Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Новые подходы к фармакокоррекции неспецифических составляющих патогенеза токсических поражений

09-5 4177

11а пр;т;|\ рукописи

ГУЛЯЕВА ИННА ЛЕОНИДОВ НА

НОВЫЕ ПОДХОДЫ К ФАРМАКОК'ОРРЕКНИИ НЕС ПЕЦПФИЧЕС КИ\ С ОСТАВЛЯЮЩИХ ПАТОГЕНЕ 1А ТОКСИЧЕСКИХ ПОРАЖЕНИЙ

14.00.25 фармако.ки ия. клиническая фармакчикн пя 14.00.16 1К11и.101 пчсская <{)мшо.км ия

Лшорефера1 дпсссркщпн на соискание ученом степени док три медицинских наук

Томск 2004

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшею профессиональною образования «Пермская государственная медицинская академия им. ак. Е.А. Вагнера Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию».

Научные консультанты:

академик РАН и РАМН, доктор медицинских наук,

профессор Черешнев Валерий Александрович

доктор биологических наук, профессор Сергеева Светлана Александровна

Официальные оппоненты

доктор медицинских наук, профессор Хачанов Вениамин Абрамович

доктор медицинских наук, профессор Ваизова Ольга Евгеньевна

доктор медицинских наук, профессор Гольдберг Виктор Евгеньевич

Ведущая организация: ГОУ ВПО «Российский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Защита диссертации состоится 2009 года в « » часов на

заседании диссертационного совета Д 001.031.01 при Учреждении Российской академии медицинских наук НИИ фармакологии СО РАМН (634028,г. Томск, пр. Ленина, 3).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Учреждения Российской академии медицинских наук НИИ фармакологии СО РАМН.

Автореферат разослан « » -г ('/(.■ С 2009 года.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор биологических наук

Амосова Е.Н.

Актуальность проблемы. Деятельность современного человека осуществляется в условиях возрастания интенсивности и продолжительности действия неблагоприятных эколого-профессиопальных факторов - колебаний барометрического давления, температурных нагрузок, изменений парциального давления газов вдыхаемого воздуха, интенсивных шумов и вибраций, гнпергравнтацпн или невесомости, угловых ускорении, негативных мнформпниошю-ссмантнческнх и других факторов среды. С'очстаиное, одновременное или последовательное действие нескольких факторов ведет к взаимному отягощению их влияния па организм человека. Выполнение в тгнх условиях задач профессиональной деятельности, особенно связанных с физическими и психочмоцпоиаль-ными нагрузками, обусловливает дополнительное напряжение функций организма и может вызвать быстрое истощение его физиологических резервов.

В ответ на воздействие определенной дозы (интенсивности и длительности) неблагоприятных эколого-профсссиональпых ([пппоров могут развиваться состояния предельного напряжения механизмов адаптации с обратимыми явлениями дезадаптации, которые обозначаются термином «'экстремальные». Особенно высок риск развития ■экстремальных и критических состояний у ликвидаторов последствии аварий и катастроф, участников военных конфликтов, подводников, водолазов, десантников, лётного состава, космонавтов (Новиков B.C. и соавт., 1998; Козлов II.В., 1992; Шсстопалоп С.С'., 200(1; Морозов U.C. и соавт., 2001, Ганапольский В.П., 2008; Домрачеев A.A., 2009; Гурвич В.В., 2009).

Бурное развитие ядерной энергетики и химическом промышленности во многих странах мира в последние годы сделало угрозу радиоактивного и химического заражения обширных территорий реальной не только в случае применения ядерного и химического оружия, но и в случае разрушения объектов ядерно-топливного цикла и химической промышленности, находящихся в районе ведения боевых действии, обычным оружием или при их аварии в ходе промышленной 'эксплуатации. ")то приведет к появлению новых категорий пораженных. В массовых маспмабах возникнуi специфические виты патологии, ipcöyioiHiic специальных подходов при проведении профи ыкi икн и к'чепня. ( \ шее i ненпо измеияIся величина и cipvKiypa санитарных потерь. Чначиie п.пи чнешчшеи число лиц с боевой тераиев Iпческой травмой, среди которых большую час п. соаавят пораженные токсичными химикатами и ионизирующим излучением.

В 1993 году была принята Парижская «Конвенция о запрещении разработки, производства, накопления и применения химического оружия». Конвенцию подписали более

150 государств, в их числе и Россия. В соответствии с Конвенцией изданы Указ Президента Российской Федерации «О подготовке Российской Федерации к выполнению международных обязательств в области химического разоружения» и Постановление Правительства РФ от 21 марта 1996 года №305 «Об утверждении Федеральной целевой программы «Унич тожение запасов химического оружия в Российской Федерации»», а также Постановление Правительства РФ от 24 октября 2005 года №639 «О внесении изменений в Федеральную целевую программу «Уничтожение запасов химического оружия в Российской Федерации»».

Однако основными причинами, побуждающими говорить о сохранении высокого уровня иоешю-хнмической опасности, являются достижения современной химии в области органического синтеза, беспрецедентный рост масштабов химическою производства в мирных целях, огромное разнообразие синтезированных и вновь синтезируемых веществ, многие из которых обладают высокой токсичностью.

Количество изученных физиологически активных веществ (ФАВ), свойства которых позволяют рассматривать их как потенциальные средства ведения химической войны, составляют не один десяток. И этот список будет расти даже в том случае, если в соответствии с Конвенцией будут полностью запрещены работы по поиску новых активных токсикантов. Поэтому химическое разоружение ни в одной стране пока не привело к сокращению работ в области противохимической защиты (ПХЗ).

В последнее время к угрозе применения химических веществ в военных конфликтах добавляются проблемы химической опасности в мирное время. Непрерывно растет вероятност ь аварий на химически опасных объектах, увеличивается возможность терроризма с применением боевых токсических химических веществ (БТХВ), возникает, а в отдельных регионах норой принимает катастрофические масштабы, загрязнение окружающей среды (Плужников 11.11. и соавт., 2000, 2001; Лужников Е.А., Гольдфарб Ю.С., 2001; Прозоровский В.Б. и соавт., 2001; Куценко С.А., Гребешок A.M., 2001; Соцкова В.А., 2007; Гурвич В.Б., 2009).

Всё это доказывает' актуальность изучения механизмов действия токсикантов и разработки новых методов эффективного лечения токсических поражений. Однако существующие подходы к решению обозначенной проблемы сконцентрированы в основном на специфических составляющих патогенеза токсических поражений и их терапии.

Действительно, если для купирования специфических эффектов токсикантов основным подходом является использование антидотов, то для коррекции неснецифических

проявлении токсических поражении экстремальная медицина по-прежнему опирается лишь на синдромальный (посимптомный) подход. Отсутствуют четкие критерии использования широкою арсенала средств, позволяющих повышать псспснифическую резистентность организма в критических состояниях. Немаловажным является и то, что недостаточно изучены вопросы взаимодействия специфических антидотов с лекарственными средствами, используемыми при коррекции неснецифнческих проявлений токсических поражений.

Не менее актуальной видится разработка средств и методов коррекции экстремальных состояний как для медицины труда (военной, авиакосмической, морской и спортивной медицины, гигиены груда и профнатологин, медицины катастроф), так- н для клинической медицины (Азизов А.П., 1008; Косолапой В.А., Курепкоп Л.A., 199К; Шестопалов С.С., 2000; Крылова Е.В., 2003; Юшкой Б.Г., 2006; СарШа М.. 2006).

Перспективной в качестве средств коррекции экстремальных состояний человека является группа фармакологических препаратов, которые стимулируют двигательную активность и работоспособность организма в осложненных (экстремальных) условиях (Бобков 10.Г. и соавт., 1984; Сергеева С.А., 199?; Морозов U.C. и соавт.. 1998; Катаев В.А., 2006; Воронина Т.А. и соавт., 2007). Среди них важное место занимают актопротскторы -производные бензимндазола. Действительно, опыт авиационной, радиационной, спортивной медицины показывает, что для обеспечения эффективной фармакотерапии экстремальных состояний перспективным является создание системы фармакологических комплексов, которые должны обладать психостимулирующим действием на фоне достаточного антноксидаитного, витаминного и минерального обеспечения. Для данной категории людей базовыми должны являться препараты из группы актоиротекторов (Иоников B.C. и соавт., 1998).

Цель исследования. Целью исследования явилась разработка патогенетически обоснованных подходов к коррекции неспсцифических проявлений токсических поражений с учетом взаимодействия средств неспсцифпчсскои фармакотерапии со специфическими антидотами.

Задачи исследования:

1. Изучение механизмов защитной эффективности бемитнла (антпокиелнтельной и антнрадикалыюй активности) в сравнении с референтными препаратами в модельных системах in vitro.

2. Изучение механизмов защитной эффективности бемитила и его совместного применения с антидотами (метиленовый синий, циетамин) при остром смертельном отравлении нитритом натрия и в условиях метгемоглобинемии, вызванной хронической нитритной интоксикацией.

3. Изучение влияния бс.мишла и его сочетамного применения с аншдотами фосфорор! амичеекп.ч соединений (ФОС) (атропин, ли'нпкепм) па систяние мембран клеюк (мпкропя 1кис 11.. аклиниоси. мембраневязапны.ч ферменнж). процессы нерекиснот окисления липпдов (ПиЛ) и искоюрыс мемаболнчсскис реакции в восстановительном периоде после тяжелых ос трых отравлений ФОС (карбофос, армии).

4. Изучение влияния бемитила на перекиеное окисление липидов, ключевые фрагменты амтиокислительной системы цикла трикарбоповых кислот, нентозофосфатного цикла, ферменты синтеза мочевины и морфофупкциональное состояние печени при сочетанной ин токсикации иолихлорированными бифенилами и этанолом.

5. Изучение влияния бемитила на суммарный уровень цитохрома Р450 в печени, изоформо-епецифические и изоформо-неспецифические моиооксигеназные активности в печени и лимфоцитах.

6. Изучение экспериментальной и клинической фармакокинетики бемитила при однократном и курсовом введении, а также анализ влияния феномена фармакокинетнческой интерференции на фармакокинетические параметры бемитила и других лекарственных препаратов при совместном их применении в единой лекарственной форме.

7. Изучение эффективности включения бемитила в комплекс реабилитационных мероприятий контингента, пострадавшего от аварии на Чернобыльской АЭС.

Научная новизна

Впервые изучено влияние бемитила и его сочстанного применения с антидотами мстилсновым синим и цистамипом на длительность жизни экспериментальных животных и процессы ПОЛ при остром смертельном отравлении нитритом натрия и хронической нитритной интоксикации. Показано, что механизмы потенцирования защитного эффекта сочетапного применения метиленового синего или цистамина, обладающих деметгемоглобинезирующей активностью, с бемитилом, в фармакологическом спектре которого присутствует антнгипоксическая и антиоксидантная активность, обусловлены их действием на различные звенья токсикогенеза. Продемонстрировано, что одним из

механизмов реализации защитных эффектов сочетаиного применения бсмитпла с антидотами является восстановление нарушенного нрооксидаптно-антиоксидантпого равновесия.

Выявлено, что использование бемитила в качестве дополнительного к антидотам средства восстановительного лечения после тяжелых отравлений ФОС полностью предупреждает падение активности Ыа+/К+ АТФазы и увеличение продуктов ПОЛ-дненопых конъюгатов, оснований Шиффа (ШО) в органах крыс. Бемитил в комбинации с атропином, в отличие от атропина, применяемого отдельно, предупреждает развитие структурно-функциональных нарушении в мембранах -эритроцитов и, как следствие, изменение флуоресценции мембранного зонда 1-анилннопафталин-Х-сульфопата (А! 1С') в мембранах эритроцитов крыс на 14-е и 21-е сутки после отравления карбофосом. Показано, что в основе механизма защитного влияния на эритроциты лежат три основных механизма: стимулирующее действие препарата па эндогенные аптмокендаптные системы, аптнрадикальныи эффект, мембрапостабилизируюшес действие.

Выявлено преимущество бемитила перед гепатопротсктором сплнмарипом в условиях экспериментального цирроза печени, вызванного смесью полихлорнропанных бифеннлов и этанола. Применение бемитила способствует восстановлению активности сукципатдегидрогепазы (С'ДГ), малатдегидрогеназы (МДГ), ферментов синтеза мочевины (аргиназы и карбамоилфоефатсинтетазы (КФС)), стабилизации процессов ПОЛ, активности катализы, а также нормализует скорость использования Гл-6-Ф через пентозофосфатный шунт.

Определены особенности влияния бемитила на изоформо-специфнчсскнс (7-это-кснрезоруфнп-О-деэтнлазную (ЭРОД), бензилокснрезоруфин-О-дебензилазпую (БРОД)) и изоформо-нсспецифические (амипопприн-О-дсмстнлазную, аннлин-р-гидроксплазную, 4-нптроаннзол-О-дсметмлазпую и 2,5-дифепилпзоксазол-р-гидроксилазную) активности в печени и лимфоцитах, что позволило оценит], возможное участие конкретных изоформ шпохрома Р45П и метаболизме препарата и прогнозировать характер фармакокппстической интерференции в рамках комплексной терапии.

Впервые исследовано влияние феномена фармакокппс!ичеекпн пшерфереинни на фармакокинешчеекпе параметры беми тила и других лекара ценных препаратов при совместном их применении в единой лекарст венной форме.

Показано, что механизмами реализации защитно-восстановительного действия бемитила, повышающего функциональное состояние организма и работоспособность при воздействии экстремальных факторов среды обитания и деятельности, являются

аптирадикальная активность, влияние препарата на ферменты антиоксидантной защиты (еуперокеиддисмута'за (СОД), каталаза), а также на ряд других ферментных систем, биоэнергетику клетки и состояние биологических мембран. Благодаря оптимальным фармакокипет ическим свойствам препарата, а именно интенсивному распределению в органах и тканях, бемитил способен взаимодействовать с водорастворимыми и лшюфильными свободными радикалами.

Научно-практическая значимость работы

Сформулирован подход к анализу механизмов реализации защитпо-восстанови тельных эффектов препаратов, повышающих функциональное состояние организма и работоспособность человека при воздействии экстремальных факторов среды обитания и деятельности, с целью создания методологии доклинического изучения препаратов подобного тина действия.

Обоснована перспективность включения бемитила в качестве базисного средства, обеспечивающего позитивное влияние на выживаемость и физическую работоспособность при широком спектре неблагоприятных для профессиональной деятельности условий, в систему фармакологических комплексов, содержащих дополнительные препараты, избирательно повышающие работоспособность в конкретной экстремальной ситуации.

Полученные результаты доказывают необходимость учета феномена фармакокине-тической интерференции при применении многокомпонентных лекарственных комплексов, содержащих в своем составе актопротекторы - производные беизимидазола, в условиях фармакологической коррекции экстремальных состояний, и позволяют прогнозировать потенциально опасные комбинации лекарственных средств, а также оптимизировать режимы использования актопротекторов в зависимости от их влияния на цитохром-Р450-завиеимые моноокеигепазы и особенностей распределения по органам и тканям организма.

Основные положения, выносимые на защиту 1. Присутствие неспецифических механизмов патогенеза постинтоксикационных нарушений в тканях органов-мишеней, обусловленных активацией перекисного окисления и нарушением антиоксидантной защиты, ведущих к повреждению клеточных мембран и метаболическому дисбалансу, определяет необходимость совместного применения антидотов специфического действия совместно со средствами несиецифической защиты, в част ности актопротекторов - производных беизимидазола.

2. Курсовое применение производного бензимилазола - актопротектора бемитила -обеспечивает кумуляцию препарата п крови преимущественно за счет cío накопления в эритроцитах, при чтом имеет место интенсивное распределение препарата из крови в органы и ткани-мишени с оптимальным коэффициентом распределения между полярной i] неполярной фазами, что позволяет эффективно взаимодействовать с радикалами без образования активных радикальных форм ингибитора.

3. При проведении терапии токсических повреждений с использованием фармакологических комплексов необходим обязательный учет феномена фнрмакокпнетнческой интерференции.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены на Международной конференции «Новые лекарственные средства: синтез, технология, фармакология, клиника» (Минск, 2001), конференции «Клинические исследования лекарственных средств в России» (Москва, 2001, 2007), IX, X, XI, XIV Российских национальных конгрессов «Человек и лекарство» (2002, 2003, 2004, 2007), I Национальной научио-медшшпекой конференции «Здоровье человека» (Ереван, Армения, 2002), VI, VIII и IX Международной научной конференции «Здоровье семьи - XXI век» (Дубай, ОАЭ, 2002; Гоа, Индия, 2004; Далянь, Китай, 2005; Бангкок, Таиланд, 2006), Международной конференции «Reactive oxygen and nitrogen species, antioxidants and human health» (Смоленск, 2003), II съезде Российскою научного общества фармакологов «Фундаментальные проблемы фармакологии» (Москва, 2003), конференции «Основные обшсгштологическне и клинические закономерности развития критических терминальных и постреанимацнонных состоянии, принципы их коррекции» (Москва, 2003), IV Российской конференции «Гипоксия; механизмы, адаптация, коррекция» (Москва, 2005).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 69 печатных работ.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена па страницах

машинописною iCKcia и состоит из введения, обзора .тшерщуры. павы описания материалов и меюдон исследования. ') пан собсiмспныч нес te ичшннн. шк.почепия, выводов и списка .тшерагуры, включающею 621 исючннк. in них 33'' окчестнениых и 2X2 зарубежных. Работа иллюстрирована X рисунками и содержи! 3-1 кш.шны.

Материалы и методы исследования

Экспериментальные исследования проведены на 154 белых беспородных мышах-самцах и самках массой ¡7-24 г и 956 белых беспородных крысах-самцах массой 140-260 г, содержащихся на стандартной диете вивария в условиях свободного доступа к воде. Использованы также лимфоциты периферической крови 42 здоровых доноров-добровольцев.

В качестве объекта исследования использовали химически чистые субстанции бемитила (2-этилтиобензимидазола гидробромид) и бромантапа (N-(2-a;iaMaimui)-N-(napa-бромфеиил)амин, соединения Б-16 [2-(3,4-дигидроксифенацил-тио] бензимидазол, а также комбинированные лекарственные формы препаратов: нирабел (комбинированная капсулированпая лекарственная форма бемитила 0,25 и пирацетама 0,6); бромнтил (комбинированная лекарственная фирма таблеток бромантана 0,1 н бемитила 0,125).

Препаратами сравнения в различных сериях экспериментов служили: антиоксндаит -ионол; актонротскторы - этомерзол, тиетазол. В работе также применяли антидоты ФОС -М-холипоблокатор - атропин; реактнватор холинэстеразы - диэтикеим; радиопротектор -цистамин; антидот меттемоглобннобразующих ядов - метиленовый синий.

Механизмы и эффективность фармакологической коррекции процессов свободно-радикального перекисного окисления липидов, мембраиотоксического действия и метаболических нарушений оценивали но следующим показателям:

1. Антирадикалытая активность и антиоксидаитная эффективность соединений в модельных системах различной сложности.

2. Накопление продуктов ПОЛ в липидных экстрактах (ткани) головного мозга, миокарда, печени и эритроцитов.

3. Гемолитическая стойкость и электрофоретическая подвижность эритроцитов.

4. Интенсивность флуоресценции зонда AMC в мембранах эритроцитов.

5. Активность СОД эритроцитов и каталазы мозга, печени и эритроцитов.

6. Активность глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы (Гл-6-ФДГ) в цитоплазматичеекой фракции печени и мозга, в эритроцитах.

7. Активность СДГ, МДГ, аргиназы и КФС и митохондриальной фракции гепатоцитов.

8. Активность Na+/K+ АТФазы в ткани печени и микросомальной фракции мозга.

9. Активность аланинамипотраиеферазы (АлАТ), асиартатаминотраисферазы (АсАТ), уроканиназы, лактатдегидрогеназы (ЛДГ), щелочной (ЩФ) и кислой фосфатаз (КФ) в сыворотке крови.

10. Уровень питохромов Р450 и Ь, в мпкросомах п монооксш еназпые активности в гомогенатах печени крыс.

11. Выживаемость животных при различных видах острой гипоксии и отравлений химическими веществами.

12. Уровень малонового диальдегнда (МДЛ), уроканпна ie.i, гистндазы, СДГ, треопнндептдратазы (ТДГ), СОД, капиталы, гаутатноннсроксидачы (ГП), АдАТ, АсАТ, общего билирубина в сыворотке крови пациентов, пострадавших от аварии на Чернобыльской АЭС и принимавших бемитил,

Механизмы защитной эффективности бемнтила и его совместного применения с антидотами (метиленовый синий, цистамин) оценивали нрн остром смертельном отравлении нитритом натрия (введение под кожу спины крыс 4% раствора нитрита натрия в дозе 400 мг/кг) п в условиях мстгемоглобпнемни, вызванной хронической ннтрнтиой интоксикацией (подкожное введение крысам нитрита натрия в дозе 50 мг/кг в су тки в течение 4 педель).

Исследование влияния бемитшт и его еочетанного применения с антидотами ФОС (атропин, диэтиксим) на состояние мембран, процессы ПОЛ и некоторые метаболические реакции оценивали па модели острой интоксикации ФОС', вызванной путем однократного внутрижелудочпого введения крысам карбофоса в дозах 0,8-0,9 LD50 или однократного внутримышечного введения армина в дозе 0,75 мг/кг (0,9 1.П5ц).

Эффективность бемнтила при токсическом поражении печени оценивали при экспериментальном циррозе печени, который создавали путем пнутрижелудочиого введения 50% раствора смеси нолихлорпрованных бнфенплов и трпхлорбензола, соответствующей рецептуре «Совтол-10», на оливковом масле из расчета 0,25 мл па 100 г массы тела 2 раза в неделю в течение 4 недель. Вместо воды для питья использовали 10% раствор этанола.

Содержание бемнтила, бромаптаиа и бромптнла в крови, органах и тканях экспериментальных животных определяли газохроматографичееким методом. Анализ проводили на газовом хроматографе (модель 3700 с электроннозахпатным детектором, содержащим "'М-Р-ионизациониый источник) с использованием стеклянной колонки длиной 2 м (внутренний диаметр 2,5 мм). В качестве сорбента использовался C'hromaton N-Snper с 3% жидкой фазы SE-30. Скорость потока газа-носителя (азот особой чисто ты): через колонку - 25 мл/мин; через детектор - 60 мл/мин.

Содержание пирацетама, бемнтила и пирабела в крови определяли методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Анализ проводили на хроматографе «Perkin Elmer» (США) модели 601 с УФ-детсктором при длине волны 2X0 нм с использованием

метода обращепно-фазной хроматографии на колонке длиной 250 мм и внутренним диаметром 2,5 мм, заполненной ееликагелем е привитой фазой октадецилеукцината с длиной цепи С18. В качестве подвижной фазы использовали элюент следующего состава: ацетоиитрпл - 35%; 0,1М трис-буфср с рЫ=7,5 - 25%; вода - 40%. Скорость подачи элюента на колонку - I мл/мни.

Мнкросомы печени получали методом дифференциальной! испфифу i нрования (Ahokas J. el al.. 1^77); 1 2l)U(]y-i omoi с i i a i ы (субмшоищдиальпая фракция! получали меюдом О. Pelkonen (Pelkonen О. el al.. 1974). Концен фацию белка определяли по моюду Лоури пли Брэдфорда (наборы Bio-Rad Prolein Assay Kit; Bio-Rad Laboratories, США). Содержание цитохромов Р450 и Ь5 в суспензии микросом определяли методом Т. Опшга и R. Salo (1964) па спектрофотометре «Specord М40».

