Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Морфологический и функциональный статус пула плазматических клеток при цитостатической гемодепрессии и в условиях антигенной стимуляции

11а прайм рукописи

Кудаева Ирина Валерьевна

МОРФОЛОГИЧЕСКИЙ II ФУНКЦИОНАЛЬНЫЙ СТАТУС ПУЛА ПЛАЗМАТИЧЕСКИХ КЛЕТОК ПРИ ЦИТОСТАТИЧЕСКОЙ ГЕМОДШРЕССИИ И В УСЛОВИЯХ АНТИГЕННОЙ СТИМУЛЯЦИИ

14.00.16. - Патологическая физиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на совскавне ученой степени кандидата медишшскях наук

Томск - 1997

Работа выполнен! на кафедре патологической физиологии Сибирскс государственного медицинского университета и в лаборатории иммунофармакологии токсикология противоопухолевых препаратов научно-исследовательского пнстпт] фэрмзкологаи Томского научного центра РАМН

Научный руководитель: академик РАМН, профессор Е.Д. Гольдберг

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор В.И. Агафонов

на заседании диссертационного совета К 001. 33. 01 при научно-исследовательском институте фармакологии томского научного центра РАМН (634028, г.Томск, пр. Ленина, 3).

С диссертацией можно ознакомиться в Виблиотеке каучко-нсслсдовагельско-го института фармакологии Томского научного центра РАМН.

доктор медицинских наук, профессор Т.С. Федорова

Ведущее учреждение - Институт физиологии Сибирскою отделения РАМН

Защита состоится

1997г. в

ч.

1997г.

Ученый секретарь Диссертационного совета, кандидат биологических наук

К.Н. Амосова

Актуальность проблемы. Среди существующих методов лечения боги ы ix злокачественными новообразованиями в последние годы особое внимание уделяется лекарственной терапии опухолей. Доказана оправданность использования противоопухолевых препаратов на различных стадиях заболевания ие только с целью избавления больных от мучительных симптомов, но и в целях продления их жизней и даже полного излечения от недуга (Блохин H.H., 1977; Гарин A.M., 1983; Файнштейн Ф.Э. и соавт., 198-4; Переводчикова H.H., 1986; Pazdur R., Baker LH., 1986; Сущенко И.В., 1987 и др.). В последние годы циюстатческие препараты весьма эффективно используются для химиотерапии многих опухолевых заболеваний, таких как мелкоклеточный рак легкого, рак яичников, регикудосаркома, лнмфосар кома, острый лимфобластный лейкоз, множественная миелома и друте. Часть из них применяется также как нммунодепрессивное средство (антиметаболиты пуриновых оснований, летотрексаг, циклофосфан и др.) при гломерулонефрлтах, красной волчанке, ревматоидном vprpiive, неспецифическом аортоартериите (Чернов В.А., Покрышкин В.И., 1986; Беиепсон 3. Б. с соавт., 1986; 1987; Беиепсон Е.Б., Миррахимова Э.М., 1989; Покровский A.B., 1990).

Известно, что абсолютное большинство используемых для этих целей ннтостатнче ких лекарств не обладает строго селективным повреждающим воздействием на клетки-шшени и оказывает токсический эффект на нормальные ткани организма. Особенно вмсо-:ую чувствительность к токсическому действию цщостагикоа проявляют нормальные кле-очные системы с высокой фракцией роста н, в первую очередь, костный мозг н лим()юид-ые органы (Франкфурт О.С., 1976; Блохин H.H., 1977; Гершановнч М.Л., 1982; Гольдбер! :.Д., Новицкий В В., 1986), представляющие собой места пролиферации и ли(]*^л,-ренциров-и всех иммунокомпетентнмх клеток.

В связи с этим вызываемое действием противоопухолевых препаратов уменьшение езерва гуморальных и клеточных Дикторов иммунитета выражается в установленном в ксперименте и клинике нммунодепрессивном эффекте большинства антнбластомных зедств (Березина Т А., Утешев B.C., 1979; Малкова II.В., 1980; Ватин А.Е ; 1980; 1981; Сукова И.В. с соавт., 1981; Киреева И В. с соавт., 1981; Шаповалова С II., Малкова И В., 383; Shen J.Y., 1984; Киселев И.Е. с соавт., 1985; Зсмсков A.M., Войтекунас Е Б., 1986; о палев И.Е., Азизов Р.Г., 1986; Hadden J.W., 1987). В то же время известен факт суше-вования нарушений в системе иммунитета у больных, страдающих опухолевыми завещаниями. Так дефицит аитителообразовашщ обнаруживается даже на ранних стадиях хро-«еского лимфолейказа н миелоиы, а недостаточность клеточного иммунитета - при лим-этранулематозе, лимфосаркоме и ретнкулоннтоме. Другой тип иммунолефицнтных со-ояний (преимущественно клеточного характер'а с вовлечением гуморальных реакций) евч-н с распространением процесса и наблюдается при токачестяенных лич<|юмах, остром Пкозе, обширном метаслазнронанни солидных опухолей. Нарушения »леточнчт им-

мунитета заключаются в уменьшении количества или изменении функций Т-лимфоцитов и макрофагов, гуморального - B-лимфоцитов, плазматических клеток, иммуноглобулинов, комплемента и интерферона. Применение же иммунодепрессантов у больных с новообразованиями может привести к последствиям, потенциально опасным, по меньшей мере, в трех направлениях: реактивации или повышению восприимчивости к инфекции, диссиминации уже существующей опухоли и возникновению новых (вторичных) злокачественных опухолей (Гершанович М.Л.. 1982; Joullard J. et al., 1984; Gale R.P., 1985; Cairo D.M.S. et al., 1986; Schimpff S C., 1986; Hoffman M.S. et ai., 1988).

Поиск и разработка xJxJjeKTiiBKbix стимуляторов функций иммунокомпетентных клеток в условиях иммунодепрессивной терапии делает весьма актуальным изучение патогенеза нарушений в системе иммунитета, развивающихся в этих случаях. К настоящему времени достаточно хорошо изучено повреждающее действие противоопухолевых препаратов на моноцитарно-макрофагальную, Т- и B-клеточную системы (Акрамов А Р. с соавт., 1985; Ковалев U.E., Азизов Р.Г., 1986; Беиенсои Е. Б. с соавт., 1987; Кондратьева Т.К. с соавт., 1988; Наполов Ю.К., Борисов К Б., 1991; Alonso М.Е. et al., 1991; Moore F.R. et al., 1995; Anderson D. et al.. 1995; Hartmann A. et al., 1995; Kurd D.D., Peters W.P„ 1995; Ripoll-Hamer E. et al., 1995). И то же время известно, что в формировании иммунологического ответа помимо этих клеточных субпопуляиий участвуют плазматические клетки, представляющие собой основной источник синтеза иммуноглобулинов в организме (Лозовой В.П., Шергин С.М., 1981; Петров Р.В., 1982; Азнурян A.B., Бахшинян М.З., 1985; Кульберг А.Я., 1985; 1986). Их концентрация в сыворотке крови определяется числом клеток-нродуцентов антител, количеством молекул Ig, синтезируемых каждой клеткой и регуляторными механизмами (Кульберг А.Я., 1986).

