Автореферат и диссертация по медицине (14.01.30) на тему:Морфофункцональные показатели крови человека в клинических моделях преждевременного старения

На правах рукописи

ПОЗДНЯКОВА Наталья Михайловна

МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ПОКАЗАТЕЛИ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА В КЛИНИЧЕСКИХ МОДЕЛЯХ ПРЕЖДЕВРЕМЕННОГО СТАРЕНИЯ

14.01.30 - геронтология и гериатрия 14.03.02 - патологическая анатомия

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

-4 і :;сл 2013 005531125

Санкт-Петербург — 2013

005531125

Работа выполнена на кафедре патологии и кафедре внутренних болезней № 2 медицинского факультета ФГАОУ ВПО «Белгородский государственный национальный исследовательский университет» Министерства образования и науки РФ

Научные руководители:

доктор медицинских наук, профессор Прощаев Кирилл Иванович; доктор медицинских наук, профессор Павлова Татьяна Васильевна.

Официальные оппоненты:

Кветиой Игорь Моисеевич, заслуженный деятель науки РФ, доктор медицинских наук, профессор, федеральное государственное бюджетное учреждение "Научно-исследовательский институт акушерства и гинекологии им. Д.О. Отта" СЗО РАМН (ФГБУ «НИИ АиГ им. Д.О. Отта» СЗО РАМН), руководитель отдела патоморфологии.

Хмельницкая Наталия Михайловна, доктор медицинских наук, профессор, ГБОУ ВПО «Северно-Западный государственный медицинский университет им. И.И. Мечникова» Минздравсоцразвития России (ГБОУ ВПО СЗГМУ им. И.И. Мечникова МЗ РФ), профессор кафедры патологической анатомии.

Ведущая организация: Филиал ГБОУ ВПО РНИМУ им. Н.И. Пирогова Минздрава РФ «Научно-клинический центр геронтологии»

Защита состоится «09» июля 2013 года в 12.00 часов на заседании диссертационного совета Д. 601.001.01 при Санкт-Петербургском институте биорегуляции и геронтологии СЗО РАМН по адресу: 197110, Санкт-Петербург, просп. Динамо, 3.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Санкт-Петербургского института биорегуляции и геронтологии СЗО РАМН по адресу: 197110, Санкт-Петербург, просп. Динамо, 3. Автореферат разослан «07» июня 2013 года.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор биологических наук, профессор

Л.С. Козина

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность проблемы

Одними из основных показателей цивилизованности страны являются уровень здоровья и продолжительность жизни ее населения [ВОЗ, 2010; ООН, 2011]. На исследования в этой области практически во всех современных развитых государствах, а также во многих развивающихся странах тратятся государственные и частные средства, превосходящие траты в других областях (например, в США расходы на здравоохранение составляют порядка 14% федерального бюджета) [Беленков Ю.Н., Мареев В.Ю., 2001; Вко Н. еЛ а!., 1997; Ьоуе11 М., 2006 Мигаууоу А. V. ег а1., 2010].

Во всем мире обеспечение качества жизни граждан пожилого и старческого возраста признается приоритетной задачей государственной социальной политики, но с развитием цивилизации и с увеличением продолжительности жизни у людей стали наблюдаться процессы преждевременного старения. Предупреждение преждевременного старения человека и продление активного долголетия - основная задача геронтологии, как важная медицинская медико-биологическая и медико-социальная проблема [Лазебник Л.Б., 2007; Хавинсон В.Х., 2008, 2010; Шабалин В.Н., 2009; Майк К.Ь., Майк т., 2012].

Приходится констатировать, что в настоящее время существует мало программ профилактики преждевременного старения, и они не имеют широкого распространения. Одна из причин этого - нехватка объективных, применимых в реальной клинической практике критериев преждевременного старения [Белозерова Л.М., 1998]. Следует отметить, что на сегодняшний день разработано большое множество критериев преждевременного старения. Однако в большинстве своем они не являются интегральными, как правило, отражают процессы старения какой-либо одной системы организма [ВойтенкоВ.П. и соавт., 1984; Коркушко О.В. и соавт., 1993]. Многие из существующих методов определения биологического возраста человека сложны в практическом применении [Белозерова Л.М., 1998]. На сегодняшний день существует твердое убеждение в том, что характеристики крови достоверно отражают процессы, происходящие в организме [Лазебник Л.Б., 2007]. Поэтому параметры, отражающие характеристики крови, могут также выступать в качестве интегрального критерия преждевременного старения. Действительно, исследованиям в области возможного использования характеристик крови при оценке биологического возраста уделялось определенное внимание [Белозерова Л.М., 1998; Бауаг N.. 2007; Мигаууоу А. V. е1 а1., 2010]. Однако те критерии, которые разработаны к сегодняшнему дню, в практической деятельности не всегда применимы и отражают в основном только количественные характеристики. В связи с этим, исследование морфофункциональных характеристик и

биохимических характеристик крови, как критериев преждевременного старения, является актуальным.

Цель исследования

Цель исследования - изучить морфофункциональные и биохимические характеристики крови как геротропной ткани и на этой основе разработать критерии для оценки процессов преждевременного старения.

Задачи исследования

1. Изучить морфологические и функциональные свойства эритроцитов у пациентов разных возрастных групп с основными возраст-ассоциированными соматическими заболеваниями (артериальная гипертензия, ишемическая болезнь сердца, сахарный диабет 2 типа).

2. Исследовать химический состав эритроцитов у пациентов разных возрастных групп с основными соматическими заболеваниями (артериальная гипертензия, ишемическая болезнь сердца, сахарный диабет 2 типа).

3. Выявить наиболее характерные сигнальные молекулярные взаимодействия при основных соматических заболеваниях, ассоциированных с процессами преждевременного старения.

4. Установить взаимосвязь между изменениями морфофункциональных и молекулярных характеристик крови и клинической картиной возраст-ассоциированной патологии.

5. Разработать методы диагностики и раннего скрининга процессов преждевременного старения на основе определения морфофункциональных параметров крови, объективно отражающих наличие процессов преждевременного старения в организме человека.

Научная новизна

Впервые кровь рассмотрена как ткань, являющаяся объектом воздействия процессов преждевременного старения на основе интеграции клинической, морфологической, патофизиологической и биохимической оценки изменений в организме человека при соматической патологии и их взаимовлиянии.

Полученные результаты о состоянии компонентов крови (морфологические и функциональные свойства эритроцитов, их микроэлементный состав, уровень и характер сигнального молекулярного взаимодействия) при артериальной гипертензии, сахарном диабете 2 типа, ишемической болезни сердца позволяют уточнить факториальную концепцию развития и прогрессирования процессов преждевременного старения и их влияния на возникновение и течение наиболее часто встречающихся соматических заболеваний.

