Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Нейроиммунные механизмы в развитии алкоголизма (экспериментально-клиническое исследование)

Р Г Б ОД

рой^с^ лплдшаш иедицннсзшх наук иаучна-иссшшлтельст! институт обцея патологии и патояшоеогин

На лралах рукошгси

ДАЕЦДСВЛ Татьяна Висгоронна

нейроншунные 1кха1п!3:ш в развитии алюгоеша (исспэрпянтально-клиническое исследование)

14. 00.16 - патологическая физиология

Автореферат диссертации на сокскашж ученой степени • дзктора медицинских наук

Ивсюза. - 1994

Работа выполнена в Научно-исследовательском институте обшей патологии и патофизиологии Российской академии медицинских наук

Научный консультант доктор медицинских наук, профессор Е А. Евсеев

Официальные оппоненты доктор медицинских наук, профессор Б. М. Гехт доктор медицинских наук, профессор А. К. Василенко доктор медицинских наук, профессор А. М. Майский

Ведущее учреадение - Государственный научный центр наркологии Министерства здравоохранения Российской Федерации

Автореферат разослан " 1994 г.

К&кгяуа

Защита диссертации состоится " " 1994 г. в часов на заседании Специализированного совета шифр Д 001.03.01 при Научно-исследовательском институте общей патологии и патофизиологии РАЫН (125315, Москва, Балтийская ул., 8).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института,

Ученый секретарь

Специализированного совета

кандидат медицинских наук Л Н. Скуратовская

ОБШАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТ&

Астуальность проблемы. Основные разделы настскгеего исследования .выполнялись и имели финансовое обеспечение в рамках государственнной научно-технической программы "Национальные приоритеты б медицине и здравоохранении" направление С5 "Наркомании, токсикомании, алкоголизм".

Актуальность проблемы, обусловлена прежде всего зкачитель- -ной распространенностью алкоголизма, а такта отсутствием в настоящее время завершенной концепции "его патогенеза, которая 'могла бы послукить базой для разработки эффективных методов терапии заболевания, остающегося, в сугкссти, неизлечимым и сегодня. В последние годы большое внимание стало уделяться фундаментальным исследованиям патогенеза анкоголизма (И. П. Анохина и др. , 1975-1994; Л Ф. Ланченко и др. , 1982-1994; & М. Островский и др., 1976-1690; Ю. В. Буров и др., 1976-1990; А. Е. Успенский и др., 1983-1990; И. П. Ап^арин и др. , 1989-1992; А. Я Майский и др., 1983-1992; К В. Судаков и др:1986-1992; ТаЬакоГГ et а1., 1975-1987; Бегг е1 а1., 1880-1985 и др.) Особенностью нового подхода к изучению проблем патогенеза алкоголизма явилось представление об алкоголизме как о нейроимму-нопатояогическом синдроме (Г. Е Крылавовсккй, КА.Езсеев, 1986,1980. Правомерность такого подхода обусловлена, с одной стороны, общепризнанной ролью в патогенезе алкоголизма стойких нарушений дофаминовой.и серотониновой нейронедзации (И. П. Анохина и др., 1975-1993; И. К Буров и др. , 1976-1550; ТаЬакоГГ еЬ а1., 1975-1987), с другой стороны, взаимосвязью этих нарушений с дисрегуляцией функций иммунной систеш, сттулируемой дофамином и угнетаемой серотонином (Л. Ф. Дешзйно, Р. К1 Яльшенок.,

1983,1993). До настоящего времени иммунологические нарушения, выявляемые кг: в клинике, так и в эксперименте при длительной алкоголизации рассматривались лишь как результат непосредственного токсического действия алкоголя на клетки иммунной системы. фи таком подходе остаются без учета данные о взаимосвязи и взаимодействии нервной и иммунной систем, опосредуемых, с одной стороны, нейромедиаторами, нейрогомонами и нейропептида-ми, а с другое стороны, лиыфокинами (интерлейкины, интерферо-ны, лимфопеятиды) и антителами к нейромедиаторам (JL А. Захарова, Р. Е Петров, 1990; А. А. Михайлова и др., 1985-1992; А. В. Василенко, 1989; В. А.Евсеев и др., 1984). Сегодня уже имеются достаточные основания считать, что иммунная система активно участвует в .механизмах развития алкоголизма. В связи с этим представлялось интересным исследовать иммунологические проявления алкоголизма в трех основных аспектах:- 1) алкоголизм и механизмы иг^натгической защиты; 2) алкоголизм и вторичные иммунодефшдашке состояния; 3) нейроиммунопатология алкоголизма. Изучение этих аспектов алкоголизма позволяет глубже понять механизмы (^армирования основных проявлений алкоголизма (алкогольная мотивация, зависимость от алкоголя, абстинентный синдром) и явиться основой для разработки методов иммунотерапии и иммунопрофилсгггики алкоголизма.

Дель работы п задачи исследования. .Дедыо работы являлось изучение pon нейроимыунных механизмов в формировании патологической застимости от алкоголя при длительном приеме алкоголя и алкога&гзме.

В задачи работы входило:

ОБЯАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.

Астуальность проблемы. Основные разделы настоящего исследования выполнялись и имели финансовое обеспечение в рамках государственной научно-технической прсграшы "Национальные приоритеты б медицине и здравоохранении" направление 05 "Наркомании, токсикомании, алкоголизм".

Актуальность проблемы, обусловлена прелде всего зкачитель- -ной распространенностью алкоголизма, а тают отсутствием в настоящее время завершенной концепции"его патогенеза, которая могла бы послужить базой для разработки эффективных методов терапии заболевания, остающегося, в сущности, неизлечимым и сегодня. В последние годы большое внимание стало уделяться фундаментальным исследованиям патогенеза алкоголизма (Л И Анохина и др. , 1975-1994; Л Ф. Панченгаэ и др. , 1982-1994; ¡3. М. Островский и др., 1976-1990; Ю. В. Буров и др., 1976-1990; А. Е. Успенский и др. , 1983-1990; Е П. Апарин и др. , 1989-1992; А. И. Майе гай и др., 1983-1992; К В. Судаков и др:1986-1992; ТаЬакоГГ et а1., 1975-1987; Бегг еЬ а1., 1980-1985 и др.) Особенностью нового подхода к изучению проблемы патогенеза алкоголизма явилось представление об алкоголизме как о нейроимму-нопатологическом синдроме (Г. Н. КрылашвскиЗ, В. А. Евсеев, 1986,198У). Правомерность такого подхода обусловлена, с одной стороны, общепризнанной ролью в патогенезе алкоголизма стойких нарушений дофаминовой.и серотошшовой неЯронэд—щли (II П. Анохина и др., -1975-1993; ¡0. В. Буров и др. . 1976-1850; ТаЬакоГГ еЬ а1., 1975-1987), с другой стороны, взалшевязыэ этих нарушений с диерегуляцией функций иммунной систеш, стиууаируемой дофамином и угнетаемой серотонином (1Ф. Девойно, Р. Ю. Ильюченок.,

1983,1993). До настоящего времени иммунологические нарупения, выявляемые кгх в клинике, так и в эксперименте при длительной алкоголизацгэ рассматривались лишь как результат непосредственного токсического действия алкоголя на клетки иммунной система Бри таим подходе остаются без учета данные о взаимосвязи и взаимодействии нервной и иммунной систем, опосредуемых, с одной стороны, нейромедааторами, нейрогомонами и нейропептида-ми, а с другой стороны, лимфокинами (интерлейкины, интерфэро-ны, лиыфопепящы) и антителами к нейромедиаторам (ЛА. Захарова, Р. В. Петров, 1990; А. А. Михайлова и др., 1985-1992; А. В. Василенко, 1989; В. А. Евсеев и др., 1984). Сегодня уже имеются достаточные основания считать, что иммунная система активно участвует в .механизмах развития алкоголизма. В связи с этим представлялось интересным исследовать иммунологические проявления алкоголизма в трех основных аспектах: 1) алкоголизм и механизмы км* дологической защиты; 2) алкоголизм и вторичные иммунодефицютые состояния; 3) нейроиымунопатология алкоголизма. Изучение этих: аспектоз алкоголизма позволяет глубже понять механизмы формирования основных проявлений алкоголизма (алкогольная мотивация, зависимость от алкоголя, абстинентный синдром) и явиться основой для разработки методов иммунотерапии и иммунопрофилактики алкоголизма.

Цель рабагы п задачи исследования. .Целью работы являлось изучение рола нейроиммунных механизмов в формирован™ патологической завзлшости от алкоголя при длительном приеме алкоголя и алкоголизме.

