Автореферат и диссертация по медицине (14.00.27) на тему:Направленный транспорт липосом в орган-мишень в условиях ауто- и аллотрансплантации

р г Б ОД

г % МП

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВОХРАНЕНЯЯ РФ 5МЕРОБСКШ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ ИНСТИТУТ

На правах рукописи УКД 577. 352. 24-616-089. 843-611

СЕШЕНКО СЕРГЕЙ БОРИСОВИЧ

НАПРАВЛЕННЫЙ ТРАНСПОРТ ЛИПОСОИ В ОРГАН-ШОВЕНЬ В УСЛОВИЯХ АУТО- И АЛЛОТРАНСПЛАНТАЦИИ

14'. 00. 27 14. 00.16

АВТОРЕФЕРАТ

хирургия

патологическая

физиология

диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Кемерово - 1994

Работа выполнена в лаборатории з к с п е р и и е нтал ь ной хирургии кафедры хирургический болезней N1 пр К е м е р о в с к о и г о с у д а р с т в е н н о и и е д и ц и н с к о и и н с т- и т у т (Зав . хсафедрой пррФ. Шраер Т. И . )

Научный руководительЗаслуженный деятель наук РФ, доктор медицинских наук, профессор Т.И.Шраер.

О Ф и ц и п ь и и с- о п п о н е н 'I- ы : доктор медицинских наукпрофессор Ониш.екко Н.Д. доктор иедицинских наук., профессор Торгунаков в Г)

Ведущая организации я I

часов на заседании о

вета К.©34.65.в! при Кемеровском государственна не д и 14 и иск о м институте по адресу: 650023., Кемерове ул.Ворошилова 22 А.

Кемеровского -медицинского института (ул . Во роши лог

Р о с с и й с к и й И а у ч н ы й Ц е и т р X и р у р г1 и и

а и, и та состоится

С диссертацией можно ознакомится в библиоте!

22 А >

У ч е н ы й с о к р е т а р ь с п е ц и а л и з ир о в а и к о г о Уч е к о 5 Совета кап. мед. наук Подолужный ВЛ

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.

Актуальность проблемы.__В а ж н евшими : а д * чаи и

временной трансплантологии являются противоише-еская защита трансплантата и адекватное и сво-еменное воздействие на реакцию отторжения. Пои разработка новых методов воздействия на эти цессы может идти в двух направлениях: создание ых лекарственных препаратов и достижение целе-равленного действия уже известных и новых про-оишемических средств и импуносуппрессорсв

Ine R. 1331 )

Поиск новых средств должен быть направлен на рекцию и стабилизацию мембранозависимых про-сов в трансплантате., где имеются выраженные :труктивные повреждения клеточных мембран. Се— тивность приложения лекарственных препаратов [жна привести к повышению их эффективности и 1жению риска побочных реакций и осложнений,ха-:терных для иммуносуппрессивных препаратов. Одним из альтернативных средств воздействия на »режденные клеточные мембраны могут стать ли-:оиы, которые^ активно взаимодействуя с клетка— , могут стабилизировать мембрану, предупреждая >ушения и улучшая процессы жизнедеятельности 'ток (Gregor ia.dis G.,1331).

Установлены антиоксиданный и антигипоксантный ?екты липосом, которые проявляются лишь в усло-IX выраженной тканевой гипоксии (Стефанов A.B. с шт., 133 <Э) . Обнаружена сорбционная активность юсом к токсическим ¡метаболитам при постишемичес-t расстройствах (Стефанов A.B. с соавт.,1384 ), чередованный противоишеиический эффект липосом

(Palmer T.L. et al, 1384).

В связи с этим мо-кет окаг-аться полезным испо/п гованиен липосом при трансплантации органов) coi ровождающейся иш е м и ч еским поврекденнеи органом, патогенезе которого основная роль отводится noi рождению мембранных структур в результате прс цессов переписного окисления липидов и ФосФолипа-: ной дест рук-щации мембран ¿Шумаков В. И. с соавч 1383 ).

Имеются данные по использованию Фторуглероднс эмульсии , как специального препарата, уленьшамч!?! ишемические повреждения в органах (Ониш,енко H.A. соавт.,1383,1330), однако широкого клиническог применения предлагаемые средства не нашли.Нг представляются наиболее перспективными использовг ние для этих целей липосом, обладающих большой ологической доступностью и биодеградируемостью имеющих большее сродство к биологическим мембранг за счет максимального структурного сходства (Боре дин Б.А. с соавт., 1385, Грегориадис Г. 138" Bangham A.D., et al , 1365, Greg jr iad is. G. , 1ЭЭ1) .