Таким образом, изучение морфологического и функционального состояния пула плазматических клеток после деИепшя цитостатических препаратов предстанляет собоИ значительный научный и практический интерес. Литературные сведения, описывающие влияние антнПластомных препаратов на данную клеточную популяцию, отрывочны, противоречивы и ограничиваются лишь данными о количестве антителообраэующих клеток в concierne, либо уровне антител.

Цель исследования: Изучить мор<|х>лшнчсскс>е к функциональное состояние пула иламзтичеекмх клепж при ашмши »pni>t.'Ti>i>|>cHii». ньпшшюН пишпатическими препаратами ;ъти!:ччпкпнсн*т|ша действия (на модели дейстиия никлн^ккфаиа)

|||ч' трмнчгое исследование было сосрслшочено на решении следующих основных

ыл.и.

1 О. ["- клич, содержание ни степени цимчсш итапмпмани к.четк » кровсшор-II, и и i.i ' :,ч:.пЬ'И 1К.1Ш1 IIH1.H рm i» ,i..r'"p.ii'J i'i.u »тинных (мыши. кршы. морите

свинки). Описать их морфологию в костном мозге, селезенке, лимфатических ушах, тн мусе.

2. Установить содержание по степени зрелости клеток плазмошггарною рада в кро ветворных и лимфондных органах (тимус, костный мозг, селезенка, лимфатические узлы) у экспериментальных животных в динамике цитостатической болезни, после иммунизации интактных мышей и при введении тнмусзависимого антигена через 3 суг после одиокрапю-го введения циклофосфана в МПД.

3. Описать морфологические. особенности клеток ллазмоцшарного ряда кронешор ных и лимфондных органов после иммунизации интактных мышей, животных с цитостатической болезнью и при однократном введении циклофосфана.

4. Исследовать количественные показатели предшественников плазмагических клеток (В-лимфоцитов) в селезенке экспериментальных животных.

5. Выявить особенности действия циклофосфана и иммунизации при их изолированном и сочетанном применении на ферментативный статус лимфондных и плазматических клеток.

6. Изучить состояние функциональной активности плазматических клеток у мышей с цитостатической болезнью, индуцированной однократным введением циклофосфана, и при иммунизации интактных животных и мышей с гипоплазией кроветворения после применения цитостатического препарата.

Научная новнзна; Впервые проведено комплексное изучение характера нарушений, возникающих в системе клеток плазмоцнтарного ряда, при экспериментальной цитостатической болезни у мышей, вызванной однократным введением циклофосфана в МИД. Установлено, что развивающаяся в этом случае гипоплазия костного мозга и лимфоициых органов (тимус, селезенка) сопровождается относительным подъемом количественных показателей плазматических клеток, а период восстановления обшей клеточностн органов - увеличением их абсолютной численности. Установлено, что снижение количества В-ликЦюцитов в селезенке при цитостатической болезни сопровождается уменьшением числа ангигелооб-разующих клеток в этом органе и их увеличением в костном мозге. Показано, что падение титра специфических гймагглютипинов в сыворотке крови после введение цитостатического препарата алкшшрующего типа действия вызвано не только понижением количественных показателей клеток, их синтезирующих, но и угнетением активности ключевых ферментов плазматических клеток, сопровождающимся падением их функциональной активности.

Полученные данные вносит новые знания в существующие представления о характере повреждающего действия цитостатических препаратов на иммунную систему и дополняют имеющиеся сведения о морфофункциональном состоянии кроветворных и лим^кшдных органов при иммунизации тимусзависимым антигеном при шиостагичесшч втдеСстин

Научно-практическая значимость. Представленные данные вносят новые сведения в сложившееся представление о патогенезе иммунодепрессивных состояний, развивающихся при цшосташческой болезни и эффектах повреждающего действия противоопухолевых препараюв us плазматические клетки. Полученные в результате проведенного исследования данные могут служить основой для обоснования новых патогенетических механизмов развития имму но дефицитных осложнений цитостатической болезни.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 6 работ.

Обьем и структура работы. Диссертация изложена на 222 страницах машинописного 1екста н состоит из введения, четырех глав, выводов и списка литературы, включающего 308 источников, из которых 169 отечественных и 139 иностранных. Диссертация иллюстрирована 46 таблицами и 14 рисунками.

Автор выражает глубокую благодарность доктору медицинских наук Евгению Станиславовичу Смольянинову и кандидату медицинских наук Галине Васильевне Карповой за консультативную помощь в процессе работы над диссертацией.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Эксперименты проведены на 500 мышах сампах линии СВА массой 20 - 25 граммов, 15 крысах - самцах и б морских свинках (питомник "Рассвет", г. Томск). Животных содержали на обычном пищевом рационе в пластмассовых клетках по 15-20 особей и каждой. Дли исключения влияния сезонных колебаний на изучаемые покаштели псе основные жепери-менты проводили в осенне-зимний период года. Распределение животных по группам пред-стаплено в табл.1.

Для моделирования цитостатической болезни использовали циклофосфан (пронтодства Саранского комбината "Биохимик"). Перед введением препарат растворяли п стерильном физиологическом растворе и вводили внутрибрюшииио однократно п МИД, рассчшапиоП методом графического пробнт-аиализа по Litschfiekl, Wilcoxon (1948).

Иммунизацию мышей осуществляли однократным инутрибрюпшннмм введением тимусзависимого антигена - зритроннтов барана, полученных из НПО "Вирнон". Перед введением Ь')Р трижды отмывали раствором Хзнкса в стерильных услопиях. Для иммунизации животных исполыовалн 0,2 мл 20'? раствора БЭР.

