Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Влияние парентерального введения липосом на постишемическое повреждение конечности при компрессионной травме

КЕМЕРОВСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ МЕДИЦИНСКАЯ АКАДЕМИЯ

д ()Д 11а правах рукописи

- ) СЕН 1999

БАЯНОВ ВАДИМ ВЛАДИМИРОВИЧ

ВЛИЯНИЕ ПАРЕНТЕРАЛЬНОГО ВВЕДЕНИЯ ЛИПОСОМ НА ПОСТИШЕМИЧЕСКОЕ ПОВРЕЖДЕНИЕ КОНЕЧНОСТИ ПРИ КОМПРЕССИОННОЙ ТРАВМЕ (ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ)

14.00.1 б—патологическая физиология

АВТОРЕФЕРАТ

Диссертации на соискание учёной степени кандидата медицинских наук

Кемерово - 1999

Работа выполнена на кафедре травматологии, ортопедии и ВПХ Кемеровской государственной медицинской академии

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор А.Л. Кричевскин Научный консультант:

доктор медицинских наук, профессор А.Я. Евтушснк-о

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Г.В. Лнсаченко доктор медицинских наук, профессор В.А. Коиысова

Ведущее учреждение Центральный научно-исследовательский институт травматологии и ортопедии имени H.H. Приорова.

Защита диссертации состоится «_»_1999г. в_час. на заседании диссертационного совета /К-08465.01/ при Кемеровской медицинской академии по адресу: 650029, г. Кемерово, ул. Ворошилова, 22 А.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Кемеровской государственной медицинской академии

Автореферат разослан «_»__1999г.

Учёный секретарь

Кандида г медицинских паук, доцент В.И. I (ололужнмн

N

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность работы. Одной из важнейших причин компрессионной травмы мягких тканей конечностей, характерных для Кузбасса - главного угольного региона России, расположенного в сейсмоопасной зоне, являются аварии в шахтах. По данным А.Д. Ткачёва (1982), обрушения и завалы в шахтах встречаются в 27% всех причин травм в Кузбассе. Поэтому проблема оказания помощи поражённым с тяжелой компрессионной травмой конечности в течение многих лет привлекает пристальное внимание специалистов, изучающих травму в Кузбассе ( Ниренбург К.Г. 1972; Горячев А.Н. и др., 1981; Водянов Н.М. и др., 1982).

При длительном сдавлении большой массы мягких тканей развиваются опасные для жизни и травмированной конечности постишемические осложнения. Б основе этих осложнений, связанных с реперфузией, лежит цитолиз 'Кирнатовский И.Д. и др., 1984), мембраногенный отёк (Oden eî all., 1990) и самоотравление организма ишемкческими токсинами (Оксман Т.М. и др., 1971-'5).

С созданием липосом (Bangham et all., 1965) появилась перспектива мно-огранного воздействия на повреждённую клетку. Липосомы способны при оп->еделённых условиях «встраиваться» в клеточную мембрану и становится ча-тью её липидного бислоя (Gregoriadis G., at all, 1973; Iluang L. et all, 1975; Mar-:n F. J. et all, 1976; Байбаков Б. А. и др., 1980; Struck D. К. et all, 1980; Марголлс [.Б. и др., 1986; Alving С. et all, 1987). Кроме этого липосомы обладают анти-льтеративными (Брыгинский С.А. и др., 1988; Шраер Т.Н. и др., 1988; Крейнес >.М. н др., 1990; Бородулина Е.М. и др., 1996), детоксикационными (Loh Н.Н. et 11, 1980; Стефанов А.В. и др., 1984; Хромов А.С. и др., 1989; Van Rooijen N. et 1, 1990; Голубчикова Н А. и др., 1990; Ельский В.Н. и др. 1999), мембранопро-:кторными и лимфостимулирующими свойствами (Крейнес В.M и др., 1982; эродин Б.А. и др., 1985;-IlJpacp-T.il. и др., 1988; Добрынина О.В. и др., 1990; )ефанов А.В. и др.,: 1990; Семчеико С.Б., 1994; Чернобай Г.Н., 1998). Эти

свойства липосом привлекли к себе внимание и позволили получить лечебный эффект при патологических состояниях организма, связанных с реперфузией ишемизированной мышцы сердца (Биленко М.В., 1989; Стефанов A.B. и др.,1992). Ельскнм В.Н. и др. ( 1993-1999) получены данные о защитном влиянии фосфатидилхолиновых липосом на сердце, печень, почки, мозг, лёгкие при моделировании СДР на крысах. Однако, данных о влиянии липосом на течение реперфузионных осложнений со стороны скелетных мышц в условиях компрессионной травмы в доступной литературе нам найти не удалось. Между тем, подобные исследования весьма актуальны.

Всё изложенное послужило основанием для поиска способов лечения поражения мягких тканей сдавленной конечности с помощью липосом.