Активность амиионирии-Ы-деметилазы и анилин-р-гидроксилазы определяли в 12000g-roMorenarax по методу О. Pelkonen (Pelkonen О. et al., 1974). Идентификацию продуктов реакции осуществляли спектрофотометрически стандартным способом, используя реактив Nash в случае аминопирин-Ы-деметилазной активности и цветную реакцию образования индол-фенолытого комплекса в случае анилин-р-гидроксилазной активности.

Скорость О-деметилирования 4-нитроанизола оценивали по количеству образовавшегося р-нитрофенола (микрометод В. Schoeiie (Schoene В. el al., 1972)). Концентрацию р-шпрофенола определяли на планшетном спектрофотометре Multiscan-Plus {Labsystems,Финляндия) при А.=450 им; 2,5-дифенилоксазол-р-гидроксилазную активность определяли по методу J. Ahokas el al. (1987). Концентрацию водорастворимого метаболита 5-(р-гидроксифепил)-2-фенилоксазола определяли на флуориметре Versa FLUOR (Bio-Rad Laboratories, США).

Определение ЭРОД- и БРОД-активноетей н 12000g-roMorena'rax печени осуществляли по методу С. Thompson et al. (1989), в лимфоцитах - в модификации С. Сибиряка (Sibiryak S. et al., 2001).

Для постановки реакции блаеттрансформации лимфоциты выделяли из венозной крови методом градиентного центрифугирования (45 мин, 400g), на градиенте Fieoll-Paque Plus (Pharmacia Biotech, США). Выделенные мононуклеары ресусиендировали в среде RPMI-1640, содержащей 50 мкг/мл гентамицииа, 10% эмбриональной телячьей сыворотки и культивировали 72 часа (37"С, 5% С02). Концентрация клеток в культуре составляла МО1' клеток/мл. Для индукции пролиферации использовали митогены - смесь фнтогемагппотинипа Р (10 мкг/мл) и митогепа лаконоеа (5 мкг/мл).

Эффективность применения бемитила в комплексе реабилитационных мероприятий контингента, пострадавшего от аварии на Чернобыльской АЭС, оценивали у 81 пациента в возрасте от 40 до 70 лет из числа ликвидаторов последствий Чернобыльской аварии, страдающих хроническими заболеваниями гепатобилиарнон системы с нарушениями функции печени. Все пациенты, получающие стандартную генатопротекторную терапию, были случайным образом разделены на дне группы. Пациентам исследуемой группы (54 человека) дополнительно назначали бемитил в дозе 750 мг/суг (250 мг и таблетках' Л раза в день) в течение двух недель. Контрольную группу составили 27 пациентов со сходными половозрастными характеристиками. Исходно и после проведенного курса лечения оценивали клинические симптомы и лабораторные признаки печеночной дисфункции.

Статистический анализ результатов

Анализ результатов проводили с использованием пакета статистических программ, реализованных в Windows 2000/ХР: Statistic«! 6.0 (StatSoft), Pharmacologic Calculation System 4.1. Использовали параметрические и непарамстричеекие методы анализа. Различия между группами считали достоверными при уровне значимости р<0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Антнокислитсльпую активность бемитила и других производных бензнмндазола исследовали на двух модельных системах снободиорадикалыюго окисления различном сложности. Активность соединении в системе «пилбепзол - ледяная уксусная кислота» оценивали по величине константы К7 (характеризует антпрадпкадьпую активность препаратов), которую сопоставляли с константой К7 иопола - известного синтетического ингибитора спободнорадикальпых реакций. Показано, что бемитил, чтомерчол и соединение Б-16 проявляют выраженную антирадикальпую активность (табл. I). Наиболее активными препаратами в данной модельной системе являются ттомерзол и соединение Б-16, которые по способности щи нпнронат ь инициированное окисление ни.юепют не yciyna ли поно.зу (попотьиын жвивалеш - 0,64 и 0,65 cootbcictнепно). Tueiaioi и шнпкепм пе проявляли аптпокнедше.тыюй акшвности в данной молельной снсмеме.

Активность препаратов также оценивали в модельной сиск'ме с использованием гомогеиата печени крыс, оценивая влияние препаратов (через I, 2, 3 и 4 часа после инкубации) на процессы свободиорадикальиого перекисного окисления линнлов при спонтанном, нсферменптом (Fe2+ аскорбатзависимом) и ферментном ПОЛ.

- 13 -

Таблица !

Антирадикальна» активность препаратов, оцснснная на модельной системе

инициированного окисления этилбензола

Препарат Антирадикальная активность К7 (л/моль) -с Ио и ол ь и ы й э к в и вал е нт

Бемитил (1,0±0,3) '10'1 4,5-10"2

Этомерзол (1,4±0,1)-104 0,6

Соединение Б-16 (1,5±0,2) - Ю4 0,65

Тиетазол 0,0 _

Диэтикеим (8,1 ±2,0)-10' 3,5-10"''

Иоиол (2,3+0,6)-104 1,0

В условиях аскорбатзависнмого п ферментного ПОЛ антноксидаитпая активность бемитила не уступала этомерзолу и соединению Б-16. В условиях автоокисления (система спонтанного ПОЛ) этомерзол был несколько активнее бемитила (препараты ингибировали ПОЛ на 73% и 62% соответственно). Препараты незначительно уступали ионолу по способности ипгибировать свободнорадикальное ПОЛ (51-73% против 75-100% иод действием нопола). Тиетазол практически пе влиял на процессы ПОЛ.

Таблица 2

Аитиокислнтсльнаи активность препаратов, оцененная на модельной системе

перекисного окисления лигшдов печени крыс

Препарат (соединение) Антиокислительная активность, %

Спонтанное ПОЛ Неферментное ПОЛ Фермен тное ПОЛ

Бемитил 62 51 67

Этомерзол 73 55 67

Соединение Б-16 не определяли 62,5 68

Тиетазол не определяли 20,8 10,5

Иоиол 100 100 75

Таким образом, в различных модельных системах показана высокая антирадикальная и антиокислительная активность бемитила и других производных бензимидазола - этомерзола и соединения Б-16.

В условиях остроте смертельного отравления экспериментальных животных нитритом натрия введение мышам бемитила в дозе 25 мг/кг (табл. 3) достоверно не увеличивает длительность жизни отравленных животных, в отличие от метиленового синего (10 мг/кг; +31,6%). Сочетанное применение бемитила (25 мг/кг) и метиленового синего (10 мг/кг) увеличивало продолжительность жизни мышей па 55% (р < 0,01).

Повышенно лозы бемитпла до 50 мг/кг достоверно, сравнимо с метиленовым синим, увеличивало продолжительность жизни отравленных животных. Сочетапнос введение бсмитила (50 мг/кг) и мстиленового синего (10 мг/кг) приводило к выраженному потенцированному эффекту и увеличивало длительность жичии мышей в 2,1 раза (р < 0,001 ).

Таб лица 3

Влияние бсмитилп и его комбинации с метиленовым синим или цнетамином на продолжительность жизни мышей при острой ннтритпоп иптоксикашш

Препараты Время жизни, мин

п М±1И %.........

еч Нитрит натрия 12 12.OiO.S5 100

EL Бемитил (25 мг/кг) 12 13,2±1,34 110

и Метиленоный синий (10 мг/кг) 12 15,8+0,82 * 13 1,6

Бемитил (25мг/кт)+мстиленовып синим (10 мг/кг) 12 1 8,6+1.22 ** 155

в; Нитрит натрия 12 12,0+0,85 100

5. Бемитил (50 мг/кг) 12 15,6+0.56 * 130

о Метилеиовын синий (10 мг/кг) 12 15,8+0,08 * 13 1,6

<N Бемитил (50 мг/кг)+метпленовый синий (10 мг/кг) 12 TQ *** 210

о; [1итрит натрия 10 1 1,2+0.62 100

S О. Бемитил (50 мг/кг) 10 16,4+1,23 ** 144

о Цистамин (50 мг/кг) 10 15,8+0,66 * 141

Бемт ил (50 мг/кг)+иистамин (50 мг/кг) 10 24,5+2,08 *** 218,7

Примечание: *, **, *** - статистически достоверное различие (р ■ 0,02. р < 0,01, р < 0,00/,

соответственна) с группой «нитрит натрии».

Бемитил (50 мг/кг) сравнимо с антидотом цнетамином (50 мг/кг) увеличивал длительность жизни отравленных животных на 49% н 41% соотпетсгвечню. Сочстаниос введение бсмитила и цистамнна увеличивало длительность жизни мышеи в 2,2 раза (р< 0,001).

Показано, что в условиях острой гемпческой гипоксии, вызванной введением смертельной дозы нитрита натрия, бемитил потенцирует защитный эффект деметгемоглобинообразователей - метилепового синего и цистампна.

В условиях метгемоглобннемни, вызванной длительной нитрипюй интоксикацией, в качестве антидота псгюльзовали циетамин, который имеет большую по сравнению с метиленовым синим широту терапевтического эффекта. Другим преимуществом цистамнна является возможность его использования в таблстнрованпон форме для перорального применения.

В условиях длительной нитритной интоксикации на 15-е и 30-е сутки эксперимента содержание метгемоглобина у крыс составляет соответственно 45,0+2,15% и 42,6+2,60%

от общего гемоглобина. Введение крысам бемитила не оказывало существенного влияния на динамику образования и разрушения метгемоглобина, поскольку его уровень в крови отравленных крыс существенно не изменялся в указанные сроки тестирования. В то же время применение цнстамина, обладающего деметгемопюбинизирующим действием, статистически достисрпо снижает' содержание метгемоглобнна на 15-е и 30-е сутки опыта соответственно до (>7.(1"., и 7Ч.3"„ и1 аналогичною показателя в кон фоле ( кю.г 4).

Тио.шца 4

> ронснь ,мс ii СМ01 лобина кроки крыс в условиях длит ельной шпритнои интоксикации (в % к общему гемоглобину)

№ Группы крыс Статистический показатель Время эксперимента

15-е сутки 30-е сутки

1 Нит рит натрия М ± т % 45,0±2,15 100 42,6+2,60 100

2 Бемитил М. ± га % 43,0+1,90 95,7 40,0+2,16 94,5

3 Циетамин М + т % 30,2±2,90* 67,0 33,8±2,17* 79,3

Примечание: * - статистически достоверное различие (р<0.05) с группой «нитрит натрия».

Хроническое отравление нитритом натрия сопровождается накоплением диеновых конъюгатои (ДК) в эритроцитах, ДК и оснований Шиффа в полушариях головного мозга и печени крыс, а также снижением активности ферментов антиокеидаптной защиты, что свидетельствует о сдвигах в системе регуляции свободнорадикалыюго окисления липидов (табл. 5 и 6).

Сочетанное введение бемитила и циетамина полностью предупреждает сдвиги прооксидантно-антиоксидаптного равновесия в эритроцитах, раздельное введение крысам бемитила или циетамина менее эффективно. Комбинация бемитила и циетамина в условиях метгемоглобипемин имеет преимущество по сравнению с индивидуальными препаратами в значительной степени нормализует процессы ПОЛ, оказывает защитно-восстановитслы-юс действие на фермен тативную активность в головном мозге и печени крыс.

Полученные результаты свидетельствуют о том, что интенсивность ПОЛ в

эритроцит ах выше, чем в мозге и печени, в условиях длительной нитритиой интоксикации.

Это связано, вероятно, с тем, что эритроциты подвергаются прямой атаке

свободнорадикальных метаболитов, возникающих при окислении гемоглобина нитрит-

ионом, в то время как в мозге и печени усиление липопероксидации присходит, скорее всего,

- 16 -

за счет другого патогенетического механизма, а именно: развивающейся гипоксии и токсического стресса, нарушающих клеточный метаболизм.

Таблица 5

Влияние бемитила, цистамина и их комбинации на прооксидантно-антиоксидантное равновесие в эритроцитах крыс в условиях длительной нитрнтной интоксикации

Показатели Группы крыс, п = 8-10 Сутки эксперимента

15-е 30-е

ДК, и Моль/г ПЬ Интактиые крысы Нитрит натрия Бемнтнл Цистамин Бемнтнл + цнетамнн 86,2±4,0 156,3±0,5* 120,9±12,4* ** 124,1 ± 13,2* ** 90,8±6,5** 86,2±4,0 179.4-±7,3* 130,2±9,3* ** 129,9±9,0* ** 99,5±7,2**

сод, усл. ед./мг ПЬ Пнтактные крысы Нитрит натрия Бемнтнл Цистамин Бемнтил + цнетамнн 1,04±0,04 1,00±0,03 1,01 ±0,03 0,98±0,04 1,02±0,03 0,89±0,03* 0,90±0,12 0,91 ±0,48 1,04±0,04**

Каталаза, мМоль в мип/г ПЬ Интактиые крысы I Ьггрит натрия Бемнтил Цис'1'амнн Бемнтил + цистамин 32,4±1,19 24,6±0,93* 31,3±1,04** 24,7±0,78* 31,8±1,20** 31,5±0,92 20,1 ±1,20* 28,5± 1,10** 23,0± 1,07* 30,2±0,90**

Гл-6-ФДГ, нМоль в мин/мг ПЬ Интактиые крысы 1 [итрит натрия Бемнтил Цистамин Бемнтнл + цистамин 15,2±0,56 11,7±0,47* 13,3±0,50* ** 12,8±0,47* 11,2±0,48** 14,6±(1,56 12,7:1:0,49* 13,2±0,52 14,8±0,44** 14,8±0,52**

Примечания: * - статистически достоверное различие (р<0,()5) с крутит «шшшкпшыс крысы»; ** - с группой «нитрит натрия».

Окислительный стресс и лидирующее его проявление - активация ПОЛ - важное и малоисследованное звено в патогенезе тяжелых отравлений ФОС. ФОС обладают выраженным мембранотоксическим действием. Продукты ПОЛ оказывают дестабилизирующее действие на структурно-функциональное состояние биологических мембран, что выражается в нарушении их основных физико-химических свойств -проницаемости, вязкости, фазового состояния; изменяют молекулярную структуру мембраны клеток: нарушаются липид-линидные, а также лппид-бедковые взаимодействия, изменяется активность мсмбраносвязаниых ферментов, п частности №+/К+ АТФазы.

; Таблица 6

Влияние бемитила, циста,чина и их комбинации на нрооксндантно-антиоксидантное

равновесие в условиях хронической нитритной интоксикации

Показатели Группы крыс, п = 8-10 Головной мозг Печень

Интактные крысы 0,202±0,017 0.454±0,022

i lit 1 рп 1 натрии 0,304±0,025* 0,672±0,039*

ДК, Дш Ьеми 1 ил 0,229±0,019** 0,38010.026**

! (неммнп 0,263±0,034 0.543; 0.035**

Ьемншл ■ hhcuimihi 0.22010.018** 11.391 : (1.(136**

1 Inkikiiimc крысы 0.16x0.01 0,39(1.0.025

1110, 1 Inipiii naipiiH U,24±0.02* 0,570i(),040*

усл. ед./мт Бемитил 0,20±0,04* 0,390±0,030**

лииидов Цистамнн 0,21 ±0,01* 0,420±0,040**

Бемитил + цистамнн 0,18±0,01** 0,402±0,017**

Интактные крысы 1,12±0,045 328,0±24,0

Катализа, Нитрит натрия 0,75±0,040* 222,0±19,0*

мМоль в мин/мг Бемитил 0,78±0,060* 310,0±10,0**

белка Цистамнн 0,86±0,050* 254,0±19,0*

Бемитил + цистамнн 1,13±0,045** 318,0±18,5**

Интактные крысы 19,9±0,63 58,3±3,1

Гл-6-ФДГ, Нитрит натрия 20,5± 1,55 29,4±3,4*

нМоль в мин/мг Бемитил 18,3±1,16 44,9±4,7* **

белка Цистамнн Бемитил + цистамнн 23,4±1,3 50,3±2,8** 54,2±3,5**

Примечания: * - статистически достоверное различие (р<0,05) с группой «иитактиые крысы»; ** — с группой «нитрит натрии».

Введение крысам карбофоса в дозе 0,9 1_В511 снизило на 42,6% активность Ыа+/К+ ЧТФазы на 14-е су тки эксперимента у выживших животных. Армии в дозе 0,9 Ь05и снижает активность фермента на 38,4% (табл. 7).

Таблица 7

Активность №+/К+ АТФазы в мозге крыс, отравленных

фосфорорпшическими соединениями (в мкМ Ф„ на 1 мг белка/час; п = 12)

№ Группы крыс Карбофос Армии

1 Интактные крысы 4,5+0,44 4,5±0,44

2 Фосфорорганические соединения 2,6±0,32* 2,8±0,36*

3 Атрошш (10 мг/кг) + диэтиксим (25 мг/кг) 3,6±0,50 4,4±0,74

4 Атропин (10 мг/кг) + диэтиксим (25 мг/кг) + Бемитил (50 мг/кг) ; 4,2±0,55** 4,6+0,56**

Примечания: * - статистически достоверное различие (р<0,05) с группой «интактные крысы»; ** - с группой «фосфорорганические соединения».

Лечение отравленных карбофосом крыс двумя антидотами ФОС (М-холнноблокатор атропин в лоте 10 мг/кг и реяктинатор холннэстсразы диэтиксим п дозе 25 мг/кг) дважды внутримышечно - через 30 минут и 2 часа после введения карбофоса - несколько повысило активность Ыа+/К+ АТФазы до 3,6+0,5 мкМ Фм на 1 мг белка в час, по не восстановило активность фермента. В то же время включение в схему лечения бемитила (50 мг/кг 2 раза -па 2-е и 3-й сутки) полностью восстановило активность Ыа+/К+ АТФазы (табл. 7).

Введение комплекса антидотов крысам, отравленным армином, через 0,5 мин, 30 мин и 3 часа после интоксикации приводит к недостоверному увеличению активности фермента. Более эффективна комбинация антидотов с бемнтнлом, который применяли дополнительно на 2-е а 3-й сутки после отравления внутрибртошипно в доте 50 мг/кг. Активность №+/К+ АТФазы п данной группе крыс была полностью восстановлена до аналогичных показателен здоровых животных (табл. 7).

Результаты проведенных исследований позволяют сделать вывод, что острая интоксикация крыс карбофосом (0,9 1.05()) или армином (0,4 РП.чц) сопровождается интенсификацией процессов ПОЛ, что выражается в резком увеличении содержания продуктов ПОЛ па 14-е сутки постинтоксикационного периода (табл. К). При отравлении карбофосом уровень ДК повысился в полушариях мозга и миокарде на 232,2% (р < 0,05) и 278,4% (р < 0,05) от контроля соответственно, а уровень ШО на 112,5% (р < 0,05) и на 173,7% (р < 0,05). При отравлении армином содержание ДК в мозге и миокарде повысилось на 133,3% (р < 0,05) и 110,8% (р < 0,05), а содержание ШО па 162,5% (р < 0,05) и па 86,8% (р < 0,05) от уровня интактных животных соответственно.

Применение бемитила в дозе 50 мг/кг в условиях интоксикации карбофосом или армином совместно с комплексом антидотов снижает накопление ДК и ШО в полушариях мозга и миокарде через 14 суток после введения ядов в организм до уровня интактных животных.

Наряду с активацией ПОЛ в условиях тяжелых отравлении аптнхолинчетерашыми

ядами наблюдаемся снижение актннносш фермента ап.............ой стчемы организма

(С'ойпов П Л., 2(100: Крылова Р..В.. 2003). Полученные ^сперичсшл п.ные данные свидетельствуют о ни, что карбофос (0,9 ЬП.чп) вызываем I пбель ЗП"„ крыс в течение первых суток, а в постинтокснкацпопиом периоде оказывает выраженное действие па систему эритрона. У отравленных животных выявлено увеличение в кропи содержания ретикулоцитов, снижение осмотической резистентности и электрического заряда

эритроцитариых мембран, подавление активности аптиоксидантной системы и увеличение концентрации первичных и вторичных продуктов ПОЛ (табл. 9).

Таблица 8

Содержание диеновых коныш атов и оснований Шиффа в головном мозге

и миокарде крыс, отравленных фосфорор га нн чески ми соединениями

Группы животных, условия опыта Карбофос Армии

Интактные крысы 0,18±0,01 0,18+0,01

.а и Фосфорорганнческие соединения 0,58±0,03* 0,42+0,05*

я и о Атропин (Юмг/кг) + дйэ гиксим (25мг/кг) 0,40+0,06* 0,34+0,03*

гО I ^ <1 Атронии (Юмг/кг) + дпэтиксим (25мг/кг) + бемитил (50 мг/кг) 0,21+0,04** 0,22±0,02**

и Интактные крысы 0,37±0,01 0,37±0,01

т о ч о. Фосфорорганнческие соединения 1,40+0,12* 0,7810,08*

X (и к о Атропин (Юмг/кг) + днэтикепм (25мг/кг) 0,80+0,04* 0,54±0,05*

Атропин (Юмг/кг) + дпэтиксим (25мг/кг) + бемитил (50 мг/кг) 0,44+0,05** 0,30±0,02**

Интактные крысы 0,16±0,02 0,16±0,02

к Фосфорорганнческие соединения 0,34±0,02* 0,42±0,04*

к I со о Атропин (Юмг/кг) + дпэтиксим (25мг/кг) 0,28+0,01* 0,37+0,02*

в о X и ° с 2 Атропин (Юмг/кг) + дпэтиксим (25мт/кг) + бемитил (50 мг/кг) 0,19±0,01 ** 0,20+0,02**

ю Интактные крысы 0,38±0,04 0,38±0,04

о ■в" -еЯ ч р. Фосфорорганнческие соединения 1,04±0,06* 0,71 ±0,04*

•х. о Атропин (Юмг/кг) + дпэтиксим (25мг/кг) 0,84±0,06* 0,58+0,05*

3 к 2 Атропин (Юмг/кг) + дпэтиксим (25мг/кг) + бемитил (50 мг/кг) 0,48±0,03** 0,43+0,02**

Примечания: * - статистически достоверное различие (р<0,05) с группой «интактные крысы»: ** — с группой кфосфорорганические соединения».

Карбофос приводи!' к снижению активности СОД и катал азы в эритроцитах отравленных животных на 14-е сутки постинтоксикационного периода на 36,4% (р < 0,05) на 23% (р < 0,05) от контроля соо тветственно.

Введение отравленным крысам атропина (10 мг/кг) предупреждает развитие ретикулоцитоза и ограничивает рост уровня ДК, однако антидотная терапия не влияет на аитиоксидантнуш систему эритрона, ПОЛ, осмотическую резистентность и электрический заряд мембран. Включение в схему лечения бемш'ида (50 мг/кг) восстанавливает большинство нарушенных показателей, в том числе содержание ретикулоцитов, активность СОД, каталазы, Гл-б-ФДГ, осмотическую резистентность и электрический заряд эритроцитариых мембран до уровня интактных животных.

