Автореферат и диссертация по медицине (14.00.07) на тему:К обоснованию критериев гигиенической оценки и нормирования биологически активных промышленных препаратов

/У

/ /

ЛЕНИНГРАДСКИЙ САНИТАРНО-ГИГИЕНИЧЕСКИЙ МЕДИЦИНСКИЙ ИНСТИТУТ

На правах рукописи КВЯТКОВСКАЯ Изабелла Яковлевна

К ОБОСНОВАНИЮ КРИТЕРИЕВ ГИГИЕНИЧЕСКОЙ ОЦЕНКИ и НОРМИРОВАНИЯ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ПРОМЫШЛЕННЫХ ПРЕПАРАТОВ

14.00.07 — Гигиена

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соисканне ученой степени кандидата медицинских наук

Ленинград 1981

| .Лчи.* |

Работа выполнена в Отделе гигиены и профзаболеваний ЦНИЛ Рижского медицинского института и на кафедре микробиологии Тартусского государственного университета»

НАУЧНЫЕ РУКОВОДИТЕЛИ:

Доктор медицинских наук, профессор Л.И.Иарайлет}

Доктор медицинских наук, профессор А.А.Ленцнер

ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ: Доктор медицинских наук, доцент

Е.А.Мельникова

Доктор медацинеких наук, профессор . Г.В.Селюжицкий

Ведущее учреждение - Ленинградский научно-исследова1: мьский институт гигиены труда и профессиональных заболеваний.

Защита диссертации состоится 1982 года

б _ часов на заседании Специализированного Ученого

Совета Д.064.21.01 при Ленинградском санитарно-гигиеническом медицинском институте (195067 Ленинград, Пискаревский пр.,47)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института. Автореферат разослан 1982 года

Ученый секретарь Специализированного Ученого, совета доктор медицинских наук,

профессор Е.А.Лебедева

II-. я-т.-,".*;

' ' , • Ь

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы.На современном этапе научно-технического прогресса, в условиях интенсивного применения во многих отраслях социалистического народного хозяйства биологически активных препаратов (антибиотики, ферменты, различные горновые добавки, биологические средства защиты растений и т.д.) нередко возникает реальная опасность вредного воздействия этих веществ на организм работающих. С каждым годом растет процент рабочих, занятых в микробиологической и других, близких к последней, отраслях промышленности.

Как известно,советским гигиенистам принадлежит приори-.тет а разработке принципов, критериев и методов гигиенического нормирования различных факторов окружающей среды. В значительной мере это откосится к новым химиче<хим соединениям, обладающим подчас высокой степенью токсичности, В отношении препаратов микробиологического происхождения аспрось! гигиенической оценки и нормирования их во иногом требует ешо дальнейшей разработки. К таким вопросам, в частности, относится подбор адекватных критериев оценки безопасности и ксэЬ Фщиента паласа в целях гигиенического ограничения допустимого содержания указанных выше веществ в воздухе рабочей зоны (И'.В.Саноцкий, ¡{.К.Сидоров, 1975).

Б "Основных направлениях эионочичаы'с^о и социального развитии СССР на 19Ы-1Р85 пр. и на период до 11-90 го;:да, принятых на ХХУ1 съезде КПСС, м/итсно шачигм-во шь

- г -

производство антибиотиков для кормовых и ветеринарных целей, микробиологических средств защиты растений, ферментных препа ратов, бактериальных; удобрений. Увеличение выпуска продукция микробиологической промышленности в 1,8-1,9 раза, предусмотренное на текущую пятилетку, обусловлено все расширяющимся применением препаратов микробного синтеза.

Большой удельный вес в ассортименте последних составляют антибактериальные препараты. Как известно, антибиотики и дру гие антибактериальные вещества, в частности, нитрофураны, ок. зывают побочные действия в процессе их применения с лечебной целью. Но эти данные не могут быть механически перенесены в область контакта работающих в процессе производства. Пути ПО' ступлэния в организм и длительность воздействия препарата, его дозировки не соответствуют таковым в условиях клиники. Кроме того, исследования действия биологических препаратов с позиций гигиены труда должно проводиться на здоровом организ: а не на больном.

Особо следует подчеркнуть, что поскольку производство лекарственных антибиотиков широко распространено, значителык возрос в последние годы интерес к гигиеническим аспектам их влияния на организм (Л.И.Израйлет, 1970; Г.В.Штейнберг, 1571; Е.Б.Алексеев, 1975; И.Н.Иачтите, 1978; Л.'.':.Краснокутокая, 1979). Что же касается антибиотиков, применяемых вне медицинских целей, а также биологических средств заг.нть: растений, йерчэтных препаратов, то сведения о них малочисленны (Е.А. Мельникова, 1977, 1981; В.И.Мурза, 1977; Р.Е.Когай, 1978; П.Л.Рельцер, 1980).

Кроме антибиотиков, большой удельный вес в ассортимента микробиологической промышленности занимают препараты, основу которых составляют различные виды"бактерий и грибов. Ферменты, применяемые в спиртовой и пивоваренной отраслях промышленности, являются зачастую продуктам<-. жизнедеятельности микроорганизмов. Кроме того, микробные препараты асе икре находят свое применение в сельском хозяйстве в качестве эффективных средств защиты растений; Уместно напомнить, что повсеместное применение пестицидов наряду со значительным положительным эффектом влечет за собой и ряд отрицательных последствий, связанных с потенциальной опасностью возникновения интоксикаций и глобального загрязнения окружающей человека среда. Проблема охраны этой среда и рациональное использование природных богатств наше'* страны нашли свое отражение в постановлении . "О дополнительных мерах по усилению охрани природа и улучшение использования природных ресурсов", принятом ЦК КПСС и Советом Министров СССР в дькабре 1978 года. Это постановление партии и правительства является еще одним убедительным подтверждением положения, высказанного Генеральным секретарем ЦК КПСС товарищем Л.И.Брежневым и приведенного в указанном документе, о том, что "... хоэяйс зе, рачительное использование естествен«« ресурсов, забота о земле, о лесах, о роках и чистом воздухе, о растительном и животном мире - все это кровное коммунистическое дело. Не только мн, но к последующие поколения допжчн иметь вогзможнссть пользоваться всеми благами, которые дчот прекрасная природа нашей родины". В стране создана согоднп иг.-.тлючи-тельно мойная -хоччйстп=цн<гк и врид/чеекпя дтя агпеития

элективных мероприятий по охране окружающей среды.