Впервые проведено комплексное изучение морфофункциональных свойств крови, в частности изучение изменений эритроцитов у пациентов с основными соматическими заболеваниями (артериальная гипертензия, ишемическая болезнь сердца, сахарный диабет), установлена связь между изменениями характеристик крови и клинической картиной возраст-ассоциированной патологии. Показано, что такие изменения, как появление эритроцитов неправильной формы, разнонаправленные изменения размеров эритроцитов (макроцитоз, микроцитоз), повышение сладжированности эритроцитов, появление эритроцитов с эффектом «спущенного мяча» и увеличение количества клеток-теней, ассоциировано с процессами преждевременного старения.

Впервые с помощью комплекса морфометрических и биохимических методов в их взаимосвязи изучена роль патогенетических процессов при артериальной гипертензии, сахарном диабете 2 типа, ишемической болезни сердца в усугублении процессов преждевременного старения.

Установлена достоверная взаимосвязь между изменением морфологической структуры эритроцитов, пластичностью мембран и микроэлементного состава эритроцитов и тяжестью клинической картины возраст-ассоциированной патологии.

Впервые изучено состояние цитокинового и интерлейкинового статуса во взаимосвязи с процессами преждевременного старения в континууме «здоровье - преждевременное старение - развитие соматического заболевания - формирование полиморбидности -усугубление процессов преждевременного старения».

Практическая значимость

Полученные данные о вариантах сигнального молекулярного взаимодействия позволят в реальной клинической практике с большей точностью оценивать тяжесть патологических процессов у больных с артериальной гипертензией, сахарным диабетом 2 типа, ишемической болезнью сердца разного возраста и оценивать в динамике эффективность терапевтического воздействия на процессы преждевременного старения.

Выявленные морфометрические и морфофункциональные особенности эритроцитов у пациентов при наличии/отсутствии процессов преждевременного старения во взаимосвязи с характером и тяжестью соматической патологии будут способствовать разработке новых программ профилактики и раннего скрининга возраст-ассоциированной патологии.

Полученные данные о взаимосвязи изменений характеристик крови человека при процессах преждевременного старения и клинической картины возраст-ассоциированной патологии дает основу для отнесения людей к разным группам риска по преждевременному старению. Это в свою очередь позволит более эффективно и своевременно разрабатывать лечебно-профилактические программы, предупредит развитие тяжелой

возраст-ассоциированной патологии и будет способствовать продлению периода активного долголетия.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту

1. Процессы преждевременного старения ассоциированы с изменением как морфологических свойств эритроцитов (увеличение доли клеток неправильной формы, разнонаправленные изменения размера клеток, усиление процессов деструкции эритроцитов), так и их функциональных характеристик (нарушения мембранных свойств в виде повышения степени сладжированности и снижения эластичности).

2. В процессе формирования полиморбидности («артериальная гипертензия» - «артериальная гипертензия + ишемическая болезнь сердца» - «артериальная гипертензия + ишемическая болезнь сердца + сахарный диабет 2 типа») происходит прогрессивное нарастание уровня содержания углерода в эритроцитах крови и дисбаланса в содержании натрия, хлора, калия и серы, что свидетельствует о вовлеченности эритроцитов в патогенетические механизмы развития преждевременного старения.

3. Наличие процессов преждевременного старения, так же, как и наличие артериальной гипертензии, ишемической болезни сердца, сахарного диабета 2 типа, сопряжено с нарастанием степени цитокинемии в сыворотке крови по показателям фактора некроза опухоли альфа и интерферона альфа, а также с нарастанием уровней интерлейкинов 1, 2 и 6 типов, что свидетельствует об общности патогенетических механизмов преждевременного старения и развития ведущей соматической патологии.

4. Степень морфологических, морфофункциональных и биохимических свойств крови человека в клинических моделях преждевременного старения достоверно коррелирует с тяжестью соматической патологии и степенью полиморбидности.

5. Определение уровней цитокинов и интерлейкинов в сыворотке крови и оценка их динамики могут служить методом оценки тяжести полиморбидной патологии у пациентов с преждевременным старением и методом контроля эффективности терапии, а изучение морфометрических и мембранных свойств эритроцитов крови может использоваться как метод раннего доклинического скрининга преждевременного старения.

Связь с научными программами

Диссертационная работа выполнена в рамках Федеральной целевой программы «Развитие научного потенциала высшей школы» (федеральный грант «Разработка нового метода оценки биологического возраста человека», регистрационный номер: 2.1.1/12806), гранта для аспирантов университетов Минобрнауки РФ «Исследование крови для оценки процессов преждевременного старения» (регистрационный номер ВКАС-22-12) и является научной темой, выполненной по основному плану НИР

медицинского факультета ФГАОУ ВПО «Белгородский государственный национальный исследовательский университет» Минобрнауки РФ.

Апробация и реализация результатов

Результаты диссертации доложены и обсуждены на Всероссийской конференции «Общество, государство и медицина для пожилых» (Москва,

2010); Юбилейной научно-практической конференции с международным участием «Актуальные проблемы геронтологии и гериатрии» (Санкт-Петербург, 2011); Международной конференции «Артериальная гипертензия и профилактика сердечно-сосудистых заболеваний» (Беларусь, Витебск, 2011); Всероссийской конференции «Кардиоваскулярная профилактика и реабилитация - 2011» (Москва, 2011) Всероссийской конференции «Неинфекционные заболевания и здоровье населения России» (Москва, 2011); Всероссийской научно-практической конференции «Цитоморфометрия в медицине и биологии: фундаментальные и прикладные аспекты» (Москва, 2011); научно-практической конференции «Современный взгляд на болезни внутренних органов и полиморбидность» (Белгород, 2011); научно-практической конференции «Медицинская наука и клиническая практика на Харьковщине: прошлое, настоящее, будущее» (Украина, Харьков, 2011); 4-й Международной конференции по фиксированным комбинациям в лечении гипертензии, дислипидемии и сахарного диабета (Франция, Париж, 2011); 7-ой Международной научной конференции «Донозология 2011» (Санкт-Петербург, 2011); 7-й научно-практической геронтологической конференции «Пушковские чтения» (Санкт-Петербург,

2011); 5-й юбилейной международной научно-практической конференции «Геронтологические чтения - 2012» (Белгород, 2012), 3-м Съезде геронтологов и гериатров России (Новосибирск, 2012).

Личный вклад автора

Автором лично определены цель и задачи исследования, проанализирована отечественная и зарубежная литература по изучаемой проблеме, разработаны методические подходы к проведению исследования. Автор непосредственно производил сбор данных, обработку и обобщение полученных материалов, подготовку основных публикаций по выполненной работе, написание и оформление рукописи. Личный вклад автора составляет 85%.

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 17 работ, из них 7 статей в журналах, включенных в Перечень ВАКа Минобрнауки РФ, 2 статьи в других журналах и сборниках, 8 тезисов докладов.