В связи с этим, использование "пустых" липосс как лекарственного средства имеет несомненно перспективу и прежде всего для воздействия на пое режденные тканевые и клеточные структуры (Шрае Т.И., с соавт. 1388).. Кроме того, сегодня липосои являются одним из наиболее оптимальных переносчи ков лекарств для направленного транспорта их тканям - мишеням, обеспечивая тем самым селектив ность лекарственного воздействия (Hjang K.L. е al , 1987) .

Различные сферы воздействия липосомальных пре паратов на патологические процессы требуют соот вествующего пути введения. Известно, что при внут ривенном введении липосом не удается избежать и значительного захвата органами ретикуло-эндотели

- 4 -

,ной системы (РЭС), а при подкожном введении совная часть липосом локализуется в лимфати— узлах ( Turner A. et э.1,1383, lilpaep Т. И. с тт., ГЗЗЗ).

Внутриаргериальное и внутрикостное введение ли — :оп сопровождаются общими закономерностями, .терными для внутривенного пути введения (UV-i^ht И. , 1Э30) , а исследования энтерального, внут-;устдвного и внутримышечного путей единичны и не 1учили какого-либо широкого применения

зпп^уеКЗ <З.М. and Croirel in D.J.А. 1388, Nae-Ff R. , VZ>) .

Попытки создания липосомальной формы циклоспо— ia A (Stuhne-Seca.1 ее 1_. , Stanacev N.Z. , 36—1391) требуют обязательного и быстрейшего гчения возможного применения липосомальной Формы 1уносуппрессоров в экспериментальной и клиникой трансплатологии. 4

Одноко, несмотря на достаточно широкий спектр следований по применению липосом в различных па-югических условиях, совершенно не изучена воз-кность их использования для воздействия на пропсы, происходящие в организме при трансплантации -ана.

Одной из проблем, стоящих при решении этого ipoca, является адекватная доставка липосом в шеплантат и органы, вовлеченные в процесс его штации и отторжения. В связи с этим изучение определения липосом в' организме в условиях акти-дии трансплантационного иммунитета, выбор пути ?дения для направленного транспорта липосом к хнеплантату и иммунокомпетентны^ органам требует >циального исследования.

Цель и задачи исследования:

Определение временных и количественных законо-

мерностей процесса транспорта и распределения мз лык нейтральных липосом при различных путях введе ния в организм животных с различными моделям трансплантации и возможности достижения максималь ного накопления их трансплантатом и иммунокомпе тентным органам и снижения накопления органам РЭС.

В работе были поставлены следующие задачи:

1.Изучить распределение липосом в организме жи вотных с различными моделями тканевой и органно трансплантации.

2.Охарактеризовать процесс распределения ли посол в организме животных с различными моделям тканевой и органной аллотрансплантации в зависи мости от пути введения.

3.Определить степень количественного накоплени липосом трансплантатом и иммунокомпетентными орга нами после однократного введения в условиях аллот рансплантации.

■4.На основе получения данных выбрать путь вве дения липосом, позволяющий снизить их захват орга нами РЭС и увеличить их содержание в трансплантат и иммунокомпетентных органах.

Научная новизна:

Впервые изучены транспорт и распределение ли посом в условиях трансплантации тканей и органов Использюван комплексный подход к оценке распреде ления липосом после различных путей введения как условиях активации трансплантационного иммунитета так и без таковых. Приведена сравнительная оценк распределения липосом по органам и тканям животны в зависимости от модели трансплантации и пути вве дения. Выбраны пути введения липосом, позволяющи осуществить преимущественный транспорт липосом трансплантат и иммунокомпетентные органы при тка

- 6 -

зой и органной трансплантации.

Практическое значение работы:

На основе полученных данных по распределению юсом в организме животных экспериментально основано, что при тканевой аллотрансплантации юльзование местного введения малых нейтральных юсом позволяет направить их к трансплантату, э локу, регионарным лимфоузлам и надпочечникам, зньшио одновременно поступление их в органы РЭС. При органной трансплантации местное введэние• -::ке преимущественней и пролонгиро—

ший транспортам липосоп в трансплантат и имну— компетентные органы и позволяет избежать значи-тьного захвата липосом печенью. Для достижения гениального и быстрейшего поступления липосом в хнеплантат должно быть использовано внутривенное ?дение. Для создания стабильно высокой концент-дии липосом в трансплантате в течение 4 суток :ле органной трансплантации целесообразно сов-:тное использование местного и внутривенного эсобов введения.

