (КОЕ/мг селезенки = 268,50±27,20; 87,87±5,79; 71,17±7,58; без ГБО соответственно = 383,38±4,22; 129,14+6,02; 98,57+10,51; Р<0,05'- 0,001) и значительным (Р<0,05) снижением биологической активности эндотоксина на протяжении 42 часов.

При использовании средних доз S.abortus equi и воздействии ГБО происходит усиление специфической иммунной реакции организма на возбудитель, подтверждением чему служат АГ-зависимые мембранныр цррцессы на спленоцитах, стимуляция IgM-AOK (log10 АОК/селез. = ЗД8±0,21 против 2,26±0,18 без ГБО; Р<0,01) и уровня макромолекулярных иммуноглобулинов (3,20+0,26 мг/мл против 2,06±0,29 без ГБО; Р<0,05).

Наиболее существенные изменения возбудитель вызывает на мембране иммунокомпетентных клеток в первые часы после заражения (D.C.Morrison, J.A.Rudbach, 1981). Увеличивается в 2,3 раза по сравнению с интактными животными экспрессия АГ-связывающих и, что особенно существенно, плотность lg-рецепторов ("кэп"-образование: 0,32+0,05 % против 0,28+0,05 без ГБО), свидетельствующих о начале специфического иммунного процесса. Одновременно повышается количество иммунорегуляторных клеток, реагирующих на стрессовые медиаторы (Г-РОК), либо регулирующие

размножение лимфоцитов (АЦХ-РОК) и уменьшается количество предшественников клеток-регуляторов (ауто-РОК),и возможна, за счет ускорения созревания и перехода гих в конкретный разряд регулирующих клеток. В дальнейшем динамика рецепторной активности у нелеченых животных отражает нарастание в тенение-4-х дней специфических (иРОК, ИГ-рецепторы) и фазность регуляторных (ауто-РОК, Г-РОК, АЦХ-РОК) процессов, "свойственных, по-видимому, физиологическому характеру формирования противоинфекционного иммунитета.

Вмешательство гипербарического кислорода в этот процесс характеризует в качестве неспецифического влияния незначительное (Р>0,05) повышение стрессовых медиаторов (Г-РОК) сразу после воздействия и их резкое увеличение к 4-му дню (14,91+1,12 % против 10,45+0,70 без ГБО; Р<0,01) — в период нарастания клинических проявлений, что может быть связано с перераспределением гиста-мина в лимфоидных фолликулах селезенки (И.Г.Зеленова,~1982) в результате метаболических изменений в них. Специфическая функция рецепторов, связанная с АГ, под влиянием ГБО резко возрастает уже в первые часы последействия как среди недифференцированных (иРОК) рецепторов (21,69+0,76 % против 18,09+1,48 без ГБО; Р<0,05), так, что существенно, среди спонтанных и особенно специфически стимулированных !д-рецепторбв в форме ускорения "пэтч"-(% клеток = 4,65±0,20 против 4,00+0,21 без ГБО; Р<0,05) и "кэп"-образований (% клеток = 0,86+0,13 против 0,51±0,08 без ГБО; Р<0,05) и наблюдается на протяжении 4-х дней. Изменение регуля-торной функции рецепторов под влиянием ГБО отражают реакции ауто-РОК и АЦХ-РОК. Так, ГБО увеличивает в течение всего срока наблюдений (4 дня) число рецепторов, свойственных предшественникам иммунорегуляторных клеток (ауто-РОК). В то же время в первые сутки ГБО снижает количества рецепторов (% АЦХ-РОК = 10,67±0,82 против 15,56+1,66 без ГБО; Р<0,05) клеток, ответственных за регуляцию размножения лимфоцитов (В.А.Ляшенко с соавт., 1988), что может быть обусловлено неспецифической адаптационной реакцией (З.М.Михайлова, 1978), вызванной двойным стрессовым воздействием, тем более, что в дальнейшем количество АЦХ-РОК нарастает, однако на 4-е сутки вновь резко (Р<0,05) падает, отражая, в этом случае, уже специфические метаболические процессы в лимфоцитах.

Взаимодействие рецептора, являющегося реактивным компонентом биологической мембраны, со своим АГ индуцирует ряд кооперативных процессов, изменяющих функциональное состояние мембраны. Это отражается на активности локализованных в ней ферментов, в свою очередь, передающих сигнал от рецептора

