Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Некоторые аспекты в оценке общетоксического и специфического действия препарата Неоаквасепт

Актуальность темы. Проблема освоений новых территорий страны для хозяйственного строительства, выполнения работ в сложных метеорологических условиях обуславливает потребность людей в эффек тивных средствах обеззараживания индивидуальных запасов питьевой воды. Разработка методов и средств, предназначенных для этих целей, является весьма актуальной задачей,

В настоящее время одним из наиболее эффективных методов обеззараживания питьевой воды является химический метод. При этом особое внимание заслуживают препаративные формы дезсредств в виде таблеток, как наиболее удобные и безопасные в применении. К этим препаратам предъявляется ряд весьма строгих требований: высокая антимикробная активность, они но должны сильно изменять органолептические свойства воды, быть эффективными в широком диа пазоне температур в течение небольшого промежутка времени и обла дать низкой токсичностью.

В настоящее время ассортимент используемых препаратов весьма ограничен. Известно, что для этих целей используются дезинфек-танты из различных групп химических соединений (препараты йода, серебра, хлорактивные препараты). В СССР с 1938г. выпускаются таблетки "Пантоцид" на основе хлорамина, которые, несмотря на низкую эффективность, являются единственным табельным средством. В последнее время для обеззараживания воды используются препараты на основе хлорциануратов (Волкова Ж.П. и др. , 1970; Истомина Т.И., йлоренсова К.М., 1971;'Петров В.П., 1971, 1973; Баев В.И., Баранова В.И., Волкова А.И., 1972; Малевская И.А., Колычева Л.И. 1981; Соколова Н.Ф. , Михайлова Л.М., 1981).

Во ШИИДиС была разработана рецептура бактерицидных таблеток "Аквасепт" на основе натриевой соли дихлоризоциануровой кислоты

ДВДЮ» содержащая 4 мг активного хлора и предназначенная для обеззараживания малозагрязненной питьевой воды.

В продолжение этих исследований разработана рецептура таблеток на основе натриевой соли ДХЩ с большим содержанием активного хлора (10 мг Неоаквасепт). Увеличение содержания активного хлора обеспечивало обеззараживание воды с хлорпоглащаемостыо до 5 мг/литр. Кроме того, разработанная рецептура обеспечивала быструю распадаемость таблеток, особенно при низкой температуре, превышающую таковую аналогичных таблеток "Пуритапс11 фирмы " 11 (Англия).

Цель исследование. Изучение некоторых аспектов общетоксических свойств препарата Неоаквасепт, ранее неизученных в эксперименте, а также исследование ряда специфических эффектов с учетом оценки анафилактогенной активности, влияния на репродуктивную функцию крыс самцов, возможности модификации химического канцерогенеза и влияния на рост трансплантируемых опухолей.

Для решения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Изучить некоторые обще токсические свойства препарата Неоаквасепт:

1.1. интегральные показатели (масса тела, поведенческие реакции, морфологический состав периферической крови);

1.2. биохимические показатели крови;

1.3. метаболизм фосфат содержащих соединений печени и селезенки;

Х.4. морфологические изменения внутренних органов.

2. Изучить некоторые виды специфического действия препарата Неоаквасепт :

2.1. анафилактогенную активность;

2.2. влияние на сперматогенез; ,

2.3. влияние на индуцированный химический канцерогенез; д2.4. влияние на рост трансплантируемых опухолей.

3. Обосновать безопасный режим применения препарата Неоаквасепт на основе дозо-временных критериев вредности и комплекса показателей.

Научная новизна.

1. Впервые дана токсикологическая оценка нового препарата Неоаквасепт с углубленной характеристикой как его общетоксических, так и специфических эффектов.

2. Впервые с использованием высокочувствительного метода

31

Р-ЯМР спектроскопии высокого разрешения выявлены ранние нарушения содержания фосфатсодержащих соединений печени и селезенки.

3. Впервые для оценки влияния препарата Неоаквасепт на сперматогенез использован электронно-микроскопический метод изучения синаптонемных комплексов (GK) хромосом половых клеток самцов мышей и показаны их значительные нарушения при воздействии препарата в дозах, превышающих рекомеццованную в 10 раз (20 мг/кг).

