Автореферат и диссертация по медицине (14.00.09) на тему:ОПТИМИЗАЦИЯ ОЦЕНКИ ЭФФЕКТИВНОСТИ ЛЕЧЕНИЯ ПРИ РЕЦИДИВИРУЮЩЕМ БРОНХИТЕ У ДЕТЕЙ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ МИКРОЭЛЕКТРОФОРЕЗА НАЗАЛЬНЫХ ЭПИТЕЛИОЦИТОВ

На правах рукописи

ЗАНКЕЕВА АННА ГЕОРГИЕВНА

ОПТИМИЗАЦИЯ ОЦЕНКИ ЭФФЕКТИВНОСТИ ЛЕЧЕНИЯ ПРИ РЕЦИДИВИРУЮЩЕМ БРОНХИТЕ У ДЕТЕЙ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ МИКРОЭЛЕКТРОФОРЕЗА НАЗАЛЬНЫХ ЭПИТЕЛИОЦИТОВ

14. 00. 09 - Педиатрия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

1 7 ЛЕН 200Э

Пермь 2009

003490030

Работа выполнена в государственном образовательном учреждении высшего

профессионального сбриЗииши^ (.иъиСиилий 1 и^уДирV«^¡и^мл Гт1 сднц«Щуцид

Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор Грвшкин Иван Георгиевич

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Репецкая Марина Николаевна

(ГОУ ВПО «Пермская государственная медицинская академия Росздрава)

доктор медицинских наук, профессор Ермакова Маргарита Кузмниична

(ГОУ ВПО «Ижевская государственная медицинская академия Росздрава»)

Ведущая организация:

ГОУ ВПО « Казанский государственный медицинский университет»

Защита состоится^сг г. в « » часов на заседании

диссертационного совета Д. 208.067.02 при ГОУ ВПО «Пермская государственная медицинская академия им. акад. Е.А. Вагнера Росздрава» по адресу: 614000, г. Пермь, [ТиоЛСВСКиЯ^ д,2б>

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО «Пермская государственная медицинская академия им. Е.А. Вагнера Росздрава» по адресу: 614000, г. Пермь, ул. Петропавловская, д. 26).

Автореферат разослан;*^»г.

Ученый секретарь диссертационного совета

доктор медицинских наук, профессор Щекотов В.В.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность проблемы Рецидивирующий бронхит (РБ) представляет одну из распространенных форм патологии органов дыхания у детей, формирующихся в раннем и дошкольном возрасте (Гришкин И.Г., 2004). Важное значение в патогенезе РБ имеет повреждение реснитчатого эпителия слизистой оболочки респираторного тракта. Развитие мукоцилиарной несостоятельности при повреждении эпителия у детей является фоном для повторных воспалений слизистой оболочки респираторного тракта (Богданова A.B., 1990, Захарова Г.П., 1998). Поэтому нарушение функции реснитчатого эпителия можно рассматривать как один из важных показателей состояния брокхолегочной системы. Особое значение в развитии РБ имеют верхние дыхательные пути - слизистая носовой полости, поскольку этот орган является первичными входными воротами для респираторных инфекционных агентов. Более того, состояние носоглотки является косвенным отражением состояния бронхолегочной системы и влияет на течение патологии легких (Пономаренко Г.Н., 1998).

Реснитчатые эпителиоциты имеют на своей поверхности электрический заряд, о величине которого принято судить по электрокинетическим свойствам (ЭКС) и экспериментально измеряемой скорости передвижения клеток в электрическом поле -электрофоретической подвижности (ЭФГ1), которая изучается с помощью клеточного микроэлектрофореза (Быкова И.А., 1993, Мищук И.И., 1992, Соловьев A.A., 2001, Онучин H.A., 2002). Объектом исследования клеточного микроэлектрофореза, применяемого в различных областях медицины, чаще являются клетки периферической крови (эритроциты), буккальный эпителий (Базелюк J1.T., 1997, Бабаева З.Н., 2000, Казанкин Д.С., 2002, Кутявина C.B., 2002, Аладашвили Н.З., 2005). Результаты этих исследований свидетельствуют о том, что клеточный микроэлекгрофорез дает представление не только о функциональном состоянии одной клетки, но и о состоянии организма в целом (Левченкова Н.С., 1996). Однако метод микроэлектрофореза клеток не получил должного распространения в детской пульмонологии.

Тем не менее, использование микроэлектрофореза элителиоцитов респираторной системы как информативного, несложного метода исследования в сочетании с неинвазивным способом забора материала со слизистой носа важно было бы в разделе детской пульмонологии при изучении клеточной составляющей мукоцилиарного аппарата Данные о способах контроля элекгрокинетической активности (ЭКА) реснтчатых эпигелиоцитов у детей, страдающих рецидивирующим бронхитом, представляют теоретический и практический интерес, указывающий возможности к управляемой коррекции возникающих в организме ребенка нарушений, что может быть важным при индивидуальном подборе

адекватной терапии, контроле эффективности проводимых лечебно-реабилитационных мероприятий и прогнозировании течения заболевания.

С учетом вышеизложенного нами поставлены следующие цель и задачи настоящей работы.

Цель работы: оптимизировать методы контроля эффективности лечебно-реабилитационных мероприятий при рецидивирующем бронхите у детей с использованием метода микроэлектрофореза назальных реснитчатых эпителиоцитов.

Задачи исследования: 1. Изучить характер и возможные механизмы рецидивирования бронхитов у детей на современном этапе.

2. Разработать методику прижизненного исследования реснитчатых эпителиоцитов, как составляющей мукоцилиарного аппарата при рецидивирующем бронхите у детей.

3. Оценить ингаляцию минеральной водой «Увинская лечебная» как средства, улучшающего функциональную активность назальных эпителиоцитов у детей с рецидивирующим бронхитом.

4. Изучить в катамнезе рецидивирующего бронхита функциональное состояние назальных эпителиоцитов в сопоставлении с клиническими особенностями течения бронхита.

5. Изучить в катамнезе рецидивирующего бронхита сопряженность показателей электрофоретической подвижности назальных эпителиоцитов и риноцитограмм.

Научная новизиа работы

Впервые разработан метод цитологического анализа с изучением электрофоретической подвижности назальных реснитчатых эпителиоцитов, имеющий диагностическое значение у больных рецидивирующим бронхитом.

Установлена возможность применения метода микроэлектрофореза назальных реснитчатых эпителиоцитов для оценки степени тяжести поражения респираторного тракта при рецидивирующем бронхите у детей.

Впервые проведен комплексный анализ популяции реснитчатых эпителиоцитов дыхательных путей по электрофоретической подвижности во взаимосвязи с их морфологическими особенностями у здоровых детей и у больных рецидивирующим бронхитом в катамнезе.

Выявлены закономерности адаптационных изменений электрокинетической активности реснитчатых эпителиоцитов при рецидивирующем бронхите у детей.

Впервые проведена оценка влияния ингаляционного воздействия минеральной водой «Увинская лечебная» на реснитчатые эпителиоциты с исследованием электрофоретической

подвижности у детей в остром периоде рецидивирующего бронхита. Выявлено активирующее влияние ее на электрокинетическую активность эпителиоцитов.

Практическая значимость

Использование неинвазивного, атравматичного метода микроэлектрофореза переживающих клеток является приоритетным при исследовании клеточного компонента мукоцилиарного аппарата у детей с рецидивирующим бронхитом.

Использованный нами дифференциальный подход к анализу популяции реснитчатых эпителиоцитов по электрокинетическим свойствам может применяться как дополнительный метод при исследовании их функционального состояния при рецидивирующем бронхите у детей. Также может оказаться полезным при оценке влияния проводимой ингаляционной терапии на функцию реснитчатого эпителия.

Проведенные исследования определяют возможность использования применяемой методики микроэлектрофореза переживающих клеток как диагностической, позволяющей для индивидуализации лечебных мероприятий оценивать влияние лекарственных препаратов in vivo на электрофоретическую подвижность нативных эпителиоцитов, как показатель их функциональной активности.

Полученные данные расширяют возможности диагностического использования метода цитоэлектрофореза при различной патологии респираторного тракта у детей.

Основные положения, выносимые на защиту

1. У детей после обострения рецидивирующего бронхита длительно сохраняется функциональная несостоятельность реснитчатых эпителиоцитов, обуславливающая рецидивы заболевания.

2. Электрофоретическая подвижность назальных эпителиоцитов респираторного тракта является более тонким индикатором их состояния в сравнении с их цитоморфологическими характеристиками.

3. Ингаляция минеральной водой «Увинская лечебная» оказывает активирующее влияние на функциональное состояние реснитчатых эпителиоцитов.

Внедрение в практику

Результаты исследований внедрены в клиническую практику МУЗ Медсанчасти «Ижмаш» г. Ижевска, используются в учебном процессе на кафедре детских инфекций с курсом педиатрии и кафедре гистологии, эмбриологии и цитологии ГОУ ВПО «Ижевской государственной медицинской академии Росздрава».

