Автореферат и диссертация по медицине (14.03.06) на тему:Направленный поиск и фармакологические свойства веществ с антиоксидантной активностью среди конденсированных и неконденсированных производных бензимидазола

На правах рукописи

8Э4604991

ТИБИРЬКОВА ЕЛЕНА ВИКТОРОВНА

НАПРАВЛЕННЫЙ ПОИСК И ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ВЕЩЕСТВ С АНТИОКСИДАНТНОЙ АКТИВНОСТЬЮ СРЕДИ КОНДЕНСИРОВАННЫХ И НЕКОНДЕНСИРОВАННЫХ ПРОИЗВОДНЫХ БЕНЗИМИДАЗОЛА

14.03.06 - фармакология, клиническая фармакология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

1 о ИЮН 2010

ВОЛГОГРАД-2010

004604991

Работа выполнена в ГОУ ВПО университет Росздрава»

«Волгоградский государственный медицинский

Научный руководитель:

Официальные оппоненты:

Член-корреспондент РАМН, Заслуженный деятель науки РФ, доктор медицинских наук, профессор

Спасов Александр Алексеевич

доктор медицинских наук, профессор

Островский Олег Владимирович доктор медицинских наук, профессор

Макляков Юрий Степанович

Ведущая организация:

ГОУ ВПО «Саратовский государственный медицинский университет Росздрава»

Защита состоится « » ИНРА Я_2010 г. в __ч. на заседании

Диссертационного Совета Д 208.008.02 при ГОУ ВПО «Волгоградский

государственный медицинский университет Росздрава» по адресу: 400131, г. Волгоград, пл. Павших борцов, 1

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет Росздрава»

Автореферат разослан « » М-А-Я_2010 г.

Ученый секретарь Диссертационного Совета, доктор медицинских наук,

профессор А.Р. Бабаева

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Свободнорадикальное окисление играет важную роль как в нормальной жизнедеятельности клеток, так и в развитии патологического процесса [Моругова Т.В., Лазарева Д.Н., 2000; Бульон В.В. и др., 2006]. Избыточная продукция свободных радикалов и (или) нарушение функционирования антиоксидантной системы рассматриваются в качестве одних из наиболее значимых факторов патогенеза старения [Голубев А.Г., 2003; Арутю-нян А.В., Козина J1.C., 2009; Golden T.R. et al., 2002], сердечно-сосудистых заболеваний [Неверов И.В., 2001; Капелько В.И., 2003; .Панкин В.З. и др., 2004; Ковалева О.Н. и др., 2005; Tardif J. С., 2005], бронхолегочной патологии [Фар-хутдинов У.Р., Фархутдинов P.P., 2000; Камышников B.C., 2003], заболеваний печени [Девяткина Т.А. и др., 2003; Камышников B.C., 2003], нейродегенера-тивных заболеваний [Федин А.И., 2002; Дзюба А.Н., Сорокин Ю.Н., 2004; Ка-тунина Е.А., 2005; Bonnefont-Roussclot D. et al., 2000; Buhmann С. et al., 2004], ишемии мозга и поражения нейронов [Зозуля Ю.А. и др., 2000; Спасов А.А. и др., 2003; Бизенкова МН. и др., 2006], сахарного диабета и его сосудистых осложнений [Балаболкин М.И., Клебанова Е.М., 2000; Бардымова Т.П. и др., 2006; Vincent A.M. et al., 2004] и т.д.

Важную роль в клинической практике играют антиоксидантные средства, способные поддерживать структурный гомеостаз организма в условиях патологии [Шанин Ю.Н., 2003; Меньшикова Е.Б. и др., 2008; Gutteijdge J.M.C., Halliwell В.H., 2000; Guerra E.J., 2001]. Однако, несмотря на широкий спектр препаратов для подавления реакций свободнорадикального окисления, возникают проблемы, связанные с использованием существующих средств, такие как токсичность некоторых фенольных антиоксидантов, вытеснение эндогенных антиоксидантов при использовании синтетических соединений и т.д. [Окови-тый C.B., 2003; Шанин Ю.Н., 2003; Лукк М.В. и др., 2008]. В связи с этим является актуальным поиск новых ангиоксидантных веществ, на основе которых могут быть созданы лекарственные препараты для лечения заболеваний, сопровождающихся избыточной активацией процессов пероксидации.

Производные бензимидазола имеют л-электронноизбыточную структуру, что позволяет предполагать наличие у них антиоксидантной активности [Ав-дюнина Н.И., 1979; Пожарский А.Ф., 1985; Анисимова В.А. и др., 1996]. На протяжении ряда лет на кафедре фармакологии и в НИИ фармакологии Волгоградского государственного медицинского университета широко исследуются различные виды биологической активности данного класса соединений, в том числе показана их способность ингибировать свободнорадикальные реакции [Спасов А.А., 1983; Островский О.В., 1996; Косолапов В.А., 2005]. Учитывая вышесказанное, были проведены поиск новых высокоактивных антиоксидант-ных веществ среди конденсированных и неконденсированных производных бензимидазола и изучение их влияния на процессы пероксидации при различных патологических состояниях.

Диссертационная работа выполнена в рамках Федеральной целевой научно-технической программы «Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития науки и техники гражданского назначения» (№ государственной регистрации 01200116045), является составной частью научно-исследовательской программы «Поиск, разработка и фармакологическое изучение веществ, проявляющих антиоксидантные свойства» (№ государственной регистрации 01200609434), включенной в план НИР Волгоградского государственного медицинского университета. Тема работы утверждена на заседании Учёного Совета Волгоградского государственного медицинского университета (протокол № 8 от 20.04.2007 г.).

Целью настоящего исследования являлся направленный поиск высокоактивных антиоксидантных соединений в ряду конденсированных и неконденсированных производных бензимидазола с последующим детальным изучением влияния наиболее активных веществ на процессы пероксидации и доклиническим исследованием их специфической активности на различных патологических моделях.

Для достижения указанной цели представлялось необходимым решить следующие задачи:

1. Провести прогноз наличия высокоактивных антиоксидантных веществ среди ранее неиспытанных соединений из ряда конденсированных и некондем-сированных производных бензимидазола, а также изучить антиоксидантные и антирадикальные свойства веществ, отобранных при проведении прогноза, и препаратов сравнения на моделях in vitro.

2. Определить зависимость действия изучаемых соединений на свобод-норадикальные процессы от их химических структур и физико-химических свойств.

3. Исследовать механизмы действия наиболее активных веществ и препаратов сравнения на различные звенья свободнорадикальных процессов на моделях in vitro.

4. Изучить острую токсичность наиболее активных соединений, рассчитать их терапевтический индекс и выбрать наиболее эффективные вещества для доклинического изучения их специфической активности.

5. Исследовать защитное действие наиболее активных соединений и препаратов сравнения на различных моделях острой гипоксии.

6. Изучить противоишемические свойства наиболее активных веществ и препаратов сравнения на модели ишемии головного мозга путем билатеральной окклюзии сонных артерий.

7. Исследовать влияние наиболее активных соединений и препаратов сравнения на процессы псрекисного окисления липидов и активность ферментов антиоксидантной системы, а также их гемореологические свойства при билатеральной окклюзии сонных артерий с контролируемой гипотензией.

