Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Неспецифические реакции тканевых базофилов

РГ6 од

На правах рукописи

КРАСНОЖЕНОВ Евгений Павлович НЕСПЕЦИФИЧЕСКИЕ РЕАКЦИИ ТКАНЕВЫХ БАЗОФИЛОВ

14.00. 16.- "Патологическая физиология"

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Томск -1996

Работа выполнена в Сибирском Государственном медицинском университете и институте фармакологии ТНЦ СО РАМН

Научные консультанты:

академик РАМН Е.Д.Гольдберг член-корр. АН ВШ, профессор Ю.В.Федоров

Официальные оппоненты:

академик МАН ВШ, профессор В.В.Новицкий доктор медицинских наук В.И.Агафонов доктор медицинских наук Е.С.Смольянинов

Ведущая организация - Институт физиологии СО РАМН (г. Новосибирск)

Защита состоится "_"_г. в_; часов на заседании

диссертационного совета Д.084.28.02 Сибирского Государственного медицинского университета (634050 г. Томск, Московский тракт, 2).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Сибирского Государственного медицинского университета (г. Томск, пр. Ленина,. 107).

Автореферат разослан

Ученый секретарь диссертационного совета, профессор

Н.А.Бражникова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. В настоящее время роль тканевых базофилов • (ТБ, тучных клеток ) рассматривается как ключевая не только в аллергических реакциях, таких как ГНТ, но и в .широком аспекте яругах биологических реакций, включая воспаление, ГЗТ, отторжение трансплантата, противопаразитарный иммунитет, репара-тивные процессы, фиброз и др. Показано, что ТБ способны вырабатывать ряд цитокинов, влияющих на физиологические, иммунологические и патологические процессы (Dvorak H.F et al., 1974; Беклемишев Н.Д., 1986; Banovac К. et al., 1989; Laurence M. et al., 1992; Ponvert C. et al., 1993). Активация ТБ осуществляется как иммунологическими (специфические антигены, анти Jg Е и анти Jg G), так и неиммунологическими активаторами (Кон А, декстран, препарат 48/80, полимик-син В и др.). При этом тучные клетки способны высвобождать как ранее синтезированные, так и вновь синтезируемые медиаторы; вазоак-тивные, хемотаксические вещества, ферменты и протеогликаны ( Lemanske R.F. et al., 1985; Liauw L. et al., 1985).

Многообразие эффекторных функций ТБ позволяет рассматривать их как компонент поддержания иммунологического гомеостаза (Бережная Н.М. и др., 1986). Однако, реакции ТБ при инфекционных процессах посвящены лишь единичные работы, касающиеся, главным образом, изучения количественного содержания и морфологической характеристики тучных клеток и, в меньшей мере, функционального состояния (Дзись И.П., 1969). В литературе встречаются отдельное исследования, посвященные воздействию продуктов жизнедеятельности микроорганизмов на функциональную активность ТБ (Спивак С.М. и др. 1986; Nom S. et al., 1986; Wize J. et al., 1986; Телешев В.A. и др., 1987), однако, этих сведений недостаточно для оценки участия ТБ в противоинфекционной защите. Принимая во внимание способность тучных клеток непосредственно продуцировать вещества, обладающие широким спектром действия на различные функции организма (гистамин, гепарин, серотонин, простагландины и др.), исследование ТБ при инфекционном процессе представляет значительный интерес .

Проведенный анализ клинических данных обнаружил отрицательную корреляцию между развитием злокачественного процесса и аллергией (Бережная Н.М. и др., 1983). Экспериментальными исследованиями было показано наличие тучноклеточной реакции, развивающейся на ранних стадиях опухолевого процесса (Никольский U.C. и др., 1983). Способность ТБ оказывать цитотоксическое действие на опухолевые клетки в эксперименте позволила предположи!ь их участие в противоопухолевом иммунитете.

В то же время подавляющее большинство цитостатиков, применяющихся в терапии злокачественных опухолей, наряду с лечебными

свойствами, одновременно наделены гсматотоксичным и иммуноде-прессшшым эффектами, В результате этого, представляет интерес комплексное изучение морфофункционалъной характеристики ТБ в условиях цитостагической болезни (Гольдберг Е.Д. и др., 1989; Запус-калова О Б., 1989), что важно для развитая эффективной стратегии терапии опухолевых заболеваний.

Известно, что на отдаленных этапах химиотерапии цитостатиче-скими препаратами нарушения со стороны системы крови могут носить латентный характер и выявляться при дополнительных нагрузках на гемопоэтическую и лимфоидную ткань (Гольдберг Е.Д., Новицкий В.В., 1986), что особенно важно при инфекционном процессе. В связи с этим, большой интерес представляет изучение реакции ТБ на инфекционный процесс в отдаленные сроки после воздействия цитостати-ков.

Все вышеизложенное обусловливает целесообразность проведения настоящего исследования.

Цель исследования. Целью настоящей работы явилось выявление роли и механизмов участия тканевых базофилов' в- неспецифических защитных реакциях организма-.

Основные задачи» которые ставились в работе;

1. Изучить морфофункциональное состояние тканевых базофилов прн столбняке, листсриоэе и стафилококковой инфекции.

2. Определить характер реакции тканевых базофилов в процессе роста трансплантированных опухолей.

3. Изучить динамику изменений морфофункционального состояния тканевых базофилов после введения цитостатиков.

4. Исследовать реакцию тканевых базофилов при листериозе и стафилококковой инфекции на фоне цитостатической болезни, вызванной циклофосфаном.

5. Исследовать влияние активации тканевых базофилов на течение инфекционного и опухолевого процессов.

6. Выяснить роль тканевых базофилов в механизмах неспецифических защитных реакций организма.

Положения, пыиоснммс на защиту.

1. Тканевые базофилы способны к быстрой неспецифичсской реакции на раздражители различной природы - инфекцию, трансплантацию опухолевых клеток, введение цитостатических препаратов.

2. Направленность реакции ТБ зависит от прогностической характеристики патологического процесса: вторичная активация ТБ при инфекционном процессе, резкое угнетение при опухолевом росте и стабилизация морфофункшюнальных показателей при воздействии цитостатиков.

3. Активация ТБ с помошыо гетерогенных белков облегчает течение и исход инфекционного и опухолевого процессов.

4. Участие 'ГБ в противоинфекционной защите реализуется через медиаторы, осуществляющие их кооперацию с фагоцитами, либо с помощью собственных протеаз, выделяемых в процессе дегрануляции и экзоцитоза.

Научная новизна и практическая значимость работы.

До настоящего времени для оценки реакции ТБ исследователи опирались на следующие признаки: изменений количественного состава и характера гистотопографии тучных клеток, цитохимические изменения, являющиеся показателем интенсивности и качества биосинтеза, степень выраженности дегрануляции, являющейся показателем максимума секреторной активности. Однако, имеется мало, работ, где бы учитывались все показатели. Еще меньше исследований, сопоставляющих указанные признаки с общими и местными реакциями организма при патологических процессах.

Впервые с патофизиологических позиций, используя комплекс морфофункциональных методов, проведен динамический анализ изменений реакции ТБ при инфекционном и опухолевом процессах и цитостатической болезни. При этом' новым является определение функциональной значимости ТБ в защитно-приспособительных реакциях. Впервые в эксперименте охарактеризованы выраженность и длительность аллергических реакций немедленного типа при цитостатической болезни. Новым является изучение вопроса взаимосвязи между неспецифической сенсибилизацией ТБ и резистентностью организма к возбудителям инфекционных заболеваний.

Клеточная система : " тканевой базофил - нейтрофил - эози-нофил" рассматривается в настоящее время, как часть иммунного механизма, выработанного для защиты от инвазий, в первую очередь, гельминтами. Проведенные исследования показали, что роль ТБ не может ограничиваться противопаразитарным эффектом, а распространяется на противомикробную и противоопухолевую защиту . Возникает необходимость в поисках препаратов, обладающих модулирующим действием на клетки и медиаторы, вовлекаемые в реакции ГНТ, с целью использования их как метод адъю-вантной терапии инфекционных и опухолевых заболеваний. Их применение особенно важно при вялом, затяжном течении инфекционного процесса, резком продолжительном угнетении показателей неспецифической резистентности, опасности развития вторичной инфекции, а также при применении с лечебной целью препаратов, обладающих иммунодепрессивными свойствами (антибиотики, гормональные препараты ).