Степень личного участия

Автором лично проводился клинический осмотр больных и здоровых детей, взятие материалов для лабораторных исследований, а также изучение риноцитограмм и

микроэлектрофореза переживающих клеток, лечение и наблюдение детей в катамнезе. Автор освоила и самостоятельно выполнила статистическую обработку и анализ полученных данных, осуществила подбор и анализ литературы по теме исследования, отразила результаты исследования в публикациях.

Апробация диссертационного материала

Результаты проведенных исследований и основные положения работы были доложены и обсуждены на IV, V, VI, VII Конгрессе педиатров-инфекционистов «Актуальные вопросы инфекционной патологии и вакцинопрофилактики у детей» (Москва, 2005, 2006, 2007, 2008г.), II, III, V Межрегиональной межвузовской конференции молодых ученых и студентов «Актуальные вопросы биологии и медицины» (Ижевск, 2005, 2006, 2008г.), IX Межвузовской научной конференции молодых ученых и студентов «Современные аспекты медицины и биологии» (Ижевск, 2009г), Конференции, посвященной 25-летию кафедры детских инфекций и 70-летию профессора И.Г. Гришкина «Состояние окружающей среды и здоровье» (Ижевск, 2005г.), I Конгрессе педиатров Урала «Актуальные проблемы педиатрии» (Екатеринбург, 2008г.), I Ежегодном Всероссийском Конгрессе по инфекционным болезням (Ижевск, 2009г), Научно-практической конференции, посвященной 70-летию МСЧ Ижмаш (Ижевск, 2009г).

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 24 печатные работы, 1 из них - в журнале, рекомендованном ВАК РФ.

Обьем и структура диссертации

Диссертация включает следующие главы: содержание, введение, обзор литературы, методы исследования и характеристика групп наблюдаемых больных, клиническая характеристика наблюдаемых больных рецидивирующим бронхитом, электрофоретическая подвижность назальных реснитчатых эпителиоцитов, характеристика риноцитограммы у здоровых детей и больных рецидивирующим бронхитом, заключение, выводы, практические рекомендации, список литературы. Материалы диссертации изложены на 147 машинописных листах, содержат 20 таблиц, 22 рисунка, 2 клинических примера, список литературы включает 263 названия работ, из которых 74 иностранных и 189 отечественных.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Объем, материалы и методы исследования

Под наблюдением находилось 82 ребенка в возрасте 1-6 лет, страдающих РБ, обследованных в динамике заболевания трехкратно: в остром периоде бронхита и в катамнезе, через 1 и 6 месяцев после последнего эпизода бронхита Соответственно было сформировано 3 группы наблюдения. Первую группу составили 82 ребенка, находившиеся на стационарном лечении в детском

инфекционном отделении МСЧ «Ижмаш» в остром периоде рецидивирующего бронхита При этом 78 детей (95,1%) переносили обструкгивный бронхит и 4 ребенка (4,9%) - простой бронхит (клинически). В зависимости от течения бронхита, выделено 2 подгруппы: IA - дети в остром периоде РБ (59 человек), Ю - дета, острый период бронхита у которых сочетался с пневмонией (23 человека). Сочетание обострения бронхита с пневмонией рассматривалось нами как более тяжелое поражение респираторной системы в сравнении с бронхитом без пневмонии. Во П группу включены те же дети, 77 человек, наблюдавшиеся в кагамнезе заболевания, через один месяц после обострения. Из них в группу ПА вошло 57 человек, в группу ПВ - 20 человек. Остальные 5 детей ю 82 не обследованы ввиду отказа их родителей от дальнейшего наблюдения. В Ш группу включены дети, обследованные через шесть месяцев после послед него эпизода РБ, 65 детей При этом группа ША представлена 45 детьми, ШВ - 20 детьми. За пятимесячный интервал между сроками наблюдения П и Ш группы 12 детей перенесли очередной эпизод бронхита (С группа). Характеризуя этих детей, отмечено, что очередной эпизод бронхита в кагамнезе наблюдения развился у 7 детей из группы IA с выраженным и/ или длительно сохранявшимся бронхообслрукшвным синдромом и у 5 детей из группы Ш.

Для сравнительного анализа в исследование введена группа детей, переносящих ОРЗ в форме острого ринита или ринофарингита, т.е. без поражения бронхолегочной сиситемы, находившихся на стационарном лечении в детском инфекционном отделении Медсанчасти «Ижмаш» (25 детей). Группа сравнения представлена 76 практически здоровыми детьми, не имеющими хронических заболеваний и редко болеющими острыми инфекциями.

Результаты исследования детей групп наблюдения и сравнения были получены при анализе проспективного и катамнесгического наблюдения, выкопировке данных из «Медицинских карт стационарного больного» и «Медицинских карт амбулаторного больного». У всех детей проводилось комплексное лабораторно-инсгруменгальное обследование.

Для изучения функциональных особенностей реснитчатых эпителиоцитов верхних дыхательных путей у всех детей проводилось исследование микроэлектрофореза переживающих назальных эпителиоцитов по методике Соловьева A.A. (Патент РФ № 2168176 «Способ микроэлектрофореза клеток крови и эпителиоцитов и устройство для его осуществления» от 07.05.2001)*. Определение электрофоретической подвижности (ЭФП) клеток проводилось с помощью комплекса «Цитоэксперт» (Удостоверение РФ от 14.06.05 №ФС 022а2005/174405).

* Выражаем глубокую благодарность доценту кафедры гистологии, эмбриологии и цитологии ГОУ ВПО «Ижевская государственная медицинская академия» кандидату медицинских наук Александру Александровичу Соловьеву за помощь и квалифицированную консультацию при выполнении работы.

Материал со слизистой носа для исследования микроэлектрофореза эпителиоцитов забирался путем мазка со средней носовой раковины. Клетки мазка с тупфера помещались на поверхность камеры, содержащей 0,9% раствор NaCl, сразу окрашивались метиленовым синим. Анализировалась ЭФП 30-50 клеток.

В микрокамере комплекса «Цитоэксперт» под действием переменного электрического тока с помощью окулярной линейки измерялась дистанция перемещения клеток (амплитуда колебания, Аср, мкм) и доля подвижных клеток (кинетика, К,%) в выборочной клеточной популяции. Для анализа внутрипопуляционных изменений изучаемых типов клеток рассчитывались коэффициенты: асимметрии (As) и эксцесса (Ех). Все четыре показателя исследовались двукратно, с интервалом в 10 минут: в начале инкубации (на 5-ой минуте) и в конце инкубации (15-ой минуте), что позволило выявить адаптацию клеток по способности сохранения стабильности их электрофоретической подвижности в экстракорпоральных условиях в условиях in vitro.

У всех обследованных детей (82 человека), находившихся на стационарном лечении в остром периоде рецидивирующего бронхита, на фоне комплексного лечения проводилось исследование влияния ингаляции минеральной водой «Увинская лечебная» на элекгрофоретическую подвижность назальных реснитчатых эпителиоцитов. Забор мазка-соскоба со слизистой носа для изучения ЭФП производился непосредственно до ингаляции и через 15 минут после проведенной процедуры.

Для изучения морфологических изменений эпителиоцитов использовался анализ риноцитограмм. Подсчитывали 100 эгогГелиоцитов в поле зрения микроскопа. Эпителиоцштраммы оценивали по совокупности \ 1 показателей: характер расположения клеток в микропрепарате (пластами, скоплениями, отдельные клетки), вакуолизация, дисхромия цитоплазмы и ядер, форма и размеры клеток и ядер, соответственно, кариолизис, наличие многоядерных клеток. Определяли тип риноцитограммы согласно методике, предложенной Матвеевой Л.А., 1986. Учет в мазках процентного содержания каждого вида клеток позволил определить соответствующий тип риноцитограммы: а) лейкоцитарная, б) эпителиальная, в) эпителиально-лейкоцитарная цитограмма.

Для оценки деструктивных процессов в слизистой носа определяли класс деструкции реснитчатых клеток (0,1, II, III, IV), индекс деструкции клеток (ИДК), средний показатель деструкции (СПД), индекс цитолиза клеток (ИЦК) и определяли тип дифференцированной цитограммы деструкции клеток:

^ + "2 + + спд _ 1", + 2Л2 + Зп3 + 4пА щК=-5«->

100 100 n0+nl+n2+n3+ni

где 1,2,3,4 - номера классов деструкции,

п,,п2,пз,п4-количество клеток соответствующего класса,

100-количество исследованных клеток.

Определяли дифференцированные цитограммы деструкции клеток:

I тип — в цитограмме максимальное количество клеток I и минимальное - IV класса,

II тип - цитограмма с максимальным количеством клеток II и минимальным - IV класса,

III тип — цитограмма с максимальным количеством клеток III и минимальным - IV класса,

IV тип - цитограмма с максимальным количеством клеток IV и минимальным - I класса деструкции.