Настоящая работа является фрагментом научно-практической программы Администрации Кемеровской области «Система жизнеобеспечения шахтёров при авариях на шахтах Кузбасса» (Постановление Администрации Кемеровской области № 21 от 27 августа 1997г). В рамках программы в Кемеровской медицинской академии выполняется комплексное исследование на тему: «Профилактика реперфузионных осложнений ишемической травмы мягких тканей конечности».

Цель работы: Изучить в эксперименте возможность использования малых моноламмелярных липосом для уменьшения тяжести местных реперфузионных осложнений компрессионной травмы мягких тканей конечности.

Задачи исследования: 1 .Разработать экспериментальную модель компрессионной травмы мягких тканей конечности, характеризующуюся выраженными реперфузионными осложнениями.

2.Провести сравнительную оценку влияния различных путей введения липосом (внугриартериальный, внутривенный подкожный) на динамику развития местных реперфузионных осложнений в мягких тканях конечности. З.Опредедть онтимаиьный'иугь введения липосом для достижения максималь-

ного местного терапевтического эффекта.

Научная новизна. В эксперименте на модели компрессионной травмы мягких тканей конечности обнаружены свойства липосом - снижать темп нарастания посташемического отёка с последующей ускоренной резорбцией нек-эотического детрита, главным образом, из подкожной клетчатки; «защищать» зт ишемического повреждения «двигательные единицы» скелетной мышцы; :пособствовать сохранению проходимости лимфатических путей травмирован-гой конечности; ограничивать распространение ишемического некроза мышц и пособствовать раннему развитию процессов репаративной регенерации мыш-

[Ы.

Наиболее выраженный терапевтический эффект в повреждённой конечно-га обнаружен при однократном внутриартериальном и подкожном способах ведення липосом.

По материалам исследования получены приоритетные справки на изобрете-ля: «Способ профилактики местных и общих посгишемических осложнений т длительной компрессионной травме конечности» (per. № 97115337 от 8 нтября 1997 г.), и «Способ оказания неотложной медицинской помощи при [ительной компрессионной травме конечности» (per. № 9712508 от 11 декабря 97 г.).

Теоретическая и практическая значимость. Полученные в эксперименте зультаты свидетельствуют о том, что малые моноламмелярные липосомы мог быть обоснованно применены для снижения интенсивности местных репер-зионных осложнений, для профилактики миолиза и сохранения проходимо-i лимфатических путей при компрессионной травме мягких тканей. При этом чаге ишемического поражения создаются условия для более раннего разви-процессов репаративной регенерации мышц.

Прспзрат липосом удобен для однократного парэнтерального введения, реально можно применять на догоспитальном этапе для оказания помощи аженным в условиях массового поступления больных с компрессионной

травмой мягких тканей в условиях чрезвычайных ситуаций.

Апробация материалов диссертации. Результаты исследования доложен: и обсуждены на 4-ом Российско-Японском международном симпозиум (Иркутск 1996); на Международной конференции «Охрана здоровья населени угледобывающих районов» (Ленинск-Кузнецк 1997); на заседании областног общества травматологов- ортопедов Кузбасса (Кемерово 1997); на Всеросси£ ской конференции «Проблемы медицины и биологии» (Кемерово 1998); на рс гионарной научно-практической конференции «Фундаментальные аспекты ме дицины катастроф Сибири» (Новосибирск 1998); на международном симпози) ме «Проблемы лимфологии и эндоэкологии» (Новосибирск 1998).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 11 работ, в том числе в сс авторстве 2 монографии. Поданы заявки и получены 2 приоритетные справки н изобретения.

Объём и структура диссертации. Диссертация изложена на 118 страница машинописи и состоит из введения, обзора литературы, описания материала i методов исследования, результатов собственных исследований, обсуждения, за ключенкя, выводов, списка используемой литературы, включающего 131 отече ственный и 57 зарубежных источников. Работа содержит 10 таблиц, иллюстри рована 32 рисунками и диаграммами.

Основные положения, выносимые на защиту:

1 .На мелких лабораторных животных разработана модель компрессионно! травмы конечности с длительностью компрессии 6 часов, характеризующаяс: выраженными реперфузионными осложнениями.

2.Применение липосом на данной экспериментальной модели компресси опной травмы позволяет уменьшить степень тяжести ишемических поврежде ний травмированных мышц конечности.

3.Внутриартериалыюе введение липосом позволяет получить максималь ный-мембранонротекторимй эффект в травмированных нервных и мышечны: волокнах, максимальный противоотечный эф<|)екг в подкожно-жи|швой- клет

чатке и межмышечных пластах и максимальный антиальтеративный эффект, выражающийся в признаках апоптоза и более раннем начале регенерации мышечных волокон.