С указанных позиций весьма перспективным является внедрение взамен химического биологического способа борьбы с вредителями сельского хозяйства. Выпускается целый ряд препаратов, вызывающий гибель вредных насекомых (енто-и токсобантерин, дендробацил-лин - действующее начало споры различных вариант £ао щио Ш>.1г ( боверин - действующее начало споры Веаш-ег1а

Ьавв1ы1аХ Наряду с производством последних, резко возросло производство бактериальных удобрений (нитрагин - действующее начало бактерии НдлаоМшп врр .).

Перечисленные микроорганизмы входят в состав готовых препаратов. С последними сталкиваются значительные контингента работающих в процессе производства, т.к. и на промежуточных, и на заключительных стадиях технологического процесса возможно поступление препарата в воздух рабочей зоны. Контакт с этими препаратами осуществляется и при их применении.

Настоящая работа посвящена вопросам обоснования некоторых критериев гигиенической оценки и нормирования биологических препаратов', '.упускаемых микробиологической и фармацевтической промыюленностями. В частности,

- препаратов, применяемых из-за их антимикробного дейст-шг. - лекарственный препарат нитрос^ранового ряда фуразолидон, лекарственные антибиотики олеандомицин, тетрациклин и олететрин, представитель кормошх антибиотиков тилоэин и антибиотик лакто-цид, применяемый в спиртовой промышленности;

- препаратов, основу которых составляют жизнеспособные ¡ЗЁ'».т(!рйи и спора - сельскохозяйственное удобрение нитрагин и

бактериальный инсектицид дэндробациллин;

- О -

- ферментных препаратов - цитороземин и глвкоэндомикопсил, применяемых в пивоваренном производстве и препарата такстериа-на - средства зашиты растений, в состав которого входят споры гриба рода энтомоАтора.

Выбор ;укасанши препаратов связан с тем, что они широко используются в народном хозяйстве и относятся к различных« гтг/л-■Ттам продуктов микробиологической промышленности.

Большинство перечисленных препаратов и началу проведения . исследования практически не изучалось в качестве факторов производственной среду с позиций гигиенической оценки потенциальной опасности их воздействия на организм работающих. Не были установлены гигиенические нормативы допустимого содержания фу-разолидона и тилозина з воэдухо рабочей зоны. Не были также разработаны соответствующие оздоровительные мероприятия для условий промышленных предприятий,.где большинство из них производятся.

Для гигиенической оценки производственных вредностей обычно применяются различные показатели их сбщвтоксического и избирательного действия. Менаду гем, возможности использования в ргде случаев характеристики микрофлоры кишечника как критерия гигиенического нормирования изучены недостаточно. Микрофлора кижэчника исследовалась при регламентации лил» некоторых лекарственных антибиотиков (Л.И.Израйлст, 1970; Е.Б.Алексеев, 1973; Н.И.Мачюлите, 1977; Л.МДраснокутск&ч, 1378). Однако и другие микробиологические препараты, очевидно, также могут определенным образом влиять на микроэкологив пищеварительного тракта, т.к. флора человека является достаточно чувствительным индикатором на различные вредные воздействия

внешней среды и изменения в физиологическом состоянии макроорганизма (А.А.Ленцнер, 1973; Н.Н.Лизько, В.М.Шилов, 1979;В. Огаиаг , 1974). Именно поэтому в настоящей работе изу-

чалась микрофлора кишечника кан непосредственно в условиях производства у рабочих предприятий микробиологической промышленности, так и в эксперименте на подопытных животных.

Цель и задачи'исследования. Цель данной работы - оценить, а в случае положительных результатов, аргументировать и рекомендовать возможность использования показателей, характеризуют/ ' состав микрофлоры фекалий как одного из критериев при гигиеническом нормировании биологических препаратов в воздухе рабочей зоны производственных помещений.

Для достижения указанной цели предусматривалось решение следующих конкретных задач.

1. В эксперименте на квотных оценить эффект действия на микрофлору кишечника антибиотических препаратов (фуразо-лидон, тилозш, лактоцид), ферментных препаратов (гликоэндо-микопсин, цитороземлн), бактериальных препаратов (девдроба-циллин; нитрагин), грибного препарата (такстериана).

2. В эксперименте на животных изучить общетоксическое действие названных антибиотических препаратов.

Исследовать состояние микрофлоры кишечника у лиц, занятых производством антибиотических препаратов фуразоли-дрна и лактоцида к ферментно о - цитороземина.

4. На основе изучения обшетокспчес.кого и антимикробного действии фуразолидона и тилозина об-^мозать ПДК этих препа-рг.,"(12 в гоздухе рабочей зоны производственных помещений.

5. Аргументировать выбор коо^фициента залпса при гигие-»нгевгвад иориировьнип препаратов, обячддояих «•чтпиикробнял

действием.

Научная новизна работы. В результате проведенных исследований показано, что для веществ антибиотического действия изменения кишечной микрофлоры не всегда могут служить лимитирующим критерием отрицательного действия на организм. При длительном воздействии фуразолидона ведущим является антимикробный эффект, при действии же тилоэина - общетоксический, а лактоцида - аллергенный эффект.