При обработке результатов использовали стандартные методы статистического анализа в рамках пакета EXCEL 5,0 и BIOSTAT. Минимальный уровень значимости при этом принимался при р<0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

У всех наблюдаемых детей на основании клинико-лабораторных и анамнестических данных устанавливалась инфекционная этиология обострения рецидивирующего бронхита. Установлено, что из 82 выявленных больных с РБ бронхитический анамнез у 52 детей (63,4±5,9%) составил 1 год, у 26 детей (31,7±5,1%) -2 года и реже - 3 года У обследованных детей бронхит чаще повторялся 3-4раза в год с большей заболеваемостью возрасте 1-3 лет. Впервые острое бронхолегочное заболевание в грудном возрасте перенесли 49 детей (59,8±5,4%) из группы наблюдения и лишь 9 человек (11,9±3,6%) из группы сравнения (р<0,001).

У всех детей первые симптомы заболевания были связаны с поражением верхних отделов респираторного тракта с последующим вовлечением в процесс и нижних дыхательных путей. Клинические проявления развившегося обструктивного бронхита отмечались родителями в виде появления таких симптомов как дистанционные хрипы и/ или одышка, возникновение которых родители отмечали чаще на 4-5ый день заболевания (51,28±5,7% случаев), реже - на 2-3™ день (32,05±5,3% случаев) и позднее 50г0 дня - у 16,67±4,2% детей. Обострение бронхита у всех обследуемых детей имело среднюю степень тяжести. У большинства детей (74,4±4,8%) повышение температуры наблюдалось уже в первые два дам заболевания с максимумом подъема в эти же дни -у 41,8±5,4% детей. У 61,0±5,4% детей лихорадка достигала фебрильных и у 39,0±5,4% -субфебрильных цифр. Аускультативная симптоматика в легких характеризовалась преимущественно диффузно-симметричным распространением (в 95,1% случаев) как сухих, так и влажных хрипов (у 53,6% детей). Дыхательная недостаточность 1-Й степени развивалась у 80,5% детей. В 75,6% случаев одышка была обусловлена бронхообструктивным синдромом, клинические признаки которого выявлялись у 78 (95,1±2,4%) детей. Сочетание обострения бронхита с пневмонией отмечено у 23 детей

(28,0±4,6%). Пневмония чаще была очаговой (86,9±3,7%) с преимущественно правосторонней локализацией процесса (в 65,2±5,3% случаев). При анализе гемограммы у детей в остром периоде бронхита были выявлены незначительные и мало различимые признаки воспалительной реакции у детей как с пневмонией, тах и без пневмонии. Выявляемый «слабый» ответ иммунокомпетентных клеток крови на инфекционный процесс в бронхолегочной системе, даже при развитии пневмонического очага, у обследуемых детей может свидетельствовать об их иммунокомпрометированности.

У матерей больных детей выявлялся отягощенный акушерский анамнез: достоверно р<0,01) чаще, чем у матерей здоровых детей имели место неблагоприятные исходы предшествующих беременностей: искусственное прерывание беременности, выкидыши, мертворождение. В течение беременности у матерей детей группы наблюдения достоверно -((р<0,05)) чаще наблюдались: угроза прерывания, гестоз, урогенитальная инфекция, вызванная внутриклеточными патогенами, ОРЗ. Преждевременные роды и оперативное родоразрешение в группе наблюдения регистрировались так же достоверно чаще (р<0,01).

У 74,4±4,8% детей группы наблюдения отмечалась перинатальная энцефалопатия, в то время как в группе сравнения - у 35,5±5,5 (р<0,001). У 19,5±4,4% детей группы наблюдения в периоде новорожденности отмечались признаки внутриутробной инфекции, а в группе здоровых детей - только у 5,3±2,6% детей (р<0,001), признаки задержки внутриутробного развития (19,51 ±4,4% и 5,3±2,6% детей, соответственно, р<0,01), чаще страдали дисбиозом кишечника (29,26±5,0% и 15,8±4,2% детей, соответственно, р<0,05), анемией (48,8±5,5% и 23,7±4,9% детей соответственно, р<0,001). Более высокая респираторная заболеваемость на первом году жизни характерна для детей группы наблюдения (75,6±4,7% и 35,5±5,5% детей соответственно, р<0,05). Чаще выявлялся атопический дерматит, свидетельствующий о дисбалансе иммунной системы (18,29±4,2% детей, р<0,001).

В семьях детей группы наблюдения достоверно больше было курящих членов семьи: 3 и более человека - в 10,9±3,4% случаев, в группе сравнения таких семей не наблюдалось (р<0,01). В группе сравнения 68,4±5,3% детей начали посещать детский комбинат с 2-3-летнего возраста и 23,2±4,7% детей из группы наблюдения (р<0,001).

Взаимосвязь электрокинетических свойств назальных эпителиоцитов и риноцитологической картины у здоровых детей и больных рецидивирующим бронхитом

В риноцитограммах здоровых детей кроме морфологически цельных клеток (92,03±3,1%) обнаруживались и поврежденные эпителиоциты преимущественно с I степенью деструкции (7,83±3,1%) (табл 1, рис. 1, рис. 2).

Таблица 1

Цитологические показатели назального реснитчатого эпителия у здоровых детей

Группа Класс деструкции спд ИД К ицк дцд

0 I II III IV

Группа сравнен ни, п=76 6 92,03 ±3,10 7,83 ±3,10 0,14 ±0,40 0 0 0,08 0,083 0 1

I, п=82 2 37,01 ±3,72 AAA 30,20 ±3,75 АА* 21,59 ±2,87 AAA 10,48 ±2,40 0,79 ±0,38 1,167 0,79 0,0079 1

II, 11=77 7 58,76 ±3,35 *** 27,33 ±2,47 *** 11,33 ±2,0 *** 2,38 ±0,82 0,09 ±0,09 0,572 0,41 0,0009 I

III, п=65 5 77,0 ±5,20 *** 22,67 ±5,20 АА 0,33 ±0,70 0 0 0,23 0,23 0 I

Примечание: *- р<0,05, **- р<0,01, ***- р<0,001 по отношению к группе сравнения

Класс деструкции клеток Ш О И| BII Hill HIV

Рнс. 1. Дифференцированные цитограммы деструкции назальных эпителиоцнтов

ä

Здоровые Группа I Группа II Группа III

егяспд на идк -*-ицк

Рис. 2. Показатели деструкции клеток в катамнезе рецидивирующего бронхита

Клетки в микропрепарате чаще располагались в виде скоплений. Деструктивные процессы клеток были минимальны. В 96,6% имела место эпителиальная цитограмма.

Такой картине эпителиоцитограммы соответстветствовали следующие показатели электрофоретической подвижности (ЭФП) клеток. Среди 92,03±3,1% морфологически цельных клеток электрокинетически активными были 52,67±3,4% со средней амплитудой колебания 2,9±0,27 мкм. Популяции клеток свойственна гетерогенность по

электрокинетической активности (ЭКА) (положительный Ех) и преобладание клеток с

относительно низкими амплитудами колебаний (положительный Аб) (табл. 2).

Таблица 2

Показатели ЭФП назальных эпителиоцитов I группы (М±т)_

П^днод Группа Начало инкубации Через 10 минут инкубации

К,% А$ Ех Аср, мкм К,% Аз Ех Аср, мкм

Группа сравнения п=76 52,7 ±3,4 0,6 ±0,3 1,48 ±0,9 2,9 ±0,3 37,6 ±10,1 -0,8 ±0,5 -0,7 ±2,1 1,1 ±0,2 "*Н

1А,п=59 34,6 ±3,7 •■•о 0,9 ±0,2 1,59 ±0,7 и ±0,2 31,1 ±4,1 1,01 ±0,1 "Н 0,6 ±0,6 1,29 ±0,1

1В, п=23 31,2 ±4,7""* 0,92 ±0,3 ±0,7 1,5 ±0,2"* 26,2 ±5,2 0,8 ±0,2 -0,6 ±1,2 1,18 ±0,1

Примечание: здесь и далее: Группа А- дети с обострением бронхита без пневмонии,

Группа В - дети с обострением бронхита в сочетании с пневмонией;

К,% - доля подвижных клеток,%,

Аср - средняя амплитуда колебания, мкм,

Аэ - коэффициент асимметрии,

Ех - коэффициент эксцесс;

»- р<0,05, **- р<0,01, ***- р<0,001, где

указатель 0 - указывает достоверность по отношение к группе сравнения, А- по отношению к группе А,

Н- по отношению к результатам исследования в начале инкубации.

Структурно-функциональные изменения эпителиоцитов, развивающиеся при РБ у

детей, характеризуются стадийностью.