Структура и объем диссертации

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, главы с описанием материалов и методов исследования, глав результатов собственных исследований, выводов, практических рекомендаций, списка использованной литературы. Текст диссертации представлен на 120 страницах и содержит 7 таблиц, 11 рисунков. Список литературы включает 210 источников, из них - 105 отечественных и 105 иностранных авторов.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Клиническими базами исследования явились Муниципальная городская клиническая больница № 2, городская поликлиника № 7 и Медицинский центр «Поколение» г. Белгорода. Морфологическая и биохимическая часть исследования проведены в лаборатории кафедры патологии медицинского факультета и в Центре развития нанотехнологий ФГАОУ ВПО «Белгородский государственный национальный исследовательский университет» Минобрнауки РФ.

В исследование было включено 253 человека: 122 человека среднего возраста и 131 человек пожилого возраста. Все люди, включенные в исследование, были разделены на несколько групп:

1. Практически здоровые люди (п=61):

1.1. практически здоровые люди среднего возраста (п=31, возраст от 40 до 49 лет, средний возраст 44,1+2,2 года, мужчин - 17 чел., женщин - 14 чел.);

1.2. практически здоровые люди пожилого возраста (п=30, возраст от 60 до 69 лет, средний возраст 64,4+2,3 года, мужчин - 14 чел., женщин - 16 чел.).

2. Пациенты, страдающие артериальной гипертензией (АГ) (п=61):

2.1. пациенты среднего возраста, страдающие АГ: (п=30, возраст от 40 до 49 лет, средний возраст 44,8+3,1 года, мужчин - 11 чел., женщин - 19 чел.);

2.2. пациенты пожилого возраста, страдающие АГ (п=31, возраст от 60 до 69 лет, средний возраст 64,0+2,7 года, мужчин - 13 чел., женщин - 18 чел.).

При этом все пациенты страдали АГ II-III степени, 2-й - 4-й степени риска развития сердечно-сосудистых катастроф.

3. Пациенты, страдающие АГ и ишемической болезнью сердца (ИБС) (п=63):

3.1. пациенты среднего возраста, страдающие АГ и ИБС (п=31, возраст от 40 до 49 лет, средний возраст 45,2+2,7 года, мужчин - 21 чел., женщин -10 чел.);

3.2. пациенты пожилого возраста, страдающих АГ и ИБС (п=32, возраст от 60 до 69 лет, средний возраст 65,8+2,2 года, мужчин - 19 чел., женщин -13 чел.).

Все пациенты в этой группе страдали АГ II-III степени, 3-й - 4-й степени риска развития сердечно-сосудистых катастроф и ИБС в виде стенокардии напряжения I-III функционального класса (ФК), хронической сердечной недостаточностью (ХСН) ФК I-II по классификации NYHA.

4. Пациенты, страдающие АГ, ИБС и сахарным диабетом (СД) 2 типа (п=68):

4.1. пациенты среднего возраста, страдающие АГ, ИБС и СД 2 типа (п=30) (возраст от 40 до 54 лет, средний возраст 48,2+2,6 года, мужчин - 8 чел., женщин - 22 чел.);

4.2. пациенты пожилого возраста, страдающие АГ, ИБС и СД 2 типа (п=38, возраст от 60 до 69 лет, средний возраст 65,6+2,1 года, мужчин - 13 чел., женщин - 25 чел.).

Все пациенты в этой группе страдали АГ II-III степени, 4-й степени риска развития сердечно-сосудистых катастроф и ИБС в виде стенокардии напряжения I-III функционального класса (ФК), хронической сердечной недостаточностью (ХСН) ФК I-II по классификации NYHA, СД 2 типа легкой и средней степени тяжести.

АГ диагностировали по критериям экспертной группы ВОЗ по артериальной гипертензии (1999) и Российских национальных рекомендаций по диагностике и лечению АГ (2011), ИБС - по критериям, изложенным в рекомендациях Всероссийского научного общества кардиологов (2010), сахарный диабет - по рекомендациям ВОЗ «Definition and diagnosis of diabetes mellitus and intermediate hyperglycemia» (2006).

Артериальная гипертензия, ишемическая болезнь сердца и сахарный диабет второго типа были избраны в качестве клинических моделей возраст-ассоциированной патологии; выбор был обусловлен тем, что при этих заболеваниях биологический возраст человека достоверно опережает календарный [Kubesova И., 2006, 2009; Аносова Е.В., 2012].

Исследование выполнялось в нескольких направлениях.

Первое направление - сканирование эритроцитов методом зондовой и растровой микроскопии с элементным анализом.

Зондовую сканирующую микроскопию проводили на сканирующем зондовом микроскопе Ntegra-Aura (Компания НТ-МДТ, г. Зеленоград, Россия). Осуществлялся забор крови, проводилось приготовление образцов крови, сканирование клеток в режиме полуконтактной атомно-силовой микроскопии и проводилось измерение геометрических параметров клеток. При этом образец готовился из суспензии нативных эритроцитов, предварительно отмытых от плазмы, путем нанесения капли на чистое обезжиренное предметное стекло (брались стекла для иммуногистохимии), помещался образец во влажную камеру, насыщенную парами воды,

закрытую мембраной, и проводилось сканирование в парах воды в полуконтактном режиме, используя коммерческие Si или SiN-кантилеверы серии NSG 01(NT-MDT, Россия) в режимах постоянного или прерывистого контактов на приборе «Ntegra-Aura». Обработку и построение АСМ-изображений проводили при помощи программного обеспечения «NOVA» (НТ-МДТ, Россия) и «ImageAnalysis» (НТ-МДТ, Россия). Использование способа позволяет сократить время исследования и получать сканы клеток с высоким разрешением, сохраняя их жизнеспособность, нативные размеры и форму.

Для электронной микроскопии образцы готовились таким же образом и затем просматривали в растровых микроскопах FE1 Quanta 200 3D, а также FE1 Quanta 600 FEG (НТ-МДТ, Россия).

Элементный анализ проводился с использованием детектора для регистрации спектров характеристического рентгеновского излучения фирмы ЕРАХ, детекторы были интегрированы с растровым электронным микроскопом Quanta 600 FEG. Микроэлементный анализ был основан на возникновении непрерывного флуоресцентного излучения при бомбардировке исследуемых образцов пучком первичных рентгеновских лучей. Абсолютная чувствительность метода составила 10~13 - 10~15 г.

Второе направление - исследование нейроиммуноэндокринных аспектов АГ, сочетания АГ и ИБС, а также АГ, ИБС и СД у пациентов разного возраста: изучение содержания провоспалительных цитокинов в сыворотке крови - интерферона-альфа (IFN-a) и фактора некроза опухолей альфа (TNF-a); изучение содержания интерлейкинов (IL) 1-го, 2-го 6-го типов в сыворотке крови..

Уровни показателей сигнальных молекул (провоспалительных цитокинов - IFN-a и TNF-a, интерлейкинов IL-1, IL-2 и IL-6) определяли ферментативным методом с использованием стандартных реактивов на биохимических автоанализаторах FP-901 «Labsystem» (Франция), «Harizon» (Канада).