4.Подкожное введение липосом позволяет получить максимальный анти-эдемическкй эффект при сохранённой проходимости лимфатических путей гравмированной конечности.

5. Оптимальным вариантом введения липосом для уменьшения тяжести «иемических повреждений мягких тканей травмированной конечности является шутриартериальный и подкожный.

Материал и методы исследования Эксперименты выполнили на 372 крысах линии «Вистар» в возрасте 5-6 1есяцев массой 180-250 гр. Компрессионную травму конечности воспроизводи-[И наложением металлических тисков с площадью сдавливающей поверхности ,5 см2 . Под кетаминовым наркозом (25 мг внутримышечно ) на бедро накла-;ывались тиски и туго прикручивались. Через каждые 1-2 мин. тиски подкручи-ались в течение 20 мин. (Кулагин В. К.1965; Ефремов А. В. и др.1992). Прове-я серию опытов при 4-х часовом сдавлении у 20 животных, мы в этой серии олучили 100% выживаемость. В серии опытов при 6-ти часовом сдавлении из 0 животных выжило 16. Эта продолжительность сдавления была избрана в ка-естве базовой модели компрессионной травмы мягких тканей, вызывающей ак местные, так и общие реперфузионные изменения. К 12-м суткам ишемиче-<ий отёк разрешался и это было критерием к окончанию наблюдения.

В эксперименте нами использованы малые моколамелярпые липосомы. ля приготовления липосом был использовали метод Bangham A.D. et all, 965), апробированный Семченко С. Б.(1994). Для приготовления липосом )именяли яичный фосфатидилхолин («Биос», г.Новосибирск) и холестерин igma, США). Смесь фосфатидилхолина и холестерина растворяли в гороформе в молярном соотношении 7:5 из расчета 25 мг/мл и высушивали на гтацконном испарителе. Затем добавляли 0,15 М раствор NaCl и встряхивали

до образования суспензии липосом. После чего суспензию обрабатывали и ультразвуковом дезинтеграторе 1Л>-20 (Польша) при 4° С с частотой 22 кГц течение 5 минут.

Проведено 4 серии экспериментов (табл. 1). 1 серия - контрольная - на 10 животных проведено моделирование тяжелой компрессионной травмы без ле чения. 81 животному 2-й серии перед декомпрессией подкожно в 1-й межпаль цсвой промежуток там, где находятся лимфатические сосуды, однократно все дён препарат липосом. 80 животным 3-й серии внутривенно, струйно перед сия тием пресса, в ярёмную вену вводили препарат липосом. 72 животным 4 сери» перед освобождением от пресса была выполнена срединная лапаротомия, пункция брюшной аорты на уровне ее бифуркации с помощью катетера с тонкой иглой на конце, пережатие её на время, необходимое для декомпрессии, и после декомпрессии вводили внутриаортально в дистальном направлении в течение 5 минут препарат липосом в дозе 25 мг/кг массы животного, разведённый изотоническим раствором хлорида натрия 1 : 10. 5-и минутный промежуток времени введения преследовал цель увеличит!, время контакта препарата с ишемизиро-ванными тканями.

На 1, 6 и 12 сутки после травмы животных выводили из эксперимента путём наркотизации кетамином (25 мг )и пересечения яремных вен, при этом у животных для исследования брали венозную кровь, кусочки тканей травмированной и контрлатералыюй конечности для изучения отёка мышц и морфологических исследований.

Для оценки развития отёка травмированной конечности использовали методику определения длины окружности средней трети бедра на протяжении всего периода наблюдения.

Динамику шиемического отёка мышечной ткани изучали как на травмированной, так и на симметричной конечности по методике Иарророй (Липовецкий К.С. 1962). По щёку мышечной ткани определяли сухой остаток и егенемь гидратации мышц к их исходному уровню.

Электровозбудимосгь мышечной ткани определяли по показателям реобазы и хронакеии в течение всего эксперимента.

Скорость проведения импульса по нервному стволу и амплитуду М-ответа определяли с помошью стимуляционной электромиографии на 12 сутки наблюдения.

Состояние лимфатического русла оценивали методом прижизненной непрямой электрорентгенолимфографии с прямым увеличением изображения на электрорентгенографическом комплексе РЕЙС Д-ЭРГА 02.

Таблица № 1.

Распределение экспериментальных животных в соответствии с используемыми

методами исследования.

Раздел исследования Количество исследований

Подкожное введение липосом Внутривенное введение липосом Знутриарте риальное введение липосом Контроль Ицтакт-ные животные

1. Отработка модели эксперимента. 40

2.Измерение длины окружности конечности. 10 10 10 10

3. Определение отёка мышечной ткани. 21 24 22 25 10

4. Измерение электровозбудимости мышц. 7 18 16 12 20

5. Проведение электромиографического исследования. 7 8 8 8 7

6. Проведение лимфо-графического исследования. 18 12

7. Проведение морфологического исследования мышц. 28 30 26 25

^того: 372 животных

Морфологические исследования проводилось как на травмированной, так и на симметричной конечности. Забор материала проводился по методике Г.Л. Меркулова (1969г.) и Э. Пирса (1962) при выведении животных из эксперимента.

