Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Морфофункциональная характеристика плаценты при нарушении обмена гормонов и биогенноактивных веществ у беременных с герпес-вирусной инфекцией

На правах рукописи

АНДРИЕВСКАЯ Ирина Анатольевна

МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ПЛАЦЕНТЫ ПРИ НАРУШЕНИИ ОБМЕНА ГОРМОНОВ И БИОГЕННОАКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ У БЕРЕМЕННЫХ С ГЕРПЕС-ВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИЕЙ

14.00.16 - патологическая физиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Иркутск - 2004

Работа выполнена в Государственном учреждении Дальневосточного научного центра физиологии и патологии дыхания Сибирского отделения Российской академии медицинских наук. ,

Научный руководитель: академик РАМН, доктор медицинских наук, профессор

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор

Луценко Михаил Тимофеевич

Бенеманский Виктор Викторович

доктор медицинских наук, профессор

Изатулин Владимир Григорьевич

Ведущее учреждение: Государственное учреждение научно-исследовательский институт Фармакологии ТНЦ, г. Томск

Защита состоится »^б^С^-е^*^- 2004 г. в Ф часов на заседании

диссертационного Совета Д 001.054.01 ГУ «Восточно-Сибирский научный центр Сибирского отделения РАМН»: 664003, Иркутск, ул. Тимирязева, 16.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГУ «Восточно-Сибирский научный центр Сибирского отделения РАМН»

Автореферат разослан » 2004 г.

Ученый секретарь диссертационного Совета, кандидат медицинских наук

Шолохов Л.Ф.

гоочг -ч

гъчеш)

1

Общая характеристика работы

Актуальность исследования

В настоящее время не вызывает сомнений, что герпес-вирусная инфекция на разных сроках гестации оказывает негативное влияние на плод и приводит к выраженным нарушениям его внутриутробного развития, к высокой постнатальной заболеваемости и смертности (Г И Герасимович и соавт, 1985; В Я. Кицак. 2004).

Характерная для вируса герпеса специфика распределения в организме позволяет ему в период активации воздействовать на функциональное состояние нервных центров, перемещаться из ганглиев по аксонам до эпителиальных клеток, где происходит его интенсивное размножение (В. А. Исаков, 1999). Такого рода локализация и перемещение вируса герпеса в организме позволяет инфекции широко внедряться в различные участки тела, токсично действуя на организм, особенно в период беременности (Ю К. Малевич и соавт., 1986; Б.Г. Тебелев и соавт, 1999). Этот факт диктует необходимость оценивания степени опасности герпес-вирусной инфекции для фетоплацентарного барьера При этом следует учесть, что неблагоприятные исходы беременности при вирусных инфекциях в основном связаны с несостоятельностью структурно-функциональной организации системы мать-плацента-плод (Б.И. Глуховец, 2002; М.Т. Луценко и соавт., 2000, 2003).

Однако вопросы функционирования фетоплацентарного комплекса при герпес-вирусной инфекции остаются мало изученными Имеющиеся немногочисленные сведения, касающиеся нейрогормонального фона, довольно скудны, а результаты исследований гормонального статуса фетоплацентарного комплекса относятся к поздним срокам беременности (И.И. Антипова, 1994; Л.Э. Кузьменко, 1994) Также остаются не до конца выясненными вопросы, отражающие связь между типом и путями проникновения вирусов герпеса через фетоплацентарный барьер и степенью выраженности возникающих при этом нарушений в системе мать-плацента-плод Тем не менее, большое количество экспериментальных и клинических работ, проведенных рядом авторов, дают основание полагать, что характер и степень выраженности адаптивно-приспособительных нейроэндокринных реакций у плода и новорожденного в условиях патологических изменений у матери, включая герпесную инфекцию, закладываются на раннем этапе эмбрионального развития и непосредственно связаны с функционированием отдельных звеньев нейрогормонального комплекса системы мать-плацента-плод. В зависимости от параметров компенсаторных реакций со стороны фетоплацентарного комплекса наблюдаются различные варианты ответной реакции нервной и эндокринной систем у плода и новорожденного в период родов и в раннем постнатальном периоде или на более поздних стадиях развития (И.П. Ларичева, 1984; В.М. Ищенко, 1988; Ю.И. Барышев, 1997; М.Т. Луценко и соавт., 2000, 2003).

В настоящее время получены факты, подтверждающие развитие осложнений беременности и патологии у плода при нарушении обменных процессов в условиях активации вирусной инфекции. Отмечено повышеии^ирэдщсщёмрсти ,

I ЬИГ, • >,ОТ! к А

I СПччриург

| 200 ^РК

плацентарного барьера продуктами липидного обмена (В.Я. Кицак, 2004), метаболитами окиси азота (в. Р^пагса й а1., 1996). На этом фоне нарушается „ биосинтез нейрогормонов в системе мать-плацента-плод при герпесной инфекции, которые изменяют характер маточно- и фетоплацентарного кровообращения (А.Н. Стрижаков и соавт., 1997; И.В. Довжикова, 2001). Увеличение маточно-пуповинно-плодовых кровеносных сосудов при герпесной инфекции в свою очередь повышает риск развития осложнений беременности: гипоксия, перинатальная патология плода, структурные, ферментативные и гормональные изменения в тканях плаценты на различных этапах ее развития (П. Кастельянос и соавт., 1986).

Выше указанные факторы позволяют предположить, что вирусные инфекции, в том числе герпес-вирусная, стимулируют появление ранних форм фетоплацентарной недостаточности в результате прямого токсического воздействия вирусного агента и влияния продуктов свободнорадикального происхождения в критические для плода периоды эмбрионального развития на фетальный тимус, надпочечники, ворсинки хориона, васкуляризацию ворсин и активность ферментативных реакций, регулирующих важнейшие обменные процессы в системе мать-плацента-плод (М.Т. Луценко и соавт., 2000, 2003).

Мы считаем, что такой подход к изучению и систематизации знаний в области некоторых патофизиологических механизмов нейрогормональной регуляции фетоплацентарного комплекса при герпес-вирусной инфекции позволит расширить понимание вопросов о взаимодействии персистирующей герпес-вирусной инфекции и фетоплацентарного барьера; оценить степень выраженности морфофункциональных и структурных нарушений мембраны хориального симпласта, надпочечников и легких плода; рассмотреть некоторые аспекты ядерного метаболизма и работы ДНП-комплекса в симпласте плаценты при герпесной инфекции; изучить на гистохимическом уровне нейрогормональные реакции хориального симпласта.

Цель исследования

Целью данной работы явилось изучение характера морфофункциональных изменений фетоплацентарного барьера и патофизиологических механизмов нейрогормонального регулирования системы мать-плацента-плод при герпес-вирусной инфекции.

Задачи исследования

1. Выявить морфофункциональные изменения симпласта хориона, надпочечников и легких плода, возникающие при герпес-вирусной инфекции.

2. Определить особенности нарушений ядерного метаболизма и степени выраженности обменных процессов, возникающих в симпласте хориона при герпесной инфекции.

3. Дать характеристику нейрогормонального статуса системы мать-плацента-плод при герпес-вирусной инфекции.

4. Провести корреляцию между содержанием биогенных аминов и активностью инактивирующих систем в фетоплацентарном комплексе при герпесной инфекции.

Научная новизна исследования

В настоящей работе дается комплексная оценка состояния нейрогормонов в системе мать-плацента-плод при герпес-вирусной инфекции Выявлены особенности их функционирования, проведена корреляция между показателями отдельных нейрогормонов и степенью тяжести заболевания.

В работе представлена морфологическая, ультрастуктурная, гистохимическая и биохимическая характеристика состояния фетоплацентарного барьера на фоне герпесной инфекции.

Впервые изучены патофизиологические аспекты действия вируса герпеса на мембрану, протоплазму и процессы ядерного метаболизма в симпласте хориона.

Изучена морфология надпочечников и легких плода, погибшего в силу высокой герпесной интоксикации у беременной.

Подробно дана биохимическая и гистохимическая оценка содержания серогонина, катехоламинов, их предшественников и метаболитов в симпласте. Исследованы процессы метаболизма данных веществ в тканях плаценты.

Проведена диагностика гормональной функции фетоплаценгарной системы у беременных с герпесной инфекцией.