В задачи работы входило:

1. изучить в динамике особенности изменения им^нореак-■ивности у животных при алкоголизации в связи с генетически изличной предрасположенностью к потреблению алкогает;

2. изучить в условиях клиники состояние иммунной системы

г больных при контрастных формах развития алкоголизма: непрерывная - с ремиссиями менее 1 года и приступообразнзя - с ре-иссиями'до 5 лет;

3. изучить роль антител к нейромэдкаторам (серотошшу и зтехоламинам) в форкшровании алкогольной мотивавя у живот-:ых;

4. изучить влияние активной и пассивной иммувизатш кснъ->гатами серотонин-бэлок, норадреналин-белок и дофа»;ш-белок на отребление алкоголя животными различных генетических линий;

5. изучить•влияние различных нейротропных иммунокодулиру-щис препаратов (спленопентия, фрагменты субстанции Р, витамин

) на развитие алкогольного иммунодефицита и .пристрастия к лкоголю;

6. изучить в исследованиях на больных алкоголизмом эффектность применения триады из малых доз галоперидола, феназе-ама и оксибутирата лития для лечения алкоголизма.

Научная новизна. Результаты работы позволили впервые выя-ить и обосновать нейрогенную природу вторичного иммунодефи-гсгного' состояния, развиващзгося при длительном приеме алко-эля и алкоголизме, а также показать длительное существование »¡мунодефицита после прекращения приема алкоголя. Епервые по-ззано -наличие взаимосвязи меиду генотипом животин и иммуно-эгическими нарушениями при хронической алкогольной интоксика-

ции. Пэлучепы данные, свидетельствующие о различиях в проявлении иммунодефицита у сольных хроническим алкоголизмом в зависимости от варианта течения заболевания, что подтверждается современными данными, утверждающими ■ патогенетическую гетерогенность алкоголизма и находящую свое отражение на нейрохимическом уровне. Впервые при длительном приеме алкоголя и алкоголизме в сшоротке крови обнаружены антитела к нейромедиато-рам - серотогану и катехоламинам. Впервые проведен анализ роли антител к нейромедиаторам при экспериментальном алкоголизме. Установлена взаимосвязь между алкогольной мотивацией и образованием аутоаигител к серотонину и катехоламинам, показана возможность изменения связанного с потреблением алкоголя поведения животных при активной и пассивной иммунизации конъюгатами нейромедиаторов с белковым носителем. Намечены пути применения антител к серотонину с целью подавления патологического влечения к алкогагэ. Исследован большой набор нейротропных иммуно-модуляторов для ликвидации иммунодефицитного состояния при хронической алкогольной интоксикации и алкоголизме с учетом их влияния на ЩЮ. Впервые установлено, что комплексная патогенетическая терапия (КИТ) по Г. К Крыжановскому (сочетанное применение малых юз галоперидола, феназепама и оксибутирата лития) больных алкоголизмом приводит к нормализации их психического и иммунологического статуса.

Теоретическая значимость работы. Результаты работы обосновывают существенную роль механизмов нарушений регуляции взаимодействия нервной и иммунной систем в развитии алкоголизма, прежде всего активное участие иммунной системы (антитела к

нейромедиаторам) в регуляции нейропсихических процессов формирования зависимости от алкоголя. Совокупность полученных данных вносит существенный вклад в развитие нового научного направления - психонейроиммуномодуляции.

Практическая ценность работы. Подученные данные открывают перспективу ■ для разработки новых нейроиммунолопгэских подходов к лечению а профилактике алкоголизма, в частности перспективу специфической иммунотерапии алкоголизма с пошщ&ю антител к нейромедиаторам. Показано прогностическое значение оценки иммунного статуса больных алкоголизмом по динамик продукции антител к нейромедиаторам. Определение антител к нейромедиаторам внедрено в прагаику псковского областного натаологическо-'о диспансера

Положения, выносимые на защиту.

1. Хроническое действие алкоголя и алкоголизм сопровождайся развитием вторичного иммунодефицитного состояния, дли-'ельно существующего после оконча!шя приема алкогшш.

2. В процессе развития экспериментального алкоголизма в ыворотке крови возникает усиленное накопление аутоантител к еротонияу и катеходаминам, представляющее собой защитную ре-кцию организма на формирование патологического вггчения к ал-эголю, что выражается в. торможении алкогольной зависимости и эдтверадается результатами активной и пассивной иммунизации 1вотных конъюгатами нейромедиатор-белок и антитегэш к серо->нину и норадреналину.

3. У больных хроническим алкоголизмом уставовлгва корре-:ция между характером течения болезни (непрерывной и присту-

пообразной) и уровнем продуквди аутоангител к катехоламинам к серотонину.

4.. Комплексная патогенетическая терапия с применением нейротропных иммуномодуляторов хронического алкоголизма способствует коррекции стойких проявлений вторичного нейрогенного иммундцефицивгаго состояния и восстановлению нейропсихического статуса Оолызго.

Апробация работы. Материалы работы доложены на Пленуме научного Совета Минздрава СССР "Межведомственные проблемы наркологии", гзсвяшенного биологическим аспектам алкоголизма (Ярославль, 1982), на Международном симпозиуме "Субстанция Р в регуляции физиологических и патофизиологических процессов" (Мэсква, 198Б), на Международном симпозиуме "Новые подходы к лечению алкоголизма, наркоманий и токсикоманий" (Гагра, 1989), на IV Всесоюзном съезде патофизиологов (Кишенев, 1989), на V Всесоюзном с->.;яюзиу>.{а по физиологии иммунного гомеостаза (Оренбург, 1ЕЭО), на I Международном конгрессе по нейроиымуно-модуляции (йэренция, 1990), на Учредительном конгрессе Международного обс=ства по патофизиолопш (Москва, 1991). /

Публикации.' По материалам работы опубликовано 40 работ в том числе 1 монография и 16 статей.

Структура диссертации. Диссертация состоит, из введения, обзора литературы, главы с изложением материалов и методов, 6 глав собственных исследований, заключения, выводов и списка " литература Диссертация изложена на 207 стр. машинописи, иллюстрирована 14 рисунками, 21 таблицей, библиография состоит из 272 источников литература

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

В работе было использовано 200 беспородных краг массой 250-300 Г, 1200 мышей линии С57В1/6, 200 - мышей линии СВА. 150 - мышей линии BalB/c массой 16-18 г, 100 морских свинок "агути" массой 250-300 г. Во всех экспериментах использовали только самцов.

Клинико-иммунологические исследования проведена на больных хроническим алкоголизмом 2-й стадии, находившееся на лечении в стационаре Московского областного наркологического диспансера Обследовано 160 мужчин в возрасте от.25 до 60 лет, страдающих алкоголизмом 2-й стадии со средней давтстью заболевания около 10 лет. Контрольную группу составляй 35 здоровых доноров в возрасте от 25 до 55 лет.

Экспериментальные модели алкоголизма. Для вос^зотзведения хронического действия алкоголя мышей либо ежеднею) в течение 30 суток поили 30% раствором этанола по 0,1 mj per os, либо вместо воды в поилки в качестве единственного источника жидкости наливали l'OZ или 15% раствор алкоголя.

Для воспроизведения хронического действия алкоголя у крыс использовали 10-15% растворы алкоголя в качестве единственного источника питья.

Генетическую-предрасположенность к алкоголю исследовали на мышах разных линий: С57В1/6, Bal В/с, СВА.

Алкогольную мотивацию у мышёй оценивали группетм методом (5-10 животных в группе) по количеству алкоголя, потребляемого

t

- а -

животными в цыювиях свободного выбора между 10% и 157. раствором алкоголя ж водой.

Методы исследования. В работе использовали для индукции антител к неЩгомедиагорам (серотонину, норадреналину и дофамину) у' мышеи конъюгаты нейромедиаторов с бычьим сывороточным альбумином (СГ-ВСА, НА-БСА и ДОФА-БСА), полученные старшим научным сотрудиком JL А. Башаровой . Конъигат СТ-БСА синтезировали модифицирааштнм методом формальдегидной конденсации Манни-ха (Ranadive.Sehon, 1967), кон-ногат НА-БСА - с помощью бифункционального реагента глутаральдегида (И. Е. Ковалев, ' 0. Е Полевая, 1984). юнъюгат ДОФА-БСА получали в реакции с параамино-фениладанином (Pescar. Spector, 1973). Полученные конщагаты содержали 10-15 молекул биологически активных веществ, ковале нт но бвяаашых. с одной-молекулой БОА.

Антитела к серогонину, норадреналину и дофамину для введении мышам Geли получены старшим научным сотрудником Л. А. Ветрила при ишс^1зации кроликов конъигатами СТ-БСА, НА-БСА, ДОФА-БСА.

Содержание Г-лимфоцитов в периферической крови морских свинок.7 опреденди путем реакции роаеткообразования с эритроцитами кролика (Wilson, Coombs, 1972). У лвдей определение Т-лимфоцитов производили путем реакции розеткообразования с эритроцитами Сарана ОБ).

О функциоильной активности Т-лимфоцитов людей и животных

судили по реакции бласттрансформации на митогены конА и ФГА.

i

" Определение интенсивности включения Е-тимидина в ДНК клеток производили с помощью счетчика "intertechniquc" (Франция).

У мышей штивность антигенспецифических супрессоров изу-

чади методом предложенным R М. Писаревым, JL А. Певницким (1977).

Для выявления актигеннеспецифических ( индуцированных конА супрессоров) использовали широко распространенный метод (Show et al. ,1976), основанный на торможении реакции бласттрансфор-мации.