Таблица 9

Морфофуикциональнмс показатели эритроцитов и их мембран у крыс после острого отравления карбофосом и коррекции бемитплом и атропином

Показатель Препараты (фупна животных)

Атропин Атропин +бемитил Контроль (карбо(|)ос) Пнтактнмс крысы

Гемоглобин, г/л 140,2±4,8 152,()±3,0 142,5+2,8 148,2+5,2

Эритроциты, 102/л 4,6±0,2 4,7±0,09 4,5*0.18 4,6±0,l

Гематокрит, % 41,6±3,5 41,3± 1,8 41,5+4,0 42,0+3,4

Ретнкулопиты, "/п() 36,4±2,0** 30,6±2,0** 58,2+2,7* 34,0+3,5

ССГ, пк 0,23±0,03 0,24±0,01 0,27+0,03 0,28+0,02

СЭФПЭ, mVvc 1,1 1±0,0! |,13±0,05** 1,00+0,02* 1.13+0,01

Катадаза, ммоль/мнп/мг IIb 26,5±1,6* 33,1 ±2,0* * 24,4±2,5* 31,7± 1,8

СОД, усл. ед./мг IIb 0,70±0,05* 1,12±0,05** 0,68+0,07* 1,07±0,04

Гл-6-ФДГ, мкмоль/мин/мг Hb 12,8±0,4* 16,9:1:0.4*** 10,2:1:0,4* 15,7+0,4

ДК, нмоль/г IIb 125,0±2,4** 99,6± 1 1,2** 182,0+1,8* 102,1+5,0

ТБК-РП, нмоль/мг белка 0,68±0,05* 0,25±0,07** 0,56+0,02* 0,26±0,1 1

Примечании: * - статистически достоверное рачличне (р< 0,0.4) с грунт») «иитактиые крысы»:** - статистически достоверное различие (р<0,05) с группой «контроль (карбофос)».

О состоянии мембран эритроцитов в условиях отравления карбофосом и применения корригирующей терапии бсмитилом и атропином сулили также по тушению интенсивности флуоресценции мембранного зонда АНС (табл. 10). Зонд AIIC является «универсальным» зондом, который встраивается в поверхностные локусы мембраны и реагирует иа различные перестройки, происходящие в мембранах, отражая состояние области бслок-лнпплного взаимодействия (Владимиров 10.А., Добрецов Г.Е., 1980).

Показано статистически значимое уменьшение флуоресценции зонда AI 1С па 14-е и 21-е сутки как у крыс, отравленных карбофосом, так и у крыс, оправленных карбофосом и леченных атропином, что свидетельствует о нарушении структурной организации мембраны эритроцитов, повышении их микровязкости. Выявленное тушение флуоресценции обусловлено акт ивацией процессов ПОЛ, которые приводят к увеличению поверх постной плотности заряда, увеличению электростатической отталкивающей силы между А ПС и мембранной участка связывания АНС и уменьшению флуоресценции системы «АНС -мембрана».

В то же время у крыс, отравленных карбофосом и леченных атропином и бемитплом, интенсивность флуоресценции AMC в мембранах эритроцитов оставалась в пределах нормы

на протяжении всего опыта (тушение флуоресценции АНС было меньше 3%), что обусловлено мембраностабилизирующими свойствами бемитила.

Таблица 10

Степень ¡мнения флуоресценции мембранного зонда АНС и мембранах фщроннюи крыс, отравленных карбофосом, ((1-Ц-11)/ 1'ц)

Группы живо 1 iii,1\. ii n Су тки экснсрнмста

2 3-й 14 15-е 21-е

Карбофос 0.06 tO.Hl 0,1 3 Ш.02** 0.12.0,02*

Карбофос -1 атропин 0,02±0,01л 0,1 1±0,01** 0,11 ±0,01**

Карбофос+атроиип+бемитил 0,02±0,01 0,03±0,01лл т 0,02±0,01 #

Примечания: * - статистически достоверное различие (р<0,05) с группой «интактные крысы»;

** - статистически достоверное различие (р<0,002) с группой «интактные крысы»;

л- статистически достоверное различие (р<0,02) с группой «карбофос»; ™ — статистически достоверное различие (р<0,001) с группой «карбофос»; # - статистически достоверное различие (р<0,01) с группой «карбофос + атропин»;

##- статистически достоверное различие (р<0,01) с группой

«карбофос+атропии»; У7 — интенсивность флуоресценции препаратов (отн. ед.): /•« — интенсивность флуоресценции контроля (интактные крысы); = 0,9±0,02 ед. фл.

Таким образом, включение бемитила в схему лечения отравлений карбофосом предупреждает развитие основных токсических эффектов ФОС: активацию ПОЛ, изменение активности ферментов антиоксидантной системы организма и, соответственно, модификацию важнейших физико-химических свойств мембран - проницаемость, вязкость, фазовое состояние. Оптимальные физико-химические свойства бемитила (коэффициент распределения между полярной и пеполяриой фазами) обеспечивают его уникальные фармакокииетичеекпе параметры и, соответственно, взаимодействие с водорастворимыми и липофильными свободными радикалами. Избирательная кумуляция препарата в эритроцитах при курсовом введении (табл. 21) предупреждает деструкцию липидного бислоя, повышение его мнкровязкостп, предотвращает развитие дезорганизации белкового состава, нарушение функциональной активности ферментов и функционального состояния мембран-рецепторного комплекса в эритроие.

В различных молельных с истемах установлена высокая антираликалышя и антиокислительная активность других производных бснзимндазола - этомерзола и соединения Б-16 (табл. I). Результаты сравнительного исследования влияния моиотсрапни бемитилом, этомерзолом и соединением Б-16 на процессы ПОЛ при отравлении ФОС представлены в табл. 1 I и 12.

Таблица 11

Содержание диеновых коныогатов в органах крыс, отравленных карбофосом

(отн. ед. оптической плотности/мг липндов, п = 8)

Группы крыс, препараты Статистический Время после отравления

показатель 2-3-н сутки 14-е сутки

Головной мозг Интактные крысы Карбофос Карбофос + бемитил Карбофос + этомерзол Карбофос -I- соединение Б-16 М±т % М±т % М±т % М±т о/ /О М±т % 0.18 ±0,01 100 0,40 ± 0,06* 222 0,25 ± 0.05** 138 0,23 ± 0,02** 128 0,28 ± 0,05 156 0.18 ±0,01 ion 0,58 ±0,03* 322 0,40 ±0,04** 222 0,36 ±0,03** 200 0,39 ±0,04** 216

Миокард Интактные крысы Карбофос Карбофос + бемитил Карбофос + этомерзол Карбофос + соединение Б-16 М±т % М±т % М±т % М±т % М±т % 0.37 ±0,01 100 1,10±0,10* 297 0,48 ±0,02** 130 0,42 ±0,02** 114 0,50 ±0,04** 135 0,37 ±0.01 100 1,41 ±0,10* 381 0,51 ±0,03** 138 0,44 ±0,05** 119 0,42 ±0,06** 114

Примечания: * - статистически достоверное различие (р<0,05) с группой «интактные крысы»; ** - статистически достоверное различие (р< 0,05) с группой «карбофос».

Установлено, что карбофос в дозе 0,8 LD5n вызывает гибель 20% животных и значительно увеличивает активност ь процессов ПОЛ в головном мо и с и сердце крыс па 2 3-и. 6-е и 14-е еччкн в nocíингокепкацпоппом периоде. На 2 3-й е\лкн количество ДК в головном моне у травленных крыс возрастаем в 2.2 paia. а па 1-1 с cvikti в 3.2 раза (табл. 11).

В миокарде крыс, отравленных карбофосом, содержание ДК на 2-3-и сутки

увеличивается в 3 раза, а на 14-е сутки - в 3,8 раза. Исследуемые препараты предупреждают

чрезмерное накопление ДК примерно в одинаковой степени. Применение бемитнла и

этомерзола практически нормализует количество ДК в головном мозге и а 2 -3-й сутки и

- 23 -

достоверно сннжаег их содержание на 14-е сутки, хотя не достигает нормы. В го же время лечение крыс производным беизимидазола - соединением Б-16 - оказывает положительный эффект на 14-е сутки, по не па 2-3-и сутки (табл. 11).

Результаты изучения содержания ШО в головном мозге н миокарде крыс, отравленных карбофосом и леченных исследуемыми препаратами, представленные в табл. 12, показывают, что бемнтнл пнгибирует процессы ПОЛ и, в частности, снижает уровень ШО в головном мозге н миокарде подобно этомерзолу и соединению Б-16.

Тм'тща I-

Содержание Шиффоных основании в органах крыс, отравленных карбофосом

(отн. ед/мг лииидов, п = 8)

Статистический Время нос. е опошления

1 рушил крыс, препараты показатель 6-е сутки 14-е су тки

11пгактные крысы М±т % 0,16 Ю,02 100 0,16 ±0,02 1011

го о Карбофос- М±т % 0,40 ±0,01* 250 0,34 .1 0.02* 213

'о я ш Карбофос + бемнтил М±т % 0,28 ± 0,02** 175 0,30 ±0,03** 188

о о и Карбофос + этомерчол М±И1 о/ /и 0,20 ±0,02** 125 0,20 ± 0,02** 125

Карбофос + соединение Б-16 М±т % 0,18±0,01** 1 13 0.14 ±0,01** 1 14

Интактные крысы М±т /и 0,38 ± 0.04 100 0,38 ± 0.04 100

ч о. Карбофос М±т % 1,22 ±0,22* 321 1,04 ± 0,06* 274

« а о Карбофос + бемитил М±т % 0,50 ±0,05** 132 0.58 ±0,05** 153

2 Карбофос + этомерзол М±т % 0,46 ± 0,06** 121 0,60 ±0,04** 158

Карбофос + соединение Б-16 М±п1 % 0,48 ± 0,05** 126 0,48 ± 0,08** 126

Примечания: * - статистически достоверное различие (р<0,05) с трупной «иншктные крысы»;

** - статистически достоверное различие (р<0,05) с группой «карбофос».

В настоящее время 1)ЫЕР (ипкеЛ ЫаПопБ ЕгшгоптсШа! Ркуес1) особо выделяет группу из 12 соединений и групп соединений, на которые следует обращать первоочередное внимание. Эта так называемая «грязная дюжина» включает' в себя следующие вещества: нолихлорировапные бифеиилы (ПХБ), полихлорировапные дибеизо-и-дикоеипы, "олихлорированиые дибензофураны, алдрин, диэлдрип, дихлор-дифенил-трихлорэтан, ндрин, хлордан, гекеахлорбензол, мирекс, токсафен и гептахлор (Юфпт С.С., 2001). 23 мая -002 1'. в Стокгольме принята Глобальная международная конвенция о запрещении стойких органических загрязнителей (СО'З), к которой присоединилась и Россия. Среди СОЗов ПХБ

являются одними нч самых распространенных, в процессе бнотраисформаинн ПХБ образуются более токсичные метаболиты.

[3 условиях длительной сочетаниой интоксикации ПХБ и этанолом на 30-е сутки морфогнетохимичеекпй анализ печени крыс показал развитие хронического типологического процесса, основными проявлениями которого являются фиброз и цирроз печени.

Биохимическими показателями, отражающими метаболизм и функцию печени в нормальных и патологических условиях, является уровень печеночных ферментов в сыворотке крови. Одним из наиболее специфичных' ферментов является уроканшшза. Появление в крови урокангшазы является следствием нарушения гистогсматического барьера печени п результате массированного некроза под влиянием повреждающего фактора. У здоровых крыс активность урокаииназы в крови находится на очень низком уровне или практически не определяется (табл. 13).

ТаГшща 13

Влияние бемитила и силимарина на биохимические показатели сыворотки крови крыс

в условиях сочетаниой интоксикации ПХБ и этанолом

Группы животных

Показатели Статистический показатель Интактные крысы ПХБ + этанол ПХБ + этанол + бемитил ПХБ + этанол + силимарин

Уроканпназа, нмоль/сл М±т - 54,9+3,5* 44,8±3,6** 52,5±4,4*

АлАТ, М±1П 3,3±0,18 9,4±0,45* 4,2±0,76** 8,8±0,77*

ммоль/ч-л % 100,00 2865,30 152,00 267,20

АсАТ, М±т 10,7±0,14 25,7±0,43* 12,4±1,1** 10,0±2,5**

ммоль/ч-л % 100,00 240,10 115,80 93,40

ЛДГ, М±т 29,9±1,0 122,0±1,8* 92,6±3,3** 149,7±1,5*

ммоль/Ч'л % 100,00 408,00 309,60 500,60

ЩФ, М±ш 15,1±1,4 28,5±1,9* 23,2±1,3* 36,0±7,7*

ммоль/ч-л % 100,00 188,70 153,60 238,40

КФ, М±ш 15,2±2,6 26,8±8,8* 16,8±1,8** 24,0±7,0*

ммоль/ч*л % 100,00 176,30 110,50 157,80

Примечания: * - статистически достоверное рапнчис (р<П.05) с группой «интактные

крысы»; ** ( ншпии пшнчсски /Ьн пюксрипс ра I тчис '/> 1>.1>?) г.у >утюн «ПХБ ■ ннанп!".

Суди по сушес1венному снижению повышенного п речу.ть |;пс инюксикаиии уроши активности урокаииназы (па 18,4%; р < 0,05), активности трансминач ДлАТ (в 2,2 раза р<0,05), АсА'Г (в 2,1 раза; р<0,05), ЛДГ (в 1,3 раза; р<0,05), КФ (в I ,6 раза; р < 0,05), бемитил в отличие от силимарина препятствует развитию цитолитичсского синдрома. Однако, также как и силимарин, бемитил не изменяет активности ЩФ, что свидетельствует об отсутствии его влияния на холестатпческий эффект токсикантов.

- 25 -

Результаты ерашш гелышги изучения влияния бемитнла и силимарина на ПОЛ и функционирование в гепатоцитах ключевых ферментов антнокиелительной системы цикла трикарбоновых кислот, пептозофосфатпого цикла и ферментов синтеза мочевины в условиях сочетанной интоксикации ПХБ и этанола представлены в таблицах 14, 15 и 16. Продукты ПОЛ определяли в линидных экстрактах печени, Продукты, реагирующие с тиобарбитуровой кислотой (ТБК-реагнрующие продукты), определяли в гомогенатах печени крыс.

Таблица 14

Влияние бемитнла и силимарина на процессы ПОЛ, активность каталазы и Гл-6-ФДГ

в печени крыс в условиях сочетанной интоксикации ПХБ и этанолом

Статистиче- Группы животных

Показатели ский Мптактные ПХБ + ПХБ + этанол ПХБ + этанол

показатель крысы этанол + бемитил + силимарин

ДК, М±пт 0,454*0,022 0,632±0,026* 0,464±0,032** 0,516±0,023**

ДИ1 'Ун 100,0 139,2 102,2 1 13,6

ТБК-РП, М±1п 90.4±4,1 123,1*3,4* 98,3±2,8** 100,8± 1,4**

нмиль/г ткани % 100,0 136,1 108,7 111,5

Каталаза, ммоль/мип/г бедка М±п1 % 328,0±24,0 100,0 236,0±17,0* 71,9 308,0±19,0** 93,9 264,0±16,5* 80,4

Гл-6-ФДГ, М±п1 528,6±36,9 806,5±63,4* 578,2±66,5** 708,4±42,7*

нкат/г бел ка % 100,0 152,5 109,3 134,0

Примечания: * - статистически достоверное различие (р<0,05) с группой «интактные

крысы»: ** - статистически достоверное различие (р<0,05) с группой «ПХБ + этанол».

Лечебное введение бемитнла отравленным животным сопровождалось выраженным восстановительным эффектом, превосходящим влияние генатопротектора силимарина на все исследуемые показатели: ДК, ТБК-РП, каталазу, Гл-6-ФДГ (табл. 14).

Длительная еочетапная интоксикация ПХБ и этанолом сопровождалась существенным подавлением каталитической активности ферментов цикла трикарбоновых кислот (табл. 14). МДГ является наиболее активным ферментом цикла трикарбоновых кислот (ЦТК), что обусловлено органными особенностями метаболизма печени - преобладанием тканевого дыхания над гликолизом. Данный факт позволяет предположить, что одним из важных патогенетических механизмов поражений печени в условиях сочетанной интоксикации ПХБ и этанолом является биоэнергетическая (тканевая) гипоксия. Вышеизложенное подтверждается результатами исследования: гепатопротектор силимарин не изменял активность СДГ и МДГ в гепатоцитах, а антигигюксант бемитил статистически значимо увеличивал активность исследованиях ферментов ЦТК у отравленных животных. Бемитил предупреждает' снижение уровня митохондриального белка в митохондриях, а силимарин таким действием не обладает.

Таблица ¡3

Влияние бемитила и силимарина на активность ферментов цикла тршсарбоновых кислот и количество белка в митохондриальной фракции гепатоцитов крыс в условиях сочетанной интоксикации ПХБ и этанолом

Статистический Группы ЖИВОТНЫХ

Показатели Интактные ПХБ + ПХБ + этанол ПХБ* этанол + сил имарии

показатель крысы этанол + бемнтил

сдг, М±т 146,0*12,8 93,2±8,9* 130,7**9,0** 106,5*9,2*

нкат/г белка % 100 63,8 89,5 72,9

МДГ, М±т 7,2±0,2 3,9*0,7* 5 9**0,2** 4,4*0,9*

мк кат/г белка % 100 52,6 81,6 61,3

Митохондри-альный белок, мг/г М±т % 9,8±0,6 100 6,8*0,7* 69,7 9,7*0,3** 98,3 6,6*0,7* 67,5

Примечания: * - статистически достоверное различие (р<0,05) с группой «интактные

крысы** - статистически достоверное различие (р<0,05) с группой «ПХБ + этанол».

При длигелъиои сочетанной интоксикации ПХБ и этанолом, наряду с нарушением процессов ПОЛ, снижением функциональной активности каталазы, Гл-6-ФДГ и ферментов ЦТК, в генатоцитах обнаружено снижение активности ключевых ферментов мочевинообразования - карбомоилфосфатсинтетазы и аргиназы (табл. 16). Применение бемитила оказывало выраженный корригирующий эффект.

Таблица 16

Влияние бемитила на активность аргиназы и КФС в гепатоцитах крыс

в условиях сочетанной интоксикации ПХБ и этанолом

Статистический показатель Группы животных

Показатели Интактные крысы ПХБ * этанол ПХБ * э танол + бемитил

Аргиназа, М±т 160,5*18,52 96,3*8,94* 131,5*8,22**

мккат/г белка % 100,0 60,0 81,9

КФС, М±т 258,4*32,1 122,3*13,8* 179,6*13,2**

нкат/г белка % 100,0 47,3 69,5

Примечания: * - статистически достоверное различие (р<0,05) с группой «интактные

крысы»; **- статистически достоверное различие (р«),()5) с группой «ПХБ + этанол».

Анализ результатов проведенного исследования позволяет констатировать, что ПОЛ является общим механизмом нарушения метаболических процессов и состояния биологических мембран при экспериментальной интоксикации нитритами, ФОС, ПХБ и этанолом. Полученные результаты, доказывающие и уточняющие участие процессов ПОЛ в

патогенезе интоксикаций изученными химическими веществами, открывают перспективное направление в фармакотерапии отравлений с помощью ингибиторов ПОЛ - производных бензпмидазола.

Основным путем метаболизма производных бензпмидазола является их биотраисформапия цитохромом-Р450-завнсимымн моноокеигеиазами печени и других тканей (Zimmermann К. et al., 2008: Asteinza J. et al., 2000). При этом одно и то же соединение, в биотрапсформанип которого нередко принимают участие различные изоформы цитохрома Р450, в зависимости от режима введения и дозы, способно как ингибировать, так и индуцировать пптохром Р450. Детальный анализ влияния бемитила на монооксигенирование различных модельных субстратов представляет несомненный интерес, поскольку позволяет не только косвенно определить спектр участвующих в биотрансформации препарата нзоформ, но и прогнозировать характер его фармакокиистпческой интерференции с другими, мстаболнзпруюншмнея цнтохром-Р450-завнсимыми моноокеигеиазами препаратами.

В настоящем исследовании проведен анализ влияния бемитпла на характер изменения суммарного уровня цитохрома Р450 и его воздействия па некоторые изоформо-спецпфические и изоформо-иеспецнфические монооксигсназные активности в печени крыс и in vitro - в лимфоцитах человека.

Результаты анализа уровней цитохромов Р450 и bs и монооксигеназнмх активностей в печени крыс иллюстрирует таблица 17. Прн однократном введении бемитил статистически значимо увеличивал содержание цитохрома Р450 в печени крыс - уровень белка цитохрома Р450 составил 116% от такового в контрольной группе животных; уровень цитохрома Ь5 также незначительно увеличивался, однако статистически значимых отличий от контроля не наблюдалось. При курсовом введении бемнтила отмечалась лишь тенденция к увеличению содержания цитохрома Р450, а уровень цитохрома Ь5 прн этом режиме введения практически ие изменялся,

Бемитил прн однократном введении вызывал отчетливую индукцию ампнопирип-N-деметилазной активности, которая возрастала в 1,7 раза по сравнению с контрольной группой. При курсовом введении индуцирующий эффект был выражен в меньшей степени -аминопирин-Ы-деметилазиая активность возрастала в 1,5 раза и различия с контрольной группой были статистически несущественны. Изменения амниопирин-Ы-дсметилазной активности соответствовали таковым для СУР2В1/2-изоформо-специфичсской БРОД-актнвиости, поскольку именно эта изоформа является основной изоформой, обеспечивающей биотрансформацию аминопирина у грызунов (Ryan D., Levin W., 1990). Бемитил не вызывал статистически значимого изменения скорости монооксигенирования анилина, биотраисформапия которого у грызунов осуществляется в основном изоформой CYP2E1 (Ryan D., Levin W., 1990), показатели анилин-р-гндроксилазиой активности в группе животных, получавших как однократное, так и курсовое введение препарата, статистически значимо от контроля не отличались.

При однократном введении препарата 4-нитроанизол-О-деметилазная активность, в реализации которой основном принимают участие СУР1А1/2 изоформы, возрастала в 2,3 раза, а при 5-кратном введении - в 1,8 раза. Скорость гидроксилирования 2,5-дифенилоксазола, метаболизирующегося в основном СУР1А2, спустя сутки после однократного введения бемитила возрастала в 4,4 раза, а после курсового введении -в 2,3 раза. Максимальная индукция выявлена при оценке СУРШ-изоформо-епецифической ЭРОД-активноети. При однократном введении бемитила скорость О-деэтилнрования 7-этоксирезоруфина возрастала в 5 раз, а при курсовом - в 2,1 раза.