8. Изучить влияние наиболее активных веществ и препаратов сравнения на показатели перекисного окисления липидов и активность ферментов антиоксидантной системы, а также их защитное действие в отношении Р-клеток поджелудочной железы в условиях стрептозотоциновой интоксикации.

Научная новизна. Впервые для новых оригинальных химических соединений из ряда конденсированных и неконденсированных производных бензи-мидазола был проведен прогноз уровня антиоксидантной активности в программном комплексе «Микрокосм» 4.2 с последующим экспериментальным изучением антиоксидантных и антирадикальных свойств веществ, выбранных на основе прогноза. Обнаружено, что наиболее активными являются производные N'-замещенных пирроло[1,2-а]бензимидазолов, а также N9-пиперидиноэтильные производные имидазо[1,2-а]бензимидазолов, имеющие в качестве радикала R2 фенил, замещенный фенил (п-оксифенил, 4-фторфенил, 3,4-дихлорфенил) или а-нафтил. В ходе выявления взаимосвязи между действием изучаемых веществ на свободнорадикальные процессы и их физико-химическими свойствами были установлены параметры, детерминирующие наличие выраженных антиоксидантных свойств у производных бензимидазола, что позволило дать рекомендации по направленному синтезу высокоактивных антиоксидантных соединений. Были исследованы механизмы действия наиболее активных веществ, относящихся к ряду производных пирроло[1,2-а]бензимидазолов, под лабораторными шифрами РУ-642 и РУ-643 на различные звенья свободнорадикальных процессов in vitro и установлена их наибольшая эффективность в отношении липопероксильного радикала и (в высоких концентрациях) стабильного свободного радикала 2,2-дифенил-1-пикрилгидразил. Впервые были обнаружены противогипоксические и противо-ишемические свойства у нового высокоактивного и умеренно токсичного анти-оксидантного вещества РУ-642, а также его способность нормализовать гемо-реологический статус организма при ишемии головного мозга с последующей реперфузией и проявлять защитное действие в отношении р-клеток поджелудочной железы при интоксикации стрептозотоцином. Доказано, что в основе эффективности исследуемого соединения в условиях данных патологий лежит антиоксидантный механизм его действия.

Научно-практическая значимость работы. Прогноз уровня антиоксидантной активности в программном комплексе «Микрокосм» 4.2 с последую-

щей экспериментальной проверкой может быть эффективно использован для целенаправленного поиска новых гетероциклических производных с высокой антиоксидантной активностью. Полученные данные свидетельствуют о целесообразности поиска ингибиторов перекисного окисления липидов среди производных пирроло[1,2-а]бензимидазолов. На основании выявленной зависимости антиоксидантной активности изучаемых соединений от их физико-химических параметров были даны рекомендации по оптимизации поиска субстанций в аналогичных рядах веществ и направленному синтезу эффективных аитиокси-дантных соединений. Получены данные о наличии у вещества РУ-642 противо-гипоксических и противоишемических свойств, обнаружена его способность снижать количество продуктов перекисного окисления липидов, повышать активность ферментов антиоксидантной системы и улучшать реологические параметры крови при ишемии головного мозга с последующей его реперфузией, а также уменьшать образование продуктов перекисного окисления липидов, увеличивать активность антиоксидантных ферментов и проявлять протекторное действие в отношении Р-клеток поджелудочной железы в условиях интоксикации стрептозотоцином. Выраженное защитное действие соединения РУ-642 при различных патологических состояниях, сопровождающихся активацией сво-боднорадикапьных процессов, определяет перспективность проведения дальнейших фармакологических и токсикологических исследований данного вещества.

Реализация результатов исследования. Прогноз уровня антиоксидантной активности в программном комплексе «Микрокосм» 4.2 с последующей экспериментальной проверкой используется на кафедре фармакологии и в НИИ фармакологии Волгоградского государственного медицинского университета для целенаправленного поиска высокоактивных антиоксидантных веществ среди новых конденсированных и неконденсированных производных бензимида-зола. Выявленные закономерности между химическими структурами изученных производных бензимидазола и их способностью ингибировать процессы перекисного окисления липидов принимаются во внимание при синтезе новых

антиоксидантных соединений в НИИ физической и органической химии Южного федерального университета, а также в экспериментальной работе лаборатории органического синтеза НИИ фармакологии Волгоградского государственного медицинского университета. Результаты работы используются в лекционных курсах на кафедрах фармакологии, химии, фармакологии и биофармации ФУВ Волгоградского государственного медицинского университета, на кафедре фармакологии Ростовского государственного медицинского университета.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Производные N'-замещенных пирроло[1,2-а]бензимидазолов являются перспективным классом соединений в плане поиска новых веществ, способных ингибировать процессы перекисного окисления липидов.

2. Прогноз уровня антиоксидантной активности производных бензими-дазола в программном комплексе «Микрокосм» 4.2 с последующей экспериментальной проверкой позволяет оптимизировать поиск высокоактивных антиоксидантных соединений среди веществ данного ряда.

3. Наиболее выраженную антиоксидантную активность среди новых конденсированных и неконденсированных производных бензимидазола проявляют производные N'-замещенных пирроло[1,2-а]бензимидазолов, а также пиперидиноэтильные производные имидазо[1,2-а]бензимидазолов, имеющие в качестве радикала Яг фенил, замещенный фенил (п-оксифенил, 4-фторфенил, 3,4-дихлорфенил) или а-нафтил. К физико-химическим параметрам, детерминирующим наличие выраженных антиоксидантных свойств у производных бензимидазола, относятся: молекулярная рефракция ароматического цикла молекулы вещества > 45,90; 22,48 < молекулярная рефракция радикала Я3 < 30,83; липофильность ароматического цикла молекулы вещества > 2,47; 1,41 < липо-фильность радикала II3 < 2,20; суммарный заряд радикала > 0,076; -0,062 < суммарный заряд радикала Я3< -0,004.

4. Производное Ы'-замещенных пирроло[1,2-а]бензимидазолов соединение РУ-642 превосходит по условному терапевтическому индексу антиокси-

дантной активности, полученной на модели аскорбат-зависимого перекисного окисления липидов, остальные исследуемые производные бензимидазола, а также препараты сравнения тролокс, дибунол и мексидол. Вещество РУ-642 эффективнее мексидола на различных моделях острой гипоксии; не уступает ему по выраженности противоишемических свойств; оказывает большее, чем препарат сравнения липоевая кислота, защитное действие при интоксикации стрептозотоцином, что является предпосылкой для дальнейших расширенных фармакологических исследований данного соединения.

Апробация работы. Материалы диссертации докладывались и обсуждались на X11-XIH Региональных конференциях молодых исследователей Волгоградской области (Волгоград, 2007-2008 гг.); 65-67-й итоговых научных конференциях студентов и молодых ученых Волгоградского государственного медицинского университета (Волгоград, 2007-2009 гг.); Пятой Российской конференции «Гипоксия: механизмы, адаптация, коррекция» (Москва, 2008 г.).

Публикации

По теме диссертации опубликовано 17 работ (из них две - в центральной печати).