Статистическая обработка всего материала осуществлялась с использованием средней арифметической, ошибки средней (М ±ш). Достоверность полученных данных определяли по критериям непараметрической статистики (Гублер Е.В. 1978).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ [.Динамика развития отёка травмированного бедра

Проведённая контрольная серия экспериментов показала, что с первых часов после снятия пресса начинал развиваться отек, который достигал своего максимума к концу первых суток, локализуясь на всей травмированной конечности (рис. 1).

о/ /о

-Серия-1 контроль

—Серия -2 внутривенное введение липосом

—X—Серия -3 падгояаме введение липосом

—»—Серия -4

внутриартериальнае введение липосом Интактная

Рис. 1. Динамика изменения длины окружности травмированного бедра крысы при различных способах введения препарата липосом .

Со вторых суток наблюдения отёк прогрессивно снижался. На контрлатеральной конечности увеличения длины окружности не зафиксировано. При любом способе введения липосом развивающийся после реперфузии отек травмированной конечности значительно меньше; чем в кон тральнойсерии. Начиная с

и

7-10 суток после реперфузии, происходит его уменьшение, по сравнению с исходной величиной. Атрофия конечности под влиянием лнпосом наступает значительно раньше, чем в контрольной группе. При разных способах введения липосом интенсивность ликвидации отёка различалась.

Наименьший отёк с наиболее ранним переходом в атрофию конечности отмечен при внутриартериальном введении липосом. Несколько более выраженный отёк наблюдался в серии с подкожным ведением липосом. Менее выраженное влияние на развитие отёка оказало внутривенное введение липосом. 2. Динамика содержания жидкости в мышцах травмированной и симметричной, нетравмированной конечности.

Изучение содержания жидкости в мышечной ткани показало, что при тяжелой компрессионной травме изменения в мышцах происходят как в травмированной, так и в симметричной конечностях (табл. 1).

В травмированной конечности в контрольной группе процент содержания жидкости в мышце увеличивается, достигая пика к 6-м суткам. Далее этот показатель незначительно снижается к концу наблюдений, не достигая исходного уровня.

В опытных сериях, в отличии от контрольной группы, отёк мышц достигал максимума уже на 1-е сутки. Наиболее быстрое снижение содержания жидкости в мышцах отмечено при подкожном введении липосом. Гидратация .шшц к концу срока наблюдения превысила показатель интакгной конечности в гонгролыюй серии в 1,23 раза, при внутривенном введения липосом - в 1,21 >аза, при подкожном введении липосом - в 1,11 раза, а при внутриартериальном пособе введения липосом в 1,13 раза.

Содержание жидкости в мышцах контрлатсральной конечности увеличи-ось во всех сериях опытов, что подтверждает и данные литературы Лильникова Г.В. и др. 1978). Во всех сериях содержание жидкости в мышцах энгрлатеральной конечности (табл. 1) достигало максимума только к б-м еуг-1м, но было меньше, чем в травмированной конечности. При подкожном вве-

дении липосом на протяжении всего срока наблюдения имелась тенденция ; снижению отёка, по сравнению с контролем. В отличии от этого, при внутри венном и внутриартериальных путях введения липосом на 1-е сутки имелао тенденция к незначительному увеличению отёка, а затем, так же как и при под кожном введении наблюдалась тенденция к снижению содержания жидкости £ мышцах.

Таблица 1.

Динамика содержания жидкости в мышцах травмированной и симметричной

конечностей крысы при различных вариантах введения липосом

Серия экспериментов. Процент содержания жидкости в мышечной ткани (М+ш).

интакная мышца I сут 6 сут 12 ■ сут

Серия -1 контроль (без лечения) 59,2 ±0,6 73,7 ±1,25 76,1 ±1,01 73,1 ±0,76

Серия -1 коитроль(без лечения), контрла-тергльиая конечность 66,1 ±1,23 69,6 ±1,31 68,5 ±0,47

Серия -2 внутривенное введение лияосом 76,0 ±1,23 75,6 ±4,53 72,2 ±1,04

Серия -2 внутривенное введение липосом, контрлатеральная конечность 67,3 ±1,01 68,6 ±1,03 65,8 ±0,95

Серия -3 подкожное введение липосом 78,8* ±1,1 70,8 ±2,49 65,6 ±3,22

Серия -3 подкожное введение липосом, контрлатеральная конечность 65,4 ±0,92 67,1 ±1,7 64,3* ±1.15