Таблица 17

Влияние бемитила на уровни цитохромов P4S0 и bs в микроеомах и мопооксигеназные активности в 12000g-roMoreiia'rax печени крыс

Показатели Группа животных

Контроль п = 8 Бемитил, однократное введение п = 8 Бемитил, курсовое введение п = 8

Уровни цитохромов (М±т)

Цптохром Р450, нмоль/мг белка микросом 0,70±0,023 0,81 ±0,048 * 0,79±0,027

Цптохром Ь5, нмоль/мг белка микросом 0,69±0,040 0,74±0,020 0,71 ±0,042

Мопооксигеназные активности (М±т)

Аминопирнп-Ы-деметилазная, нмоль/мпн/мг 0,100±0,006 0,170±0,022 * 0,14б±0,018

Анилни-р-гидрокеилазиая, нмоль/мин/мг 0,017±0,004 0,020±0,004 0,018±0,002

4-нитроанизол-О-деметилазная, нмоль/мин/мг 0,054±0,009 0,122±0,014 ** 0,098±0,017 *

2,5-дифеннлоукеазол-р-гидрокснлазная, RFU/мии/мг 75,6±3,9 336,8*62,3** # 172,0±21,4 **

ЭРОД-акти вность, пкмоль/мин/мг 1,56±0,17 7,87±0,32 ** № 3,26±0,62 *

БРОД-акти вность, икмоль/мнн/мг 1,47±0,11 2,42±0,41* 2,29±0,31

Примечания: * - статистически достоверное различие (р<0,05) с группой «контроль»;

** - статистически достоверное различие (р<0,Ш) с группой «контроль»: # - статистически достоверное различие (р<0,05) с группой «бемитил, курсовое введение»; ##- статистически достоверное различие (р<0,01) с группой «бемитил, курсовое введение».

Ценным методическим подходом к оценке влияния различных ксенобиотиков на

активность цнтохром-Р450-зависимых момооксигеназ является проведение исследований лимфоцитов миеломоноцитарпых или лимфобластоидных линий клеток in vitro. Исследования in vitro могут служить ценной моделью для прогнозирования

биотрансформации ксенобиотика у человека (Balls М., Sabbioni Е„ 1999). Как правило, изменения активности в гепатоцитах и лимфоцитах при воздействии индукторов и ингибиторов цнтохрома Р450 идут параллельно. При анализе влияния бемитила на ЭРОД-активности в лимфоцитах человека (табл. 18) выявлен «волнообразный», зависимый от концентрации эффект препарата. В концентрации 100 цМ бемитил вызывал отчетливую, статистически значимую индукцию деэтилазной активности; при концентрации бемитила в культуре 10 ¡тМ этот эффект снижался; в концентрации 1 цМ - практ ически отсутст вовал, но при дальнейшем снижении концентрации вновь наблюдалась тенденция к индукции ЭРОД-активностн. Влияние бемитила на БРОД-активность является «зеркальным отражением» его влияния на ЭРОД-активность. Максимальный индуцирующий эффект на дебензилнрование 7-бензилоксирезоруфина, осуществляющийся у человека изоформами, ортологичнымп CYP2B1/2 грызунов, наблюдался в диапазоне доз от I до 10 рМ, а при увеличении или снижении концентрации препарата индукции монооксигеназной активности не отмечалось.

Таблица 1Н

Влияние бемитила на ЭРОД-активность и БРОД-активность в митоген-стимулнрованных лимфоцитах человека

№ Условия культивирования Ферментативная активность, пмолей/мин/106 лимфоцитов М±т

ЭРОД-активность (п = 8) БРОД-активность (п = 7)

1 Контроль 0,1 19±0,01 й 0,048±0,010

2 Бемитил 100 цМ 0,172±0,035 * 0,040±0,012

3 Бемитил 10 рМ 0,166±0,040 0,058±0,014

4 Бемитил 1 цМ 0,124±0,023 0,059±0,013 *

5 Бемитил 0,1 цМ 0,162±0,027 0,043±0,015

Примечании: * - статистически достоверное различие (р<0,05) с группой «контроль».

Таким образом, бемитил, при введении крысам внутрь в эффективной дозе 50 мг/кг, как при однократном, так и при курсовом введении, проявил свойства индуктора смешаного типа. Максимальный индуцирующий эффект для большинства изученных монооксигепазных активностей прослеживается при однократном введении препарата. Судя по характеру изменения монооксигепазных активностей, бемитил преимущественно индуцирует АИ-рецептор-зависимые изоформы цитохрома Р450 - СУР 1А1/2 (т.н. «метилхолаитреп-индуцируемые»), в меньшей степени влияя на т. н. «фенобарбиталовые изоформы» подсемейства СУР2В, и практически не оказывает влияния на «короткоживущуго» изоформу СУР2Е1. Эти данные согласуются с многочисленными исследованиями.

свидетельствующими об CYPlAl/2-индуцирушщем влиянии производных бензимндазола (омепразола, тиабендазола, иимозида, окефендазола, астемизола, фснбендазола) и участии этих нзоформ, наряду с CYP2C и CYP3A, в метаболизме самих бензимидазолов. In vitro, при использовании митогеи-етимулированных лимфоцитов человека, бемитил, в зависимости от концентрации, также вызывал индукцию ЭРОД- и БРОД-активностей, что косвенно свидетельствует о сходных путях биотранеформации самого бемитила у грызунов и человека.

Анализ результатов, полученных в ходе настоящего исследования, позволяет утверждать, что бемитил проявляет свойства индуктора цитохрома Р450 смешанного типа, увеличивая уровень цитохрома Р450 в микросомах и моноокснгеназные активности, сопряженные как с Ah-рецептор-завнснмыми, так и с Ah-рецснтор-пезаииснмыми нзоформамн, за исключением аннлии-р-гидроксилазной активности, которая оставалась неизменной. Индуцирующий эффект в отношении монооксигеназных активностей, реализуемых Ah-рецептор-зависимыми изоформами (4-нитроаннзол-О-деметилазная, 2,5-дпфенилоксазол-р-гидроксилазная, ЭРОД-активность), более выражен и максимален при однократном введении препарата. In vitro бемитил в высоких концентрациях увеличивает экспрессию ЭРОД-активноетн в лимфоцитах, а и низких - БРОД-активности.

Для обеспечения эффективной фармакотерапии экстремальных состояний перспективным является создание системы фармакологических комплексов, состоящих из базисного средства, чье позитивное влияние на работоспособность наблюдается при максимально широком спектре неблагоприятных для профессиональной деятельности условий, и дополнительных препаратов, избирательно увеличивающих работоспособность в конкретной экстремальной ситуации. Подобный комплекс должен обладать психостимулирующим действием без развития истощения, анаболическим и иммуностимулирующим действием па фоне достаточного антнокеидаитиого, витаминного и минерального обеспечения.

В качестве базовых препаратов наиболее перспективными являются актонротекторы -производные бензимндазола. При использовании актопротекторов - производных бензимндазола в комплексной терапии необходимо учитывать их способность модифицировать активность цитохром-Р450-зависимых мопооксигеназ, изменять фармакокипетику и, соответственно, динамику развития фармакологических эффектов совместно применяемых лекарственных препаратов.

Сравнивая фармакокинетические параметры в плазме крови крыс при различных путях введения бемитила, следует отметить, что значение константы элиминации при пероральиом введении препарата превышает kei при его внутривенном введении (табл. 19). При пероральиом введении бемитила крысам (100 мг/кг) он всасывается из желудочно-кишечного тракта с высокой скоростью (кийс 11лаит = 1,75 ч"1), период полуабсорбции - 0,395 ч, время

достижения максимальной концентрации - 1 ч, максимальная концентрация в плазме крови -1,9±0,15 мкг/мл.

Анализируя полученные экспериментальные данные, можно сделать вывод, что увеличение кС| бемитила при пероралыюм введении может быть обусловлено двумя причинами:

1. Выраженной биотрансформацией в кишечной стенке. Большинство лекарственных средств, характеризующихся эффектом первого прохождения через печень, подвергается значительному метаболизму в пей, но это не значит, что в крови препаратов с высоким печеночным клиренсом непродолжителен (Лоуренс Д.Р., Бепнит П.П., 1991).

2. Более интенсивным распределением препарата в органы и ткани. Объем распределения бемитила при пероралыюм введении в 17,4 раза выше, чем при внутривенном введении (табл. 16).

При курсовом пероралыюм введении бемитила крысам концентрация неизмененного препарата в плазме крови практически не меняется.

Таблица И)

Фаршакогсипстичсскис параметры бемитила в плазме крови и цельной крови крыс

после однократного введения

Внутривенное Пероральное введение

Параметры Размерность введение (10 мг/кг) (100 мг/кг)

Плазма крови Плазма крови Цельная кровь

а -1 ч 2,575 0,721 0,67

Р -1 ч 0,106 0,115 0,099

-1 ч - 1,755 1,814

. пбе 4/2 ч - 0,395 0,382

1|пад ч - 1,0 1,0

Сщах нг/мл - 1888,0 2684,0

ч 0,269 0,96 1,035

^ ч 6,523 6,023 6,932

кс. ч-1 0,264 0,345 0,326

к,2 -1 ч 1,381 0,251 0,238

к2, -1 ч 1,036 0,241 0,206

С1 л/кг'4 0,509 11,552 7,709

V, л/кг 1,927 33,459 23,668

МЯТ ч 8,834 6,489 7,183

АиС нг-ч/мл 19646,104 8656,545 12970,93

V % - 24,95 -

Для производных бензимидазола, и в частности меркаптобензимидазолов, характерно накопление препаратов в эритроцитах крови (Навасардян М.Р., 1999; Черненко И.В., 1999). Бемитил также накапливается в эритроцитах с высокой скоростью, концентрация бемитила ч эритроцитах через 1 час после введения в 1,8 раза выше, чем в плазме крови. При курсовом

введении бемитила концентрация препарата в эритроцитах повышается в 2,3 раза но сравнению с однократным введением (табл. 21).

В связи с кумуляцией бемитила в эритроцитах его концентрация в цельной крови выше, чем в плазме, что соответственно модифицирует фармакокинетические параметры (табл. 20).

Таблица 20

Фарма ко кинетические параметры бемитила в крови, печени и мозге крыс

после однократного нероралыюго введении препарата (100 мг/кг)

Параметры Размерность Цельная кровь Печень Мозг

к„Сс -1 ч 1,814 1,854 1,814

4/2 ч 0,382 0,374 0,382

1ша\ ч 1,0 1,0 1,0

ша\ нг/мл 2684,0 9160,0 2878,0

1 а И/2 ч 1,035 1,089 1,035

1 Р 4/2 ч 6,932 7,887 6,932

к,.. -I ч 0,326 0,417 0,326

С1 л/КГ'Ч 7,709 2,742 7,19

лис пг'ч/мл 12970,93 36475,4 13908,5

При курсовом введении бемитила крысам концентрация препарата в цельной крови повышается в 1,8 раза. Проведенное исследование позволяет сделать вывод, что повышение концентрации бемитила в цельной крови при курсовом введении происходит почти исключительно за счет избирательного накопления препарата в эритроцитах.

Экспериментальные данные, полученные в результате проведенного исследования, обосновывают необходимость учета различий фармакокннетичеекпх параметров исследуемых препаратов, рассчитанных по кинетическим кривым в плазме н цельной крови, в случае кумуляции препарата и/или его метаболитов в эритроцитах.

При однократном и курсовом нероральном введении бемитила препарат обнаруживается во всех исследованных органах н тканях, причем прослеживается значительная гетерогенность в распределении бемитила (табл. 21). Бемитил накапливается в ткани печени с высокой скоростью (к„дс= 1,854 ч"1), через 30 мин после однократного нероралыюго введения препарата уровень бемитила в печени в 3 раза выше его одномоментной концентрации в крови. Время достижения максимальной концентрации бемитила в печени (С,ши = 9,16 мкг/г) после нероралыюго введения - 1 чае, к:,, 1 = 3,41; кр2 = 4,85 (табл. 21). Снижение концентрации бемитила в печени происходит биэкспоненциалыю, период полувыведения бемитила в а-фазе - 1,089 ч, в (3-фазс - 7,887 ч. Биодоетушюсть бемитила в печени в 2,8 раза выше бнодоступноети в цельной крови и в 4,2 раза выше, чем в плазме крови. Через 24 часа после однократного нероралыюго введения бемитила в печени обнаруживается 2% от максимальной концентрации препарата (1с,, 1 = 4,63; к,,2 = 5,78).

Исследование кинетики бемитила в печени крыс подтверждает высокую экстракционную способность ткани к препарату, что характерно для лекарственных препаратов - производных беизимидазола (Marriner S. et al., 1986; Lowentlial D.T. et al., 1988; Walsh T.J. et al., 1989; Kitzman J.V. et al., 1990; Oukessou M. et al., 1991; Dareer S.M. et al., 1993). Имндазолы и, в частности, бензимидазолы экскрстируются с желчью и подвергаются энегерогепатической циркуляции, что увеличивает период их пребывания в организме (Dulim В. et al., 1974; Braithwaite P.A. et al., 1982; Gottshall D.W. et al., 1990; Hennessy D.R. et al., 1992).

При курсовом введении бемитила крысам концентрация 'препарата в печени понижается в 1,4 раза по сравнению с концентрацией после однократного введения; kp I снижается в 2,6 раза; к,,2 - в 1,5 раза (табл. 21). Печень является основным органом, накапливающим бемитил при однократном введении. При курсовом введении препарата коэффициенты распределения для всех изученных органов и тканей (мозг, скелетная мускулатура, сердце, почки, легкие, жировая ткань, селезенка, семенники) значительно не возрастают или уменьшаются (табл. 21). Полученные экспериментальные данные позволяют сделать вывод, что понижение концентрации бемитила в печени при курсовом введении не является следствием перераспределения препарата между другими органами и тканями, а обусловлено усилением элиминации препарата из ткани печени вследствие возрастания интенсивности процессов биотрансформации, что характерно для индукторов цитохром-Р450-завиеимых монооксигеназ печени и других тканей (Dilger К. et al., 1999; Hartmann M. et al., 1999; Negishi M., Hokakosi P., 2000).

Проницаемость имидазолов через гематоэнцефалический барьер зависит от физико-химических свойств препаратов, обусловленных химической структурой радикалов в бензимидазольном цикле (Лоуренс Д.Р., Беннит Л.Н., 1991; Debruyne D., Ryckelynek J.P., 1993; Zervos M., Meunier F., 1993; Walsh T.J. et al., 1989; Сергеева C.A. и соавт., 2001). Бемитил довольно быстро проникает через гематоэнцефалический барьер (knflc = 1,814 ч*1), через 30 мин после однократного введения уровень препарата в мозге в 2,14 раза выше одномоментной концентрации в крови. Время достижения максимальной концентрации бемитила в мозге (С,Ш11 = 2,878 мкг/г) после перорального введения I час; кр1 = 1,07, kp2 = 1,52 (табл. 21). Снижение концентрации бемитила в мозге происходи1» биэкспоненциалыю, период полувыведепия бемитила в а-фазе - 1,035 ч, в Р-фазе - 6,932 ч. Биодоступность бемитила в мозге незначительно (в 1,1 раза) выше, чем в цельной крови, и в 1,6 раза выше, чем в плазме крови. Через 24 часа после однократного перорального введения бемитила в мозге обнаруживается 2,8% от максимальной концентрации препарата (кр1 = 2,0; к ,,2 = 2,5).

Курсовое введение бемитила сопровождается повышением концентрации препарата в мозге в 1,4 раза (табл. 21), однако в связи с тем, что при курсовом введении уровень препарата в цельной крови также повышается (преимущественно за счет избирательного

накопления бемитила в эритроцитах), коэффициент распределения кр1 уменьшается в 1,3 раза. При курсовом введении бемнтила концентрация препарата в плазме практически не изменяется по сравнению с однократным введением, поэтому коэффициент распределения мозг/плазма при курсовом введении возрастает незначительно (в 1,3 раза) по сравнению с аналогичным параметром при однократном введении (табл. 21).

Через 1 час пос^е однократного перорального введения бемнтила уровень препарата в почках в 2,5 раза выше одномоментной концентрации в цельной крови и в 3,5 раза выше, чем в плазме (табл. 21). Длительное введение бемнтила сопровождается незначительным (в 1,2 раза) повышением концентрации препарата в почках; коэффициент распределения почки/цельная кровь понижается на 34%; коэффициент распределения почки/плазма возрастает на 9,7%.

После однократного введения бемнтила препарат обнаруживается в скелетной мускулатуре. Через 1 час после введения концентрация бемнтила в скелетной мускулатуре выше, чем в цельной крови и в плазме (кр1 = 1,86; к,,2 = 2,64). Длительное введение бемнтила сопровождается повышением уровня препарата а скелетной мускулатуре в 1,68 раза; коэффициент распределения скелетная мускулатура/кровь понижается на 5,38%, к,, скелетная мускулатура/плазма возрастает на 57,2%.

Концентрация бемнтила в сердце через 1 чае после однократного введения препарата выше уровня бемнтила как в цельной крови, так и в плазме: к(11 = 1,67; кр2 = 2,37. Курсовое введение бемнтила характеризуется увеличением скорости элиминации препарата из миокарда: кр1 понижается на 58,7%, к,,2 понижается на 31,2% (табл. 21).

Бемитил обнаруживается в ткани легких крыс: через 1 час после однократного перорального введения концентрация препарата в ткани легких в 1,4 раза выше, чем в цельной крови и в 2 раза выше, чем в плазме (табл. 21). Длительное введение бемнтила сопровождается понижением уровня препарата в ткани легких: Ц,1 понижается на 44,9%, к,,2- па 8,2%.

Концентрация бемнтила в жировой ткани через 1 час после однократного введения ниже уровня препарата в цельной крови (к,,1 = 0,75) и практически равна концентрации препарата в плазме (к,,2 = 1,07). Курсовое введение бемнтила характеризуется увеличением скорости элиминации препарата из жировой ткани: к,,! понижается на 40%, Ц,2 понижается на 0,9% (табл. 21).

Бемитил интенсивно распределяется из крови в ткань селезенки: через 1 ч после однократного введения концентрация препарата в селезенке в 2,2 раза выше, чем в цельной крови, и в 3,16 раза выше, чем в плазме (табл. 21). Курсовое введение бемнтила характеризуется увеличением скорости элиминации препарата из селезенки: кр1 понижается на 55,16%, к,,2 понижается на 24,68%.

Через 1 час после однократного введения бемитила уровень препарата в семенниках в 1,13 раза выше одномоментной концентрации в цельной крови и в 1,61 раза выше, чем в плазме. Длительное введение бемитила сопровождается увеличением скорости элиминации препарата из семенников: кр1 понижается на 50,44%, кр2 понижается на 17,39% (табл. 21).

Таблица 21

Содержание бемитила в цельной крови, плазме, эритроцитах, органах и тканях крыс после однократного и курсового перорального введения бемитила в дозе 100 мг/кг

(M±m, п = 5)

Органы и ткани Однократное введение Курсовое введение

С, нг/г (мл) U кР2 С, иг/г (мл) к„1 К«2_

Цельная кровь 2684,0+380,0 - - 4766,6+392,0 -

Плазма 1X88,0+150,0 - - 2013,4+280,0 - -

Эритроциты 3335,0+380,0 - 1,77 7579,7+840,0 - 3,76

Печень 9160,0±760,0 3,41 4,85 6340,0+480,0 1,33 3,15

Мозг 2878,0+210,0 1,07 1,52 3980,0+720,0 0,83 1,98

Почки 6630,0+520,0 2,47 3,51 7760,0+540,0 1,63 3,85

Селезенка 5976,0+870,0 2,23 3,16 4790,0+360,0 1,00 2,38

Сердце 4473,0+450,0 1,67 2,37 3290,0+250,0 0,69 1,63

Скелетная мускулатура 4980,0+480,0 1,86 2,64 8358,01640,0 1,75 4,15

Легкие 3700,0+410,0 1,38 1,96 3620,0+280,0 0,76 1,8

Жировая ткань 2020,0+620,0 0,75 1,07 2130,0±430,0 0,45 1,06

Семенники 3038,0+580,0 1,13 1,61 2686,0+310,0 0,56 1,33

Примечание: кр1 - коэффициент распределения ткань/цельная кровь, кр2 - коэффициент распределения ткань/плазма.

Анализ экспериментальных данных, полученных в результате изучения распределения бемитила в органах и тканях крыс при однократном и курсовом применении препарата, позволяет сделать вывод об интенсивном переходе препарата в органы и ткани из крови. Исследование распределения бемитила при курсовом введении показало, что кровь обладает способностью кумулиропать препарат, преимущественно за счет накопления бемитила в эритроцитах.

Для обеспечения эффективной фармакологической поддержки работоспособности в экстремальных условиях перспективным является создание системы фармакологических комплексов, состоящих из базисного средства, чье позитивное влияние па работоспособность наблюдается при максимально широком спектре неблагоприятных для профессиональной деятельности условий, и дополнительных препаратов, избирательно повышающих работоспособность в конкретной экстремальной ситуации.

Анализ фармакокинетики бромитила позволил выявить модифицирующее влияние интерференции на всех этапах прохождения комплексного препарата в организме: всасывание, распределение, биотрансформация и выведение.

Фаза абсорбции бромантана, в случае применения бромитнла, в 3,1 раза продолжительнее ((ш"01 ¡фомншл = 0,286 ч) фазы всасывания бромантана из раствора в ПЭГ-400 (^л бриошиIин ~ 0,091 ч), что обусловлено меньшей скоростью всасывания (табл. 22). Соответственно время достижения максимальной концентрации бромантана из бромнтила продолжительнее, чем 1„шх бромантана, в случае применения раствора препарата в ПЭГ-400.

Максимальная концентрация бромантана в крови, в случае применения бромитнла (С1Шц оромишл = 0,311 мкт/мл; Д брмишпш = Ю0 мг/кг), сравнима с максимальной концентрацией бромантана в крови при введении раствора бромантана в ПЭГ-400 (Д брпмштш = 100 мг/кг).

Скорость всасывания бемптила, в случае применения бромнтила, увеличивается но сравнению с к„ос водного раствора препарата, время достижения максимальной концентрации не изменяется, однако максимальная концентрация бемнтнла в крови, в случае иероралыюго введения водного раствора бемитила (100 мг/кг), в 2,4 раза выше максимальной концентрации бемитила, достигаемой при введении бромн тила.

Модифицирующее влияние интерференции на фармакокннетические параметры бемитила с аналогичной тенденцией описано Г.Г. Незнамовым с сотрудниками (Незна-мов Г.Г. и еоавт., 1993). Отмечено снижение равновесной концентрации бемитила в крови пациентов при применении бемитила в комбинации с феназенамом (С55, при применении бемитила 2,46±0,58 м кг/мл, при комбинированной терапии - 1,75±0,40 м кг/мл), соответственно изменяется степень выраженности фармакологических эффектов бемитила; происходит уменьшение выраженности психостимулирующего и связанного с ним астенического действия препарата.

При применении бромитнла интенсивность распределения бромантана и бемптила изменяет ся по сравнению с раздельным применением препаратов.

Объем распределения бемитила, в случае применения бромитнла, увеличивается по сравнению с VI водного раствора препарата и 3,2 раза. Объем распределения бромантана, в случае применения бромитнла, в 1,4 раза ниже объема распределения бромантана при применении раствора препарата в ПЭГ-400.

В метаболизме ксенобиотиков непосредственное участие принимают в основном монооксигеназы мнкросом печени с участием цнтохрома Р450 в качестве терминальной оксидазы. Этот гидроксилирующий комплекс занимает одно из центральных мест в общем процессе детокеикацнн. Скорость метаболизма лекарственных препаратов является наиболее важным фактором, влияющим на интенсивность и длительность их действия. Изучение процессов стимулирования и ипгибирования гидрокеилнрующей системы ксенобиотиками необходимо в клинической практике при длительном лечении пациентов комплексом лекарственных ередств.