Для тучения содержания п.тмлгичсских клеток в кроветворных и лим<|кшлных ор-пшл н ill функциональны*! mullein в условиях рашшшейся шнооагической боле им, инь-(kiiuiK |. )Р пропилили чсрс! 72 часа после впеления ннк;н»|н>сф.чна (иериол максимального } П1Г1П11И крове пшрення)

Таблица I

РАСПРЕДЕЛЕНИЕ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ ЖИВОТНЫХ ПО ГРУППАМ НАБЛЮДЕНИЯ

№ п/п Содержание эксперимента Каиггг-тволя-вопых Сроки исследования, сут

1 2 3 4

1. Изучение содержания плазматических клеток в кроветворных и лимфоидных органах и их морфологических свойств у крыс 15

2. Изучение содержания плазматических клеток в кроветворной и лимфоидной ткани и их морфологии у интактных морских свинок 6 --

3. Изучение содержания плазмоцитов в костном мозге, селезенке, тимусе и лимфатических узлах, их морфо - функциональных характеристик и количества В-лнмфоцитов в селезенке у интактных мышей 30

4. Изучение количественных показателей плазматических клеток кроветворных и лимфоидных органов и их морфологических характеристик у мышей после однократного введения циклофосфана в МПД 90 1, 2, 3, 4, 6, 8, 10, 17, 24-е

5. Изучение содержания плазматических клеток в костном мозге и лимфоидных органах и их морфологии у животных после иммунизации 70 1. 2, 3, 5, 7, 14, 21-е

6. Изучение содержания и морфологии плазматических клеток в кроветворной и лимфоидной ткани у животных при иммунизации на фоне действия циклофосфана 70 1, 2, 3, 5, 7. 14, 21-е

7. Изучение функциональной активности плазмоцитов и содержания В-лимфоантов в селезенке у мышей после однократного введения циклофосфана в МПД 80 ' 6, 10, 17-е

Продолжение таблицы 1

1 1 3 4

8. Изучение функциональных свойств плазматических клеток и количества В-лимфоцнтпв в селезенке у тштактных живот-пых после однократного введения ЭБ 80 3, 7, 14-е

9. Изучение функциональной активности плазматических клеток и количественных пока та гелей В-лнмфлштов селезенки мышей, имму ни тированных через 72ч после однократного введения циклофосфана в МГ1Д 80 3, 7, 14-е

Кои (рольной труппе ж и нотных внутрибркшшнио вводили стерильный изотопический раствор хлорида натрия л жминалснгном обьеме.

Материал для исследования забирали на 1, 2, 3, 4, 6,8, 10, 17, 24 сут после введения цитосгатика или на 1, 2, 3, 5, 7, 14 н 21 сут после иммунизации. Изучение количества В-лимфоцигив, антитслообразуюишх клеток селезенки и костного мозга и сывороточных ге-мат тлютининов проводили на 3, 7 и 14 суг после введения антигена или на 6, 10 и 17 суг после однократной инъекции цикло<|юсфапа.

Определение общею колнчссзна каршшптов костиою мозга и лимфлшных органов upon топили с использованием общепринятых методов исследования. Для изучения содержания и морфшогии плазматических клеток в кропстиорнмх и лимфтидных органах тото-пилн мазки и) содержимшо грудины и ¡»могената кусочка ткани и аузолотичной сыворот-кп Препараты фиксировали в метаноле в течение 5 мин, высушивали и окрашивали азурИ-H1IHIIOM в течение 30 мин. Затем препараты промывали проточной водоН, высушивали н микроскопировали. Подсчет миелограммы и нитофамЪт лимфоидных пртанои проинюдилн на 400 клеток, после чею рассчитывали абсолютное содержание клеточных злемензон.

Определение диаметра ила тматическнх клеток и их ядер производили с помощью озу л нр-микрометра.

Нмип.зенне акттгнности кисло» фосфатаи.| в лимфтцнтах и плазматических клетках оашесш.тязи методом аюсочетлтни по ОоШЬегр Д. Г., Barta Т. (1%2). II качестве субстрата hoio.-h.poiu.ih ii;«(>nu-A.S'-(|xK.v|i.)r фирмы "ОтспироГ (Чехословакия), акжраснгслем служил лн.ионнро'чнпыИ n.ip.ifio»анк.Ч!lit отечественном) iipiiHiiiiucTiu. Опенку полученных данных провод" П! по.туичичественно но метолу Клр1т\ (1955) и молификлнии AMalili el Vcrga

(1957). Определение активности цитоплашатнческои РНК в плазмошпах проводили по методу Браше с использованием метилового-зелеиою пнронина. Фотометрию окрашенных препаратов осуществляли на цитофотомегре "Univar" ("Reichcrl", Лвсфн.ч) методом одно-волнового фотомегриронания при длине полны монохроматического снега 540 нм. Результат выражали в условных единицах оптической плотности.

Антнтелообразующие клетки выявляли с помощью метода локального гемолиза в жидкой среде (по Caningham (1965)); B-лимфоциты - с исполыопанием метода прямой йм-мунофлуоресценции. Для оценки интенсивности процесса антителообраюнания определяли уровень гемагглютининов в реакции агглютинации.

Статистическую обработку проводили с использованием t-крнтерия Стъкшента (Лакин Г.Ф., 1990).

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ СОБСТВЕННЫХ НАБЛЮДЕНИИ Проведенное исследование позволило установить, что однокрапюе введение инкло-фосфана в МГТД приводит к падению ОКК всех изучаемых органов: в костном мотге (до 17,52 - 47,47% от фоновых показателей), тимусе (в среднем на 63,31" от исходных значений) и селезенке (на 40,65 - 75,69% от первоначальных величин) - на протяжение первых 5 -8-ми сут эксперимента, а в лимфатических узлах - в период всего исследования в среднем до 24,83% (рис. 1). Общая депрессия мнелокариоцнтов сопровождается снижением абсолютных показателей лнмфопдных элементов (в центральном кроветворном органе и лимфатических узлах - в течение всего периода наблюдения в среднем на 66,43 и 67.54% соогвет-ствевно, в тимусе - в срок с 1-х по 6-е сут опыта до 19,08 - 37,08% от (¡юна, в селезенке.на 28,06 - 67,62% от показателей интактных животных - на протяжение первых 2-х нед исследования), обусловленным, как показал анализ цитограмм, уменьшением абсолютных значений как властных форм, так и средних и малых лимфоцитов, и увеличением относительного количества клеток плазмоцнтарного ряда в центральных органах (рис. 2) и падением как абсолютных, так и относительных величин общего числа плазматических клеток в селезенке (рис. 4, 5). Плазмоцитарная реакция, наблюдавшаяся в период подъема общей клеточностн органов (в последние две недели эксперимента), носила абсолютный характер и осуществлялась за счет проплазмоцитов (костный мозг и селезенка) и зрелых форм (костный мозг, тимус, селезенка)(рис. 3, 5).

Отмеченный угнетающий эффект цикло()х1сфана на изучаемые показатели обусловлен его способностью действовать как на активно пролнферируюшие, так и на покоящиеся клетки (Блохин H.H., Переводчиком Н.И., 1984). При введении в организм в мнкросомах гепа-тоцитов препарат подвергается химическому препращенню с образованием активных

70 60 50 40 30 20 10 0

1 Э 3*2

№1 1ТМ4 1А21

«I М ЛЗ 1*7 ЫЛ1 И Ш1

250 ;

:оо •

150 •

юо

50 0 '

Э г: 4X1 П II11 17М4 ! г: 1

А

7 1\

■ V-----

\_____

ш

1 : 3 4\1 54 М «Ч 1ЙТ 14111 №14 ¡4121

Рнс. 1. Динамика показателей обшего количества кариоцитов в костном мозге (А), тимусе (Б), селезенке (В) и лимфатических узлах (Г) у мышей посте введения циклофосфана в МПД (сплошная линия) и иммунизации (прерывистая линия) на фоне цнтостатического воздействия (светлые столбики). По оси абсцисс - сроки исследования (после введения цитоста-тнческого препарата - числитель, либо антигена - знаменатель), сут; по оси ординат - количество клеток, хЮ6. Доверительные интервалы при р=0,05.