Статистическую обработку материала выполняли на персональном компьютере типа IBM PC (программы MicrosoftExcel, Statistica 6.0). При статистическом анализе материала выполняли расчет интенсивных и экстенсивных показателей средних величин, определяли достоверность различий средних и относительных величин по критерию Стьюдента. Достоверными считали различия при р<0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Морфофункциональные свойства эритроцитов в клинических моделях преждевременного старения

При анализе результатов проведения атомно-силовой микроскопии эритроцитов оказалось, что у практически здоровых людей среднего

возраста в абсолютном большинстве случаев были получены сканы клеток правильной формы и размеров (97,5+0,3% клеток от общего числа сканированных эритроцитов) (рис. 1, 2). В полях зрения встречались эритроциты с явлениями сладжа (2,0+0,2%) и клетки-тени (3,5+0,3% клеток).

У практически здоровых людей пожилого возраста наблюдалась схожая картина. В абсолютном большинстве случаев были получены сканы клеток правильной формы (96,8+0,4% клеток от общего числа сканированных эритроцитов), в полях зрения встречались эритроциты с явлениями сладжа (2,3+0,2%) и клетки-тени (3,9+0,3% клеток). При этом достоверных отличий по сравнению с параметрами эритроцитов у людей среднего возраста выявлено не было (р>0,05).

Рис. 1. Эритроциты у практически здоровых людей (х 10000).

10 о

ут

Рис. 2. Трехмерная гистограмма нормальных эритроцитов у практически здоровых людей (атомносиловая микроскопия, х 20000).

При сканировании эритроцитов больных АГ среднего возраста наблюдались следующие изменения - появлялись эритроциты с эффектом «спущенного мяча» (2,0+0,1% эритроцитов от общего числа сканированных клеток), что не наблюдалось у практически здоровых людей и свидетельствовало о нарушении эластичности мембран, повышалась сладжированность (7,1+0,2% клеток, р<0,05 по сравнению с практически здоровыми людьми среднего возраста), увеличивалось вследствие нарушения стабильности плазмолемм количество клеток неправильной формы (до 6,1+0,3%, р<0,05 по сравнению с практически здоровыми людьми среднего возраста), при этом количество клеток-теней достоверно не отличалось (р>0,05) от их содержания в крови здоровых людей и составило 3,7+0,3% от общего числа сканированных эритроцитов.

При сканировании крови у людей пожилого возраста, страдающих АГ, были получены следующие данные - появлялись эритроциты с эффектом «спущенного мяча» (2,2+0,2% эритроцитов от общего числа сканированных клеток), что не наблюдалось у практически здоровых людей, повышалась сладжированность (9,9+0,3% клеток, р<0,05 по сравнению с практически здоровыми людьми пожилого возраста и р<0,05 по сравнению с людьми среднего возраста, страдающими АГ), увеличивалось вследствие нарушения стабильности плазмолемм количество клеток неправильной формы (до 6,2+0,4%, р<0,05 по сравнению с практически здоровыми людьми пожилого возраста), при этом количество клеток-теней достоверно не отличалось (р>0,05) от их содержания в крови здоровых людей и составило 3,8+0,2% от общего числа сканированных эритроцитов. В целом, при АГ у людей пожилого возраста отмечалась более высокая степень сладжирования эритроцитов по сравнению с людьми среднего возраста.

В то же время, при сканировании эритроцитов больных АГ в сочетании с ИБС наблюдались более выраженные изменения.

У людей среднего возраста, страдающих АГ и ИБС, наблюдались следующие изменения: количество эритроцитов с эффектом «спущенного мяча» возрастало до 5,1+0,1% от общего числа сканированных эритроцитов, повышалась сладжированность — 11,1+0,2%, количество неправильных форм эритроцитов также возрастало - 9,1+0,1%, увеличивалось количество клеток-теней до 5,2+0,2% (для всех показателей р<0,05 по сравнению с пациентами среднего возраста, страдающими АГ).

У людей пожилого возраста, страдающих АГ и ИБС, изменения были еще более выраженными. Наблюдались следующие изменения: количество эритроцитов с эффектом «спущенного мяча» возрастало до 5,1+0,1% от общего числа сканированных эритроцитов, повышалась сладжированность - 15,1+0,2%, количество неправильных форм эритроцитов также

возрастало - 12,2+0,1%, увеличивалось количество клеток-теней до 5,2+0,2% (для всех показателей р<0,05 по сравнению с пациентами пожилого возраста, страдающими АГ). При этом количество неправильных форм эритроцитов и степень сладжированности были достоверно выше (р<0,05), чем у людей среднего возраста с сочетанием АГ и ИБС (рис 3, 4).

яшшшкт-шшяшвшт

4/2/2011 | тад \Л.'С) ьрсМ Н\/ •-20 ¡¡гп —

12:1306 РМ 6 000 х 6 4 тт 4.5 ЕТРПОООку!_ОиагНа РЕС

Рис. 3. Эритроциты у пожилых больных с артериальной гипертензией и ишемической болезнью сердца (изменение формы клеток, сладжированность клеток, наличие эритроцитов с эффектом спущенного мяча, клеток-теней) (х 6000).

Рис. 4. Трехмерная гистограмма эритроцитов у пожилых больных с артериальной гипертензией и ишемической болезнью сердца (атомно-силовая микроскопия, х 5000).

Изучение образцов крови, полученных от больных АГ в сочетании с ИБС и СД 2 типа показало следующее. У людей среднего возраста, страдающих АГ, ИБС и СД 2 типа, наблюдались изменения, схожие с группой больных, страдающих АГ и ИБС. Количество эритроцитов с

эффектом «спущенного мяча» составило 5,2+0,2% от общего числа сканированных эритроцитов, сладжированность - 12,0+0,2%, количество неправильных форм эритроцитов - 9,0+0,1%, количество клеток-теней -5,2+0,3% (для всех показателей р<0,05 по сравнению с пациентами среднего возраста, страдающими АГ и р>0,05 по сравнению с пациентами среднего возраста, страдающими АГ и ИБС). Вместе с тем, обращал на себя внимание факт наличия пойкилоцитоза. При этом пойкилоцитоз проявлялся преимущественно в наличии макроцитов (до 8,72цм) на фоне среднего размеры клеток 7,01 ±0,05 цм, меньшего такового у практически здоровых людей среднего возраста. (7,50+0,05 цм).