внутрь клетки (В.А.Ляшенко, И.М.Молотковская, 1988; T.Wileman,

1985), превращая этот сигнал в иммуногенный стимул. Последний запускает в клетке оксидативные механизмы метаболизма, которые, судя по полученным результатам, в данном случае характеризуются наращиванием процессов ПОЛ в лимфоидном органе (МДА = 3,12+0,27 мкМ/г против 1,78±0,18 у интактных; Р<0,001), не компенсированных (Р>0,05) антирадикальной защитой (СОД селезенки). В организме в первые часы после заражения также резко возрастает ПОЛ (МДА в сыворотке = 43,67±3,86 мкМ/л против 32,28±1,06 у интактных; Р<0,05). Однако уже через сутки в селезенке почти вдвое увеличивается СОД-активность и снижается до уровня биологического контроля содержание МДА. Мощная мобилизация антиокси-дантной системы на организменном уровне и, прежде всего, самой сыворотки снижают в 3,5 раза по сравнению с первоначальным подъемом уровень МДА в сыворотке, в результате чего он становится ниже уровня интактных животных. Вслед за этим происходит вероятностное истощение компенсаторных механизмов, доказательством чего служат: резкое усиление ПОЛ в организме (увеличение сывороточной МДА в 2,2 раза), в селезенке (увеличение МДА в 1,6 раза) с постепенным снижением в последней антиокислительной защиты (СОД) и мобилизация организмом дополнительных антирадикальных механизмов (резкое увеличение уровня сывороточных Р-белков с 11,88±0,49 до 14,84+0,37 log2 титра; Р<0,001).

Стратегия реакций адаптации окислительно-восстановительного характера при ЭШ и действии ГБО должна заключаться в усилении антирадикальных процессов и сдерживании пероксидации, степень которой характеризует тяжесть клинического течения саль-монеллеза (Л.Б.Оконенко, 1987). В патофизиологическом плане повышение ПОЛ при сальмонеллезном сепсисе может свидетельствовать о снижении активности окислительно-восстановительных и гидролитических ферментов в различных органах (С.Г.Пак с соавт., 1988); нарушении 02-транспортной функции крови (Л.А.Позина,

1986); сопутствующей гипоксии, обусловленной поражением 02-регулирующих и 02-утилизирующих систем (А.Б.Граменицкий, 1983), что при формировании противоинфекционного иммунитета можно оценить как ограничивающий или ослабляющий механизм.

Основной реакцией, снижающей ПОЛ в лимфоидном органе, является увеличение СОД-активности, которая сразу после ГБО возросла в 2 раза по сравнению с неоксигенированными животными (4,93±0,63 ед/мг белка, против 2,44±0,32 ; Р<0,01). Действенность антирадикальной защиты селезенки оставалась существенной и через сутки (5,21+0,42 ед/мг белка против 3,85±0,37 без ГБО; Р<0,05), что соответствует данным о сохранении изменений окислительных

процессов в тканях не менее суток после сеанса (В.В.Мацынин, 1982), после чего различия в группах становились недостоверными. Параллельно в те же сроки под влиянием ГБО происходит снижение уровня МДА в селезенке (2,15±0,32 и 1,29+0,17 мкМ/r против соответственно: 3,12±0,27 и. 1,89+0,20 у неоксигенированных; Р<0,05) и несколько дольше держится снижение {до 2-х суток) в сыворотке (МДА = 30,15±2,60; 8,50+0,98 и 22,71+1,21 мкМ/л против соответственно: 43,67±3,86; 12,49+1,02 и 28,14+1,35 без ГБО; Р<0,05), после чего к 4-му дню наблюдений процессы ПОЛ нарастают.

Кратковременное улучшение окислительно-восстано-вительных процессов в иммунокомпетентных клетках, обусловленное неспецифическим действием ГБО, на фоне сальмонеллезного эндотоксико-за, способствует специфическому антителообразованию. Это подтверждается существенно возросшей силой суммарного влияния 2-х факторов (возбудитель + ГБО), обнаруженной при факториальном анализе. По-видимому, в данном случае имеет место и воздействие ГБО на микроорганизмы, находящиеся in vivo.

Усиление клеточного метаболизма повышает плазматизацию лимфоидных клеток, наиболее выраженную на 2-е - 3-е сутки (КП = 263,11+ 7,28 и 402,05±22,71 % против 226,63+5,15 и 285,79+22,15 у неоксигенированных; Р<0,01), за счет, в большей степени (Р<0,01) плазмобластов, и в меньшей (Р>0,05) — зрелых плазмоцитов, увеличивая в последующем содержание в сыворотке макромолекулярных иммуноглобулинов.

Аутоиммунный контроль в данном случае может осуществляться (R.Davies, I.Kolarski, 1976) Т-клеточными субпопуляциями, т.к. в исследуемые ранние сроки другие регуляторы {ААТ, Вс) отсутствуют, и влияние ГБО, по-видимому, взаимно уравновешивает разнонаправленные изменения в действии специфических и неспецифических Тс.

В развитии иммунобиологической сопротивляемости инфекции активная роль принадлежит естественным факторам защиты. Особенности метаболизма ее клеточного звена позволяют использовать энергию для реализации двигательной, фагоцитарной активности, а также при синтезе жирных кислот в результате ряда ферментативных превращений (В.А.Алмазов с соавт., 1979). Активизация метаболизма фагоцитов взаимосвязана с его антибактериальной функцией, осуществляемой 02-зависимой и 02-независимой бактерицидными системами (S.KIebanoff, 1975) посредством генерации активных форм кислорода (Л.Ф.Панченко с соавт., 1981; R.Weenning et al., 1975; T.J.Yost, I.Fridovicb, 1974), действия лизосомальных энзимов, неферментных белков, ряда биологически активных веществ (В.А.Алмазов с соавт,, 1979; В.Е.Пигаревский, 1978; M.Zatti et al.,