Рис. 2. Динамика показателей плазмоцитов костного мозга (А), общего количества плазматических клеток в костном мозге (Б) н тимусе (В) у мышей после введения циклофосфана в МПД (сплошная линия) и иммунизации (прерывистая линия) на фоне цитостатического воздействия (светлые столбики). По.оси абсцисс - сроки исследования (после введения цитостатического препарата - числитель, либо антигена - знаменатель), сут; по оси ординат - количество клеток, Я. Доверительные интервалы при р=0,05.

Рис. 3. Динамика показателей плазмоцитов костного мот га (А), общего количества ллатматическнх клеток в костном мозге (Б) и тимусе (В) у мышей после введения цикло<|хк(|>ана в МИД (сплошная линия) и иммунизации (прерывистая линия) на фоне цитостатического воздействия (светлые столбики) По оси абспнсс - сроки исследования (после введения цитостатического препарата - числитель, либо антитсна - знаменатель), сут; по оси ординат - количество клеток, х10". Доверительные интервалы при р=0,05.

Рис. 4. Динамика показателей проплазмоцитов (А), плазмоцитов (Б) и общего количества плазматических клеток (В) в селезенке у мышей после введения циклофосфана в МПД (сплошная линия) и иммунизации (прерывистая линия) на фоне питостатического воздействия (светлые столбики). По оси абсцисс - сроки исследования (после введения питостатического препарата - числитель, либо антигена - знаменатель), сут; по оси ординат - количество клеток, %. Доверительные интервалы при р=0,05.

Рис. 5. Динамика показателей проплазмоцитов (А), пла чмонитоп (Г>) и общего ко личества плазматических клеток (В) в селезенке у ммшсП после ввеленн) циклофосфана в МИД (сплошная линия) и иммунизации (прерывистая ли пня) на фоне цитостатичсского всплсйствия (светлые столбики). По оси аб сиисс - сроки исследования (после введения цитостагического препарата числитель, либо аптшена - знаменатель), сут; по оси ординат - количеств« клеток, х1(У. Доверительные интервалы при р=0,05.

метаболитов, содержащих две хлорэтильные боковые цепи (Marinello A.J. et al., 1985; Kawabata Т., While К. L., 1988). После попадания в цитоплазму клеток-мишеней они отщепляют ион хлора с образованием электрофильиого карбонневого аниона. Последний взаимодействует с нуклеофилышми структурами ДНК. В результате алкилировання нмида-зольное кольцо раскрывается и по освободившейся связи образуется соединение гуанина с тимином ДНК. В месте образования такого кроссинговера не может работать ДНК-зависимая ДНК-полимераза и происходит нарушение правильной редупликации и остановка деления клетки (Наполов Ю.К., Борисов К.Б., 1991). При этом алкнлнрование ДНК в про-лиферирующих клетках сопровождается летальным эф<1>ектом. В покоящихся кл-етках в результате репаративного синтеза возможно восстановление натнвной структуры полимера, и последующее вступление такой клетки в S-фазу не сопровождается летальным эффектом (van Putten L.M., Lelieveld P., 1970). Причина более длительного восстановления показателей лимфатических узлов может быть, на наш взгляд, связана с особенностями фармакоки-нетики препарата (Colvin М., Hilton J., 1981): известно, что наряду с другими тканями, лимфатические сосуды и узлы представляют собой место наибольшей концентрации цикло-фосфана. Помимо зтого, значительная часть его активных соединений, экскретируемых с желчью, подвергается реабсорбцин в кишечнике и вновь попадает в.лимфатические сосуды и лимфатические узлы (Яковлев В.П., ¡974). Таким образом, время циркуляции активных метаболитов препарата в последних увеличивается. Полученные нами данные по изучению содержания лимфоидных элементов в кроветворных и лимфоидных органах подтверждают имеющиеся в литературе сведения о наибольшей чувствительности к цнклофос-фану лимфопоэза (Переводчикова Н.И., 1974; Булкнна З.П., 1991).

Среди клеток лимфоидного ростка повышенной восприимчивостью к данному препарату отличаются В-клеткн (Кондратьева Т.К. с соавт., 1988; Misra R., Bloom S., 1988). Об этом же свидетельствуют наши результаты по снижению относительного и абсолютного количества 1)-лнм(|х)Цнтов в селезенке мышей этМ1 экспериментальной группы в течение первых 10-тн сут (до 53,14% и 10,2 - 67,5% соответственно) н подтверждают предположение ряда авторов о существовании пула "покоящихся" В-клсток, чувствительных к цитостатику со сроком обновления около 8 сут. Они находятся на крайней стадии линейного процесса ги-CToreneia В-лимс|х>ннтов и соответствуют зрелым B-клеткам (Леонтьева Т.Н. с соавт., 1988). В отсутствии антигенного ращраження они находятся вне никла и их элиминация спя)ана с отсутствием регенерации, вызванной снижением .цитостатиком пролш|>еранни менее зрелых лимфоцитов.

Ре1юмируя полученные результаты, можно утверждать, что паление общего числа предшественников АОК приводит к снижению количества последних в селезенке и костном мозге на протяжение первых 6-ти суг наблюдения на 30,51 н 43,18il от исходных «оказатс-

лей соответственно (рис. 6). Увеличение последних в лимфоидном органе наблюдается в период с 10-х по 17-е сут (до 138,08 - 188,34%), в центральном кроветворном органе - к окончанию эксперимента (в 1,91 раза), что можно объяснить, по всей видимости, поликлональ-ной активацией- их предшественников под воздействием некоторых митогенов, например, ЛПС и МДП (Сибиряк C.B., Алехин Е.А., 1988; Рахмилевич А.Л., 1990; Gras J., Tuset N.. 1992; Holda J.H., 1992; Morris D.L. et al., 1993), входящих в состав клеточной стенки многих микроорганизмов, усиление инфицирования которыми может быть связано с падением иммунитета в более ранние сроки (Hicakata Y., 1995)., возможной причиной которого может быть нарушение барьерных механизмов' и инфицирование как аутофлорой, так и патогенными микроорганизмами, вирулентность которых под действием циклофосфана увеличивается (Никонова H.A., Руденко A.B., 1989).