Серия - 4 внутриартериальное введение липосом 76,2 ±1,8 72,7 ±0,85 67,3* ±1.03

Серия - 4 внутриартериальное введение липосом, контр латеральная конечность 68,2 ±1,3 70,2 ±1,28 64,7* ±0,71

*-Р < 0,05 в сравнении с контрольной серией по критерию и - Вилкоксона

К 12-м суткам содержание жидкости было достоверно меньше только при подкожном и внутриартериальном способах введения липосом. При внутривенном способе введения липосом в эти же сроки имелась лишь тенденция к уменьшению отёка. Гидратация мышц к концу срока-наблюдения превысила этот показатель мышцы интактной конечности в контрольной серии в 1,15 раза, при внутриненном введения ли носом - п 1,11 раза; при подкожном введении ли-

посом - в 1,08 раза, а при внутризртериалыюм способе введения липосом в 1,09 раза.

Количество жидкости в мышечной ткани травмированной конечности при внутриартериальном введении липосом снизилось незначительно. Из этого следует, что уменьшение отёка всей травмированной конечности происходит, в основном, за счет иятерстициальной жидкости, подкожной межмышечной клетчатки. Это особенно заметно уже с первых суток после травмы.

Изучение сухого остатка (Рис. 2) на 1г мышечной ткани показало, что масса мышечного волокна к 12-м суткам наблюдения больше сохранилась у животных при подкожном и внутриартериальном способах введения липосом, тогда как у животных в контрольной серии (без введения липосом) и при внутривенном введении наблюдалось более выраженное уменьшение массы сухого остатка мышц на фоне сохраняющейся гипергидратации. То же самое наблюдается и при морфологическом исследовании мышц у этих же животных.

1 - Интактная

100% 90% 60% 70% 60% 50% 40% 30% 20% 10« 0%

¡¡9,

; Ю,!

'2.3

| >5,(

'А/

>7:

12,

1 2 3 4 5

□ Сухой остаток □ Содержание жидкости

конечность.

2- Контрольная серия (без лечения).

3- Внутривенное введение липосом.

4- Подкожное введение липосом.

5- Внутриартериальное введение липосом.

Рис 2. Содержание сухого остатка в 1г мышечной ткани сдавленной конечности при различных способах введения липосом на 12-е сутки.

Эксперименты показали, что при любом способе введения препарата липо-;ом наблюдается уменьшение постишемического отёка травмированной конеч-гости при увеличении количества сухого остатка в 1 г мышечной ткани. Поэтому можно заключить; что введение липосом способствует сохранности ишеми-ированной мышечной ткани в условиях реперфузии,- предотвращая её лизис и езорбнию.

Таким образом, внутриартериальное введение липосом позволяет уже с 1-х суток снизить степень ишемического отёка травмированной конечности преимущественно за счёт уменьшения содержания жидкости в интерстициальных тканях.

Подкожный способ введения липосом, в отличии от внутриартериального, видимо, не обеспечивает быстрого контакта липосом с большой массой ише-мизированных тканей. Этим можно объяснить некоторое увеличение отёка конечности в первые сутки наблюдения. Но, так как при подкожном пути введения липосом они распространяются преимущественно лимфогенно (Семченко С.Б. 1994 г.), их контакт с ишемизированными тканями более продолжителен. При этом липосомы в очаг травмы попадают позже, чем при внутриартериаль-ном введении. В результате чего при подкожном введении липосом терапевтический эффект сохраняется дольше, чем при внутрисосудистых способах введения липосом.

Наименее выраженный антиэдемический эффект отмечается при внутривенном введении липосом. Это можно объяснить, в частности, кратковременным контактом липосом в наименьшей их концентрации с травмированными тканями, так как они попадают к ним, пройдя через малый круг кровообращения.

3. Влияние подкожного способа введения липосом на лимфоотток в травмированной конечности.

Проведённое лимфографнческое исследование показало, что подкожное введение липосом перед декомпрессией оказывает действие, препятствующее нарушению лимфооттока, характерного для компрессионной травмы конечностей, т.е. отсутствует стадия лймфостаза (Ефремов A.B. и др., 1995.). В отличии от контрольной серии, лимфографическая картина при подкожном введении приближается к картине интактной конечности, особенно на 3-й сутки наблюдений. Это даёт основание заключить, что, в отличии от контрольной серии, при подкожном введении липосом к 3-6 суткам лимфоотток в

травмированной конечности нормализуется.

4. Функциональная активность мышц сдавленной конечности при направленном транспорте липосом (по показателям электрической активности).

Определив реобазу на 20 интактных животных, которая равнялась 1,33±0,06 V и хронаксию, которая определялась у всех животных, при том минимальном значении времени, на которое рассчитан хронаксиметр 0,00] мсек., провели изучение этих показателей при различных способах введения липосом. Полученные данные представлены на рис 3 и 4.