При обследовании рабочих (совместно со специалистами \Отдела гигиены и профзаболеваний ЦНЙЛ №), подвергающихся воздействию фуразолидона, лактоцида и цитороземина, установлено нарушзние количественного состава микрофлоры кишечника у лиц, коктактирующих с первыми двумя препаратами.

Установлено слабое влияние на кишзчную микрофлору нитрагина, дендробадиллина, цитороземина, глюкоэндомикопсина, так-стериани.

Аргументирован методический прием выбора коэффициента запаса для гигиенического нормирования антибиотиков широкого спектра на примере тетрациклиновой групп». Предложенный новый способ является предметом изобретения (заявка № 2664776/ 13, положительное решение от 26.05.81).

Научная значимость работы. Аргументирована необходимость в процессе экспериментальных и производственных исследований при гигиенической оценке биологических препаратов, наряду с общегоксичзским и аллергическим эффектами оценивать их действие на микроэкологию кишечника. Показана возможность использования количественной характеристики микрофлоры кишечника в качестве одного из критериев их гигиенической регламентации.

Практическая ценность работы. На основании обобщения и анализа по-цучонных данных обоснована необходимость' улучшения условий труда и эффективной профилактики неблагоприятных воздействий при промышленном производстве фуразолидсна, лакто-цида и цитороземина.

Аргу 'вотированы и утверждены ПДК фуразолидона и тилозина в воздухе рабочей зоны производственных помещений.

Показано, что определение количественного состава микрофлоры фекалий способствует выявлению состояния препатологии у работающих.

Внедрение. На основании материалов экспериментальных и производственных исследований разработаны рекомендации по проведению санитарно-гигиенических и лечебно-профилактических мероприятий в условиях предприятий, изготавливающих фуразоли-дон, лактоцид и цитороэемин. Рекомендации приняты к внедрению администрацией НПО "Биохимреактив" (г.Олайне), спиртового эяе-лериментального завода (г.Мичуринск) и пивоваренного завода фирмы "Колос" (г.Львов).

Установлены предельно-допустимые концентрации в воздухе рабочей зо..ы тилозина (I мг/ы3 - 2 класс опасности), утвержденная Главным санитарно-эпидемиологическим Управлением МЗ СССР (перечень № 13 "ПДК вредных веществ в воздухе рабочей зоны" ГОСТ № 1572-79 от 21.03.79) и предельно допустимая концентра-Ч'М фуразолидона (0,Ь мг/м3 - 2 класс опасности), утверидешая Главним санитарко-зпидемиологическиы Управлением МЗ СССР (перечень № 16 "ПДК вредных веществ в воздухе рабочей зоны" ГОСТ 2253-80 от 25.09.80).

Рекомендован способ определения хоэ^чциента запаса при гигиеническом нормировании антибиотиков (заявка № 2864776/13,

положительное решение от 28.05.81 года).

Внесет рационализаторские предложения, которые внедрены в Отделе гигиены и профзаболеваний ЦНЛЛ РМИ (№.1* 998 , 999, 1074, 1126, 1369, 1492, 1509).

Апробация работы. Фрагменты диссертации были доложены на совместном заседании Отдела гигиены и профзаболеваний ЩШ и кафедры микробиологии РМИ (1981), заседаниях Секций по установлению санитарных стандартов вредных веществ в воздухе рабочей зоны Всесоюзной проблемной комиссии "Научные основы гигиены труда и профпатологии" (М., 1979, 1980); на Учредйтельной конференции по токсикологии СМ., 1900); на Всесоюзной конференции "Биологическая характеристика лабораторных животных и экстраполяция на человека полученных в эксперименте данных" СМ., 1980).-

Публикации. По теме диссертации опубликовано 7 работ. Две работы приняты в печать: монография "Гигиено-профпатоло-гичесяая характеристика антибиотиков и нитро^ранов", "Зинаг-не", АН Латв. ССР, Рига, 1982 (в соавт. с Л.И.Израйлет) и научный обзор "Гигиена труда и профпатологии при производстве микробных препаратов", ВНИИМИ, М., 19В1 (в соавт. с К.И.Зрман, В.Н.Слинько, И.З.Баумане).

Структура диссертации. Диссертация изложена на 196 страницах машинописи, включат 49 таблиц и рисунков. Состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, заключения, выводов и указателя литературы. Б список литературы (37 стр.) включено 317 источников, их которых 217 отечественных и 100 иностранных.

Методика и объем исследования.Для оценки влияния биологически активных препаратов на организм лабораторных животных было использовано 1378 животных (1052 крысы, 160 мышей, 92 морских свинки, 54 безмикробные мыши). Микробиологические исследования были проведены на 270 крысах (1190 анализов).

Токсичность (5/раоолидона и тилозина изучались в остром, подостром и хроническом зксперименте. Критерием токсичности служили величины средних смертельных доз (ЛД50) при внутри-брииинном и ингаляционном путях введения. Учитывали также величины максимально переносимых доз, токсические и пороговые концентрации. В подостром опыте определяли кумулятивные свойства, изучали резорбтивное и кожно-раздражавдее действия. Хронический опыт проводили в течение 4 месяцев и в последующем на протяжении одного месяца (восстановительный период) при ингаляционном пути введения в затравочных камерах конструкции И.Ф.Бочрчука (1963). •

В процессе изучения общетоксичзского действия препаратов оценивали динамику массы тела животных, относительную массу внутренних органов, изменения температуры тела, степень потрзб ления кис орода, морфологическую картину крови. 0 функциональном состоянии печени и почек судили по биохимическим показателям - активности аланинаминотршсферазы, аспартахам инотране-феразы, результатам проб Квика-Пытеля и бромсульфалеиновой, данным о количестве белка в моче и ^воротки крови.

«Г.ейсчвие веществ на иммунологический статус организма Оцениьэли по морфологической, картине крови и содержанию бел-коьых фракций в сыворотке, а также по активности лизоцима в ■сыворотке крови. Длч выявления аллергии использовались тесты пгломзрация лейкоцитов или феномен леЯкергии, лейкоцитолиз,

реакция латекс-оседания эритроцитов.