Как показали результаты проведенного нами исследования, введение циклофосфана в МПД приводит к достоверному увеличению активности кислой фосфатазы (по СЦК) в клетках селезенки (на 10% в лимфоцитах и на 24% - в плазмоцитах) в течение первых шести сут (рис. 7). Причина этого, на наш взгляд, может быть связана с усиленной антигенной нагрузкой, возникающей при альтерации тканей под воздействием препарата в указанные сроки и стимуляцией активности ферментов в функционирующих лимфоцитах, индуцированных антигенным воздействием (Уманский Ю.А., Пинчук В.Г., 1982; Ляшенко В.А. с соавт., 1988). Нельзя исключить также, что активация катаболических ферментов может быть результатом первичного нарушения структуры лизосом (Белоусова А.К., 1965). Снижение показателей активности кислой фосфатазы в лимфоцитах костного мозга (на 16,7%) и в плазматических клетках селезенки (на 365?) отмечается к 17-м сут, в лимфоидных элементах лимфатических узлов - на 10-е (на 38,6%) и. 17-е (на 30%) сут, что можно объяснить повреждающим действием препаратов алхнлирующего типа действия на структуры белков и нуклеиновых кислот. Это приводит к возникновению мутантных клеток, неспособных Синтезировать те ферменты, которые находятся под контролем молекул ДНК, потерянных или измененных вследствие алкилирования (Белоусова А.К.,'1965). Помимо этого, и белки, и аминокислоты также подвергаются аликилированию, после чего исключаются Яз общего внутриклеточного метаболического фонда; у алкилироваиных' же белков (коими являются и ферменты) нарушается вторичная и третичная структуры, а, следовательно, и биологическая активность (Птицын О.Б., 1970). Считается также, что метаболиты циклофосфана обладают способностью концентрироваться в клеточных, митохондриальных и микросомальных мембранах и, включаясь в свободнорадикальную реакцию, индуцировать перекисное окисление липндов последних (Олейник A.B., 1985; 1986), продукты которого нарушают их структуру н функции. Ферментативные же процессы в клетке протекают с участием энергии.

100 «о 60 40 20 0

24 2

1

0,5 0

А

гЬ

1 н т>

■ § *1 II

фош

3\6

7\10

14 12 10 8 6 4

фон

20 15 10

фол

4

й

г

ЙГ

у ?

3\6

14\17

д

т —

-1 Р' -Ь -Р

фоа

7\10

14\17

Рис.6. Динамика показателей АОК л селезенке (абсолютных (А) относительных (Б)), костного мозга (абсолютных (В) и относительных (Г)) и уровня специфических гемагглютининов в сыворотке крови (Д) у мышей после введения циклофосфана в МПД (вертикальная штриховка) и иммунизации (светлые столбики) на фоне цнтостатического воздействия (косая штриховка). По оси ординат - сроки исследования (после введения антигена - числитель, либо цнтостатического препарата - знаменатель), сут; по оси абсцисс - количество, х10° (А, В), % (Б.Г). (Д). Доверительные интервалы при р=0.05.

3\6

Падение активности цнтоплазматической РНК в плазмоцитах селезенки и костного мозга только в период первой недели исследования (на 24 и 25,7% соответственно) (рис. 7) можно объяснить, вероятно, меньшей способностью РНК подвергаться алкилированию в сравнении с другими макромолекулами. Нельзя исключить и тот факт, что алкилированная РНК более стабильна по сравнению с алкилированной ДНК (Утешев Б.С., Бабичев В.А., 1974).

Иммунизация интактных. животных сопровождается достоверным подъемом общей клеточности и абсолютного количества лнмфоидных элементов костного мозга (в среднем на 33,3 и 52,6% соответственно) - в срок-на 1, 3 и 21-е сут опыта (рис. 1), тимуса (на 91,7 -405 и 90,7 - 399% соответственно) (рис. 1) н селезенки (в 1,66 и 1,5 раза) (рис. 1) - в течение первых 2-х нед эксперимента и снижением соответствующих показателей лимфатических узлов (в среднем в 2,1 и 1,6 раза) в период первых 3-х сут и через две недели исследования (рис. 1). Абсолютное содержание плазматических клеток в костном мозге увеличивается на 7-е и с 14-х по 21-е сут наблюдения (в среднем на 192,6%), в тимусе (на 934,8%) - в течение первой недели опыта (рис. 3), селезенке (на 146,6%) - в период с 3-х по 11-е сут исследования (с последующим падением показателей в селезенке на 64,2% от фоновых показателей до окончания периода исследования) в основном за счет способных к пролиферации клеточных форм плазмоцитарного ряда (рис. 5). Изложенные результаты хорошо согласуются с данными исследователей, изучавших цитоморфологический состав кроветворной и лимфоид-ной ткани на введение антигенов бактериальной и вирусной природы (Осечинский И.В., Манько В.М., 1966). Следует отметить, что реакция со стороны ОКК н лимфоидного ростка изученных нами органов (кроме лимфатических узлов) представляет собой стереотипный ответ кроветворной и лимфоидной ткани на любой стрессорный раздражитель (Васильев Н.В., 1975). Предполагается, что полученная стереотипная реакция не является чем-то побочном, посторонним по отношению к иммунному ответу, а, напротив, обеспечивает фон, на котором формируется популяция АОК. Изменения клеточной реакции, наблюдаемой в лимфатических узлах, возможно, объясняется миграцией 'малых лимфоцитов (о чем может свидетельствовать снижение их абсолютного количества на фоне роста количественных показателей больших и средних лимфоцитов). Плазмоцитарная реакция, развивавшаяся в указанные сроки, является прямым следствием действия стимула антигенной природы.

Как показали результаты проведенных нами исследований, иммунизация интактных мышей не вызывает статистически значимых изменений количественных показателей В-лимфоцитов селезенки на протяжение всего периода исследования и сопровождается увеличением показателей количества АОК (в 3,2 - 6,3 раза по сравнению с исходными значениями) в селезенке и титра специфических гемагглйтининов в сыворотке крови (в 1,4 - 2,6 раза) на щкняженне всего периода исследования (рис.б), что соответствует динамике развития

200 150 10050 0-

3\6 7\10 14\17

В

¿4

3>6 5\8 7\10 ]4\17 21\24

200 150

50'

О-

3\6 7\10 14\17

«3 3\6 5\8 7М0 14*17 2ГЛ4

Рис 7. Динамика цитохимической активности кислой фосфатазы <СЦК) плазматических клеток хоегаого мозга (Л), селезенки (Б) и цнтоплазмагическон РНК в плазмопитах селезенки (В) и костного мозга (Г) у мышей после введения циклофосфана в МПД (серые столбики) и иммунизации (темные столбики) на фоне цитостатическпго воздействия (светлые столбики). По оси абсцисс - сроки исследования (после введения антигена - числитель, либо цшостатического . препарата - знаменатель), сут; по оси ординат - активность ферментов, % от нормы.