4. Впервые в условиях индуцированного уретаном канцерогенеза выявлена слабая промоторная активность Неоаквасепта при 10-ти кратном превышении рекомендованной"дозы (20 мг/кг).

5. На основе дозо-временных критериев и комплекса показателей обоснован безопасный режим применения препарата Неоаквасепт для обеззараживания индивидуальных запасов питьевой воды.

Практическая ценность работы.

1. Экспериментально обоснован безопасный режим применения препарата Неоаквасепт на этапе его практических испытаний и применении^ в практике.

2. Материалы по экспериментальному изучению препарата Неоаквасепт явились основанием для разрешения 3>К МЗ СССР (протокол № II от 10.06.88) и приказа начальника ВМедА им.С.М.Кирова ($> 206 от 01.03.89г.) проведение клинических испытаний.

3. Разработана нормативно-техническая документация на препарат Неоаквасепт для осуществления его промышленного выпуска и применения в практике на основе экспериментальных и клиническ*з*гигиеничес-ких исследований (материалы представлены в ШК МЗ СССР).

На защиту выносятся следующие положения.

1. Характеристика общетоксических и специфических эффектов препарата Неоаквасепт в зависимости от препаративной формы и условий применения.

2. Рекомендации использования высокочувствительных методов исследования для оценки специфических эффектов биоцидов воды близкой химической структуры.

Структура и объем диссертации.

Диссертация изложена на листах машинописи и состоит из введения, обзора литературы, методов исследования и глав собственных исследований, заключения и выводов, списка литературы ( отечественных и зарубежных авторов), содержит таб

-127-ВЫВОДЫ

При токсикологическом исследовании, в, условиях субхронического эксперимента-, выявлены" биохимические; и морфологические; изменения.В: печени: при: применении препарата Неоаквасепт в: дозах, превышающих норму расхода в 3 и 10 раз / 6 и 20 мг/кг соответственн/.

ГУТ

2. Методом Р-ЯМР спектроскопии: высокого) разрешения! выявлены, изменения: метаболизма: фосфатсс^ржащих соединений., пе— ^ чеши при: применении; препарат Неоаквасепт В; дозах, превышающих н норму расхода в 3 и. 10 раз / 6 и 20 мг/кг соответственно/.

3. Не выявлена анафилактогенная активность- у препарата: Неоаквасепт.

4., При: электронно-микроскопическом анализе) тотальных . препаратов, синалтонемных комплексов:-, самцов:, мышей.выявлен мутагенный эффект, препарата Неоаквасепт: в. дозах,, превышающих рекомендовонную норму расхода в. 3 и 10 раз / 6 к 20 мг/кг соответственно?/.

5. В условиях индуцированного канцерогенеза, выявлена слабая промоторная активность препарата Неоаквасепт,: превышающей норму, расхода; в 10 раз / 20 мг/кг /.

6. Не вы я влено; влияние препарата Неоаквасепт на рост трансплантируемы х опухолей у мышей.

7. Дана оценка токсичности и: безопасности; применения препарата Неоаквасепт в условия х острого и субхронического.' эксперимента. Дозу препарата Неоаквасепт 2 мг/кг, соответствующую норме расхода, следует, расценивать как;; безопасную в применении,-, дозу препарата, превы шающую ее. в 3 раза; /6 мг/кк: /как; минимально; действующую, а дозу, превы шающую безопасную в 10 раз / 20 мг/кг /' - как; действующую.

8.; Обоснована^ и рекомендована- к - применению, безопасная бактерицидная норма, расхода препарата Неоаквасепт,

ЗАКЛЮЧЕНИЕ W $ •

Настоящее исследование посвящено оценке токсичности и безопасности применения нового бактерицидного препарата на основе натриевой соли ДХЦК Неоаквасепта, используемого для обеззараживания индивидуальных запасов питьевой воды.

Цель работы состояла в изучении общетоксических и специфических эффектов этого препарата в процессе острого и субхронического эксперимента, позволивших на основе полученных экспериментовьных и клинико-гигиенических данных, а также на основе дозо-временных критериев вредности обосновать безопасный режим применения препарата.