На заключительных эталах проводили морфологические ис-' следования.

Лактоцид, нитрагин,' дендробациллин, глйкоэндоммкопсин, цитороземин, такстериана изучались в хронических опытах длительностью 2-4 месяца, использовали два пути поступления веществ в организм (внутрихелудочный и ингаляционный) с целью . оценки их аллергенного и антимикробного эффектов.

Антимикрсбноз действие всех используемых в работе пре-парагов изучалось по изменениям количественного состава микрофлоры фекалий, отражавшей микрофлору толстого кишечника. Выл использован метод, апробированный на кафедра микробиологии Тартусскогс> государственного университета под руководством профессора А.Л.Ленцнера Ш.Э.Микзльсаар с соавт., 1972^" Р.Я.Паберза, 1981). Преимущество примененной методики по сравнению с такоьой, изложенной в методических рекомендациях "Бактериологическая диагностика дисбяктериоза кишечника" (Р.В.с'пштейн-Литван, Ф.Л.Вильгааиская, 1969, 1977), сводится-к большой тсэдости и к получению лето поддающихся биометри-че кой обработке конкретных цифровых результатов. Именно 150-этему указанная методика была взята в основу новых методических рекомендаций по опрод«лении количественного состава анаэробной и аэробной микрофлоры кишечиика при кишечных заболеваниях (А.Ф.Блюгер с соавт.., 1961).

Опыты с гнотобиомтннмя тавотными проводили на базэ лаборатории гнотобиологии кафедры микробиологии и Физиологии растений Латвийского государственного университета (зав. кафедрой профессор Х.А.Мауриня). Лекарственные антибиотики вводили гнотобионтан с предварительной стерилизацией. Для этого препараты облучали на жидкометаллическом радиационном контуро

- хс. —

РК-ХМ Атомного реактора Института фивики АН Лат в. .ССР.

Изучение состояния здоровья лиц, занятых в производстве фуразолидона, лактоцида, цитороземина, проводили путей амбулаторного обследования 305 человек, в том числе 255 рабочих НПО "Биохшреактив" г.ОлаЙне, Мичуринского спиртового экспериментального завода и гшьоварешого завода фирмы "Колос" г. йьвова и 50 человек - сотрудники других учреждений, сцукащла контролем. Количественный состав микрофлоры кишечника был изучен у 115 человек. Медицинское обследование проводилось бригадой специалистов (терапевт, невропатолог, аллерголог, отоларинголог, окулист, дерматолог). Показателями '-'сенсибилизации служили тесты лайкоцитолиза при стимуляции предполагаемыми аллергенами, лейкергии, реакции латекс оседания эритроцитоЕ, а также данные осмотра и опроса. Иммунологическая резистентность определялась по фагоцитарному процессу, бактерицидной способности кода, состоянию микрофлоры кожи и кишечника.

Во всех экспериментах количество животных в группах было не менее 8-Ю. Исследования по воем показателя;,! в опытных и контрольных группах проводились одновременно.

Биоиетрическал обработка полученных данных осуществлялась по Стьюдеи'^у-Фигюру. Быч принят уровень вероятности р <0,05.

СОДЕРЖАНИЙ РАБОТЫ

С целью .установления обеих закономерностей влияния на иикрезкодогдю кимечника препаратов микробиологического про-ксхолцзиия я обоснования их гигиенических нормативов в воздухе рабочей зона, нами изучались игмонанил в составе микро-

флоры кишечника при воздействии следующих препаратов: фура-зол идона, тилозина, лактоцида, нитрагина, дендробациллина, глюкоэндомикопсина, цитороземина и такстерианы.

Установлено, что как вещества антибиотического действия, так и препараты, основу которых составляют производственные штаммы различных микроорганизмов, могут оказывать неблагоприятное воздействие на микроэколопго кишечника рабочих, участвующих в производстве указанных веществ, и животных в эксперименте.

При изучении особенности воздействия фуразолидона в концентрации 5 мг/мэ в условиях ежедневной, исключая выходные дни, ингаляции, из числа определяемых показателей было отмечено уменьшение потребления кислорода на втором месяце и снижение оральной температуры на третьем месяце опыта. В кишечнике животных наступило определенное нарушение равновесия между микроорганизмами и хозяином. Это выражалось в уменьшении общего количества анаэробов, а также количеств лакто-бацилл и стафилококков. Уменьшение количества стафилококков имело место на протяжении всего опыта, и по-видимому является результатом прямого действия препарата (А.£.Влюгер, 1958, 19)0). Снижение количества анаэробов отмечалось однократно, лш>ь в первый месяц затравки. Уменьшение количества лантойа-цилл на протяжении всего эксперимента говорит о наступившем дисбиоэе. По данным т.миеиока , (1973) дли здоровых крыс количество лактобацилл колеблется в пределах 9-П 1ое/г, а для обследованных нами здоровых животных нижняя граница определялась на уровне несколько более низком - 7105 /г.. В рассматриваемой серии экспериментов количество лактобацилл в фекалиях

подопытных животных достигало 6,2+0,25 1ое/г.

Через месяц после прекращения введения препарата количественный состав'микрофлоры кишечника подопытных групп нормализовался.