Апробация работы. Результаты диссертации обсуждены на научных конференциях " Биологические препараты и иммунологическая реактивность организма" (Томск, 1971, 1973, 1974, 1985, 1988), на Всероссийских симпозиумах " Факторы естественного иммунитета при

различных физиологических и патологических состояниях" (Челябинск. 1974, 1976), на конференции иммунологов и аллергологов (Фрунзе, 1980), на конференциях Института Фармакологии ТНЦ СО РАМН "Актуальные проблемы фармакологии и поиска новых лекарственных препаратов" (Томск, 1990. 1993), на заседании Томского отделения Российского научного Общества патофизиологов (Томск, 1995), на юбилейной научно-практической конференции медико-биологического факультета СГМУ (Томск, 1995). Материалы диссертации опубликованы в 31 научной статье, 5 из них - в центральных медицинских журналах (ЖМЭИ, 1990, №2; 1996, №1,2; Патол. физиология и экспериментальная терапия, 1994, № 1; Антибиотики и химиотерапия, 1994, №8).

Объем и структура работы. Диссертация изложена на 256 страницах машинописного текста и состоит из введения, четырех глав, списка литературы. Работа проиллюстрирована 20 рисунками и 66 таблицами. Библиографический указатель включает 339 источников, из них - 166 отечественных и 153 иностранных.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Эксперименты проведены на 72 кроликах, 1828 беспородных мышах и 504 мышах линии ВАЛВ/с, полученных из питомника "Рассвет" НПО "Вирион" (г.Томск). Распределение животных по группам в зависимости от воздействий и сроков исследования представлено в табл. 1.

Для моделирования токсической инфекции мышам подкожно в корень, хвоста вводили ЕДм столбнячного токсина, полученного из НПО "Вирион", в объеме 0,2 мл. На 6 сут после введения токсина учитывали тяжесть клинической картины при столбняке и гибель мышей по дням (Крыжановский Г.Н., 1966). Листериоз воспроизводили путем введения суточной культуры Listeria monocytogenes, штамм 5 В+ (музей кафедры микробиологии СГМУ) в дозе: кроликам - 100 млн микробных тел внутривенно, мышам - 1,5 млн бактерий подкожно. Стафилококковую инфекцию вызывали подкожным заражением животных суточной культурой Staphylococcus aureus, штамм 209 Р в дозе: кроликам - 3 млрд микробных тел внутривенно, мышам - 1 млрд бактерий подкожно.

ЛД50 листерий и стафилококка и ЕД» для столбнячного токсина вычисляли по методу Рида и Менча (Ашмарнн И.П. и др., 1962).

Для оценки тяжести инфекционного процесса у подопытных животных измеряли массу тела, температуру, исследовали СОЭ, лейкоцитоз по общепринятым методикам. . *

Таблица 1

Распределение жив'отных по группам в записи мости от воздействия »сроков исс1!сл<)нания

Содержание эксперимента Сроки исследования Количество животных

Кролики Белые мыши (беспородные) Мыши линии ВАЛВ/с

1. Столбнячный токсин (ЕД 5о) Ежедневно в течении 6 сут - 30 -

2. ЛСА + столбнячный токсин (ЕД*,) 3,7, 14,21 сут - 120 -

3. Столбнячный токсин 1,6, 12, 24, 48 ч, 6 сут - 84 -

4. ЛСА + столбнячный токсин 1,6, 12, 24, 48 ч, 6 сут - 84 -

5. Гистамин + столбнячный токсин Однократно - 12 -

6. Гепарин + столбнячный токсин Однократно - 12 -

7. Серотонин+ столбнячный токсин Однократно - 12 -

8. ЛСА + блокада клеток РЭС + столбнячный токсин Однократно 12 -

9. ЛСА + димедрол + столбнячный токсин Однократно - 12 -

10. Сыворотка сенсибилизированных мышей + столбнячный токсин Однократно 12

Таблица 1 (продолжение)

Содержание эксперимента Сроки исследования Количество животных

Кролики Белые мыши (беспородные) Мыши линии ВАЛВ/с

11. Листерии (ЛД») Ежедневно в течении 14 сут - 30 -

12. ЛСА + листерии (ЛДм) 3,7, 14, 21 сут - 120 -

13. Листерии 1,3,7,14,21 сут 12 84 _

14. ЛСА + листерии 1,3, 7, 14,21 сут 12 84 -

15. ЛСА + блокада клеток РЭС + листерии 1,3, 7, 14,21 сут - 12 -

16. Стафилококк (ЛДзо) Ежедневно в течении 14 сут 30 -

17. ЛСА + стафилококк (ЛД») 3,7,14,21 сут - 120 -

18. Стафилококк 1,3,7, 14, 21 сут 12 84

19. ЛСА + стафилококк 1,3, 7, 14,21 сут 12 84 -

20. ЛСА + блокада клеток РЭС + стафилококк 1,3,7, 14,21 . сут 12 -

21.НЛС 3, 5, 7, 14,21 сут 12 84 -

22. ЛСА 3,5, 7,14, 21 сут 12 84 _

23. Саркома 180 3, 5,7, 14 сут _ 60 —

24. Асцигкарци-нома Эрлиха 3, 5, 7, 14 сут - 60 -

25. НЛС + саркома 180 3, 5,7, 14 сут - 60 -

2б.НЛС+асцит-кариинима Эрлиха 3, 5, 7, 14 сут - 60 —

Таблица 1 (продолжение)

Содержание эксперимента Сроки исследования Количество животных

Кролики Белые мыши (беспородные) Мыши линии ВАЛВ/с

27. Доксорубицин (МПД), однократно 2, 5,7, 10, 15, 21, 30 сут - - 96

28. Винбластин (МПД), однократно 2, 5,7, 10, 15, 21, 30 сут - - 96

29. Циклофосфан (МПД), однократно 2, 5, 7, 10, 15. 21, 30 сут - - 96

30. Доксорубицин 1/10 ЛДм х 10 1, 2, 3 мес - - 72

31. Винбластин 1/10 ЛДм х 10 1, 2, 3 мес - - 72

32. Циклофосфан 1/10 ЛД» х 10 1, 2, 3 мес - - ' 72

33. Циклофосфан (1 месяц) + листе-рии 1,3,7, 14,21 сут - 72 -

34. Циклофосфан (3 месяца) + ли-стерии 1,3,7, 14,21 сут - 72 -

35. Циклофосфан (1 месяц) + стафилококк 1,3, 7,14,21 сут - 72 -

36. Циклофосфан (3 месяца) + стафилококк 1,3, 7,14,21 сут - 72 -

37. Циклофосфан + ЛСА + стафилококк 1.3,7,14,21 сут - 72 -

Всего: 37 групп — 72 1828 504

В процессе инфекции исследовали также колонизационную резистентность эпителиальных клеток трахеи кроликов (Всршигора А.Е. и др., 1986) и барьерно-фиксирутощую функцию клеток и тканей организма бактериологическим методом.

Фагоцитарная активность лейкоцитов оценивалась путем определения поглотительной и nq> свариваю щей способности фагоцитирующих клеток. Для изучения кислороднезависимой бактсрииидности в лейкоцитах цитохимическим методом исследовали катионные белки (Шубич М.Г., ¡974). Кислородзависимую бактсрицилность определяли с помощью НСТ-теста (Гордиснко С.М.. 1983).

Логические свойства сыворотки крови в процессе инфекции и активации ТБ исследовали по отношению к бараньим эритроцитам, определяли татр нормальных гемолизинов, активность комплемента (Иммунологические методы исследований. Под ред. И.Лсфковитса. Б.Перниса, ¡988) и пропердина (Яковлев А.М. и др.. i960). Бактерицидную активность сыворотки (БАС) оценивали по отношению к Е. coli, М. lysodeicticus и Вас. subtilis (Бухарин О.В. и др.. 1974, 1977).