У детей в остром периоде бронхита преимущественно изолированное расположение клеток в риноцитограммах свидетельствует о нарушении межклеточных взаимодействий (табл. 1, рис.1, рис.2). Подавляющее большинство клеток подвергнуты деструкции, вплоть до IV класса. Достоверно уменьшался размер клеток, появлялись клетки с вакуолизацией, гиперхромией цитоплазмы, исчезновением ресничек. Выявленные изменения коррелировали с отрицательной динамикой ЭКА (табл. 2, рис. 7, рис. 8). 'Гак, в группах 1А и 1В значительно снижалась доля подвижных эпителиоцитов по сравнению с группой сравнения, р<0,001. В популяции преобладали низкоамплитудные клетки (положительный Ав), что закономерно приводило к снижению и средней амплитуды колебания клеток в обеих подгруппах, в среднем, в 2 раза ниже, чем в группе сравнения, р<0,01. Однако, вероятно, компенсаторно, популяция сохраняла гетерогенность по ЭКА (положительный Ех). У детей при развитии пневмонии (группа 1В) количество функционально активных клеток было меньше, чем у детей без пневмонии (группа 1А). Адаптивность эпителиоцитов была снижена: снижение средних показателей ЭФП сочеталось с преобладанием клеток с относительно низкими амплитудами (положительный Ав).

Выявлена корреляционная взаимосвязь между изменением параметров ЭФП клеток и продолжительностью острого эпизода бронхита: (г= - 0,571) между долей подвижных клеток (К,%) и продолжительностью заболевания, р<0,05. Это свидетельствует о снижении количества функционально полноценных клеток с удлинением продолжительности болезни (рис. 3).

1 -3 день 4-7 день

Продолжительность болезни, дни

Рис. 3. Доля подвижных эпителиоцитов (К,%) в зависимости от продолжительности болезни

Изучено изменение электрокинетической активности реснитчатых назальных эпителиоцитов у детей в остром периоде бронхита в зависимости от степени дыхательной недостаточности: ДНо-без признаков дыхательной недостаточности (ДН), ДН[ - с первой степенью и ДН2- со второй степенью ДН(табл. 3, рис. 4).

Таблица 3

Показатели ЭФП назальных эпителиоцитов детей I группы в зависимости от

^Цервод Начало инкубации Через 10 минут инкубации

К,% As Ех Аср К,% As Ex Аср

ДН„, п=12 39 ±1,12 1,19± 0,55 3,47± 2,00 1,74± 0,17 37,80± 3,40 0,73± 0,38 -1,0± 0,80*н 1,48± 0,12

ДН., п=36 33,45 ±2,27*" 0,75± 0,30 0,49± 0,12 1,28± 0,12**° 31Д2± 2,57 1,17± 0,19 0,81± 0,6 1,19± 0,10

ДН2,11=11 31,98 ±3,01*" 1,35± 0,42 2,61± 1,98 1,19± 0,24**° 28,87± 4,42 U8± 0,29 1,84± 1,07 1,10± 0,13*°

Примечание: *- р<0,05, **- р<0,01, ***- р<0,001:

индекс 0- по отношению к группе детей с обострением бронхита с ДНо,

Н- по отношению к результатам исследования в начале инкубации.

При этом доля подвижных клеток у детей с ДН1 и ДН2 была ниже, чем у детей без ДН на 14,6% (в 1,18 раза) и 18,4% (в 1,22 раза), соответственно (р<0,05). При ДН, и ДН2 средняя амплитуда колебания была ниже, чем в группе детей без ДН на 26,4% и 31,6%, соответственно (р<0,01). Во всех рассматриваемых случаях адаптация клеток in vitro сопровождалась снижением средних показателей с преобладанием эпителиоцитов с относительно низкими амплитудами колебания (положительный As).

ДН1 ДН1

Н15 мин

Рис. 4. Изменение доли подвижных клеток (К,%) н амплитуды колебания (Аср) клеток в зависимости от степени дыхательной недостаточности

Для сопоставления изменений ЭФП назальных эпителиоцитов в зависимости от топики поражения дыхательной системы проведено сравнительное изучение ЭКА клеток у детей в остром периоде рецидивирующего бронхита и у детей с поражением верхних дыхательных путей на фоне острой респираторной инфекции (ОРЗ) без поражения бронхов. Полученные результаты указывают, что средние значения К,% и Аср у детей с ОРЗ были выше, чем у детей в остром периоде РБ: доля подвижных клеток - на 22%, (р>0,05), средняя амплитуда - в 2,5 раза, (р<0,001) (рис. 5).

ш

ш

ж щ

ш

ш

ОРЗ

Рецидивирующий бронхит

ОРЗ

Рецидивирующий бронхит

Рис. 5 Изменение доли подвижных клеток (К,%) и амплитуды колебания (Аср) клеток в зависимости от топики поражения респираторного тракта

Более того, если в популяции клеток детей группы 1А преобладающими были эпителиоциты с относительно низкими амплитудами колебания и популяция характеризовалась гетерогенностью по ЭКА (положительный Ав и Ех), то при ОРЗ популяция отличалась электрокинетической однородностью с превалирующими эпителиоцитами с относительно высокими амплитудами колебания (отрицательный Ав и Ех) (р<0,001) (рис.6).

ода

-0,58

1 !

0Р.Ч

Тр.ТА

орз

Группы детей

Группы детей

Рис. 6 Изменение коэффициентов Ая и Ех в зависимости от топики поражения респираторного тракта

Адаптация клеток сравниваемых групп сопровождалась угнетением клеточной

активности с уменьшением К,% и Аср (р>0,05).

Через 1 месяц после бронхита, согласно полученным риноцитологическим данным, морфологические характеристики эпителиоцитов имели лишь незначительную тенденцию к восстановлению (табл. 1, рис. 1, рис. 2). Характерным было, по-прежнему, преимущественно изолированное расположение эпителиоцитов. Средний размер клеток сохранялся меньшим, чем у здоровых детей (р<0,05). Выявлялась вакуолизация цитоплазмы и ядер. Встречались многоядерные клетки и наблюдались признаки кариолизиса. Тем не менее, на фоне уменьшения деструктивых изменений и увеличения количества морфологически цельных клеток, средние показатели ЭФП не имели тенденции к нормализации, отмечалась их стабилизация на тех же значениях, что и в периоде обострения (К,%=34,71±4,37% и Аср=0,84±0,09 мкм во НА группе и К,%=32,05±7,52% и Аср=1,09±0,17 мкм во ИВ группе), р<0,001 (табл.4, рис.7, рис.8). В обеих группах в этом периоде изменение показателей ЭФП отражало сниженную клеточную адаптивность (табл. 4).

Таблица 4

^Шотод Начало инкубации Через 10 минут инкубация

Грунпа^\ К, % Ая Ех Аср, мкм К, % Ав Ех Аср, мкм

Группа сравнения, п=76 52,67 ±3,40 0,62 ±0,25 1,48 ±0,94 2,90 ±0,27 37,63 ±10,07 -0,77 ±0,55 -0,67 ±2,19 1,1 ±0,26" •н

НА, п=57 34,71 ±4,37 ••■о 1,32 ±0,26 2,69 ±0,84 0,84 ±0,09 30,56 ±4,52 1,74 ±0,21 "*Н 3,41 ±0,96 0,77 ±0,16

ИВ, п=20 32,05 ±7,52"'д 0,89 ±0,18 0,40 ±1,02 1,09 ±0,17'"А 26,44 ±6,96 0,26 ±0,52 -0,85 ±1,31 0,68 ±0,15

II С, п=12 31,19 ±3,76*0 1,54 ±0,27*В -2,32 ±0,91 *В 0,78 ±0,34"° 28,12 ±3,36***° 1,76 ±0,37 -2,28 ±0,54***А 0,67 ±0,2

Примечание: *- р<0,05, **-р<0,01, *** -р<0,001:

индекс 0- по отношению к группе сравнения,

А-по отношению к группе А, В- по отношению к группе В, Н- по отношению к результатам исследования в начале инкубации.

Анализируя ЭФП эпителиоцитов 12 детей, перенесших в интервале между первым и шестым месяцем катамнестического наблюдения очередной эпизод бронхита (группа НС), отмечено, что средние показатели (К,% и Аср, мкм) мало отличались от показателей групп НА и ИВ (р>0,05) (табл. 4). Отличительной особенностью была электрокинетическая однородность (отрицательный Ех) популяции и превалирование эпителиоцитов с относительно низкими амплитудами колебания (положительный Ая) уже на 5-ой минуте инкубации (р<0,05).

К окончанию шестимесячного периода реконвалесценции после перенесенного бронхита, несмотря на отсутствие жалоб детей и клинических симптомов заболевания, морфо-функциональная структура эпителиоцитов верхних дыхательных путей не была восстановлена. Более чем в половине случаев (58,3%) эпителиоциты сохраняли изолированное расположение. Средний размер клеток так же был достоверно меньше, чем у здоровых детей. Количество клеток с вакуолизированными цитоплазмой и ядрами уменьшалось. Многоядерные клетки и кариолгоис не регистрировались. Показатели деструкции отражены в таблице 1. Соответственно положительным изменениям риноцитограммы наблюдалось повышение ЭФП клеток, однако, показатели так же не восстанавливались до соответствующих значений здоровых детей (табл. 5, рис. 7, рис. 8).