Бромантан является~~~выраженным индуктором цитохром-Р450-зависимой моно-оксигеназной системы печени (Хлопушина Т.Г. и соавт., 1991, 1992; Сергеева С.А., 1993). Влияние производных бензимидазола на цитохром-Р450-зависимын метаболизм ксенобиотиков зависит от дозы, лекарственной формы и времени, прошедшего с момента введения, а также способа введения (Ковалев И.Е. и соавт., 1994; Лазарева Д.П., Алехин Е.К., 1985).

Таблица 22

Фармакокинетичеекие параметры бромантаиа, бемнтила и бромитнла в плазме крови крыс после перорального введения

Параметры Размерность Бемитил (водный раствор) Д = 100 мг/кг Бромантан (раствор в ПЭГ-400) Д = 100 мг/кг Бромитил

Бромантан Д = 100 мг/кг Бемитил Д = 125 мг/кг

кцпс -1 ч 1,755 7,562 2,42 1,99

.1/2 1 пг»с ч 0,395 0,091 0,286 0,347

мкг/мл 1,88 0,311 0,31 1 0,78

^тлх ч 1,0 0,33 1,0 1,0

1 1/2 ч 0,96 0,819 2,55 1,394

' 1/2 ч 6,023 46,2 44,1 8,592

к,2 -1 ч 0,251 0,248 0,107 0,143

к» -1 ч 0,241 0,591 0,15 0,133

ко, -1 ч 0,345 0,021 0,028 0,302

лис иг-ч/л 8,656 16,763 12,579 3,834

V, л/кг 33,459 397,68 283,9 107,99

р % 4,4 27,6 20,71 3,1

? % 24,95 42,2 32,6 10,5

Сочетаиное применение лекарственных препаратов, оказывающих выраженное влияние на цитохром-Р450-зависимую монооксигеназную систему печени, безусловно вносит спой вклад в модификацию фармако- и токсикокинетики, а также, соответственно, динамики развития фармакологических и токсикологических эффектов бромитнла по сравнению с раздельным применением препаратов. При изучении острой токсичности у крыс при пероральном введении установлено: Ь05одля бромантана- 5640 (4900-6400) мг/кг; Ь05ц для бемнтила - 581,48 (350,17-965,57) мг/кг; ЬО50 для бромитнла - 1750,30 (1463,07 -2093,92) мг/кг.

Константа элиминации бемитила уменьшается в случае применения бромитила, по сравнению с раздельным его применением, в 1,14 раза. Константа элиминации бромантана увеличивается в случае применения бромитила в 1,33 раза по сравнению с раздельным его применением.

Анализ влияния феномена фармакокинетичеекой интерференции на фармако-кинетичеекие параметры бромантана и бемитила при их совместном применении в единой таблетироваитшй лекарственной форме (бромитил) позволил выявить модифицирующее влияние интерференции на всех этапах прохождения исследуемых лекарственных препаратов в организме экспериментальных 'животных: всасывания, распределения но органам и тканям, биотраиеформапнн и выведения.

При нероральном применении бемитил быстро всасывается из желудочно-кишечного "факта (к„(К - 1,655 ч"'; ti,2'"" = 0,419 ч), достигая максимальной концентрации через 1 час после введения; характер элиминации из крови биэкеионепцнальный. Высокое значение объема распределения (табл. 23) подтверждает интенсивность распределения бемитила по органам н тканям.

Пирацетам после нероралыюго введения всасывается из желудочно-кишечного факта с высокой скоростью (k„(ll. = 3,589 ч"1; Ч/г"61" = 0,193 ч), время достижения максимальной концентрации - 1 час; характер элиминации из крови биэкеионепцнальный. Высокое значение объема распределения (V! = 43,832 л) свидетельствует об интенсивном распределении пнрацетама в органы и ткани из крови.

Анализ фармакокинетики иирабела позволил выявить модифицирующее влияние интерференции на всех этапах прохождения комплексного препарата в организме: всасывания, распределения, биофансформации и выведения. Фаза абсорбции пнрацетама в случае применения иирабела продолжительнее (t|//r,t „И|Шбсл = 0,271 ч) фазы всасывания пирацегама при раздельном его применении (ti/j"fciiii|iiuu!iiiM = 0,193 ч), что обусловлено меньшей скоростью всасывания (табл. 23). Время достижения максимальной концентрации не изменилось, однако C,luu при раздельном применении пнрацетама выше. Площадь под фармакокинетичеекой кривой пнрацетама в случае применения иирабела в 1,5 раза меньше, чем AUC пнрацетама ври раздельном его применении в той же дозе.

Скорость всасывания бемитила в случае применения иирабела уменьшается (табл. 23), время достижения максимальной концентрации увеличивается по сравнению с аналогичными фармакокипетичеекнми параметрами бемитила при раздельном применении. Однако СПШХ бемитила в крови в случае введения иирабела выше максимальной концентрации бемитила при раздельном его применении в той же дозе. AUC бемитила при применении иирабела (а соответственно, и биодоетупность) в 2 раза ниже, чем AUC бемитила при раздельном его применении в той же дозе.

Объем распределения бемитила в случае применения пнрабела уменьшается по сравнению с V] таблеток бемитила в 1,8 раза. При применении пирабела интенсивность распределения пнранетама практически не отличается от аналогичных параметров таблеток пирацстама.

Таблица 23

Фармакокинетические параметры пирацетама, бемитила и пирабела после перорального введения у человека

Параметры Размерность Пирацетам 0,6 г Бемитил 0,25 г Пирабел

Пирацетам 0,6 г Бемитил 0,25 г

кпбе -I ч 3,589 1,655 2,559 1,433

11 й с 4/2 ч 0,193 0,419 0,271 0,484

ч 2,537 2,109 2,601 0,914

Л/2 ч 21,769 8,626 1 1,833 13,227

V, л 43,832 103,29 45,348 58,576

ксг -1 ч 0,062 0,146 0,091 0,532

к21 -1 ч 0,140 0,181 0,170 0,075

кп -1 ч 0,103 0,082 0,063 0,203

СЬ л/ч 2,715 15,07 4,152 31,172

АиС МКГ'Ч/МЛ 221,025 16,592 144,498 8,02

МЯТ ч 28,230 10,569 15,351 ! 7,701

ч 1,0 1,0 1,0 2,0

г м кг/мл 12,22±0,41 1,87±0,21 11,86±0,39 2,16±0,33

7 % 97,1 85,7 95,6 74,3

Рассмотренные в настоящем исследовании некоторые аспекты фармакокинетической интерференции могут, наряду с теоретическим, в ряде случаев представлять и практический интерес, поскольку для обеспечения эффективной фармакотерапии экстремальных состояний перспективной является комбинированная фармакотерапия.

Влияние включения бемитила в комплексную терапию нарушений функций печени исследовали у 81 ликвидатора последствий аварии на Чернобыльской АЭС (ЧАЭС) с хроническими заболеваниями гепатобилиарной системы.

В отдаленный период после повреждающего радиационного воздействия (через 20 лет после катастрофы) у ликвидаторов был обнаружен дисбаланс процессов свободнорадикалытого окисления, выражающийся в гиперпродукции свободных радикалов

кислорода, дефиците ферментативных и низкомолекулярных звеньев антиоксидантной защиты и накоплении продуктов ПОЛ.

Применение бемитила позволило достичь уменьшения проявлений тканевой гипоксии, оптимизировать функционирование антиоксидантной системы и предотвратить активацию процессов линоперокеидации, что положительно отразилось па печеночной функции.

Таблица 24

Данные лабораторных исследований печеночной функции и проявлений тканевой гипоксии до и после лечения

Показатель Бемитил Контроль

Исходно 14-й день Д% Исходно 14-й день Д%

Билирубин общ. (мкмоль/л) 12,7+0,84 10,2±0,71 -19,7 12,9±0,51 11,9±0,85 -7,8

Трансаминазы

АлАТ (мккат/л) 0,25±0,06 0,20±0,05 -20,0 0,28+0,06 0,24+0,08 -14,3

АсАТ (мккат/л) 0,19±0,02 0,12±0,02 -36,8 0,21+0,02 0,17+0,05 -19,1

Органоснецифические ферменты

Уроканиназа (ед.) 0,14±0,03 0,10+0,02 -28,6 0,15±0,02 0,12±0,02 -20,0

Гнстидаза (ед.) 0,19+0,03 0,13±0,05 -31,6 0,22+0,02 0,19+0,02 -13,6

СДГ (мкмоль/л/ч) 71,7±5,92 61,8±5,24 -13,9 78,4±5,92 61,8+5,24 -21,2

ТДГ (мкмоль/л/ч) 71,5±6,06 66,3±3,24 -7,3 74,6+6,04 67,3+4,04 -9,8

Псрекисиое окислениелнппдов

МДА (мкмоль/л) 8,7+0,69 6,9±0,44* -20,6 9,0+0,69 8,7+0,49 -3,1

Ферменты антиоксидантной защиты

Каталаза (мкмоль/мл/мин) 16,5± 1,47 21,6+0,53* +23,6 17,0+1,57 18,6+0,64 +8,8

СОД (у.е./мл ) 3,4+0,31 3,9±0,19 + 13,6 3,4±0,29 3,5+0,19 +3,1

ГП (мкмоль/мл/мин) 2,6±0,13 3,5+0,15* +26,6 2,4±0,18 2,8+0,27 + 14,1

Примечание: * - статистически достоверное различие (р<0.05) по сравнению с исходными

■значениями.

На 14-н день лечения отмечено снижение уровня билирубина плазмы, активности аланиновой и аенарапшовой трансаминаз, гистндазы и урокашшазы, а-сериндегидратазы и а-треопнидегидротазы. Значимое улучшение функции печени (снижение >25% от исходных значений) в процессе лечения достигнуто у 79,6% пациентов, принимающих бемитил (табл. 24). Улучшения сократительной функции желчного пузыря (но данным УЗИ-контроля) выявлено не было ни в одной из грушт.

В результате лечения отмечено уменьшение общей слабости и утомляемости пациентов, а также тяжести в правом подреберье (табл. 25). Клиническое улучшение было более выражено в группе пациентов, получавших бемитил, по сравнению со стандартной гепатонротекторной терапией.

Следует отметить, что добавление бемитила в комплексную терапию нарушений функций печени не приводило к достоверным изменениям печеночного кровотока, что объясняет положительную динамику клинических и лабораторных показателей главным образом его метаболическим действием.

Таблица 25

Динамика клинической симптоматики в изучаемых группах пациентов,

кол-во человек с симптомом (% пациентов с симптомом)

Бемитил (п=54) Контроль(п=27)

исходно 14-й день исходно 14-й день

Гепатомсгалия 30 (55,5%) 26 (48,2%) 17(62,9%) 14 (51,9%)

Спленомегалия 5 (9,3%) 4 (7,4%) 2 (7,4%) 2 (7,4%)

Тяжесть в правом подреберье 18 (33,3%) 6* (11,1%) 10 (37,0%) 5 (18,5%)

Болезненность печени при пальпации 31 (57,4%) 22 (40,7%) 14(51,8%) 8 (29,6%)

Астеновегетативиые проявления 52 (96,3%) 16* (29,6%) 24 (88,9%) 10 (37,0%)

Диспепсические явления 12(22,2%) 4 (7,4%) 5 (18,5%) 2 (7,4%)

Примечание: * - статистически достоверное различие (р<0,05) по сравнению с исходными

значениями.

Таким образом, включение бемитила в комплекс реабилитационных мероприятий ликвидаторов аварии па Чернобыльской АЭС в дозе 750 мг в сутки приводило к оптимизации функционирования антиоксидантной системы и предотвращению активации процессов липопероксидацим. У пациентов улучшалось функциональное состояние печени и снижались проявления цитологического синдрома. Препарат бемигил в суточной дозе 750 мг может быть рекомендован для использования пациентами, страдающими хроническими заболеваниями гепатобилиарной системы, с целыо дополнительной коррекции антиоксидантной и антигипоксической защитной систем организма.

ВЫВОДЫ

1. Сочетаниое применение бемитила с аитидотами (метиленовый синий, цистамин) при токсической метгемоглобинемии (вызванной острой или хронической нитритной интоксикацией) имеет преимущество по сравнению с индивидуальными препаратами (монотерапией) и является эффективным средством коррекции ПОЛ в эритроцитах, головном мозге крыс, нормализует активность антиоксидантных и мембраносвязанных ферментов.

2. Включение бемитила в схему лечения, наряду с антидотами (М-холиноблокатором атропином, реактиватором холинэстеразы диэтиксимом), является эффективным методом

-42-

коррекции нарушений активности Ыа+/К+ А'ГФазы и ПОЛ в мозге и сердце крыс, а т акже состояния мембран клеток (микровязкость, активность мембраноевязанных ферментов) в восстановительном периоде после тяжелых отравлений антихолиичетеразными ядами (карбофосом млн арммном).

3. Применение бемитила при циррозе печени (вызванном сочетанной интоксикацией полнхлорированными бпфенилами и этанолом) восстанавливает активность СДГ', МДГ, ферментов синтеза мочевины (аргиназы и КФС), каталазы, стабилизирует процессы ПОЛ, а также нормализует скорость использования Гл-6-Ф через нентозофосфатный шунт.

4. Бемитнл при нероральпом введении крысам проявляет свойства индуктора цито.хрома Р450 смешанного типа, увеличивает суммарное содержание цитохрома Р450 в микросомах и монооксигеназную активность, сопряженную как с АЬ-рецеитор-завненмымн, так и с АЬ-рецентор-незавиенмыми изоформами, за исключением ашшин-р-гидроксилазной активности.

5. 11нду пирующий эффект бемитила в отношении монооксигеназной активности, реализуемой АЬ-рецен тор-зависимыми изоформами (4-иптроаннзол-О-демептлазная, 2,5-дефинилокеазол-р-гидрокеилазиая, ЭРОД-активность), более выражен и максимален при однократном введении препарата. Бемитил ш уйто в высоких концентрациях увеличивал экспрессию ЭРОД-актнвностн в лимфоцитах, а в низких - БРОД-актнвности.

6. Фармакокинетика бемитила характеризуется высокой интенсивностью распределения в органы и ткани из крови. При курсовом введении кровь обладает способностью кумулировать препарат, преимущественно за счет накопления бемитила в эритроцитах.

7. Установлено модифицирующее влияние феномена фарыакокипетнчеекой интерференции на фармакокинетичеекие параметры бемитила и других лекарственных препаратов при совместном их применении в единой лекарственной форме.

8. У ликвидаторов аварии на Чернобыльской АЭС даже через 20 лет после аварии обнаруживается дисбаланс процессов свободнорадикалыюго окисления и снижение активности физиологической антиоксидаптной системы, приводящие к окислительной деструкции макромолекул - липидов и белков, в связи с этим включение антиоксидантов с мембрапоетабилизирующнми свойствами в комплексную реабилитацию пациентов из числа участников ликвидации последствий аварии на ЧАЭС - патогенетически обосновано и является эффективным методом коррекции нарушений ПОЛ.

9. Фармакологическая коррекция иеепецифических механизмов патогенеза, возникающих в организме при различных видах интоксикаций, вносит существенный вклад в повышение эффективности комплексной терапии токсических поражений. В качестве средств коррекции песпецифпческих проявлений токсических поражений целесообразно использовать препараты группы актопротекторов - производных беизимндазола.

СПИСОК ПЕЧАТНЫХ РАБОТ

1. Фармакокинетика актопротекторов - производных беизимидазола и адамантана в головном мозге крыс при однократном и курсовом введении // Тез. докл. Междунар. науч. коиф. «Новые лекарственные средства: синтез, технология, фармакология, клиника». -Минск. - 2001. - С. 130-131 (в соавторстве с Сергеевой С.А., Сорокиной Е.А., Красных Л.М., Сибиряком C.B.).

2. Фармакокинетика актопротекторов - производных беизимидазола и адамантана в печени крыс при однократном и курсовом введении // Там же. - С. 131-132 (в соавторстве с Сергеевой С.А., Сорокиной Е.А., Красных Л.М., Сибиряком C.B.).

3. Влияние актопротекторов производных беизимидазола на содержание цитохрома Р450 и момоокенгеназиые активности в печени крыс // Там же. - С. 139-140 (в соавторстве с Сорокиной Е.А., Сибиряком C.B., Сергеевой С.А.).

4. Клиническая фармакокинетика бемитила // Тез. науч. раб. I Междунар. копф. «Клинические исследования лекарственных средств в России». - М. - 2001. - С. 94 (в соавторстве с Сергеевой С.А.).

5. Влияние бемитила на цитохром-Р-450-зависимые монооксигеиазы // Там же. - С. 246 (в соавторстве с Сибиряком C.B., Сорокиной Е.А., Сергеевой С.А.).

6. Клиническая эффективность актопротектора бемитила при остром стенозируюшсм ларипготрахеите у детей: пилотное исследование // Тез. докл. IX Российского национального конгресса «Человек и лекарство». - С. 1 19 (в соавторстве с Петровым В.И.).

7. Клиническая фармакокинетика пирабела // Там же. - С. 525 (в соавторстве с Шустовым Е.Б., Сергеевой С.А.).

8. Экспериментальная фармакокинетика бромитила // Там же. - С. 605-606 (в соавторстве с Сергеевой С.А., Красных Л.М.).

9. Кинетика распределения бемитила в печени и мозге крыс // Там же. - С. 694 (в соавторстве с Сергеевой С.А.).

10. Кинетика проницаемости актопротекторов через гематоэнцефалический барьер при однократном и курсовом введении // Мат. I Нац. науч.-мед. конф. «Здоровье человека». -Ереван. - 2002. - С. 186 (в соавторстве с Сергеевой С.А., Навасардяп М.Р., Красных Л.М.).

11. Фармакокинетика препарата группы актопротекторов - этомерзола // Мат. VI Междунар. науч. конф. «Здоровье семьи - XXI век». - Пермь (Россия) - Дубай (ОАЭ). - 2002. -С. 40—41 (в соавторстве с Сергеевой С.А., Петровым В.И.).

12. Фармакокинетика актопротектора бемитила // Там же. - С. 41-42 (в соавторстве с Сергеевой С.А., Петровым В.И.).

13. Особенности фармакокинетики актопротекторов в печени крыс // Мат. науч. сессии Пермской государственной медицинской академии. - Пермь. - 2002. - С. 44—45 (в соавторстве с Сергеевой С.А., Танеевой Е.Р).

14. Экспериментальная коррекция химических поражений печени производными пиримидина // Уфа. - 2002. - 150 с. (в соавторстве с Мышкиным В.А., Бакировым А.Б., Сергеевой С.А.).

!5. Влияние актопротекторов - производных бензимидазола на переписное окисление лииидов при экспериментальной интоксикации карбофосом // Mar. II Нац. науч.-мед. конгресса «Здоровье человека». - Ереван. - 2003. - С. 199-200 (в соавторстве с Сергеевой СЛ.).

16. Кинетика накопления актопротекторов - производных бензимидазола в печени крыс при однократном и курсовом введении // Там же. - С. 200-201 (в соавторстве с Сергеевой С.А., Навасардяп М.Р.).

17. Бемнтил в коррекции переписного окисления лииидов в комплексном лечении пациентов с доброкачественной гиперплазией предстательной железы // Тез. докл. X Российского национального конгресса «Человек и лекарство». - М. - 2003. - С. 161.

18. Бемнтпл в коррекции тканевой гипоксии и иерекиепого окисления лииидов в комплексном лечении больных хроническим салыпшгоофоритом с нарушением менструальной функции // Там же. - С. 161 (в соавторстве с Фроловой И.В.).

19. Влияние тауфона, бемитила и пикамилопа па качество жизни у пациен тов - ликвидаторов последствий Чернобыльской катастрофы, страдающих артериальной гипертонией // Там же. - С. 164 (в соавторстве с Давыдовым И.Н., Фроловым М.Ю., Резван Т.С.),

20. Генатонротекторная активность и механизм действия бемитила и окспмегплурадила при интоксикации полихлорнрованными бифенилами // Там же. - С. 609-610 (в соавторстве с Ибатуллиной Р.Б., Савлуковым А.И., Мышкиным В.А., Мышкиным И.В., Сергеевой С. А.).

21. Влияние бемитила на метаболические процессы в мозге при острой гемнческой гипоксии // Там же. - С. 638 (в соавторстве с Мышкиным В.А., Ибатуллиной Р.Б., Савлуковым А.И., Сергеевой С.А.).

22. Сравнительная кинетика распределения актопротекторов - производных бензимидазола в печени крыс // Там же. - С. 661 (в соавторстве с Сергеевой С.А.).

23. Фармакокниет ика актопротекторов - производных бензимидазола и адамантана в почках крыс при однократном и курсовом введении // Там же. - С. 661 (в соавторстве с Сергеевой С.А., Красных Л.М.).

24. Аптиоксидантпые эффекты производных пиримидина и бензимидазола при острых отравлениях // Уфа. - 2003. - 189 с. (в соавторстве с Мышкиным В.А., Ибатуллиной Р.Б., Савлуковым А.И., Бакиновым А.Б., Сергеевой С.А.).

25. Глицин, тауфон, бемитнл: мстаболитические корректоры у пациентов с артериальной гнпертеизией // Тез. докл. 11 съезда Российского научного общества фармакологов «Фундаментальные проблемы фармакологии». - М. - 2003. - Ч. I. - С. 156 (в соавторстве с Давыдовым H.H., Фроловым М.Ю., Костромеевой Е.В.).

26. Фармакологическая коррекция перекисиого окисления дипидов при экспериментальных интоксикациях химическими веществами // Там же. - Ч. II. - С. 40 (в соавторстве с Мышкиным В.А., Кривоноговым В.П., Ибатуллиной Р.Б., Савлуковым С.А., Крыловой Е.В., Сергеевой С.А., Толстиковым Г.А.).

27. Экспериментальная фармакокинетика актопротекторов - производных бензимидазола и адамантана в жировой ткани при однократном и курсовом введении // Там же. - Ч. 11. -С. 155 (в соавторстве с Сергеевой С.А., Красных JI.M.).

28. Актопротскторы - производные бензимидазола, влияние па цитохром-Р-450-завнеимые монооксигеназы // Там же. - Ч. П. - С. 164 (в соавторстве с Сибиряком С.В.. Сергеевой С.А.).

29. Влияние бемитила и пробукола на проявление тканевой гипоксии и показатели перекисиого окисления лнппдов у ликвидаторов последствий Чернобыльской катастрофы со спижешюй функцией печени // Там же. - Ч. II. - С. 256 (в соавторстве с Фроловым М.Ю., Резвап Т.С.).

30. Комплексное соединение 6-метилуранила с янтарной кислотой, проявляющее аитигипоксическуга активность, и способ его получения // Патент Российской Федерации № 2259357. Приоритет изобретения от 21 июля 2003 г. (в соавторстве с Еникеевым Д.А., Кривоноговым В.П., Мышкиным В.А., Ибатуллиной Р.Б., Чернышенко 10.П., Козловой Г.Г., С'авлуковой А.П., Абдрахмановым И.Б., Мышкиным И.В., Сергеевой С.А.).

31. Защитные эффекты пиримидииовых производных при экспериментальной острой алкогольной интоксикации Н Мат. VII Междуиар. науч. конф. «Здоровье семьи -XXI век». - Пермь (Россия). - Валетта (Мальта). - 2003. - С. 61-62 (в соавторстве с Сергеевой С.А., Мышкиным В.А.).

32. Influence of actoprotectors, benzimidazole derivatives, on lipid peroxidation induced by malatliion // International conference «Reactive oxygen and nitrogen species, antioxidants and human health. - Abstracts. - 2003. - Smolensk, Russia. - P. 123 (with Sergeeva S.A.).