1965) и их способности выделяться как внутрь, так и наружу клетки (B.M.Babior, 1978, 1982; D.Roas, R.S.Weening, 1979; G. Weismann, 1976). Заражение животных S.abortus equi с первых часов интенсифицирует ПОЛ в периферических нейтрофилоцитах. Высокий уровень функциональной активности фагоцитов обеспечивается за счет максимальной ферментативной оптимизации 02-зависимой системы путем наработки активных форм кислорода, о чем с большой достоверностью свидетельствуют; значительное увеличение в сравнении с интактными животными оксидазной активности е спонтанном (в 2,3 раза) и стимулированном (в 1,6 раза) вариантах HCT-теста и повышение более чем в 2 раза миелопероксидазной активности. При этом, низкие показатели компонентов 02-независимой системы фагоцитов (катионные белки, лейкоцитарный лизоцим) в этот срок могут быть обусловлены их повышенным выбросом из клетки (А.А.Аваков, Н.М.Грачева, 1983; H.J.Zeya, J.K.Spitznagel, 1971). Таким образом, пероксидация в фагоцитах в первые часы заражения играет доминирующую роль, что обосновано снижает (более чем в 3 раза) фагоцитарный резерв нейтрофилов. В динамике к 4-му дню наблюдается ослабление функционирующих механизмое обеих систем, обеспечивающих антибактериальную способность фагоцитоз.

У животных, подвергшихся ГБО, повышенная утилизация кислорода нейтрофилами, связанная с запуском функциональной деятельности, по-видимому, компенсируется избытком поступающего гипербарического кислорода. В результате оксидазная активность в спонтанном варианте HCT-теста существенно снижается (ИАН = 0,34±0|03 усл.ед. против 0,50+0,06 у неяеченных животных; Р<0,05), а в стимулированном — несколько повышается (ИАН = 0,57+0,04 усл.ед. против 0,54+0,02 без ГБО), что позволяет клетке в первые же часы в 6 раз увеличить фагоцитарный резерв по сравнению с неоксигенированными и в 2 раза по сравнению с интактными животными. Функционирование оксидазной знзиматической системы в первые часы после ГБО является основной, т.к. активность миелопе-роксидазы остается на уровне показателей у нелеченых животных, а синтез катионных белков и лейкоцитарного лизоцима после вероятностного их выброса из клетки еще не налажен. В последующем происходит активизация под влиянием ГБО всех компонентов 02-зависимой и 02-независимой систем микробицидной защиты периферических нейтрофилоцитов, что позволяет считать клеточное звено естественной резистентности при ЭШ одним из ранних и важных механизмов иммуноадаптации к гипероксии.

Следует отметить, что гуморальный компонент естественной иммунобиологической защиты организма, как комплементарная активность, резко сниженная в первые 2 дня после заражения (СН50

ед/мл = 9,35+0,25 и 9,02+0,66; против 11,16+0,49 у интактных; Р<0,05), под влиянием ГБО существенно возрастает лишь в первые часы (СН50 ед/мл = 11,88±0,95 против 9,35±0,25 без ГБО; Р<0,05), а затем снижается, по-аидимому, за счет интенсивного участия в иммунных реакциях (А.Б.Граменицкий, 1983).

Таким образом, воздействие ГБО при ЭШ сальмонеллезной природы, оказывает влияние, с одной стороны, на естественную резистентность организма, создавая, при этом, наиболее благоприятный тип метаболической иммуноадаптации, а с другой — на формирование специфического иммунного ответа и отражает многофункциональный уровень иммунобиологических механизмов лечебного эффекта гипероксии.

Эффект ГБО в интактном организме

Воздействие ГБО на интактный организм исключает взаимодействие кислородного фактора с иным патогенным агентом, в результате чего здоровые животные могут служить моделью для изучения точек приложения гипербарического кислорода в механизмах развития защитной иммунобиологической реакции.

Наибольшие изменения, способные повлиять на иммунные реакции, обнаружены в системе ПО/1 — антиперекисная защита селезенки. В разных сериях опытов выявлена одинаковая закономерность. Сразу после сеанса ГБО резкое увеличение МДА компенсаторно повышает СОД-активность спленоцитов, что на фоне возросшей пероксидации в организме (сывороточные показатели МДА и ГПЛ) составляет индивидуальную защиту лимфоидного органа. Процессы окислительно-восстановительного баланса нормализуются к 10-му -14-му дню (С.Я.Дьячкова, Т.Д.Новосельцева, 1989).

Значительной чувствительностью к гипербарическому кислороду отличаются и периферические нейтрофилоциты с уникальной схемой изолированного метаболизма и большим энзиматическим набором (В.А.Алмазов с соавт., 1979; В.Е.Пигаревский, 1978). В условиях ГБО интактные нейтрофилы существенно (Р<0,05 - 0,001) снижают оксидазную активность, но, при этом, увеличивается количество клеток, содержащих миелопероксидазу. Изменение Ог-зависимай бактерицидной системы нарушает, по всей вероятности, функционирование 02-независимой, снижая содержание катионных белков и лейкоцитарного лизоцима. Восстановление нарушенного метаболизма фагоцитов происходит в течение 7 -14 дней.