—•—Серия 1- контроль \

—Серия 2-

внутривенное ;

введение липосом ! —х— Серия 3- подкожное ! введение липосом I

—♦— Серия 4- •!

внутриартериальное; введение липосом > ■-Интактная

Рис 3. Изменение реобазы при различных способах введения липосом.

*- Р<0,05 по критерию и-Вилкоксона - Манна -Уитни по сравнению с контролем.

Приведённые данные наглядно свидетельствуют о том, что любой способ введения липосом способствует ускорению восстановления показателей реобазы и хронаксии сдавленной мышцы. При внутриартериалыгом введении липосом, в отличии от контрольной серии, реобаза и хронаксия травмированной мышцы начинает определяется с 1 -х суток, а при подкожном введении липосом наблюдается самое быстрое снижение этих показателей.

Палее раннее начало восстановления электровозбудимости мышц при впутриарсериальном введении липосом может быть также связано с более бы-сгрым, чем-.ири подкожном и внутривенном введении,-попаданием препарата в

ишемизированные мышцы. Но его основная часть, по-видимому, успевает уйти по сосудистому руслу из очага, поэтому восстановление идёт медленно, только за счёт 1-й порции попавших в ишемизированную ткань липосом.

- Серия 1- контроль

-*— Серия 2-внутривенное введение липосом -х— Серия 3- подкожное введение липосом

-♦—Серия 4-

внутриартериальное введение липосом —-Интактная

Рис 4. Изменение хронаксии при различных способах введения липосом.

*- Р<0,05 по критерию и-Вилкоксона - Манна -Уитни по сравнению с

контролем.

Максимальное, но более медленное попадание и накопление липосом в ишемизированной мышце отмечается при подкожном их введении. Здесь весьма вероятен лимфогенный путь их распространения в проксимальном направлении в зону ишемизированных мышц, где они в наибольшем количестве накапливаются и дольше, по всей вероятности, встраиваются в повреждённую ишемизированную сарколемму мышцы. При подкожном введении препарата липосом наблюдаются самые низкие показатели реобазы и хронаксии из всех опытных серий.

4.2 Электромиографические показатели мышц сдавленной конечности при направленном транспорте липосом.

Проведённое электромиографическое исследование показало, что в группе интактных животных во всех случаях М-ответ имеет форму синусоиды с ла-тентностью 1,5-2,0 мс, с амплитудой 0,57+ 0,07 мВ и скоростью проведения импульса по нерш.ому волокну 15,7 11,36 м/'сск\

В серии 1 (контроль, без липосом) только в 4 случаях из 6 форма М-от-вета оставалась синусоидной, в 2-х случаях была гюлифазной и 2-х случаях М-ответа не было. Латентное время появления сигнала увеличилось более чем в 2 раза (4,25+0,25 мсек.). Скорость проведения импульса по нервному волокну снизилась в среднем в 3 раза (5,1 +0,12 м/сек.), а амплитуда М-ответа уменьшилась в среднем в 6-7 раз (0,07 ±0,03 мВ, против 0,57± 0,07 мВ). Снижение амплитуды М-ответа, изменение его формы, увеличение латенгного времени и снижение скорости проведения импульса по нервному стволу свидетельствует о демиелипизации нервных волокон (Бадалян Л.О, 1986).

Все эти показатели в сериях с введением липосом по скорости проведения импульса по нервному стволу ближе к показателям интактной конечности, чем в контроле, и особенно близки с достоверной разницей (Р<0,05) при внутривенном (9,7 ±0,21 м/сек.) и внутриартериалыюм введении липосом (13,8 +1,5 м/сек.). В этих же сериях короче, то есть ближе к показателям интактной серии, латентное время появления М-ответа.

При внутриартериалыюм введении липосом к 12-м суткам скорость проведения импульса по нервному волокну практически сравнима со здоровыми живот))ыми13,8 ± 1,5 м/сек. (Р < 0.05). Латентное время имеет самое низкое значение из всех опытных серий 1,8 ±0,13 мсек., амплитуда М-ответа имеет наибольшее значение из всех опытных серий - 0,27 ±0,046 мУ (Р < 0.05), и толь-ад на 50% меньше, чем у ингактных животных. Уменьшение миографических "фнзнаков демиелинизации нервного волокна (увеличение скорости проведения гервного импульса, снижение латентного времени, увеличение амплитуды М->твета), свидетельствует о мембранопротекторно.м свойстве липосом при ком-грессионной травме.

Применение липосом, независимо от способа их введения, позволяет лучшить электромиографические показатели 1равмированной конечности. Но ри впу-фиартериальном способе введения липосом их эффект наиболее выра-ен. Полученные данные свидетельствуют о том. что компрессионная травма

мышцы снижает, но не приводит к исчезновению электрическую активность мышцы и подтверждают данные Р. Я. Герштенкерна (1966) о сохранности медленно проводящих нервных стволов, несмотря на значительную силу сдавления мягких тканей. Полифазный характер получешшх миограмм также свидетельствует лишь о частичном выключении некоторых двигательных единиц (Бадалян J1. О., 1986).