Результаты, полученные при выполнении данной 5оты, используются как основание для дальнейших следований.

Основные положения, выносимые на защиту:

1.При различных моделях трансплантации мишенями I липосом после их поступления в организм явля— ;я трансплантат, ложе трансплантата, иммуноком-гентные органы и надпочечник.

2.В условиях аллотрансплантации возможен преи-;ественный транспорт липосом в трансплантат и 1унокомпетентные органы, выраженность и продол-дельность которого может зависеть от антиген-:ти трансплантата, региона трансплантации и пути

введения липосом.

3.Факторамиj обеспечивающими направленный тра порт липосом в орган-мишень, могут являться ишел ческое повреждение трансплантата, опэрационн травма и возможная связь транспорта липосом с ци куляцией иммуноколпетентнык клеток.

4.Иестное введение липосои обеспечивает макс мальное и продолжительное поступление липосом органы—мишени, как при тканевой, так и при орга ной аллотрансплантации и снижает захват липос органами РЭС и может быть предложено в случ использования липосом для и.ммуносупрессии.

•з,Только при органной аллотрансплантации во можно использование внутривенного способа введен липосом для достижения их максимальной концентр ции в трансплантате в течение первых суток,ког особенно велика степень его ишемического поврежд ни я.

Апробация работы:

Основные положения диссертации доложены обсуждены:

- на Международном симпозиуме "The Liposo Conference: New Cönsepts, Perspectives a Clinical Appl ica.t ion "(г. Санкт-Петербург, Э-11 ию 1ЭЭЗг.)

- на заседании Кемеровского обласного общест хирургов (г.Кемерово, 19 Февраля 1993г.)

- на совместной конференции кафедр хирург ческих болезней N1/ хирургических болезней N2, о щей хирургии, травматологии, ортопедии и ВпХ, п тологической Физиологии Кемеровского медицинско института и УНПО "Кардиология" (г.Кемерово, 9 ию 1994г.).

Публикации:

- а -

По теме диссертации опубликовано 5 научных ра— г .

Структура и об"ем работы:

Диссертация написана на русском языке, состоит введения, обзора литературы, 7 глав собственных следований, заключения, выводов, практических комендаций и списка литературы. Работа изложена 15 -Э страницах машинописи, иллюстрирована 45 сунками. Библиографический указатель содержит -18 еч-->стс<ешшх и '3'i зарубежных источника.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ.

Материалы и методы исследования:

имические продукты:

Яичный фосфатидилхолин (ФХ) и холестерин (X) ли получены от фирмы Sigma Q-temical Со. (St.Lou-, USA). 125-J-ФX для мечения липосом был получен Фирмы "БИоС" (Новосибирск, Россия). Качествен-й контроль чистоты липидов осуществляли методом нкослойной хроматографии (ТСХ) в смеси хлоро-рм: метанол: уксусная кислота: вода (в соотноше— и 25:15:4:2). Результаты показали, что чистота пидов была выше Э5"/., и не требовали дальнейшей . истки.

иготовление липосом.

ля приготовления малых нейтральных липосом зга нову был взят метод Bangham,et al (1Э65). Смесь и X растворяли в хлороформе в молярном соотно-нии: 7:5 из расчета 25 мг/мл. Липидную смесь сушивали на ротационном испарителе, добавляли .15 И раствора NaCl и встряхивали до образования спензии липосом. Далее 5 мл суспензии дробно оз—

- 3 -

вучивали на ультразвуковом дезинтеграторе UD-' (Польша) при 4 С в течение 5 минут (22 кГц). Д того, чтобы пометить липидную мембрану, в сие перед высушиванием на ротационном испарителе Bir си ли 57ХЭ лкКи 12'5-J-'toC'$aTH дилхо лина . Полярн активность 125-J-'t>X достигала 20 Ки/моль. По да ным ТСХ радиохимическая чистота продукта бы близка к 1Ö27.. В опытах с органной трансплантаци в качестве радионуклидной метки использовал 3-Н-ФосФатидилхолин. По окончании процедуры приг товления липосом отбирали аликвоты для определен сБ"емйсм р&диопс^тм ипоети полученных np^napard гз л Каждой группт-4 эк епериионтсв .