При моделировании токсикологического эксперимента и выборе адекватных методов исследования исходили из требований ФК МЗ СССР к новым лекарственным средствам и специфики применения данного препарата, использование которого предполагается в течение короткого промежутка времени, ограниченным контингентом, в сложных, и не редко экстремальных условиях. Вследствии этого, наше исследование включало изучение как общетоксического действия препарата, так и исследование его специфических эффектов (изучение анафилактогенной активности, канцерогенных свойств в условиях индуцированного бластомогенеза, противоопухолевую активность), а также влияние препарата на течение сперматогенеза.

Первым этапом нашего исследования было изучение общетоксического действия препарата Неоаквасепт в процессе субхронического воздействия. На основе полученных результатов было сделано заключение, что препарат в получаемых дозах и во все сроки обследования не вызывал изменений показателей, характеризующих состояние нервной системы (СПП, СДА, ориентировочные реакции), а также не было зафиксировано изменений морфологического состава перефирической крови (гемоглобин, лейкоциты, эритроциты).

В экспериментах нами было показано, что при воздействии НА в дозах 2 и б мг/кг не было зафиксировано изменений, характеризующих функциональное состояние почек. Тем не менее, почки могут явиться как бы мишенью для НА, т.к. в дозе 20 мг/кг (ЮН) отмечались изменения в содержании белка и хлоридов в моче. Так, на 15 сутки от начала воздействия НА отмечено увеличение содержания белка в моче до 39,9*4,8 мг/мл по сравнению с 28,7*3,2 мг/мл в контроле (р 0,05). Это различие сохранялось и на 45 сутки от начала воздействия НА и исчезало к 60 суткам.

При воздействии НА в дозе 20 мг/кг на 7 сутки отмечалось также увеличение содержания хлоридов в моче: 2,96*0,13 мг/мл в опытной и 1,97*0,15 мг/мл - в контрольной группе (р<0,05). Аналогичный эффект наблюдали и на 60 день воздействия, но к концу третьего месяца показатель нормализовался и оставался на уровне контрольных животных до конца эксперимента.

Анализ биохимимических показателей, характеризиующих состояние печени, выявил следующее. В дозах 2 и 6 мг/кг НА не оказывал токсического действия на печень, так как колебал ния активности изучаемых печеночных ферментов в сыворотке крови (AJIT, ACT, ЛДГ, глюкоза Б, 4^-амилаза) практически не выходили за пределы физиологических отклонений, отмеченных в контроле. Тем, не менее, в дозе 20 мг/кг наблюдались транзи-торные нарушения активности ферментов. Так, на 15 сутки от начала воздействия отмечено повышение активности АЛТ - 74,7* 3,75 Е/л в опыте и 60,9*3,97 Е/л в контроле (р,. С 0,05).

На втором и третьем месяцах от начала воздействия НА отмечено достоверное снижение активности ЛДГ, выходящее за пределы физиологических колебаний в контроле. В течение восстановительного периода активность ЛДГ полностью восстановилась.

В дозе 20 мг/кг НА отмечено также повышение ACT на 7 сутки от начала воздействия до 375*16,7 Е/л по сравнению с 271*19,4 Е/л в контрольной группе (р ^ 0,05), а также увеличение активности ЛДГ на 60 сутки до 3878*244 Е/л по сравнению с 2624*199 Е/л в контрольной группе (р-<0,05), и к третьему месяцу - до 3769*219 Е/л по сравнению с контролем -2620*205 Е/л (р^0,05). В восстановительном периоде значение всех биохимических показателей в дозах НА 6 и 20 мг/кг практически не выходили за рамки физиологических показателей контроля.

При гистологическом исследовании внутренних органов установлено, что только в дозе 20 мг/кг НА приводил к структурным изменениям тканей печени, почек и желудка. В конце восста< новительного периода морфологические изменения частично сохранялись. Введение НА в дозе 6 мг/кг вызывало сходные морфологические изменения в структурных элементах печени, почек и желудка. Однако они были менее выражены, наступали в более поздние сроки и полностью восстанавливались к 30 суткам эксперимента. Воздействие НА в рекомендованном режиме применения не привело к развитию в организме животных морфологических изменений во все сроки обследования по сравнению с контролем.