Таблица S

Показатели ЭФП назальных эпителиоцитов III группы (М±т)_

^Недиод Группа Начало ивкубацни Через 10 минут инкубации

К,% As Ex Аср, мкм К,% As Ех Аср, мкм

Группа сравнения, п=76 52,67 ±3,40 0,62 ±0,25 1,411 ±0,94 2,90 ±0,27 37,63 ±10,07 -0,77 ±0,55 -0,67 ±2,19 1,1 ±0,26 •••н

ША, п=45 45,28 ±5,98 1,28 ±0,32 3,27 ±0,98 1,20 ±0,12 •«о 35,92 ±6,84 0,79 ±0,33 •н 1,88 ±0,79 0,97 ±0,14

ШВ, п=20 33,17 ±7,86 "А 1,39 ±1,13 0,77 ±0,38 0,92 ±0,17 "•А 29,68 ±6,03 1,39 ±1,48 1,37 ±0,32 0,52 ±0,45

ШС, 11=12 34,17 ±3,99 ***0 0,92 ±0,17 1,56 ±0,27 **0 1,34 ±0,23 "0 33,67 ±3,67 0,99 ±0,18 *»Н 0,74 ±0,29 0,99 ±0,06

Примечание: *- р<0,05, **- р<0,01, *** -р <0,001: индекс 0- по отношению к группе сравнения, А-по отношению к группе А,

Н- по отношению к результатам исследования в начале инкубации.

Так, в ША группе К,% сохранялся ниже, чем в группе сравнения на 14%, Аср - на 58,6%. Причем у детей группы ШВ показатели были существенно ниже, чем в гр. сравнения: К,% ниже на 37%, Аср - на 68,3%. У детей ШС группы средние показатели так же были снижены. Во всех подгруппах популяция клеток характеризовалась электрокинетической гетерогенностью и превалированием клеток с относительно низкими амплитудами колебания. Адаптация клеток, по-прежнему, была снижена.

Гр. сравнения IA I в ИЛ НЕ! ИМ III в

0 Кинетика, 6 мин Н Кинетика, 16 мин

Рис. 7. Изменение доли подвижных клеток (Кинетика,%) назальных эпителиоцитов при рецидивирующем бронхите в катамнезе

Гр. IA IB IIA MB ША III В

сравнения

И Амплитуда, 5 мин О Амплитуда, 15 мин

Рис. 8. Изменение средней амплитуды колебания (Аср) назальных эпителиоцитов при рецидивирующем бронхите в катамнезе

Немаловажной особенностью ЭФП эпителиоцитов является влияние на ее изменение длительности рецидивирования бронхита. С увеличением продолжительности периода рецидивирования бронхита наряду с урежением частоты повторных бронхитов (исходя из выявленных анамнестических данных) в структуре популяции реснитчатых эпителиоцитов возрастает доля клеток с относительно низкими амплитудами колебания (положительный Ав), но за счет электрокинетической гетерогенности (положительный Ех) в популяции повышается средняя амплитуда колебания клеток (рис. 9).

3,6 ------------------------------------------------------------------------------ 7

12 3

Длительность рецидивирования бронхита, годы

^Аэ ЕЭЕх Амплитуда колебания, мкм

Рис. 9 Зависимость коэффициентов Аз, Ех и Аср от длительности рецидивирования бронхита

Сопоставление данных риноцитограмм и ЭФП эпителиоцитов позволило отметить, что исследование ЭФП эпителиоцитов является более тонким индикатором их функционального состояния, чем исследование риноцитограмм. Это обусловлено более ранним появлением функциональных отклонений, выявляемых с помощью микроэлектрофореза в морфологически неповрежденных клетках, с одной стороны, и поздним восстановлением их функциональной активности, в отличие от структурно-морфологических показателей. Так, например, в риноцитограмме здоровых детей среди 92,03±3,10% морфологически неповрежденных эпителиоцитов электрокинетически активными, т.е. функционально полноценными являются лишь 52,67±3,4% клеток. Такая же тенденция сохраняется и у детей во всех периодах РБ (рис. 10).

К53 Морфологически целые клетки Кинетика, 5 мин

Рис. 10. Взаимосвязь доли подвижных эпителиоцитов (К,%) и доли морфологически цельных клеток

Влияние ингаляций минеральной водой «Увннская лечебная» на электрокинетические свойства реснитчатых эпителиоцитов.

Учитывая важную роль функции мукоцилиарного транспорта в механизмах саногенеза и патогенеза заболеваний дыхательных путей, необходимо знать пути и

способы его коррекции. С этой целью произведена оценка ингаляции Увинской минеральной водой как средства, улучшающего функциональную активность реснитчатых эпителиоцитов. Учитывая изменение ЭФП реснитчатых клеток при рецидивирующем бронхите, данные свойства клеток были выбраны в качестве индикатора. Полученные данные подтверждают активирующее влияние минеральной воды на функциональную активность эпителиоцитов (табл. 6, рис. 11).

Таблица 6

Изменение ЭФП назальных эпителиоцитов под влиянием ингаляций Увинской ____минеральной воды______

^^Период Начало инкубации Через 10 минут инкубации

Группа К,% Ая Ех Аср, мкм К, % АБ Ех Аср, мкм

Группа 52,67 0,62 1,48 2,90 37,63 -0,77 -0,67 1,1

сравнения, ±3,40 ±0,25 ±0,94 ±0,27 ±10,07 ±0,55 ±2,19 ±0,26

п=76

До ингаляции 33,44 0,99 1,57 1,26 29,42 0,98 0,41 1,19

п=82 ±2,89 ±0,21 ±0,72 ±0,19 ±3,39 ±0,16 ±0,62 ±0,23

***0 »♦♦о **Н

После 40,1 0,63 1,25 1,57 40,00 0,68 0,64 2,09

ингаляции ±4,55 ±0,23 ±0,62 ±0,31 ±5,60 ±0,28 ±0,72 ±0,44

п=82 **А **А ♦А **А *Н

Примечание: *- р<0,05, **- р<0,01, *** - <0,001:

индекс 0- по отношению к группе сравнения,

А - по отношению к группе «До ингаляции»,

Н- по отношению к результатам исследования в начале инкубации.

Это проявлялось в достоверном увеличении количества подвижных клеток (от 33,44±2,89% до 40,1±4,55%), средней амплитуды их колебания (от 1,26±0,19 мкм до 1,57±0,31 мкм) и повышении адаптивных реакций клеток после ингаляции.

До ингаляции После ингаляции й Кинетика, 5 мин 0 Кинетика, 15 мин

До ИНГ2ЛЯЦИИ

0 Амплитуда, 6 мин

После ингаляции ЕЭ Амплитуда, 16 мин

Рис. 11. Изменение доли подвижных назальных эпителиоцитов (Кинетика,%) и амплитуды колебания (Аср) до и после ингаляции минеральной водой «Увинская лечебная»

В то же время, дифференциальный анализ популяционных изменений с использованием Аэ позволил выявить, что изменение типов распределения эпителиоцитов по электрокинетическим свойствам (ЭКС) после ингаляции минеральной водой зависит от течения бронхита.

М,2

У I: " . '

15« 14,3

•

шШ

шя

До ингаляции

После ингаляции

О клетки о "низкой" ««К1питудой,% И клетки с "вьюокой" якж1гатудой,%

До ингаляции После ингаляции

□ клетки с "низкой" амплитудой,% 0 клетки с "высокой" амплитудой,%

Группа I А Группа I В

Рис. 12. Динамика частоты встречаемости типов клеток по ЭКС после ингаляции минеральной водой «Увинская» у больных группы 1А и 1В

Так, увеличение частоты встречаемости высокоаплитудных клеток (отрицательный

тип распределения) характерно лишь для детей, переносящих бронхит без пневмонии (группа 1А) (х2=11,21 при п=1, р<0,001). В то время как у детей 1В группы (при сочетании бронхита с пневмонией) соотношение клеток с относительно высокими и низкими амплитудами остается прежним (р>0,05) (рис. 12).

Таким образом, полученные результаты работы позволили сделать следующие выводы.

ВЫВОДЫ

1. Обострение рецидивирующего бронхита приводит к снижению функциональной активности назальных реснитчатых эпителиоцитов: доля подвижных клеток уменьшается на 34,3%, средняя амплитуда колебания (Аср) - на 58,2%. Полного восстановления функции клеток не происходит даже через 6 месяцев после обострения: доля электроотрицательных клеток сохраняется ниже нормы на 14,0%, средняя амплитуда - на 58,6%.

2. Функциональные нарушения эпителиоцитов у больных с рецидивирующим бронхитом, изучаемые методом микроэлектрофореза, зависят от степени поражения респираторного тракта: чем тяжелее и обширнее патологический процесс, тем ниже средние показатели элекгрофоретической подвижности и уровень клеточной адаптации

3. Длительное и стойкое снижение функциональной активности назальных эпителиоцитов при рецидивирующем бронхите выявляется у всех обследованных детей и

диктует необходимость обязательной комплексной реабилитации после купирования острых проявлений бронхита.