Объем и структура работы

Диссертация изложена на 213 страницах машинописного текста, иллюстрирована 40 рисунками и 50 таблицами. Состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части (главы 2-4), обсуждения результатов, выводов, списка литературы, включающего 159 отечественных и 46 зарубежных источников.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы исследования

Эксперименты выполнены на 130 белых неинбредных крысах обоего пола массой 200-400 г. и 263 белых неинбредных мышах обоего пола массой 1736 г., содержащихся в условиях вивария с естественным световым режимом на стандартной диете (ГОСТ Р 50258-92), согласно методическим руководствам и нормативным документам - ГОСТ 3 51000.3-96 и 51000.4-96; правила и Меж-

дународные рекомендации Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых при экспериментальных исследованиях (1997); правила лабораторной практики (GLP) в РФ, утвержденные приказом Минздрава РФ от 19 июня 2003 г. №267. Острую токсичность соединений исследовали в соответствии с требованиями и инструкциями Федеральной службы по надзору в сфере здравоохранения и социального развития [Хабриев Р.У., 2005].

В работе изучены 27 веществ под лабораторными шифрами «РУ», синтезированные в НИИ физической и органической химии Южного федерального университета1. Из них 21 соединение относится к производным М^-замещенных имидазо[1,2-а]бензимидазолов, 6 соединений - к производным N'-замещенных пирроло[1,2-а]бензимидазолов. В качестве препаратов сравнения использовали тролокс (Fluka, Швейцария), дибунол (Merck, Германия), мексидол (НИИ фармакологии РАМН, Россия), липоевую кислоту (ICN Марбиофарм, Россия).

Прогноз аитиоксидантнои активности у 100 новых конденсированных и неконденсированных производных бензимидазола из компьютерной базы данных Волгоградского государственного медицинского университета проводили в программном комплексе «Микрокосм» 4.22.

Антиоксидантную активность отобранных при прогнозе веществ изучали в экспериментах in vitro на модели аскорбат-зависимого перекисного окисления липидов (ПОЛ) [Панкин В.З. и др., 1975]. Антирадикальные свойства соединений оценивали по их способности инактивировать стабильный свободный радикал 2,2-дифенил-1-пикрш-гидразил (ДФПГ) (Sigma, США) [Glavind J., 1963].

Для выявления взаимосвязи между антиоксидантной активностью и физико-химическими свойствами изучаемых веществ использовали подструктур-ный анализ [Васильев П.М., 1983]. Предварительно рассчитывали стерические

1 Выражаем глубокую признательность ведущему научному сотруднику НИИ физической и органической химии Южного федерального университета, к.х.н. В.А. Анисимовой за синтез и предоставление субстанций веществ для данной работы.

2 Выражаем глубокую признательность старшему научному сотруднику лаборатории лекарственной безопасности НИИ фармакологии Нолгоградского государственного медицинского университета, к.б.н., с.н.с. П.М. Васильеву за содействие при исполнении данной работы.

[Arup K.G, Gordon M.C., 1987], липофильные [Vellarkad N.V. et al., 1989] и электронные [Кларк Т., 1990] параметры, используя квантово-химические методы, реализованные в программном обеспечении CS Chem3D® 8.0.

Влияние наиболее активных веществ на процессы хемилюминесценции (XJI) изучали на хемилюмшгометрс «XJI-ООЗ» (Уфа, Россия). Фиксировали показатель суммарной светимости в условных единицах. Для исследования анти-оксидантной активности соединений использовали метод Fe2*-индуцированной ХЛлипидов [Фархутдинов P.P., Лиховских В.А., 1995]. Антирадикальные свойства веществ изучали с помощью метода люминол-зависимой XJJ [Фархутдинов P.P., Лиховских В.А., 1995] и системы с генерацией пероксильного радикала (ROO') в ходе термического разложения . 2,2'-азобис(2-метилпропионамидин)дигидрохлорида (АБАП) [Клебанов Г.И., 2001]. Антирадикальную активность оценивали также по способности соединений подавлять окисление 2,2'-азино-бис-(3-этшбензтиазолин)-6-сульфоновой кислоты (АБТС) [Rice-Evans С., 1994]. Ингибирующую концентрацию ИК50 рассчитывали методом регрессионных уравнений в программе Statistica 6.0 (StatSoft, США).

О влиянии веществ на процессы ПОЛ in vivo судили по концентрации малонового диальдегида (МДА) в плазме крови [Андреева Л.И., Кожемякин Л.А., 1988] и гомогенатах тканей [Гаврилов В.Б. и др., 1987]. Активность супер-оксиддисмутазы (СОД) определяли по методу В.А. Костюка и др. [1990], глу-татионпероксидазы (ГП) - по методу В.М. Моина [1986].

Оптическую плотность измеряли на спектрофотометре PD-303 UV (APEL, Япония) в кюветах с длиной оптического пути 1 см.

Измерение вязкости крови проводили на анализаторе крови реологическом АКР-2 (Россия). Вязкость крови определяли при скоростях сдвига 300, 200, 100, 50 и 20 с"' [Добровольский Н.А., 1998]. Влияние веществ на агрегацию тромбоцитов оценивали на двухканальном лазерном анализаторе агрегации тромбоцитов (модель 220 LA) («Биола», Москва) по методу G. Вот [1962] в модификации З.А. Габбасова [1989]. Исследовали богатую тромбоцитами плазму [Люсов В.А., Белоусов Ю.Б., 1971].

Противогипоксическую активность соединений изучали согласно методическим рекомендациям под редакцией Л.Д. Лукьяновой [1990]. Острую ги-побарическую гипоксию (ОГБГ) моделировали в проточной барокамере «Био-конт-Б» («Парус», Москва). Мышей помещали в условия, соответствующие подъему на высоту 11 ООО м. Оценивали время их жизни до второго атонального вдоха или летального исхода. ЕД50 (дозу, в которой вещество повышает время жизни на 50%) рассчитывали методом регрессионных уравнений в программе Statistica 6.0 (StatSoft, США). Острую гемическую гипоксию (ОГеГ) создавали путем однократного внутрибрюшинного введения натрия нитрита в дозе 225 мг/кг. Острую гистотоксическую гипоксию (ОГТГ) вызывали однократным внутрибрюшиниым введением натрия нитропруссида в дозе 20 мг/кг. Регистрировали продолжительность жизни мышей от момента введения до гибели. Для воспроизведения гипоксии с гиперкапнией в гермообъеме животных поодиночке помещали в стеклянные банки объемом 200 мл, которые герметически закрывали. Фиксировали время жизни мышей до второго атонального вдоха.