У людей пожилого возраста, страдающих АГ, ИБС и СД 2 типа, наблюдались следующие изменения: количество эритроцитов с эффектом «спущенного мяча» составило 5,2+0,1% от общего числа сканированных эритроцитов, сладжированность - 15,2+0,2%, количество неправильных форм эритроцитов — 12,4+0,2%, количество клеток-теней - 5,4+0,4% (для всех показателей р<0,05 по сравнению с пациентами пожилого возраста, страдающими АГ и р>0,05 по сравнению с пациентами среднего возраста, страдающими АГ и ИБС). При этом количество неправильных форм эритроцитов и степень сладжированности была достоверно выше (р<0,05), чем у людей среднего возраста с сочетанием АГ, ИБС и СД 2 типа (рис 3, 4). При этом также обращал на себя внимание факт наличия пойкилоцитоза, проявляющегося преимущественно в наличии макроцитов (до 8,71цм) на фоне среднего размера клеток 7,00+0,06цм, меньшего такового у практически здоровых людей пожилого возраста (7,51+0,07цм).

Также у людей как среднего, так и пожилого возраста отмечалось наличие эритроцитов с одиночными выростами (рис. 5, 6, 7).

Рис. 5. Эритроциты у больных с артериальной гипертензией, ишемической болезнью сердца и сахарным диабетом 2 типа (пойкилоцитоз, макроцитоз) (х 6000).

Рис. 6. Эритроциты у пожилых больных с артериальной гипертензией, ишемической болезнью сердца и сахарным диабетом 2 типа (неправильная форма клеток, наличие одиночных выростов) (х 12000).

Рис. 7. Трехмерная гистограмма эритроцитов у пожилых больных с артериальной гипертензией, ишемической болезнью сердца и сахарным диабетом 2 типа (атомно-силовая микроскопия, х 10000).

Микроэлементный состав эритроцитов у пациентов с возраст-ассоциироваиной соматической патологией

В таблицах 1 и 2 представлены данные о микроэлементном составе эритроцитов у людей разного возраста с возраст-ассоциированной патологией. Как видно из представленных данных, у людей среднего возраста прослеживалась достоверная закономерность в отношении содержания углерода и хлора: с нарастанием тяжести полиморбидности достоверно (р<0,05) увеличивалось пропорциональное содержание

углерода в эритроцитах и достоверно (р<0,05) уменьшалось пропорциональное содержание хлора.

Таблица 1

Микроэлементный состав эритроцитов у людей среднего возраста с

Элемент Пропорциональное содержание атомов микроэлемента (в % от общего числа содержания атомов в эритроците)

здоровые АГ АГ+ИБС АГ+ИБС+СД

С(углерод) 45,90+0,11 45,75+0,03 49,64+0,09*" 58,06+0,16*'"'*

N(азот) 22,40+0,56 19,52+3,28 21,83+0,12 20,42+2,44

О(кислород) 17,25+0,02 16,48+0,26 12,96+0,04*'** 15,27+0,16

№ (натрий) 3,14+0,04 4,97+0,02* 2,81+0,03*'** 1,60+0,04""*

8 (сера) 0,87+0,05 1,18+0,03' 1,41+0,03* 0,32+0,02*'"'"

С1 (хлор) 5,55+1,00 8,66+0,08' 5,97+0,21 0,69+0,01*'**'"

К (калий) 2,90+0,04 1,93+0,06" 3,85+0,12*'** 1,63+0,07*'"

Прочие 2,00+0,32 1,52+0,45 2,04+0,08 1,99+0,07

Всего 100 100 100 100

р<0,05 по сравнению с практически здоровыми людьми р<0,05 по сравнению с пациентами с артериальной гипертензией * р<0,05 по сравнению с болезнью сердца

пациентами с артериальной гипертензиеи и ишемическои

Таблица 2

Микроэлементный состав эритроцитов у людей пожилого возраста с

Элемент Пропорциональное содержание атомов микроэлемента (в % от общего числа содержания атомов в эритроците)

Здоровые АГ АГ+ИБС АГ+ИБС+СД

С(углерод) 46,88+0,10 46,64+0,12 51,43+0,08*'" 62,11+0,25''**'*'°

N(азот) 21,42+0,48 18,50+2,98 19,66+1,56 20,23+3,12

О(кислород) 17,37+0,03 15,23+0,25 Ю,04+0,03*'**'° 10,3 7+0,08*'"'и

№ (натрий) 3,11+0,02 5,85+0,04* 2,69+0,02*'" 1,56+0,05*'"'"

Б (сера) 0,79+0,07 1,23+0,02* 1,38+0,02* 0,37+0,03*'"'"

С1(хлор) 5,33+1,01 7,44+0,07* 5,76+0,20 0,65+0,02"'*"'"

К (калий) 2,88+0,03 1,87+0,05* 3,67+0,06*'** 1,69+0,05*'*

Прочие 2,11+0,44 2,32+0,20 3,00+0,04 2,44+0,29

Всего 100 100 100 100

р<0,05 по сравнению с практически здоровыми людьми р<0,05 по сравнению с пациентами с артериальной гипертензией " р<0,05 по сравнению с пациентами с артериальной гипертензией и ишемической болезнью сердца

°р<0,05 по сравнению с пациентами среднего возраста.

В отношении содержания натрия, серы и калия были отмечены разнонаправленные достоверные (р<0,05) сдвиги, не связанные с увеличением степени полиморбидности. В отношении пропорционального содержания других микроэлементов в эритроцитах достоверных изменений получено не было.

У людей пожилого возраста изменения были достоверно еще более выраженными. Помимо изменений, сходных с изменениями у людей среднего возраста, был обнаружен достоверный отрицательный тренд в содержании кислорода: при нарастании степени полиморбидности пропорциональное содержание кислорода достоверно (р<0,05) уменьшалось. Кроме того, достоверно увеличивалось содержание пропорционального содержание углерода по сравнению с аналогичной патологией у людей среднего возраста (р<0,05).

Полученные данные свидетельствовали об усугублении патологических процессов с нарастанием степени полиморбидности, напряженности саногенетических механизмов и о большей подверженности лиц пожилого возраста патологическим процессам, влияющим на кислородный и углеродный обмен.

Сигнальное молекулярное взаимодействие и процессы преждевременного старения Результаты исследования содержания сигнальных молекул П-ЪГ-а, ТОТ-а в сыворотке крови представлены в таблице 3.

Таблица 3

Содержание основных цитокинов в сыворотке крови_

Исследуемый Возраст Уровень сигнальных молекул в сыворотке крови

показатель здоровые АГ АГ+ИБС АГ+ИБС+СД

ШЯ-а, Средний 130,2 285,2 385,2 405,2

пг/мл ±6,8 ±16,1* ±14,1 *,* ±5,7 *,#

Пожилой 132,3 290,1 396,1 430,8

±8,8 ±13,2* ±9,2 *,# ±3,9 *,#

ТЫР-а, Средний 79,7 81,0 108,2 114,4

пг/мл ±4,1 ±3,5 ±2,2*," ±2,1*/

Пожилой 79,7 81,0 128,4 129,3

±4,2 ±3,5 +2,1*,*'° +3,1*,*'°

* р<0,05 по сравнению со здоровыми людьми

#р<0,05 по сравнению с пациентами с артериальной гипертензией

°р<0,05 по сравнению с пациентами среднего возраста

Как видно из приведенных данных, уровень ИТЧ-а в сыворотке крови начинал достоверно повышаться (р<0,05) при наличии артериальной гипертензии как монопатологии и продолжал прогрессивно нарастать по мере усугубления степени полиморбидности. При этом при сочетании АГ, ИБС и сахарного диабета 2 типа содержание данной сигнальной молекулы в сыворотке крови у людей пожилого возраста было достоверно выше, чем у людей среднего возраста: 430,8±3,9 и 405,2±5,7 иг/мл соответственно (р<0,05).