Таким образом, из результатов субхронического эксперимента следует, что дозу НА 2 мг/кг, соответствующую норме расхода, следует расценивать как безопасную в применении, а дозу препарата, превышающую ее в 3 раза (6 мг/кг) - как минимально действующую, учитывая, что при воздействии НА в дозе 20 мг/кг (ЮН) выявлены выраженные нарушения функционального нарушения состояния организма, а также и в большинстве случаев стойкие структурные изменения в органах, считали, что указанная доза НА является действующей.

Можно предположить, что повышение или снижение активности печеночных ферментов в крови,как и белка и хлоридов в моче, в отдельные дни обследования связано с соответствующими колебаниями концентрации препарата в организме. Следует отметить, что, по-видимому, различные системы организма адаптируются к воздействию НА в разные сроки. Иными словами, проявление адаптационного процесса не носит линейного характера, поскольку в разные периоды воздействия происходит усиление или ослабление одной и той же системы, т.е. происходит формирование адаптации, как процесса, идущего волнообразно /34,35/.

Кроме биохимического и гистологического изучения печени и селезенки при воздействии препарата НА функциональное сосот тояние этих органов было оценено с применением метода Р-ЯМР-спектроскопии высокого разрешения .в процессе острого и субхронического воздействия. Метод позволяет проследить за метаболическими процессами в структурно и функционально неизмененном органе (56, 66, 80).

При однократном пероральном введении препарата крысам в дозе, равной 1/2 ДЦзд, через 6 часов от начала ^эксперимента наблюдалось максимальное отклонение концентраций фосфатных соединений от нормальных уровней (приблизительно в 2-2,5 раза) , которые в дальнейшем, через 12 часов от начала эксперимента, нормализовались. Концентрации аденозиндифосфорной и аденозинтрифосфорной кислот (АТФ и АДр), фосфомоноэфиров (<ШЭ), а также значение внутриклеточного рН гепатоцитов отклонялись в противоположную сторону, что, очевидно, можно объяснить активизацией компенсаторных процессов в организме.

Выявленные закономерности, по-видимому, характеризуют общее токсическое действие препарата НА на клетки печени и селезенки.

Следует отметить возрастание и последующее падение уровней неорганического фосфата (Рб ) и ФМЭ, рост выше уровня нормы концентраций АТФ и щелочной сдвиг рН. Падение АТФ в первые часы отражает различные экстремальные воздействия на организм, а также увеличивающуюся потребность организма в энергии, необходимую для перестройки всех клеточных процессов и адаптации к новым условиям. Последующий максимум активности АТФ через 6 часов эксперимента явился следствием активации энергосистем печени.

При однократном внутрижелудочном введении препарата НА в дозе 1/2 ЛДзд через 3 и 24 часа наблюдались глубокие нарушения энергетики селезенки. В частности, уже через 12 часов от начала воздействия практически исчезали сигналы нукяеотид-трифосфатов и резко возрос сигнал Рб . В дальнейшем исчезли все сигналы в спектрах.

Поскольку от введения препарата в высоких дозах наблюдался ярко выраженный токсический эффект, целью наших дальнейших исследований являлось изучение нарушений фосфатного метаболизма печени и селезенки в условиях субхронического воздействия НА. Первая точка, снятая через 15 суток от начала воздействия, указала на снижение концентраций Шд и Р во всех экспериментальных группах, что, по-видимому, связано с нарушением липидного метаболизма. По всем показателям можно отметить, что на 30-е сутки от начала воздействия НА. в дозе 20 мг/кг (ЮН) наблюдаются наиболее выраженные изменения от контроля. К 45 суткам происходило возвращение к уровню нормы ФМЭ V-■ • и Р-^ . Кривые АТФ и внутриклеточного рН имели колебательный характер. При этом, также как и в остром опыте, нормализация этих показателей происходила к 90 суткам от начала воздействия. Следует отметить, что наблюдаемое отклонение внутриклеточного рН от его значения в контроле после восстановительного периода составило немее 0,1, что, конечно, не существенно для жизнедеятельности организма. Что касается неполного восстановления АТФ и АДФ, то, по-видимому, при воздействии НА в дозе 20 мг/кг продолжительность восстановительного периода в 30 суток не было достаточно для.полной нормализации функций печени. Полученные данные позволяют сделать вывод о том, что потребление НА животными в течение 90 суток приводит к нарушению фосфатного обмена, который лишь частично нормализовался при адаптации организма к его токсическому действию и в течение восстановительного периода. При субхроническом воздействии НА в рекомендованном режиме обеззараживания (2 мг/кг) нарушения в печени носили не ярко выраженный, транзиторный характер, и в основные сроки обследования, а также в восстановительный период не выходили за рамки физиологических колебаний в контроле. Сказанное позволяет заключить, что рекомендованную норму расхода (2 мг/кг) следует считать безопасной в применении,, что совпадает с ранее полученными результатами.