Практическая значимость

Комплексный подход к оценке этиопатогенеза герпесной инфекции позволяет судить о состоянии системы мать-плацента-плод в условиях активации вируса герпеса Результаты исследований с одной стороны, дают возможность судить о нейрогормональных перестройках, происходящих в организме беременных, инфицированных вирусом герпеса, и с другой - отражают характер морфофункциональных изменений фетоплацентарного барьера. Этот факт является прогностическим критерием патологического течения беременности и коррелируется с тяжестью клинического проявления заболевания.

Полученные результаты позволяют, говорить о целесообразности включения данных диагностического комплекса в схему обследования, и могут быть использованы для диагностики осложнения беременности, протекающей при герпес-вирусной инфекции.

Результаты работы внедрены в практическую деятельность клинических подразделений ГУ ДНЦ ФПД СО РАМН. Получен положительный отзыв на Ученом Совете ГУ ДНЦ ФПД СО РАМН от 30.05.04 г.

Положения, выносимые на защиту

1. В инфицированной вирусом герпеса плаценте, надпочечниках и легких плода наблюдаются различной степени выраженности нарушения дифференцировки тканевых структур.

2. У беременных, инфицированных вирусом герпеса, отмечается нарушение нейрогормональной регуляции системы мать-плацента-плод, которое выражается в накоплении в периферической крови и тканях плаценты серотонина, гистамина, катехоламинов, их предшественников и ослаблении процессов инактивации моно- и диаминов.

3. Развитие гормональной дисфункции фетоплацентарного барьера на фоне герпес-вирусной инфекции происходит при нарушении серотонинового метаболизма, активации окислительных процессов, повышении реакции на N0-синтазу, гуанилатциклазу и снижении аденилатциклазной активности в хориальном симпласте.

4. Структурно-функциональные изменения ядерного аппарата при герпесной инфекции характеризуются усилением процесов метилирования ДНП-комплекса, подавлением активности механизмов трансаминирования, приводящие к снижению синтеза ДНК, РНК, а также уменьшению содержания белков с вН- и ЫН2-группами, как в ядрах, так и в цитоплазме сим пласта хориона.

Апробация работы

Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на заседаниях Ученого Совета ГУ ДНЦ ФПД СО РАМН (2003, 2004 г.); на итоговой научной конференции в ГУ ДНЦ ФПД СО РАМН совместно с департаметом Здравоохранения Амурской области «Фетоплацентарная система при герпесной инфекции» (Благовещенск, 18-19 сентября 2003 г.); на научной конференции ГУ ДНЦ ФПД СО РАМН «Молодые ученые - науке» (Благовещенск, 8 февраля 2003 г.); на научной конференции ГУ ДНЦ ФПД СО РАМН совместно с АмурКНИИ ДВО РАН «Молодые ученые - науке» (Благовещенск, 10 февраля 2004 г.); на пятой региональной межвузовской научно-практической конференции «Молодежь XXI века: Шаг в будущее» (Благовещенск, 12-13 мая 2004 г.).

Публикации

По теме диссертации в центральной печати опубликовано 6 печатных работ.

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 187 страницах машинописного текста и имеет 10 таблиц, 3 схемы и 76 рисунков. Собственно текст - 105 страницах. Работа состоит из введения, обзора литературы, шести глав собственных исследований, обсуждения, выводов, раздела «Внедрения в практику» и списка литературы, содержащего 156 отечественных и 69 зарубежных источника.

Весь материал, представленный в диссертации, получен, обработан и проанализирован лично автором.

Материал и методы исследования

Обследование беременных осуществлялось на базе отделений клиники и консультативной поликлиники ГУ ДНЦ ФПД СО РАМН совместно с научным подразделением - лабораторией «Механизмы этиопатогенеза и восстановительных процессов дыхательной системы при неспецифичсских заболеваниях легких».

С целью изучения этиопатогенеза герпес-вирусной инфекции и состояния нейрогуморально-гормональных механизмов регуляции женского организма было обследовано 126 беременных в возрасте от 18 до 35 лет в I, II и III триместрах. Все пациентки обследовались в динамике на всех этапах беременности. За время нахождения в стационаре проводилось трехкратное исследование периферической крови и мочи на содержание в ней гормонов нейроэндокринного комплекса. Клинический диагноз был выставлен на основании клинико-лабораторного обследования с применением функциональных и иммуноферментных методов.

В зависимости от тяжести клинических проявлений беременные, больные герпесом, были разделены на три группы В первую группу вошли беременные, перенесшие обострение герпес-вирусной инфекции на сроке 10-12 недель (п = 46), вторая - беременные с рецидивом герпесной инфекции на 14-24 неделях (п = 38) и третья - с обострением на 28-34 неделях (п = 42). Группу сравнения составили 30 практически здоровых беременных на разных сроках гестации.

Одновременно проводилось морфологическое, гистохимическое и биохимическое исследование тканей плацент на сроке 5-14 недель (15 случаев) и 38-40 недель (12 случаев) полученных от беременных, перенесших рецидивы герпес-вирусной инфекции до и во время беременности. В контрольную группу вошел материал плацент от практически здоровых беременных на тех же сроках гестации (30 случаев).

Биохимические методы исследования

Степень активности нейрогормональных реакций фетоплацентарного комплекса оценивали по показателям биогенных аминов, плацентарных и фетальных гормонов в периферической крови, моче и гомогенатах плаценты.

Периферическую кровь для исследования забирали непосредственно перед определением серотонина и гистамина в стеклянные пробирки, содержащие 1,34% раствор оксалата натрия. Для исследования активности ферментативных систем и гормонов использовали кровь, не содержащую коагулянтов. Сыворотку получали центрифугированием при 3000 об/мин в течение 15 минут.

Свежую плацентарную ткань гомогенизировали с трехкратным количеством фосфатного буфера рН 7,2 в гомогенизаторе сначала 5 мин. при 8000 об/мин, а затем 25 мин. - при 4000 об/мин при комнатной температуре. Осадок удаляли. Над осадочную жидкость фильтровали. Супернатант использовали для определения биологически-активных веществ методом ИФА, указанным ниже.

Сбор мочи производился в ^течение суток. Из общего объема для исследования забиралось в контейнер 10-15 мл. мочи с добавлением консерванта 6М раствора соляной кислоты.

Для оценки функциональной активности нейрогормонального фона системы мать-плацента-плод использовались следующие биохимические методы- а) фтоорометрический метод: - выявление серотонина и гистамина производилось по ЛЯ. Прошиной Метод основан на экстракции, элюции и конденсации с О-фталевым альдегидом гистамина и нингидрином -

серотонина. Флюоресценцию, образовавшихся флюорофоров, измеряли на флюориметре «Hitachi» (Япония); - активность МАО и ДАО оценивали по методу Г.А. Сиворакша и Ю.Н. Сидельникова. В основу метода положено окислительное дезаминирование серотонина и гистамина. Об активности ферментов судили по убыли аминов;

б) спектрофотометрический метод: - концентрацию 17-кетостероидов в моче беременных определяли спектрофотометр ическим методом с использованием набора реагентов «Sigma Diagnostics», (USA);

в) иммуноферментный метод анализа: - содержание серотонина и 5-гидроксииндоламиноацетата в периферической крови, моче и тканях плаценты выявляли методом твердофазного ИФА. При этом использовали наборы реагентов «ШЬ», (Germani). Определение уровня указанных веществ проводили на анализаторе иммунноферментных реакций АИФР-01 «Униплан», (Москва); -оценку показателей гормональной активности фетоплаценгарной системы беременных выполняли на основе полученных величин содержания в крови и гомогенате эстрадиола, эстриола, 17-ОН-прогестерона «DRG», (USA), прогестерона - ЗАО «НВО Иммунотех», (Москва) и ДЭАС - ЗАО «Алкор Био», (Санкт-Петербург); - уровень плацентарных и плодовых гормонов оценивали по содержанию в крови беременной а-фетопротеина - ЗАО «Вектор-Бест», (Новосибирск) и гормона передней доли гипофиза - пролактина - ООО «Хема-Медика», (Москва); - состояние щитовидной железы оценивали по уровню тиреотропного гормона, трийодгиронина и тироксина - ЗАО «Алкор Био», (Санкт-Петербург); - содержание кортизола в крови оценивали иммунно-ферментным методом, с использованием реагентов ЗАО «Алкор Био», (Санкт-Петербург); - идентификация вируса герпеса проводилась методами ИФА и ПЦР.