Эиспериментальный материал:

Работа выполнена на 24О половозрелых нелинейн крысах обоего пола весом 15®-3©Эгр-. , содержащих на стандартном корме вивария. Животные распредел лись по группам следующим образом (Таблица N1 Трансплантацию кожного лоскута осуществляли в ме лопаточную область по методике Medavar Р.,(1946 регионарными лимфоузлами .считались подмышечн лимфоузлы. Трансплантацию ткани селезенки осущес вляли в подвздошную ямку внебрмшинно, регионаным лимфоузлами считались подвздошные лимфоузл Трансплантацию почки на сосудистой ножке осушес вляли по методике Fisher, Lee, (1Э65) в свободн брюшную полость, регионарными считались параао тальные лимфоузлы.

Внутривенное введение липосом осуществлялось хвостовую вену, внутрибрюшное введение' по ста дартной методике, подкожное введение осуществл лось дистальнее паховой складки на сторо трансплантации, а местное введение осуществлялось к трансплантатувмягкие ткани и жировую клетчатку Введение липосом производилось однократно сра

- 1<Э -

Таблица 1.

,rm С О о :<в оде-си я

Л о;; о ль трансплантации

: гС о л - о о: группа: :кивот—:опытов: :ных : :

1одкож- аутотрансплантация кож— 1ый ного лоскута

аллотрансплантация кожного лоскута а/тзтр?.нс п л а н т a lui д гк -им селв'зоя^и

ЗО 3«

24-

I

I I

Местный аутотрансплантация ткани селезенки аллотранслантация ткани селезенк и

аллотрансплантация почки

Знутри- аллотрансплантация кож-?енный ного лоскута

аллотрансплантация ткани селезенки аллотрансплантация почки

Знутри-» аллотрансплантация тка-рюшной ни селезенки

Итого

24 24 15 30 24 15 24 : 240

IV V

VI

VII

VIII

IX X

- 11 -

после окончания операции в дозе 25 иг/кг. На 1,4 7 сутки после операции производили забор органо для исследования радиоактивности. Для этого произ водили девитализацию животных внутпибрюшным зведе нием тиопентала натрия 30 пг/кг. После декапдтаци животных забирали смешанную кровь, кусочки ткане печени, правой почки, правого легкого, правог надпочечника,тимуса, костного мозга, транспланта та, ложа трансплантата, регионарных и отдаленны лимфоузлов. После определения веса забранных дл исследоЕ<ания органов рассчитывали их радиоактив ноегь на гамма-счетчике ГСУ—1. Радиоактивность аи ражали а импульсах/мин/грамп (ерк/г). Определял процент включения меченых липосом в органы и ткан по сравнению с аналогичным показателем при услови равномерного распределения липосом. по всем тканя организма, что сделало возможным сравнение резуль тагов различных серий экспериментов, где введенна радиоактивность была различной.

Полученные результаты обрабатывали методам описательной статистики с определением средней ве личины, ошибки среднего и критерия Стьюдента используя различные компьютерные программы.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

Распределение малых нейтральных липосом у жи

вотных с трансплантацией кожного лоскута._На пер

вом этапе исследований на модели трансплантаци кожного лоскута были изучены возможные различия распределении липосом в условиях аутотранспланта ции (Группа I) и аллотрансплантации (Группа II).

Установлено, что поступление липосом в кровь печень, селезенку, легкое, почку, поджелудочну железу, тимус и отдаленные лимфоузлы одинаков незначительно как в условиях стимуляции трансплан

- 12 -

[Ционного иммунитета, так и без таковых (Р><Z),05) . азало^ь, что при обеих моделях более значигель— >е накопление липосом отмечалось в трансплантате, .ке гр-днспланта га, регионарных лимфоузлах и надпо-чнике, что позволило определить эти органы как шени для липосом (Таблица 2).

Динамика содержания липосом в ложе транспланта-., регионарных лимфоузлах и надпочечнике в усло-аутотрансплантации и аллотрансплантации бала ;инаковой, и различия в накоплении органами-мише-ми носили только количественный характер с ¡за-■гньи Дреовладание содержания липосом в них при ло-грансплантации . Так , значении радиоактивности дпочечника при аллотрансплантации на 4 сутки в 7 раза больше аналогичного показателя при аутот-нсплантации.(Р< 0.(25). Уровень . радиоактивности аней ложа трансплантата и регионарных лимфоузлов и аллотрансплантации в основном соответствовал ковому при аутотрансплантации, однако степень ижения радиоактивности этих органов к 7 суткам и аллотрансплантации б&'ла менее значительной руппы I и. II) . В то же время, при аллотрансплан-ции лоскута поступление липосом в трансплантат личалось не только количественно, но и качест-нно, и носило, в отличии от аутотранспланта-и»пролонгированный характер до 7 суток, увеличи--ясь по сравнению с 1 сутками в 5,5 раза (Р<<2.05) превышало на этот период времени аналогичный по-затель для аутотрансплантации в 2.2 раза <0,05) .