первичного иммунного ответа на введение Т-зависимого антигена и осуществляется за сч пролиферации и/или дифференциронки предшественников клегок-антителопродуценгов зрелые АОК (Новиков В.И. с соавт., 1982; 1991). Вместе с тем приводятся сообщения о то что на пике иммунного ответа костномозговые клетки способны продуцировать раствор мый САП (Михайлова A.A., 1984; Стрелков Л.А., Михайлова A.A., 1987; Mikliailova A.J Fonina L.A., 1990), который включает синтез антител в резервных ("молчащих") АОК, yi личивая тем самым количество антителопродуцентов на пике иммунной реакц (Михайлова A.A., 1977).

Повышение функциональной активности изучаемых клеток подтверждает не толь рост титра специфических антител, но и достоверное увеличение процента положителы реагирующих клеток лнмфондного и плазмоцитарного ряда во всех изучаемых органах среднем в 1,45 раза) и активности кислой фосфатазы в лимфоцитах центрального Kpoi творного органа (на 57,8%) и селезенки (на 45% от фоновых величин) в период всего эка римента, повышение активности кислой фосфатазы (по СЦК) в лимфоцитах лимфатн' ских узлов до 134,3% от ([юна в течение первой недели, в плазмоцитах селезенки (на 2¡ 60%) и костного мозга (на 52.6 - 78,9%) - на 3-й и 7-е сут (рис. 7), а также стимуляц активности цитоплазматической РНК клеток плазмоцитарного ряда селезенки (на 22,3%) протяжение первых 5-ти сут наблюдения, костного мозга (на 19,9%) - в срок с 5-х по 1-сут опыта (рис. 7), что свидетельствует об активации процессов синтеза белка.

Таким образом,'увеличение активности цРНК в плазматических клетках костж мозга и селезенки свидетельствует о развитии плазмобластической реакции, что подтвер дает появление в костном мозге молодых форм плазмоцитарного ряда, в селезенке же -увеличение по сравнению с фоновыми величинами.

Исходя из имеющихся в литературе данных, можно предположить, что достоверт снижение абсолютного количества АОК в костном мозге в течение первой недели после ¡ тигенного воздействия на 41,48% от исходных значений при иммунизации интактных м шей (рис. 6) вызвано влиянием супрессорного фактора", секретируемого В-супрессора: костного мозга. К настоящему времени сформулировано представление, согласно'.которо костномозговые В-супрессорЫ являются возможными универсальными ингибиторами kj точного деления (Петров Р.В., 1982; 1989; Акрамов А.Р., Калинкович А.Г., Пинегин Б.] 1985), в том числе и АОК, и функция которых реализуется за счет выработки низкомоле! лярных факторов (Сидорович И.Г., 1987) после контакта с активно пролиферирующи иммунокомпетентными клетками.

Антигенная стимуляция мышей через 72ч после однократного введения циклофосс на в МПД способствовала более раннему (по сравнению с действием одного цитостатичео го препарата) восстановлению общего количества ядросодержащих клеток и абсолютных i

ззателей лимфоидных элементов (за счет лимфобластов, средних и малых лимфоцитов) в эстном мозге и селезенке и отсутствию выраженной клеточной реакции в последние сроки сспернмелта, наблюдавшейся в контрольной группе (рис. 1). Динамика аналогичных пока-ггелей тимуса и лимфатических узлов подобна таковой у животных с цнтостатической бо-езпью, не подвергнутых стимуляции Т-зависимым антигеном. Абсолютные значения об-тето количества плазматических клеток в костном мозге в опытной группе на 1,5 и 14-е Гг превышает показатели мышей, повергнутых либо цитостатическому (в 3,1 раза), либо птигенному (в 2,8 раза) воздействию (рис. 3). В тимусе животных сочетанное введение нклофосфана и эритроцитов барана приводит к более высоким нокатателям (посравненню контрольной группой мышей с одной цнтостатической болезнью) клеток плазмоцнтарного яда в период с 1-х по 3-й (на 66,7%) и на 21-е (на 92,9%) сут эксперимента (рис. 3), в селе-?ике - к более низким (на 77,3%) - в срок с 3-х по 21-е сут исследования (рнс. 5).

Результаты более раннего восстановления клеточности.костного мозга и селезенки у ивотных этой экспериментальной группы по сравнению с мышами после введения одного иклофлефана можно объяснить способностью антигенного воздействия усиливать проли-«.'ративную активность ПСКК костпого мозга (Гпт1е1 Е., Сго)га! 11., 1975), подавленную ведением цитостатцчсского препарата, следствием чего является увеличение числа КОЕ-С ак п кроветворном органе (Козлов В.А., Журавкин И.П., Цмрлопа II.Г., 1982), так и в се-енпке (Шкитап 13.А.. Во».чег И.Т.. 1972), а также усиливать миграцию ПСКК из костною юна в селезенку.

Однако, несмотря на значительное уиелнченкс колнчссткенш,1х показателей лнчфо-Л1Н.1Х элементов в селезенке, установлено, что введение БЭР на фоне цнтостатической бо-сшн способствует более глубокому падению как относительных, так и абсолютных зттаче-|т1| П-лимфшшгоп этою органа в течение всего перттода наблюдений как по сравнению с «новыми покашелями (в среднем в 4,1 и 8,4 раза соответственно), так и но отношению к [.•личинам обеих контрольных групп (на 63,5% по сравнению с показателями животных осле цнтосгатнческото и на 77,0% - после антигенного воздействия). Причиной усиления отстающего э(|н|)екта циклофосфана на изучаемые показатели может быть, на наш взгляд, целующее: под влиянием специфическою антигена (БЭР) происходит максимальная зкти-зння клоноп Н-лимфонитон, реактивных к нему, при этом происходит активация В-клеток античного уровня (||ункцноналы1ой зрелости. Применение антигена выпивает пстошаюшую И(|*|х.'решшровку всей популяции, а инклот^тосфан дает мноютвеньевую блокаду погтуля-ии. Вместе с тем следует отмстить, что введение БЭР трансформирует прямые ттрелше-тпештики ("нокоищнеся" В-Л11М(|х>штгы) на антителопролуценты, о чем может стшлезс.и,-щовать более высокий (в 1,63 раза) уровень АОК (по сравнению с контрольной труппой ышей с одним пнзостатиком) н селе тенке именно в первые шесть сут )ксисримсита.

Однако, лак «оказали результаты проведенного нами исследования, введение Т-зависнмого антигена животным с цитостатической болезнью, не приводил уровень антите-лопродуцентов селезенки и титра специфических гемагглюгининов к уровню контрольных значении, зарегистрированных после иммунизации интактных животных (рис. 6). Причиной этого, помимо повреждающего действия цитостатического препарата на клетки-предшественники антителогенеза, может служить, на наш взгляд, действие естественных супрессорных клеток, которые в норме в селезенке отсутствуют, но проявляют свою активность в этом органе при введении циклофосфана (Ляхов В В. с соавт., 1987). Вместе с тем приводятся сообщения о влиянии иэ иммунологические показатели и эритроцитов (Козлов В.Д., Лозовой В.П., Журавкин И.Н., 1977).