Морфо-гистохимические методы

Результаты морфологических исследований образцов плацент были проанализированы с помощью световой и электронной микроскопии (Г. Г Автандилов, 1962, A G E. Paerse, 1962, R.D. Lillie, 1969).

Для электронно-микроскопических исследований материал фиксировали на холоде в 2,5% глютаральдегиде на 0,1 М кокадилатном буфере при рН 7,4 в течение часа. Далее его отмывали в соответствующем буфере с добавлением сахарозы. Последующую фиксацию проводили в 2% растворе четырех окиси осмия в течение 20-30 минут. После дегидратации в серии спиртов и ацетона образцы заливали в смесь смол аралдит и эпон-812. Полутонкие срезы толщиной 1 мкм готовили на ультрамикротоме «LKB-8800» (Швеция) и окрашивали, толуидиновым синим.

Гистохимические методы проводили на парафиновых и криостатных срезах после фиксации 4% раствором параформальдегида на фосфатном буфере (рН 7,4).

Для морфологических исследований обмена гистонов и белков цитоплазмы материал фиксировался в спирт-формалине и заливался в парафин. Гистоны окрашивали в 0,125% растворе амидочерного Б при рН 8,2 в течение 20 минут при температуре 25°С.

Метальные группы окрашивали 0,1% раствором азура А при рН 6,2 и 37°С в течение 20 минут Препараты подвергались цитофотометрическому анализу на цитофотометре фирмы «Mecos».

Для анализа были применены следующие методы' а) общегистологические-окраска срезов гематоксилином Бемера и по ван Гизону для изучения общего плана строения тканей плаценты и дефинитивных органов плода;

б) гистологические: - триптофан выявляли по Адамсу; - активность серотонина оценивали люминесцентной микроскопией; - индол выявляли по Берстону; - активность моноаминооксидазы оценивали методом Гленнера; -тирозин выявляли по Берстону; - активность тирозиназы выявляли по Роскину;

- адреналин выявляли по Хилларну; - активность норадреналиндегидрогеназы оценивали по методу, разработанному в ГУ ДНЦ ФПД СО РАМН (на основе Z. Loida); - гистидин выявляли по Пирсу; - выявление накопления гистамина по Ch Champy и R. Coujard с помощью солей осмия и ртути; - выявление активности ферментов аденилатциклазы и гуанилатциклазы по J.Reik et al., в модификации Б.Я. Рыжавского и лаборатории ГУ ДНЦ ФПД СО РАМН; -выявление активности НАДФН-диафоразы (дает информацию о состоянии внутриклеточного окисления и активности NO-синтазы) по методу Д.Э. Коржевского; - выявление активности фермента аргининдегидрогеназы по методу, разработанному в ГУ ДНЦ ФПД СО РАМН; - выявление активности фермента дегидроэпиандростендиолсульфатдегидрогеназы по методу Z. Loida; -выявление активности фермента пиридоксальфосфатдепщюгеназы по методу, разработанному в ГУ ДНЦ ФПД СО РАМН; - выявление активности фермента гидрокортизондегвдрогеназы по методу, разработанному в ГУ ДНЦ ФПД СО РАМН; - перикиси жирных кислот выявляли по методу Винклер-Шульце с использованием в качестве субстрата п-амино-N, N-диметилфинилендиамина; -SH-группы выявляли по методу R.J. Barrnett и A.M. Seligman с добавлением в инкубационный раствор 2,2-дигидрокси-6, 6-динафтилдисульфида (ДДД); -NH2-группы выявляли по методу Берстона; - гистоны выявляли по Эренпрейсу;

- ДНК и РНК выявляли по методу Эйнарсона.

Для каждого гистохимического метода были поставлены соответствующие контроли.

Вариационно-статистический анализ

Статистическая обработка данных проводилась при помощи персонального компьютера, с использованием программ- Microsoft Excel, Microsoft Word.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Обмен гормонов и биогенноактивных веществ у беременных с герпес-вирусной инфекцией

Как отмечалось, различными авторами, вирусы семейства Herpesviridae проявляют свою активность либо при неблагоприятных условиях окружающей срсды, оказывающих влияние на организм, либо при нарушении гомеостаза организма - носителя вирусной инфекции. Беременность является

сильным фактором, влияющим на весь нейроэндокринный комплекс женского организма. ,

По нашим данным типичное проявление герпес-вирусной инфекции было установлено на ранних сроках гестации (10-12 недель). Среди женщин, ранее не часто болевших этой инфекцией, титр антител к вирусу простого герпеса 1:12800 фиксировался в 30% случаев, в 50% случаев регистрировался титр антител 1:6400 и только у 20% беременных обострение заболевания выражалось титром антител 1:3200.

Поскольку основным сосредоточением вируса герпеса являются нервные центры головного мозга (гипоталамо-гипофизарная область) и нервные ганглии спинного мозга, то при его активации происходит поражение нервных структур и механизмов нейрогуморально-гормональной регуляции, затрагивая при этом основные зоны выработки биогенноактивных веществ (серотонин). В результате чего нарушается взаимоотношение между гипоталамусом и надпочечниками (синтез катехоламинов) и выработкой гистамина (эозинофилы).

При анализе результатов нашего исследования было установлено, что при не осложненном течении беременности с увеличением срока гестации происходило постепенное увеличение активности периферической серотонинэргической системы. Содержание серотонина в течение нормально протекающей беременности находилось в пределах значений от 0,42±0,03 мкмоль/л (10-12 недель) до 0,86±0,07 мкмоль/л (39-40 недель). Одновременно с нарастанием показателей серотонина в крови усиливалась дезаминирующая способность МАО. Активность фермента за время беременности выросла в 2,1 раза. Данный факт свидетельствует о том, что МАО, участвуя в деградации серотонина, вызывающего сокращение гладкой мускулатуры и отторжение плаценты, поддерживала их уровень в пределах физиологической нормы, что имело значение для оптимальной продолжительности беременности. Следует заметить, что сформировавшиеся изменения в функциональной активности серотонинэргической системы в организме беременной являются генетически детерминированным процессом. Это объяснялось способностью серотонина выступать в роли морфогенетического сигнала, моделируя развитие, рост и жизнеспособность плода.

При герпесной инфекции независимо от времени рецвдива организм беременной остро реагировал на обострение заболевания. Появлялись признаки иммунодепрессии на фоне усиленной выработки и накоплении в периферической крови серотонина, высокий уровень которого сохранялся на всем протяжении беременности, вплоть до родов. В среднем значения моноамина в крови находились в пределах от 1,16±0,01 мкмоль/л до 1,37±0,05 мкмоль/л. Регистрируемое значительное повышение уровня биогенных аминов у беременных, по-видимому, было направлено на поддержание оптимальных метаболических процессов вследствие индукции энергетических ресурсов организма беременной Однако, затянувшаяся интенсификация процессов функционирования серотонинэргической системы при герпесе на протяжении всей беременности, чревата возможными осложнениями в виде снижения реактивности организма вплоть до срыва сформировавшихся компенсаторно-

приспособительных реакций. Данное суждение в полной мере подтверждается неоднозначным количественным содержаниеч на протяжении всей беременности при герпесной инфекции МАО Так в первом триместре в периферической крови беременных, инфицированных вирусом герпеса, регистрировался более высокий уровень МАО (45,36±3,1 мкмоль/л/ч). В последующем эти показатели снижались до 22,45±4,3 мкмоль/л/ч и 19,16±1,4 мкмоль/л/ч, соответственно, во втором и третьем триместрах. В целом все же активность моноаминоксидазы при герпесе подавлялась на всех этапах беременности.

Изучение состояния метаболической активности МАО позволило установить, что во всех исследуемых группах беременных с герпес-вирусной инфекцией происходило снижение экскреции 5-гидроксииндоламиноацетата (5-ГИАА) с мочой. На сроке 10-12 недель беременности при обострении герпеса содержание 5-ГИАА находилось в пределах 42,32±9,61 ммоль/л. В последующем также происходило падение показателей метаболита - 67,41±7,45 ммоль/л и 71,29±7,48 ммоль/л, соответственно на сроке 14-24 и 28-36 недель. При отсутствии признаков заболевания у беременных и высокой метаболической активности периферической серотонинэргической системы отмечалось постепенное повышение уровня конечного метаболита в моче на разных этапах беременности.