Ишемию головного моха создавали под наркозом хлоралгидратом (400 мг/кг, внутрибрюшинно) окклюзией общих сонных артерий [Мирзоян P.C. и др., 2000]. В течение 3-х суток после операции оценивали выживаемость крыс, локомоторную активность в актометре («Ugo Basile», Италия), поведение в тесте «открытое поле», сохранность рефлексов [Бурый Я., Бурешова О., 1991]. Неврологический дефицит определяли по шкале Stroke-index McGrow в модификации И.В. Ганнушкиной [1977]. Ишемически-реперфузионное повреждение головного мозга моделировали под наркозом хлоралгидратом (400 мг/кг, внутрибрюшинно) окклюзией общих сонных артерий в течение 30 минут с последующей реперфузией [Мирзоян P.C., 2006]. Операцию проводили под контролем артериального давления (80/60 мм.рт.ст.). Через 30 минут релерфузии забирали кровь из брюшной аорты, а после эвтаназии крыс методом декапитации - мозговую ткань. В плазме крови и мозге определяли содержание МДА, активность СОД и ГП. В отдельной серии экспериментов изучали влияние веществ на вязкость крови и АДФ-индуцированную агрегацию тромбоцитов.

Стрептозотоциновую интоксикацию моделировали путем однократного внутривенного введения раствора стрептозотоцина (Sigma, США) в 1 моль/л цитратном буфере pH 4,5 в дозе 50 мг/кг [Srinivasan К., Ramarao Р., 2007]. Оценивали потребление животными воды и корма, их вес. Через 72 часа после введения стрептозотоцина [Akbarzadeh А. et al., 2007] регистрировали выживаемость крыс, определяли уровень глюкозы в плазме крови и моче с помощью набора «Глюкоза-ФКД» (Россия), а также содержание кетоновых тел в моче с использованием диагностических полосок «Кетофан» (PLIVA-Lachema Diag-nostika, Чехия). После забора крови из брюшной аорты у наркотизированных хлороформом животных осуществляли их эвтаназию методом декапитации и извлекали поджелудочную железу, сердце, почки [Dincer Y. et al., 2002; Maritim AC et al., 2003]. В плазме крови и гомогенатах органов изучали процессы ПОЛ по накоплению МДА, оценивали активность СОД и ГП. Островковый аппарат селезеночного отдела поджелудочной железы исследовали морфологически3. Морфометрический анализ проводили с помощью компьютерной системы «Ви-деоТсстМорфо-4». Определяли процентное соотношение площади, занимаемой ß-эндокриноцитами, к общей площади островка, которую принимали за 100%.

Острую токсичность соединений изучали на мышах при внутрибрю-шинном введении. Величину LD50 определяли по методу Личфилда-Вилкоксона. Для расчета показателя условной широты терапевтического действия выводили условный терапевтический индекс (УТИ).

Статистическую обработку данных проводили с использованием пакета программ Statistica 6.0 (StatSoft, США) и Excel 2007 (MS Office 2007, США) с применением парного критерия Стьюдента (i) и точного метода Фишера.

Результаты исследования и их обсуждение В ходе прогноза антиоксидантной активности у новых производных бен-зимидазола из 100 неиспытанных соединений, содержащихся в компьютерной базе данных Волгоградского государственного медицинского университета,

3 Выражаем глубокую признательность доценту кафедры патологической анатомии Волгоградского государственного медицинского университета, к.м.н. Г.Л. Снигуру за содействие в проведении исследований.

отобрано 27 веществ с достоверными расчетными оценками наличия выраженных антиоксидантных свойств. При изучении их антиоксидантной активности установлено, что в ряду производных N'-замещенных пирроло[1,2-а]бензимидазолов все соединения (6/6) проявляют высокую активность, в то время как среди производных N'-замещенных имидазо[1,2-а]бензимидазолов доля высокоактивных веществ составляет 33,3% (7/21). Таким образом, антиок-сидантные свойства бензимидазольных соединений усиливаются при наличии в их структуре пиррольного кольца, что согласуется с представлениями о значении определенной я-избыточности для проявления веществами антиоксидантной активности. Отдельные радикалы в различных положениях гетероцикла могут усиливать донорно-акцепторные свойства производных бензимидазола. Так, присутствие пиперидиноэтильного радикала в положении N9 гетероциклического кольца производных имидазо[1,2-а]бензимидазолов в сочетании с фенилом, замещенным фенилом (п-оксифенилом, 4-фторфенилом, 3,4-дихлорфенилом) или а-нафтилом в качестве радикала Яг приводит к появлению высокой антиоксидантной активности у соединений данного класса.

При изучении зависимости антиоксидантных свойств исследуемых веществ от их физико-химических параметров методом подструктурного анализа были выявлены признаки, детерминирующие высокую антиоксидантную активность у данного ряда соединений: молекулярная рефракция ароматического цикла молекулы вещества > 45,90; 22,48 < молекулярная рефракция радикала R3

< 30,83; липофильность ароматического цикла молекулы вещества > 2,47; 1,41

< липофильность радикала R3 < 2,20; суммарный заряд радикала Ri > 0,076; -0,062 < суммарный заряд радикала R3< -0,004. Данные факты могут учитываться при направленном синтезе высокоактивных бензимидазольных соединений.

По результатам прогноза и экспериментального изучения антиоксидантной активности у новых производных бензимидазола для детального исследования антиоксидантных и антирадикальных свойств in vitro были выбраны наиболее активные вещества под лабораторными шифрами РУ-642 и РУ-643, относящиеся к производным N'-замещенных пирроло[1,2-а]5ензимидазолов. При

изучении механизмов их действия на свободнорадикальные процессы обнаружено, что данные соединения проявляют высокую эффективность в отношении липопероксильного радикала, ингибируя Ре2+-индуцированную XJ1 липидов, менее активны в отношении радикалов люминола и супероксида в системе с аутоокислением люминола, а также АБТО в методе окисления АБТС (рис. 1). В высоких концентрациях оба вещества подавляют образование ROO* в ходе термического разложения АБАП и полностью обесцвечивают раствор ДФПГ*.

А. Б.

Рис. 1. Активность веществ РУ-642 (А) и РУ-643 (Б) в концентрации 1 мкмоль/л на моделях изучения антиоксидантных и антирадикальных свойств, % ингибирования реакции Обозначения: * - данные статистически значимы (0 по отношению к контролю, р<0,05.

Наиболее позитивные характеристики по показателям антиоксидантной и антирадикальной активности, а также острой токсичности имеет вещество РУ-642 (табл. 1), которое и было выбрано для доклинического исследования его специфической активности на патологических моделях, сопровождающихся активацией свободнорадикальных процессов.

Таблица 1

Показатели антиоксидантной и антирадикальной активности (ИК511), острой токсичности (ЬП5.,), условного терапевтического индекса веществ РУ-642, РУ-643 и препаратов сравнения_

X» Шифр вещества LD}0, мг/кг Аскорбат-зависимое ПОЛ Ре2>-индуцированная ХЛ липидов Взаимодействие с ДФПГ

ИКа,, мкмоль/л УТИ №<*„ мкмоль/л УТИ ИК30, мкмоль/л УТИ

1. РУ-642 792 0,32 4517,5 3,26 442,3 9,83 146,6

2. РУ-643 262 0,32 1534,9 1,09 444,2 7,28 66,7

3. Тролокс 1700' 2,76 2457,3 1,13 6026,5 6,78 1002,4

4. Дибунол 490 3,16 701,0 0,48 4628,8 15,56 142,5

5. Мексидол 475- 480,0 3,9 192,13 9,7 20,94 89,0

Примечание:

1 - Cort W.M. et al., 1975;2 - Воронина Т.А., 2005;5 - Косолапое В. А. и др., 2005.