Установлено, что после внутривенного введения и аллотрансплантации кожного лоскута радиоактив-сть трансплантата не менялась на протяжении все-

периода наблюдения (РХЭ.05), и была обусловле-, на наш взгляд липосомами, попавшими в него в чении 1 суток ( Группа VIII) . Накопление липосом

Таблица 2. Распределение липосои по органам пр трансплантации кожного лоскута (радиоактивность процентах).

Ткань : Группа: Сутки :

• ■ 1 4 7

Печень I 37,5 40,5 13,9

II 24,1 38,3 17, 1

УГ т 2-10,8 54, Ц 33,7

Легкое I 4(3, О 85,8 33,9

II 25,3 47,2 28,7

VII 53,5 32,2 30,5

Надпочеч- I 92,Э 105,1 142,6

ник II 85,2 176,8. 112,3

VII 257,7 176,2 104,6

Трансплан- I 82,6 125,2 52,1

тат II 20, 9 75,5 113,0

VII 89,6 94,6 30,0

Ложе I 126,5 53,4 36,2

трансплан- - II- 34,1 67,1 43,2

тата VII 123,1 31,8 53,1

Регионарные I 112,3 182,0 67,1

лимфоузлы II 61,0 169,7 111,0

VII .295,4 81,5 75,9

- 14 -

еми органами в данной группе животных отмечалось лысо э течение первых суток, а наибольший уро— нь радиоактивности был о-гмечен в печени и надпо— чнике, превышая н*;пги показатели после

дкожного введения соотвес г&онно в 8,7 и 3,С22 ра— (Р<0,<#5>.

Сравнение распределение липосом после местного едения при ауго- и аллот р-знсплантации ткани се— зенки (Группы IV и. V) соо те ет ствовало данным по-ченным на модели кожного лоскута, однако при ансплантации ткани селезенки уровень радиоактив— сти а ллотраксплантстга Сыл из. п&рвме сутки £ 1-.5 -За (Р^С-С^) , <3 па- че-тгьвртыг сутки )ъ 2,3 раза <<Э.05) больше по сравнении с аутотрансплантатом. оме того, при аллотрансплантации ткани селезенки яечалось э 1,8 раза больше поступление липосом в мус, чем при ее ауто'грансплантации (Р<0.©5) .

Таким образом, при аллотрансплантации как скута, так и ткани селезенки поступление липосом трансплантат не только количественно, но качест— нно, и носило, в отличие от аутотрансплантации, олонгированный характер, соответствовало опреде-нным срокам иммунного ответа на аллотрансплантат вероятно, было связано с поступление в него им— нокомпетентных клеток, имеющим определенные вре— иные характеристики (8,9, 14,29,33) .

Были установлены различия в распределении лисом в условиях антигенной стимуляции и без них, было предположено, что при аллотрансплантации зможен направленный транспорт липосом в ансплантат.

Распределение малых нейтральных липосом у житных с аллэтрансплантацией ткани селезенки после зличннх путей введения.

На втором этапе исследований было изучено расп— целение лнпосоч в условиях тканевой аллот—

- 15 -

рансплантации после различных путей введения (Гас лица 3).

Установлено, что уже в течении первых сут< после внутривенного введения основная илегь л^ nocott депонируется в печени, селезенке и, в б шей степени, в надпочечнике. Поступление липосом остальные органы, в том числе трансплантат, ло> трансплантата и регионарные лимфоузлы, менее зн; чительно и также непродолжительно во време! (Группа VIII).