4. Ингаляция минеральной водой «Увинская лечебная» оказывает активирующее влияние на функциональную активность реснитчатых зпителиоцитов с увеличением количества подвижных клеток (К,%) на 20,0% (р<0,01) и средней амплитуды колебания (Аср) на 25,0% (р<0,05), а также повышением адаптивности клеток.

5. Раннее появление функциональных отклонений, выявляемых с помощью микроэлектрофореза в морфологически неповрежденных клетках и позднее восстановление функциональной активности по сравнению со структурно-морфологическими показателями свидетельствует о том, что исследование электрофоретической подвижности зпителиоцитов является более тонким индикатором прижизненного состояния зпителиоцитов, по сравнению с исследованием риноцитограмм, что предполагает возможность использования метода микроэлектрофореза для ранней диагностики функционального нарушения реснитчатых зпителиоцитов при рецидивирующем бронхите у детей.

6. При контроле эффективности лечебно-реабилитационных мероприятий при рецидивирующем бронхите у детей нами предлагается неинвазивный метод микроэлектрофореза для оценки степени поражения реснитчатых эпителиоципад респираторной системы.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Детям с рецидивирующим бронхитом после купирования острого периода необходима комплексная реабилитация, направленная на репарацию эпителия дыхательных путей.

2. Рекомендуется в профильных лечебных учреждениях использовать микроэлекрофорез назальных зпителиоцитов как скрининговый неинвазивный метод для исследования степени поражения реснитчатого эпителия, а также для оценки влияния лекарственных препаратов на его функциональную активность и контроля эффективности проводимой терапии.

3. Ингаляция минеральной водой «Увинская лечебная» может быть рекомендована как средство в комплексном лечении и реабилитации больных с рецидивирующим бронхитом, поскольку улучшает функциональные свойства реснитчатых эпителиоцитов респираторного тракта.

СПИСОК ПЕЧАТНЫХ РАБОТ

1. Занкеева А.Г. Роль цилиарной дисфункции мерцательного эпителия в патогенезе болезней органов дыхания у детей/ А.Г. Занкеева, И.И. Лаврова //Состояние окружающей среды и здоровье детей: Материалы конференции, посвященной 25-летию кафедры детских инфекций и 70-летию профессора И.Г. Гришкина.- Ижевск, 2005, -С. 76-81.

2. Занкеева А.Г. Клиническое значение изучения электрокинетических свойств клеток назального эпителия у детей / А.Г. Занкеева // Актуальные вопросы биологии и медицины: Материалы II межрегиональной межвузовской конференции студентов и молодых ученых. - Ижевск, 2005.- С. 212-214.

3. Занкеева А.Г. Изменение электрокинетической активности переживающих клеток при острых респираторных заболеваниях у детей/ А.Г. Занкеева, И.Г. Гришкин, A.A. Соловьев, М.А. Сидорова, Е.А. Ермилов // Актуальные вопросы инфекционной патологии у детей (диагностика и лечение): Материалы IV Конгресса педиатров-инфекционистов,- Москва, 2005.- С. 75.

4.Сидорова М.А. Роль C.pneumoniae в развитии рецидивирующего обструктивного бронхита у детей дошкольного возраста/ М.А.Сидорова, Е.А.Бакулина, И.А.Ходырева, С.В.Туровец, Л.Г.Лазаренко, А.Г.Занкеева //Актуальные вопросы инфекционной патологии и вакцинопрофилактики у детей: Материалы четвертого российского конгресса детских инфекционистов. -Москва, 14-16 декабря 2005г. - Москва, 2005. - С.164-165.

5. Занкеева А.Г. Клинико-эпидемиологические особенности рецидивирующего бронхита у детей/ А.Г. Занкеева, И.Г. Гришкин, A.A. Соловьев, М.А. Романова// Актуальные вопросы инфекционной патологии и вакцинопрофилактики у детей: Материалы V Конгресса педиатров- инфекционистов.- Москва, 2006.- С 67.

6. Занкеева А.Г. Влияние ингаляций минеральной воды «Увинская лечебная» на электрокинетические свойства назальных эпителиоцитов при рецидивирующем бронхите у детей / А.Г. Занкеева, И.Г. Гришкин, A.A. Соловьев, М.А. Романова // Здоровье детей-здоровье нации: Сборник научных работ. - Киров, 2006. - с. 65-66.

7. Романова М.А. Клиника, диагностика и лечение рецидивирующего бронхита атипичной этиологии у детей./М.А. Романова, А.Г.Занкеева, И.Г.Гришкин.// Здоровье ребенка-здоровье нации: Сборник научных работ. - Киров, 2006,- С.222-224.

8. Романова М.А. Хламидийная и микоплазменная инфекция у детей с рецидивирующим бронхитом /М.А. Романова, А.Г.Занкеева// Актуальные медико-биологические проблемы: Материалы III межрегиональной межвузовской научной конференции студентов и молодых ученых. Ижевск, 24-27апреля 2006г. - Ижевск, 2006. -С.128-130.

9. Романова М.А. Клинико-лабораторные особенности рецидивирующего бронхита хламидийной и микоплазменной этиологии./М.А. Романова, А.Г. Занкеева, И.Г. Гришкин, И.А.Ходырева, Л.Г. Лазаренко, C.B. Туровец, Е.А. Бакулина// Труды Ижевской государственной медицинской академии. - Т.44- Ижевск, 2006,- С.165-166.

Ю.Занкеева А.Г. Влияние острой респираторной инфекции на электрокинетическую подвижность назальных эпителиоцитов и эритроцитов периферической крови у детей / А.Г.Занкеева, И.Г.Гришкин, А.А.Соловьев, М.А.Романова, Л.П.Винокурова // Труды Ижевской государственной медицинской академии. - Т.44 - Ижевск, 2006,- С.161-162.

П.Романова М.А. Этиологические агенты рецидивирующего бронхита у детей / М.А. Романова, А.Г. Занкеева, И.Г. Гришкин, C.B. Туровец, Е.А. Бакулина, И.А.Ходырева// Актуальные вопросы инфекционной патологии и вакцинопрофилактики у детей: Материалы пятого Российского конгресса детских инфекционистов. Москва, 4-6 декабря 2006г. - Москва, 2006. - С. 13 6.

12.Романова М.А. Ровамицин в комплексной терапии рецидивирующего бронхита, вызванного C.pneumoniae и M.pneumoniae у детей./М.А. Романова, А.Г. Занкеева, И.Г. Гришкин, И.А.Ходырева, C.B. Туровец, Е.А. Бакулина // Актуальные вопросы инфекционной патологии и вакцинопрофилактики у детей: Материалы пятого

Российского конгресса детских инфекционистов. Москва, 4-6 декабря 2006г. - Москва,

2006.-С. 137.

13. Занкеева А.Г. Цитологический анализ эпителия слизистой носа у детей с респираторными инфекциями/ А.Г. Занкеева, И.Г. Гришкин, А. А. Соловьев, А.Н. Сабрекова, Г.А. Иванова // Актуальные вопросы инфекционной патологии и вакцинопрофилакгики у детей: Материалы VI конгресса педиатров- инфекционистов.- М,

2007.- С. 70.

14. Занкеева А.Г. Особенности эритроцитофореза при респираторных инфекциях у детей дошкольного возраста / А.Г. Занкеева, И.Г. Гришкин, А.А. Соловьев, М.А Романова, С.В. Туровец, Е.А. Бакулина, И.А. Ходырева // Актуальные вопросы инфекционной патологии и вакцинопрофилакгики у детей: Материалы VI конгресса педиатров-инфекционистов.- М, 2007.-С.69-70.

15. Занкеева А.Г. Влияние ингаляций минеральной воды Увинская на мерцательный эпителий при рецидивирующих бронхитах у детей / А.Г. Занкеева, А.М. Сабрекова, Г.А. Иванова, М.А. Романова // Современные аспекты биологии и медицины. Часть 2: Материалы V межрегиональной межвузовской научной конференции молодых ученых и студентов. - Ижевск, 2008.-С.119-121.

16. Занкеева А.Г. Клинико-лабораторная характеристика рецидивирующих бронхитов у детей дошкольного возраста / А.Г. Занкеева, А.М. Сабрекова, Г.А. Иванова, М.А. Романова II Современные аспекты биологии и медицины. Часть 2: Материалы V межрегиональной межвузовской научной конференции молодых ученых и студентов,-Ижевск, 2008.-С.129-131.

17. Занкеева А.Г. Электрофоретическая подвижность эритроцитов при респираторных инфекциях у детей / А.Г. Занкеева, М.А. Романова // Современные аспекты биологии и медицины. Часть 2: Материалы V межрегиональной межвузовской научной конференции молодых ученых и студентов,- Ижевск, 2008.-С.178-181.