33. О некоторых закономерностях развития оксидативного стресса при отравлении фосфорорганнческимн соединениями // Мат. конф. «Основные обшепатологические и клинические закономерности развития критических терминальных и постреанимационных состояний, принципы их коррекции». - М. - 2003. - С. 110-112 (в соавторстве с Мышкиным В.А., Ибатулииой Р.Б., Еникеевым Д.А., Савлуковым А.И., Сергеевой С.А.).

34. Влияние актопротекторов - производных бензимидазола на свободнорадикальнмс процессы in vitro // Тез. докл. XI Российского национального конгресса «Человек и лекарство». - М. - 2004. - С. 802-803 (в соавторстве с Крыловой Е.В., Мышкиным В.А., Сергеевой С.А., Савлуковым А.И.).

35. Влияние бемитила на показатели гуморального иммунитета у пациентов с доброкачественной гиперплазией предстательной железы в периоперациоином периоде // Там же. - С. 132.

36. Эффективность и безопасность бемитила у ликвидаторов последствий Чернобыльской аварии с заболеваниями желчного пузыря и сниженной функцией печени // Там же. -С. 627 (в соавторстве с Фроловым М.Ю., Резван Т.С.).

37. Лекарственный формуляр санатория для лечения лиц - ликвидаторов последствий Чернобыльской аварии // Сборник материалов Поволжских региональных конференций «Лечение и реабилитация ликвидаторов последствий аварии на Чернобыльской АЭС», г. Волгоград, 2000-2003 гг. - Волгоград. - 2004. - С. 33-34 (в соавторстве с Резван Т.С., Фроловым М.Ю.).

38. Применение бемитила в коррекции перекисного окисления линидов у ликвидаторов последствий Чернобыльской аварии // Там же. - С. 78-80.

39. Применение бемитила в лечении ликвидаторов последствий Чернобыльской аварии с нарушением функции печени // Там же. - С. 81-82.

40. Влияние бемитила на функционирование про- и антиоксидантной системы у пациентов с доброкачественной гиперплазией предстательной железы в периоперационном периоде // Там же. - С. 140-147 (в соавторстве с Шульгиным P.E.).

41. Клиническая эффективность бемитила в комплексном медикаментозном сопровождении аденомэктомин // Там же. - С. 147-156 (в соавторстве с Шульгиным P.E.).

42. Влияние пиримидиновых производных на уровень метгемоглобнна при интоксикации нитритом натрия // Мат. VIII Междуиар. науч. конф. «Здоровье семьи - XXI век». - Гоа, Индия. - 2004. - С. 73-74 (в соавторстве с Сергеевой С.А., Мишкиным В.А., Петровым В.И.).

43. Механизмы действия и опы т клинического применения актопротекторов - производных бензимидазола // Там же. - С. 74-77 (в соавторстве с Сергеевой С.А., Петровым В.И.).

44. Влияние бемитила и тиетазола на состояние мембран эритроцитов при отравлении карбофосом // Там же. - С. 207-210 (в соавторстве с Мышкиным В.А., Ибатуллиной Р.Б., Савлуковым А.И., Енпкеевым Д.А., Сергеевой С.А.).

45. Гепатонротекторное действие бемитила и атропина при экспериментальной интоксикации карбофосом // Мат. конф. «Реаниматология. Ее роль в современной медицине». - М. - 2004. - С. 154-155 (в соавторстве с Мышкиным В.А., Савлуковым

A.И., Ибатуллиной Р.Б., Еннкеевым Д.А., Сергеевой С.А.).

46. Влияние бемитила и атропина на иерекисное окисление линидов и некоторые метаболические процессы в мозге и сердце крыс при остром отравлении карбофосом // Здравоохранение Башкортостана. - 2004. -№ 4. - С. 169-170 (в соавторстве с Мышкиным

B.А., Савлуковым А.И., Ибатуллиной Р.Б., Еншсеевым Д.А., Сергеевой С.А.).

47. Влияние атопротекторов на перекисное окисление линидов и состояние мембран эритроцитов у крыс при отравлении карбофосом // Патологическая физиология и экспериментальная терапия - 2004. - № 3. - С. 10-12 (в соавторстве с Мышкиным В.А., Ибатуллиной Р.Б., Савлуковым А.И., Еннкеевым Д.А., Сергеевой С.А.).

48. Применение силимариШ и альфа-токоферола для коррекции метаболических и морфофункциональных нарушений в печени крыс при интоксикации полихлорированными бифенилами // Токсикол. Вести. - 2004. - № 3. - С. 30-33 (в соавторстве с Мышкимым В.А., Ибатуллиной Р.Б., Савлуковым А.И., Волковой Е.С., Сергеевой С.А.).

49. Влияние производных бензимидазола на свободнорадикальные процессы in vitro // Экспериментальная коррекция постинтокеикационных нарушений / В.А. Мышкин, Д.А. Еникеев. - У(|)а: ИД «Чурагул». - 2005. - 350 с. (С. 89-98) (в соавторстве с Мышкимым В.А., Еннкеевым Д.А.).

50. Актопротекторы бемитил, этомерзол и производное бензимидазола Б-16: сравнительное исследование антиоксидантиого действия после острого отравления крыс карбофосом // Мат. IX Междуиар. конф. «Здоровье семьи - XXI век». - 2005. - Далянь, Китай. - С. 281284 (в соавторстве с Савлуковым А.И., Мышкиным В.А., Ибатуллиной Р.Б., Сергеевой С.А., Еннкеевым Д.А.).

51. Влияние сукцината оксиметилурацила и бемитила на биоэнергетические процессы в печени и головном мозге крыс в условиях острой гипоксии // Здравоохранение Башкортостана. - № 7. - 2005. - С. 160-161 (в соавторстве с Мышкиным В.А., Черновым

B.II., Ибатуллиной Р.Б., Шафиковым А.Р., Мирсаяповым Р.Ш.).

52. О возможности фармакологической коррекции гипоксии головного мозга производными беизимпдазола бемитилом и этомерзолом // Мат. IV Российской конференции «Гипоксия: механизмы, адаптация, коррекция» (с международным участием). - М. - 2005. - С. 32 (в соавторстве с Сергеевой С.А.).

53. Влияние соединения Б-16, бемитила и этомерзола на перекиеное окисление лнгпшов в восстановительном периоде после острого отравления крыс карбофосом // Там же. -

C. 96-97 (в соавторстве с Савлуковым А.И., Мышкиным В.А.., Ибатуллиной Р.Б., Сергеевой С.А., Еннкеевым Д.А.).

54. Антнгипоксическая и антиоксидаитиая активность производных пиримидина // Там же. -С. 97-98 (в соавторстве с Савлуковым А.И., Мышкиным В.А., Срубилиным Д.В., Ибатуллиной Р.Б., Еннкеевым Д.А., Сергеевой С.А.).

55. Распределение бемитила по органам и тканям крыс при однократном и курсовом введении // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2006. - Т. 141, № 5. -С. 534-536 (в соавторстве с Сергеевой С.А.).

56. Влияние бемитила и силимарина на перекиеное окисление липидов, активность сукцинат- и малатдегидрогеназы в гепатоцитах при экспериментальном циррозе печени // Мат. X Международной научной конференции «Здоровье семьи - XXI век». - 2006. -Бангкок, Таиланд. - С. 240-242 (в соавторстве с Мышкиным В.А., Ибатуллиной Р.Б., Екииеевым Д.А., Сергеевой С.А., Шафиковым А.Р., Шафиковой JI.B.).

57. 'Защитно-восстановительная эффективность бемитила и этомерзола при алкогольной интоксикации (по показателям эритроцитарной системы) U Там же. - С. 242-244 (в соавторстве с Мышкиным В.А., Ибатуллиной Р.Б., Екинеевым Д.А., Сергеевой С.А., Шафиковым А.Р., Шафиковой Л.В.).

58. Эффективность применения бемитила и ннстамгша при хронической нптрнтмой интоксикации // Пермский медицинский журнал, - Т. 23, № 3. - Пермь. - 2006. - С. 14-19 (в соавторстве с Серг еевой С.А.).

59. Коррекция бемнтилом и антидотами фосфироргапическнх соединений церекисного окисления лииидов и повреждения клеточных мембран при интоксикациях карбофосом и армнпом // Там же. - С. 94-99.

60. Пилотное исследование применение бемитила при заболеваниях генатобилиарпоп системы // Тез. докл. XIV Российског о национального конгресса «Человек и лекарство». -М. - 2007. - С. 437-438 (в соавторстве с Сергеевой С.А.).

61. Влияние бемитила па активность печеночных ферментов при экспериментальном циррозе печени крыс // Там же. - С. 814-815 (и соавторст ве с Серг еевой С.А.).

62. Распределение этомерзола по органам и тканям крыс при однократном и курсовом введении // Там же. - С. 874-875 (в соавторстве с Сергеевой С,А.).

63. Коррекция нарушений прооксидантно-антноксидантного равновесия поели тяжелых острых отравлений // Общая реаниматология. - Т. 111, № 5-6. - М. - 2007. - С. 69-74 (в соавторстве с Мышкиным В.А., Савлуковым А.П., Енпкеевым Д.А., Ибатуллиной Р.Б., Сергеевой С.А., Шафиковым А.Р.).

64. Клиническое исследование фармакокинетнкн пирабела у здоровых добровольцев // VI Междунар. конф. «Клинические исследования лекарственных средств». - М. - 2007. -С. 135-136 (в соавторстве с Шустовым Е.Б., Сергеевой С.А.).

65. Распределение этомерзола по органам и тканям крыс при однократном и курсовом введении // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2008. - Т. 145, № 1. -С. 47-49 (в соавторстве с Сергеевой С.А.).

66. Распределение тиетазола по органам и тканям крыс при однократном и курсовом введении // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2008. - Т. 145, № 5,-С. 555-557 (в соавторстве с Сергеевой С.А.).

67. Экспериментальная фармакокинетика бромитила // Физиология и патология иммунной системы. - 2008. - № 3. - С. 3-8 (в соавторстве с Сергеевой С.А.).

68. Клиническая фармакокинетика пирабела // Физиология и патология иммунной системы. -2008. - Хя 4. - С. 9-13 (в соавторстве с Сергеевой С.А.).

69. Сравнительная экспериментальная фармакокинетика производных беизимидазола // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2008. - Т. 146, № 12. - С. 657-659 (в соавторстве с Сергеевой С.А.).

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

АлАТ - аланинаминотрансфераза

АНС. - 1-аиилинонафталин-8-сульфонат

АсАТ - аспартатамииотраисфераза

АТФ - аденозин трифосфат

БРОД - бензилоксирезоруфии-О-дебензилаза

БТХВ - боевые токсические химические вещества

Гл-6-ФДГ - глгокозо-6-фосфатдепшрогеназа

ГП - глутатионнероксидаза

ДК - диеновые коныогаты

КФ - кислая фосфатаза

КФС - карбамоилфосфатсинтетаза

лдг - ла ктатдегидроге! шза

МДА - малоновый днальдсгид

мдг _ малатдегидрогеназа

мх - м итох оидр иал ь ны й

НАД - никотинамидадениндинуклеотид

НАДФ - никотинамидадениндинуклеотидфоефат

ПОЛ - перекисное окисление липидов

ПХБ - полихлорированные бифенилы

ПХЗ - противохимическая защита

сдг - сукцинатдегидрогеназа

сод - супероксиддисмутаза

соз - стойкие органические загрязнители

ссг - среднее содержание гемоглобина

СЭФПЭ - средняя электрофоретическая подвижность эритроци тов

ТБК-РП - продукты, реагирующие с тиобарбитуровой кислотой

тдг - треониндегидратаза

ФАВ - физиологически активные вещества

ФОС - фосфорорганические соединения

ЦТК - цикл трикарбоновых кислот

шо - основания Шиффа

ЩФ - щелочная фосфатаза

ЭРОД - этоксирезоруфин-О-деэтилаза

нь - гемоглобин

- легальная доза

Подписано в печать 05.10.2009 г. Формат 60х 84/16. Усл. печ. л. 2,8. Тираж 100 чкз. Заказ № 2678.

Типография ООО «Студия «ЗёБРА». Адрес: 614990, г. Пермь, ул. Окулова, 80.

f\

2008174429

Актуальность проблемы. Деятельность современного человека осуществляется в условиях возрастания интенсивности и продолжительности действия неблагоприятных эколого-профессиональных факторов -колебаний барометрического давления, температурных нагрузок, изменений парциального давления газов вдыхаемого воздуха, интенсивных шумов и вибраций, гипергравитации, или невесомости, угловых ускорений, негативных информационно-семантических и других факторов среды. Сочетанное, одновременное или последовательное действие нескольких факторов ведет к взаимному отягощению их влияния на организм человека. Выполнение в этих условиях задач профессиональной деятельности, особенно связанных с физическими и психоэмоциональными нагрузками, обусловливает дополнительное напряжение функций организма и может вызвать быстрое истощение его физиологических резервов.

В ответ на воздействие определенной дозы (интенсивности и длительности) неблагоприятных эколого-профессиональных факторов могут развиваться состояния предельного напряжения механизмов адаптации с обратимыми явлениями дезадаптации, которые обозначаются термином экстремальные. Особенно высок риск развития экстремальных и критических состояний у ликвидаторов последствий аварий и катастроф, участников военных конфликтов, подводников, водолазов, десантников, летного состава, космонавтов (Новиков B.C. и соавт., 1998; Козлов Н.Б., 1992; Шестопалов С.С., 2000; Морозов И.С. и соавт., 2001, Ганапольский В.П., 2008; Домрачеев A.A., 2009; Гурвич В.Б., 2009).

Бурное развитие ядерной энергетики и химической промышленности во многих странах мира в последние годы сделало угрозу радиоактивного и химического заражения обширных территорий реальной не только в случае применения ядерного и химического оружия, но и в случае разрушения объектов ядерно-топливного цикла и химической промышленности, находящихся в районе ведения боевых действий, обычным оружием или при их аварии в ходе промышленной эксплуатации. Это приведет к появлению новых категорий пораженных. В массовых масштабах возникнут специфические виды патологии, требующие специальных подходов при проведении профилактики и лечения. Существенно изменятся величина и структура санитарных потерь. Значительно увеличится число лиц с боевой терапевтической травмой, среди которых большую часть составят пораженные токсичными химикатами и ионизирующим излучением.

В 1993 году была принята Парижская «Конвенция о запрещении разработки, производства, накопления и применения химического оружия». Конвенцию подписали более 150 государств, в их числе и Россия. В соответствии с Конвенцией изданы Указ Президента Российской Федерации «О подготовке Российской Федерации к выполнению международных обязательств в области химического разоружения» и Постановление Правительства РФ от 21 марта 1996 года №305 «Об утверждении Федеральной целевой программы «Уничтожение запасов химического оружия в Российской Федерации»», а также Постановление Правительства РФ от 24 октября 2005 года №639 «О внесении изменений в Федеральную целевую программу «Уничтожение запасов химического оружия в Российской Федерации»».

Однако основными причинами, побуждающими говорить о сохранении высокого уровня военно-химической опасности, являются достижения современной химии в области органического синтеза, беспрецедентный рост масштабов химического производства в мирных целях, огромное разнообразие синтезированных и вновь синтезируемых веществ, многие из которых обладают высокой токсичностью.

Количество изученных физиологически активных веществ (ФАВ), свойства которых позволяют рассматривать их как потенциальные средства ведения химической войны, составляют не один десяток. И этот список будет расти даже в том случае, если в соответствии с Конвенцией будут полностью запрещены работы по поиску новых активных токсикантов. Поэтому химическое разоружение ни в одной стране пока не привело к сокращению работ в области противохимической защиты (ПХЗ).

В последнее время к угрозе применения химических веществ в военных конфликтах добавляются проблемы химической опасности в мирное время. Непрерывно растет вероятность аварий на химически опасных объектах, увеличивается возможность терроризма с применением боевых токсических химических веществ (БТХВ), возникает, а в отдельных регионах порой принимает катастрофические масштабы, загрязнение окружающей среды (Плужников H.H. и соавт., 2000,2001; Лужников Е.А., Гольдфарб Ю.С., 2001; Прозоровский В.Б. и соавт., 2001; Куценко С.А., Гребенюк А.Н., 2001; Соцкова В.А., 2007; Гурвич В.Б., 2009).

Всё это доказывает актуальность изучения механизмов действия токсикантов и разработки новых методов эффективного лечения токсических поражений. Однако существующие подходы к решению обозначенной проблемы сконцентрированы в основном на специфических составляющих патогенеза токсических поражений и их терапии.

Действительно, если для купирования специфических эффектов токсикантов основным подходом является использование антидотов, то для коррекции неспецифических проявлений, токсических поражений экстремальная медицина по-прежнему опирается лишь на синдромальный (посимптомньтй) подход. Отсутствуют четкие критерии использования широкого арсенала средств, позволяющих повышать неспецифическую резистентность организма в критических состояниях. Немаловажным является и то, что недостаточно изучены вопросы взаимодействия специфических антидотов с лекарственными средствами, используемыми при коррекции неспецифических проявлений токсических поражений.

Не менее актуальной видится разработка средств и методов коррекции экстремальных состояний как для медицины труда (военной, авиакосмической, морской и спортивной медицины, гигиены труда и профпатологии, медицины катастроф), так и для клинической медицины

Азизов А.П., 1998; Косолапов В.А., Куренков JLA., 1998; Шестопалов С.С., 2000; Крылова Е.В., 2003; Юшков Б.Г., 2006; Caputa М., 2006;).

Перспективной в качестве средств коррекции экстремальных состояний человека является группа фармакологических препаратов, которые стимулируют двигательную активность и работоспособность организма в осложненных (экстремальных) условиях (Бобков Ю.Г. и соавт., 1984; Сергеева С.А., 1993; Морозов И.С. и соавт., 1998; Катаев В.А., 2006; Воронина Т.А. и соавт., 2007). Среди них важное место занимают актопротекторы производные бензимидазола. Действительно, опыт авиационной, радиационной, спортивной медицины показывает, что для обеспечения эффективной фармакотерапии экстремальных состояний перспективным является создание системы фармакологических комплексов, которые должны обладать психостимулирующим действием на фоне достаточного антиоксидантного, витаминного и минерального обеспечения. Для данной категории людей базовыми должны являться препараты из группы актопротекторов (Новиков B.C. и соавт., 1998).

Цель исследования. Целью исследования явилась разработка патогенетически обоснованных подходов к коррекции неспецифических проявлений токсических поражений с учетом взаимодействия средств неспецифической фармакотерапии со специфическими антидотами.

Задачи исследования:

1. Изучение механизмов защитной эффективности бемитила антиокислительной и антирадикальной активности) в сравнении с референтными препаратами в модельных системах in vitro.

2. Изучение механизмов защитной эффективности бемитила и его совместного применения с антидотами (метиленовый синий, цистамин) при остром смертельном отравлении нитритом натрия и в условиях метгемоглобинемии, вызванной хронической нитритной интоксикацией.

3. Изучение влияния бемитила и его сочетанного применения с антидотами фосфорорганических соединений (ФОС) (атропин, диэтиксим) на состояние мембран клеток (микровязкость, активность мембрансвязанных ферментов), процессы перекисного окисления липидов (ПОЛ) и некоторые метаболические реакции в восстановительном периоде после тяжелых острых отравлений ФОС (карбофос, армин).

4. Изучение влияния бемитила на перекисное окисление липидов, ключевые фрагменты антиокислительной системы цикла трикарбоновых кислот, пентозофосфатного цикла, ферменты синтеза мочевины и морфофункциональное состояние печени при сочетанной интоксикации полихлорированными бифенилами и этанолом.

5. Изучение влияния бемитила на суммарный уровень цитохрома Р450 в печени, изоформо-специфические и изоформо-неспецифические монооксигеназные активности в печени и лимфоцитах.

6. Изучение экспериментальной и клинической фармакокинетики бемитила при однократном и курсовом введении, а также анализ влияния феномена фармакокинетической интерференции на фармакокинетические параметры бемитила и других лекарственных препаратов при совместном их применении в единой лекарственной форме.

7. Изучение эффективности включения бемитила в комплекс реабилитационных мероприятий контингента, пострадавшего от аварии на Чернобыльской АЭС.

Научная новизна.

Впервые изучено влияние бемитила и его сочетанного применения с антидотами метиленовым синим и цистамином на длительность жизни экспериментальных животных и процессы ПОЛ при остром смертельном отравлении нитритом натрия и хронической нитритной интоксикации. Показано, что механизмы потенцирования защитного эффекта сочетанного применения метиленового синего или цистамина, обладающих деметгемоглобинезирующей активностью, с бемитилом, в фармакологическом спектре которого присутствует антигипоксическая и антиоксидантная активность, обусловлены их действием на различные звенья токсикогенеза. Продемонстрировано, что одним из механизмов реализации защитных эффектов сочетанного применения бемитила с антидотами является восстановление нарушенного прооксидантно-антиоксидантного равновесия.

Выявлено, что использование бемитила в качестве дополнительного к антидотам средства восстановительного лечения после тяжелых отравлений ФОС полностью предупреждает падение активности Ка+/К+ АТФазы и увеличение продуктов ПОЛ-диеновых конъюгатов, оснований.Шиффа(ШО) в органах крыс. Бемитил в комбинации с атропином, в отличие от атропина, применяемого отдельно, предупреждает развитие структурно-функциональных нарушений в мембранах эритроцитов, и как следствие, изменение флуоресценции мембранного зонда 1-анилинонафталин-8-сульфоната (АНС) в мембранах эритроцитов крыс на 14 и 21 сутки после отравления карбофосом. Показано, что в основе механизма защитного влияния на эритроциты лежат три основных механизма: стимулирующее действие препарата на эндогенные антиоксидантные системы, антирадикальный эффект, мембраностабилизирующее действие.

Выявлено преимущество бемитила перед гепатопротектором силимарином в условиях экспериментального цирроза печени, вызванного смесью полихлорированных бифенилов и этанола. Применение бемитила способствует восстановлению активности сукцинатдегидрогеназы (СДГ), малатдегидрогеназы (МДГ), ферментов синтеза мочевины (аргиназы и карбамоилфосфатсинтетазы (КФС)), стабилизации процессов ПОЛ, активности каталазы, а также нормализует скорость использования Гл-6-Ф через пентозофосфатный шунт.

Определены особенности влияния бемитила на изоформо-специфические (7-этоксирезоруфин-О-деэтилазную (ЭРОД), бензилоксирезоруфин-О-дебензилазную (БРОД)) и изоформо-неспецифические (аминопирин-О-деметилазную, анилин-р-гидроксилазную, 4-нитроанизол-О-деметилазную и 2,5-дифенилизоксазол-р-гидроксилазную) активности в печени и лимфоцитах, что позволило оценить возможное участие конкретных изоформ цитохрома Р450 в метаболизме препарата и прогнозировать характер фармакокинетической интерференции в рамках комплексной терапии.

Впервые исследовано влияние феномена фармакокинетической интерференции на фармакокинетические параметры бемитила и других лекарственных препаратов при совместном их применении в единой лекарственной форме.