Анализ распределения липосом после внутривенно Г'О ©йелйния при ТКАНЯЙСЙ лллотр гшеплаитации лг>ие

что ©но не имеет значительных качественные количественных отличий от закономерностей распр« деления липосом после внутрисосудистого введения организм как интактных животных, так и животных различными патологическими процессами (Gregor iad:

G. 1978,1991,Hj.ang l_. et al, 1978).

Внутрибрюшинное введение липосом при алло1

рансплантации ткани селезенки в подвздошную ям! приводило к тому, что содержание липосом трансплантате и его ложе на 1 сутки превышало э-i показатели при внутривенном введении, что бы; возможным только при условии как гематогенног< так и лимфогенного поступления липосом трансплантат. Эти два возможных механизм транспорта липосом в организме после внутрибрюшне го введения предполагались в исследованиях по npv менению липосом, нагруженных цитостатиками, т лечения асцитных опухолей (Kobayashi Т. et al 1985), согласуются с особенностями всасывания лимфоотока из брюшной полости (Mar к А. 1939, Bakí

H.J. 1979). Однако, в наших зкепериментальнь условиях внутрибрюшинное введение не обеспечива/ более значительного и длительного поступления лк посом в трансплантат, ложе трансплантата и регис

Таблица 3. Распределение липосом по органам при трансплантации ткани селезенки (радиоактин^ность

сань : Группа j_Сутки_^

_:__1 _4_:_____74_;

Iii : 126 : за, а : 21,5- :

?чень : V : 127 : 55 : 19

: vil : 257 : 74 : 31,3 :

_________: ....... к______:_______169.44.. .1__66 25_________:_________22_____

: Iii : зо : 23,б : 19,6 :

inyc : V : 43 : 32 : 14 :

: vil : 40 : 23,5 : L7,2 :

_: К : 27,15: 20,4 : 15_L

: in : 234 : 133,6 : ios

то- : ~ v : 223 : 190 : 89 :

{ник : vil : 542 : 320 : 170

_; X : 229 : 254__: 164_

: . 111 : 615 : 129 : 95

*нс- : V : 326 : 429 : 132 :

хнтат : VII : 68 : 67,5 : 42,1

_ X : 351,5 : 141_: 5.1,25__i

>же : III : 413 -: 195,2 : 52,9 :

\нс- : V : 1374 i 318 : иэ :

хнтата: VII : 138 : 43,6 : 25,6 :

_: х : 343,6 : юз_ 22,5

'Иона-: III : 952 : 242 """ : 762

зные : V : 1163 : 156 : 64

хФоуз-: vil :' 230 : 163 : 37,36

_: X : 184,2 ; 40,6 : 27,8 :

хзличия радиоактивности органов с радиоактив-'ьи крови достоверны для всех экспериментальных 'К <Р<0.01)

- 17 -

нарные лимфоузлы, сопроьюждаясь незначительны! поступлением липосом в остальные органы, кроме печени, селезенки и надпочечника, захват липосом ко-торими был такой же эаачительний, «töte после внутривенного вЕ<едения (Группа X) .

Более значительным оказалось поступление липосом в трансплантат, ложе трансплантата, регио нарные лимфоузлы после подкожного введения, кото рое сопровождалось незначительным захватом липосо органами РЭС (Группа III). При аллотрансплантаци ткани селезенки поступление липосом в органы—мише hvt отмечалось только s течение -i Cyva/z., л а uvckjш чеиием регионарных лимфоу-З-лей.. уровень ради.сак тик, ности которых ук^еличивался к 7 суткам. Только пр аллотрансплантации кожного лоскута подкожное вве дение липосом приводило к пролонгированном поступлению липосом в трансплантатj которое в ко личественном отношении было не так значительно Аналогичный преимущественный транспорт липосом патологический очаг и регионарные лимфоузлы поел подкожного введения отмечен на модели гнойной огнестрельной раны, однако поступление липосом них было менее продолжительным (Голубчикова H.A. 1ЭЭ2, Шраер Т.Н. с соавт. 1ЭЗЭ).

Отмечено, что более выраженное накопление лм посом органами-мишенями наблюдалось после местног введения (Группа V). Уже в течении 1 суток содер жание липосом в ложе трансплантата и региояарнь лимфоузлах после местного введения было соотвест вено в 3,32 раза и 1,3 раза (P<®.©5) больше, чем после подкожного, а поступление липосом трансплантат носило пролонгированный характер, максимальный уровень радиоактивности трансплантат отмечался на 4 сутки, превышая уровень радиоактиЕ ности трансплантата после подкожного введения

32 раза (Р<0.<25> .