При изучении антигипоксических свойств соединения РУ-642 установле-

нс, что исследуемое вещество в дозе 0,176 мг/кг увеличивает продолжительность жизни животных на 160,27 (р<0,05); 74,13; 73,88 (р<0,05) и 26,96 (р<0,05) % по отношению к контролю при ОГБГ, ОГеГ, ОГТГ и гипоксии с гиперкапни-ей в гермообъеме соответственно (рис. 2). Мексидол в дозе 122,4 мг/кг повышает время жизни мышей на 182,14 (р<0,05); 17,30; 48,40 (р<0,05) и 21,86% в тех же условиях. Десяти- и стократное увеличение дозы соединения РУ-642 на модели ОГБГ привело к возрастанию его противогипоксического эффекта. При расчете величины ЕД50 было выявлено значительное превосходство исследуемого вещества (ЕД50=0,055 мг/кг) над мексидолом (ЕД50=14,22 мг/кг) на данной модели. Наиболее вероятно, что в основе обусловленного соединением РУ-642 повышения резистентности организма животных к острой гипоксии лежит торможение свободнорадикальных процессов.

Д.

Мексадол

ру-642

12,24 61,2 122,4 244,8 0,044 0,083 0,176 1,76 17,6 доза, мг/кг

14,22 122,4 2443 0,055 0,176 0352 доза, мг/кг

70

2

эе с;

о 50

X 2- 40

£ о 30

а> Q. 20

10

0

Мексидол

РУ-642

ру-642

14,22 122.4 244,8 0,055 0,176 0,352 доза, МГ/КГ

х 30

I?25

J о 20

$ i 15 i 2 10 ш 6

se 0

доза, мг/кг

Рис. 2. Влияние вещества РУ-642 и мексидола на время жизни мышей при острых гипобарической (А), гемической (Б), гистоуохсической (В) и гиперкапнической в гермообъеме (Г) гипоксиях Обозначения: по оси абсцисс - доза вещества, мг/кг; по оси ординат - время жизни животных по отношению к контролю, %; * - данные статистически значимы (/) относительно контроля, р<0,05.

При изучении противоишемических свойств вещества РУ-642 на модели билатеральной окклюзии сонных артерий была обнаружена тенденция к повышению выживаемости животных на 12,5% относительно ишемии в течение всего опыта. В то же время мексидол проявил сходный эффект только на 2-е и 3-й сутки после операции. Наиболее выраженное защитное действие соединение

РУ-642 оказывало в 1-е сутки после перевязки сонных артерий: статистически значимо увеличивало локомоторную активность животных в 6,3 раза по отношению к ишемии, повышало их горизонтальную активность в тесте «открытое поле» на 80,69%, а также снижало выраженность неврологических нарушений (по шкале Stroke-index McGrow) на 57,65% относительно ишемии (табл. 2). Мексидол несколько превосходил исследуемое вещесгво по влиянию на горизонтальную активность, но данные являлись статистически незначимыми.

Таблица 2

Влияние вещества РУ-642 и мексидола на локомоторную (в актометре), горизонтальную (в тесте «открытое поле») активности и неврологический статус (по шкале McGrow) животных в первые сутки

Группа животных Доза вещества, мг/кг Локомоторная активность, усл.ед. Горизонтальная активность, количество пересеченных квадратов Неврологический статус, баллы

Контроль - 33,78 ±9,98 32,44 ± 4,77 0,06 ± 0,06

Ишемия - 1,38 ±0,94* 16,88 ±4,45* 4,72 ± 1,18*

Ишемия + РУ-642 0,176 8,63 ± 2,78*,** 30,50 ±3,03** 2,00 ±0,33*,**

Ишемия +Мексидол 122,4 4,33 ±3,84* 34,67 ± 10,28 3,31 ± 1,47

Примечание: * - данные статистически значимы (г) относительно группы ложнооперированных крыс, р<0,05; ** - данные статистически значимы (/) относительно группы крыс с ишемией, р<0.05.

С целью выяснения механизма противоишемического действия соединения РУ-642 была использована модель ишемии головного мозга с последующей его реперфузией. При этом у крыс с патологией, получавших исследуемое вещество, содержание МДА в плазме крови и мозговой ткани снижалось на 34,88 и 26,77 (р<0,05) % по отношению к ишемии соответственно (рис. 3). Мексидол продемонстрировал сходную активность, уменьшая данный показатель на 31,61 % в плазме крови и на 27,01 % (р<0,05) относительно ишемии в мозге.

£ 250 -

I 200

I 150

5 100

я 50

5 0

Мексидол

Мексидол

Рис. 3. Влияние вещества РУ-642 и мексидола в дозах 0,176 и 122,4 мг/кг соответственно на содержание малонового диальдегида в плазме крови и мозге при ишемии-реперфузии головного мозга Обозначения; по оси абсцисс - группа животных; по оси ординат - дельта к ложнооперированному контролю, %; * — данные статистически значимы (/) относительно группы ложнооперированных крыс, р<0,05; ** - данные статистически значимы (г) относительно 1-руппы крыс с ишемией, р<0,05.

Вещество РУ-642 повышало активность СОД на 52,35 и 32,68% (р<0,05) по отношению к ишемии в плазме крови и головном мозге соответственно (рис. 4). Мексидол был менее эффективен и в плазме крови увеличивал активность фермента на 47,41 % (р<0,05), в мозге - на 27,87% относительно ишемии.

ишемия РУ-642 Мексидол ишемия РУ-642 Мексидол

Рис. 4. Влияние вещества РУ-642 и мексидола в дозах 0,176 и 122,4 мг/кг соответственно на активность супероксиддисмутазы в плазме крови и мозге при ишемии-реперфузии головного мозга Обозначения: по оси абсцисс - группа животных; по оси ординат - дельта к ложнооперированному контролю, %; * - данные статистически значимы (/) относительно группы ложпооперированных крыс, р<0,05; ** - данные статистически значимы (/) относительно группы крыс с ишемией, р<0,05.

При введении соединения РУ-642 наблюдалась тенденция к повышению активности ГП на 21,43 и 86,87% по отношению к ишемии в плазме крови и мозге соответственно. Мексидол не влиял на активность фермента в плазме крови, но увеличивал ее в мозге на 47,86% относительно ишемии.

В ходе изучения гемореологическои активности вещества РУ-642 при ишемии-реперфузии головного мозга была обнаружена его способность статистически значимо снижать вязкость крови на 8,80; 9,47; 10,72; 12,24 и 16,26% по отношению к ишемии при скоростях сдвига 300; 200; 100; 50 и 20 с"1 соответственно, что свидетельствует о нормализации способности эритроцитов к деформации и их агрегационной способности. Мексидол уменьшал показатели вязкости крови при скорости сдвига 300 с"1 на 12,00%, 200 с"' - на 12,59%, 100 с"1 - на 13,65%, 50 с"1 - на 15,02% и 20 с"1 - на 18,84% относительно ишемии. Изучаемое соединение продемонстрировало значительный антиагрегантный эффект, снижая индекс агрегации тромбоцитов и максимальный наклон агрега-тограммы на 33,13 и 80,11% (р<0,05) относительно ишемии соответственно. Мексидол также уменьшал функциональную активность тромбоцитов, но данные были статистически незначимыми. Учитывая роль активации свободнора-дикальных процессов в гемореологических нарушениях, можно предположить,

что полученный эффект соединения РУ-642 обусловлен его антиоксидантными свойствами.