Для оценки влияния НА на процесс сперматогенеза и репродуктивную функцию нами впервые был использован электронномикроскопический ixrr анализ хромосомных перестроек в половых клетках животных /'(7,63,88).

Вопрос о возможном влиянии препарата НА на мейотические хромосомы мышей был первоначально выяснен в максимально жестких условиях, т.е. при внутрижелудочном введении препарата в МПД. У затравленных самцов, забитых на седбмые сутки, обнаружены уни- и мультивалентны в пахитенных клетках; чаще, чем в контроле, наблюдалась ассоциация полового бивалента с аутосомными бивалентами, что, как известно, ведет к трукция хромосом и дегенерация сперматоцитов в целом, которую можно расценить как токсическое действие препарата.

Анализ препаратов животных, получавших НА в течение трех месяцев в рекомендованном режиме обеззараживания (2 мг/ кг) показал, что наиболее распространенным типом нарушения от нормального течения мейоза было наличие ассоциаций оси Х-хромосом с аутосомными бивалентами. Кроме того, в единичных клетках обнаружено отсутствие У-хромосом и преждевременный десинапсис половых хромосом.

У животных, получавших препарат НА в дозе 6 мг/кг (ЗН), в субхроническом эксперименте наблюдались более значительные изменения в структуре и поведении СК. Так, помимо клеток, в которых наблюдалась ассоциация полового бивалента с внешне нормальными аутосомными бивалентами, встречались клетки, в которых с половым бивалентом ассоциировали и гетероморфные аутосомные биваленты с ассинаптирующими теломерными концами хромосом, которые формировали концевые замкнутые структуры. Кроме того, в клетках животных этой группы встречались клетки с кариотипом ХО. аресту мейоза этих животных выявилась дес

У животных контрольных групп нарушения I типа встречались реже, чем у животных, получавших НА в дозах 2 мг/кг (Н) и б мг/кг (ЗН). Наличие таких клеток у контрольных животных и незначительное увеличение их числа у подопытных животных данной серии эксперимента согласуется с представлениями о пахитене как о стадии , на которой происходит селекция клеток, не только при действии мутагенов, но и в норме, и о незначительном росте мутаций в процессе онтогенеза.

На диаграмме продемонстрированы типы встречавшихся отклонений от нормального течения профазы I мейоза при анализе тотальных препаратов GK самцов пяти экспериментальных групп в процессе субхронического эксперимента с НА.

При превышении рекомендованной нормы расхода в 3 раза (6 мг/кг) уровень I типа возрос приблизительно на 10% по сравнению с животными, получавшими НА в рекомендованном режиме. После однократного введения МПД процент таких нарушений был еще выше.

У животных этой группы проявления таких ассоциаций возможно обусловлено нарушениями в структуре осевых элементов СК.

Наличий ассоциаций полового бивалента (ХУ) с аутосомным : бивалентом, как известно, приводит к аресту на стадии пахитены и обусловлено активацией Х-хромосом в ответ на нарушении синапсиса аутосомных хромосом / 72/.

Второй тип нарушений встречался в незначительном количестве и только у животных длительно получавших препарат как в дозе 2 мг/кг, так и в дозе б мг/кг. Нарушения этого типа следует рассматривать как нарушения, имевшие место до наступления стадии мейоза. Очевидно, отсутствие У-хромосом является следствием неправильного расхождения хромосом в процессе предмейотического деления гониальных клеток. Отсутствие нарушения этого типа у животных, забитых на седьмые сутки после однократного введения МПД НА,объясняется тем, что за 7 суток клекти, прошедшие гониальное развитие, не достигли стадии пахитены.