Для оценки течения листериоза у кроликов определяли титр специфических антител с помощью реакции непрямой гемагтлютинации (РИГА) и класс иммуноглобулинов по методу Манчини.

С целью выяснения роли ТБ в защитных реакциях при инфекционном процессе мышам вводили подкожно гистамин и ссротонин - 10 мг/кг, гепарин - 50 ед/кг, димедрол - 20 мг/кг (Гацура В.В., Саратаков A.C., 1977).

Для моделирования опухолевого роста разным группам мышей трансплантировали внутрибрюшинно асцитеарциному Эрлиха (5*106 опухолевых клеток) и подкожно в область правой половины спины саркому 180 в дозе 50 мг (Экспериментальная оценка противоопухолевых препаратов в СССР и США. П'од ред. Софьиной З.П., Сыркина А.Б., Гольдина А., Клейна А., 1980). Злокачественность процесса оценивали по продолжительное™ жизни, срокам гибели животных, массе опухоли на 14 сут от начала наблюдения. Из выделенной опухолевой ткани саркомы 180 готовили парафиновые срезы и окрашивали гематоксилин-эозином по Браше. На гистологических препаратах определяли процент некроза, число митозов на 1000 опухолевых клеток, клеточную инфильтрацию (количество гистиоцитов, лимфоцитов, плазматических клеток, соотношение г истиоцитов и лимфоцитов).

Моделирование цитостатической болезни проводилось согласно методике, разработанной в НИИ фармакологии ТНЦ СО РАМН (Запускалопа О.Б. и др., 1989). Использовались протавоопухолевые препараты: доксорубипин (адриамицнн "ФармИталия"), винблаепш ("Гедеон Рихтер"', Венгрия), циклофосфан (Минмедпром, Саранский завод мелпреггаратов, Россия). Препараты вводили однократно в МИД О'/ксорубицин - 2,0; винблаепш - 3,1; циклофосфан - 275 мг/кг)

и курсом - 1/10 ЛДы> ежедневно в течение 10 дней (7,0; 4,5 и 400 мг/кг соотаетстБСННо). Через 2, 5, 7, 10, 15, 21, 30 сут после однократного и спустя 1, 2, 3 мес после курсового введения препаратов производили забор материала для исследования.

С целью изучения морфофункционального состояния ТБ при инфекционном процессе, протекающем на фоне цитостатической болезни, мышей заражали листериями и золотистым стафилококком в указанных дозах через 1,3 мес после курсового применения циклофосфа-на.

Иследованию подвергались ТБ перитонеалыюй жидкости, брыжейки и кожи мышей. Перитонеальную жидкость отмывали раствором Хенкса. С помощью камеры Фукса-Розенталя под микроскопом.(х 400) и окраски 0,1% спиртовым раствором нейтральрота подсчитывали процентное содержание ТБ, а также индекс их активности (отношение количества дегранулированных базофилов к числу всех интактных). Для изучения мезентериальных базофилов из брыжейки мыши готовили пленочные препарата и окрашивали 0,1% спиртовым pacraopoij толуидинового синего. Используя светлопольную микроскопию (х 400), подсчитывали общее количество ТБ в 30 полях зрения, содержание молодых, зрелых и дегранулированных форм (Соловьев Ю.Н. и др., 1964) и вычисляли индексы активности (ИА) и созревания (ИС -отношение количества молодых клеток к числу зрелых форм). Из области правой стороны спины животного вырезали кусочек кожи и готовили парафиновые срезы, которые окрашивали толуидиновым синим. Под микроскопом (х 400) подсчитывали общее количество дер-мальных базофилов в 30 полях зрения с учетом дегранулированных форм и вычисляли ИА.

Для оценки метаболической активности ТБ исследовали дер-мальные базофилы, используя цитохимические методы. В клетаах определяли липиды (Шпак С.И. и др., 1981), активность пероксидазы и кислой фосфатазы (Шпак С.И. и др., 1978), основные белки (ЛопуноваЖ.К., 1972), биогенные амины (ЛуппаХ. ,1980). Оценку результатов цитохимических исследований проводили полуколичественным методом (Kaplow L., 1955).

Рецепторную активность ТБ изучали с помощью реакции розет-кообразования (Wallach D. et ah, 1976).

Секреторную активность ТБ исследовали с помощью реакции дегрануляции ТБ (Зеличенко Л.И. и др., 1968), на неспецифический активатор (Кон А, пирогенал) и антигенный стимул (лошадиный сывороточный альбумин, листерийный антиген, стафилококковый анатоксин). Учет реакции производили путем определения числового "показателя дегрануляции тучных клеток" - ПДТК (Радунская Р.Ф., 1982).

Для моделирования аллергических реакций у животных применялись нормальная лошадиная сыворотка (НЛС) и лошадиный сывороточный альбумин (ЛСА, НПО "Вирион"). НЛС вводили подкожно трехкратно, с интервалом 5 дней в лозе: кроликам 4 мл, мышам - 0,1 мл. ЛСА по такой же схеме инъецировали мышам в дозе 50 мг/кг. Степень сенсибилизации у мышей определяли с помощью внутрикожной аллергической пробы (Капеи 8. е( а1., 1986). Реактивные изменения нейтрофилов крови при сенсибилизации (лейкергии) у кроликов оценивали постановкой реакции аггломерации лейкоцитов (Сахаров П.Л. и др., 1971).

Все полученные данные обрабатывались математически методом вариационной статистики с вычислением средней арифметической X", средней ошибки средней арифметической "т" и среднего квад-ратического отклонения. Сравнение средних величин производилось с использованием критерия Стъюдента. Результаты течения столбнячной интоксикации на фоне активации ТБ оценивали с помощью критерия X.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Полифункциональность тканевых базофилов, оценка их роли в общей системе организма привлекает внимание многих исследователей (Беклемишев Н.Д., 1986; Banovac et al., 1989; Laurence M. et al., 1992; Ponvert et al., 1993). Несмотря на значительное количество литературы, посвященной поведению тучных клеток при различных видах патологии, малоизученными остаются вопросы, связанные с изучением участия ТБ в инфекционном и опухолевом процессах.

Вышесказанное предопределило появление настоящей работы, целыо которой явилось получение комплексной морфофункциональ-ной характеристики и изучение основных закономерностей тучнокле-точной реакции в патогенезе инфекционных заболеваний, опухолевого роста и цитостатической болезни, а также выяснение роли и механизмов участия ТБ в естественной резистентности организма.

Отдельные исследования, касающиеся изучения количественного содержания и морфологической характеристики ТБ при инфекционном процессе (Дзись И.П., 1969) и воздействия некоторых продуктов жизнедеятельности микроорганизмов на их функциональную активность (Спивак С.М. и др., 1986; Nom S. et al., 1986; Wize J. et al., 1986; Телешев B.A. и др., 1987) недостаточны для оценки участия ТБ в про-тивоинфекционной защите.

Нами проведено изучение морфпфункциопалмюго состояния ТБ при токсической (столбняк), септической (листериоз) и токсикосепти-

чсской (стафилококкоз) инфекциях, смоделированных на белых мышах.

Полученные результаты экспериментов показали, что при столбнячной интоксикации в организме животных происходило увЛпичение содержания дермальных, мезентериальных и перитонеальных базофи-лов на 20-40% с выраженной их дегрануляцией. Через 6 часов количество ТБ снижалось, но повышалась в 2-2,5 раза их секреторная активность. Эти явления продолжались до 48 часов и совпадали с максимальной гибелью животных. На 6 сутки вновь регистрировалось увеличение количества ТБ на 30-100% с высоким содержанием молодых незрелых форм и высокой секреторной активностью при раздражении их столбнячным анатоксином.

Для первых трех суток заболевания листериозом и стафилокок-козом было характерно увеличение дермальных (130-245%), мезентериальных (170%) и перитонеальных (150-200%) базофилов. В это время отмечалось повышение содержания дегранулированных клеточных форм. Перитонеальные базофилы интенсивно дегранулировали под воздействием стимуляторов Кон А, пирогенала и, особенно, при контакте со специфическим антигеном. Клинически это совпадало с максимальным подъемом температуры и появлением возбудителя в крови. На 7-14 сутки наблюдалось снижение количественных показателей ТБ, уменьшалась степень их дегрануляции, возрастало число молодых базофилов. Этот период характеризовался началом снижения температуры, выраженной бактериемией и наибольшей гибелью животных от инфекции. К 21 суткам вновь отмечалось повышение содержания ТБ в организме на 75-125%, увеличение содержания молодых незрелых клеток, что совпадало с нормализацией температурной реакции и исчезновением возбудителя в крови.