Выраженное позитивное влияние на состояние крыс со стрептозотоци-новой интоксикацией вещество РУ-642 оказывало в дозе 26,6 мг/кг: повышало выживаемость до 100% (р<0,05); уменьшало потребление воды на 65,31% (р<0,05); увеличивало потребление корма и массу тела на 40,74 (р<0,05) и 10,48% соответственно; проявляло тенденцию к снижению уровня глюкозы в плазме крови и моче на 20,54 и 22,28% соответственно, а также кетоновых тел в моче - на 52,22% по отношению к патологии. Липоевая кислота в дозе 10 мг/кг была менее эффективна: повышала выживаемость на 25%, снижала потребление воды на 7,14% (р<0,05), увеличивала потребление корма на 20,16% (р<0,05), уменьшала содержание кетоновых тел в моче на 11,11% относительно группы животных с интоксикацией стрептозотоцином.

В ходе изучения механизма защитного действия соединения РУ-642 при стрептозотоциновой интоксикации установлено, что исследуемое вещество статистически значимо снижало уровень МДА: в плазме крови - на 25,59; 26,35; 26,47 и 46,75% в дозах 0,176; 1,76; 8,8 и 26,6 мг/кг соответственно; в поджелудочной железе - на 59,50; 62,92 и 69,49% в дозах 1,76; 8,8 и 26,6 мг/кг соответственно; в сердце - на 45,66% в дозе 26,6 мг/кг; в почках - на 33,62 и 35,39% по отношению к патологии в дозах 8,8 и 26,6 мг/кг соответственно (рис. 5). Липоевая кислота уменьшала содержание МДА в плазме крови и поджелудочной железе на 40,25 и 24,52% (р<0,05) относительно патологии соответственно.

плазма поджелудочная железа сердце почки

1 250

а 200

I 150

~ 100

* 50

го

5 0

I -5°

О интоксикация стрептозотоцином 0 интоксикация стрептозотоцином+Липоевая кислота

а интоксикация стрептозотоцином+РУ-642, 0,176 мг/кгя интоксикация стрептозотоцином+РУ-642,1,76 мг/кг а интоксикация стрептозотоцином+РУ-642,8,8 мг/кг й интоксикация стрептозотоцином+РУ-642,26,6 мг/кг

Рис. 5. Влияние вещества РУ-642 и липсевой кислоты (10 мг/кг) на содержание малонового диапьдегида в плазме крови и гомогенатах органов крыс с интоксикацией стрептозотоцином

Обозначения: по оси абсцисс - исследуемый материал; по оси ординат - дельта к интактному контролю, %; * - данные статистически значимы (?) относительно группы интактных крыс, р<0,05; ** - данные статистически значимы (/) относительно группы крыс с патологией, р<0,05.

Под действием соединения РУ-642 в дозах 1,76; 8,8 и 26,6 мг/кг активность СОД в плазме крови повышалась на 27,95; 28,85 и 36,11% (р<0,05) по отношению к патологии соответственно. В поджелудочной железе отмечалось увеличение активности фермента на 41,94% (р<0,05) при введении изучаемого вещества в дозах 0,176 и 1,76 мг/кг и на 51,15 и 62,21% (р<0,05) при использовании доз 8,8 и 26,6 мг/кг соответственно. Повышение активности СОД в сердце на 47,03% (р<0,05) относительно патологии наблюдалось под влиянием соединения РУ-642 в дозе 26,6 мг/кг. Липоевая кислота существенно увеличивала активность фермента в плазме крови и поджелудочной железе на 31,78 и 36,41 % (р<0,05) соответственно.

плазма поджелудочная железа сердце почки

В интоксикация стрептозотоцином в интоксикация сгрептозотоцином+Липоевая кислота

еэ интоксикация стрептозотоцином+РУ-642, 0,176 мг/кгй интоксикация стрептозотоцином+Р>'-642, 1,76 мг/кг ¡5 интоксикация стрептозотоцином+РУ-642, 8,8 мг/кг э интоксикация стрептозотоцимом+РУ-642, 26,6 мг/кг

Рис. 6. Влияние вещества РУ-642 и липоевой кислоты (10 мг/кг) на активность супероксиддисмутазы в плазме крови и гомогеаатах органов крыс при интоксикации стрелтозотоцином Обозначения: по оси абсцисс - исследуемый материал; по оси ординат - дельта к интактному контролю, %; * - данные статистически значимы (/) относительно группы интактных крыс, р<0,05; ** -данные статистически значимы (/) относительно группы крыс с патологией, р<0,05.

При введении вещества РУ-642 во всех изучаемых дозах наблюдалась тенденция к повышению активности ГП в плазме крови и исследуемых органах, в то время как под действием липоевой кислоты активность фермента в плазме крови и почках оставалась без изменений.

Морфологическое исследование островкового аппарата поджелудочной железы крыс, получавших соединение РУ-642 в дозе 26,6 мг/кг, выявило умеренные признаки воспаления и деструкции. По результатам морфометрическо-го анализа процентное соотношение площади, занимаемой р-клетками, к общей площади панкреатического островка увеличилось в 4,6 и 19,7 раз (р<0,05) относительно патологии при введении доз 8,8 и 26,6 мг/кг соответственно (табл. 3). Липоевая кислота оказывала менее выраженное защитное действие в отпоше-

нии р-клеток поджелудочной железы при интоксикации стрептозотоцином.

Таблица 3

Влияние вещества РУ-642 и липоевой кислоты на распределение Р-клеток в панкреатических остров-

Группа животных Дота вещества, мг/кг 3-клетки, %

Интактный контроль - 85,58 ± 5,72

Стрептозотоциновая интоксикация - 3,03 ±1,48*

Стрептозотоциновая интоксикация + РУ-642 0,176 9,33 ± 4,28

1,76 9,02 ± 4,59

8,8 13,98 ±4,19»*

26,6 59,17 ±9,64**

Стрептозотоциновая интоксикация + Липоевая кислота 10,0 9,11 ±5,11

Примечание: * - данные статистически значимы (() относительно группы интактных крыс, р<0,05; ** -данные статистически значимы (/) относительно группы крыс с патологией, р<0,05.