Особый интерес вызывали данные периферической крови беременных в родах, перенесших обострение герпес-вирусной инфекции на 10-12 недели беременности и пуповинной крови новорожденных в отношении активности процессов синтеза и распада биогенных аминов. Уровень серотонина в родах при герпесе повышался примерно в 2 раза, в пуповинной крови - в 1,9 раз. Активность МАО снижалась до 58,06±2,93 мкмоль/л/ч - показатели периферической крови беременных в родах (контроль - 124,88±1,95 мкмоль/л/ч), и до 64,74±1,06 мкмоль/л/ч - в пуповинной крови новорожденных (контроль - 132,73±3,65 мкмоль/л/ч).

В такой ситуации избыточное содержание серотонина обуславливало довольно неблагоприятный прогноз: интенсификацию перекисного окисления липидов, повышение спазма гладкой мускулатуры матки и кровеносных сосудов.

В этом плане настораживали наши данные о высоком содержании серотонина непосредственно в тканях изолированной плаценты, полученной от женщин с герпес-вирусной инфекцией в результате прерывания беременности в сроки гестации 5-9 недель и в родах на сроке 38-40 недель. Иммуноферментным методом было выявлено повышение концентрации моноамина в гомогенатах при герпесе в 1,5-3 раза, по сравнению с контролем. Отсюда возникали реальные предпосылки выраженных нарушений в гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой системе, сопровождающихся метаболическим сдвигом у плода и новорожденных, матери которых перенесли обострение герпес-вирусной инфекции на ранних сроках беременности.

Наряду с биохимическими показателями гистохимически мы отмечали наличие серотонина и его предшественника - триптофана в симпласте хориона

уже на ранних стадиях развития эмбриона. Анализ состояния моноамицэргической системы фетоплацентарного барьера показал, что в плаценте существуют «ненервные» структуры синтеза биогенноактивных веществ (серотонин) из предшественников (триптофан) и механизмы их инактивации (МАО). На фоне герпес-вирусной инфекции происходило нарушение метаболизма периферического и тканевого (плацентарного) серотонина Появлялись признаки усиленного образования и накопления в тканях плаценты эндогенного серотонина. В свою очередь, экзогенный серотонин, поступавший из крови матери, также обладал патогенностью по отношению к плаценте.

Следует отметить, что при герпес-вирусной инфекции в системе мать-плацента-плод изменениям подвергалась гистаминэргическая система. Высокоактивная герпесная инфекция способствовала повышению содержания периферического и тканевого (плацентарного) гистамина. Регистрируемое увеличение концентрации гистамина происходило, вероятно, при сниженной дезаминирующей способности ДАО.

Во время физиологически протекающей беременности отмечалось постепенное повышение в крови уровня другого стресс гормона - гистамина к концу третьего триместра. Данное явление объяснялось необходимостью стимуляции гладкой мускулатуры матки во время родов. Однако если организм беременной подвергался интоксикации вследствие обострения герпес-вирусной инфекции, то характер обмена биогенноактивных веществ изменялся. Клиренс гистамина усиливался в несколько раз, что становилось угрожающим для системы мать-плацента-плод, поскольку это приводило, вероятно, к усилению сократительной активности гладкой мускулатуры матки и нарушению проницаемости капиллярного русла фетоплацентарного барьера.

Одновременно мы провели исследования по выявлению гистамина в плацентах, взятых от практически здоровых женщин и беременных, которые перенесли обострение герпес-вирусной инфекции в конце третьего триместра. В последнем случае отмечалось накопление гистидина в симпласте хориона, и реакция становилась интенсивной (в норме она практически отсутствовала), что не могло не сказаться на активности гистамина, которая при обострении герпесной инфекции значительно повышалась.

В ходе исследования также было установлено, что компенсаторно-приспособительные реакции фетоплацентарной системы при герпесной инфекции характеризовались динамическими изменениями симпатико-адреналовой системы. Повышенная активность гипоталамо-гипофизарно-надпочечникового комплекса матери и плода наблюдалась на фоне высокого содержания серотонина при титре антител к вирусу простого герпеса 1:12800 Обнаружено, что при герпес-вирусной инфекции происходила активизация обмена тирозина и его накопление в симпласте ворсин хориона Параллельно мы провели гистохимические реакции на присутствие в ворсинках хориона адреналина и активность норадреналиндегидрогеназы. Результаты нашего исследования показали, что в период высокого нейрогормонального напряжения в организме беременной при обострении герпес-вирусной

инфекции отмечалось накопление в симпласте хориона большого количества адреналина - и обнаруживалась интенсивная . реакция на норадреналиндегидрогеназу.

Таким образом, герпес-вирусная инфекция, вырабатывая токсины, глубоко повреждала как структуру клеточных мембран, так и изменяла в сторону патологических отклонений общий метаболизм организма беременной.

На этом метаболическом фоне мы изучали гормональную активность фетоплаценгарного комплекса. Было установлено снижение показателей плацентарных (эстрадиол, эстриол, прогестерон, пролактин), плодовых (а-фетопротеина, ДЭАС, 17-ОН-гтрогестерона, 17-кетостероидов) и повышение уровня глюкокортикоидных (кортизола), тиреоидных гормонов (трийодгиронина). Так увеличение содержания кортизола в крови у беременных в стадии обострения инфекции происходило в 2-2,5 раза. В этом случае имела место гиперкортизолемия, которая развивалась, по-видимому, при повышенной концентрации кортизола, серотонина и сопровождалась активацией системы гипофиз-надпочечники у матери и плода при обострении герпеса. Вероятно, данный процесс находился в прямой зависимости от состояния моноаминэргической системы мозга и наоборот.

Во время беременности, осложненной герпесом, изменялся не только уровень кортизола, но и половых стероидов (эстрадиола и прогестерона), пролактина. По нашим данным, на ранних сроках беременности при отсутствии признаков герпетической интоксикации (контроль) уровень эстрадиола в крови составил 20706,66± 116,70 пмоль/л, в последующие недели его количество увеличивалось и достигало пика к концу второго и третьего триместра - 27703,12±0Д2 и 31000,0±596,23 пмоль/л, соответственно. Изучение изменения содержания эстрадиола в крови при обострении герпесной инфекции у беременных показало, что уровень этого гормона снизился на 10-12 неделе беременности в среднем до 20589,96±203,05 пмоль/л, на 14-24 недели - 27192,24±852,2 пмоль/л, и на 28-34 неделе - 27800,84±240,548 пмоль/л.

Анализ результатов динамики содержания эстриола в крови беременных, инфицированных герпесом, показал, что уровень гормона находился в пределах от 6,03±0,17 нмоль/л на сроке гестации 10-12 недель, до 29,15±0,6 нмоль/л и 41,64±0,12 нмоль/л, соответственно, на 14-24 неделях и 28-34 неделях.

Концентрация прогестерона в крови у беременных с обострением заболевания составила 45,03±3,19 нмоль/л (10-12 недель) (контроль - 83,96±5,31 нмоль/л), 61,80±4,12 нмоль/л (контроль - 111,28±5,89 нмоль/л) и 123,76±9,31 нмоль/л (контроль - 149,76±12,1 нмоль/л), соответственно на сроке 14-24 недели и 28-34 недели.

Поскольку локализация вируса герпеса чаще всего связана с нервными ядрами как центрального, так и периферического характера, то через стрессорную моноаминэргическую систему наблюдалось, как мы полагали, влияние на эндокринный гомеостаз беременной. Усиленное образование серотонина нервными ганглиями при обострении герпес-вирусной инфекции у беременной тормозило выработку стероидов не только на ранних сроках, но и в конце беременности. В ходе исследования было установлено, что в родах концентрация

эстрадиола у беременных с герпесом снизилась и составила 29345+143,96 пмоль/л (контроль - ЗЛ602±203,44 пмоль/л). Для прогестерона снижение показателей происходило до уровня 186,98±11,4 нмоль/л (контроль - 217,52±14,7 нмоль/л).