Показано, что механизмами реализации защитно-восстановительного действия бемитила, повышающего функциональное состояние организма и работоспособность при воздействии экстремальных факторов среды обитания и деятельности, являются антирадикальная активность, влияние препарата на ферменты антиоксидантной защиты (супероксиддисмутаза (СОД), каталаза), а также на ряд других ферментных систем, биоэнергетику клетки и состояние биологических мембран. Благодаря оптимальным фармакокинетическим свойствам препарата, а именно интенсивному распределению бемитила в органы и ткани, бемитил способен взаимодействовать с водорастворимыми и липофильными свободными радикалами.

Научно-практическая значимость работы:

Сформулирован подход к анализу механизмов реализации защитно-восстановительных эффектов препаратов, повышающих функциональное состояние организма и работоспособность человека при воздействии экстремальных факторов среды обитания и деятельности, с целью создания методологии доклинического изучения препаратов подобного типа действия.

Обоснована перспективность включения бемитила в качестве базисного средства, обеспечивающего позитивное влияние на выживаемость и физическую работоспособность при широком спектре неблагоприятных для профессиональной деятельности условий, в систему фармакологических комплексов, содержащих дополнительные препараты, избирательно повышающие работоспособность в конкретной экстремальной ситуации.

Полученные результаты доказывают необходимость учета феномена фармакокинетической интерференции при применении многокомпонентных лекарственных комплексов, содержащих в своем составе актопротекторы — производные бензимидазола, в условиях фармакологической коррекции экстремальных состояний, и. позволяют прогнозировать потенциально опасные комбинации лекарственных средств, а также оптимизировать ^ режимы использования актопротекторов в зависимости от их влияния на цитохром Р450-зависимые монооксигеназы и особенностей распределения по органам и тканям организма.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Присутствие неспецифических механизмов патогенеза постинтоксикационных нарушений в тканях органов-мишеней, обусловленных активацией перекисного окисления и нарушением антиоксидантной защиты, ведущих к повреждению клеточных мембран и метаболическому дисбалансу, определяет необходимость совместного применения антидотов специфического действия совместно со средствами неспецифической защиты, в частности - актопротекторов производных бензимидазола.

2. Курсовое применение производного бензимидазола — актопротектора бемитила обеспечивает кумуляцию препарата в крови преимущественно за счет его накопления в эритроцитах, при этом имеет место интенсивное распределение препарата из крови в органы и ткани-мишени с оптимальным коэффициентом распределения между полярной и неполярной фазами, что позволяет эффективно взаимодействовать с радикалами без образования активных радикальных форм ингибитора.

3. При проведении терапии токсических повреждений с использованием фармакологических комплексов необходим обязательный учет феномена фармакокинетической интерференции.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены на Международной конференции «Новые лекарственные средства: синтез, технология, фармакология, клиника» (Минск, 2001), конференции «Клинические исследования лекарственных средств в России» (Москва, 2001, 2007), IX, X, XI, XIV Российских национальных конгрессов «Человек и лекарство» (2002, 2003, 2004, 2007), I национальной научно-медицинской конференции «Здоровье человека» (Ереван, Армения, 2002), VI, VIII и IX Международной научной конференции «Здоровье семьи - XXI век». (Дубай, ОАЭ, 2002; Гоа, Индия, 2004; Далянь, Китай, 2005; Бангкок, Таиланд, 2006), на научных сессиях Пермской государственной медицинской академии (Пермь, 2002, 2006), Международной конференции «Reactive oxygen and nitrogen species, antioxidants and human health» (Смоленск, 2003), II съезде Российского научного общества фармакологов «Фундаментальные проблемы фармакологии» (Москва, 2003), конференции «Основные общепатологические и клинические закономерности развития критических терминальных и постреанимационных состояний, принципы их коррекции» (Москва, 2003), IV Российской конференции «Гипоксия: механизмы, адаптация, коррекция» (Москва, 2005).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 69 печатных работ.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 287 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, главы описания материалов и методов исследования, 9 глав собственных исследований, заключения, выводов и списка литературы, включающего 621 источник, из них 339 отечественный и 282 зарубежный. Работа иллюстрирована 8 рисунками и содержит 34 таблицы.

6. выводы

1. Сочетанное применение бемитила с антидотами (метиленовый синий, цистамин) при токсической метгемоглобинемии (вызванной острой или хронической нитритной интоксикацией) имеет преимущество по сравнению с индивидуальными препаратами (монотерапией) и является эффективным средством коррекции ПОЛ в эритроцитах, головном мозге крыс, нормализует активность антиоксидантных и мембраносвязанных ферментов.

2. Включение бемитила в схему лечения, наряду с антидотами (М-холиноблокатором атропином, реактиватором холинэстеразы диэтиксимом), является эффективным методом коррекции нарушений активности №+/К+ АТФазы и ПОЛ в мозге и сердце крыс, а также состояния мембран клеток (микровязкость, активность мембраносвязанных ферментов) в восстановительном периоде после тяжелых отравлений антихолинэстеразными ядами (карбофосом или армином).

3. Применение бемитила при циррозе печени (вызванном сочетанной интоксикацией полихлорированными бифенилами и этанолом) восстанавливает активность СДГ, МДГ, ферментов синтеза мочевины (аргиназы и КФС), каталазы, стабилизирует процессы ПОЛ, а также нормализует скорость использования Гл-6-Ф через пентозофосфатный шунт.

4. Бемитил при пероральном введении крысам проявляет свойства индуктора цитохрома Р450 смешанного типа, увеличивает суммарное содержание цитохрома Р450 в микросомах и монооксигеназную активность, сопряженную как с АЬ-рецептор-зависимыми, так и с АЬ-рецептор-независимыми изоформами, за исключением анилин-р-гидроксилазной активности.

5. Индуцирующий эффект бемитила в отношении монооксигеназной активности, реализуемой АЬ-рецептор-зависимыми изоформами (4221 нитроанизол-О-деметилазная, 2,5-дефинилоксазол-р-гидроксилазная, ЭРОД-активность), более выражен и максимален при однократном введении препарата. Бемитил in vitro в высоких концентрациях увеличивал экспрессию ЭРОД-активности в лимфоцитах, а в низких -БРОД-активности.

6. Фармакокинетика бемитила характеризуется высокой интенсивностью распределения в органы и ткани из крови. При курсовом введении кровь обладает способностью кумулировать препарат, преимущественно за счет накопления бемитила в эритроцитах.

7. Установлено модифицирующее влияние феномена фармакокинетической интерференции на фармакокинетические параметры бемитила и других лекарственных препаратов при совместном их применении в единой лекарственной форме.

8. У ликвидаторов аварии на Чернобыльской АЭС даже через 20 лет после аварии обнаруживается дисбаланс процессов свободнорадикального окисления и снижение активности физиологической антиоксида! 1тной системы, приводящие к окислительной деструкции макромолекул — липидов и белков, в связи с этим включение антиоксидантов с мембраностабилизирующими свойствами в комплексную реабилитацию пациентов из числа участников ликвидации последствий аварии на ЧАЭС - патогенетически обосновано и является эффективным методом коррекции нарушений ПОЛ.

9. Фармакологическая коррекция неспецифических механизмов патогенеза, возникающих в организме при различных видах интоксикаций, вносит существенный вклад в повышение эффективности комплексной терапии токсических поражений. В качестве средств коррекции неспецифических проявлений токсических поражений целесообразно использовать препараты группы актопротекторов — производных бензимидазола.

5. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Достижения современной химии в области органического синтеза, беспрецедентный рост масштабов химического производства в мирных целях, огромное разнообразие синтезированных и вновь синтезируемых веществ, многие из которых обладают высокой токсичностью, делают актуальной проблему создания новых лекарственных средств, способных защитить человека в условиях острого и/или хронического воздействия разнообразных повреждающих химических факторов. В 1993 году была принята Парижская «Конвенция о запрещении разработки, производства, накопления и применения химического оружия», которую в числе 150 государств ратифицировала и Российская Федерация. В соответствии с Конвенцией изданы Указ Президента Российской Федерации «О подготовке Российской Федерации к выполнению международных обязательств в области химического разоружения» и Постановление Правительства РФ от 21 марта 1996 года №305 «Об утверждении Федеральной целевой программы «Уничтожение запасов химического оружия в Российской Федерации»», а также Постановление Правительства РФ от 24 октября 2005 года № 639 «О внесении изменений в Федеральную целевую программу «Уничтожение запасов химического оружия в Российской Федерации»».

Создание препаратов, способных оказывать защитное действие при воздействии повреждающих факторов различной природы, при отсутствии четко выстроенной методологии экспериментального и клинического изучения довольно проблематично, так как может потребовать больших временных и экономических затрат. В связи с этим, разработка патогенетически обоснованных подходов к коррекции неспецифических проявлений токсических поражений с учетом взаимодействия средств неспецифической фармакотерапии со специфическими антидотами, представляется весьма актуальной. Для устранения специфических проявлений токсических поражений используются антидоты, в тоже время отсутствует единый подход к коррекции неспецифических проявлений токсических поражений. Лекарственных средств, способных эффективно и безопасно повысить неспецифическую резистентность и работоспособность организма в критических ситуациях, практически не существует, широко используемая в настоящее время симптоматическая терапия, к сожалению, не всегда отвечает современным требованиям. Недостаток информации о лекарственных взаимодействиях между специфическими антидотами и препаратами, использующимися для коррекции неспецифических поражений, также не позволяет с наибольшей эффетивностью разрабатывать фармакологические комплексы для защиты от токсических поражений.

На примере производного бензимидазола - актопротектора бемитила был разработан новый подход к фармакокоррекции неспецифических составляющих патогенеза токсических поражений, включающий разработку стратегии исследования механизмов защитной эффективности в экспериментальных модельных системах in vivo и in vitro, а также оценку эффективности включения бемитила в комплекс реабилитационных мероприятий ликвидаторов аварии на ЧАЭС с заболеваниями гепатобилиарной системы, а именно:

- оценку антиокислительной и антирадикальной активности бемитила в модельных системах in vitro;

- исследование механизмов защитной эффективности бемитила при остром смертельном отравлении нитритом натрия и в условиях хронической нитритной интоксикации;

- исследование влияния бемитила на состояние мембран клеток (микровязкость, активность мембрансвязанных ферментов), процессы ПОЛ и некоторые метаболические реакции в восстановительном периоде после тяжелых острых отравлений ФОС; исследование влияния бемитила на ПОЛ, ключевые этапы антиокислительной системы цикла трикарбоновых кислот, пентозофосфатного цикла, ферменты синтеза мочевины и морфофункциональное состояние печени при сочетанной интоксикации полихлорированными бифенилами и этанолом;

- исследование влияния бемитила на систему цитохрома Р450 печени, изоформо-специфические и изоформо-неспецифические монооксигеназные активности в печени и лимфоцитах;

- анализ влияния феномена фармакокинетической интерференции на фармакокинетические параметры бемитила и других лекарственных препаратов при совместном их применении в единой лекарственной форме; оценку эффективности включения бемитила в комплекс реабилитационных мероприятий контингента, пострадавшего от аварии на Чернобыльской АЭС.

Антиокислительную активность бемитила и других производных бензимидазола исследовали на двух модельных системах свободнорадикального окисления. В двух различных модельных системах показана высокая антирадикальная и антиокислительная активность бемитила и других производных бензимидазола - этомерзола и соединения Б-16. Исследование антирадикальной и антиоксидантной активности бемитила в модельных системах различной сложности в сравнении с этомерзолом, тиетазолом, производным бензимидазола - соединением Б-16, а также с гидрохлоридом цистамина, атропином, диэтоксимом и референтным ингибитором радикально-цепного окисления - ионолом - позволило с физико-химических позиций углубить понимание механизма действия бемитила.

В модельной реакции радикально-цепного окисления этилбензола была исследована реакционная способность бемитила путем определения эффективной константы скорости реакции между молекулами бемитила и перекисными радикалами этилбензола - (К7) с последующим вычислением ионольного эквивалента (ИЭ) - отношения К7 бемитила/К7 ионола. В соответствии со значением ИЭ бемитил может быть отнесен к ингибиторам

201 радикально-цепного окисления средней силы. Это подтверждается исследованием антиокислительных свойств бемитила в системах спонтанного, неферментного и ферментного ПОЛ. В данной модельной системе производные бензимидазола - бемитил, этомерзол и соединение Б-16 проявляют примерно одинаковую антиокислительную активность, превосходящую АОА тиетазола: бемитил и этомерзол и соединение Б-16 > тиетазол.

Антиоксидантные свойства бемитила, а также антигипоксическая активность препарата оказались ключевыми факторами в механизмах реализации его защитного эффекта в условиях острой нитритной интоксикации. В условиях острой гемической гипоксии, вызванной введением смертельной дозы нитрита натрия, бемитил потенцирует защитный эффект деметгемоглобинообразователей — метиленового синего и цистамина. Введение мышам бемитила в дозе 25 мг/кг достоверно не увеличивает длительность жизни отравленных животных. Повышение дозы бемитила до 50 мг/кг достоверно (+30-40%), сравнимо с метиленовым синим (10 мг/кг; +31,6%) и цистамином (50 мг/кг; +41%), увеличивало продолжительность жизни экспериминтальных животных. Сочетанное применение бемитила в дозе 25 мг/кг и 50 мг/кг и метиленового синего, а также бемитила в дозе 50 мг/кг и цистамина приводило к выраженному потенцированию эффекта и увеличению продолжительности жизни мышей в 1,5-2 раза. Таким образом, установлено, что бемитил в дозах 25 мг/кг и 50 мг/кг увеличивает защитный эффект метиленового синего и цистамина — препаратов, обладающих деметгемоглобинизирующим действием, что подтверждает преимущество комбинированной фармакопрофилактики перед индивидуальными препаратами.

Хроническое отравление нитритом натрия сопровождается сдвигами в системе регуляции свободнорадикального окисления липидов: накоплением диеновых конъюгатов (ДК) в эритроцитах, ДК и оснований Шиффа (ШО) в полушариях головного мозга и печени крыс, а также снижением активности ферментов антиоксидантной защиты. Интенсивность ПОЛ в эритроцитах выше, чем в мозге. Вероятно, это связано с тем, что эритроциты подвергаются прямой атаке свободнорадикальных метаболитов, возникающих при окислении гемоглобина нитрит-ионом, в то время как в мозге и печени усиление липопероксидации присходит, скорее всего, за счет другого патогенетического механизма, а именно развивающейся гипоксии и токсического стресса, нарушающих клеточный метаболизм. Сочетанное введение бемитила (50 мг/кг) и цистамина (50 мг/кг) полностью предупреждает сдвиги прооксидантно-антиоксидантного равновесия в эритроцитах, оказывает защитно-восстановительное действие на ферментативную активность в головном мозге и печени крыс. Раздельное введение крысам бемитила или цистамина менее эффективно.

В условиях метгемоглобинемии, вызванной длительной нитритной интоксикацией, выявлена высокая восстановительная эффективность комбинации бемитила с цистамином. Ее применение полностью предупреждает сдвиг прооксидантно-антиоксидантного равновесия в эритроцитах крыс. В то же время в режиме монотерапии бемитил и цистамин не предупреждают в эритроцитах нарушений активности антиоксидантного фермента - супероксиддисмутазы, а цистамин, кроме того, активности каталазы и Г-6-ФДГ.

Комбинация бемитила с цистамином имеет преимущество по сравнению с индивидуальными препаратами и в качестве средств восстановительной коррекции прооксидантно-антиоксидантного равновесия в полушариях головного мозга: терапия с использованием двух препаратов полностью предупреждает изменение количества вторичных продуктов ПОЛ (ШО) и нарушение активности каталазы.

Фосфорорганические соединения (ФОС) обладают выраженным мембранотоксическим действием. Окислительный стресс и его лидирующее проявление — активация ПОЛ - важное и малоисследованное звено в

203 патогенезе тяжелых отравлений ФОС. Продукты ПОЛ оказывают дестабилизирующее действие на структурно-функциональное состояние биологических мембран, что выражается в нарушении их основных физико-химических свойств - проницаемости, вязкости, фазового состояния; изменяют молекулярную структуру мембраны клеток: нарушаются липид-липидные, а также липид-белковые взаимодействия, изменяется активность мембраносвязанных ферментов, в частности Ыа /К АТФазы.

Для уточнения и расширения показаний для применения бемитила в схемах восстановительного лечения после тяжелых острых отравлений ФОС исследовано влияние препарата в комплексе с антидотами - атропином и диэтиксимом и режиме монотерапии на активность церебральной На+/К+ АТФазы, ПОЛ в полушариях головного мозга и миокарде, а также на морфо-функциональные показатели эритроцитов. Показано, что в условиях отравления животных карбофосом и армином антидотное лечение не оказывает позитивного влияния на активность липидзависимого фермента -Иа+/К+ АТФазу и не предупреждает усиления активности процессов ПОЛ в полушариях головного мозга и миокарде на 14-е сутки после отравления.

Лечение отравленных карбофосом (0,9 1Л}5о) или армином (0,9 1Л}50) крыс комбинацией антидотов ФОС (М-холиноблокатор атропин в дозе 10 мг/кг и реактиватор холинэстеразы диэтиксим в дозе 25 мг/кг) несколько повысило активность № /К АТФазы, сниженную в результате повреждающего действия ФОС, но не восстановило активность фермента. Включение в схему лечения бемитила (50 мг/кг 2 раза - на 2-е и 3-й сутки) полностью восстановило активность №+/К+ АТФазы до аналогичных показателей здоровых животных.

В то же время включение в схему лечения бемитила (50 мг/кг) полностью предупреждает падение активности Иа+/К+ АТФазы и увеличение продуктов ПОЛ - диеновых конъюгатов, оснований Шиффа в органах крыс, что свидетельствует об антиоксидантном и мембранопротекторном действии препарата. Кроме того, бемитил в комбинации с атропином, в отличие от

204 одного атропина, предупреждает нарушение флуоресценции мембранного зонда АНС в эритроцитах крыс на 14-е и 21-е сутки после отравления карбофосом.

Острая интоксикация крыс карбофосом или армином сопровождается интенсификацией процессов ПОЛ, что выражается в резком увеличении содержания продуктов ПОЛ на 14-е сутки постинтоксикационного периода. При отравлении карбофосом уровень ДК повысился в полушариях мозга и миокарде на 232,2% (р < 0,05) и 278,4% (р < 0,05) от контроля соответственно, а уровень ШО - на 112,5% (р < 0,05) и на 173,7% (р < 0,05). При отравлении армином содержание ДК в мозге и миокарде повысилось на 133,3% (р < 0,05) и 110,8% (р < 0,05), а содержание ШО - на 162,5% (р < 0,05) и на 86,8% (р < 0,05) от уровня интактных животных соответственно. Применение бемитила в дозе 50 мг/кг в условиях интоксикации карбофосом или армином совместно с комплексом антидотов снижает накопление ДК и ШО в полушариях мозга и миокарде до уровня интактных животных.

У отравленных карбофосом животных выявлено увеличение в крови содержания ретикулоцитов, снижение осмотической резистентности и электрического заряда эритроцитарных мембран, подавление активности антиоксидантной системы и увеличение концентрации первичных и вторичных продуктов ПОЛ, а также снижение активности СОД и каталазы в эритроцитах.

Введение отравленным крысам атропина (10 мг/кг) предупреждает развитие ретикулоцитоза и ограничивает рост уровня ДК, однако антидотная терапия не влияет на антиоксидантную систему эритрона, ПОЛ, осмотическую резистентность и электрический заряд мембран. Включение в схему лечения бемитила (50 мг/кг) восстанавливает большинство нарушенных показателей, в том числе содержание ретикулоцитов, активность СОД, каталазы, Гл-6-ФДГ, осмотическую резистентность и электрический заряд эритроцитарных мембран до уровня интактных животных.

Таким образом, включение бемитила в схему лечения отравлений карбофосом предупреждает развитие основных токсических эффектов ФОС: активацию ПОЛ, изменение активности ферментов антиоксидантной системы организма и, соответственно, модификацию важнейших физико-химических свойств мембран - проницаемость, вязкость, фазовое состояние. Оптимальные физико-химические свойства бемитила (коэффициент распределения между полярной и неполярной фазами) обеспечивают его уникальные фармакокинетические параметры и, соответственно, взаимодействие с водорастворимыми и липофильными свободными радикалами. Избирательная кумуляция препарата в эритроцитах при курсовом введении предупреждает деструкцию липидного бислоя, повышение его микровязкости, предотвращает развитие дезорганизации белкового состава, нарушение функциональной активности ферментов и функционального состояния мембран-рецепторного комплекса в эритроне.

В настоящее время UNEP (United Nations Environmental Project) особо выделяет группу из 12 соединений и групп соединений, на которые следует обращать первоочередное внимание. В состав этой «грязной дюжины» входят и полихлорированные бифенилы (ПХБ, Юфит С.С., 2001). В условиях длительной сочетанной интоксикации ПХБ и этанолом на 30-е сутки морфогистохимический анализ печени крыс показал развитие хронического гепатологического процесса, основными проявлениями которого являются фиброз и цирроз печени. Биохимическими показателями, отражающими метаболизм и функцию печени в нормальных и патологических условиях, является уровень печеночных ферментов в сыворотке крови, повышенный при нарушениях функции печени.

Проведено сравнительное изучение влияния бемитила и силимарина на уровень печеночных ферментов, процессы ПОЛ и функционирование в гепатоцитах ключевых ферментов антиокислительной системы цикла трикарбоновых кислот, пентозофосфатного цикла и ферментов синтеза мочевины в условиях сочетанной интоксикации ПХБ и этанолом.

Судя по существенному снижению повышенного в результате интоксикации уровня активности уроканиназы (на 18,4%; р < 0,05), активности трансминаз - АлАТ (в 2,2 раза; р<0,05), АсАТ (в 2,1 раза; р<0,05), ЛДГ (в 1,3 раза; р<0,05), КФ (в 1,6 раз; р<0,05), бемитил в отличие от силимарина препятствует развитию цитолитического синдрома. Так же как и силимарин, бемитил не изменяет активность ЩФ, что свидетельствует об отсутствии его влияния на холестатический эффект токсикантов. Введение бемитила отравленным животным сопровождалось выраженным восстановительным эффектом, превосходящим эффект гепатопротектора силимарина на все исследуемые показатели: ДК, ТБК-РП, каталазу, Гл-6-ФДГ.

Длительная сочетанная интоксикация ПХБ и этанолом сопровождалась существенным подавлением каталитической активности ферментов цикла трикарбоновых кислот, что обусловлено органными особенностями метаболизма печени - преобладанием тканевого дыхания над гликолизом. Этот факт позволяет предположить, что одним из важных патогенетических механизмов поражений печени в условиях сочетанной интоксикации ПХБ и этанолом является биоэнергетическая (тканевая) гипоксия. Данное предположение подтверждается результатами исследования: гепатопротектор силимарин не изменял активность СДГ и МДГ в гепатоцитах, а антигипоксант бемитил статистически значимо увеличивал активность исследованных ферментов ЦТК у отравленных животных. Кроме того, бемитил в отличие от силимарина предупреждает снижение уровня митохондриального белка в митохондриях. Применение бемитила также восстанавливало активность ключевых ферментов мочевинообразования -карбомоилфосфатсинтетазы и аргиназы.

Анализ результатов проведенного исследования позволяет констатировать, что ПОЛ является общим механизмом нарушения метаболических процессов и состояния биологических мембран при экспериментальной интоксикации нитритами, ФОС, ПХБ и этанолом.