При воздействии фураэолидона .в концентрации 50 мг/мэ у подопытных животных наблюдалось статистически достоверное уменьшение потребления кислорода. Кроме того, имело место повышение количества белка в моче и сыворотка крови, уменьшение количества гиппуровой кислоты в моче и морфологические изменения в печени и селезенке. Отмечены значительные изменения в микроэкологии кишечника: в фекалиях наблюдалось уменьшение общего количества анаэробов и аэробов, а также количеств лактобацилл, кишечных палочек и стафилококков и увеличение количества протеев. Указанные изменения обусловлены, вероятно, тем, что фуразолидон является антимикробным препаратом широкого спектра действия (А.Ф.Блвгер, Л.И.Иэ-райлет, 1962). К концу восстановительного периода количественны е соотношения не всех групп микробов восстанавливались. В частности, количество протеев все еке превышало контроль на 1,41сс/г. Такие изменения следует рассматривать как стойкий дисбиоэ кишечника, наступивший под воздействием дли-'<='• ;г.го контакта с фураэолидоном. Обнаруженные изменения сохранялись до конца восстановительного периода.

Принимая во внимание, что изменения при воздействии препарата на животных в концентрации 5 мг/м3 имели место лить в двух группах микроорганизмов, а при воздействия препаратом в концентрации 50 мг/м5 отмечен стойкий антимикроб-

ный эффект, а также было выявлено изменение ряда интегральных показателей, мы сочли возможным принять концентрацию 50 мг/мэ пороговой по общетоксическому и действующей по антимикробному эффекту, а концентрация 5 мг/м3 расценивалась нами, как пороговая по антимикробному действию. Поскольку антимикробный эффект фуразолидона оказался лимитирующим; нормирование его осуществлялось исходя из последнего, с применением коэффициента запаса 10. Предложена ПДК=0,5 мг/мэ. В соответствии с принятой классификацией (ГОСТ 12.1.007-76) исследуемый препарат относится к категории высокоопасных (2 класс).

В последующей серии наблюдений нами изучалось влияния на организм тилозина (антибиотик - макролид, активность 120000 ед/г) и лактоцида (поли;5ракционный антибиотик, активность 150000 ед/г) при продолжительности опыта 5 месяцев. Установлено, что указанные антибиотики обладают антимикробным эффектом в разной степени выраженности.

Установлено такие, что тилозин в концентрации 10 иг/и3 вызывал нерезко выраженный общетоксический эффект, который проявлялся сниженном количества лейкоцитов и гемоглобина в крови{ отмечены кроме того, нарушения функции печени в виде снижения показателей бромсульфалеиновой пробы и экскреции гиппуровой кислсты с мочой. Результата функциональных изменений печени статистически достоверны, но не выходят за продолы физиологических колебаний. При морфологических исслед' маниях а печени И сердце подопытных кивотних отмечается полнокровие сосудоп. Кроме того, тилогин в указанной концентрации обуславливает некоторые сдвиги в иикроогологии киптикка. 0;ш вакютлиоь » уменьшения общего яоли'Кгсгч.ч аца^гк^оа в -тч-чт .'огммх месяцев и ечкжочие колячоетж* чищенных .%■/-,гл;., дц-ят

месяце затравочного периода, К концу затравочного периода эти нарушения нормализовались. Это позволило нам оценить данну"о концентрацию как пороговую и по общетоксическому, и по антимикробному действию.

При воздействии на организм крыс тилозина в концентрации 100 мг/мэ, начиная со второго месяца опыта у подопытных животных имели место нарушения, характеризующие токсическое дейст-) вне препарата: в крови было снижено количество лейкоцитов, уменьшены показатели потребления кислорода, пала орешьная температура, снижена экстреция гиппуровой кислоты и АлАТ, изменены показатели бромсульфалеиновой пробы, увеличено количество белка в моче. Изменения носили стойкий характер и подтвер?кда-лись морфологической картиной. Так, в ле-_сих наблюдались участки эмфиземы и очаговых ателектазов; периваскулярные и пери-бронхиальные лимфоидно-клеточные пролифераты; в печени имели . место склеротические изменения; наблюдалось набухание эпителия в стенках артериол селезенки.

Полученные данные свидетельствуют о том, что 100 ¡.¡г/м3 являются действующей концентрацией по общетоксическому аффекту. Таковой она является и по антимикробному действию. Уже с

;1!1ого месяца и до конца затравки прослеживалось стойкое уменьшение общего количества анаэробов и количества кипенных палочек, а также увеличение количества ддктсбацилм. С целью более подробного изучения влияния тилозина на/ микрофлору кишечника мн провели месячный опыт в течение которого тилозин в дозе 20 мг/кг вводили ежедневно бельм крыса".! внутрижелудоч-но. Такпя постановка опыта привела к резкому снижению общего ;<•<>,нпества анаэробов и некоторому увеличению количества лакто-•*ч ч кятаепшх палочек, т.е. выявило аналогичные изменения

микрофлоры фекалий.

Итак, полученные данные свидетельствуют о совпадении порогов антимикробного и общетоксического действия. При этом сдвиги в микрофлоре при ингаляционной затравке в концентрации 10 мг/м3 были незначительны, кратковременны, к концу опита исчезали, а показатели общетоксического эффекта оказались более выраженными. Это явилось основанием нормировать тило-зин по общетоксическому действию. Но так как антимикробный эффект все же имел место, а при внутрижелудочном введении был резко выражен, нами предложена ПДК в воздухе рабочей зоны - I мг/м3, с применением коэффициента запаса 10. В соответствии с принятой классификацией (ГОСТ 12.1.007-76) исследуемый препарат относится к категории высокоопасных (2 класс).

Относительно лактоцида было показано, что этот препарат в концентрации 10 мг/м3 обуславливает уменьшение общего количества анаэробов. Начиная со второго месяца опыта, отмечено снижение общего количества аэробов, а также повышение количеств киюечных палочек и стафилококков. Кроме того аллерголо-гическййи тестами"подтверийвно""¿1лергевдоё"дейотвиё"~прзпарата

в этой лснцентрации'.

Концентрация 50 мг/м° лактоцида также вызывает изменения в микрофлоре кишечника. Они характеризуются, во-первых, повышением количества кишечных палочек уже с первого месяца опыта более чем на 2 З-о^/г по сравнению с контролем и, во-вторых, увеличением количества стафилококков, начиная со второго месяца. Лактобациллы не были обнаружены в течение зеего периода затравки у крыс обеих опытных групп, что объясняется особенностями спектра действия препарата, непосредственным действием на молочно-кислые бактерии. В течение восстановительного

периода количество этих микробов оставалось сниженным по сравнению с контролем.