Изменение состояния системы мать-плацента-плод при герпесе привело к нарушению морфофункциональной организации надпочечников и печени плода. В пуповинной крови выявлялся низкий уровень эстрогенов и гестагенов. Уменьшение содержания эстрадиола происходило в 2,1 раза, эстриола - 1,8 раз, а прогестерона - в 1,17 раз.

Наряду с определением содержания прогестерона мы изучали динамику изменений его метаболита по биосинтезу в коре надпочечников глюкокортикоидов - 17-ОН-прогестерона. Неожиданностей в данном случае не было, параллельно со снижением синтеза прогестерона убыло содержание и 17-ОН-прогестерона: наименьшее его количество было в тот момент, когда в организме беременной резко возрастал титр антител к вирусу герпеса (1:12800) По мере восстановления защитных сил организма и снижения титра антител до 1:400 концентрация 17-ОН-прогестерона восстанавливалась.

На фоне герпес-вирусной инфекции, особенно при обострении ее на ранних сроках беременности (титр антител 1:6400-1:12800) нами было выявлено подавление синтеза андростендионов в надпочечниках. В норме их уровень во время беременности находился в пределах значений от 52,05+0,92 до 105,1±0,67 мкмоль/сут. При герпетической патологии на 10-12 недели беременности в среднем экскреция 17-кетостероидов с мочой составила 39,91+0,65 мкмоль/сут. На 14-24 неделе их уровень определялся в среднем 67,67±0,5 ммоль/сут, а к концу беременности концентрация 17-кетостероидов возрастала до 97,85+0,9 ммоль/сут.

Не менее важна роль и пролактина в развитии осложнений беременности. В контроле наблюдалось достоверное нарастание уровня пролактина, что обусловлено ролью этого гормона в лактопродукции. Обострение герпеса, ведущее к нарушению связей гипоталамуса и гипофиза, из-за которых не понижался уровень кортизола и серотонина, вероятнее всего, снижало экспрессию пролактина в организме беременной. Данное предположение подтверждалось нашими данными. Так у инфицированных вирусом герпеса беременных на сроке 10-12 недель было установлено снижение показателя пролактина до 497,4+110,2 мМЕ/л (контроль - 1491,1±18,6 мМЕ/л). Во втором и третьем триместрах содержание гормона составило 872,9+145,6 мМЕ/л (контроль - 2486,3+39,5 мМЕ/л) и 972,4+183,3 мМЕ/л (контроль - 3736,2+52,1 мМЕ/л), соответственно.

Из выше изложенного следует, что важным патогенетическим компонентом герпесной инфекции в организме беременной явилось изменение регуляции гормональной деятельности. Простым данный процесс назвать нельзя, так как в нем принимали участие одновременно как организм матери, так и развивающийся зародыш, а в последствии и плод. Следует отметить, что гормональная система принципиально изменялась как по локализации, так и по схеме биосинтеза. Так для сохранения беременности гормоны (эстриол и прогестерон) приобретали новые черты своего места синтеза. Желтое тело яичника и плацента,

а точнее хорнальный симпласт, становился одним из основных мест выработки этих гормонов. Поскольку без участия виновника всего этого процесса - плода, формирование данной группы гормонов невозможно, в стероидогенез включались дефинитивные органы: надпочечники и печень плода, где выполнялись промежуточные этапы биосинтеза гормонов под контролем ферментативной системы организма матери, сосредоточенной в симпласте хориона. Изменение концентрации одного гормона не являлось признаком гормональной дисфункции фетоплацентарной системы. Подтверждением ее служило динамическое наблюдение за уровнями не только конечных продуктов сгероидогенеза (эстрадиола, эстриола, прогестерона), но и промежуточных продуктов обмена, прежде всего дегидроэпиандростерон-сульфата.

Если обострение герпесной инфекции приходилось на 8-10 неделю развития эмбриона, количество ДЭАС достоверно снижалось. Это свидетельствовало, что формируемая ткань корковой зоны надпочечников морфофункционально легко блокировалась в своей ферментативной активности под воздействием токсичных вирусных продуктов. При герпесной инфекции содержание ДЭАС в крови на 1214 неделе развития было сниженным и составило 7,15±0,39 мкмоль/л. В конце второго и в течение всего третьего триместров показатели ДЭАС находились в пределах значений от 9,45±0,65 мкмоль/л до 12,15+0,81 мкмоль/л. В контрольной группе показатели ДЭАС находились в пределах от 8,23±0,19 мкмоль/л до 13,50±0,45 мкмоль/л.

Интересным представлялся анализ зависимости активности синтеза ДЭАС от титра антител к вирусу герпеса. Полученные данные свидетельствовали, что интенсивность процесса образования ДЭАС прямо пропорциональна уровню антител к вирусу герпеса в организме матери. При нарастании титра антител к вирусу герпеса от 1:6400 до 1:12800 количество циркулирующего дегидроэпиандростерон-сульфата в крови беременных снижалось до минимума и составило 9,72±0,69 мкмоль/л и 8,91±0,42 мкмоль/л, соответственно. Прослеживая дальнейшую судьбу этих беременных, мы отмечали постепенное восстанавление ферментативной активности плацентарной системы и способности клеток коркового вещества надпочечников плода синтезировать ДЭАС. В дальнейшем количество образующегося дегидроэпиандростерон-сульфата через 2-3 месяца отсутствия признаков инфекции возрастало на 30-31% Одновременно были проведены гистохимические реакции на предмет выявления дегидроэпиандростевдионсульфат-дегидрогеназной активности. Нами показано, что в момент обострения герпес-вирусной инфекции в симпласте хориона на 1218 неделях развития интенсивность ДЭА-сульфатдегидрогеназной реакции была значительно снижена, что свидетельствовало о выраженных структурных и метаболических изменениях в тканях плаценты и надпочечниках плода

Рассматривая морфологическое состояние надпочечников на момент прерывания беременности в силу высокой герпес-вирусной интоксикации, мы убеждались в морфофункциональной несостоятельности этого зародышевого органа в момент длительного обострения герпесной инфекции. Надпочечники

плода после прерывания беременности характеризовались недоразвитием коркового вещества, появлялось множество расширенных капилляров, заполненных лимфоцигоподобными клетками, порой покидающими очаги их скопления Формировались многочисленные узелковые структуры из эпителиальных клеток, окруженных соединительной тканью. Клубочки часто были опустошены В пучковой зоне клетки увеличены в размерах, цитоплазма становилась прозрачно-светлой и сильно вакуолизированной. На лицо все признаки дегенеративных изменений в корковом веществе надпочечников при герпес-вирусной инфекции.

а-фетопротеин - гликопротеид, вырабатываемый печенью зародыша. Данный гормон рассматривался нами как кофактор, принимающий активное участие в процессе синтеза эстрогенов в плаценте во время беременности Отмечалась следующая закономерность в отношении содержания а-фетопротеина при герпес-вирусной инфекции. В момент обострения инфекции и в течение нескольких последующих недель (1-2 после обострения) просматривалась тенденция к снижению концентрации этого белка во время беременности на 50-57%.

Таким образом, мы склонны считать, что коррелятивная связь между интенсивностью синтеза эстрогенов и количественным содержанием а-фетопротеина вполне логична, так как речь шла о функциональной компетентности печени эмбриона, принимающей активное участие в процессе биосинтеза предшественников эстрогенов. Присутствие токсических продуктов при герпес-вирусной инфекции в организме матери затрагивало и ферментативную активность паренхимы печени плода, что и приводило к угнетению выработки а-фетопротеина, лишая хориальный симпласт участия важного кофактора в перестройке андрогенов в гормоны эстрогенного профиля.

Характер изменений во время беременности при герпес-вирусной инфекции во многом определялся функционированием щитовидной железы. У беременных, инфицированных вирусом герпеса, имело место, выраженное проявление тириодида, которое отмечалось не только вследствие снижения уровня эстрадиола, влияющего на содержание основного транспортного протеина -тироксинсвязывающего глобулина, активирующего влияния серотонина на фолликулярные клетки щитовидной железы, но и за счет нарушения микробицвдных процессов в организме беременных. Противоинфекционная защита, выполняемая системой нейтрофильного фагоцитоза, развивается на фоне мощной миелопероксидазной системы, антибактериальное действие которой проявляется в присутствии таких галогенов как йод и хлор. Имеются данные о том, что недостаток йода в организме приводит к снижению фагоцитарной активности гранулоцитов.