18. Занкеева А.Г. Особенности электрофоретической подвижности эритроцитов при респираторных инфекциях у детей дошкольного возраста/ А.Г. Занкеева, И.Г. Гришкин, А.А. Соловьев, М.А. Романова, С.В. Туровец, Е.А. Бакулина, И.А. Ходырева // Актуальные проблемы педиатрии. Материалы I Конгресса педиатров Урала. -Екатеринбург, 2008.- С.53

19. Романова М.А. Роль карнитина хлорида в комплексной терапии рецидивирующего бронхита, ассоциированного с инфицированием С.рпеитошае и М.рпеитошае/ М.А. Романова, И.Г.Гришкин, А.Г.Занкеева // Актуальные вопросы инфекционной патологии и вакцинопрофилакгики у детей: Материалы седьмого Российского конгресса детских инфекционистов. Москва, 3-5 декабря 2008г. - Москва,

2008. -С.124-125.

20. Занкеева А.Г. Цитологические критерии оценки влияния ингаляций минеральной водой «Увинская» на реснитчатый эпителий у детей с рецидивирующим бронхитом/ А.Г.Занкеева, И.Г.Гришкин, А.А.Соловьев, М.Н.Канкасова, М.А.Романова и др.// Актуальные вопросы инфекционной патологии и вакцинопрофилакгики у детей: Материалы седьмого Российского конгресса детских инфекционистов. Москва, 3-5 декабря 2008г. - Москва, 2008. - С.52.

21. Занкеева А.Г. Оптимизация цитологического исследования назальных эпителиоцитов при рецидивирующих бронхитах у детей/ А.Г.Занкеева, И.Г.Гришкин, А.А.Соловьев, М.Н.Канкасова, М.А.Романова и др. // Материалы I Ежегодного Всероссийского Конгресса по инфекционным болезням. — Москва, 2009. - С.72.

22. Занкеева А.Г. Характеристика риноцитограммы у детей в разные периоды течения рецидивирующего бронхита/ А.Г. Занкеева, М.А. Романова // Современные аспекты медицины и биологии: Материалы IX межвузовской научной конференции молодых ученых и студентов. Ижевск, 20-23 апреля 2009г. - Ижевск, 2009. - С.223-225.

23. Динамика электрофоретической подвижности назальных эпителиоцитов у больных с рецидивирующим бронхитом / А.Г. Занкеева // Детские инфекции. - М., 2009,-Том 8.-№ 1.-С. 17-20.

24. Занкеева А.Г. Электрофоретическая подвижность назальных эпителиоцитов у здоровых детей и ее изменение при рецидивирующем бронхите / А.Г. Занкеева, И.Г. Гришкин, A.A. Соловьев, М.Н. Канкасова, М.А. Романова, Л.Г. Лазаренко, И.А. Ходырева, Е.А. Бакулина, C.B. Туровец // Медико-санитарной части «Ижмаш» -70 лет. Материалы научно-практической конференции, посвященной 70-летию МСЧ Ижмаш. - Ижевск, 2009.- С. 222-224.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

1. Аср -средняя амплитуда

2. ВДП - верхние дыхательные пути

3. ДН - дыхательная недостаточность

4. ИДК - индекс деструкции клеток

5. ИЦК - индекс цитолиза клеток

6. К,% - доля подвижных клеток

7. ОРЗ - острое респираторное заболевание

8. РБ - рецидивирующий бронхит

9. РФ - Российская Федерация

10. СПД - средний показатель деструкции

11. ср. спец. - среднее специальное

12. ЭКА - электрокинетическая активность

13. ЭКС - электрокинетические свойства

14. ЭФП - электрофоретическая подвижность

15. Ав - коэффициент ассиметрии

16. Ех- коэффициент эксцесс

17. №С1 - хлорид натрия

ЗАНКЕЕВА АННА ГЕОРГИЕВНА

ОПТИМИЗАЦИЯ ОЦЕНКИ ЭФФЕКТИВНОСТИ ЛЕЧЕНИЯ ПРИ РЕЦИДИВИРУЮЩЕМ БРОНХИТЕ У ДЕТЕЙ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ МИКРОЭЛЕКТРОФОРЕЗА НАЗАЛЬНЫХ ЭПИТЕЛИОЦИТОВ

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Отпечатано с готового оригинал-макета заказчика

Подписано в печать 26.11.2009. Формат 60x84 1/16. Усл. печ. л. 1,0. Тираж 100 экз. Заказ № 1897.

Типография издательства «Удмуртский университет» 426034, Ижевск, ул. Университетская, 1, корп. 4.

Актуальность проблемы. Рецидивирующий бронхит (РБ) представляет одну из распространенных форм патологии органов дыхания у детей [15, 23, 166], которая формируется в раннем и дошкольном возрасте и составляет, в среднем, около 25,8 % всей бронхолегочной патологии детского возраста [140]. РБ является отражением особенности реагирования организма ребенка на инфекцию и факторы окружающей среды [23, 100]. Как правило, эти дети состоят на диспансерном учете в группе часто болеющих детей (ЧБД) [29, 65]. При этом на долю ЧБД приходится до 75% среди всех случаев острых респираторных заболеваний (ОРЗ) [17].

Приоритетными задачами диспансеризации детей, страдающих повторными бронхитами, являются диагностика функционального состояния респираторной системы, выбор адекватной терапии, контроль эффективности проводимого лечения и реабилитационных мероприятий и прогнозирование исходов заболевания. Важное значение для реализации данных задач диспансеризации в педиатрической практике имеет разработка и использование неинвазивных, несложных в исполнении и, в то же время, высокоинформативных методов исследования.

Рецидивирующий бронхит формируется под воздействием на организм ребенка ряда факторов, среди которых выделяют инфекционные, генетические, биологические, социальные и, естественно, антропогенное загрязнение окружающей воздушной среды [28, 49, 68, 72, 123, 160, 258]. При этом первой поражаемой мишенью является реснитчатый эпителий слизистой оболочки респираторного тракта. Работа этого эпителия в здоровом организме при нормальных реологических характеристиках слизи обеспечивает непрерывный процесс очищения дыхательных путей от попавших извне инородных частиц и микроорганизмов - так называемый мукоцилиарный клиренс (МЦК) [155].

Этиологией обострения РБ является инфекционный фактор. Остальные вышеуказанные факторы - предрасполагающие. Известно, что поражение слизистой оболочки под влиянием инфекционного воспаления приводит к мукоцилиарной несостоятельности. Длительный период репарации мукоцилиарной системы у детей с РБ является фоном для повторных воспалений слизистой оболочки респираторного тракта [20, 61]. Следовательно, функцию реснитчатого эпителия можно рассматривать как один из важных показателей состояния бронхолегочной системы.

Реснитчатые эпителиоциты, как и другие клетки организма, имеют на своей поверхности электрический заряд. О величине его и косвенно о явлениях, протекающих на поверхности клеток, принято судить по электрокинетическим свойствам (ЭКС) и экспериментально измеряемой скорости передвижения клеток в электрическом поле - электрофоретической подвижности (ЭФП) [181], которая изучается с помощью клеточного микроэлектрофореза [11, 81, 118, 120, 179]. Наличие электрического заряда этих клеток определяет возможность сложных физиологических функций - межклеточного взаимодействия, адсорбции на поверхности антигенов, антител, токсинов и многое другое [179]. При различных заболеваниях, сопровождающихся изменением состояния внутренней среды организма, величина отрицательного заряда мембраны клеток может существенно меняться [1, 24, 54, 192] и вызывать комплекс других патологических процессов. Например, известно, что уменьшение ЭФП эритроцитов сопровождается усилением адгезии эритроцитов, ухудшением микрореологии и развитием тканевой гипоксии.

Исследование клеточного микроэлектрофореза применяется в различных областях медицины, таких как неврология, дерматовенерология, стоматология, кардиология, гастроэнтерология, пульмонология, акушерство и гинекология, гематология, иммунология и др. Объектом исследования в большинстве случаев являются клетки периферической крови (эритроциты), буккальный эпителий [1, 7, 8, 48, 69, 79, 82, 91, 95, 117, 163, 190], макрофаги [172]. Однако метод микроэлектрофореза клеток не получил должного распространения в педиатрической практике. Имеются лишь единичные работы, посвященные изучению ЭФП эритроцитов при острых респираторных инфекциях и ядер буквальных эпителиоцитов при кишечных инфекциях у детей [2,64]. Исследований ЭФП реснитчатых эпителиоцитов не проводилось.

Как известно, состояние носоглотки является косвенным отражением состояния бронхолегочной системы и влияет на течение патологии легких [128]. Поэтому изучение функционального состояния назальных реснитчатых эпителиоцитов с использованием нетравматичного и неинвазивного метода микроэлектрофореза может иметь важное значение при реабилитации детей с рецидивирующим бронхитом. Данные о способах контроля электрокинетической активности (ЭКА) реснитчатых эпителиоцитов у детей, страдающих рецидивирующим бронхитом, представляют теоретический и практический интерес, указывающий возможности к управляемой коррекции возникающих в организме ребенка нарушений. Это может быть важным при индивидуальном подборе адекватной терапии, контроле эффективности проводимых лечебно-реабилитационных, мероприятий и прогнозировании течения заболевания.