Было высказано предположение об общих механиз— IX транспорта липосом после подкожного и местного 'той введения, при которых наблюдался главный об— гзом транспорт липосом по лимфатической системе, было характерно создание депо липосом в месте <едения. Это позволило рассматривать оба пути ведения как разновидности непрямого эндолимфати— некого способа введения. При Таком введении в :анях везикулы логут связываться с межклеточными >мпонентами, с поверхности к. легок, либо оста —

пьс.д иитАкт^Ымц т е-гёним дшч епьнрю пери о л ¿г >©«йт*И СМарго;чМ£ П .Б ■ > 19В5, 1Ка1 с а 1 л V.! . еЬ аЛ )3'Л, РаЬе! Н.М.). Возможно, несвязавшиеся с к.летами интактные везикулы и поступают в лимфати— 'ские капилляры. (Чокно также предположить, что >мимо упомянутого механизма, росту активности сани регионарных лимфоузлов способствовало

»ступление к ним липосом в составе крови, в кото— >й везикулы способны циркулировать длительное )емя, сохраняя свою структуру благодаря высокому >держанию холестерина (Огедаг1асНз О. , 1973, 1991) . стественно, что какая-то часть липосом не вступа— : в контакт с Фагоцитирующими клетками, и с лип— щитами поступает в системный кровоток из трудно— > ликфотического протока. Их дальнейшее распреде-_ 'ние должно соответствовать законам распределения ж внутрисосудистом введении, обусловливая после-'ющую элиминацию их из организма и снижение радиоактивности большинства органов.

Кроме того, предположено, что при всех путях ведения поступление липосом в трансплантат в те— 1нии I. суток происходит вследствие его ишемии и юпности липосом к поврежденным ишемическим воз— 'йствием тканям. Пеханизм уменьшения степени не— ¡ратимости деструкции клеток носит, вероятно, до—

- 13 -

вольно сложный характер, включающий мембранопрс текцию, возникающую при взаимодействии липосом клеточной мембраной, а также модификацию клеточнь мембран за счет липосоиальных липидов, повышая v устойчивость к поврежденному воздействию ишемии Поступление липосом в трансплантат в теченк последующих суток наблюдается только после местнс го введения, и об"яснить такой рост радиоактин ности трансплантата только с позиций его ишем»-недостаточно. Поэтому было высказано предположен о возможной свл" и транспорта липосом в т ран ":п л а; тат с поступлением в него имиунокоапетентных кл«£ ток и реализации регионарного лимфостимулируючег эффекта липосом ускорением процессов peвacкyляp^ зации и релимфатизации трансплантата именно пос/ местного введения.

Полученные результаты позволили выделить меси ный путь введения в условиях аллотрансплантац!. ткани селезенку в регион, куда осуществляет^ трансплантация почки в клинике, как наиболее опт1 мальный для направленного транспорта липосом тканевой трансплантат и регионарные лимфоузлы, г; наблюдается локализация иммунного конфликта nj тканевой трансплантации без первичной васкуляризг ции трансплантата.

Распределение малых нейтральных липосом у ж! вотных с аллотрансплантацией почки.

На следующем этапе исследований результаты, п< лученные при тканевой аллотрансплантации проии прон^ерку в условиях органной аллотрансплантац! (Таблица 4). Установлено, что внутривенное введ< ние (Группа IX) липосом сопровождается значител: ным захватом их печенью и в большей степе! трансплантатом, обеспечивая высокое содержание Л1 посол в них в течении 1 суток. Обнаружено такж< что значительное накопление липосом осуществляет'

Т£зб.1иц-л <1. Распределение липосом при аллот— ^нсплангацчи ре>Чкл1 (ралиозюгцфНОсть р пргэц-гнтах; .

Ткань : Группа : Сутки *

• 1 : 4 7 • / •

Течень VI 45, 0 57,3 15, 6

IX 126, 1 78,6 19,6

1од*елу -

эчная же-- VI 47,0 55,3 23,3

?за IX 114,6 75,8 26,3

1адпочеч- VI 137,8 135.0 34,3

{ИК IX 105,0 241,6 51.3

Тимус VI 42,3 113,6 7,7

IX 60,5 48.5 15,3

Трансплан- VI 104,3 258,0 109,0

тат IX 162,5 73,6 13,5

1оже транс- VI 38,8 186,0 54,8

хлантата IX 76, 1 73,0 14,2

'егионарные VI 43,3 150,6 20,5

[имфоузлы IX 82,6 63,6 у 3 ф

Различия радиоактивности органов с радиоактив-устью крови достоверны для всех экспериментальных >чек <Р<0.01)

- 21 -

надпочечником и продолжается до 4 суток. Поступлс кие липосон после внутривенного введения в ло.) трансплантата, регионарные лимфоузлы и тимус бы/ менее значительно и непродолжительно во времени.