Анализ количественно-функциональных параметров ТБ выявил увеличение содержания и функциональной активности ТБ на начальных этапах инфекционного процесса (первые 3 суток при листерийной и стафилококковой инфекциях и в течение часа после введения столбнячного токсина), уменьшение количества и снижение их функции в разгаре заболевания (7-14 сутки при листериозе и стафилококкозе и 6 час при столбнячной интоксикации) и повторное повышение содержания и функциональной активности в период реконвалесценции (21 сутки при листериозе и стафилококковой инфекции и 6 сутки при столбняке).

Таким образом, в данной работе показано, что ТБ включаются в реакцию организма при действии на него, инфекционных агентов. Это проявляется в изменении их количественного содержания, морфологических признаков и секреторной активности. Реакция ТБ при инфекционных заболеваниях с различным этиопатогенезом однотипна. Вслед за воздействием инфекционного возбудителя для ТБ характерно

I 4

увеличение их содержания и интенсивная дегрануляция, связанная с цитотоксическим влиянием микробных белковых токсинов и ЛПС (Konig et а]., 1986; Siraganian et al., 1986). Наличие в соединительной ткани незрелых форм ТБ создает возможность увеличения их численности не только путем образования из предшественников, но и за счет деления молодых форм (Клименко H.A., 1992). Разгар болезни сопровождается снижением количества ТБ, в связи с их массовой деграну-ляцией, однако, это компенсируется генезом тучных клеток. В период реконвалесценции содержание в организме соединительнотканных ба-зофилов (в том числе и активных форм) возрастает и значительно превышает исходный уровень, что, по-видимому, связано со стимуляцией гемопоэза и гиперкомпснсаторным генезом ТБ (Дыгай A.M. и др., 1992).

Возможность участия' 'ГБ в противоопухолевой защите подтверждается их способностью оказывать цитотоксическое действие на опухолевые клетки в эксперименте (Бережная Н.М. и др., 1983; Никольский И.С. и др., 1983).

В наших исследованиях, начало опухолевого роста при асцит-карциноме Эрлиха у белых мышей сопровождалось повышением содержания ТБ в коже (140%) и брыжейке (250%) в течение первых трех суток после имплантации опухолевых клеток и снижением их количества на 7-14 сутки (до 60%). Этот период характеризовался увеличением объема асцита и наибольшей гибелью животных. Значительное количество дегранулированных клеток в начале опухолевого процесса указывает на повышение функциональной активности, а нарастание содержания молодых форм - на гиперкомпенсирующий генез ТБ. Зрелые клетки в этот период были переполнены ортохроматическими гранулами, что свидетельствует об усилении депонирования ими био-. генных аминов (гистамина и серотонина). К концу заболевания обнаруживалось снижение содержания дегранулированных клеточных форм, что указывает на угнетение функциональной активности ТБ. Повышение количества молодых незрелых клеток к 7 суткам на фоне снижения общего числа ТБ свидетельствует о проявлении истощающего компенсаторного генеза ТБ.

У животных с имплантированной саркомой 180, на 3 сутки увеличивалось co/iqm'anne 'ГБ в коже, брыжейке и псритонсальной жидкости в 2 раза по сравнению с исходными значениями с высокой степенью активности дермальпых базофилов. Среди мезентериальных ба-зофилов отмечалось значительное содержание молодых форм клеток. На 5 сутки количественные показатели ТБ возвращались к исходным значениям, функциональная активность дермалы'нлх базофилов оставалась достаточно высокой. Для 7 суток опухолевого роста были характерны шпкие показа к\-;п содержания ТБ п исследуемом материале и \ t негожи- их акшвносгн. На !4 супа: у отдельных животных наблю-

дался распад опухоли; в коже, брыжейке и перитонеальной жидкости определялось низкое содержание ТБ и резкое угнетение их активности. Возрастало количество молодых незрелых клеток.

Таким образом, можно утверждать, что ТБ вовлекаются в реакцию организма в ответ на опухолевый рост. Характер тучноклеточной реакции зависит от стадии злокачественного процесса. Начало развития опухоли сопровождается повышением количественного содержания ТБ в организме, что связано с их интенсивным генезом. В это время отмечается значительная дегрануляция и высокая секреторная активность ТБ. Дальнейшее прогрессирование опухолевого роста приводит к угнетению реакции ТБ, что выражается в уменьшении их количества и снижении функциональной активности. Некоторое повышение содержания молодых клеток в этот период на фоне снижения общего числа базофилов указывает на признак атональной мобилизации последних резервов ТБ. Интенсивность тучноклеточной реакции в той или иной ткани зависит от локализации опухоли. Для асцитной карциномы в большей степени характерна реакция со стороны мезен-териальных базофилов, для солидной саркомы более выражена реакция ТБ кожи.

В настоящее время в химиотерапии злокачественных заболеваний широкое применение нашли цитостатики. Изменения со стороны ТБ при цитостатических гемодепрессиях, вызванных их введением (Ьо^рпапп Я.-Р. е{ а!., 1979; Герашанович М.Л., 1982; Гсшьдберг Е.Д. и др., 1986, 1991;Во^11оО,е1а1., 1986; Костарева И.В., 1987; БреСЬ Р.А.1 & а1., 1988; Евтушенко О.М., 1993) практически неизучены.

В наших исследованиях однократное введение МПД мышам линии БАЛБ/с доксорубицина, винбластина и циклофосфана вызывало повышение содержания ТБ в коже и перитонеальной жидкости на 2-5 сутки после инъекции препаратов. Количество мезентериальных базофилов в это время снижалось, по-видимому, за счет интенсивной миграции активных форм клеток в перитонеальную жидкость в процессе их отмывания. Более выраженным эффектом обладал циклофосфан (повышение содержания ТБ в 2-6 раз). Возрастало содержание дегра-нулированных и молодых форм ТБ. При этом наибольшее дегранули-рующее действие на дермальные и мезентериальные базофилы наблюдалось со стороны доксорубицина. Перитонеальные базофилы были более чувствительны к винбластину и циклофосфану. Цитохимические методы исследования позволили выявить возрастание содержания гликогена и липидов в дермальных базофилах при воздействии вин-бласпгна, что указывает на напряженность биосинтетических процессов в ТБ. Увеличение количества основных белков в это время свидетельствует об активации протеолитических ферментов в дермальных базофилах. Данные явления сопровождались также накоплением биогенных аминов в ТБ, имеющих важное патофизиологическое значение.

Повышение активности пероксидазы в дермальных базофилах на 2 и 5 сутки после введения винбластина свидстсл1.ствует о перестройке энергетического фона ТБ с преобладанием окислительных процессов, а возрастание в эти сроки содержания кислой фосфатазы указывает на активацию лизосом базофилов. В этот период под влиянием цитоста-тиков усиливалась также секреторная активность ТБ, что выражалось в интенсивной реакции дегрануляции перитонеальных базофилов при контакте их с неспецифическим стимулятором Кон Д. Данным эффектом в наибольшей степени обладал винбластин.

Начиная с 10 и по 30 сутки после применения цитостатиков. наблюдалась нормализация количественных показателей ТБ. Все описанные изменения цитохимической характеристики дермальных базофилов стихали, показатели метаболизма приближались к исходному уровню. Снижение в это время секреторной активности может быть связано с возрастанием числа молодых малоактивных клеток в результате компенсаторного генеза ТБ.

В отдаленные сроки после курсового применения цитостатиче-ских препаратов отмечалось некоторое снижение числа мезентериаль-ных и перитонеальных базофилов в течение 3 месяцев после их введения. Содержание ТБ в коже существенно не менялось. Преобладали дегранулированные формы ТБ. Метаболическая напряженность и секреторная активность перитонеальных базофилов сохранялась на высоком уровне в течение 3 месяцев. ТБ находились в режиме постоянной секреции гранул, о чем свидетельствовал их повышенный индекс активности.