Количество В-лимфоцитов в периферической крови определяли методом розеткообразования с частицами зииозапа (Mandes et al. , 1977).

Динамику M, G и А иммуноглобулинов в сыворотке крови людей исследовали методом радиальной иммунодиффузии с использованием наборов моноспецкфических антисывороток (Mancini et al., 1965).

Уровень антител к серотонину и норадреналину в сыворотке крови исследовали в реакции пассивной гемагглюгингцяи (РПГА) с использованием в качестве диагностикума эритроцитов барана, ковалентно связанных с конъюгатом нейромедиатора-с гамма-глобулином лошади (0. Kl Полевая, И. Е. Ковалев, 1981).

Антителообразующие клетки (AÖK) в селезенке мьпгэй, иммунизированных ЭБ, определяли прямым ( Jörne, Nordin, 1963), а у иммунизированных Yi-антигеном - непрямым методом Ерне (La4e et al. , 1977).

Для определения общей гемолитической активности комплемента (СЕ50) использовался метод его титрования по 501 гемолизу (Е. Кэбот, ЯИейер, 1968). Неспецифическую бактерицидную активность сыворотки крови определяли нефэлометрячеса (Muschel, Tceffers,1956) с'использованием в качестве тест-!гкроба штамм "наев' золотистого стафилококка. Активность лизоцима в сыворотке

крови определяли нефелометрическим методом (Дорофейчук, 1968).

Определение фагоцитарной активности гранулоцитов и пери-тонеальных шкрофагов периферической крови производили общепринятым методам. В качестве тест-микроба использовали культуру золотистого стафилококка (штамм "Жаев*). ^

При проведении цитохимических исследований гранулоцитов миелопероксвдазу в них выявляли общепринятым бензидиновым методом по Саго и катионные белки с помощью окраски их примули-ном (Е. А. Венгдинская и соавт., 1976).

Данные, полученные в результате экспериментальных исследований, подвергались статистической обработке с использованием t- критерия Стъюдента по алгоритмам программы "Statgraphics" на микроЭВМ IBM PC/AT.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

При длительном приеме алкоголя и алкоголизме формируются стойкие нарушения в иммунной системе: подавление клеточного иммунитета, снижение продукции антител, ослабление фагоцитарной активности нейтрофилов и макрофагов и т.д. Наличие значительной вартбедьности в проявлениях депрессии механизмов специфического и неспецифического иммунитета побудило провести сравнительный анаша влияния генетической предрасположенности или непредрасположенности к потреблению алкоголя на характер нарушения юшунореактивности при длительной алкоголизации, а также, сопоставить эти нарушения с изменениями нейромедиации в ВДЗ.

Особенности нейрогенного шмунодефишткого состояния у животных с различной алкогольной мотивацией пси хронической алкогольной интоксикации. •

У животных с различной предрасположенностью к потреблению алкоголя в результате хронической алкогольной интоксикации были выявлены разнонаправленные выраженные изменения кммунореак-тивнссти. 30-дневное принудительное введение алкпголя у мышей 3-х разных линий, исходно различающихся существенна по уровню естественного влечения к алкоголю, обусловило разнонаправленные изменения иммунного ответа к эритроцитам барана, сопряженные ■ с изменениями активности Т-супрессоров. Результаты опытов представлены в таблице 1. Под влиянием алкогольной интоксикации происходило значительное возрастание числа ACS у мышей линии С57В1/6, характеризующихся предрасположенностью к потреблению алкоголя. У иькей этой линии обнаружено: торможение активности антигенспецифических Т-супрессоров и сохраняющаяся на уровне нормы активность неспецифических, индуцированных конА Т-супрессоров. Обратные соотношения выявлены у мышей линии BalB/с и СБА, отвергающих алкоголь при свободном выборе питья. Так, иммунный ответ к ЭВ у мышей линии BalB/с был в 13 раз снижен по сравнению с интактными животными, а у мышей линии СВА титр антител был снижен в 3 раза по сравнена с контролем. В соответствии с обнаруженными различиями в величинах АОК оказывается различной степень активации функции т-супрессоров, как антигенспецифических, так и индуцированных кэнА.

Стимулирующее действие алкоголя на иммунную сястему мышей, предрасположенных к потреблению алкоголя, подтверждается также при изучении массы лимфоидных органов у этих животных.

с.-

Так, у мыше» линии С57В1/6 при 30-дневной алкогольной интоксикации набжщали достоверное увеличение массы тимуса до 0,24+0,01 (X от массы тела), в то время как у контрольных животных она была равна 0,19+0,008 (Р<0,05). У мышей линии Ва1В/с, предаочитаншх воду, масса тимуса при хронической алкогольной интоксикации, напротив, снижалась'до 0,12+0,008 {7. от массы), у интактных она составляла 0,17+0,009 (Р<0,05).

Таблица 1.

Измененве иммунного ответа к ЭБ и активности Т-супрессо-ров при тонической алкогольной интоксикации у мышей с различным уровнем алкогольной мотивации

Линия мышей

Имвднный ответ к ЭВ : Т-супрессоры _е

(АСС на 10 лимфоци-цикш)

к ЭБ (I супрессии)

: конА индуциро-

: ванные Т-суп-

: рессоры

: (% супрессии)

: опыт : контроль : опыт : контроль: опыт : контроль

* *

С57В1/6 296,6+19,3 392,3+26,2 87+2,3 74+4,1 53+2,6 48+2,4

"акЫг ЫоА;

Ва1В/с 417.8+50,5 15,0+3,2 80+4,7 99+0,07 23+1,4 56+2,8

** *

СВА 1280,3+115,8 398,3+114,5 65+3,3 80+3,2

одной звездочкой обозначены значения Р<0,05, двумя Р<0,01

Эта т закономерность проявилась при изучении особенностей реакции фагоцитарной активности перитонеальных макрофагов и бластогенного ответа лимфоцитов на различные етгогены при 30-дневной алкогольной интоксикации у мышей, предрасположенных и непредрасположенных к потреблению алкоголя. Так, у мышей линии С57В1/6, предпочитающих растворы алкоголя воде, не удалось обнаружить достоверных различий показателей фаго^тгарной ак-

л

тивкости с таковыми в контрольной группе (фагоцитарное число в опытной группе составляло 38,0+2,5%, в контральта оно равнялось 41,0+3,0%). Иная картина выявлена в этих условиях у мышей линии СБА и Ва1В/с, характеризующихся негативным отношением к алкоголю. У них развивались глубокие нарушения фагоцитарной функции макрофагов, что выражалось в снижении фагоцитарного числа у мышей СВА- до 30,0+2,2% (контроль - 43,0+3,0%; р < 0,01) и у Ва1В/с до 32,1+2,8% ( контроль - 52,0+3,0%; р < 0,01), а фагоцитарного индекса у мышей СВА до 1,010,1 ( в контроле он равнялся 4,3+0,12, р < 0,01).

функциональную активность Т- и В-лимфоцитов у мышей оценивали по реакции бласттрансформации на мктогегы ФГА и конА после 30-дневной алкогольной интоксикации. В груше мышей линии С57В1/6, предпочитающих растворы этанола, -достоверных различий по сравнению с контролем выявлено не было. У мышей линии Ва1В/с, предпочитающих воду, регистрировали скзетше уровня бласттрансформации на ФГА. Так, захват ^тимидина в культурах лимфоцитов от мышей, подвергнутых хронической алкогольной ин-

токсикации, при стимуляции ®ГА был равен 725,1+35,8 имп./мин. , в культурах лимфоцитов от. интактных животных, он составлял. 1046,8+32,1 имп./ыин. (р <0,01). Вместе с тем бластогенный ответ лимфоцитов у этих животных на конА был достоверно усилен - в опытной группе захват %-тимидина лимфоцитами составлял 2041,3+281,2 иш. /ыин., в контрольной - 1213,0+67,3 имп. /мин., р < 0,05), следовательно у мышей, предпочитающих воду, наступала в результате алкоголизации активация Т-супрессоров.

Таким образом, установлено, что тяжесть проявлений экспериментального алкоголизма находится в обратной зависимости от степени исходной предрасположенности животных к потреблению алкоголя. Е^унологические нарушения в первую очередь развиза-кггся у животных, относящихся к категории не предрасположенных к потреблению алкоголя, у них тяжелее протекает и экспериментальный алкоголизм (Ю. В. Буров, ЕЕ Ведерникова, 1985). Полученные измкюния следует квалифицировать как нейрогенный иммунодефицит, так как они коррелируют с особенностями обмена ней-ромедиатороз в мозге у животных с разнонаправленным отношением к алкоголю. В процессе алкоголизации происходит усиленный синтез дофамина у животных с исходно низким содержанием его в мозге и снижение уровня серотонина у животных с исходно высоким уровней его. Реципрокные нарушения нейромедиации обуславливают (ЛВ.Девойно и Р. И. Илыоченок, 1983) контрастные изменения иммунореактивности - и, как следствие, развитие нейроген-ного иммунодефицита у животных, отвергающих алкоголь.

Особенности проявления иммунодефицита у животных после прекращения приема алкоголя.