5. Морфологические изменения в мышечной ткани травмированной конечности при различных способах введения липосом.

В контрольной группе животных морфологические проявления повреждений мягких тканей при компрессионной травме не имели принципиальных отличий от ранее описанных при ишемической травме другими исследователями (Колесникова H.A. и др., 1959; Секамова С.М., 1987). В контралатералыюй конечности животных возникали циркуляторные расстройства, завершавшиеся отеком эндомизия, перимизия. Как следствие этих нарушений, отмечалась, белковая зернистость цитоплазмы и исчезновение гликогена с узлами сокращения и очаговой фрагментацией мышечных волокон.

При внутривенном введении липосом морфологические изменения в травмированной конечности и контралатералыюй отличались меньшей интенсивностью. Регенерация мышц, как и в контрольной серии, отмечалась на 12 сутки.

При подкожном введении липосом альтерация мягких тканей конечности не увеличивалась, так как травматический отек был слабо выражен. Ранний фагоцитоз возникал лишь в местах апоптоза миосимпластов. С 6-х суток встречались и ранние признаки репаративной регенерации мышечных волокон в виде усиленного миосателлитоцитоза и регенераторной гипертрофии сохраненных миосимпластов. В фазе пролиферации регенерация скелетных мышц задерживалась, сопровождалась нарастающей регенерацией соединительной ткани и завершалась субституцией. Атрофии были подвергнуты только мышечные волокна, заключенные в массив созревающей грануляционной

ткани. В контралатеральной конечности рефлекторно возникавшие расстройства кровообращения проявлялись обратимыми дистрофическими изменениями в мышечных волокнах и мукоидном набухании межуточного вещества стромы. К концу наблюдения в мягких тканях контрлатералыюй конечности следы былой рефлекторной реации обнаруживались только по сохранившемуся миосателлитоцитозу.

При внугриартериальном введении липосом в мягких тканях конечное™ животных обнаруживались изменения аналогичные подкожному введению липосом, подтверждающие их противоотёчные, мембранопротекторные и антиальтеративные свойства. В этой серии очищение зон повреждения и регенерация мягких тканей отмечались к 6-м суткам.

Таким образом, проведённое исследование показало, что основными патологическими процессами в травмированных тканях при компрессионной травме конечности является ишемический некроз, травматический отёк и как следствие этого - воспаление. Липосомы не изменяют фаз классического течения воспалительного процесса и, обладая мембранопротекторньш противоотёчными и антиальтеративными свойствами, сокращают фазу экссудации. Мембранопротекторные свойства липосом способствуют переживанию повреждённых клеток и гибели их через апоптоз с образованием апоп-тозных тел. Алоптозные тела не вызывают воспалительной реакции и поглощаются исключительно макрофагами и клетками окружения. Это способствует более быстрому очищению зоны повреждения и раннему развитию репаративной регенерации повреждённых структур.

Выводы

1 .Разработана модель компрессионной травмы конечности у крыс, осуществляемая путём наложения пресса на 6 часов. Эта модель характеризуется выраженными реперфузионными осложнениями и позволяет выявить максимум защитных и патологических реакций организма. Данная модель позволяет выполнять манипуляции по регионарному введению липосом.

2.В течение первых суток после 6-и часовой компрессии у животных в травмированной конечности развивается выраженный ишемический отёк за счёт мышечной ткани и подкожной клетчатки. При этом блокируются лимфатические пути, снижается скорость проведения импульса по нервному стволу, снижается количество двигательных единиц в мышцах, снижается электрическая активность травмированных мышц, отмечается морфологическая картина шнемического некроза мышц. Регресс этих показателей начинается с 12-х суток.

3.Внутриартериальное введение липосом перед релерфузией сопровождается наиболее выраженным снижением ишемического отёка подкожной клетчатки и, в меньшей степени, в мышцах. При этом с 1-х суток после травмы отмечается восстановление электрической активности мышц с морфологическими признаками апоптоза и регенерации мышечных волокон.

4.Подкожное введение липосом перед реперфузией способствует уменьшению отёка мышечной ткани и препятствует блокированию лимфатических путей травмированной конечности. При подкожном введении липосом наилучшим образом восстанавливаются показатели электровозбудимости мышц. В морфологической картине преобладают признаки регенерации мышц и соединительной ткани.

5,Основным результатом местного действия липосом при тяжёлой компрессионной травме конечности является противоотёчный эффект, сохранение проходимости лимфатического русла, уменьшение признаков демиелинизации нервных стволов, ускорение процессов резорбции и более ранней регенерации мышц.