Уровень ТЫ-а в сыворотке крови при артериальной гипертензии не отличался от такового у практически здоровых людей. Это было характерно, как для людей среднего, так и пожилого возраста. Присоединение ИБС и СД 2 типа приводило к достоверному (р<0,05) увеличению содержанию этого цитокина в сыворотке крови у людей обоих

возрастных групп, причем у людей пожилого возраста эти изменения были достоверно более выраженными. Так, уровень ТЫТ-а в сыворотке крови у пожилых людей, страдающих АГ и ИБС, составил 128,4+2,1 пг/мл против 108,2+2,2 пг/мл у людей среднего возраста (р<0,05), при сочетании АГ, ИБС и СД 2 типа - соответственно 129,3+3,1 пг/мл и 114,4+2,1 пг/мл (р<0,05).

Изучение интерлейкинового статуса показало следующее (рис. 8).

350 300 250 200

¿г

здоровые дг

& средним возраст ' пожилой возраст

АГ+ИБС+АД

* р<0,05 по сравнению со здоровыми людьми

**р<0,05 по сравнению с пациентами с артериальной гипертензией

# р<0,05 по сравнению с пациентами с артериальной гипертензией и ишемической болезнью сердца

°р<0,05 по сравнению с пациентами среднего возраста.

Рис. 8. Содержание интерлейкина-1 в сыворотке крови при возраст-ассоциированно11 патологии (в пг/мл).

Содержание 1Ь-1 у здоровых людей среднего возраста составило 261,2±4,6пг/мл. При изолированном течении АГ не происходило достоверного увеличения содержания данной сигнальной молекулы в сыворотке крови, показатель составил 266,5+4,7 пг/мл (р>0,05 по сравнению со здоровыми пожилыми людьми). Дальнейшее же нарастание полиморбидности приводило к достоверному (р<0,05) нарастанию степени интерлейкинемии по показателю 1Ь-1. Так, у больных пожилого возраста с АГ и ИБС уровень этой молекулы в сыворотке крови составил 309,3+4,8 пг/мл, при сочетании АГ, ИБС и СД 2 типа - 342,3+5,9 пг/мл. Содержание 1Ь-1 у здоровых людей пожилого возраста составило 262,3+4,2 пг/мл. При изолированном течении АГ имело место достоверное увеличение содержания данной сигнальной молекулы в сыворотке крови до 278,5+2,4 пг/мл (р<0,05 по сравнению со здоровыми пожилыми людьми). Дальнейшее нарастание полиморбидности приводило к достоверному (р<0,05) нарастанию степени интерлейкинемии по показателю 1Ь-1. У больных пожилого возраста с АГ и ИБС уровень этой молекулы в

сыворотке крови составил 312,2±5,1 пг/мл, при сочетании АГ, ИБС и СД 2 типа - 347,2±6,3 пг/мл. При этом при АГ наблюдались достоверные отличия содержания этой молекулы в сыворотке крови в сравнении с пациентами среднего возраста (р<0,05). Аналогичные результаты были получены в отношении содержания в сыворотке крови других изученных интерлейкинов - 1Ь-2 и 1Ь-6.

Разработка классификации изменений параметров крови как ткани-мишени при процессах преждевременного старения

При изучении эритроцитов с помощью сканирующей микроскопии было показано, что в зависимости от наличия/отсутствия возраст-ассоциированной патологии, ее тяжести, происходило нарастание морфофункциональных изменений эритроцитов. Все эти изменения можно разделить на 5 групп: 1) изменение формы клеток (появление неправильных форм эритроцитов, эритроцитов с одиночными выростами); 2) изменение размера клеток (пойкилоцитоз с преобладанием макроцитоза на фоне уменьшенного среднего размера клеток); 3) нарушение связей между клетками (повышение степени сладжированности); 4) нарушение эластичности мембран клеток (появление эритроцитов с эффектом «спущенного мяча»); 5) повышенная деструкция клеток (увеличение количества клеток-теней). Также были отмечены разнообразные изменения в пропорциональном содержании микроэлементов в эритроцитах. В ходе работы были выявлены и достоверные изменения в сигнальном молекулярном взаимодействии при заболеваниях, ассоциированных с преждевременным старением.

Это позволило предложить классификацию изменений параметров крови как ткани-мишени при преждевременном старении. Она выглядит следующим образом:

Изменения параметров крови как ткани-мишени, ассоциированные с преждевременным старением

A. Изменения эритроцитов.

1. Морфологические изменения:

1.1. Нарушение формы. (1.1.1. Утрата равномерности внешнего контура. 1.1.2. Появление одиночных выростов.)

1.2. Нарушение размеров эритроцитов. (1.2.1. Пойкилоцитоз. 1.2.2. Появление макроцитов. 1.2.3. Уменьшение средних размеров клеток.)

2. Функциональные нарушения:

2.1. Снижение эластичности мембран. 2.1. Повышение сладжированности.

3. Химические изменения:

3.1. Повышение пропорционального содержания углерода.

3.2. Снижение пропорционального содержания кислорода.

3.3. Снижение пропорционального содержания хлора.

B. Нарушения сигнального молекулярного взаимодействия.

1. Нарушения цитокинового статуса.

2. Нарушения интерлейкинового статуса.

Результаты настоящего исследования позволяют с уверенностью утверждать, что кровь является тканью, подверженной процессам преждевременного старения и ассоциированных с ними заболеваний, и ее можно трактовать в этом контексте как геротропную ткань. При этом поражаются различные ее составляющие - как клеточные, так и молекулярные. Для интегральной оценки степени выраженности этих процессов более всего подходят эритроциты и сигнальные молекулы.

У больных пожилого возраста обнаружена большая степень выраженности изменений в морфофункциональных и молекулярных характеристиках крови при изученной патологии в количественном измерении. Однако, наличие во многом сходных по качеству изменений, как в организме пожилых людей, так и людей среднего возраста, при ряде соматической патологии (артериальная гипертензия, ишемическая болезнь сердца, сахарный диабет 2 типа) позволяет считать эти заболевания в среднем возрасте ассоциированными с процессами преждевременного старения, а само преждевременное старение, в свою очередь - рисковым фактором по возникновению указанной патологии и усугублению течения этих заболеваний. Возраст, в свою очередь, является фактором, усугубляющим патологические процессы.