С учетом вышеизложенного нами поставлены следующие цель, и-задачи настоящей работы.

Цель работы: оптимизировать методы контроля эффективности лечебно-реабилитационных мероприятий при рецидивирующем бронхите у детей с использованием метода микроэлекрофореза назальных реснитчатых эпителиоцитов.

Задачи исследования:

1. Изучить характер и возможные механизмы рецидивировать бронхитов у детей на современном этапе.

2. Разработать методику прижизненного исследования реснитчатых эпителиоцитов, как составляющей' мукоцилиарного аппарата;, при рецидивирующем бронхите у детей.

3. Оценить влияние ингаляции минеральной водой «Увинская лечебная» как средства, улучшающего функциональную активность назальных эпителиоцитов, у детей с рецидивирующим бронхитом.

4. Изучить в катамнезе рецидивирующего бронхита функциональное состояние назальных эпителиоцитов в сопоставлении с клиническими особенностями течения бронхита.

5. Изучить в катамнезе рецидивирующего бронхита сопряженность показателей электрофоретической подвижности назальных эпителиоцитов и риноцитограмм.

Научная новизна работы

Впервые разработан метод цитологического анализа с изучением электрофоретической подвижности назальных реснитчатых эпителиоцитов, имеющий диагностическое значение у больных рецидивирующим бронхитом.

Установлена возможность применения метода микроэлектрофореза назальных реснитчатых эпителиоцитов для оценки степени тяжести поражения респираторного тракта при рецидивирующем бронхите у детей.

Впервые проведен комплексный анализ популяции реснитчатых эпителиоцитов дыхательных путей по электрофоретической подвижности во взаимосвязи с их морфологическими особенностями у здоровых детей и у больных в катамнезе рецидивирующего бронхита.

Выявлены закономерности адаптационных изменений электрокинетической активности реснитчатых эпителиоцитов при рецидивирующем бронхите у детей.

Впервые проведена оценка влияния ингаляционного воздействия минеральной водой «Увинская лечебная» на реснитчатые эпителиоциты с исследованием электрофоретической подвижности у детей в остром периоде рецидивирующего бронхита. Выявлено активирующее влияние ее на электрокинетическую активность эпителиоцитов.

Практическое значение

Использование неинвазивного, атравматичного метода микроэлектрофореза переживающих клеток является приоритетным при исследовании клеточного компонента мукоцилиарного аппарата у детей с рецидивирующим бронхитом.

Использованный нами дифференциальный подход к анализу популяции реснитчатых эпителиоцитов по электрокинетическим свойствам может применяться как дополнительный метод при исследовании их функционального состояния при рецидивирующем бронхите у детей. Также может оказаться полезным при оценке влияния проводимой ингаляционной терапии на функциональную активность реснитчатых эпителиоцитов.

Проведенные исследования определяют возможность использования применяемой методики микроэлектрофореза переживающих клеток как диагностической, позволяющей при индивидуализации лечебных мероприятий оценивать влияние лекарственных препаратов in vivo на электрофоретическую подвижность нативных эпителиоцитов, как показатель их функциональной активности.

Полученные данные расширяют возможности диагностического использования метода микроэлектрофореза при различной патологии респираторного тракта у детей.

Основные положения, выносимые на защиту

1. У детей после обострения рецидивирующего бронхита длительно, сохраняется функциональная несостоятельность реснитчатых эпителиоцитов, обуславливающая рецидивы заболевания.

2. Электрофоретическая подвижность назальных эпителиоцитов респираторного тракта является более тонким индикатором их состояния в сравнении с их цитоморфологическими характеристиками.

3. Ингаляция минеральной водой «Увинская лечебная» оказывает активирующее влияние на функциональное состояние реснитчатых эпителиоцитов.

Реализация результатов исследования

Результаты исследований внедрены в клиническую практику МУЗ Медсанчасти «Ижмаш» г. Ижевска, используются в учебном процессе на кафедре детских инфекций с курсом педиатрии^ и кафедре гистологии, эмбриологии и цитологии ГОУ ВПО «Ижевская государственная медицинская академия Росздрава».

Апробация диссертационного материала

Результаты проведенных исследований и основные положения работы были доложены и обсуждены на:

IV Конгрессе педиатров-инфекционистов «Актуальные вопросы инфекционной патологии и вакцинопрофилактики у детей» (Москва, 2005г.),

V Конгрессе педиатров-инфекционистов «Актуальные вопросы инфекционной патологии и вакцинопрофилактики у детей» (Москва, 2006г.),

VI Конгрессе педиатров- инфекционистов «Актуальные вопросы инфекционной патологии и вакцинопрофилактики у детей» (Москва, 2007г.),

VII Конгрессе педиатров- инфекционистов «Актуальные вопросы инфекционной патологии и вакцинопрофилактики у детей» (Москва, 2008г.),

II Межрегиональной межвузовской конференции молодых ученых и студентов «Актуальные вопросы биологии и медицины» (Ижевск, 2005г.),

III Межрегиональной межвузовской конференции студентов и молодых ученых «Актуальные вопросы биологии и медицины» (Ижевск, 2006г.),

IX Межвузовской научной конференции молодых ученых и студентов «Современные аспекты медицины и биологии» (Ижевск, 2009г),

Конференции, посвященной 25-летию кафедры детских инфекций и 70-летию профессора И.Г. Гришкина «Состояние окружающей среды и здоровье детей» (Ижевск, 2005г.),

I Конгрессе педиатров Урала «Актуальные проблемы педиатрии» (Екатеринбург, 2008г.),

V Межрегиональной межвузовской научной конференции молодых ученых и студентов «Современные аспекты биологии и медицины » (Ижевск, 2008г.)

I Ежегодном Всероссийском Конгрессе по инфекционным болезням (Ижевск, 2009г),

Научно-практической конференции, посвященной 70-летию Медсанчасти «Ижмаш» (Ижевск, 2009г).

Публикации

По материалам диссертации опубликованы 24 печатные работы, 1 из них - в издании, рекомендованном ВАК РФ.

Объем и структура диссертации

ВЫВОДЫ

1. Обострение рецидивирующего бронхита приводит к снижению функциональной активности назальных реснитчатых эпителиоцитов: доля подвижных клеток уменьшается на 34,3%, средняя амплитуда колебания - на 58,2%. Полного восстановления функции клеток не происходит даже через 6 месяцев после обострения: доля электроотрицательных клеток сохраняется ниже нормы на 14,0%, средняя амплитуда колебания - на 58,6%.

2. Функциональные нарушения эпителиоцитов у больных с рецидивирующим бронхитом, изучаемые методом микроэлектрофореза, зависят от степени поражения респираторного тракта: чем тяжелее и обширнее патологический процесс, тем ниже средние показатели электрофоретической подвижности и уровень клеточной адаптации.

3. Длительное стойкое снижение функциональной активности назальных эпителиоцитов при рецидивирующем бронхите выявляется у всех обследованных детей и диктует необходимость обязательной' комплексной ' реабилитации после купирования острых проявлений.

4. Ингаляция минеральной водой «Увинская лечебная» оказывает -активирующее влияние на функциональную активность реснитчатых эпителиоцитов с увеличением количества подвижных клеток (К,%) на 20,0% (р<0,01) и средней амплитуды колебания (Аср) на 25,0% (р<0,05), а также повышения адаптивности клеток.

5. Раннее появление функциональных отклонений, выявляемых с помощью микроэлектрофореза в морфологически неповрежденных клетках и позднее восстановление функциональной активности по сравнению со структурно-морфологическими показателями свидетельствует о том, что. исследование электрофоретической подвижности эпителиоцитов является более тонким индикатором прижизненного состояния эпителиоцитов, по сравнению с исследованием риноцитограмм, что предполагает возможность использования метода микроэлектрофореза для ранней диагностики функционального нарушения реснитчатых эпителиоцитов при рецидивирующем бронхите у детей.

6. При контроле эффективности лечебно-реабилитационных мероприятий при рецидивирующем бронхите у детей нами предлагается неинвазивный метод микроэлектрофореза для оценки степени поражения реснитчатых эпителиоцитов респираторной системы.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Детям с рецидивирующим бронхитом после купирования острого периода необходима комплексная реабилитация, направленная на репарацию эпителия дыхательных путей.

2. Рекомендуется в профильных лечебных учреждениях использовать микроэлекрофорез назальных эпителиоцитов как скрининговый неинвазивный метод для исследования степени поражения реснитчатого эпителия, а также для оценки влияния лекарственных препаратов на его функциональную активность и контроля эффективности проводимой терапии.

3. Ингаляция минеральной водой «Увинская лечебная» может быть рекомендована как средство в комплексном лечении и реабилитации больных с рецидивирующим бронхитом, поскольку улучшает функциональные свойства реснитчатых эпителиоцитов респираторного тракта.