Итак, антибактериальные.препараты во всех испытанных концентрациях оказывают различное влияние на количественный'состав микрофлоры кишви:.ика. Однако, небезынтересно отметить, что все они обуславливают уменьшение общего количества анаэробов и изменение количественного содержания кишечных палочек и лактобацилл (рис.1). А уменьшение общего количества анаэробов считается ведущим показателем дисбиоза кишечника. Признанными показателями дисбиотичес-ких изменений в кишечнике являются также сдвиги в количественном содержании кишечных палочек и лактобацилл. В изменениях количественного состава микрофлоры прослеживается определенная связь со спектром антимикробного действия препаратов. В частности, лакто-цид, используемый в промышленности для подавления лактобацилл, в опытах на крысах оказывал, четко выраженное угнетающее действие на лактофлору.

Следующий фрагмент работы посвящен изучению влияния на микрофлору кишечника препаратов, действующее начало которых составляют различные штаммы бактерий и грибов. Показано, что для них антимикробный эффект не является ведущим. Общетоксическое действие нитрагина наблюдали при концентрации 2,4 иг/и3, а аллергенное дендробациллина при концентрации 10 мг/м3 и цитороземина -при концентрации 4 мг/м3. Более высокие концентрации препаратов 25 мг/м3 для нитрагина, 100 мг/м3 для дендробациллина и 40 мг/м3 для цитороземина, глккозндсмикопсина и такстериаяы обуславливали различные по характеру и стабильности сдвиги в составе микрофлоры кишечника.

Рис Л, Изменения количественного состава никро^лорн фехалкЯ 6«лых кгшс пси длите;ш»ом воздействии '1ураэолццона СЮ. тилозина (б) и лактоцида (в).

Ан-анаэробы, Аэ-аэройи.Л-лактобщшяы.Е-хииечные палочки, П-протеи, Ст-стафилококки, мэ-месяц затравки, Вп- восстановительный период, | повышение, | понижение,

I___I менивая концентрация препарата,

оо ль вал концентрация препарата.

ПримечаниеI при воздействии лохтоцидД лактобаци.чли на были обнаружены в течение всего периода затравки,

Нитрагин и дендробациллин - препараты, основу которых составляют бактерия (3-5 млрд/г бесспоровых и 30 млрд/г спор соответственно), в условиях опыта приводили к повышению общего количества аэробов. Кроме того, нитрагин вызывал увеличение количества лактобацилл и кишечных палочек, а дендробациллин -протеев и стафилококков и снижение, количества кишечных палочек (рис. 2).

Препараты ци-тороземин, глюкоэндомикопсин, такстериана, основу которых составляют грибы, влияли на количественное содержание кишечных палочек и протеев (рис. 2). Под воздействием цитороземина (ферментативная активность 10000 ед/г) имело место уменьшение количества микробов обеих групп. Такстериана приводила к уменьшению количества протеев и увеличению количества кишечных палочек, а глюкоэндомикопсин способствовал размножению микробов обеих групп (ферментативная активность 5000 ед/г).

Последнюю часть окспериментальных исследований составили опыты на безмикробных животных с целью разработки и обоснования способа определения коэффициента запаса для антибиотиков. Использовали препараты широкого спектра действия -олеандомицин, тетрациклин и олететрин. Как уже указывалось, при выборе безмикробных животных в качестве модели, мы исходили из того, что чувствительность организма с пораженной микрофлорой условно может быть приравнена к таковой безмикробного организма. В результате проведенных исследований мы выявипи десятикратную разницу в чувствительности конвенциональных и безмикробннх мыией ко взятый в опыт препаратам. Это позволило нам предложить принять за коэффициент запаса 10. Указ&н-!Я.'И показатель, естественно, нельзя переносить ц& все анти-

Рис,2. Ивыене.чияг количественного составе микрофлору ¡¡«¿алий бея ¡х крыс при длительном воздействии иягрдгккА цклчияа (б),глялозндомиуоггспие (в), циторогемидо (.г-.1, тладта-риг»!« (д).

Аи-анаэрбы./.э-варобы.Л-лаитойадилли.К-киьечни« пеаячкя, пра.'еи.Ст-ста^илококки, «э-н«ояц затрявк», Зп-восстямяитвди«' яыС! период, * повымние, > ломикеич?»

микробные вещества, но сш принцип объективного подбора коэффициента запаса на модели безмикробных животных признан оправданным и является предметом изобретения (заявка № 2864776/13, положительное решение ит 28.05.81).

Для практи:сл гигиенического нормирования существенное значении 1.меьт состояние здоровья лиц, длительно контактирую-xiivix с ^рздкыми веществами. В ходе обследования рабочих НПО ''Блохимреактив" г.Олайне, производящих фуразолидон, Мичуринского спиртового экспериментального завода, производящих дакчо-цид и пивоваренного завода фирмы "Колос" г.Львова, производящих цлторозомчн, нами было изучено состояние количественного состава мшсрофкоры кишечника у лиц непосредственно контактирующих с препаратами, и у лиц контрольных групп (рис. 3). В группы отбирались лица до 40 лет, не предъявляющие жалоб на дисфункцию кишечника и не имещих в анамнезе каких-либо заболеваний *;едудо'»ю~киш<5 «юге тракта. • ..

Б производстве фуразолидзна у рабочих цех;а готовой продукция отмечено увеличение сбяего количества анаэробов (9,С;+ 1,0 1с(г/г) и количества лактобацилл (9,7+0,9iog /г). Согласно данном Г.Я.Паберза (IGBI), .увеличение колкчэства ш.гоСацлгл озмик! i'1 /i является одккч из крчтерись ооа и мог*? iip.iпесги к целому рчду кликичзских проявлен 'Ш'.тгпогии жегу-дошо- к.теч югу грл;ста.