Полученные результаты, доказывающие и уточняющие участие процессов ПОЛ в патогенезе интоксикаций изученными химическими веществами, открывают перспективное направление в фармакотерапии отравлений с помощью ингибиторов ПОЛ - производных бензимидазола.

Основным путем метаболизма производных бензимидазола является их биотрансформация цитохром-Р450-зависимыми монооксигеназами печени и других тканей (Zimmermann К. et al., 2008; Asteinza J. et al., 2000). При этом одно и то же соединение, в биотрансформации которого нередко принимают участие различные изоформы цитохрома Р450, в зависимости от режима введения, дозы, способно как ингибировать, так и индуцировать цитохром Р450. Детальный анализ влияния бемитила на монооксигенирование различных модельных субстратов представляет несомненный интерес, поскольку позволяет не только косвенно определить спектр участвующих в биотрансформации препарата изоформ, но и прогнозировать характер его фармакокинетической интерференции с другими, метаболизирующимися цитохром-Р450-зависимыми монооксигеназами препаратами.

Бемитил при введении крысам внутрь в эффективной дозе 50 мг/кг, как при однократном, так и при курсовом введении, проявил свойства индуктора цитохрома Р450 смешаного типа. Максимальный индуцирующий эффект для большинства изученных монооксигеназных активностей прослеживается при однократном введении препарата. Судя по характеру изменения монооксигеназных активностей, бемитил преимущественно индуцирует Ah-рецептор-зависимые изоформы цитохрома Р450 - CYP1А1/2 (так называемые «метилхолантрен-индуцируемые»), в меньшей степени влияя на так называемые «фенобарбиталовые изоформы» подсемейства CYP2B и практически не оказывает влияния на «короткоживущую» изоформу CYP2E1. Эти данные согласуются с многочисленными исследованиями, свидетельствующими об CYPlAl/2-индуцирующем влиянии производных бензимидазола (омепразола, тиабендазола, пимозида, оксфендазола, астемизола, фенбендазола) и участии этих изоформ, наряду с CYP2C и

CYP3A, в метаболизме самих бензимидазолов. In vitro, при использовании митоген-стимулированных лимфоцитов человека, бемитил, в зависимости от концентрации, также вызывал индукцию ЭРОД- и БРОД-активностей, что косвенно свидетельствует о сходных путях биотрансформации самого бемитила у грызунов и человека.

В подтверждение свойств индуктора цитохрома Р450 смешанного типа бемитил увеличивал уровень цитохрома Р450 в микросомах и монооксигеназные активности, сопряженные как с Ah-рецептор-зависимыми, так и с Ah-рецептор-независимыми изоформами, за исключением анилин-р-гидроксилазной активности, которая оставалась неизменной. Индуцирующий эффект в отношении монооксигеназных активностей, реализуемых Ah-рецептор-зависимыми изоформами (4-нитроанизол-О-деметилазная, 2,5-дифенилоксазол-р-гидроксилазная, ЭРОД-активность), более выражен и максимален при однократном введении препарата. In vitro бемитил в высоких концентрациях увеличивает экспрессию ЭРОД-активности в лимфоцитах, а в низких — БРОД-активности.

Для обеспечения эффективной фармакотерапии экстремальных состояний перспективным является создание системы фармакологических комплексов, состоящих из базисного средства, чье позитивное влияние на работоспособность наблюдается при максимально широком спектре неблагоприятных для профессиональной деятельности условий, и дополнительных препаратов, избирательно увеличивающих работоспособность в конкретной экстремальной ситуации. Подобный комплекс должен обладать психостимулирующим действием без развития истощения, анаболическим и иммуностимулирующим действием на фоне достаточного антиоксидантного, витаминного и минерального обеспечения.

В качестве базовых препаратов наиболее перспективными являются актопротекторы - производные бензимидазола. При использовании актопротекторов - производных бензимидазола в комплексной терапии необходимо учитывать их способность модифицировать активность цитохром-Р450-зависимых монооксигеназ, изменять фармакокинетику и, соответственно, динамику развития фармакологических эффектов совместно применяемых лекарственных препаратов.

Сравнивая фармакокинетические параметры в плазме крови крыс при различных путях введения бемитила, следует отметить, что значения константы элиминации при пероральном введении препарата превышает ке1 при внутривенном введении препарата. При пероральном введении бемитила крысам (100 мг/кг) бемитил всасывается из желудочно-кишечного тракта с высокой скоростью (кабс пла3ма = 1,75 ч"1), период полуабсорбции - 0,395 ч, время достижения максимальной концентрации -1ч, максимальная концентрация в плазме крови 1,9±0,15 мкг/мл. Увеличение ке] бемитила при пероральном введении может быть обусловлено двумя причинами: выраженной био-трансформацией в кишечной стенке и более интенсивным распределением препарата в органах и тканях.

Экспериментальные данные, полученные в результате проведенного исследования, обосновывают необходимость учета различий фармакокинетических параметров исследуемых препаратов, рассчитанных по кинетическим кривым в плазме и цельной крови, в случае кумуляции препарата и/или его метаболитов в эритроцитах.

Для производных бензимидазола, и в частности меркаптобензимидазолов, характерно накопление препаратов в эритроцитах крови (Навасардян М.Р., 1999; Черненко И.В., 1999). Бемитил также накапливается в эритроцитах с высокой скоростью: концентрация его в эритроцитах через час после введения в 1,8 раза выше, чем в плазме крови. При курсовом введении бемитила концентрация препарата в эритроцитах повышается в 2,3 раза по сравнению с однократным введением. В связи с кумуляцией бемитила в эритроцитах его концентрация в цельной крови выше, чем в плазме, что соответственно модифицирует фармакокинетические параметры. При курсовом введении бемитила крысам концентрация препарата в цельной крови повышается в 1,8 раза.

Проведенное исследование позволяет сделать вывод, что повышение концентрации бемитила в цельной крови при курсовом введении происходит почти исключительно за счет избирательного накопления препарата в эритроцитах.

Исследование кинетики бемитила в печени крыс подтверждает высокую экстракционную способность ткани к препарату, что характерно для лекарственных препаратов - производных бензимидазола (Marriner S. et al., 1986; Lowenthal D.T. et al., 1988; Walsh T.J. et al., 1989; Kitzman J.V. et al., 1990; Oukessou M. et al., 1991; Dareer S.M. et al., 1993). Имидазолы и, в частности, бензимидазолы экскретируются с желчью и подвергаются энтерогепатической циркуляции, что увеличивает период их пребывания в организме (Duhm В. et al., 1974; Braithwaite P.A. et al., 1982; Gottshall D.W. et al., 1990; Hennessy D.R. et al., 1992).

При однократном и курсовом пероральном введении бемитила препарат обнаруживается во всех исследованных органах и тканях, причем прослеживается значительная гетерогенность в распределении бемитила. Печень является основным органом, накапливающим бемитил при однократном введении. При курсовом введении препарата коэффициенты распределения для всех изученных органов и тканей (мозг, скелетная мускулатура, сердце, почки, легкие, жировая ткань, селезенка, семенники) значительно не возрастают или уменьшаются. Бемитил довольно быстро проникает через гематоэнцефалический барьер (кабс = 1,814 ч"1). Через 30 мин после однократного введения уровень препарата в мозге в 2,14 раза выше одномоментной концентрации в крови. Понижение концентрации бемитила в печени при курсовом введении не является следствием перераспределения его между другими органами и тканями, а обусловлено усилением элиминации препарата из ткани печени вследствие возрастания интенсивности процессов биотрансформации, что характерно для индукторов цитохром-Р450-зависимых монооксигеназ печени и других тканей (Dilger К. et al., 1999; Hartmann M. et al., 1999; Negishi M., Hokakosi P., 2000).

Таким образом, бемитил интенсивно переходит в органы и ткани из крови при однократном и курсовом применении. Исследование распределения бемитила при курсовом введении показало, что кровь обладает способностью кумулировать препарат преимущественно за счет его накопления в эритроцитах.

Анализ фармакокинетики бромитила (комбинированной лекарственной формы, содержащей бромантан и бемитил) позволил выявить модифицирующее влияние интерференции на всех этапах прохождения комплексного препарата в организме: всасывание, распределение, биотрансформация и выведение.

Фаза абсорбции бромантана, в случае применения бромитила, в 3,1 раза продолжительнее (ti/2a6c бромитнл= 0,286 ч) фазы всасывания бромантана из раствора в ПЭГ-400 (t]/2a6c бромантан = 0,091 ч), что обусловлено меньшей скоростью всасывания. Соответственно время достижения максимальной концентрации бромантана из бромитила продолжительнее, чем tmax бромантана, в случае применения раствора препарата в ПЭГ-400. Максимальная концентрация бромантана в крови, в случае применения бромитила (Стах бромитил = 0,311 мкг/мл; 100 мг/кг), сравнима с максимальной концентрацией бромантана в крови при введении раствора бромантана в ПЭГ-400 (100 мг/кг). Скорость всасывания бемитила, в случае применения бромитила, увеличивается по сравнению с кабс водного раствора препарата; время достижения максимальной концентрации не изменяется, однако максимальная концентрация бемитила в крови, в случае перорального введения водного раствора бемитила (100 мг/кг), в 2,4 раза выше максимальной концентрации бемитила, достигаемой при введении бромитила.

Модифицирующее влияние интерференции на фармакокинетические параметры бемитила с аналогичной тенденцией описано Г.Г. Незнамовым с сотрудниками (Незнамов Г.Г. и соавт., 1993). Отмечено снижение равновесной концентрации бемитила в крови пациентов при применении бемитила в комбинации с феназепамом (С88, при применении бемитила 2,46±0,58 мкг/мл, при комбинированной терапии — 1,75±0,40 мкг/мл). Соответственно изменяется степень выраженности фармакологических эффектов бемитила, происходит уменьшение выраженности психостимулирующего и связанного с ним астенического действия препарата.

При применении бромитила интенсивность распределения бромантана и бемитила изменяется по сравнению с раздельным применением препаратов. Объем распределения бемитила, в случае применения бромитила, увеличивается по сравнению с V] водного раствора препарата в 3,2 раза. Объем распределения бромантана в случае применения бромитила в 1,4 раза ниже объема распределения бромантана при применении раствора препарата в ПЭГ-400.

В метаболизме ксенобиотиков непосредственное участие принимают в основном монооксигеназы микросом печени с участием цитохрома Р450 в качестве терминальной оксидазы. Этот гидроксилирующий комплекс занимает одно из центральных мест в общем процессе детоксикации. Скорость метаболизма лекарственных препаратов является наиболее важным фактором, влияющим на интенсивность и длительность их действия. Изучение процессов стимулирования и ингибирования гидроксилирующей системы ксенобиотиками необходимо в клинической практике при длительном лечении пациентов комплексом лекарственных средств.

Бромантан является выраженным индуктором цитохром-Р450-зависимой монооксигеназной системы печени (Хлопушина Т.Г. и соавт., 1991, 1992; Сергеева С.А., 1993). Влияние производных бензимидазола на цитохром-Р450-зависимый метаболизм ксенобиотиков зависит от дозы, лекарственной формы и времени, прошедшего с момента введения, а также способа введения (Ковалев И.Е. и соавт., 1994; Лазарева Д.Н, Алехин Е.К., 1985).

Сочетанное применение лекарственных препаратов, оказывающих выраженное влияние на цитохром-Р450-зависимую монооксигеназную систему печени, безусловно вносит свой вклад в модификацию фармако- и токсикокинетики, а также, соответственно, динамики развития фармакологических и токсикологических эффектов бромитила по сравнению с раздельным применением препаратов. При изучении острой токсичности у крыс при пероральном введении установлено: LD50 для бромантаиа - 5640 (4900-6400) мг/кг; ЬО50Для бемитила - 581,48 (350,17-965,57) мг/кг; ЬО50Для бромитила - 1750,30 (1463,07-2093,92) мг/кг.

Константа элиминации бемитила уменьшается в случае применения бромитила, по сравнению с раздельным его применением, в' 1,14 раза. Константа элиминации бромантана увеличивается в случае применения бромитила в 1,33 раза по сравнению с раздельным его применением.

Анализ влияния феномена фармакокинетической интерференции па фармакокинетические параметры бромантана и бемитила при их совместном применении в единой таблетированной лекарственной форме (бромитил) позволил выявить модифицирующее влияние интерференции на всех этапах прохождения исследуемых лекарственных препаратов в организме экспериментальных животных: всасывание, распределение по органам и тканям, биотрансформация и выведение.

Анализ фармакокинетики пирабела (комбинированной лекарственной формы, содержащей бемитил и пирацетам) позволил выявить модифицирующее влияние интерференции на всех этапах прохождения комплексного препарата в организме: всасывания, распределения, биотрансформации и выведения. Фаза абсорбции пирацетама- в случае применения пирабела продолжительнее (ti/2aoc пирабел = 0,271 ч) фазы всасывания пирацетама при раздельном его применении (ti/2aoc пирацетам = 0,193 ч), что обусловлено меньшей скоростью всасывания. Время достижения максимальной концентрации не изменилось, однако Стах при раздельном применении пирацетама выше. Площадь под фармакокинетической кривой пирацетама в случае применения пирабела в 1,5 раза меньше, чем AUC пирацетама при раздельном его применении в той же дозе.

При пероральном применении бемитил быстро всасывается из желудочно-кишечного тракта (кабс = 1,655 ч"1; ti/2a6c = 0,419 ч), достигая максимальной концентрации через час после введения; характер элиминации из крови биэкспоненциальный. Высокое значение объема распределения подтверждает интенсивность распределения бемитила по органам и тканям. Пирацетам после перорального введения всасывается из желудочно-кишечного тракта с высокой скоростью (ка6с = 3,589 ч"1; ti/2a6c = 0,193 ч), время достижения максимальной концентрации — 1 час; характер элиминации из крови биэкспоненциальный. Высокое значение объема распределения (Vi = 43,832 л) свидетельствует об интенсивном распределении пирацетама в органы и ткани из крови.

Скорость всасывания бемитила в случае применения пирабела уменьшается, время достижения максимальной концентрации увеличивается по сравнению с аналогичными фармакокинетическими параметрами бемитила при раздельном применении. Однако Стах бемитила в крови в случае введения пирабела выше максимальной концентрации бемитила при раздельном его применении в той же дозе. AUC бемитила при применении пирабела (а соответственно и биодоступность) в 2 раза ниже, чем AUC бемитила при раздельном его применении в той же дозе.

Объем распределения бемитила в случае применения пирабела уменьшается по сравнению с Vi таблеток бемитила в 1,8 раза. При применении пирабела интенсивность распределения пирацетама практически не отличается от аналогичных параметров таблеток пирацетама.

Рассмотренные в настоящем исследовании некоторые аспекты фармакокинетической интерференции могут, наряду с теоретическим, в ряде случаев представлять и практический интерес, поскольку для обеспечения эффективной фармакотерапии экстремальных состояний перспективной является комбинированная фармакотерапия.

Влияние включения бемитила в комплексную терапию нарушений функций печени исследовали у 81 ликвидатора последствий аварии на Чернобыльской АЭС с хроническими заболеваниями гепатобилиарной системы.

В отдаленный период после повреждающего радиационного воздействия (через 20 лет после катастрофы) у ликвидаторов был обнаружен дисбаланс процессов свободнорадикального окисления, выражающийся в гиперпродукции свободных радикалов кислорода, дефиците ферментативных и низкомолекулярных звеньев антиоксидантной защиты и накоплении продуктов ПОЛ.

Применение бемитила позволило достичь уменьшения проявлений тканевой гипоксии, оптимизировать функционирование антиоксидантной системы и предотвратить активацию процессов липопероксидации, что положительно отразилось на печеночной функции.

На 14-й день лечения отмечено снижение уровня билирубина плазмы, активности аланиновой и аспарагиновой трансаминаз, гистидазы и уроканиназы, а-сериндегидратазы и а-треониндегидратазы. Значимое улучшение функции печени (снижение >25% от исходных значений) в процессе лечения достигнуто у 79,6% пациентов, принимающих бемитил.

В результате лечения отмечено уменьшение общей слабости и утомляемости пациентов, а также тяжести в правом подреберье. Клиническое улучшение было более выражено в группе пациентов, получавших бемитил, по сравнению со стандартной гепатопротекторной терапией.

Следует отметить, что добавление бемитила в комплексную терапию нарушений функций печени не приводило к достоверным изменениям печеночного кровотока, что объясняет положительную динамику клинических и лабораторных показателей главным образом его метаболическим действием.

Таким образом, включение бемитила в комплекс реабилитационных мероприятий ликвидаторов аварии на Чернобыльской АЭС в дозе 750 мг в сутки приводило к оптимизации функционирования антиоксидантной системы и предотвращению активации процессов липопероксидации. У пациентов улучшалось функциональное состояние печени и снижались проявления цитолитического синдрома. Препарат бемитил в суточной дозе 750 мг может быть рекомендован для использования пациентами, страдающими хроническими заболеваниями гепатобилиарной системы, с целью дополнительной коррекции антиоксидантной и антигипоксической защитной систем организма.

Результаты проведенных исследований свидетельствуют о том, что в условиях химической патологии, сопровождающейся развитием гипоксии -острой и хронической нитритной интоксикации, остром отравлении ФОС (карбофосом и армином) - актопротектор бемитил проявляет высокую защитно-восстановительную эффективность. Показано, что в основе механизма защитного влияния на периферический отдел эритрона лежат три основных механизма: стимулирующее действие препарата на эндогенные антиоксидантные системы; антирадикальный эффект; мембраностабилизирующее действие.

Бемитил также является эффективным средством восстановительного лечения после тяжелых острых отравлений ФОС. Бемитил в качестве дополнительного к антидотам средства лечения может быть рекомендован для клинической апробации при острых и хронических интоксикациях некоторыми метгемоглобинообразователями (нитритом натрия).

Введение крысам смеси ПХБ (совтола) в сочетании с алкоголизацией приводит к развитию фиброза и цирроза печени, что подтверждается морфогистохимическими и биохимическими показателями. В условиях экспериментального цирроза печени, вызванного смесью полихлорированных бифенилов и этанола, наблюдается выраженная перестройка метаболических процессов в гепатоцитах, что проявляется

217 подавлением активности ферментов энергетического метаболизма - СДГ, МДГ и ключевых ферментов мочевинообразования — карбамоилфосфатсинтетазы и аргиназы. В печени активируется перекисное окисление липидов, что проявляется увеличением количества первичных и вторичных процессов ПОЛ, снижается активность каталазы и повышается активность глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы в гепатоцитах. Последнее свидетельствует об ускорении утилизации углеводов по пентозофосфатному пути.

Экспериментальная терапия с использованием гепатопротектора силимарина малоэффективна. Применение бемитила способствует восстановлению активности СДГ, МДГ, ферментов синтеза мочевины (аргиназы и КФС-1), стабилизации процессов ПОЛ, активности каталазы, а также нормализации скорости использования Г-6-Ф через пентозофосфатный шунт. В связи с этим бемитил может быть рекомендован для дальнейших доклинических и клинических исследований в качестве перспективного препарата в составе комплексной терапии для коррекции метаболических нарушений при тяжелой хронической патологии печени.

26 апреля 1986 года на четвертом энергоблоке Чернобыльской атомной электростанции, находящейся на территории Украины, произошла авария, следствием которой стала крупнейшая в XX веке техногенная радиационная катастрофа. Самыми известными трагедиями, помимо Чернобыльской, являются пожар в реакторе Виндскейл (1957, Великобритания), расплавление реактора в ТриМайл Айленд, Харрисбург (1979, США), и авария в Токай Мура (1999, Япония).

Степень и сила воздействия повреждающих факторов, действовавших на работающих в опасной зоне людей, зависела прежде всего от времени присутствия в опасной зоне, удаленности от разрушенного энергоблока станции, полученной дозы облучения, характера выполняемой работы, а также правильности использования средств защиты. Более 40% ликвидаторов находились в зоне радиационного воздействия дольше трех месяцев, около

218

10% ликвидаторов работали меньше месяца, остальные 50% провели в зоне аварии от одного до двух месяцев, еще примерно столько же привлекались к работам по ликвидации последствий от двух до трех месяцев. Известно, что в 1986-1989 гг. около 30—40% ликвидаторов проводили работы или проживали в 30-кило-метровой зоне ЧАЭС, остальные работали и проживали на расстоянии от 30 до 50 км (Национальный регистр, 2001).

Ликвидаторы последствий Чернобыльской аварии представляют собой типичный контингент лиц, перенесших комбинированное патогенное воздействие. Данные многочисленных исследований (Панченко O.A., Табачников С.И., Кутько И.И., 1996; Гуськова А.К., Гусев И.А., 1999; Иванов В.К., Цыб А.Ф., Иванов С.И., 1999) подтверждают наличие нарушений здоровья, связанных с участием в аварийных работах, и необходимость отнесения ликвидаторов к группе пострадавших лиц. По мнению большинства исследователей, к основным факторам, приведшим к развитию патологических нарушений у ликвидаторов, относятся: радиационное воздействие, стрессирующие воздействия, недостаток или отсутствие своевременных психореабилитационных и лечебных мероприятий, а также наличие органической и психосоматической патологии, не связанной с фактом участия в аварийных работах (наличие заболеваний до аварийных работ, генетическая предрасположенность, наличие вредных привычек и др.).

В отдаленный период после повреждающего радиационного воздействия (более чем через 20 лет после катастрофы) у ликвидаторов был обнаружен дисбаланс процессов свободнорадикального окисления, выражающийся в гиперпродукции свободных радикалов кислорода, дефиците ферментативных и низкомолекулярных звеньев антиоксидантной защиты и накоплении продуктов ПОЛ.

Применение бемитила позволило достичь уменьшения проявлений тканевой гипоксии, оптимизировать функционирование антиоксидантной системы и предотвратить активацию процессов липопероксидации, что положительно отразилось на печеночной функции.

Таким образом, комплекс проведенных научно-исследовательских работ позволил обосновать актуальность коррекции ПОЛ, общего механизма токсического действия отравляющих веществ и ионизирующего излучения актопротекторами — производными бензимидазола. Показано значение изменений ПОЛ как общего звена нарушений биологических мембран, биоэнергетики и метаболизма, определяющих тяжесть постинтоксикационных нарушений в органах-мишенях.

Многофакторный анализ механизмов реализации основных фармакологических эффектов бемитила позволил сформулировать требования к «идеальному» антигипоксанту. «Идеальный» антигипоксант должен обладать комплексом свойств: во-первых, иметь коэффициент распределения между полярной и неполярной фазами, соответствующий оптимальному взаимодействию с водорастворимыми и липофильпыми свободными радикалами; во-вторых, эффективно взаимодействовать с радикалами без образования активных радикальных форм ингибитора, способных пролонгировать ПОЛ; в-третьих, характеризоваться достаточно высокой подвижностью в мембранном бислое для обеспечения взаимодействия молекул антиоксидантов с центрами радикалообразования.

Фармакологическая коррекция неспецифических механизмов патогенеза, возникающих в организме при различных видах интоксикаций, вносит существенный вклад в повышение эффективности комплексной терапии токсических поражений. Так, включение антиоксидантов с мембраностабилизирующими свойствами в комплексную реабилитацию пациентов из числа участников ликвидации последствий аварии ЧАЭС патогенетически обосновано и является эффективным методом коррекции нарушений ПОЛ.