В экспериментах по изучению состояния иммунореактивности у крыс после устранения длительной 6-месячной алкогольной интоксикации было показано, что у животных в течение полугода после отмены алкоголя сохраняются нарушения механизмов естественного иммунитета: снижение бактерицидной, комплекентарной и лизоцимной активности сыворотки крови, угнетение продукции нормальных антител к стафилококковому токсину, фагоцитарной активности нейтрофилов. Феномен бьш обозначен намя как иммунологическая абстиненция. Вероятно,, действие алкоголя на иммунную систему в данном случае оказывается достаточно сложным: иммуностимулирующий эффект алкоголя полностью не вытесняется . иммунодепрессивным. В этом, по-видимому, состоит сущность феномена патологической зависимости организма, в частности иммунной системы, от алкоголя на стадии сформировавшейся болезни. •

Особенности нейрогенного иммунодефицита у больных хроническим алкоголизмом с различными Формами течения заболевания.

Шрвая группа больных характеризовалась непрерывно-рецидивирующим течением заболевания с ремиссиями менее одного года Вторая группа больных отличалась диаметрально от первой низкопрогредиентным прерывистым с ремиссией до 5 лет течением болезни, фи сравнительном обследовании 2-х контрастных групп больных выявлены достоверные различия в изменении иммунореак-тивности. В 1-й группе больных бактерицидная активность сыворотки крови оказалась существенно снижной (34,1+4.7%; р<0,05) по сравнению с нормой (42,4+2,6%). Во 2-й группе ога достоверно превышала нормальный уровень (55,9+3,91; р<0,01). Содержа-

ние комплекта в крови снижено в 1-й груше больных более значительно по сравнению со 2-й и с контролем: 48,5+4,8 ед., 63,3+2,7 ед., 72,3+3,4 ед. соответственно по группам. Содержание 1ев достоверно выше в 1-й группе (283,1+40,6 МЕ/мл), 'чем в контрольной (155,8+12,0 МЕ/мл) и не изменено во 2-й (167,3+23,0 МЕ/ьш). В обеих грушах больных выявлено существенное повызние уровня 1еА, одного из признанных маркеров ал--коголизма. Особенно значительным оно оказалось в 1-й группе больных с неблагоприятным течением заболевания - 375,7+40,0 МЕ/мл, по сравнению со 2-й группой больных - 238,1+22,0 МЕ/мл. Уровень ¡бМ в обеих группах больных был ниже нормы.

Больные 1-й и 2-й групп достоверно различались по содержанию естественных антител в сыворотке крови. Так, титр антител к стафшзжокку составлял 0,57+0,012 ед. и 1,18+0,23 ед. (р < 0,02) и тигр антител к стрептолизину-0 160,0+21,2 ед. и 233,0+25,0 од. (р < 0,05) соответственно по группам.

Депрессия клеточного иммунитета выраталась в снижении числа Т-лиьфэщггов в обеих группах (29,3+1,8% и 24,1+1,4%) по сравнению с контролем (58,1+2,2%).

Существенные межгрупповые различия установлены в изменении состояния фагоцитарной функции нейтрофилов по показателям завершенности фагоцитоза и содержания в них катионных белков. Так, показатель завершенности фагоцитоза в 1-й груше составлял 43,5+2,3%. во 2-й 58,5+2,0%, в контрольной - 49,7+3,6%, а уровень катионных белков в нейтрофилах - соответственно 225,0+8,0 усл.ед., 292,0+12,0 усл.ед. и 200,0+17,0 усл. ед.. Таким образом, у больных с непрерыв'норецидивирукщим тяжелым

характером течения алкоголизма обнаружены наиболее значительные нарушения гуморальных и клеточных показателей сзлунореак-тивности.

Приведенные выше экспериментальные и клинические данные свидетельствуют о том, что в основе нарушений иммушззй системы при хроническом алкоголизме лежит патология нервноЗ регуляции иммунитета Хотя алкоголь, являясь мэмбранотоксичесшм соединением, способен непосредственно повреждать иммунопмлетентные клетки, для этого требуются такие его концентращз, которые непереносимы в целом для организма, так как лимфсгаты резистентны к действию этанола (На11едгеп, Рогеггеп; 1578). Однако иммунологические нарушения выявляются при приеме дзжэ небольших доз алкоголя, которые как установлено дестабилизируют деятельность ЦНС и центральные механизмы нейрозндокринзых регуля-торных систем, участвующих в регуляции иммуногенеза. Таким образом, механизмы нарушения функций иммунной система при алкоголизме связаны в первую очередь не с непосредственным действием алкоголя на иммуноциты, а с изменением их активности вследствие нейроиммуномодуляции.

Тесная взаимосвязь существующая между нервной и иммунной системой, позволяла предположить активное участте иммунной системы посредством механизмов обратной связи в изменениях функций ЦНС при алкоголизме,, усиливающих или задерживающих развитие патологического процесса

Антитела к нейромедиатосам при хроническом дейстли алкоголя и алкоголизме и их роль в изменении алкогольной мотивации.

а) Клиниго-иммунологические исследования. В сыворотке крови больных хроническим алкоголизмом выявлены антитела к норадреналину и серотонину в 51,77.. Содержание антител к норадрена-лину и серотонину составило 18,3+3,5 усл.ед. и 23,5+3,2 усл. ед. соответственно. Только у 4X больных антитела к норад-реналину и серотонину в высоких. титрах выявлены одновременно в сыворотках крови, что, очевидно, связано с индивидуальными особенностями нарушения медиаторного обмена при алкоголизме. При обследовании больных с двумя формами течения алкоголизма было устаноахено, что антитела к норадреналину определялись в 4 раза чаще к титр их был существенно выше при благоприятном течении заболевания (ремиссия заболевания до 5 лет), чем при непрерывном, тяжелом течении заболевания. Антитела к серотонину встречашсь в обеих группах в одинаковом проценте случаев и их титры сужрственно не различались.

б) Хроническое действие-алкоголя. Возможность образования антител к нейромедиаторам исследовали в опытах на мышах разных линий, предпочитающих или отвергающих растворы алкоголя при продолжительном, до 10 месяцев приеме 15% растворов алкоголя вместо воды. Антитела к серотонину и норадреналину выявлены в наибольшем татре на 3-ем месяце алкоголизации животных. У мышей С57В1/6, предпочитающих алкоголь, продукция антител к ней-ромедиаторам была наиболее значительной и составляла к норадреналину 14.6+3,8 усл. ед., к серотонину 15,6+4,2 усл. ед. у мышей ДВА/2 я СБА, отвергающих алкоголь, она была слабой и равнялась к шрадреналину 1,2+0,3 усл. ед. и к серотонину 1,3+0,4 усл. ед.. Проводилось сопоставление уровня потребления алкоголя

в условиях свободного выбора между 15% раствором алкоголя и водой с высотой титров антител к нейромедиаторам у мышей С57В1/6, предпочитающих растворы алкоголя. Было обнаружено, что кривая потребления его в два раза снижается на пике анти-телогенеза. В дальнейшем на фоне снижения титра антител кривая потребления алкоголя снова повышалась, но не достигала исходного уровня . Полученные данные указывали на возможное защитное действие антител к нейромедиаторам. при алкоголизме, что послужило основанием для проведения прямых испытаний их защитных свойств.

в) Влияние иммунизации животных конъюгатами нейромедиа-тор-белок на потребление алкоголя. Мышей линии С57В1/6 иммунизировали конъюгатом СТ-БСА в течение 1,5 месяцев, после чего на протяжении 1 месяца исследовали потребление алкоголя.' В результате иммунизации возникало существенное снижение потребления алкоголя на пике продукции антител к серотонину. Вместе с тем уровень потребления алкоголя у мышей, иммунизированных БСА (контроль на носитель), существенно возрастал. Так, у мышей, иммунизированных конъюгатом СТ-БСА, БСА и у контрольных животных уровень потребления алкоголя составлял 2,9+0,3 г/кг, 12,7+0,2 г/кг и 8,1+0,2 г/кг (Р<0,05) соответственно. Обнаруженные различия сохранялись в течение 1 месяца и исчезали по мере снижения титров антител к серотонину и БСА.

Вторым этапом исследования бшго изучение возможности подавления антителами к нейромедиаторам развившейся алкогольной зависимости. Жшей линии С57В1/6 с 30-дневной алкогольной интоксикацией иммунизировали конъюгатами СТ-БСА, НА-БСА и ДО-

г/кг

Рисунок I

Потребление алкоголя мылими линии С57В1/6, иммунизированных конъюгатами СТ-БСА, НА-БСА и ДОФА-БСА, на фоне алкоголизации

А - потребление алкоголя животными, Б - содержание антител к ней рем е ди ат орам в сыворотке.крови. Светлые столбики - иммунизация конъюгатом СТ-ЕСА, косозаш-трихованные - иммунизация конъюгатом НА-БСА, заштрихованные - иммунизация конъюгатом ДОФА-БСА, темные - контроль Достоверность- обозначена одной-звездочкой - Р 0,-05; двумя - Р 0,01.