Нарушения третьего типа встречались у животных, получавших НА в дозах 2 и б мг/кг. Понятно, что нарушения такого типа могут приводить к формированию патологических зигот и плодов с кариотипом ХО и ХХУ. Поэтому одной из рекомендаций в отношении применения препарата должно быть исключение возможности зачатия в период его приема.

Нарушения четвертого типа встречались у животных, получавших препарат в дозе 6 мг/кг, и отмечены только у двух самцов - 4,4% и 4,5% клетках. Отсутствие гетероморфных бивалентов других групп позволяет предположить, что доза НА б мг/кг может приводить к формированию транслокаций хромосом на стадиях, предшествующих мейозу.

Формирование уни- мульвалентов хромосом (нарушения У и У1 типов) наблюдались лишь при введении препарата в МПД. Так : как указанные нарушения наблюдались на стадиях поздней и ранней пахитены, т.е. в тех клетках, в которых в момент введения препарата СК был уже сформирован, то полученные данные могут свидетельствовать о влиянии НА на пахитенные клетки. Неясным остается вопрос о том, взаимодействует ли препарат непосредственно с компонентами СК или нарушения в его структуре обусловлены его общим токсическим действием на клетки семенника, дегенерация которых отмечена у животных этой группы. Понятно, что гибель клеток на стадии пахитены должна приводить к снижению плодовитости животных.

Таким образом, наши данные свидетельствуют о том, что при использовании НА в рекомендованном режиме обеззараживания (2 мг/кг) существует незначительная опасность формирования нарушений в структуре хромосом, которая в значительной мере нейтрализуется посредством ареста на стадии пахитены.

Специально проведенная нами оценка гонадотройного эффекта НА в хроническом 6-ти месячном эксперименте в дозах 2 и 6 мг/кг не выявила отчетливого повреждения гонад у эксперимен- ; тальных животных. Полученные от подопытных самцов потомство первого поколения (Fj-) было без признаков нарушения развития.

В качестве модели для оценки канцерогенных свойств препарата НА был выбран индуцированный уретаном бластомогенез в легких мышй /15 , 67 , 68, 100, 101/. В эксперименте был выявлен выраженный канцерогенный эффект уретана, при введении которого опухоли в легких у животных были обнаружены у 100% особей. При этом обращает на себя внимание более выраженная канцерогенно сть уретана для мышей линии А по сравнению с линией ВА1В/с, так как при меньшей продолжительности опыта (118 и 163 дня соответственно) все исследованные параметры были выше у мышей линии А. В частности, суммарное количество аденом на мышь у линии А и ВА1В/с составило 15,9 и 10,1, а канцерогенный индекс - 1347 и 620 соответственно.

При введении препарата НА в дозах 2, 6 и 20 мг/кг не выявлено его влияния на все исследованные параметры бластомогенеза в сравнении с контролем. Аденомы были обнаружены у 100% животных при практически одинаковш количестве мышей с аденомами большого размера ( 2 мм в диаметре). Среднее количество аденом на мышь (суммарное и отдельно больших аденом) не изменялось по сравнению с контролем (во всех случаях Р 0,05). Максимальное изменение канцерогенного индекса в опытных группах животных по сравнению с контролем составило только 27%.

При введении препарата в дозах 2 и б мг/кг не было выявлено его влияния на процессы бластомогенеза уретана. В то же время, при дозе 20 мг/кг (ЮН) отмечается почти двухкратное увеличение числа животных с аденомами большого размера - с 2,0 до 4,3 мм (р^ 0,02), хотя другие показатели оставались практически без изменений.

Различия в воздействии препарата НА на разные параметры бластомогенеза уретана могут указывать на его различную эффективность в отношении разных стадий канцерогенного процесса. Как известно, первым этапом канцерогенеза является стадия инициации, вторым - стадия промоции /70, 108/.