Как показывают опыты, введение циклофосфана в эксперименте приводит к развитию нарушений со стороны эригрона, заключающимся в повышенном распаде эрнтрондных клеток, их внутриклеточный гемолиз (Гольдберг В.Е. с соавт., 1992) и увеличение в периферической крови патологически измененных эритроцитов в ранние сроки опыта. Существует предположение (Прокопенко Л.Г., Сипливая Л.Г., 1992), согласно которому, измененные эритроциты интенсивно фагоцитируются макрофагами и индуцируют или усиливают выделение поглотившими их клетками ИЛ-1-подобного фактора (Гольдберг Е.Д., 1990), стимулирующего развитие иммунного ответа на Т-зависимые антигены. В дальнейшем в процессе регенерации эритропоэза (Гольдберг Е.Д., 1983) в селезенке появляются молодые формы эритроцитов, обладающие иммуносупрессирующими свойствами и осуществляющие их на уровне зрелых антителопродуцентов. Данная супрессия осуществляется на уровне подавления пролиферации B-лимфоцитов гуморальным фактором, который продуцируется этими эритроидными клетками (Стенников С. В., 1987; Чеглякова В.В., Цырло-ва И. Г., Козлов В. А:, 1989), и снижения биосинтеза иммуноглобулинов (Scheifer S.I. et al., 1983;Sroczynskil. et al„ 1983). '

Более высокие показатели количества АОК в костном мозге (в 1,59 раза) на протяжение первых 10-ти сут эксперимента (рис. 6), а также более выраженная плазмоцитарная реакция по сравнению со значениями, наблюдавшимися при введении одного цитостатика, можно объяснить тем, что введение циклофосфана отменяет формирование антигениндуци-рованных В-супрессоров в костном мозге (Акрамов А.Р., Калинкович А.Г., Пинегин Б.В., 1985) и, соответственно, их супрессирующий эффект в отношение антителогенеза в кроветворном органе (Петров Р.В. с соавт., 1977; Михайлова A.A., 1978).

Иммунизация мышей с цитостатической болезнью приводит к снижению активности кислой фосфатаэы (по СЦК) лимфоидных элементов лимфатических узлов во вторую неделю эксперимента до 70,7% по отношению к исходным величинам, увеличению показателей в лимфоцитах селезенки (не только в отношение фоновых (на 15%), но и контрольных по-

казателей животных с одним цнтостатическим воздействием (на 9,8%)) в первые 10 сут опыта, в костном мозге - на протяжение шести сут исследования (на 26,7%); рост значений активности лизосомалыюй кислой фосфагазы плазматических клеток селезенки отмечается в первые сроки опыта (до 132% от величин фона), падение (до 64%) - к окончанию эксперимента. Отмечаются также более высокие показатели в отношение показателей активности цитоплазматической РНК плазмоцнтов селезенки (в среднем на 28,3%) и костного мозга (на 26,3%) по сравнению с аналогичными величинами при действии одного циклофосфана (рис. 7). Полученные результаты свидетельствуют о стимуляции функциональной активности изучаемых клеточных элементов: повышению процессов пролиферации, дифференцировки, синтеза белка.

Однократное введение циклофосфана в МПД приводило к увеличению среднего диаметра плазматических клеток костного мозга в начальные (с 1-х по 4-е сут - на 15,7%) и последние (17-е сут - на 12,8%) сроки эксперимента, селезенки (с б-х по 24-е сут исследования

- в среднем на 8,3%) и их ядер в центральном кроветворном органе (на 3, 6 и 10-е сут опыта

- на 15,4%), селезенке (в период с 1-х по 3-й (на 13,8%) и с 10-х по 17-е сут (в среднем на 10,7%) наблюдения) и тимусе (на'3-и - на 22,2% и 10-е - на 27,7% сут) (табл. 22, 29, 36) за счет снижения процента случаев, встречающихся в пределах суженной нормы и в сигмаль-ной зоне ниже (X - lo), и увеличения относительного количества клеток за пределами интервала (X + lo) а также к снижению параметров ядер плазмо'цитов костного мозга на 8-е (на 7,9%) и 24-е (на 12,1%) сут исследования при противоположной вышеуказанной динамике распределения значений * диаметра по сигмальным зонам. Изменения ядррно-нитоплазматического отношения, наблюдающиеся в данной контрольной группе животных,

- неоднозначны: снижение показателей наблюдается в плазматических клетках на 4-е (костный мозг - до 92% от нормы) и 8-е (костный мозг - до 92%, селезенка - на 13,3%) сут, увеличение - на 6-е (центральный кроветворный орган - на 10%) и 10 « (костный мозг - на 14%, тимус - на 20,5%) сут.

Антигенная стимуляция иитактиых мышей вызывает увеличение среднего диаметра плазматических клеток в период всего исследования в костном мозге на 7,8% (кроме 3, 11 и 14-х сут), а в селезенке в среднем на 6,1 % (за исключением 11-х сут опыта), среднего диаметра ядер - только в лимфоидиой ткаии селезенки (на 7,7%) в срок с 7-х по 21 е сут эксперимента. Снижение значений ядерно-цитоплазматнческого отношения наблюдается в клетках костного мозга на 2, 14 и 21-е сут (в среднем до 92% от фоновых значений), а их польем

- к тимусе на 3-й сут наблюдения на 11,4% (табл. 22, 29, 36).

Нпедение антигена через 3 сут после инъекции циклофосфана вьмыгиет увеличение значений среднего диаметра плазматических клеток на протяжение всего игрища нести-

I _шия в костном мозге на 6,8% (кроме 3, 7 и 11-х сут после иммунизации) и селезенке на 8,5%, сопровождающееся превышением значений не только фоновой, но и контрольных групп в отдельные сроки опыта (при сравнении с 1 экспериментальной группой - на 2 - 3-й (в тимусе - на 1.%), 17-е (в селезенке - на 4,6%) и 21-е сут (в костном мозге - на 5,8%), а при сопоставлении со второй контрольной группой - на 21-е сут - в селезенке (на 4,4%)). Аналогичная динамика роста показателей отмечается и в отношение среднего диаметра ядер плаэ-моцитов селезенки - увеличение на 9,8% от исходных величин (кроме 3-х сут), противоположная - в плазматических клетках костного мозга на 3-й (с достоверным уменьшением показателей в сравнении с 1 (на 14,7%) и II (на 8,3%) экспериментальными группами животных) и 14-е (на 7,4%) сут опыта; в тимусе при сопоставлении параметров опытной группы с данными животных после однократного цитостатического воздействия превышение регистрируется на 2 - 3-й (на 22,2%), а падение - на 5 - 7-е (на 21%) сут антигенной стимуляции. Снижение величины ядерно-цитоплазматического отношения зафиксировано к центральном кроветворном органе в 1,13 раза на 1, 2, 5 и 21-е сут (табл. 22, 29, 36).