При моделировании аллергических реакций в организме мышей с помощью ЛСА было обнаружено, что введение в организм цитостатиков влияет на процесс сенсибилизации. Это обнаруживается аллер-гологическими методами диагностики ин витро (реакции розеткооб-разования и специфической дегрануляции) и ин вино (внутрикожная проба). Указанное влияние имеет фазный характер: первая фаза (до 5 суток после введения препарата) характеризуется угнетением аллергических реакций; вторая фаза (7-15 суток) - показатели сенсибилизации в опыте не отличаются ог контрольных значений; третья фаза (21-30 суток) - степень сенсибилизации в опыте превышает таковую в контроле, что можно объяснить выбросом из ТБ в кровь значительного количества БЛП (гистамина, серотонина и др.).

Сенсибилизация животных в отдаленные сроки после курсового применения цитостатичсских препаратов также выявила повышение рецепториой и секреторной активности 'ГБ. Спустя 1-3 месяца после введения доксорубиннпа. винбластина и диклофосфана были получены высокие результаты виутрикожных аллергических тестов.

Таким образом, вве.ч-.'пие в организм цитостатичсских препаратов примиит к увеличению содержания ТЬ в тканях, изменению их

стспсни зрелости и активности, повышению метаболической, секреторной и функциональной напряженности. В отдаленные сроки после воздействия цитостатиков морфологические изменения ТБ менее выражены. секреторная и функциональная активность остается достаточно высокой. Повышение репепторной и секреторной активности, а также положительные результаты аллергических тестов в отдаленные сроки после применения цитостатиков указывают на формирование в организме при цитостатической болезни предрасположенности к аллергическим реакциям.

Активацию реакции ТБ при воздействии цитостатиков можно объяснить прямым цитостатическим влиянием противоопухолевых препаратов на тучные клетки. Выделяемые в результате дегрануляции базофилов БАВ попадают в кровоток и стимулируют гемопоэз клеток-, предшественников (Bartoli Klugraan F. et al., 1987; Nawa J. et al., 1987). He исключена, в этом случае, связь активации тучноклеточной реакции с лейкопенией и влиянием медиаторов клеток белой крови (колониестимулирующий фактор, интерлейкин-1) на гемопоэзиндуци-руюшее микроокружение (Grundmann Е. et al., 1983; Xu С.К. et al., 1987; Дыгай A.M. и др., 1992). Увеличение экспрессии рецепторов ТБ под влиянием цитостатических препаратов может быть опосредовано демаскировкой с крытых рецепторов мембран, либо подключением резервного пула рецепторов.

Повышение функциональной активности ТБ и формирование предрасположенности организма к аллергическим реакциям при применении цитостатиков нельзя оценивать однозначно. Возникновение аллергических расстройств в этом случае является крайне нежелательным. Вместе с тем, отрицательная корреляция между аллергией и частотой опухолевых заболеваний, наблюдаемая в клинической практике (Скполс Т.А. и др., 1974; Moussa М.А. et al., 1985; Vena John E. et al., 1985) и участие факторов аллергии (имммуноглобулин'Е, гистамин, лймфокины) в механизме противоопухолевого иммунитета (Бережная Н.М. и др., 1982) побуждают по иному взглянуть на это явление.

Отдаленные последствия некоторых противоопухолевых препаратов выражаются в формировании цитостатической болезни (Гольдберг Е.Д. и др., 1986, 1989; Запускалова О.Б., 1989), для которой характерно снижение резерва клеточных и гуморальных факторов иммунитета, а также повышение восприимчивости к инфекции. (Гершанович М.Л., 1982).

Хараетгризуя Особенности морфофункционального статуса ТБ у белых мышей при листериозе и стафилококковой инфекции в отдаленные сроки после введения циклофосфана, следует указать, что оо-щая направленность изменений тучноклеточной реакции не отличалась от таковой при инфекционном процессе, протекающем без участия цитостатиков. Однако, наблюдалась большая выраженность

изменений количественного содержания и секреторной активности в начале и разгаре болезни. Значительное увеличение количества и повышение функциональной активности ТБ в течение первых трех суток сменялось глубоким и длительным угнетением изучаемых показателей в разгаре болезни. Данный этап заболевания характеризовался подавлением фагоцитарной реакции и сопровождался значительной гибелью мышей. Оставшиеся в живых животные восстанавливали исходный уровень параметров ТБ к 21 суткам. Такая картина реакции ТБ и течение заболевания при листериозе и стафилококковой инфекции была характерна при моделировании заболеваний как через один, так и спустя три месяца после применения циклофосфана. Стадия вторичной активации ТБ, характерная для периода реконвалесценции при инфекционном заболевании отсутствовала (листериоз), либо была ма-ловыражена (стафилококковая инфекция).

Наблюдаемое в разгар инфекционного процесса, протекающего на фоне воздействия цитостатика, угнетение тучноклсточной реакции может быть обусловлено резким снижением костномозговой продукции клеточного предшественника ТБ. Интенсивная дегрануляция ТБ при этом недостаточно компенсируется генезом, что подтверждается снижением количества молодых незрелых форм клеток. Увеличение количественного содержания ТБ в стадии реконвалесценции, видимо, связано с их гиперкомпенсаторным генезом (Рудзит Е.К., 1969). Снижение фагоцитарной активности нейтрофилов в разгаре инфекционного процесса зависит как от прямого угнетающего действия циклофосфана ка функцию полиморфноядерных лейкоцитов (Пахомова E.H. и др., 1991), так и нарушения регулирующего взаимодействия их с ТБ.

Многочисленные литературные данные указывают на изменение устойчивости сенсибилизированного организма к различным повреждающим факторам. Известно, что основным механизмом реакций ГНТ является активация ТБ. Из этого следует необходимость в изучении реакций преактивированных ТБ на инфекционный процесс и опухолевый рост.

В наших исследованиях для моделирования состояния сенсибилизации помимо НДС был применен лошадиный сывороточный альбумин, т.к., наличие' нормальных антител в лошадиной сыворотке'-(Трутнев Б.Д. и др., 1969) затрудняет ее использование для изучения влияния неспецифической сенсибилизации на инфекционный процесс.

Способность ЛСА активировать ТБ и, таким образом, сенсибилизировать организм была нами подтверждена в отдельных экспериментах на белых мышах. Количественные и функциональны^ изменения ТБ у животных, сенсибилизированных ЛСА, были менее выражены, чем у мышей, получивших НЛС, но тем не менее отражали степень аллергизации. Так как, процесс сенсибилизации, помимо активации

основных клеток-мишеней - ГБ, затрагивает и другие эффекторные клетки, образующие клеточну о кооперацию с ТБ, было выявлено, что параентсральное введение ЛСД и HJIC вызывает также активацию нейтрофилов. Указанный эффект был наиболее выражен на 14 сутки после введения препаратов.

При исследовании тучноклеточной реакции при столбнячной интоксикации у мышей были обнаружены более значительные количественные изменения и высокая функциональная активность ТБ в условиях их предварительной стимуляции с помощью ЛСЛ. Эти явления сопровождались более легким течением заболевания и меньшей гибелью животных.

Для преактавированных ТБ были характерны более интенсивные и продолжительные изменения количественной характеристики и секреторной активности при листериозе. Предварительная стимуляция ТБ с помошью НЛС облегчала течение листерийной инфекции у кроликов. Более ранняя температурная реакция и Появление антител в крови, менее выраженные лейкоцитоз и СОЭ, низкая обсемененность возбудителем органов были характерны для сенсибилизированных животных.

Можно отметить значительное возрастание содержания преак-тивированных ТБ и высокий уровень их секреции при стафилококковой инфекции, что было характерно и для периода разгара заболевания. Предварительная активация ТБ оказывала благоприятное влияние на течение стафилококкоза у животных, что выражалось в менее интенсивных температурной и лейкоцитарной реакциях, невысоких значения СОЭ, низких показателей микробной колонизации эпителиальных клеток и высепаемости возбудителя из органов, высокой ЛДзо.