ФА-БСА в течение 1,5 месяцев на фоне продолжавшейся алкоголизации животных. После завершения иммунизации регистрировали уровень потребления 15Z раствора алкоголя в условиях свободного выбора между алкоголем и водой в течение месяца. Мыши, иммунизированные конъюгатом СТ-БСА, потребляли на фоне максимальной продукции антител к медиатору в 3 раза меньше алкоголя, чем контрольные. Иммунизация конъюгатом • НА-БСА приводила также к снижению в 1,5 раза-уровня потребления алкоголя мышами. Иммунизация конъюгатом ДОФА-БСА оказывалась неэффективной - не вызывала существенных изменений в потреблении алкоголя животными (рис.1), что, на первый взгляд, расходится с общепринятыми представлениями о ведущей роли дофамина в развитии алкоголизма.

г) Изменение алкогольной мотивации у мышей при введении антител к нейромедиаторам.' Данные, полученные при активной иммунизации, были подвергнуты проверке в опытах с пассивной, иммунизацией животных антителами к нейромедиаторам. Результаты исследований представлены в таблице 2. Как видно из таблицы, индивидуальные особенности действия антител к нейромедиаторам на алкогольную мотивацию сохраняются и в условиях изолированного введения их. Антитела к серотонину как и при активной иммунизации оказывали наиболее выраженное действие на потребление-алкоголя мышами С57В1/6, снижая его в 5 раз, антитела к норадреналину подавляли алкогольную мотивацию в 2 раза и антитела к дофамину не изменяли уровень потребления алкоголя животными.

д) Иммуномодуляция алкогольного абстинентного синдрома.

Таблица 2

Влияние пассивного введения АТ к ОТ, НА и ДА на потребление алкоголя мышами

С57В1/6 с сформировавшейся алкогольной зависимостью

Антитела

Доза : А'Г (мг: по : белку :

Кол-во жив-ых

Потребление алкоголя (г/кг 9$ : Потребление воды (мл/кг)

:До вве- : 1-3 : 4-6 : 7-10 : До вве-Iдения : сутки : сутки : сутки : дения

1-3 : 4-6 : 7-10 сутки : сутки : сутки

' 5

к СТ-БСА 10 100

20 20 20

12,5±1,2 13,5£0,8 10,0+0,6

7,3±0,4 **

5,7±0,4 **

2,0+0,2

10,710,6 **

10,7±0,6 **

7,5+0,4

*-А ** **

11,3±0,7 3,310,2 6,610,3 6,610,4 6,6±0,4

** ** **

11,0+0,6 4,0±0,2 9,9+0,6 6,0±0,3 6,0+0,3

**

7,5+0,5 13,2+0,8 21,1+1,2 13,2+0,8 13,2+0,9

I

м го I

5

К НА-БСА 10 100

Физиологический р-р

10 20 10

13,0+1,3 13,511,2 15,0+1,5

**

6,7+0,7 **

8,3+0,9 6,0±0,6

** ** **

14,0+0;8 14,0+0,8 3,0+0,3. 8,6+0,8 9,8+0,6 9,8+0,6

**

13,5+0,8 ;14,5±0,8 9,0+0,5 13,3+0,8 19,8+0,6 9,8+0,5

**

13,011,3 12,5+1,3 3,0+0,3 9,9+1,2 14,6+1,5. 13,2+1,4

к ДА-БОА 5 . 10 100 20 20 20 14,0+1,4 15,0+0,9 12,5+0,7 11,5+1,2 Б,4±0,3 12,011,2 12,5+0,7 12,5+0,7 11,5+0.7 14.6+0,9 13,4+1,3 11,8+1,2 13,5+0,8 18,5+1,4 6,0+0,4 3,0+0,2 3,3+0,2 3,3+0,2 12,2+0,7 9,0+0,5 9,8+0,6 4,9+0,3 3,0+0,2 3,3+0,2

к БСА 5 10 30 30 12,1+1,1 11,3+0,9 12,6+0,6 14,6+0,7 14,6+0,7 11,111,0. 8,2±0,6 11,8±0,7 12,3+0,'8 9,8Ю,4 13,9+0,6 14,6+0,7 14,6+0,6 9,4+0,4 13,2+1,2 9,8+0,4

к гамма- глобулину кролика 5 10 100 10 ' 10 10 16,5+1,7 13,2+1,4 16,511,7 17,5+1,8.19,812,0 Мс 14,5±1,5 9,0±0,8 11,511,2 12,011,1 13,211,2 ** 14,0+1,4 8,510,9 13,5+1,4 16,0+1,7 4,0±0,3 17,211,7. 22,412,3 19,8+2,0 11,5+1,1 13,211,4 13,2+1,3 ** ■ 6,6+0,7 13,2Ц,4 6,0±0,6

70

11,5±1,2 10,1±0,4 14,5±0,6 14,2±0,5 19,8+0,8 19,8+0,7 14,6+0,6 19,8+0,7

Достоверность ** - Р<0,05 ПО сравнению с исходным уровнем потребления алкоголя

Б связи с тем, что антитела к серотонину оказывали наиболее выраженное утнетаодзе действие на потребление алкоголя животными, представлялось интересным исследовать эффект введения этих антител на особенности проявления основного показателя алкоголизма - абстинентного синдрома. Мышей подвергали насильственной алкоголизации в течение 10 суток аэрозолем алкоголя с использованием специальной камеры, в которой концентрация этанола составляла 14 мг/мл. Антитела к серотонину в дозе 5 и 10 мг по белку вводили животным за 24 часа до окончания алкоголизации- и сразу после отмены алкоголя. У мышей после отмены алкоголя возникали характерные признаки абстинентного синдрома: мыгечные подергивания, трешр, ригидность хвоста, вздрагивание на шум, судороги при поднятии за хвост. Введение антител к серотонину за сутки до окончания алкоголизации кшотных вызывало-достоверное уменьшение клинических признаков абстиненции. При введении 10 мг антител к серотонину за 24 часа до окончания алкоголизации судороги при поднятии за хвост в опытной группе мышей регистрировались у 1 из 12 особей, взятых в опыт, в то время 1сак в контрольной группе из 12 животных они регистрировались у 9 С р < 0,05). Эффект введения антител к серотонину возрастал с увеличением дозы от 5 до 10 мг.

Таким образом, установлено, что антитела к нейромедиато-

>

рам и, в первую очередь, к серотонину и норадреналину способны при системном введении юс в организм подавлять алкогольную мотивацию. Недостаточность в реализации его эффекта у непредрасположенных к потреблению алкоголя особей, очевидно, обуславливает наиболее тяжелые проявления алкоголизма

Коррекция иммунологических и поведенческих нарушений, вызываемых алкоголем, иммуномодудяторами нейротропного действия. Учитывая тесную взаимосвязь,- существующую между нервной и иммунной системой, а также нейрогенную природу иммунодефицита,

г

развивающегося при хронической алкогольной интоксикации и алкоголизме, значение иммунной системы в механизмах формирования алкогольной зависимости исследовали также с использованием им-муномодуляторов нейротропного действия. Б результате проведенных экспериментов установлено, что все использованные препараты: фрагмент субстанции Р SP1-4, спленопентин, витамин Е, обладающие иммуномодулирующими свойствами, в большей или меньшей мере нормализуют вторичное иммунодефицигное состояние у животных, подвергнутых длительной алкоголизациии. Одновременно с этим все использованные иммуномодуляторы обнаруживали способность существенно подавлять алкогольную мотивацию у животных.

В работе использовали спленопентин и фрагменты субстанции Р, синтезированные в Институте биологически активных веществ АН ГДР, предоставленные профессором НОеме.

Применение спленопентина в дозе 250 мкг/кг через 24 и 48 часов после отмены алкоголя у животных с 30-дневной алкогольной интоксикацией приводило к нормализации иммунного ответа к эритроцитам барана и фагоцитарной активности перитонеальных макрофагов. Так, через 24 часа после отмены алкоголя у мышей количество АОК на 106 лимфоцитов в селезенке равнялось 23,1+2,6, в то время как у животных, получавших спленопентин, .оно составляло 51,4+2,0 и достоверно не отличалось от содержания АОК в селезенке у интактных животных, служивших контролем

(52,6+2,3). Фагоцитарное число через 24 часа после отмены алкоголя составляло 35,4+0,08Z, сшгенопентин повышал его до 46,3+0,4Z, у контрольных животных - 45,2+0,3%. Было показано одновременно влияние спленопенгина на алкогольную мотивацию у мышей С57В1/6. Введение его в дозах 250 и 500 мкг/кг снижало потребление алкоголя животными в условиях свободного выбора двукратно по сравнению с таковым в контрольной группе. Эффект наблюдали с 4 по 14 сутки после введения препарата В дальнейшем потребление алкоголя постепенно увеличивалось и к 21 сут-, кам после введения спленопентина достигало исходного уровня.