Kpuue -tdi'o, у оЯслвдопаиних стмзчалос(- сиитсни') киипо.т-зя стафилококков и увеличение ксличесгза арогсэв, Tar«rr жз сдиш и и количосд венном составе микрофлори инелп место под lionj'.ftiif.'vnifiw фуразолидона у лодслытаых гкш-ымх. У pofiowx. «'•и' »:я.ич г полунродуигм.чи 5-нИ1410~{йЧ"-ч»в, .».■¿•••ч«м«»Я п ••■>•' •>£!• it rtp'i .1-<ц>н смочено не Счио, с-ю. p- тын, «»:•.,

' •■ !■:, '■' " Tt;-'t, ЧЧ-О '"¡ИСбИОЗ ЮЗНЯК «ОД J ЛГИ 111 .7 •<; .•iKWIlrt,

а)

I

ж

1

1 I

т

к

1

Ан

Ао

Ст

%/г * 10.

8 б

И

2

б)

гЬ

ь

Ай

Аэ

1Й

¥ ц

I1! 1 I,1

'II1 !у

, I1 $ ■

V' \ 1 11

'й V

с»

Рис.3. "(оличестгенный состав миШрофлорк кишечника райочкх» занятая в производстве фураэолндона (а) и лактоцида (б), ^^^^ рабочие цеха готовой продукции Г/у.1.-!"'! рабочие, икеокиэ контакт о полупродуктами

рГ-7- --- -•■ .1 рабочие анклавного цеха ¡523X53 рабочие дрсгаевого цеха С " —1 рабочие контрольных групп

У рабочих, производящих лактоцид, на первом плане были различные проявления аллергии, подтвержденные при обследовании положительными аллергологическими тестами (увеличение процента агломерации лейкоцитов, лейкоцитолиз, замедленная реакция ЯОЭ),

При микробиологическом обследовании рабочих цехов № I и }"г 2 (в этих цехах рабочие имели контакт с готовым препаратом) было отмечено снижение общего количества анаэробов (соответственно 4,3 1ое/г+0,8 1ое/г; 3,8 1оё/г+0,5 1ос/г) и увеличение количества стафилококков (соответственно 6,2+0,2 Хор/г; 6,4+ 0,51^:/г). По данным Р.Я.Яаберза (1981) дисбиоз характеризуется уменьшением количества анаэробов< 8,01ое/г и увеличением количества стафилококков> 5,01оз/г. На увеличение количества стафилококков при дисбиозе у рабочих, производящих антибиотики, указывала еще Г.Б.Штейнберг (1971). По сравнению с изменениями в количественном составе микрофлоры фекалий, установленными у подопытных животных, у людей снижение количественного содеркения лактобацилл было значительно менее выражено. Изменения по остальным группам изученных микроорганизмов оказались аналогичными.

Уместно отметить, что нарушения в количественном составе микрофлоры фекалий обнаружены нами у лиц, не предъявляющих жалоб на дисфункцию кишечника и не имеющих в анамнезе каких-либо заболеваний желудочно-кишечного тракта. Вероятно состояние указанных лиц можно расценивать как препатологию, т.е. доклиническую стадию, когда еще возможно добиться обратного развития патологического процесса.

Данные обследования состояния здоровья рабочих, занятых "¡чшзтодстве цитороземина, свидетельствуют о том, что ос-

новной патологией на этом производстве является сенсибилизация организма вследствие воздействия антигенов грибов Т.

гввепт и Л. ог^зае , что характерно для боль-

шинства препаратов микробного происхождения (Л.И.Израйлет, 1577; Е.А.Мельникова, 1978; П.Л.Зельцер, 1981). В качестве проявлений отой сенсибилизации были выявлены адлергические вазомоторные риниты, конбюнктивиты, дерматита. Каких-либо изменений в состоянии микрофлоры фекалий рабочих, контактирующих с цитороземином, не обнаружено. А между тем, у крыс в первую очередь наблюдалось значимое снижение количественного содержания протеев. Однако указанный сдвиг было бы не правильно трактовать как проявление дисбиоза.

Пытаясь внести свой посильный вклад в решение проблемы гигиенического нормирования биологических малотоксичных препаратов и включившись в соответствующее исследование, мы выдвинули две рабочие гипотезы. Во-первых, характеристика количественного состава микрофлоры кишечника может быть использована а качестве одного из критериев при гигиенической оценке и нормировании некоторых биологически активных промышленных препаратов; во-вторых, безмикробнае животные могли бы быть хорошей моделью для получения достаточно объективной величины коэффициента запаса при нормировании препаратов, обладающих антимикробным действием.

В результате проведенных исследований эти гипо'гвсш получили свое подтверждение. Количественный состав микрофлоры кишечника действительно оказался достаточно чувстгш'елышн и 1ш{юрмэ.тивным тестом для выявления антимикробного д-зКст-; вия биологически активных препаратов различных кланов.

Так, показано,- что характеристика микрофлоры может быть ис-псльэс-заяа при гигиеническом нормировании биологических препаратов в так случаях если порог антимикробного действия находится ниже порога общетоксического или аллергенного эффектов, а также, для установления специфического антимикробного дс'"ств»;я препаратов, действующим началом которых являются различные микроорганизмы.

Везпикробные животные оказались удачной моделью для получения обоснованной величины коэффициента запаса при нормировании препаратов, обладающих широким антимикробным действием .

Как показали проведенные исследования, применительно к препаратам, основу которых составляют микроорганизмы, весьма существенно, что для них антимикробный эффект не является ведшим. Однако микробы, попадая в организм в больших количествах, вызывают определенные сдвиги в количественном состава микрофлоры кишечника, что может привести к нарушению всей многогранной функции микрофлоры и обусловить снижение резистентности оргам/зма.