Нами было установлено, что при обострении герпес-вирусной инфекции в организме беременных после иммунной коррекции фагоцитарная и миелопероксидазная активность достоверно повышалась, по сравнению с

контролем Параллельно с изменениями миелопероксидазной активности, обнаруживаемой в нейтрофилах крови, нарушалось состояние щитовидной

железы. Во время рецидива персистирующей герпесиой инфекции (титр антител 1:6400-1:12800) происходило повышение уровня Т3, при сниженных, значениях ТТГ, Т4. Уменьшение в 1,23-1,55 раза содержания тироксина в крови беременных с герпесом происходило, вероятно, вследствие ускоренного перехода Т4 в Т3. В то же время у беременных с герпес-вирусной инфекцией отмечалось снижение уровня ТТГ в крови, наиболее выраженное на сроке 25-34 недели, по сравнению с контролем. Этот факт объяснялся, с одной стороны, недостаточным снабжением щитовидной железы йодом в связи с повышенной экскрецией йода с мочой. С другой стороны, потеря йодида во второй половине беременности усиливалась из-за того, что часть материнского неорганического йодида потреблялась фетоплацентарным комплексом и шла на синтез тирсоидных гормонов плода. Одновременно в крови беременных с герпесом определялась концентрация трийодгиронина. Нами выявлено повышение в 1,5-1,6 раза, по сравнению с контролем, секреции Т3.

Результаты проведенных исследований показали, что функциональное состояние периферической серотонинэргической и миелопероксидазной системы во время беременности, осложненной герпес-вирусной инфекцией повлияло на гормонобразующую функцию щитовидной железы. Выявленное нами значительное повышение уровня трийодгиронина отражалось на функциональном состоянии фетоплацентарного комплекса, с одной стороны, и привело к неблагоприятным последствиям для новорожденного - с другой.

Как уже отмечалось, герпес-вирусная инфекция характеризуется рядом патогенетических особенностей. Цитопатическое действие вируса обусловлено строго внутриклеточным паразитизмом. Вирусы запускали генетическую программу гибели (апоптоз) клеток. Механизм цитопатического действия вируса герпеса обусловлен подавлением синтеза клеточных ДНК, РНК и белков, разрушением лизосом и митохондрий, высвобождением ферментов, которые оказывают пагубное влияние на клеточные структуры (В.Я. Кицак, 2004). Нарушение метаболической активности ферментов приводило к усиленной выработке серотонина, катехоламинов. Последние блокировали синтез плацентарных и плодовых гормонов.

Как показали проведенные исследования гомогенатов плацент, уже на самых ранних сроках эмбриогенеза (5-9 недель) в ворсинчетом хорионе на фоне герпетической инфекции менялось соотношение гормонов между дефинитивными и провизорными тканями. Наблюдаемое снижение уровня стероидных гормонов и их предшественников происходило на фоне сформировавшегося иммуннодефицита и усиленной выработки трансмиттеров. При обострении заболевания (титр антител 1:12800) отмечалось падение в 2-2,5 раза показателей ДЭАС и 17-ОН-прогестерона.

Уменьшение содержания промежуточных продуктов стсроидогенеза привело к значительному снижению в 5-8 раз показателей конечных продуктов стсроидогенеза - эстраднола, эстриола, прогестерона. Общая гормональная недостаточность на фоне формирующейся морфофункциональной перестройки хориальных тканей при герпесе повлияла и на синтез фетальных гормонов, в частности - а-фетопротеина, уровень, которого так же понижался

составил 14,17+1,03 МЕ/мл (контроль - 32,69±0,90 МЕ/мл).

Нарушение специфического механизма противовирусной защиты организма беременной - системы нейтрофильного фагоцитоза привело к повышению концентрации Т3 в тканях хориона. Высокий уровень тиреоидных гормонов в симпласте хориона на данном этапе развития эмбриона обеспечивался преимущественно за счет материнских гормонов, которые проникали через конечную капиллярную сеть париетального эндометрия в плодные оболочки, а затем в околоплодную жидкость.

В другом случае, если беременность была сохранена, то длительное присутствие рецидивирующей герпесной инфекции в организме матери, несомненно, отражалось на морфофункциональном состоянии фетоплацентарного барьера, что также привело к развитию гормональной фетоплацентарной недостаточности. Изучение содержания плодовых и плацентарных гормонов в гомогенате плаценты позволило установить нарушение процессов стероидогенеза в системе мать-плацента-плод. Отмечалось не только снижение ДЭАС, 17-ОН-прогестерона, но и эстрадиола, эстриола и прогестерона примерно в 1,8-2 раза. Незначительно повышенным оставался кортизол. Низкий уровень эстрадиола в симпласте хориона (21346,2±110,3 пмоль/л, контроль - 32325,9±125,8 пмоль/л), изменение активности системы нейтрофильного фагоцитоза, все это привело к тиреостимуляции, обусловленной функциональным перенапряжением щитовидной железы плода и усиленному образованию в ней Т3. С другой стороны, избыток тиреоидных гормонов в крови матери, как было показано нами ранее, диффундировал через плацентарный барьер непосредственно в кровоток плода и вызывал повышение концентрации последних.

Следовательно, при гипертиреозе матери, развивающимся на фоне герпесной инфекции, тиреоидная функция щитовидной железы плода уже внутриутробно была подвержена стимулирующему влиянию 111, вырабатываемого гипофизом.

Таким образом, на основании проведенных исследований логично утверждать, что реактивация латентно-персистирующей герпес-вирусной инфекции привела к нарушению системных нейроэндокринных процессов в организме беременной, на фоне которых развивалась структурная и ферментативная недостаточность фетоплацентарного барьера.

Морфофункциональная характеристика фетоплацентарного барьера при герпес-вирусной инфекции

Герпесная инфекция, вырабатывая токсины, патологически действовала на структуру клеточных мембран, изменяла метаболические реакции фетоплацентарной системы. На этом фоне мы изучали структурную основу и ферментативную активность фетоплацентарного барьера.

В условиях герпес-вирусной инфекции симпласт хориона подвергался мощной атаке со стороны вируса герпеса, приводя в действие гуанилат-аденилатциклазную систему. В норме у беременной в зоне хориального симпласта отмечалась высокая интенсивность аденилатциклазы по обе стороны

барьера. Подобная ситуация вполне объяснима, поскольку через фетоплацентарный барьер проходил интенсивный обмен продуктами метаболизма между организмом матери и кровью плода. Аденилатциклаза являлась основным источником запуска ферментативных реакций в цитоплазме хориального симпласта. Поэтому на всех этапах беременности мы отмечали в симпласте интенсивную реакцию. Одновременно мы определяли активность гуанилатциклазы, интенсивность которой в норме была умеренно выражена. В процессе обострения герпес-вирусной инфекции, когда тельца вируса проникали в цитоплазму хориального симпласта, токсические продукты антигена подавляли аденилатциклазную реакцию в фетоплацентарном барьере. В противоположность этому резко усиливался распад ГТФ и в цитоплазме симпласта, повышалась реакция на гуанилатциклазу.

В процессе воздействия антигена вируса герпеса на фетоплацентарный барьер и после вступления в эту реакцию основных мессенджеров: гормонов и вторичных посредников в виде аденилат- и гуанилатциклазы в цитоплазме симпласта развивалась высокоактивная реакция метаболической ферментативной перестройки Активизировался один из регуляторов обменных процессов цитоплазмы - МО-синтаза. Под действием оксида азота усиливалось действие гуанилатциклазы и подавлялась активность аденилатциклазы. При изучении активности ЫО-синтазы мы использовали в качестве маркера НАДФН-диафоразу. При обострении герпес-вирусной инфекции в период беременности резко усиливалась гистохимическая реакция на НАДФН-диафоразу в симпласте хориона. Конечно, в таких условиях не становилось неожиданным повышение гистохимической реакции в симпласте хориона на перекиси жирных кислот. Одновременно у этих же беременных, перенесших герпес-вирусную инфекцию, в симпласте ворсинок фиксировалось подавление реакций на выявление БН- и ИН2-групп.