Таким образом, нами было выявлено, что активация ТБ способствует более интенсивной и продолжительной тучноклеточной реакции на воздействие возбудителя и облегчает течение инфекционного процесса.

Стимуляция ТБ, предшествующа» имплантации экспериментальных опухолей (асциткарциномы Эрлиха и саркомы 180) белым мышам, способствовала повышению противоопухолевой защиты, о чем свидетельствовало увеличение продолжительности жизни животных, меньшие размеры опухоли, увеличение клеточной инфильтрации и площади некроза в ней, уменьшение митотической активности опухолевых клеток. В этих же условиях в солидной саркоме 180 усиливалась стромальная реакция, что проявлялось возрастанием числа гистиоцитов, лимфоцитов, плазматических клеток, а также уменьшением соотношения гистиоцитов и лимфоцитов в опухолевой тклии.

Преактипацпя ТК сопровождалась снижением сгрсссорггого действия растущей опухоли на организм. Показатели клеточного состава периферической крови у животных на фоне препктивапни ТБ иыяпля-

ют развитие у них адаптационной реакции но типу спокойной адаптации (Гаркави J1.X. и др., 1977).

Представленные данные указывают на вовлечение в противоопухолевую защиту ТБ - важного компонента ГНТ. Участие ТБ в противоопухолевой защите может бьп'и связано с прямым повреждающим действием тучных клеток на опухоль. При этом естественная киллер-ная функция ТБ опосредуется действием на опухолевые клетки их высокоактивных медиаторов: протеаз, катехоламинов, гистамина, серо-тонина (Burtin С., 1986; Никольский И.С. и др., 1988). Другой пуп. предполагает взаимодействие ТБ с другими клеточными элементами и прежде всего с нейтрофильными гранулоцитами. Нейтрофилы, наряду с базофилами являются клетками-эффекторами, участвующими в аллергических реакциях немедленного тина, которые антагонистичны по отношению к онкогенезу. Следовательно, нейтрофилы, участвуя в реализации эффекта ГНТ, могут влиять на злокачественный рост через модуляцию интенсивности хемотаксиса эозинофилов, либо через ка-таонные белки, меняя выделение базофилами гистамина и фактора аг-грегации тромбоцитов (Лаврова B.C. и др., 1992).

Результаты благоприятного влияния преактивации ТБ на течение инфекционного процесса требуют выяснения их роли в механизмах защитных явлений при инфекционных заболеваниях.

Для решения этого вопроса необходимо было провести исследование показателей естественной ргезистентности организма в условиях активации ТБ. Первая защитная реакция организма на внедрение микробного возбудителя осуществляется с помощью фагоцитоза и неспецифических гуморальных факторов (комплемента, пропердина, ли-зоцима, бета-лизинов). Эти факторы определяют резистентность неиммунного организма ко многим патогенным бактериям.

Фагоцитоз является главным механизмом естественной резистентности на первый этапах инфекционного процесса. Ведущую бактерицидную роль в фагоцитарной реакции играют нейтрофильные гранулоциты. Оценка функциональной активности нейтрофилов осуществляется, чаще всего, по их способности поглощать и переваривать микробы. *

В наших исследованиях активация ТБ у кроликов с помощью. НЛС сопровождалась повышением поглотительной способности фа-' гоцитов почти в 2 раза по сравнению с контролем, что зависело, прежде всего, от увеличения числа фагоцитирующих клеток. Фагоцитарное число менялось незначительно. Усиление переваривающей способности фагоцитов р процессе сенсибилизации ТБ связано с активацией в ПЯЛ лизосомальных ферментов (щелочная и кислая фосфатазы, ка-таонные белки), так и с интенсификацией окислительных процессов (пероксидаза, НСТ-тест), что отражает высокую степень кисиородэа-

виснмон и кислороднезависимой бактерицидное™ фагоцитирующих клеток.

Активация ТБ сопровождалась также повышением бактерицидных и литических свойств сыворотки крови (БАС, лизоцима, бета - лй-зинов, нормальных гемолизинов, комплемента, пропердина). Пик активности зтпх показателей приходился на 7 - 14 сут и совпадал с максимальными изменениями ТБ в процессе сенсбилизации.

Можно было предположить, что благоприятное течение листе-рийной инфекции на фоне предварительной активации ТБ связано с тем. что гетерогенный белок, действуя через систему циклических нуклеотидов. индуцирует выработку ТБ медиаторов воспаления, обладающих активирующим эффектом для нейтрофилов (Бойченко М.Р. и др., 1983; Падегимас Б.Д. и др., 1983). Активированный нейтрофк.; при этом приобретает способность интенсивно фагоцитировать возбудителя.

Результаты проведенных нами исследований показали, что в процессе сенсибилизации организма чужеродными сывороточными препаратами увеличивалось содержание клеток - мишеней ГНТ - соединительнотканных базофилов в коже, брыжейке и перитонеальной жидкости, повышалась их метаболическая напряженность (в частности, накопление биогенных аминов) и секреторная активность. Вместе с тем, возрастало содержание нейтрофильньгх гранулоцитов в крови, выступающих в роли клеток- эффекторов ГНТ. Нейтрофилы приобретали способность реагировать на аллерген (в реакции агтло-мерации лейкоцитов) и интенсивно фагоцитировать тест-культуру микроба. Бактериальные ЛПС (пирогенал, листерийный антиген) вызывали значительную дегрануляцию перитонеальных базофилов, более выраженную у сенсибилизированных животных.

Повышение количественного содержания и функциональной активности ТБ при листериозе сопровождалось интенсификацией фагоцитарной реакции нейтрофилов по отношению к листсриям. Это по-тверждалось как поглотительной, так и переваривающей способности фагоцитов. Введение антигистаминного препарата - димедрола, а также блокада клеток РЭС с помощью трипан - блау снижали защитный эффект, связанный с преактивацией ТБ.

Таким образом, благоприятное влияние активации ТБ на течение листерийной инфекции связано с повышенной секрецией медиаторов, оказывающих стимулирующий эффект на фагоцитарный механизм иммунитета.

Доброкачественное течение столбнячной интоксикации в условиях предварительной активации ТБ явилось основанием для проведения исследований, пскрывающих механизм этого явления. Можно было предположить, что под влиянием бактериального экзотоксина происходит выход из активированных 'ГЬ значительною количества

биогенных аминов, оказывающих стимулирующее влияние на пино-цитоз токсина.

Действительно, результаты экспериментов показали, что реакция активированных ТБ на введение С'Р отличалась выраженным синтезом биогенных аминов и повышенной секреторной функцией тучных клеток. Однако, предварительное введение интакгным животным таких медиаторов ТБ как гистамин, гепарин и серотонин, не оказывало влияния на тяжесть столбнячной интоксикации. Введение сенсибилизированным мышам димедрола, а также блокада фагоцитов не снимали благоприятного влияния преактивации ТБ на течение столбняка.

Таким образом, предположительный механизм защитного эффекта активации ТБ при столбняке "ТБ - гистамин - пиноцитоз экзотоксина" в наших исследованиях не подтвердился. Фагоцитарный механизм иммунитета в изучаемом явлении существенной роли не играет.

В то же время нами были получены положительные результаты опытов по пассивному переносу защитного эффекта с помощью сыворотки сенсибилизированных животных, который был наиболее выражен при инъекции ее за 1 час до введения токсина. Это послужило к поиску гуморальных факторов, связанных с защитной ролью ТБ при токсических инфекциях. Принимая во внимание результаты исследований, указывающих на повышение в процессе активации ТБ литиче-ских свойств сыроротки крови по отношению к чужеродным эритроцитам (нормальные гемолизины, комплементарная активность, про-пердин), микрококку (лизоцим), сенной и кишечной палочкам (бета-литическая и бактерицидная активность), можно предположить, что введенный в организм сенсибилизированных животных СТ подвергается интенсивному протеолизу тучноклеточного происхождения.

Было обнаружено повышенное содержание катионных белков в дермальных базофилах при столбняке в группе мышей с преактивиро-ванными ТБ, указывающих на активность протеолитических фермен-. тов. Результаты опыта по прямому влиянию сыворотки сенсибилизированных животных на СТ показали ее способность ингибировать вирулентность бактериального яда.