6. Любой способ применения липосом при тяжелой компрессионной травме конечности позволяет снизить степень тяжести местных реперфузионных осложнений. Терапевтический эффект может быть получен при однократном местном парентеральном использовании препарата липосом.

7.Инъекционная форма препарата создаёт условия для реального применения его с профилактической целыо при тяжелой компрессионной травме мягких тканей конечности в условиях массового поражений на догоспитальном этапе. Помимо этого, препарат может быть применён для предупреждения или уменьшения местных реперфузионных осложнений острой ишемической травмы конечности.

Список оп убликованных работ по теме диссертации.

1. Особенности оказания помощи больным с компрессионной травмой в экстремальных условиях.//!} кн. Программа и тезисы докладов международного симпозиума фонда обмена Японии, России и стран Северо- Восточной Азии. Владивосток, 1994г., - С. 224-225. (Соавт. Кричевский А.Л., Рудаев В.И.).

2. Принципы профилактики краш-синдрома в условиях катастроф на догоспитальном этапе.// 4 Российско-Японский международный медицинский симпозиум. Тезисы докладов, г. Иркутск, 3-8 сентября 1996 г., - С. 38. (Соавт. Кричевский А.Л., Галеев И.К., Рудаев В.И., Чснобай Г.Н.).

3. Динамика морфологических изменений мыши при краш-снндроме с учётом различных путей введения липосом // Тезисы докладов международной конференции «Охрана здоровья населения угледобывающих районов» г. Ленинск-Кузнецкий 18-19 сентября 1997г.- С. 347-350. (Соавт. Рудаев В.И., Чернобай Г.Н.).

4. Сравнительный анализ влияния различных путей введения липосом на течение местных проявлений тяжелой компрессионной травмы конечности с использованием электромиографии.// Тезисы докладов международной конференции «Охрана здоровья населения угледобывающих районов» г. Ленинск-Кузнецкий 18-19 сентября 1997 г.-С. 350-351. (Соавт. Рудаев В.И, Мельянце-ва Л.П., Баштэнова Т.Б. ).

5. Прогноз и предупреждение осложнений ишемической травмы на догоспитальном этапе в условиях чрезвычайных ситуаций,// Монография. Кемерово

1997. 208 с. ( Соавт. Кричевский А.Л., Галеев И.К., Рудаев В.И., Красилыш-ков Г.Н., Чернобай Г.Н., Альтшуллер Е.М.).

6. Влияние подкожного введения препарата липосом на лимфоотгок в пораженной конечности при её компрессионной травме в эксперименте. // Сб. Фундаментальные аспекты медицины катастроф Сибири. Материалы конференции. Новосибирск, 1998, - С. 44-46. (Соавт. Кричевский А.Л., Ефремов A.B., Карпов A.B., Рудаев В.И.)

7. Принципы профилактики Краш-синдрома в условиях катастроф на догоспитальном этапе // Сб. Медицина катастроф ред. Галеев Кемерово 1998г. - С. 94-96 (Соавт. Кричевский А.Л., Галеев И.К., Чернобай Г.Н.).

8. Экспериментальное обоснование профилактики последствий компрессионной травмы мягких тканей в условиях ЧС. // Сб. Фундаментальные аспекты медицины катастроф Сибири. Материалы конференции. Новосибирск, 1998, -С. 58-60. (Соавт. Кричевский А.Л., Рудаев В.И.)

9. Профилактика лимфогенных реперфузионных осложнений при тяжелой компрессионной травме мягких тканей конечности с помощью липосом. // Тез. докл. межд симпозиума «Проблемы лимфологии и эндоэкологии.» г. Новосибирск 19-20 ноября 1998г. ( Соавт. Ефремов A.B., РудаевВ.И., Карпов A.B.).

Ю.Влияние липосом на морфофункциональное состояние мышц при тяжелой компрессионной травме мягких тканей конечности. // Сб. Проблемы медицины и биологии Кемерово 1998. С. 108-109. (Соавт. Рудаев В.И. Чернобай Г.Н, Мельянцева Л.П.).

1ГИшемическая травма конечности.// Монография Томск. 1999 год. (Соавт. Кричевский А.Л., Галеев И.К., Рудаев В.И.).

12.Способ профилактики местных и общих посташемических осложнений при длительной компрессионной травме конечности. Заявка на патент РФ приоритет № 97115337 (016023) ог8 сентября 1997 года. (Рудаев В.И., Кричевский А.Л., Галеев И.К.)

13.Способ оказания неотложной медицинской помощи при длительной компрессионной травме конечности. Заявка на патент РФ приоритет ЛЬ 9712508 (022232) от 11 декабря 1997 года, (1>удаев В.И., Кричевский А.Л., Галеев ИХ)

Соискатель:

Баянов В.В.