Таким образом, в результате прогноза уровня антиоксидантной активности у новых производных бензимидазола в программном комплексе «Микрокосм» 4.2 с последующей экспериментальной проверкой было установлено, что производные ^-замещенных пирроло[1,2-а]бензимидазолов, а также М9-пиперидиноэтильные производные имидазо[1,2-а]бензнмидазолов, имеющие в качестве радикала Яг фенил, замещенный фенил (п-оксифенил, 4-фторфенил, 3,4-дихлорфенил) или а-нафтил, обладают выраженными антиоксидантными свойствами. Наиболее активные вещества под лабораторными шифрами РУ-642 и РУ-643, относящиеся к производным Ы1-замещенных пирроло[1,2-а]бензимидазолов, особенно эффективны в отношении липопероксилыюго радикала и (в высоких концентрациях) стабильного свободного радикала ДФПГ. При исследовании фармакологического действия вещества РУ-642 установлено наличие у данного соединения противогипоксических и противоишемических свойств, а также гемореологической активности, выраженность которых сопоставима с таковыми у мексидола. При интоксикации стрептозотоцином исследуемое соединение оказывает защитное действие в отношении р-клеток поджелудочной железы и превосходит по эффективности липоевую кислоту. Снижение количества продуктов перекисного окисления липидов и увеличение активности алтиоксидантных ферментов под действием вещества РУ-642 позволяют объяснить его эффективность в условиях данных патологий. Учитывая вышесказанное, можно считать перспективным дальнейшее изучение фармакологических и токсикологических свойств соединения РУ-642.

выводы

1. Производные М'-замещенных пирроло[1,2-а]бензимидазолов являются перспективным классом веществ в плане поиска новых соединений, способных ингибировать процессы перекисного окисления липидов. В ходе изучения ан-тиоксидантной активности новых бензимидазольных веществ в ряду производных ы'-замещенных пирроло[1,2-а]бензимидазолов все соединения (6/6) оказались высокоактивными. При этом 33,3% веществ (2/6) превосходили по активности тролокс, дибунол и мексидол, 16,7% веществ (1/6) - дибунол и мексидол, 50% веществ (3/6) - мексидол. Среди производных М'-замещенных имида-зо[1,2-а]бензимидазолов доля высокоактивных соединений составила 33,3% (7/21). При этом 9,5% веществ (2/21) превосходили по антиоксидантным свойствам дибунол и мексидол, 61,9% веществ(13/21)-мексидол.

2. Прогноз уровня антиоксидантной активности у новых конденсированных и неконденсированных производных бензимидазола с помощью программного комплекса «Микрокосм» 4.2 с последующей экспериментальной проверкой позволил оптимизировать поиск высокоактивных антиоксидантных соединений среди веществ данного ряда.

3. Антиоксидантные свойства бензимидазольных соединений усиливаются при наличии в их структуре пиррольного кольца. Присутствие пипериди-ноэтильного радикала в положении гетероцикла производных имидазо[1,2-а]бензимидазолов в сочетании с фенилом, замещенным фенилом (п-оксифенилом, 4-фторфенилом, 3,4-дихлорфенилом) или а-нафтилом в качестве Я2 приводит к появлению высокой антиоксидантной активности у веществ данного ряда. Изучение зависимости антиоксидантных свойств исследуемых соединений от их физико-химических параметров методом подструктурного анализа позволило выявить признаки, детерминирующие высокую антиоксидант-ную активность у данного класса веществ.

4. Наиболее высокую антиоксидантную активность проявили производные N'-замещенных пирроло[1,2-а]бензимидазолов вещества РУ-642 и РУ-643, относящиеся к классу умеренно токсичных соединений (3 класс). Вещество РУ-

642 с условным терапевтическим индексом антиоксидантной активности, полученной на модели аскорбат-зависимого перекисного окисления липидов, 4517,5 превосходило по данному параметру препараты сравнения тролокс (2457,3), дибунол (701,0) и мексидол (3,9).

5. Вещество РУ-642 проявило выраженные защитные свойства в условиях острой гипобарической гипоксии, превосходя по величине ЕД50 (0,055 мг/кг) препарат сравнения мексидол (14,22 мг/кг). При гемической, гистотоксической и гиперкапнической в гермообъеме острых гипоксиях соединение РУ-642 в дозе 0,176 мг/кг увеличивало продолжительность жизни животных на 74,1; 73,9 и 27,0% по отношению к контролю соответственно и было эффективнее мекси-дола в дозе 122,4 мг/кг (17,3; 48,4 и 21,9%).

6. Вещество РУ-642 (0,176 мг/кг) в условиях ишемии головного мозга, вызванной перевязкой сонных артерий, повышало выживаемость животных на 12,5% в течение всего опыта (мексидол в дозе 122,4 мг/кг проявил сходный эффект на 2-е и 3-й сутки после операции); увеличивало двигательную активность крыс в актометре, превосходя по эффективности мексидол, а также горизонтальную и поисковую активности в тесте «открытое поле», несколько уступая препарату сравнения по влиянию на горизонтальную активность; снижало, также как и мексидол, выраженность неврологических нарушений.

7. На модели ишемии головного мозга с последующей его реперфузией соединение РУ-642 снижало содержание малонового диальдегида в плазме крови и мозговой ткани на 34,9 и 26,8% соответственно, не уступая мексидолу (31,6 и 27,0%), а также повышало активность супероксиддисмутазы на 52,4 и 32,7% по отношению к ишемии в плазме крови и мозге соответственно, превосходя по эффективности препарат сравнения (47,4 и 27,9%). Исследуемое вещество уменьшало индекс агрегации эритроцитов на 7,0% относительно ишемии, незначительно превосходя по гемореологическим свойствам мексидол (6,6%), а также индекс агрегации тромбоцитов и максимальный наклон агрегатограммы на 33,1 и 80,1 % соответственно (мексидол- на 28,2 и 71,0%).

8. При интоксикации стрептозотоцином вещество РУ-642 в дозе 26,6

мг/кг оказывало выраженное позитивное влияние на состояние крыс в виде повышения выживаемости до 100%, уменьшения потребления воды, увеличения потребления корма и массы тела, тенденции к снижению уровня глюкозы в плазме крови и моче, а также кетоновых тел в моче. Липоевая кислота (10 мг/кг) была менее эффективна по влиянию на данные показатели. В указанной дозе исследуемое соединение снижало уровень малонового диальдегида на 46,8; 69,5; 45,7 и 35,4% в плазме крови, поджелудочной железе, сердце и почках соответственно, а также увеличивало активность супероксидцисмутазы в плазме крови, поджелудочной железе и сердце на 36,1; 62,2 и 47,0% относительно стрептозотоциновой интоксикации соответственно. Липоевая кислота в дозе 10 мг/кг была менее эффективна и уменьшала содержание малонового диальдегида на 40,3 и 24,5%, а также повышала активность супероксиддисмутазы на 31,8 и 36,4% в плазме крови и поджелудочной железе соответственно.

9. При интоксикации стрептозотоцином вещество РУ-642 в дозе 26,6 мг/кг увеличивало процентное соотношение площади, занимаемой ß-клетками, к общей площади панкреатического островка с 3,0±1,5 до 59,2±9,6, тогда как препарат сравнения (10 мг/кг) оказывал менее выраженное протекторное действие в отношении ß-клеток поджелудочной железы.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Тибирькова, Е.В. Антиоксидантные свойства тролокса / Е.В. Тибирькова, В.А. Косолапое // Материалы 4-ой Международной конференции «Биологические основы индивидуальной чувствительности к психотропным средствам». 13-16 марта 2006 г. д/о «Подмосковье». Москва: ГУ ПИИ фармакологии им. В.В. Закусова РАМН. 2006. с. 71-72 [русский], с. 141 [английский].