Таким образом, и цнтостатическое, и антигенное воздействие, и их комбинированное введение сопровождаются неоднозначным характером изменений количественных показателей размеров плазматических клеток.и их ядер, а также ядерно-цитоплазматического отношения.

По имеющимся & литературе сведениям, в большинстве случаев увеличение размеров клеток отмечается при гиперфункции костного мозга. Что касается изменений размеров ядра клетки, следует отметить, что увеличение данных параметров наблюдается непосредственно перед митозом, в случае регенеративных процессов и чаще всего свидетельствует о повышении функциональной активности клетки. Показано также, что с общим ростом кле1ки рост ее цитоплазмы происходит более интенсивно, чем рост ядра, отражением чего служйт уменьшение ядерно-циггшлазматнческого отношения. Подобного рода явление отмечается также при развитии и специализации клеток. Существующие данные указывают на наличие связи между степенью дифференцировки кЛетки и ее ядерно-плазматическим отношением (Хесин Я.Е., 1967).

Среди морфологических признаков клеток плазмоцитар;юго ряда, выявляющихся у животных всех трех экспериментальных групп, отмечается увеличение вакуолизации цитоплазмы и ядра, индукция процессов цикноза ядра, многоядерных форм плазмоцитов и появление пламенеющих плазматических клеток. Согласно имеющимся в литературе данным образование вакуолей представляет собой характерную реакцию клеток на различные небла юпрнятные воздействия (Поликар А., Бесси М., 1970). При этом первым морфологически», пришаком дегенерации клетки служит появление вакуолей в ядре. Из хроматина образуют ся маленькие округлые чрезвычайно плотные блоки. Эти изменения представляют соСо!

пикноз ядра. Увеличение многоядерных форм плазмоцитов может свидетельствовать, возможно, о росте амитотического способа деления ядер, часто наблюдающегося, в частности, при введении циклофосфана (известно, что препарат обладает способностью блокировать прохождение митотического цикла клетками пролнферативного пула) (Козинец Г.И., Котельников В.М., Бергер И.И., 1986; Нап в. е( а!., 1995). Характер изменений, связанных с появлением пламенеющих форм плазмоцитов, связывается рядом авторов (Серов В В., 1981) с накапливанием в цитоплазме клеток мукопротеинов по мере се дифференцнровки. т.е. можно предположить, что данные клетки являются последней стадией (енеза плазматических клеток.

Таким образом, нами выявлен факт возможного влияния препарата алкилпруютпего типа действия циклофосфана как на содержание плазматических клеток в кроветворных и лимфоидных органах, так и иа их морфо-функциональные свойства.

ВЫВОДЫ:

1. Однократное введение циклофосфана в МПД приводит к увеличению количественных показателей плазматических клеток в кроветворной и пимфоилиой ткани (тимус, селезенка), которое в период депрессии общей клеточности кариоцитов носит относительный характер, а к окончанию эксперимента - абсолютный и осуществляется, в основном, за счет плазмоцитов. В лимфатических узлах характер изменений содержит» клеток плазмо-цитарного ряда отличается выраженным и продолжительным падением как относительных, так и.абсолютных величин.

2.Иммунизация иитактных животных вызывает выраженную плазмоцнтарную реакцию как способных к пролиферации, так и зрелых клеточных форм в течение первых десяти сут исследования во всех изучаемых органах, кроме лимфатических узлов, в которых динамика количественных параметров плазматических клеток имеет противоположный характер.

3. Введение тнмусзависимого антигена на фойе цитостатической болезни способствует более раннему (по сравнению с одним цитостатнком) восстановлению абсолютных значений клеток платмоцитарного ряда в центральных (с противоположной по отношению друг к другу динамикой показателей через две н три недели эксперимента) и более значительному нх палению п периферических лимфоидных органах.

Л. Выраженность и характер ишенений морфологии шшчошшш (щменение усредненных пока ытеж-Н диаметра клетки, ядра и ядерно-нишплатматичечкош отношения, а также интенсивность вакуолизации, увеличение количества мноюялернмг к мтам'-неюннк

форм клеток) не зависит от действующего агента и в большей степени проявляются в клетках костного мозга и селезенки.

5. Иммунизация мышей через 3 суг после однократного введения цнклофосфана в МИД приводит к бо^ее глубокой и длительной депрессии количественных показателей В-лнмфоцитов в селезенке, чем при действии одного цитостатического препарата и введении антигена иитактным животным.

6. Стимуляция Т-зависнмым антигеном роста АОК наблюдается в селезенке интакт-ных мышей в течение всего периода исследования, у мышей с цптостатической болезнью (имеющих минимальные показатели на 3-й сут опыта) - на протяжение 10-ти сут. Сочетан-ное воздействие цнклофосфана н иммунизации не сопровождается падением количества АОК в костном мозге, наблюдаемом при их изолированном действии в срок с 1-х по 10-е сут эксперимента.

7. Однократное внутрнбрюшиниое введение циклофосфана в МИД вызывает угнетение активности ключеных ферментов плазматических клеток костного мозга и селезенки в первую неделю исследования, сопровождающееся падением их функциональной активности и снижением у¡ювин титра специфических гемагтлютининов в сыворотке крови на протяжение всею периода исследования.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Влияние циклофосфана на неточность кроветворных и лнмфоидных органов и условиях антигенной стимуляции // Труды молодых ученых института фармакологии ТНЦ РАМН. - Томск, 1995. - С. 18 - 20.

2. Динамика В-лнмфоцигов селезенки при иммунизации на фоне цптостатической болезни /¿Труды молодых ученых института фармакологии ТНЦ РАМН. - Томск, 1995. - С. 20 - 22.

3. Харак1еристика некоторых иммунологических показателей у мышей после иммунизации на (¡юне действия цнклофосфана // Актуальные проблемы фармакологии и поиска новых лекарственных средств. - Томск, 1995. - Т. 9. - С. 92 - 93.

4. Влияние циклофосфана на содержание плазматических клеток в кроветворных и лнмф/оидных органах в эксперименте // Актуальные проблемы фармакологии и поиска новых лекарственных средств. - Томск, 1995. - Т. 9. - С. 93 - 95 (соавтор; И.Л. Зеленская).

5 Влияние циклос))осфана на морфологические признаки плазмагических клеток мышей // Проблемы экспериментальной и клинической медицины. - Томск: Изд-во Чомекою университета, 1996. - Вып. 1. - С. 5 - 7.

6 !'• 'гры плазматических клеток в кроветворных и лимфоидних органах у мышей