Под действием ГБО в сыворотке крови резко снижается (Р<0,05) общая комплементарная активность, которая достигает уровня интактных животных лишь к 14-му дню.

С достоверной силой влияния однократный сеанс ГБО изменяет рецепторную активность интактных спленоцитов к ЭБ, \Л-ЭБ, а после 3-5 сеансов усиливается "кэппинг" на брюшнотифозный антиген, гидрокортизон, цистеин (С.Я.Дьячкова, Т.Д.Новосельцева, 1989), подчеркивая неспецифичность эффекта, обусловленного, по-видимому, изменением мембранного потенциала и микровязкости плазматической мембраны иммунокомпетентных клеток (В.А.Ляшенко, И.М.Молотковская, 1988). Длительность эффекта до 10 дней свидетельствует о протяженности преобразований в фосфо-липидных биомембранах.

Таким образом, реакция интактного организма на гипероксию содержит элементы биологической адаптации на клеточном, органном и организменном уровнях и отражает обратимые функционально-метаболические процессы последействия. Основными адаптационными иммунобиологическими проявлениями ГБО следует считать изменения рецепторной активности, ферментативных процессов в иммунокомпетентных клетках, а также оксидативного метаболизма в лимфоидных органах.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Комплексное исследование адаптационно-функционального состояния иммунобиологической системы при измененной реактивности организма в условиях ГБО выявило ряд общих закономерностей и частных особенностей в механизмах иммуноадаптации.

Независимо от вида иммунного ответа {Т-зависимый, Т-независимый, противоинфекционный) ГБО инициирует формирование типовых адаптивных реакций, которые действуют на уровне: рецепторы — мембрана — иммунокомпетентные клетки — лимфоидные органы — аутоиммунная регуляция. В соответствии с выраженностью окислительно-восстановительного метаболизма в иммунокомпетентных клетках, обусловленного АГ-активацией, ГБО ингибирует, стимулирует, либо оставляет без изменений иммунные реакции организма, Пусковым механизмом иммуномодулирующего действия ГБО, определяющим уровень активности специфического иммунного процесса гуморального типа, является синтез АТ, объединяющий ряд последовательных преобразований в клетках иммунобиологической системы организма.

Формирование Т-зависимого иммунитета в условиях ГБО характеризуется всеми 3-мя эффектами.

Ингибирующий эффект обусловлен воздействием ГБО в индуктивную фазу Т-зависимого иммуногенеза и связан со снижением образования специфических АТ и макромолекулярных иммуноглобу-

линов. При этом уменьшается АГ-зависимая рецепторная активность на спленоцитах, увеличивается их чувствительность к стрессовым медиаторам (Г-РОК), изменяется соотношение регуляторных клеток, уменьшается плазматизация в лимфоидной ткани и число 1дМ-АОК. Снижение процессов АТ-образования происходит на фоне инертности антирадикальной защиты (СОД) лимфоидного органа при резко выраженной пероксидации в нем и в других тканях организма (увеличение в плазме крови содержания МДА и ГПЛ). Обнаружено, что в периферических нейтрофилоцитах усиливаются 02-зависимые ферментативные процессы, снижатся активность лейкоцитарного ли-зоцима.

Стимулирующий, эффект обусловлен воздействием ГБО на пике иммунного ответа и в поздние сроки (10-й, 14-й дни) Т-зависимого иммуногенеза. Высокий иммунный потенциал характеризуется интенсификацией антителообразования на фоне преобладания антирадикальных изменений в системе ПОЛ — антиперекисная защита лимфоидного органа при незначительных нарушениях ПОЛ в других тканях организма и участии дополнительных антирадикальных механизмов (увеличение сывороточных Р-белков). Эффект стимуляции иммунной реакции в эти сроки может зависеть также от изменившейся интенсивности отдельных составляющих иммунорегуля-торного звена (подавление ААР-активности,- действия Вс), превалирующей над остальными (сохранение возможного влияния неспецифических Тс и активизация специфических Тс).

Воздействие ГБО в рефрактерную фазу Т-зависимого иммуногенеза (7-е сутки) не изменяет уровень иммунного состояния, хотя незначительные (Р>0,05) колебания отмечаются как в цепи иммунологических преобразований, так и в системе ПОЛ — антиперекисная защита. Взаимоуравновешенные изменения активности (усиление специфических Тс и подавление — Вс) аутоиммунных регуляторов, по-видимому, также не нарушают иммунного процесса.

Формирование Т-независимого иммунобиологического процесса в условиях ГБО характеризуется 2-мя эффектами.