Накопление МО-продуктов и гидроперекисей при высокой герпесной интоксикации разрушающе действует на фетоплацентарный барьер. В сложившейся ситуации мы отмечали грубые патологические изменения в тканевых структурах симпласта. В результате морфологических изменений появлялись признаки дезинтеграции ворсинчатого хориона, микроворсинки укорачивались, становились тонкими и в большинстве своем разрушались. Наружная мембрана симпласта сильно вакуолизировалась, а в отдельных пузырьках были видны осмиофильные тельца. В большинстве случаев при обострении герпес-вирусной инфекции в наружном слое симпласта таких вакуолей с тельцами возбудителя обнаруживалось много. Вирусные тельца иногда внедрялись мощным комплексом, проходили во внутрь цитоплазмы симпласта и отшнуровывались Отдельные вакуоли с тельцами вируса достигали ядра и вступали с ними в контакт При этом отмечалась реакция ядра на вирусное присутствие. Перинуклеарное пространство расширялось, а ядерный хроматин конденсировался. В толще хориального симпласта происходили существенные структурные изменения. Нередко вся цитоплазма сильно вакуолизировалась. Появлялись осмиоофильные ламеллярные тельца, многочисленые митохондрии

теряли кристы, превращаясь в опустошенные пузырьки. Поэтому структура матрикса хориального симпласта „ изменялась. Становилась неоднородной, исчезали мембраны, появлялись конгломераты из рибосомальной зернистости. В таких условиях отмечались признаки ферментативной и гормональной дисфункции фетоплацентарного барьера.

Структурные изменения в симпласте хориона на уровне структуры ДНП-комплекса и синтеза белка при герпесной инфекции

Подходя к вопросу о регуляции процессов развития зародыша и плода наше внимание, прежде всего, привлекло морфофункциональное состояние структуры, условно разделяющей организм матери и плода и одновременно обеспечивающей стабильность фетоплацентарного барьера. Через хориальный симпласт, с одной стороны, обеспечивалось удаление продуктов метаболизма от развивающегося плода, а с другой, происходило постоянное поступление жизненно важных продуктов, обеспечивающих метаболизм и регуляцию роста плода. Благополучие этих процессов находилось под непосредственным контролем ДНП-комплекса ядерного аппарата симпласта хориона.

Метаболические сдвиги в нейроэндокринных реакциях организма беременной изменяли условия дифференцировки и роста зародышевого материала. Такие воздействия, по-видимому, вызывали изменения генетического аппарата ядер симпласта, морфологически выражающиеся в перераспределении процентного содержания метальных групп на цитозиновых нукеотидах. Избыточное метилирование ДНК повлекло за собой изменение транскрипции белков, обеспечивающих в привычных для нормы условиях функционирование фетоплацентарного барьера.

На фоне глубоких структурных нарушений в протоплазме, мы наблюдали непосредственных контакт вирусных телец с ядрами хориального симпласта Хроматиновое вещество, в таких случаях, проявляло реакцию выраженной конденсации, что отчетливо просматривалось при электронно-микроскопических исследованиях симпласта хориона, пораженного многочисленными тельцами вируса герпеса. При обострении герпес-вирусной инфекции наблюдалось расширение перинуклеарного пространства. Участки хроматина, расположенные на периферии ядра, уплотнялись. В симпласте хориона в период обострения инфекции насчитывалось до 10±1,8% ядер площадью 3,0±0,84 усл. ед. (цитофотометрическая обработка). В условиях беременности, не осложненной герпесом, средняя площадь ядер симпласта хроматина была 1,7±0,37 усл. ед. Появление в период обострения герпес-вирусной инфекции ядер с большой площадью, вероятно, свидетельствовало о внедрении вирусного антигена в систему ДНП-комплекса симпласта хориона.

Изучение процессов метилирования ДНК методом цитофотометрии показало, что у беременных, без признаков герпесной инфекции, в симпласте хориона насчитывалось до 25±1,3% ядер, содержащих 62,8±1,3 усл. ед. ДНК. После проведенной реакции деметилирования содержание ДНК в 75% случаев составило 172,2±3,4 усл. ед. У беременных, перенесших обострение

герпетической инфекции на 34 неделе, было установлено, что до деметилирования в среднем на единицу хроматина ядра приходилось до 54,6±1,8 усл. ед. ДНК. После деметилирования содержание ДНК увеличивалось до 141,0±3,9 усл. ед.

Таким образом, до метилирования плотность хроматина в ядрах симпласта хориона была в 2 раза выше, чем в ядрах симпласта контрольных исследований.

Герпесная инфекция повлияла и на связь ДНК с гистонами. При обострении герпесной инфекции в симпласте фетоплацентарного барьера число гистоновоокрашенных ядер увеличивалось до 85±2,8% (контроль - 10±0,76%). На этом фоне происходило нарушение связи ДНК с гистонами, что, по-видимому, делало доступным ДНК клетки хозяина для репликации вирусной ДНК.

Последствия такого процесса - печальные. В легких плода (20 неделя) выявлялось большое количество клеток с гигантскими ядрами.

Проведенные исследования в области влияния герпсс-вирусной инфекции на состояние фетоплацентарного комплекса позволили установить, что одной из основных причин активизации герпесной инфекции во время беременности явилось, на наш взгляд, изменение нейрогуморально-гормонального статуса беременной, которое повлекло за собой реактивацию латентно-персистирующей формы вируса. При этом в первую очередь, отмечались изменения активности гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой системы, отвечающей за выработку нейрогормонов (серотонина, катехоламинов). В такой ситуации происходила усиленная выработка и накопление серотонина, приводящая к подавлению нейроэндокринных процессов фетоплацентарного барьера.

На фоне вирусемии у беременной имела место структурно-функциональная перестройка тканей плаценты. В связи, с чем происходило нарушение целостности и, как следствие, проницаемости мембраны симпласта. Измененная картина адаптивно-метаболических реакций фетоплацентарного барьера привела к нарушению работы ДНП-комплекса хориального симпласта. Из-за нарушения связи ДНК с гистонами, вероятнее всего, происходило усиление синтеза вирусного ДНК, который проявлялся в образовании гигантских полиморфных ядер.

В силу высокой интоксикационной способности вирус герпеса во время беременности поражал не только фетоплацентарный барьер, но и дефинитивные органы плода. Морфофункциональная несостоятельность надпочечников и печени плода повлекла за собой функционально-ферментативную недостаточность фетоплацентарной системы, которая в свою очередь привела к подавлению стероидогенеза.

Таким образом, полученные нами данные, свидетельствовали о ведущей роли герпес-вирусной инфекции в инициации патологических механизмов нейрогормональной регуляции системы мать-плацента-плод.

ВЫВОДЫ

1. В инфицированной вирусом герпеса плаценте отмечается различной степени выраженности нарушения дифференцировки ее структур: ворсинки укорачиваются, становятся тонкими и в большинстве случаев подвергаются разрушению, хориальный синцитий занимает большую поверхность, цитотрофобласт часто отсутствует.

2. Герпес-вирусная инфекция у беременных сопровождается проникновением вирусных телец в строму ворсин хориона, отдельные вакуоли с герпесными тельцами достигают ядра и вступают с ним в контакт, что приводит к нарушению связей ДНК с гистонами, усилению процессов метилирования ДНК, появлению в симпласте хориона и в ряде органов плода (легкие) клеток с ядрами крупных размеров и высоким содержанием хроматина

3 В период обострения герпетической инфекции происходит усиление синтеза и накопление в периферической крови и симпласте хориона стресс-реализующих гормонов (серотонин, катехоламины), способствующих образованию в большом количестве гидроперекисей и КЮ-продуктов, подавляющих активность белков с ЗН-группами и процессы трансаминирования.

4. При герпес-вирусной инфекции нарушается синтез дегидроэпиандростерон-сульфата в надпочечниках плода и его десульфатирование в печени, что ведет к нарушению гормонпродуцирующей функции плаценты и снижению выработки стероидных гормонов' эстрадиола, эстриола и прогестерона.

Внедрение в практику

1. Результаты исследования позволили разработать и внедрить в '■» практику ГУ ДНЦ ФПД СО РАМН морфофункциональные критерии оценки влияния серотонина, гистамина и катехоламинов на состояние фетоплацентарного барьера и других структурных компонентов фетоплацентарной системы при реактивации вируса герпеса в организме беременной.