Аналогичные результаты были получены при использовании фрагмента субстанции Р SP1-4 в дозе 250 мкг/кг. Фрагмент субстанции Р SP1-4 также восстанавливал нарушенный хронической алкоголизацией иммунный ответ к эритроцитам барана и фагоцитарную активность перитонеальных макрофагов. Вместе с тем его действие на алкогольную мотивацию было более длительным - до 3-х недель после однократного введения препарата

При изучении иммуномодулируюищх свойств витамина Е было установлено, что введение его в дозе 5 МЕ в течение 3 суток восстанавливает иммунный ответ к эритроцитам барана, резко подавленный 3-х месячной алкоголизацией.' Гак, количество АОК на £

10 лимфоцитов в селезенке у мышей после 3-х месячной алкогольной интоксикации было равно 47,1+12,3, при введении витамина Б оно составляло 104,7+7,3 (Р < 0,001), у контрольных животных -131,4+16,9. У морских свинок, подвергнутых алкоголизации, витамин Е полностью нормализовал содержание Т-лимфоцитов, которое при длительном введении алкоголя снижалось в 2-3 раза Од-

нако, действие витамина Е на алкогольную мотивацию оказывалось кратковременным, не.более недели.

Таким образом, в результате проведенных экспериментов обнаружена возможность эффективного двустороннего действия спле-нопентина, БР1-4 и витамина Е при экспериментальном алкоголизме - восстановление нарушенных иммунологических показателей и подавление влечения к алкоголю. Материалы проведенных исследований свидетельствуют о взаимодействии механизмов иммунной и нервной систем в развитии экспериментального алкоголизма и, прежде всего, об активном участии иммунной системы в регуляции алкогольной мотивации и формировании зависимости от алкоголя.

Коррекция иммунодефицита у больных хроническим алкоголизмом с помощью комплексной патогенетической терапии , состоящей из галоперидола, фэназепама и оксибутирата лктия. Отправным пунктом для этого раздела работы явилось представление о генераторных механизмах нейропатологических синдромов, выдвинутое Г. Е Крьшановсклм (1980).

Важными нейрохимичесгаши патогенетическими механизмами хронического алкоголизма являются нарушения обмена катехолаш-нов, серогонина, ГАЖ В частности, показано, что при алкоголизме имеют место значительное повышение содержания ДА в крови и гипершжгвация ДА-агшарата. В ДА-меводимбических структурах ' мозга возникают генераторы патологически усиленного возбуждения (ГПУВ), делающие ати структуры гиперактивными. Для коррекции ДА-зависимых растройств нервной системы Г. й Крыжановским предложена КПГ, состоящая из триады фармакологических препаратов в виде галоперидола, блокирующего ДА-рецепторы на постсн-

наптических нейронах, бензодиазепинов (феназепама), усиливающих ГАМК-контроль за секрецией ДА и возбуждением нейронов, подавляющих гиперактивность, и солей лития (оксибутират лития), нарушающих синтез и секрецию катехоламинов.

Исследование проведено на базе Областного наркологического диспансера совместно с И. А. Хесиным и В. И. Ревенко. Больные были разделены на 2 группы, из которых одна получала общепринятую терапию, другая КИТ, состоящую та галоперидола - 1 мг, феназепама - 1 мг и оксибутирата лития 0,9 г в сутки, в течение месяца. Было показано, что сочетаняое применение малых доз галоперидола, фэназепама и оксибутирата лития у больных хроническим алкоголизмом, способствует ликвидации иммунодефицита Так, у больных, получавших КИТ, наблюдали достоверное увеличение количества Т-лимфоцитов до 46,6+2,2%, в периферической крови, до лечения оно составляло 35,2+2,1% (р<0,05). У больных, получавших обычную терапию нормализации этого - показателя не происходило (38,5+1,8%). Сходные результаты получены также при определении фагоцитарной активности полиморфонуклеарных лейкоцитов. Фагоцитарная активность нейтрофилов, о которой судили по фагоцитарному числу, существенно увеличивалась (49,8+2,1%) по сравнению с уровнем, регистрируемым до лечения (39,5+2,2%; р<0,05). При обычной терапии этот показатель не изменялся (42,9+3,0%). Следует особо отметить, что при применении КПТ у больных хроническим алкоголизмом наблюдали нормализацию содержания в сыворотке крови. До лечения уровень 1еА в сыворотке крови составлял 2,9+0,1 мг/мл, после- лечения его содержание было равно 1,8±0,09 мг/мл, в то время как у

больных, находившихся на обычном лечении, содержание достоверно увеличилось в сыворотке крови до 7,5+0,15 мг/мл. В норме у доноров уровень 1гА в сыворотке крови - 1,6+0,08 мг/мл. Кроме того, у больных, получавших КПТ, не наблюдали снижения уровня антител к нейромедиаторам в процессе лечения, что является благоприятным прогностическим признаком.

Таким образом, в результате проведенных клинических наблюдений установлено, что применение КПТ, состоящей из базисной триады препаратов (галоперидола, феназепама.и оксибутирата лития) дало положительный клинический эффект. У больных, получавших, триаду, по сравнению с больными,. находившимися на обычной терапии, отмечали в большем проценте случаев повышение умственной и физической работоспособности, урежение колебаний настроения, появления уверенности в себе, а также смягчение

психопатических черт характера. На фоне нормализации иммунолога

гических показателей, полученные результаты подтверждают, что вторичный иммунодефицит при алкоголизме связан с нарушением регуляции нейроиммунных взаимосвязей и взаимодействия.

Таким образом, в процессе проведенного исследования было показано, что при длительной алкоголизации у животных и при алкоголизме у людей формируется вторичное иммунодефицитное состояние. Установлено различие в формировании вторичного иммунодефицита у животных с . различной предрасположенностью к потреблению алкоголя. Сходные результаты получены и.у больных хроническим алкоголизмом с разными формами течения заболевания: •непрерывнорецидивирующей к прерывистой с длительными ремиссиями. Состояние показателей иммунной системы может служить

прогностическим признаком при оценке характера течения алкоголизма

В целом, согласно существующей градации стадий' алкоголизма, можно выделить 3 этапа, в изменениях функций иммунной системы в патогенезе алкогольной болезни.

На первой начальной стадии интоксикации алкоголь воздействует непосредственно на клетки иммунной системы, как и на клетки всех систем и органов, в качестве мембранотоксического соединения. Дня второй стадии алкоголизма, определяемой по развитию стойкого алкогольного влечения, а также по возникновению абстинентного синдрома, характерно развитие вторичного иммунодефицитного состояния (ослабление продукции АТ на различные антигены, подавление клеточных реакций, снижение фагоцитарной активности нейтрофилов и макрофагов и т. д.),. на фоне которого в сыворотке крови регистрируется усиленная продукция антител к нейромедиаторам. Третья стадия алкоголизма, характеризующаяся развитием физической зависимости от алкоголя, глубокими нарушениями психики и деятельности всех органов и систем, сопровождается стойкой депрессией иммунологической защиты, развитием нейроимыунопатологии. Следует отметить, что отмена приема алкоголя на 2-3 стадии процесса ведет к углублению вторичного иммунодефицитного состояния, развитию иммунологической абстиненции. Все это свидетельствует о необходимости применения иммунокорригирукщях средств в комплексной тералки больных алкоголизмом. Применение нейротропных иммунокорригиру-кздих средств с различными механизмами действия показывает, что вторичный иммунодефицит при алкогольной интоксикации подверга-

ется коррекции и, что самое важное, нормализация показателей иммунитета при применении нейротропных иммуномодуляторов сопровождается снижением алкогольной мотивации. Это свидетельствует о тесной взаимозависимости нарушений деятельности нервной и иммунной систем при алкоголизме, о их взаиморегулирующих связях. В настоящее время можно сказать, что ведущим звеном в механизмах развития алкогольной зависимости и алкоголизма могут быть нарушения нейроиммунных механизмов. Главным результатом настоящей работы является открытие неизвестного ранее защитного иммунологического механизма, способного противодействовать развитию физической зависимости от алкоголя. Впервые установлено образование аутоантител к нейромедиаторам (СТ и НА), противодействующих генетически детерминированному влечению к алкоголю и подавляющих (ослабляющих) физическую зависимость от алкоголя.

Экспериментальные данные, свидетельствующие о возможности купирования алкогольной мотивации и абстинентного синдрома в результате пассивной иммунизации антителами к нейромедиаторам, в особенности антителами к серотонину, открывают перспективу специфической иммунотерапии алкоголизма, использования иммуноглобулинов человека, содержащих антитела к серотонину, для купирования тяжелых алкогольных синдромов, таких как абстиненция, -делирий и др. Возможность аффективного вмешательства в течение различных патологических процессов с помощью антител к нейромедиаторам, усиленную продукцию которых обеспечивает применение стабильных, ковалентно связанных конъюгированных антигенов, становится одним из перспективных направлений нейроиммунопатологии.

ВЫВОДУ:

1. При длительном приеме алкоголя и алкоголизме развивается нейрогенный иммунодефицит, что проявляется в снижении продукции антител, ослаблении клеточных реакций, угнетении комплементарной, бактерицидной и лизоцимной активности сыворотки крови и фагоцитарной активности макрофагов и нейтрофи-лов, а также в усилении этих нарушений вслед за прекращением приема алкоголя.