Стимулирующий эффект наблюдается при воздействии ГБО в индуктивную и продуктивную фазы Т-независимого иммуногенеза, отражая адаптационные процессы, происходящие на мембране им-мунокомпетентных клеток (усиление рецепторной активности) и в иммуноцитах в период синтеза АТ (увеличение плазматизации лимфоидной ткани, числа 1дМ-АОК), в результате которых повышается уровень 1дМ и титр специфических АТ. Иммунобиологические преобразования в клетках, индуцированные ГБО, сопровождаются существенным преобладанием антирадикальных процессов в лимфо-идном органе на фоне незначительных колебаний ПОЛ в организме в

целом. Снижение ААР-активности на пике иммунного ответа под действием ГБО также способствует, при прочих равновесных ауто-регуляторных влияниях, иммуностимуляции в этот срок. Изменения в клеточном звене естественной иммунобиологической защиты организма, вызванные ГБО в индуктивную фазу Т-независимого иммуногенеза, характеризуются увеличением фагоцитарного резерва с интенсификацией оксидазной и снижением пероксидазной активности, а также усилением в ранние сроки синтеза клеточного лизоцима. Изменения гуморального звена отражают снижение комплементарной активности в периоды максимального участия в иммунных реакциях.

Воздействие ГБО на 7-й, 10-й или 14-й дни иммунизации Vi-АГ практически не изменяет (Р>0,05) уровень специфического иммунитета, определяемого рецепторной активностью, синтезом IgM-AOK и продукцией AT, хотя отмечается некоторая тенденция (Р>0,05< 0,1) к повышению (ГБО на 7-й, 10-й дни) или понижению (ГБО на 14-й день) иммунореактивности. Причем, ГБО в эти сроки воздействия изменяет оксидативные процессы, постепенно (от 7-го к 14-му дню) усиливая ПОЛ в организме в целом и ослабляя антирадикальную защиту в лимфоидном органе. Функциональные сдвиги в иммуноре-гуляторном звене взаимоуравновешены и не оказывают существенного влияния на иммунную реакцию.

Воздействие ГБО в режиме 3 ата 1 час непосредственно после заражения S,abortus equi, как наиболее благоприятное, оказывает стимулирующий эффект на функциональное состояние иммуноком-петентных клеток. Формирование специфического противоинфекци-онного иммунитета в этих условиях характеризуется резкой плазма-тизацией лимфоидной ткани, повышением синтеза IgM-AOK и уровня макромолекулярных иммуноглобулинов. При этом увеличивается АГ-зависимая рецепторная активность, ускоряется "кэппинг" lg-рецепторов, нарастает количество иммунорегуляторных клеток и их предшественников. Интенсификация специфических иммунобиологических процессов обеспечивается в условиях ГБО значительным увеличением в первые дни СОД-активности в лимфоидном органе, снижением в нем ПОЛ и на фоне низкой пероксидации липидов в организме. Под влиянием ГБО повышается микробицидная способность полиморфноядерных нейтрофилов за счет активизации 02-зависимой и 02-независимой бактерицидных систем, что проявляется увеличением фагоцитарного резерва клеток в первые часы последействия, а в последующем — усилением синтеза клеточного лизоцима и повышенным содержанием катионных белков.

В ответ на гипероксическое воздействие в лимфоидном органе и иммунокомпетентных клетках здоровых животных возникают неко-

торые сходные с антигенным раздражением изменения оксидативно-го характера, способствующие увеличению рецепторной активности спленоцитов, повышению бактерицидной готовности фагоцитов и др., что объясняется общностью типовых реакций адаптации на стрессовый раздражитель. Однако гипербарический кислород, в отличие от других стрессорных факторов, внедряется в главные метаболические системы потребления кислорода как энергообразование, детоксикация и биосинтез. С эволюционных позиций кислород под повышенным давлением является адаптогеном (А.Н.Леонов, 1969, 1987, 1995) и способен обеспечивать оптимальное развитие приспособительных процессов на всех уровнях интеграции организма а целом.

Таким образом, действие ГБО при измененной иммунобиологической реактивности неоднозначно. Выявлены 3 возможных иммунобиологических эффекта ГБО: ингибирующий, стимулирующий и рефрактерный, которые отражают изменение (снижение или повышение) специфического иммуногенеза и неспецифической иммунобиологической резистентности, либо не меняют их естественный ход развития. Ведущими патофизиологическими характеристиками иммуногенеза, отражающими динамику иммунобиологической реактивности, являются рецепция антигена, метаболическая активация иммунокомпетентных клеток, ауторегуляция, влияние медиаторов и, в итоге, формирование иммунного ответа гуморального или клеточного типа. Основным патофизиологическим звеном, реагирующим на действие ГБО, является вовлечение иммунокомпетентных клеток различной функциональной направленности (лимфоциты и их регу-ляторные субпопуляции, АОК, фагоциты) в систему реакций адапто-генеза. Развитие адаптационных механизмов иммунобиологического характера в условиях ГБО обусловлено конкретным антигеном, фазой антигенной активации иммунокомпетентных клеток и адаптоген-ными свойствами гипербарического кислорода.

Анализ полученных данных показывает важную роль исходной иммунобиологической реактивности организма в ответной реакции его функциональных (иммуногенез) и метаболических систем (ПОЛ, антиоксидантная) на гипероксическое воздействие как общепатологическую закономерность. Проведенные исследования отличаются научной новизной в теории адаптогенных механизмов действия гипербарического кислорода и определяют перспективность изучения иммунологических эффектов ГБО при конкретной патологии. Они теоретически обосновывают целесообразность использования гипе-роксии в комплексе мероприятий при лимфопролиферативных и иных заболеваниях с функциональными расстройствами иммунной системы. Имеются основания считать, что дальнейшее изучение па-

тофизиологии клетки различных функциональных систем, в том числе иммунологической организации, обещают обогатить теорию и практику здравоохранения важными результатами.