Таким образом, защитный эффект активированных ТБ , при столбняке связан с экзоцитозом протеаз и интенсивным протеолизом СТ, доказательством чего служат повышенная концентрация внутриклеточных катионных белков и выраженная дегрануляция тучных клеток на СТ. . •

Полученные результаты исследований указывают на участие ТБ в механизмах противоинфекционной защиты, которое может быть реализовано через медиаторы, осуществляющие их кооперацию с клетками- фагоцитами (септические инфекции), либо с помощью собственных протеолитических ферментов, выделяемых в процессе дегра-

Сетическис инфекции j

i

зоб -^озбудитель_ J

Токсикоинфекции

Ба1стериальный экзотоксин

Деграт'ляция тканевых базофилов

Ч (

Выброс БАБ

ч

Экзоцитоз протеаэ

Сти муляцияф агоцитоза

Протеолиз токсина

Рис. 1. Схема участия тканевых базофилов в механизмах противоинфекцнонной защиты организма

нуляции и экзоцитоза и разрушающих микробные экзотоксины (токсикоинфекции; рис.1). В свою очередь полиморфноядерные лейкоциты могут одновременно оказывать стимулирующий эффект на ТБ, выделяя биологически активные вещества - цитокины, катионные белки, свободные радикалы (Дыгай A.M. и др., 1992). В данных исследованиях было показано, что истощение ТБ и блокада клеток ЮС отягощали течение инфекционного процесса и увеличивали гибель животных.

Безусловно, существуют и другие механизмы благоприятного влияния неспецифической сенсибилизации на противоинфекционную защиту, однако, описанный путь, связанный с активацией ТБ, наиболее обоснован и реальность его не вызывает сомнения.

Приведенные данные свидетельствуют об участии клеточной системы "тканевой базофил" в обеспечении естественной защиты организма от инфекционных агентов и вовлечении ее в противоопухолевый иммунитет. Эти клетки образуют первый барьер в организме при появлении патогенных факторов и способны к быстрой неспецифической реакции на раздражитель.

На рисунках 2 и 3 изображены изменения содержания дермальных базофилов и их функциональной активности при различных патологических состояниях организма. Обращает на себя внимание способность ТБ реагировать увеличением количественного содержания и повыше нисм функциональной способности в течение первых трех суток после

Сроки исследования, сут

-Стафилококковая инфекция

......Саркома 180 •

----Циклофосфан __

Рис. 2. Динамика изменений содержания тканевых базофилов в коже мышей при различных воздействиях

повреждающих воздействий разной природы: заражения микробом -возбудителем, трасплантации опухолевых клеток, введения цнтоста-тическсйГо препарата. На 7- 10 сут, как правило, данные показатели во всех случаях снижаются до исходного уровня, либо достигают более низких значений. В дальнейшем, реакция ТБ принимает различную направленность, в зависимости от прогностических моментов: вторичная активация ТБ при инфекционном процессе, резкое угнетение', при опухолевом росте и стабилизация морфофункционаяьных показателей при воздействии цитостатиков.

Защитный эффект ТБ может быть усилен препаратами, активирующими эти клетки. Сенсбилизация ТБ и нейтрофилов составляет патогенетическую основу повышенной чувствительности, которая рассматривается, в настоящее время, как биологически целесообразный процесс, направленный на выявление поступления антигена во внутреннюю среду и на ограничение его действия (Гущин И.С., 1979).

- Сроки исследования, сут

—-Стафилококковая инфекция

......Саркома 180

----Циклофосфан_

Рис. 3. Динамика изменений функциональной активности дерМальных базофилов (ИА) у мышей при различных воздействиях

Хотя нельзя при этом полностью исключить возможность повышения активности других клеток (макрофагов, лимфоцитов, эозинофилов), участвующих в поддержании иммунологического гомеостаэа, можно с уверенностью утверждать о важном удельном весе клеточной кооперации "тканевой базофил - нейтрофил" в защитных процессах организма (рис. 4).

Результаты представленной работы открывают новые перспективы целенаправленного воздействия на патологические процессы путем влияния на функциональное состояние ТБ.

| -Цитотоксическое I I действие |

Рис.4 . Схема патогенетических взаимодействий клеточной кооперации "тканевой базофил - нейтрофил"

ВЫВОДЫ

1.Тканевые базофилы включаются в реакцию организма при действии на него раздражителей различной природы (инфекция, трансплантация опухолевых клеток, введение нитостатиков). Реакция ТБ нсспеиифична и проявляется в виде увеличения их количественного содержания, изменения морфологических признаков, повышения метаболической, рецепторной и секреторной активности клеток.

2.Реакция ТБ имеет общую направленность при токсических (столбняк), септических (листериоз) и токсикосептических (стафилококков) инфекциях и зависит от стадии болезни. Начало заболевания характеризуется первичной активацией ТБ, разгар болезни - угнетением их функций, стадия реконвалесценции - вторичной активацией и стабилизацией морфофункционального состояния ТБ.

3.Реакция дегрануляции, отражающая секреторную активность ТБ, при инфекционном процессе более выражена при контакте клеток со специфическим антигеном (лиртерийный антиген, стафилококковый анатоксин), нежели при использовании неспецифических стимуляторов (Кон Л, пирогенал).

4.Инфекционный процесс, протекающий на фоне цитостати-ческой болезни, характеризуется глубоким и длительным угнетением морфофункционального статуса ТБ и факторов естественного иммунитета в период разгара заболевания.

5.Преактивация ТБ с помощью белковых препаратов облегчает течение и исход инфекционного процесса. Участие ТБ в механизмах противоинфекционной защиты при септических инфекциях реализуется через медиаторы, осуществляющие их кооперацию с нейтрофиль-ными гранулоцитами и стимулирующие фагоцитоз возбудителя. Защитный эффект ТБ при токсических инфекциях связан с экзоцитозом литических ферментов (протеаз) в процессе дегрануляции и интенсивным протеолизом бактериального экзотоксина.

6.Рост перевивных опухолей (асшпкарциномы Эр лиха, саркомы 180) сопровождается увеличением содержания ТБ в организме животных, повышением их секреторной и функциональной активности в начальной стадии и угнетением реакции ТБ при прогрессировании опухолевого процесса. Характер и интенсивность реакции ТБ в той или иной ткани при опухолевом процессе зависят от локализации патологического очага.

7.Активация ТБ, предшествующая трансплантации опухолевых клеток повышает противоопухолевую резистентность, о чем свидетельствует увеличение продолжительности жизни экспериментальных животных, значительно меньшие размеры опухоли, увеличение в ней площади некроза, уменьшение митотической активности злокачественных клеток.

в.Преакгивация ТБ приводит к увеличению стромальпой реакции в солидной опухоли, что проявляется возрастанием числа гистиоцитов, лимфоцитов и плазматических клеток, уменьшением соотношения гистиоцитов и лимфоцитов в опухолевой ткани, а также снижает стрессорное воздействие растущей опухоли на организм.

9.Введение в организм противоопухолевых препаратов с различным механизмом действия (доксорубицина, винбластина и циклофос-фана) приводит к увеличению содержания ТБ, изменению их морфологической характеристики и функциональной активности в первые 25 сут после однократного их применения. Более выраженную клеточную реакцию вызывает доксорубицин.

10.В отдаленные сроки после курсового применения цитостати-ческих препаратов морфологический изменения ТБ менее выражены, функциональная активность остается высокой в течение всего срока наблюдения ( до 3-х мес). Повышенная функциональная активность ТБ, а также положительные результаты аллергологических тестов свидетельствуют о формировании в организме предрасположенности к аллергическим проявлениям в процессе цитостатической болезни.