2. Установлено наличие обратной корреляционной зависимости ;,:ежду лредраположенностью к потреблению алкоголя и чувстЕи-етельностью иммунной систе.чы к действию этанола. Животные с высоким уровнем алкогольной мотивации характеризуются при длительном введении алкоголя усилением иммунного ответа на Т-зависимые антигены и гипоактивностыэ антигенспецифических и конА индуцированных Т-супрессоров, мыши с низким уровнем алкогольной мотивации характеризуются снижением продукции антител на Т-зависимые антигены ,и гиперактивацией Т-супрессоров.

3. В процессе хронической алкоголизации у животных, предрасположенных к потреблению алкоголя, происходит усиленное образование антител к серотонину и норадреналину, что приводит к торможению алкогольной мотивации. Аналогичная зависимость меж-

• ду выраженной продукцией антител к нейромедиаторам и более

\

благоприятным течением болезни выявлена и у больных хроническим алкоголизмом.

4. В экспериментах на животных установлено защитное действие .антител к нейромедиаторам. (серотонину,. норадреналину), тормозящих в результате активной или пассивной иммунизации развитие алкогольной зависимости - снижение потребления его, угнетение абстинентного синдрома.

5. Использование нейроиммуномодуляторав, таких как фрагменты субстанции Р, спленопентин, витамин Е, приводит, с одной стороны, к нормализации иммунного статуса у животных, подвергнутых длительной алкоголизации, с другой стороны, все использованные препараты выраженно подавляют алкогольную мотивации у генетически предрасположенных к потреблению алкоголя животных.

6. Установлено, что комплексная патогенетическая терапия (сочетанное применение малых доз галоперидола, феназепама и оксибутирата лития), -базирующаяся на теории генераторных, де-терминантных и системных механизмов различных, в том числе, дофаминзависимых форм нейропатологии, приводит к нормализации психического и иммунологического статуса у Сольных хроническим алкоголизмом.

7. Материалы проведенных экспериментальных и клинических исследований свидетельствуют о существенной роли механизмов нарушений регуляции взаимодействия нервной и иммунной систем в патогенезе алкоголизма, прежде всего об активном участии иммунной системы в регуляции нейропсихических процессов формирования зависимости от алкоголя.

СПИСОК ОСНОВНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕШ ДИССЕРТАЦИИ:

1. Нарушения иммунореактивности при алкогольной интоксикации и их коррекция левамизолом и обзидаком // Биохимия алкоголизма. Минск, Наука и техника, - 1980. - С. 61 ( в соавт. с Е А. Евсеевым, В. Г. Фоминой, М. А. Аскеровым ).

2. Показатели неспецифической резистентности у крыс -"потенциальных алкоголиков" // Тез. докл. конф. молодых ученых-медиков, посвященной 60-летию образования СССР. - Рига, 1982. - С. 41-42 ( в соавт. с А. Б. Камповым-Полевым ).

3. Иммунодепрессивное, противовоспалительное действие этанола и развитие повышенной чувствительности к нему лейкоцитов крови и тучных клеток крыс // Иммунология. - 1983. - N 2. - С. 60-63 ( в соавт. с ЕЛ Евсеевым, Е Г. Фоминой, Т. И. Толого-новым, Я А. Аскеровым ).

4. Иммунобиологические проявления действия алкоголя на организм // Виологичесюте основы алкоголизма. М., 1984. - С. 187-194 ( в соавт. с Е А. Евсеевым, Е Г. Фоминой, Т. И. Тологоно-вым, Е А. Аскеровым ).

5. Нарушения иммунореактивности при алкогольной интоксикации у квотных с различным предпочтением этанола // Патол. физиол. и эксперим. терапия. - 1985. - N 3. - С. 59-63.

6. Антитела к нейромедиаторам - модуляторы иммунопатологических и поведенческих реакций // Нейрогуморальная регуляция иммунного гомеостаза, Д., 1986. - С. 107-108 ( в соавт. с В. А. Евсеевым, С. Е Катаевой, Л. А. Башаровой, А. Е Мартыненко, М. Е Мартыненко ).

7. Показатели неспецифической резистентности и иммунный ответ к эритроцитам барана у крыс с различными уровнями изначальной алкогольной мотивации // Рукопись, депонирована в ВИНИТИ 25.03.86, N 1985-В ( в соавт. с Е Г. Фоминой, А. Е Кайловым-Полевым, Ю. Е Е/ровым, Е А. Евсеевым ).

8. Подавление потребления алкоголя при индукции синтеза антител к серотонину // Фармакология и токсикология. - 1987. -N 2. ' - С. 57-58 С в соавт. с Л. А. Башаровой, И. Е Ковалевым, Е А. Евсеевым ).

-Ь4-

9. Применение витаминов А и Е для коррекции иммунных нарушений при хронической алкогольной интоксикации // Вопросы питания. - 1987. - N 4. - С. 50-52 (в соавт. с К. Д.Плецитым).

10. Антитела к норадреналину и серотонину у Сольных хроническим- алкоголизмом■и их- связь с обменом биогенных аминов // • Тез. Съезда^ невропатологов и психиатров Белоруссии, Шнек, 1986. - С. 187-188 С в соавт. с Е А. Евсеевым, В. Г. Фоминой, Е В. Бобковой, А. Е. Фаст, Л ИДесиным, Е И. Ревенко ).

11. Антитела к катехоламинам и серотонину при алкогольной интоксикации у животных с различной предрасположенностью к развитию экспериментального алкоголизма // Еюлл. эксперт,!, би-ол. и мед.. - 1987. - N 12. - С. 672-674 ( в соавт. в В. Г.Фоминой) .

12. Иммунологическая и клинико-биохимическая характеристик больных алкоголизмом в процессе лечения в условиях наркологического отделения при промышленном предприятии // Иммунология. - 1987. - К б. - С. 80-81 ( в соавт. с В. А. Евсеевым, Е. А. Громовой, Е Г. Фоминой, ЕВ. Бобковой, А. Е. Фаст, Е И. Ревенко, ЛИ. Хесиным, И. ¡а Ыетлиным ).

13. Взаимосвязь нарушений фагоцитарной активности перито-неальных макрофагов с развитием повышенной чувствительности к этанолу при хронической алкогольной интоксикации у животных с разным уровнем предрасположенности к потреблению алкоголя // Патол. физиол. и экперям. терапия. - 1988. - N 2. - С. 55-58 (

' в соавт. с • Е Г. Фоминой, Е А. Евсеевым ).

14. Дальнейшее изучение иммунокорригирующих свойств витаминов А и Е при экспериментальной .хронической алкогольной интоксикации // Вопросы питания. - 1988. - N 3. - С. 45-48 ( в соавт. с К. Д. Плецитым, Е Г. Фоминой ).

15. Антитела к нейромедиаторам, вторичные иммунодефициты, алкоголизм и старение // Тез. докл. V съезда геронтологов и гериатров. - Киев, 1988. - ч. 1. - С. 220 ( в соавт. с Е А. Евсеевым, К Г. Фоминой, Ей. Ревенко, И. И. Хесиным ).

16. Еейропатофизиологический и нейроиммунопатологический подходы к разработке принципов патогенетической терапии алкоголизма // Тез. докл." международного симпозиума "Новые подходы к лечению алкоголизма, наркоманий и токсикоманий". - Гагра,

1989. - С. 12-13 С в соавт. с Г. Н. Крыжановским, В. А. Евсеевым, Е Г.«Хтаздной ).

.17. Кммуногоррз1Гирушиэ сзойства фрагментов субстанции Р при стрессе и алкогольной интоксикации // Стресс и иммунитет (психонейроиммунология), JL - 1989. - С. 117 ( в соавт. с Е А. Евсеевым, Е Г. Фоминой, К. Д. Шецитым, Ю.Одаркк).

18. ' Роль антител к нейромедиаторам в изменении алкогольной мотивации у мышей // Тез. докл. IV Всесоюзного съезда патофизиологов, Кишенев, - 1989. - т. 1. - С. 19 ( в соавт. с Е Г. Фоминой ).

19. Особенности изменения иммунореактивности при двух формах течения алкоголизма (по материалам наркологического диспансера при промышленном предприятии) // Иммунология. -1989. - N 5. - С. 77-78 ( в соавт. с НА.Евсеевым, &Г.Фоминой, U. А. Аскеровым, И. И. Лесиным, Е Л Ревенко ).

20. Влияние алкоголя, наркотиков и табакокурения на иммунную систему. ИТОГИ НАУКИ И ТЕХНИКИ, сер. Иммунология т. 20, М. - 1989. - 131 С. ( в соавт. с К. Д. Ллецитым ).

21. Нарушение иммунной системы у больных хроническим ал- ' коголизмом // Тез. докл. I Всесоюзного съезда иммунологов, Сочи, 1989. - т. 2. - С. 191 ( з соавт. с В. Г. Ложной, Л И. Хеси-ным, В. Л Резенко ).

22. Особенности изменения иммунореактивности при двух формах течения алкоголизма //Вопросы социальной и клинической психиатрии и наркологии, М. , 1989. - ч. 2. - С. 350-354 ( в соазт. с II И. Хескяым, а И. Ревенко; Е Г. Евсеевым, В. Г. Фоминой, М. А. Аскеровым ).