ВЫВОДЫ

1. При измененной антигенным раздражением иммунобиологической реактивности организма ГБО оказывает влияние на уровень иммунного состояния, воздействуя на функционально различные элементы специфической иммунной системы и естественной резистентности через рецепторы, мембранные структуры и ферменты иммунокомпетентных клеток.

2. ГБО (303,9 кПа, 1 час), примененная в индуктивную фазу Т-зависимого иммунитета, уменьшает интенсивность антителообразо-вания, вызывая снижение специфической рецепторной активности на спленоцитах, уменьшение плазматизации лимфоидной ткани, подавление синтеза 1дМ-АОК, падение уровня макромолекулярных иммуноглобулинов и титров специфических гемагглютининов, усиление ААР-активности. Под влиянием ГБО усиливается ПОЛ в организме в целом и в селезенке при инертности в ней СОД-защиты. При этом усиливаются 02-зависимые ферментативные процессы (оксидазная и пероксидазная активность) в периферических ней-трофилоцитах и снижается содержание лейкоцитарного лизоцима.

3. Использование ГБО на пике Т-зависимого иммунитета приводит к стимуляции антителообразования. Увеличивается АГ.-зависимая рецепторная активность на спленоцитах, повышается синтез 1дМ-АОК и выработка специфических антител на фоне снижения ААР-активности. В селезенке под влиянием ГБО уменьшается уровень МДА и повышается содержание СОД. Уровень пероксида-ции липидов в организме в целом невысок, а увеличение сывороточных Р-белков дополняет антиоксидантные возможности сыворотки крови.

4. ГБО, примененная на 7-е сутки Т-зависимого иммуногенеза, не изменяет естественный ход антителообразования, в то время как использование гипероксии в поздние сроки (10-й, 14-й дни) формирования Т-зависимого иммунитета характеризуются интенсификацией антителообразования. Увеличение специфической рецепторной активности, синтеза 1дМ-АОК и продукции антител происходит на фоне преобладания антирадикальных процессов (СОД) в системе ПОЛ-антиперекисная защита селезенки. ГБО ограничивает повышение ПОЛ (МДА, ГПЛ) й увеличивает уровень сывороточных Р-белков в организме в целом. Изменения в системе иммунной регуляции

(подав-ление ААР-активности и Вс, повышение специфических Тс) взаимоуравновешены.

5. Использование ГБО в индуктивную фазу Т-независимого иммунитета стимулирует процесс антителообразования. Увеличивается количество АГ-связывающих рецепторов на спленоцитах, усиливается плазматиэация в селезенке, повышается количество IgM-AOK, синтез IgM и продукция Vi-гемагглютининов, возрастает число клеток регуляторного звена. ГБО снижает уровень МДА и увеличивает СОД-активность селезенки при резком падении перокси-дации в организме. Воздействие ГБО в этот период увеличивает фагоцитарный резерв нейтрофилоцитов за счет усиления преимущественной оксидазной активности; повышает в ранние сроки синтез клеточного лизоцима и снижает комплементарную активность на 5-е и 14-е сутки последействия.

6. Воздействие ГБО на пике Т-независимого иммунного ответа приводит к стимуляции антителообразования. Увеличивается специфическая рецепторная активность на спленоцитах, повышается синтез IgM-AOK и продукция специфических антител, снижается ААР-активность, В селезенке преобладают антирадикальные процессы при несущественном повышении ПОЛ в организме в целом.

ГБО, примененная в поздние сроки (7-й, 10-й, 14-й дни) Т-независимого иммуногенеза, практически не изменяет интенсивность специфического иммунного ответа. Однако при этом нарушаются процессы окислительного метаболизма с постепенным усилением реакций ПОЛ (сывороточные МДА, ГПЛ) в организме и ослаблением функций антиперекисной системы селезенки.

7. Комплексное исследование эффективности различных режимов и условий использования ГБО при эндотоксиновом шоке, индуцированном разными дозами S.abortus equi, обосновывает применение режима 3 ата , 1 час, проведенного непосредственно после заражения, что аргументируется увеличением продолжительности жизни животных, ускорением самоочищаемости организма от возбудителя и снижением биологической активности эндотоксина.

8. Специфический иммунный ответ при эндотоксиновом шоке сальмонеллезного генеза в условиях ГБО характеризуется увеличением АГ-зависимой рецептсрной активности с ускорением "кэппинга" lg-рецепторов, резкой плазматизацией клеток в селезенке, повышением синтеза IgM-AOK и уровня макромолекулярных иммуноглобулинов, что сопровождается снижением в первые дни ней-рогуморальных интеррецепторных влияний (АЦХ-РОК). ГБО значительно усиливает СОД-защиту селезенки на фоне резкого падения уровня МДА в лимфоидном органе и в сыворотке крови. Гипероксия оптимизирует 02-эависимые и 02-независимые процессы в фагоци-

тах (оксидазная и пероксидазная активность, клеточный лизоцим, ка-тионные белки), что повышает микробицидную способность и увеличивает фагоцитарный резерв периферических нейтрофилов. Под влиянием ГБО снижается, после первоначального подъема, комплементарная активность сыворотки крови.