11 Тканевые базофилы являются важным фактором естественной резистентности организма, способным формировать первый барьер при появлении патогенных факторов и отвечать быстрой неспецифической реакцией на раздражитель. При этом защитный эффект может быть усилен агентами, активирующими эти клетки.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Влияние неспецифической сенсибилизации на течение экспериментального листериоза II Биологические препараты и иммунологическая реактивность организма /Материалы 12 итоговой научной конференции ТомНИИВС и ТМИ/. - Томск: Изд-во ТГУ, 1971. - С. 116-118./Соавторы: В.К.Погребная/

2. Влияние неспецифичёской мйкробной сенсибилизации на течение листерийной инфекции // Вопросы теоретической и клинической ме- _ дицины/Томск: Изд-во ТГУ, 1972. - С. 54-55. -

3. Фагоцитарная реакция и комплементарная активность кроЬи в процессе белковой сенсибилизации организма // Биологические препараты и иммунологическая реактивность организма /Материалы 14 итоговой научной конференции ТомНИЙВС и ТМИ/. - Томск: Изд-во ТГУ, 1973.-С. 110-111.

4. Изменение активности комплемента при сенсибилизации организма различными антигенами // Факторы естественного иммунитета при различных физиологических и патологических состояниях

/Тезисы докладов к I Всероссийскому симпозиуму/. Вып. 3.' - Челябинск. 1974. - С. 41-42. О '

5. Влияние белковой сенсибилизации на столбнячную интоксикацию у мышей // Биологические препараты и иммунологическая реактивность организма /Материалы 15 итоговой научной конференции Том-НИИВС и ТМИ/. - Томск: Изд-во ТГУ, 1974. - С. 155-156. -

6. Влияние специфической микробной сенсибилизации на течение листерийной инфекции // Производство вирусных и бактериальных препаратов и иммунологическая реактивность /Труды ТомНИИВС и ТМИ/.-Томск: Изд - во ТГУ, 1975.-Т.25. - С.315 - 317

7. Реакция тучных клеток организма в условиях.белковой сенсибилизации II Биологические препараты и иммунологическая реактивность организма /Материалы 16 итоговой научной конференции ТомНИИВС и ТМИ/. - Томск: Изд - во ТГУ, 1975. - С. 135 - 137 /Соавтор: Т.В.Ануфриева/

8. Влияние белковой сенсибилизации на бактерицидные свойства и титр гемагглютининов сыворотки крови кроликов // Конструирование и применение биологических препаратов /Труды ТомНИИВС и ТМИ/. - Томск: Изд-во ТГУ, 1976.-Т.26.-С.145-147

9. Динамика некоторых показателей иммунологической реактивности организма в процессе белковой сенсибилизации //Факторы естественного иммунитета при различных физиологических и патологических состояниях /Сборник научных работ 2 Всероссийского симпозиума/. - Омск, 1976. - С.35

10.Показатели белковой сенсибилизации' //Вирусные и бактерийные препараты /Труды ТомНИИВС иТМЙ'/. - Томск: Изд - во ТГУ, 1978. -Т.28. - С.250 - 252

1Т.Влйяйие белковой сенсибилизации на морфолоппО периферической' Крови кроликов II Научные основы производства вирусных и бактерийных препаратов /Труды ТомНИИВС и ТМЙ'/. - Томск: ИЬдво ТГУ, 1979. -Т.27. -С.ЗОО - 302

12,Влияние белковой сенсибилизации на литическис свойства сыворотки' кроликов //Факторы естественного иммунитета прй: различных физиологических и патологических состояниях/ Матерйалы1 У Й'серос-сийского симпозиума/. - Челябинск, 1980. - С.Зб - 38

13,ПЬказатели сенсибилизации организма животных к Микробному белку 0 эксперименте //Иммунология и аллергия в инф'ейцйЫШой й. неинфекциоиной патологии / Тезисы докладов 3 конференций иммунологов и аллергологов республик Средней Азии и Казахстана/. -Фрунзе, 1980: г С.115

14,физиъл&гипес1сая характеристика фагоцитов п условиях белковой сенсибилизации// Факторы клеточного и' гуморального иммунитета при различит- физиологических и' патологически*- состояниях'

/Материалы 4 Всероссийского симпозиума/. - Челябинск, 1984. -С.67 - 68

15.Течение некоторых патологических процессов в организме сенсибилизированных животных //Медико - биологические препарат и иммунологическая реактивность организма /Материалы 22 итоговой научной конференции ТомНИИВС и ТМИ/. - Томск: Изд - во ТГУ, 1985. -С.91 - 93

16. Течение некоторых патологических процессов в организме с измененной иммунологической реактивностью II Иммунология экстремальных состояний. - Томск: Изд - во ТГУ, 1985. - С.51 - 57

17. Течение опухолевого процесса в организме животных с измененной иммупологической реактивностью // Иммунология экстремальных состояний. - Томск: Изд - во ТГУ, .1985. - С.57 - 59 /Соавторы: Л.Л. Бондаренко, С.А. Свиридова/

18.Течение некоторых патологических процессов на фоне стимуляции реагинового звена иммунитета у животных II Иммунодефицит и аллергия /Тезисы докладов Всесоюзного симпозиума с международным участием /. -Москва, 1986. - С.254 - 255

19.К вопросу о моделировании состояния сенсибилизации у животных // Медико - биологические препараты и иммунологическая реактивность организма /Материалы 24 итоговой научной конференции ТомНИИВС и ТМЙ/. - Томск: Изд - во ТГУ, 1988. - С.64

20. Реакция лимфоидных органов при сочетании сенсибилизации и опухолевого роста в эксперименте // Медико - биолог ические препараты и иммунологическая реактивность организма /Материалы 24 итоговой научной конференции ТомНИИВС и ТМИ/. - Томск: Изд - во ТГУ, 1988. - С.65 /Соавторы : В.М. Г^ельмутер, Л.А. Бондаренко /

21.Влияние сенсибилизации на течение стафилококковой инфекции у животных в эксперименте // ЖМЭИ, 1990. - №2. - С.116 - 117 /Соавтор: О.В. Дьякова/

22.Влияние цитостатических препаратов на морфофункциональное cocToairtie тканевых базофилов II Актуальные проблемы фармакологии и поиска новых лекарственных препаратов. - Томск: Изд -. во ТГУ, 1990. - Т.4. - С.90 - 94

23. Влияние доксорубищша на аллергические реакции у мышей II Актуальные проблемы фармакологии и поиска новых лекарственных-препаратов. - Томск: Изд - во ТГУ, 1990. -Т.4. - С.95 - 98

24. Течение опухолевого процесса у животных с измененной реактивностью организма //Актуальные вопросы медицинской биотехнологии и прикладной иммунологии ЛГруды ТомНИИВС и ТМИ/. -Томск: Изд - во Т1У, 1990. -Т.36. - С. 221 - 225 /Соавторы : В.М.Перельыугер, Л.А, Бондаренко/

25. Морфофункциональнач характеристика тучных клеток мышей при действии доксорубицин^ // Механизм патологических реакций /Тезисы научной конференции/. - Новокузнецк, 1991.- С.41 - 42

26 .Отдаленные последствия действия цитостатических препаратов на морфофункциональнуго характеристику тканевых базофилов // Актуальные проблемы фармакологии и поиска новых лекарственных препаратов. - Томск: Изд - во ТГУ, 1993. -Т.6. - С.49 - 52

27.Морфофункциональное состояние тканевых базофилов при введении цитостатических препаратов // Актуальные проблемы фармакологии и поиска новых лекарственных препаратов,- Томск: Изд - во ТГУ, 1993. -Т.6. - С.52 - 54 /Соавтор : М.Ю. Хлусова/

28.Морфофушшиональное состояние тканевых базофилов при цито-статической болезни // Патол. физиология и экспер. терапия. - 1994. -

29. Влияние доксорубицина на морфофункциональное состояние тканевых базофилов II Антибиотики и химиотерапия. - 1994. - Т.39. -№8. - С.34 - 36

30.Влияние инфекционного процесса на морфофункциональнуго характеристику тканевых базофилов // ЖМЭИ. - 1996.- №1. - С. 107 - 108 /Соавтор: Ю.В. Федоров /

31.Влияние экспериментальной стафилококковой инфекции на мор-фофункшональную характеристику тканевых базофилов II ЖМЭИ. -1996. - №2. - С.74 - 75 /Соавтор: Ю.В. Федоров /

Nsl.-C.12-13