На стадии инициации происходит трансформация нормальной клетки в опухолевую, а на стадии промоции - размножение опухолевых клеток, образование мелких; затем крупных узлов. По нашему мнению, разные показатели, оцененные в работе, свидетельствуют об интенсивности различных процессов бластомогенеза уретана. Процент животных с аденомами, суммарный показатель среднего количества аденом всех размеров на мышь и канцерогенный индекс характеризуют интенсивность стадии промоции, тогда как среднее количество аденом ша мышь указывает на интенсивность роста опухолевых клеток, т.е. на интенсивность стадии промоции. Именно по этому показателю и было отмечено стимулирующее воздействие препарата на бластомогенез уретана.

Это позволяет сделать вывод о том, что препарат НА может стимулировать процесс канцерогенеза уретана и как промотор может быть отнесен к фактору канцерогенного риска. Однако промоторную активность препарата нельзя признать выраженной, так как она проявилась незначительно только на одной из изученных линий животных (линия А) при максимальной дозе препарата 20 мг/кг.

По классификации факторов окружающей среды,опасных для здоровья человека, предложенной Н.Н.Литвиновым и Ю.И.Прокопенко /198//, препарата НА может быть отнесен к группе веществ, • создающих условия развития заболевания, по степени выраженности модифицирующего эффекта - к слабым модификаторам. Тем не менее, полученные результаты указывают на то, что применение препарата НА для обеззараживания индивидуальных запасов питьевой воды в очагах.повышенного риска нежелательно. При этом важно подчеркнуть, что опасным может быть использование доз . НА, существенно превышающих норму его расхода.

Выявленная промоторная активность препарата НА побудила нас исследовать его влияние на рост трансплантированных опухолей у мышей. При этом теоретически можно было ожидать как его стимулирующее, так и ингибирующее действие. Первое предположение следует из известного факта о том, что большинство соединений, обладающих промоторной активностью, являются стимуляторами пролифирации трансформированных клеток /65, 74, 75, 76/. Второе - данные о том, что большинство противоопухолевых соединений, ингибирующих рост опухолей, обладают как канцерогенной, так и мутагенной активностью / 71, 73, 79, 103, 105, 107/.

Показано, что препарат НА в 1/2 МЦЦ, в рекомендованном режиме применения (2 мг/кг) и 10-ти кратном его превышении (20 мг/кг) не повлиял на рост гемобластоза а, лейкоза Р388, а также асцитного и солидного вариантов эмбриокарциномы: во всех случаях средняя продолжительность жизни контрольных животных (мышей), .получавших препарат НА, была практически одинаковой (р 0,05).

Следует особо подчеркнуть условия проведения эксперимента. Во-первых, использовался диапазон доз НА , включая очень высокие - 1/2 МГЩ. и 10-кратно завышенная норма расхода (20 мг/кг). Во-вторых, введение препарата начинали уже за 2 дня до трансплантации опухолей, а при однократном введении препарата - в день их трансплантации. Обычно же в скриннинговых химиотерапевтических экспениментах исследуемый препарат вводят через 24 и 48 часов после трансплантации опухоли. Иными словами, можно говорить об отсутствии влияния препарата НА на рост трансплантированных опухолей даже при создании наиболее благоприятных условий для возможности его реализации.

Полученные результаты в ходе изучения общетоксического действия препарата НА по комплексу методов исследования и принимаемыё; во внимание результаты экспериментов по оценке его специфических эффектов было дано разрешение на проведение клинических испытаний на добровольцах в рекомендованном режиме (3 табл./чел./сутки) в течение I месяца.

Клинические испытания проводились в соответствии с разработанной нами программой исследований на 67 добровольцах, включающих оценку органолептических свойств обработанной Нео-аквасептом воды и состояния их здоровья.

На основании клинических испытаний препарата Неоаквасепт у добровольцев не были выявлены изменения в состоянии здоровья а также жалобы на вкусовые качества обработанной воды. Г Исходя из полученных результатов препарат Неоаквасепт был рекомеван на промышленный выпуск и применение в практике здравоохранения. Материалы по препарату Неоаквасепт передан для рассмотрения в Фармкомитет МЗ СССР в июле 1990 г.

Проведенная научно-исследовательская работа позволила на примере препарата Неоаквасепт предложить методологию изучения препаратов подобного назначения, а также набор современных высокочувствительных методов исследования для оценки общетоксических и специфических эффектов на этапе доклинического исследования.