9. Последействие ГБО у здоровых животных проявляется некоторой интенсификацией рецепторной активности спленоцитов, нарушением окислительного метаболизма (увеличение МДА и СОД) в селезенке, усилением в периферических нейтрофилах Ог-зависимых ферментативных (оксидазная и пероксидазная активность) и снижением 02-независимых (лейкоцитарный лизоцим, катионные белки) процессов, а также падением в сыворотке крови уровня комплементарной активности.

10. Особенности иммунобиологической адаптации при измененной реактивности в условиях ГБО заключаются во взаимодействии специфических и неспецифических процессов с окислительным метаболизмом в иммунокомпетентных клетках и в организме в целом. Длительность иммуно-адаптационных процессов подчеркивает потенцирующее последействие гипербарического кислорода.

. 11. Полученные результаты отражают новое воззрение на происхождение кислородных эффектов в условиях измененной иммунобиологической реактивности и могут рассматриваться как перспективное научно-практическое направление в экспериментальной и клинической патологии для решения вопросов использования ГБО при функциональных расстройствах иммунной системы различного происхождения.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Гипербарическая оксигенация на фоне иммунодепрессивного действия цистеина // Сб.науч.тр. ВГМИ "Механизмы ГБО",- Воронеж! 1986,- С.99-105.

2. Реактивность иммуноглобулиновых рецепторов лимфоцитов к различным лигандам при воздействии ГБО на интактный организм. // Сб.научлр. ВГМИ "Формы и механизмы процессов адаптации в корме и патологии".- Воронеж,1987.- С.87-90.

. 3. Эффект гипербарической оксигенации при эндотоксиновом шоке. // Te3.IV Всесоюз.симп. "Гипербарическая оксигенация" (новое в практике и теории ГБО). М.,1989.- С.36.

4. К механизму действия гилербарического кислорода на иптакт-ный и иммунный организм. // М.,1989.- 14 С.- Деп. в ВИНИТИ АН СССР 29.11.89,- N 7134 В-89 (соавторы - В.М. Клокова, Н.В. Лобеева).

5. Эффект гипербарической оксигенации в интактном организме. // Тез.докл-итог.науч.сессии "Ученые-медики - практическому здравоохранению".- Воронеж, 1989,- С.156-157 (соавтор - Т.Д.Новосельцева).

6. Особенности синтеза IgM-AOK на Т-зависимый антиген при воздействии гипербарической оксигенации в различные сроки иммунизации. // Тез.докл.X науч.конф. "Факторы клеточного и гуморального иммунитета при различных физиологических и патологических состояниях",- Челябинск, 1990,- С.47-48 (соавтор - A.A. Лоншакова).

7. Элементы иммунной саморегуляции на пике антителообразо-зания под воздействием ГБО. / / Тез.докл.научно-практической конф. "Путь науки",- Липецк,1990,- С.70-71 (соавтор - Д.Н. Леонов).

8. Патогенетические аспекты иммунной саморегуляции Т-зависимого иммунитета при воздействии гипербгрической оксигенации. // М„ 1990,- 25 С,- Деп. в ВИНИТИ АН СССР 26.06.90,- N 3G31 В-90.

9. Влияние гипербарической оксигенации на активацию иммуно-компетентных клеток и перекисного окисления липидов при иммунизации гетерологичными эритроцитами. // Бюлл.экспер.бкол. и мед., 1991,- N 7,- С.3'1-36 (соавторы - В.М.Клокова. А.Н.Леонов, Н.В.Лобеева).

10. Роль Р-белкоз в регуляции иммунного ответа при воздействии гипербарической оксигенации. // Тез,докл. Всесоюз.симп. "Новые методы прогноза патологического процесса". М.,1991,- С.4-5.

11. Динамика Р-белкоз при иммунизации различными антигенами. // Тез.докл. Всесоюз.симп. "Новые методы прогноза патологического процесса". М.,1991.- С.5 (соавторы - Н.Н.Кулагина, Л.А.Оболенкова).

12. Влияние ГБО на супрессорную активность лимфоцитов при иммунизации различными антигенами. / / Тез.докл.научно-практической конф. "Путь науки". - Липецк,1991.- С.63-64 (соавтор -Л.Н.Леонов).

13. Факторы супрессии иммунного ответа при действии гипербарической оксигенации. // Иммунология, 1992.- N 2,- С.62' (соавтор -А.Н. Леонов). ..

14. Влияние гипероксии на метаболизм клеточных рецепторов при Т-зависимом и Т-независимом иммунитете. // Тез.докл.XI науч. конф."Факторы клеточного и гуморального иммунитета при различных

физиологических и патологических состояниях".- Челябинск, 1992,-С.31-32.

15. Развитие адаптационных механизмов при иммунизации гете-рологичными эритроцитами в условиях ГБО. // Тез. докл. XI науч. конф."Факторы клеточного и гуморального иммунитета при различных физиологических и патологических состояниях".- Челябинск, 1992,-С.32-33 (соавторы - В.М.Клокова, Н.В.Лобеева, А.А.Лоншакова).