23. Neuro-irraiunopathologic approach to the development of -principles for pathogenetic treatment of alcoholism. 1st Intern. Congress ISUIM (4th Intern. Worksshop on neuroimunornodulation) Florence, Italy, 1990, Fortessa da . Basso Abstracts P. 585 ( в соавт. cB.il Евсеевым, E Г. Фоминой ).

24. Использование антител к нейромедиаторам для коррекции ■ иммунных нарушений при алкогольной интоксикации //Взаимодействие нервной и иммунной'систем, -JL , Ростов-на-Дону, 1990. - С. , 80 ( в соавт. с Е Г. Фоминой, JL А. Башаровой ).

■ 25. Effect, of SP1-4, SPl-4dodecylamine and SP5-11 on

immune defence mechanisms of control and alcoholic mice -comparison with effects on alcohol motivation. 8th Meeting of European Society for Neurochemistry, Leipsig, GDR, 1990.-Subjects P. 033 ( в соавт. с В. Г. Фоминой, ЕОэме, ЕОдарюк ).

26. Применение фрагментов ■ субстанции' Р для экспериментальной терапии алкоголизма // Патол. физиол. и эксперим. терапия. - 1990. - N 6. - С. 30-32 ( в соавт. с Е А. Евсеевым, R Г. Фоминой, ЕОеме, ЕОдарюк ).

27. Fragments of substance Р as drugs of irrmuno- and psychoneurocorrection. Constituent Congress international Society for Pathophysiology, Moscow, 1991. - P. 188 ( в соавт. с R Г. Фоминой, К Д. Пдецитым, RA. Евсеевым,' ЕОдарюк, II Оемэ ).

28. Спленопентин - модулятор иммунных и поведенческих реакций при вторичном иммунодефицитном состоянии, вызванном экспериментальным алкоголизмом // Билл, эксперим. биол. и мед.. -19Э1. - N 6. - С. 637-639 ( в соавт. с В. А. Евсеевым, R Г. Фоминой, ЕОдарюк, Г. Репке, П. Оеме, К. Форнер ).

29. Вшшние пассивного введения антител к серотонину и катехоламинам на потребление алкоголя мышами С57В1/6 при экспериментальном алкоголизме // Бюлл. эксперим. биол. и мед.. 1991. - N 7. - С. 33-34 ( в соавт. с R А. Евсеевы).!, R Г. Фоминой, Л А.Ветрилэ ).

30. Effect of SP1-4 and SP5-11 on immune defence mechanisms of control and alcoholic mice. Abstr. 5th Int. Conf. Iirenunopharmacol. , Tampa, . Fla 26-30 tey 1991. Int. J. Immunopharmacol. - 1991. - v. 13. - N 6 - P. 815 ( в соавт. с R Г.Фоминой, ЕОеме, ЕОдарюк ).

31. Антитела к нейромедиаторам - регуляторы иммунологических реакций // Тез. докл. I съезда иммунологов России, Новосибирск, 1992. - С. 129 С в соавт. с R Г. Фоминой ).

32. Влияние антител к серотонину на раавитие алкогольного абстинентного синдрома у мышей линии СБА // Бюлл. эксперим. биол. и мед.. - 1993. - N 12. - С. 582-584 ( в соавт. с R А. Евсеевым, R Г. Фоминой, Л.А.Ветрилэ, КД.Плецитым ).

33. Иммукокоррегируюдай эффект витамина Е при интоксикации этанолом // Вопросы медицинской химии. - 1994. - N 2.-С. 53-55 (в соавт. с К Д. Плецитым, R Г. Фоминой)

1989. - С. 12-13 ( в соавт. с Г. Н. Нрыкановским, В. А. Евсеевым, В. Г. Фоминой ).

17. йммунокорригируюшие свойства фрагментов субстанции Р при стрессе и алкогольной интоксикации // Стресс и иммунитет (психонейроиммунология), JL - 1989. - С. 117 ( в соавт. с В. А. Евсеевым, В. Г. Фоминой, К. Д. Плецитым, Ю-Одаркк ).

18. Роль антител к нейромедиаторам в изменении алкогольной мотивации у мышей // Тез. докл. IV Всесоюзного съезда патофизиологов, Кишенев, - 1989. - т. 1. - С. 19 ( в соавт. с В. Г. Фоминой ).

19. Особенности изменения иммунореактивности при двух формах течения алкоголизма (по материалам наркологического диспансера при промышленном предприятии) // Иммунология. -1989. - N 5. - С. 77-78 ( в соавт. с В. А. Евсеевым, R Г. Фоминой, М. А. Аскеровым, И. JL Хесиным, R К Ревенко ).

20. Влияние алкоголя, наркотиков и табакокурения на им-' мунную систему. ИТОГИ НАУКИ И ТЕХНИКИ, сер. Иммунология т. 20, М. - 1989. - 131 С. ( в соавт. с К. Д. Плецитым ).

21. Нарушение иммунной системы у больных хроническим ал- ' коголиамом // Тез. докл. I Всесоюзного съезда иммунологов, Сочи, 1989. - т. 2. - С. 191 ( з соавт. с В. Г. Фоминой, И. И. Хесиным, В. И. Ревенко ). •• '

22. Особенности изменения иммунореактивностм при двух формах течения алкоголизма //Вопросы социальной и клинической психиатрии и наркологии, М. , 1989. - ч. 2. - С. 350-354 ( в соавт. с JL К Хесиным, В. К Ревенко; В. Г. Евсеевым, В. Г. Фоминой, 11 А. Аскеровым ).

23. Neuro-insnunopathologic approach to the development of . principles for pathogenetic treatment of alcoholism. 1st Intern. Congress ISUIM (4th Intern. Worksshop on neuroirrmnorodulaticn) Florence, Italy, 1S90, • Fortessa da ■ Basso Abstracts P. 585 ( в ссавт. с R А. Евсеевым, R Г. Фоминой ).

24. Использование антител к нейромедиаторам для коррекции • иммунных нарушений при алкогольной интоксикации //Взаимодействие нервной и иммунной систем, .JL , Ростов-на-Дону, 1990. - С. , 80 ( в соавт. с R Г. Фоминой, Л. А. Башаровой ).

• 25. Effect of SP1-4, SPl-4dodecylamine. and SP5-11 on

irmune defence mechanisms of control ana alcoholic mice -comparison v/ith effects on alcohol motivation. 8th Meeting of European Society for Meurocheinistry, Leipsig, 6DR, 1990.-Subjects P. 033 С в соавт. с В. Г. (Еоминой, Е Оеме, ¡0. Одарюк ).

26. Применение фрагментов субстанции Р для экспериментальной терапии алкоголизма // Патол. физиол. и зксперим. терапия. - 1990. - N 6. - С. 30-32 С в соавт. с В. А. Евсеевым, В. Г. Фоминой, Е Оеме, 1Q Одарюк ).

27. Fragments of substance Р as drugs of imir.uno- and psychotteurocorrection. Constituent Congress International Society for Pathophysiology, Moscow, 1991. - P. 188 ( в соавт. с E Г. Фоминой, К Д. Енецитым, R А. Евсеевым, !(1 Одарюк, П. Оемэ ).

28. Спленопентин - модулятор иммунных и поведенческих реакций при вторичном иммунодефицитном состоянии, вызванном экспериментальным алкоголизмом // Бюдл. зксперим. бкол.. и мед.. -1991. - N 6. - С. 637-639 ( в соавт. с В. А. Евсеевым, В. Г. Фоминой, К1 Одарюк, Г. Репке, ЕОеме, К. Форнер ).

29. Влияние пассивного введения антител к серотонину и катехоламинам на потребление алкоголя мышами С57В1/6 при экспериментальном алкоголизме // Бюлл. эксперим. бпол. к мед.. 1991. - N 7. - С. 33-34 ( в соавт. с К А. Евсеевы),'., В. Г. Соминой, JL A-Ветрилэ ).

30. Effect of SP1-4 and SP5-11 on immune defence mechanisms of control and alcoholic mice. Abstr. 5th Int. Conf. Imrnunopharmaco 1. , Tampa, . Fla 26-30 May 1991. Int. J. Immunopharniacol. - 1991. - v. 13. - N 6 - P. 815 ( в соавт. с В. Г. Фоминой, ЕОеме, а Одарюк ).

31. Антитела к нейромедиаторам - регуляторы иммунологических реакций // Тез. докл. I съезда иммунологов России, Новосибирск, 1992. - С. 129 ( в соавт. с В. Г. Соминой ).

32. Влияние антител к серотонину на раавитие алкогольного абстинентного синдрома у мышей линии СВА // Бюлл. эксперим. биол. и мед.. - 199а - N 12. - С. 582-584 ( в соавт. с

B. А. Евсеевым, R Г. Фоминой, JL А. Ветрила, К. Д. Плецитым ).

33. Иммунокоррегируиций эффект витамина Е при интоксикации этанолом // Вопросы медицинской химии. - 1994. - N 2. -

C. 53-55 (в соавт. с К. Д.Плецитым, КГ.Фоминой)