После местного е<ведения наблюдалось низкое с~ держание липосом в крови и незначительное постуг ление их в печень — в 2.8 раза меньше, чем пос; внутривенного Е^ведения (Р<0.£>5). Обнаружено, что условиях органной трансплантации после местног введения наблюдается значительное, до 4 суто1 поступление липосом не только в регионарнне лимфе узлы, но и з тимус, яе л-л» ¡«.и Л с д ц-:-нт ральиыц ли лф:: идгпш органом, превышал аа ллогичний пзказате/ после внутривенного введения в 2,5 раза (Р<©.©5) Кроме того, после местного введения наблюдаете пролонгированное поступление липосом в транспла* тат, его ложе и надпочечник. Установлено, что на сутки наблюдается максимальное содержание липосс в трансплантате, в 3,5 раз=а (Р<0.05) превышают* таковое после внутривенного введения (Группа VI),

Таким образом, в условиях органной аллот рансплантатции подтверждена возможность пролонгр роЕ<анного до 4 суток поступления липосом трансплантат и иммунокомпетентные органы пос> местного введения липосом в организм животнэге обнаруженная сначала в условиях тканевс

трансплантации, при одновременном эффекте снижет захвата липосом органами ретикуло-эндотелиальнс системы.

При трансплантации органа с его первичне васкуляризацией, несмотря на различия в распред? лении липосом после-внутривенного и местного вв€ дения, на наш взгляд, наиболее целесообразным яе лялось бы совместное использование этих путей вв« дения, что позволило бы при обработке режимов ее« дения создать высокую концентрацию липосом

— 2"-3 —

1нсплантате и инмуноконпетентных органах в тече— ■ ¿1 суток после введения и уменьшить Функцио-;ьную нагрузку на печень.

ВЫВОДЫ.

и

1. При различных моделях трансплантации мишеня-для липосом после поступления в организм яе+ля-:я трансплантат, локе трансплантата, иммуноком-•ентные органы и надпочечник.

2. В условиях аллотрансплантации возможен прей — .ественный транспорт липосом в трансплантат и :унокомпетентные органы, выраженность и продол-ельность которого может зависеть от модели реплантации и пути введения липосом.

3. В условиях тканевой аллотрансплантации внут— <енное введение липосом сопровождается массивным оплением органами РЭС и надпочечником, превыша-м аналогичные показатели в трансплантате, его :е и регионарных лимфоузлах.

4. Распределение липосом в организме при аллот-:с-плантации ткани селезенки после внутрибрюшного •дения не имеет существенных различий в сравне—

с внутривенным Ьутем введения.

5. При тканевой аллотрансплантации подкожное » дение липосом сопровождается их наибольшим на-лением в тканях регионарных лимфоузлов и нсплантата при отсутствии значительного поступ— :ия в органы РЭС.

6.В условиях аллотрансплантации ткани селезенки тижение максимального и продолжительного содер-ия липосом в трансплантате, ложе трансплантата егионарных лимфоузлах происходит после местного дения, обеспечивающего низкое поступление в ор-ы РЭС.

- 23 -

7.В условиях трансплантации почки после внутри е<енного введения достигается наибольшее поступи« ние липосом в трансплантат в течение первых суtoi однако нежелательным является захват липосом п« ченью.

8.При трансплантации почки после местного вв> дения не только снижено поступление липосом в п< чень, но и обеспечивается значительный и пролонп рованный транспорт липосом в трансплантат, его л; же, тимус и регионарные лимфоузлы.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ.

1.Оптимальным способом введения липосом позв< ляющ.им доставить их в трансплантат - и регионарш лим'фоузлы в условиях тканевой аллотрансплантащ должно быть местное введение.

2.При органной трансплантации для достижеш максимального и быстрого противоишемического 3<J Фекта липо«:он должно быть использовано их внутр1 венное введение.

3. При использовании липосом для иммуносуг ресии, когда необходимо избежать гепато— и орган< токсичного действия, оптимальным является местн< введение, позволяющее достигать постепенного пролонгированного поступления липосом в транспла* тат, тимус и регионарные лимфоузлы, снизить захвг липосом печенью и уменьшить дозу иммуносупресивнс го препарата.

Список работ, опубликованных по теме диссеще ции.

1.Семченко С.Б., Иванов C.B. Распределение nv посом на модели трансплантации кожного лоскута.