Для людей с риском развития заболеваний, ассоциированных с процессами преждевременного старения важно иметь маркеры преждевременного старения на доклинической стадии. Вместе с тем, для людей, не имеющих хронической соматической патологии, оценка уровней основных цитокинов и интерлейкинов в сыворотке крови не может использоваться как показатель для оценки процессов преждевременного старения, т.к. содержание этих веществ начинает повышаться только при наличии клинических признаков заболевания, и не всегда при монопатологии, а только при нарастании степени полиморбидности. Для оценки процессов в доклиническую стадию, согласно результатам нашего исследования, могут быть использованы морфофункциональные характеристики эритроцитов (повышенная сладжированность, нарушение формы, появление клеток-теней и т.д.).

ВЫВОДЫ

1. При соматических заболеваниях, ассоциированных с процессами преждевременного старения, наблюдаются изменения

морфофункциональных свойств эритроцитов, основными из которых являются следующие: увеличение количества неправильных форм эритроцитов до 9,0% клеток от общего числа эритроцитов в кровеносном русле, количества эритроцитов с эффектом «спущенного мяча» - до 5,2%,

количества клеток-теней — до 5,2%, количества эритроцитов, вовлеченных в процессы сладжирования - до 12,0%, при этом пожилой возраст является дополнительным фактором по усугублению процессов сладжированности эритроцитов.

2. В процессе формирования полиморбидности у людей среднего возраста с явлениями преждевременного старения происходит прогрессивное нарастание уровня пропорционального содержания углерода в эритроцитах крови от 45,9% от общего атомарного состава эритроцитов у клинически здоровых лиц до 50,6% при артериальной гипертензии и ишемической болезни сердца и 60,1% при присоединении к ним сахарного диабета 2 типа. При этом возраст пациентов является дополнительным фактором в срыве саногенетических возможностей удержания нормального уровня пропорционального содержания кислорода и углерода, в результате чего происходит достоверное снижение последнего показателя по кислороду с 17,3% до 13,3% и достоверное увеличение по углероду с 45,2% до 60,2% на фоне нарастающего дисбаланса в содержании натрия, хлора, калия и серы.

3. Нарушение сигнального молекулярного взаимодействия ассоциировано как с процессами преждевременного старения, так и с развитием соматической патологии, оказывающих взаимное негативное влияние посредством отягощения нарушений. При этом фактор возрастного влияния на эти процессы в большей мере проявляется в отношение интерлейкинов 1, 2 и 6 типов и фактора некроза опухолей альфа, чем в отношении интерферона альфа.

4. Усугубление полиморбидности генерирует появление новых негативных свойств составляющих крови как ткани-мишени преждевременного старения. В частности, при сочетании артериальной гипертензии, ишемической болезни сердца и сахарного диабета 2 типа формируется пойкилоцитоз, проявляющийся в наличии макроцитов (размером до 8,7цм) на фоне среднего размера клеток 7,0цм, меньшего такового у практически здоровых людей 7,5цм. Это происходит на фоне нарастающей цитокинемии и провоспалительной интерлейкинемии (в частности, по показателю ЮТ-а с 79,7 до 120,2 пг/мл, по показателю 1Ь-1 с 241,2 до 343,2 пг/мл.

5. Кровь можно рассматривать как геротропную ткань при процессах преждевременного старения. При этом все изменения крови, сопряженные с процессами преждевременного старения, можно отнести к трем основным группам: морфологические и морфофункционапьные изменения клеток крови (повышение сладжированности, нарушения формы, деструкция клеток и др.), нарушения химического состава клеток крови (дисбаланс в пропорциональном содержании микроэлементов по отношению к общему содержанию атомов в эритроците), нарушения

сигнального молекулярного взаимодействия (цитокиновый и интерлейкиновый дисбаланс).

6. В группах людей среднего возраста, имеющих хроническую соматическую патологию, наличие и развитие этой патологии сопряжено с достоверным нарастанием уровня ЮТ-а от 79,7+4,2 пг/мл до 114,4+2,1 пг/мл, что позволяет исследовать этот показатель в качестве критерия оценки наличия/отсутствия процессов преждевременного старения и их динамики. У всех здоровых людей уровень ЮТ-а на доклинической стадии заболевания не меняется, в связи с этим для диагностики процессов преждевременного старения у здоровых людей с известными факторами риска развития сердечно-сосудистых заболеваний и сахарного диабета второго типа можно проводить морфофункциональное исследование эритроцитов, характеристики которых могут изменяться в доклиническую стадию.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Определение уровней фактора некроза опухолей альфа, интерферона альфа, интерлейкинов 1, 2 и 6 типов в сыворотке крови у людей с артериальной гипертензией, ишемической болезнью сердца и/или сахарным диабетом 2 типа может использоваться для оценки тяжести состояния полиморбидной патологии и оценки эффективности ее терапии в динамике лечения.

2. Определение морфометрических и морфофункциональных характеристик эритроцитов у клинически здоровых людей среднего возраста с известными факторами риска развития сердечно-сосудистых заболеваний и сахарного диабета второго типа может использоваться для выявления в этой когорте людей лиц с явлениями преждевременного старения и разработки для них целевых программ коррекции биологического возраста.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ Статьи в журналах, включенных в Перечень ВАК Министерства образования и науки Российской Федерации

1. Биологический возраст человека и преждевременное старение в антропологическом контексте/К.И.Прощаев, Н.И.Жернакова, Р.Ф.Капустин, Н.М.Позднякова, Х.К.Мартинес Гарсес, Ю.Ф. Дуке Кальдерон//Ученые записки СПбГМУ им. акад. И.П. Павлова. - 2011. - Т.ХУИ, №2. - С. 14-16.

2. Молекулярно-клеточные изменения крови как «ткани-мишени» при полиморбидной патологии/К.И.Прощаев, Т.В.Павлова, Н.М.Позднякова, К.А.Бочарова//Научные ведомости Белгородского государственного университета. Серии медицина, фармация. - 2011. - № 16(1). - С. 33-37.

3. Молекулярные основы развития и прогрессирования хронической сердечной недостаточности в пожилом и старческом возрасте/К.И. Прощаев, А.Н.

Ильницкий, В.И. Бессарабов, Т.В. Павлова, Т.В. Кветная, O.A. Болховитина, Н.М. Позднякова//Молскулярная медицина. - 2012. - № 6. - С. 60-63.

4. Морфофункциональные характеристики эритроцитов как клеток-мишеней при процессах преждевременного старения/Т.В.Павлова, К.И.Прощаев, Н.М.Позднякова, В.Н.Легкий, В.В.Башук, А.В.Нестеров, Е.С.Малютина, Л.А.Павлова//Успехи геронтологии. - 2013. - № 2. - С.234-237.

5. Полиморбидность в пожилом возрасте. Часть2. Проблема полиморбидности в контексте преждевременного старения/К.И.Прощаев, С.И.Рапопорт, Н.И.Жернакова, А.Н.Ильницкий, Н.М.Позднякова, К.В.Перелыгин, Г.И.Гурко//Владикавказский медико-биологический вестник. - 2011. - Т. 12, №19.-С. 159-162.