Б заключение считаем необходимым подчеркнуть цечееооб-г"эность дапьнгйщей разработки проблемы. Следуёт, в частное-'г.', в последуими с учета? результатов приведенных выше на-бл'эдеч-лй совершенствовать методические рекомендации по нормировании микробных препаратов. Особо следует отметить в-чгг-нссть изучения количественного состава микрофлоры фзкалий при обследовании состояния здоровья лиц, сталкивающихся с ними о процессе своего труда. Это тем бол--? существенно, что !!').1нч-?:."ггй-Г[ШГ| постав микрофлоры может способствовать вычвле-

•ч'гг'.я r¡(¡»патологии у работ ч гадах.

В N 6 О Д И

I. Характеристика количественного состава микрофлоры фекалий может быть исиользовзна в качестве одного из критериев при гигиеническое нормировании биологически активных промышленных препаратов в воздуха рабочей зоны производственных помещен« д.

' 2. Нормированные препараты фуразолидон и тилозии в соответствии с принятой классификацией (ГОСТ 12Л.007-76) по степени воздействия на организм относятся к веществам высокс опасным (2 класс). ПДК фуразолидона - 0,5 мг/м3, ПДК тило-зина - 1,0 мг/мэ,

3. Для препаратов, основу которых осставляют исследованные промышленные штаммы бактерий и грибов (Вл Шиг1п51олиН НЫгоМцт врр Т.гоягиа , Е.'М&Х'Ьо^Чапа , Е,Ъ1ь:рога ), антимикробный эффект не является ведущим. Однако попадая в организм, они все ж= обуславливают определеь.<ые изменения в количественном составе микрофлоры кишечника,

4. Безмикробнае животные могут быть использованы в качестве модели для обоснования коэффициента запаса при гигиеническом нормировании препаратов обладающий антибиотическим действием.

5. Для микробных препаратов, нормируешь, п условиях производства, целесообразно увеличить ноэф]'И!;иыт атласа

в тех случаях, когда в процессе эксперимента и при обследовании работающих наряду с 1>ллерг«н:шм деКсгоис'* ¡г.'я^л-гет-ся их антимикробный эффект,

б, У рабочих, занятых в производстве ентибактериальны* препаратов следует в процессе периодических медицинских осмотров \в соответствии с приказом МЗ СССР F 400) исследовать состояние микрофлоры (фекалий в соответствии с имеющейся методикой.

. d'UOH " РАБОТ, опубликованных по теме диссертации

I. Израйлет Л.И., Устиненко А.К., Баумане М.Э., Иванова К.А., Квятковская К.Я., Седышева Е.П. Совершенный подход к оценке иммунологической реактивности в промышленной токсикологии. -Тезисы докладов 1У научной конференции но проблеме клинической тадунодиагностики. Таллин, 1978, 264-266.

?. Квятковская И.Я. Влияние тилоэина на микрофлору кишечника белых крыс (в хроническом эксперименте).- В сб. "Гигиена труда и профессиональные заболевания", Рига, 1980, 57-100.

3. Израйлет Л.И., Баумане M.S., Иванова H.A., Квятковс-кая И.Я., Слинько В.Н., Цнруле Д.Р. Патогенный, аллергенный, антимикробный и ишуно генный эффекты в профилактической токсикологии. - Тезисы докладов на Всесоюзной учредительной конференции по токсикологии, М., 1980, 52.

4. Устиненко А.Н., Баумане M.S., Ремез И.М., Цируле Д.Р., Шамсутдинова Л,Р., Шестерки« Б.А., Квятковская И.Я. .- Иммунный ответ организма человека и экспериментальных жипотлых на профессиональные факторы различной природы. - Материала Всесоюзной конференции "Биологическая характеристика лабораторных животных и экстраполяция на человека экспериментальных данных''. М,, I960, 238-239. '

5. Квлгковская И.Я. Влияние микробных препаратов, применяемых в спиртовой и пивоваренной промышленности'на микрофлору кищэчника. - Гигиена труда и профессиональные заболевания, 1981, 4, 33-39.

6. Квятковская И.Я. Втшяние микробных препаратов, применяемых г, сельской хозяйстве, на микрофлору кяпечяика. - Ги-ги?'па V сачнтарич, 1981, 6, 8L-83.

7. Баумана М.Э., Квятковская Я.Я. Некоторые аспекты биологического действия нитрагина в эксперименте. - В сб.; Промышленная аллергология и иммунология. Рига, IS8I, 5-7.

В. Израйлет Л.И., Квятковская И.Я. Гигиенс-прсфпатоло-гическая характеристика антибиотиков и нитро(|уралов."Зинатне"> Рига, 1981 (з печати).

9. Баумане М.Э., Квятковская И.Я., Слинько В.Н., Зрман М.И, Гигиена труда и профессиональные заболеваний в производстве микробных препаратов. Обзор ВШШИ, IS8J. (в печати).

10. Изобретение "Способ определения токсичности биологически активных веществ". Заявка № 2864776/13, положительное решение от 28.05.81.

11. Рационализаторские предложения :

а) Решетка для разделения питательной среды в чашке Петри. Удостовэре-тче № 998, 1977.

б) Приспособление для забора фекалий при исследовании ■микрофлоры кишечника. Удостоверение Jf 939, 1977.

в) Колбодержатель универсальный. Удостс зрение !? 1074, 1978.

г') Столик для вскрытия и препаровки мелких лабораторных тавотных. Удостоверение № 1126, 1978.

д) Способ сенсибилизации морских свинок. Удостоверение № 1369, 1979.

е) Приспособление для работы с вредными летучими препаратами. Удостоверение !? 149?., i960.

я) Приспособление для фиксации видалевских пробирок. Удостоверение ?<• 1509, 1900.