2. Тибирькова, П.В. Исследование антиоксидантной активности новых конденсированных и »сконденсированных производных бснзимидазола / Е.В. Тибирькова // Актуальные проблемы экспериментальной и клинической медицины: материалы 65-й открытой итоговой научной конференции молодых ученых и студентов / Под общей ред. акад. В.И. Петрова. - Волгоград: Изд-во ВолГМУ, 2007.-С. 152.

3. Косолапое, В.А. Экспериментальная проверка точности компьютерного прогноза антиоксидантной активности новых гетероциклических соединений / В.А. Косолапое, П.М. Васильев, Е.В. Тибирькова и др. // Фармакологи! - практическому здравоохранению: Материалы III съезда фармакологов России / Психофармакол. биол. наркол. - 2007. - Т. 7, спец. вып. (сентябрь). -Ч. 1.-С. 1743.

4. Косолапое, В.А. Ангиоксиданты как средства коррекции ишемических нарушений головного мозга / В.А. Косолапое, Л.В. Ельдова, Е.В. Тибирькова, В.А. Аписимова // Фармакология - практическому здравоохранению: Материалы III съезда фармакологов России / Психофармакол. биол. наркол.-2007.-Т. 7, спец.выи. (сентябрь).- Ч. 1.-С. 1743-1744.

5. Косолапое, В.А. Компьютерной прогноз и экспериментальная проверка антиоксидантной активности азотсодержащих етероциклических соединений / В.А. Косолапое, П.М. Ва-

сильев, E.B. Тибирькова, В.А. Анисимова II XIV Российский национальный конгресс «Человек и лекарство»: Сборник материалов конгресса. - М„ 2007. - С. 294-295.

6. Косолапое, В.А. Лнтиоксидантные вещества - как основа для создания средств коррекции ишемии головного мозга / В.А. Косолапое, A.A. Спасов, Л.В. Ельцова, Е.В. Тибирькова, В.А. Анисимова // Лекарственные средства и биологически активные соединения: Материалы конф. / Международная научная конференция, посвященная 40-летию 1ШЦ «Институт фармакологии и биохимии HAH Беларуси». Гродно, 2007. - С. 82-83.

7. Тибирькова, Е.В. Изучение антиоксидантиых и антирадикальных свойств новых производных бензимидазола методами хемилюминссцснции / Е.В. Тибирькова // XII Региональная конференция молодых исследователей Волгоградской области: Тезисы докладов / Под общей ред. акад. В.И. Петрова. - Волгоград: Изд-во ВолГМУ, 2007. - С. 47-49.

8. Тибирькова, Е.В. Противогиноксичсские свойства нового производного пирролобен-зимидазола / Е.В. Тибирькова // Актуальные проблемы экспериментальной и клинической медицины: материалы 66-й открытой итоговой научно-практической конференции молодых ученых и студентов с международным участием / Под ред. акад. РАМН В.И. Петрова. - Волгоград: Изд-во ВолГМУ, 2008.-С. 161-162.

9. Тибирькова, Е.В. Противогипоксическая активность нового производного пирроло-бензимидазола па модели острой гипобарической гипоксии / Е.В. Тибирькова, И.Е. Толпыгин // Тезисы V Конференции молодых ученых России с международным участием «Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины», - М., 2008. - С. 431432.

10. Тибирькова, Е.В. Изучение противогипоксической активности нового производного пирролобензимидазола / Е.В. Тибирькова, В.А. Косолапое, A.A. Спасов И Пятая Российская конференция «Гипоксия: механизмы, адаптация, коррекция» / Патогенез. - 2008. - Т. 6, N» 3. - С. 8889.

11. Тибирькова, Е.В. Противогипоксическая активность нового производного пирролобензимидазола / Е.В. Тибирькова // XIII Региональная конференция молодых исследователей Волгоградской области. Волгоград, 11-14 ноября 2008 г. [Направления: 17. Актуальные проблемы экспериментальной медицины. 18. Клинические аспекты медицины]: Тез. докл. / Под общ. ред. В.И. Петрова. - Волгоград: Изд-во ВолГМУ, 2008. -С. 101-105.

12. Косолапое, В.А. Поиск новых веществ с антиоксидантными и церебропротекторными свойствами среди привилегированных молекул / В.А. Косолапов, Л.В. Ельцова, Е.В. Тибирькова, A.A. Спасов // 55-я юбилейная региональная научная конференция профессорско-преподавательского коллектива Волгоградского государственного медицинского университета «Современная инновационная медицина - населению Волгоградской области» / Под ред. акад. РАМН В.И. Петрова. - Волгоград: Изд-во ВолГМУ, 2008. - С. 147-148.

13. Тибирькова, Е.В. Лнтиоксидантные и мембранопротекторные свойства тролокса / Е.В. Тибирькова, В.А. Косолапов, A.A. Спасов // Экспериментальная и клиническая фармакология. -2009.-Т. 72, №2.-С. 47-50.

14. Тибирькова, Е.В. Противоишемические свойства нового производного пирролобензимидазола / Е.В. Тибирькова // Актуальные проблемы экспериментальной и клинической медицины: Материалы 67-й открытой научно-практической конференции молодых ученых и студентов с международным участием / Под ред. акад. РАМН В.И. Петрова. - Волгоград: Изд-во ВолГМУ, 2009.-С. 183-184.

15. Анисимова, В.А. Синтез и фармакологическая активность дигидрохлоридов 3-(2,2,2-трихлор-1-гидроксиэтил)имидазо[1,2-а]бензимидазола / В.А. Анисимова, A.A. Спасов, В.А. Косолапов, И.Е. Толпыгин, В.И. Поротиков, А.Ф. Кучерявенко, В.А. Сысоева, Е.В. Тибирькова, Л.В. Ельцова //Химико-фармацевтический журнал. - 2009. - Т. 43, №9. - С. 9-12.

16. Макаренко, В.И. Изучение противоишемической активности нового производного пирроло[1,2-а]бензимидазола РУ-642, с выраженными антиоксидантными свойствами / В.И. Макаренко, Е.В. Тибирькова// Кислород и антиоксиданты. -2009.- Выпуск 1. - С. 85-86.

17. Косолапов, В.А. Отбор антиоксидантиых веществ с церебропротекторными свойствами среди привилегированных молекул / В.А. Косолапов, A.A. Спасов, Л.В. Ельцова, Е.В. Тибирькова, В.А. Анисимова//Тезисы докладов V международной Крымской конференции «Окислительный стресс и свободнорадикалькые патологии». - Судак, Крым, Украина, 21-30 сентября 2009.-С. 33.

Тибирькова Елена Викторовна «Направленный поиск и фармакологические свойства веществ с аптиоксидантной активностью среди конденсированных и неконденсироваииых производных бензимидазола»

направление профессиональной подготовки 14.03.06 - фармакология, клиническая фармакология

Волгоград, 2010

Формат 60x90 1/16. Печать трафаретная. Бумага офсетная № 65. Гарнитура «Тайме». Тираж 100 экз. Заказ № 2429. Отпечатано в ООО «Бланк». Лиц. №3550. 400131, г. Волгоград, ул. Скосырева, 2а.