6. Современные взгляды на возможности оценки биологического возраста в клинической практике/Н.М.Позднякова, К.И.Прощаев, А.Н.Ильницкий, Т.В.Павлова, В.В.Башук//Фундаментальные исследования. - 2011. - № 2 - С. 1722.

7. Инновационные технологии в оценке морфологических свойств клеток-мишеней преждевременного старения (на примере эритроцитов) / Т.В.Павлова, К.И.Прощаев, Н.И. Жернакова, В.В.Башук, Н.М.Позднякова, A.B. Селиванова // Научные ведомости Белгородского государственного университета. Серия Медицина. Фармация. - 2013. - Вып. 21/1. - С. 55-52.

Статьи

8. Позднякова Н.М. К вопросу о роли коррекции дисбаланса между биологическим и паспортным возрастом/Н.М. Позднякова//Геронтологический журнал им В.Ф. Купревича. - 2010. - №3. - С.10-16.

9. Позднякова Н.М. Полиморбидность и преждевременное старение/Н.М. Позднякова//Геронтологический журнал им. В.Ф. Купревича. - 2011. - Т.2, №1. - С.9-11.

Тезисы докладов

10.. Кровь как биологический маркер преждевременного старения, ассоциированного с артериальной гипертензией и сахарным диабетом 2 типа / К.И.Прощаев, Т.В.Павлова, Н.М.Позднякова, В.В.Башук//Тез.конф. «Артериальная гипертензия и профилактика сердечно-сосудистых заболеваний», Витебск, 19-20 мая 2011. - Витебск, 2011. - С. 169-172.

11.. Кровь как потенциальный маркер биологического возраста человека: результаты пилотного проекта/Т.В.Павлова, К.И.Прощаев, Н.М.Позднякова,

B.В.Башук//Матер. IV Всероссийской научно-практической конф. «Цитоморфометрия в медицине и биологии: фундаментальные и прикладные аспекты». Москва, 19-20 мая 2011. - М„ 2011. - С. 67-69.

12. Павлова, Т.В. Изучение морфофункциональных особенностей эритроцитов для поисков критериев преждевременного старения/Т.В.Павлова, К.И.Прощаев, Н.М.Позднякова//Тез. конф. «Современный взгляд на болезни внутренних органов и полиморбидность», Белгород, 19-20 мая 2011. - Белгород, 2011. -

C.48.

13.. Возможности изучения морфофункциональных свойств эритроцитов в диагностике предболезней/Т.В.Павлова, Н.М.Позднякова, К.И.Прощаев, В.В.Башук// Тез. конф. «Медицинская наука и клиническая практика на Харьковщине: прошлое, настоящее, будущее», посвященной 150-летию Харьковского медицинского общества, Харьков, 20 октября 2011. - С?

14.. Изменения морфофункциональных свойств эритроцитов и содержания кислорода в них у пациентов с риском преждевременного старения/Т.В. Павлова

Т.В., Н.М.Позднякова, К.И.Прощаев, В.В.Башук//Тез. 7-ой Международной научной конф. «Донозология 2011», Санкт-Петербург, 15-16 декабря 2011. - С. 446-448.

15. Содержание кислорода в эритроцитах пожилых больных с полиморбидной патологией/Т.В.Павлова, Н.М.Позднякова, К.И.Прощаев, В.В.Башук//Тез. VII научно-практической геронтологической конф. «Пушковские чтения», Санкт-Петербург, 19-20 декабря 2011. Российский семейный врач. - Том 15, № 4. т 2011.-С.94.

16. Позднякова, Н.М. Изменения биоэлементного состава крови при процессах преждевременного старения/Н.М.Позднякова, Т.В.Павлова, К.И.Прощаев //Геронтологический журнал им В.Ф. Купревича. Матер. 5-ой юбилейной международной научно-практической конф. «Геронтологические чтения -2012», Белгород, 6-10 февраля 2012г. - 2012. - Т.З, №1. - С.15.

17. The possibilities of investigation of morphofunctional properties of erythrocytes in the estimation of effectiveness of fixed combination in patient with metabolic syndrome/K.Prashchayeu, T.Pavlova, N. Pozdnyakova, V.Bashuk, A. Ilnitski//The 4th International Conference on Fixed Combination in the Treatment of Hypertension, Dyslipidemia and Diabetes Mellitus, Paris, France, December 1-4, 2011. - P.127.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ, ПРИНЯТЫХ В АВТОРЕФЕРАТЕ

АГ - артериальная гипертензия

ВОЗ - Всемирная Организация Здравоохранения

ИБС - ишемическая болезнь сердца

СД - сахарный диабет

ФК - функциональный класс

ХСН - хроническая сердечная недостаточность

- интерлейкин №N-0- интерферон альфа

N¥114 - ^луУогкНеайАвзоаайоп (Нью-ИоркскаяАссоциацияСердца) ТОТ-а - фактор некроза опухолей альфа

Позднякова Наталья Михайловна МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ПОКАЗАТЕЛИ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА В КЛИНИЧЕСКИХ МОДЕЛЯХ ПРЕЖДЕВРЕМЕННОГО СТАРЕНИЯ //Автореф. дисс.... канд. мед. наук.: 14.01.30; 14.03.02 - СПб., 2013. - 24 с.

Подписано в печать «07»июня 2013. Формат 60*84 1/16. Бумага офсетная. Печать офсетная. Печ. л. 1,0. Тираж 100 экз. Заказ 80. Отпечатано с готового оригинал-макета. ЗАО "Принт-Экспресс" 197376, С.-Петербург, ул. Большая Монетная, 5, лит. А

СПИСОК ЦИТИРУЕМЫХ источников

Беленков Ю.Н., Мареев В.Ю., Consilium medicum, 2001, 3 (2), 3-10; Белозерова Л.М., Клинич. геронтология, 1998, 4 (2), 34-38; ВойтенкоВ.П. и соавт., Цитология и генетика, 1984, 6, 442-447; Коркушко О.В. и соавт., Гериатрия в терапевтической практике, Киев, 1993; Лазебник Л.Б., Сердце, 2007, 7, 25-27; Хавинсон В.Х., Бюлл. экспер. биол. и медицины, 2002, 133 (1), 4-10; Шабалин В.Н., Здравоохранение Рос. Фед., 2009, 2, 13-18; Bito Н. et al., Masui-Japanese J. of Anest., 1997, 46 (4), 900-909; Lovell M, J. Vase. Nurs., 2006, 24 (1), 22-26; Mauk K.L., Mauk J.M. Geroservice, 2012, 31 (2), 58-62, Muravyov A. V. et al, Clin. Hemorheol. Microcirc., 2010, 45 (4), 337-345; Sayar N., Cardiology, 2007,108 (4), 307-313.