16. Рецепторы иммунокомпетентных клеток, их активность и катаболизм при T-независимом иммунитете в услозиях гипербарической оксигенации. // Юбил.сб.науч.тр. ВГМИ "Актуальные проблемы медицины".- Воронеж, 1993.- Т.1.- С.62-65 (соавтор - А.Н. Леонов).

17. Теоретические основы гипсрбарической кислородной терапии (информационное письмо МЗ РФ).- Воронеж, 1993,- 23 С. (соавторы -

A.Н.Леонов, K.M.Резников, В.Н.Яковлев, В.А.Ворновский,

B.М.Крюков, А.М.Мальченко, А.М.Поздняков, Ю.М.'Гумановский).

18. Роль гипербарической оксигенации в иммунорегуляции Т-зависимого и Т-независимого иммунитета. // Бюлл. гипербарич, биол. и мед., Воронеж, 1994,- N 1-4,- С.7-13.

19. Basis of Immunocorreciing effect of Hyperbaric oxygenation (HBO). // Internationa! Journal of Immunorehabilifation (Supplement), 1994,- P. 102 (соавторы - А.Н.Леонов, Н.В.Лобеева, НЛО. Мулыкина).

20. The influence of the Hyperbaric oxygen on the immune status of children with acute lymphoblast leukemia during specific treatment. // International Journal of Immunorehabilitation (Supplement), 1994,- P.282-283 (соавторы - А.М.Поздняков, Т.В.Степанова).

21. Комплексная лабораторная оценка влияния гипербарической оксигенации на иммунные процессы организма (методические рекомендации МЗ РФ).- Воронеж, 1994.- 15 С. (соавторы - А.Н.Леонов, А.М.Поздняков, А.Я.Кульберг, Н.Н.Кулагина, Л.Л.Оболенкова).

22. Отдельные звенья неспецифического иммунного ответа ин-тактного организма в условиях гипербарической оксигенации. // Бюлл. гипербарич, биол.'и мед., Воронеж, 1994.- Т.2.- N.1-2.- С. 45-50 (соавтор - Л.Д. Мальцева).

23. Функциональные особенности Р-белков при различных экспериментальных иммунных моделях под воздействием гипербарического кислорода. / / Матер. Международ, симп. "Физико-химические основы функционирования белков и их комплексов",- Воронеж, 1995.- С.46-48 (соавтор - A.A. Лоншакова).

24. Экспериментальные предпосылки ГБО-терапии при септическом шоке. 1. Биологическая активность эндотоксина и микробное

обсеменение селезенки. // Бюлл. гипербарич, биол. и мед., Воронеж, 1995.-T.3.-N 3,- С.3-10.

25. Способ определения индивидуальной эффективности ГБО-терапии при остром лейкозе. //Заявка на изобретение N 94-003829/14(003373) - положительное решение о выдаче патента (соавторы - А.Н.Леонов, А.М.Поздняков, Т.В.Степанова).

26. Обоснование иммунобиологических адаптационных механизмов действия гипербарической оксигенации при септическом шоке. / / Гипербарическая физиология и медицина, 1995.- N 3,- С.25.

Тип. ВГУ. 3. 1547-95. Т. 100.

Дьячкова Светлана Яковлевна

Иммунобиологические механизмы действия гипербарической оксигенации на организм в условиях измеленной реактивности

, Необходимость исследований продиктована использованием гипербаричсской оксигеиации (ГБО) при патоиммунных состояниях. Изучение иммуно-адаптационных механизмов в условиях ГБО проведено на 3-х экспериментальных моделях измененной реактивности при различных антигенных раздражениях. Рассматривается взаимосвязь между специфическими и неспецифическими иммунными процессами с окислительным метаболизмом в иммунокомпетентных клетках и в организме в целом. Установлено, что развитие адаптационных механизмов иммунобиологического характера в условиях ГБО обусловлено конкретным антигеном, фазой антигенной активации иммуноцитов, изменением аутоиммунной регуляции и адаптогенными свойствами гипербарического кислорода. Показана важная роль исходной иммунобиологической реактивности организма в ответной реакции его функциональных и метаболических систем на гипероксическое воздействие как общепатологическую закономерность.

Dyachkova Svetlana Yakovievna

Immunobiological Mechanisms of Hyperbaric Oxygenation Action for the Organism in Conditions of Changed Reactivity

This research is necessitated by the use of Hyperbaric oxygenation (HBO) in palhoimmunological conditions. The study of immunoadaptative mechanisms in conditions of HBO has been carried out on 3 experimental models of changed reactivity with different antigenic irritations. It examines the relationship between specific and non-specific immunological processes with oxidizing metabolism in the immunocompetent cells and a whole organism. It has established that the development of adaptaiive mechanisms of immunobiological nature in conditions of HBO is due to a concrete antigen, immunocyte antigenic activation phase, changes in auto-immunological regulation and adaptagenic properties of hyperbaric oxygen. Also, has been shown the significant role in response reaction of its functional and metabolic systems to the hyperoxygenic influence as a common pathological regularity.