2. Рекомендуется включать разработанный нами диагностический комплекс в схему обследования и динамического наблюдения беременных, инфицированных вирусом герпеса, что имеет существенное значение в выборе адекватной терапии, оценки ее эффективности и прогнозирования течения данного заболевания.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

Андриевская, И. А. Состояние обмена биогенноактивных веществ и систем их инактивации у беременных, инфицированных вирусом герпеса / И. А. Андриевская // Бюллетень физиологии и патологии дыхания. - Благовещенск, 2003. - Вып. 13. - С. 33- 36. Андриевская, И. А. Гормональные и микробицидные изменения у беременных с герпес-вирусной инфекцией / И. А. Андриевская // Бюллетень физиологии и патологии дыхания. - Благовещенск, 2004. -Вып. 15.-С. 41-45.

Андриевская, И.А. Состояние процессов стероидогенеза в системе мать-плацента-плод при герпесе / И.А. Андриевская // Бюллетень физиологии и патологии дыхания. - Благовещенск, 2004. - Вып. 17. -С. 65-68.

Андриевская, И.А. Нейрогормональные отношения у беременных с герпес-вирусной инфекцией / И.А. Андриевская // «Молодежь XXI века: шаг в будущее»: Материалы пятой региональной научно-практической конференции, 12-13 мая 2004 г. - Благовещенск, 2004. -Т. 3. - С. 38-40.

Луценко, М.Т. Фетоплацентарная система при герпесной инфекции / М.Т. Луценко, ИВ. Довжикова, A.C. Соловьева, И.А. Андриевсая, H.A. Ишутина II - Благовещенск, 2003. - 200 с.

Луценко, М.Т. Фетоплацентарная система при герпес-вирусной инфекции / М.Т. Луценко, A.C. Соловьева, И.А. Андриевская // Дальневосточный медицинский журнал. - Хабаровск, 2004. - № 1. - С. 77- 78.

Разрешено к печати: 19.11.2004 г. Усл. печ..л. 1,0. Тираж 100 экз.

РНБ Русский фо]

2007-4 1066

i. 4

Ч.

Il S

..V

Актуальность исследования. Проблеме воздействия инфекционной патологии женщин на течение беременности, развитие плода и новорожденного посвещено немало работ отечественных и зарубежных ученых. В настоящее время ясна роль многих возбудителей разнообразных инфекций в перинатальной патологии [39, 59, 114, 120, 162]. Хотя значение некоторых инфекций, особенно латентно-протекающих, до последнего времени недооценивалось и изучено недостаточно. К их числу стоит отнести персистирующую герпес-вирусную инфекцию.

Характерная для вируса герпеса особенность распределения в организме позволяет ему в период активации воздействовать на функциональное состояние самих нервных центров, перемещаться из ганглиев по аксонам до эпителиальных клеток, где происходит его интенсивное размножение [53]. Такого рода локализация и перемещение вируса герпеса в организме позволяет инфекции широко внедряться в различные участки тела, токсично действуя на организм беременной [64, 139]. Именно поэтому, во время беременности, осложненной герпесной инфекцией, происходят разнообразные тяжелые повреждения плода, что является одной из причин высокой постнатальной заболеваемости и смертности [61, 203, 210].

Как отмечалось многими авторами, значительные поражения у плода имеют место в случаях сочетанного влияния генитального герпеса с цитомегаловирусом, находящихся в латентной форме в организме матери [25, 38, 58, 146]. При трансплацентарной передаче вируса герпеса и развитии генерализованной инфекции у плода происходит рождение детей с микроцефалией, внутриклеточными кальцификатами [96, 105], а в отдельных случаях, отмечается его антенатальная смерть [26, 43, 72]. На фоне сформировавшихся нарушений гематоплацентарного барьера появляются признаки вирусиндуцированного иммунодефицита у новорожденных барьера [22,46, 155].

Следовательно, выраженность и характер нарушений у плода и новорожденного зависят: от специфичности вируса, его инфицирующей дозы, вирулентности [41, 87, 91, 142]; иммуного статуса беременной [88, 140, 151]; срока гестации, определяющего иммунореактивность плода [44, 147]; состояния фетоплацентарного комплекса [6, 65,132, 143, 145].

Осложнению беременности и аномалиям у плода способствует несостоятельность структурно-функциональной организации системы мать-плацента-плод [46, 74, 75, 104, 116, 183]. В такой ситуации появляется развитие нарушений обменных процесов в условиях вирусных инфекций. Отмечено повышение проницаемости плацентарного барьера продуктами липидного обмена [144], метаболитами окиси азота [169, 199, 208, 216]. Нарушение обменных процессов, в свою очередь, приводит к активации нейрогормонов при герпесной инфекции в системе мать-плацента-плод [34, 51, 129], которые изменяют характер маточно- и фетоплацентарного кровообращения [40, 135]. Увеличение маточно-пуповинно-плодовых кровеносных сосудов при герпесной инфекции повышает риск развития осложнений беременности: гипоксия, перинатальная патология плода, структурные, ферментативные и гормональные изменения в тканях плаценты на различных этапах ее развития [55,117].

Однако вопросы функционирования фетоплацентарного комплекса при герпес-вирусной инфекции остаются мало изученными. Имеющиеся немногочисленные сведения, касающиеся нейрогормонального фона, довольно скудны, а результаты исследований гормонального статуса фетоплацентарного комплекса относятся либо к ранним, либо к поздним срокам беременности [28, 34, 100, 171].

Тем не менее, большое количество экспериментальных и клинических работ, проведенных рядом авторов, дают основание полагать, что характер и степень выраженности адаптивно-приспособительных нейроэндокринных реакций у плода и новорожденного в условиях патологических изменений у матери, включая герпесную инфекцию, закладываются на раннем этапе эмбрионального развития и непосредственно связаны с функционированием отдельных звеньев нейрогормонального комплекса системы мать-плацента-плод [30].

В зависимости от параметров компенсаторных реакций со стороны фетоплацентарного комплекса наблюдаются различные варианты ответной реакции нервной и эндокринной систем у плода и новорожденного в период родов и в раннем постнатальном периоде или на более поздних стадиях развития [25, 130].

Следует также отметить, что стабильность функционирования фетоплацентарного комплекса зависит от множества факторов внешней и внутренней среды, в частности от гомеостаза такого микроэлемента как йод. Серьезные изменения в системе мать-плацента-плод объясняются дисбалансом последнего, который отмечается при дефиците йода в окружающей среде. Именно при недостатке последнего в период беременности возникает в организме беременных, развивающегося плода и новорожденных состояние гипотиреоза, приводящее к недоразвитию нервной системы плода [16, 153]. Однако в литературе имеются разные мнения в отношении концентрации тиреоидных гормонов в периферической крови беременных в зависимости от сроков гестации и выраженности инфекционного процесса [29, 77]. Поэтому особый интерес вызывает исследование тиреоидного статуса беременных с герпес-вирусной инфекцией проживающих на территории традиционно эндемичной по зобу. Поскольку данная категория женщин входит в особую группу риска формирования не только фетоплацентарной недостаточности, но и недостаточности функциональной активности щитовидной железы и проявлений синдрома ранней постнатальной адаптации у ребенка в виде транзиторного или врожденного гипотиреоза.

Выше указанные факторы позволяют предположить, что вирусные инфекции, перенесенные на ранних сроках гестации, стимулируют появление клинических симптомов фетоплацентарной недостаточности в результате прямого токсического воздействия вирусного агента и влияния продуктов свободнорадикального происхождения в критические для плода периоды эмбрионального развития на фетальный тимус, надпочечники, ворсинки хориона, васкуляризацию ворсин и активность ферментативных реакций, регулирующих важнейшие обменные процессы в системе мать-плацента-плод.

Мы считаем, что такой подход к изучению и систематизации знаний в области некоторых патофизиологических механизмов нейрогуморальной регуляции фетоплацентарного комплекса при герпес-вирусной инфекции позволит расширить понимание вопросов о взаимодействии персистирующей герпес-вирусной инфекции и фетоплацентарного барьера; оценить степень выраженности морфофункциональных и структурных нарушений мембраны хориального симпласта, надпочечников и легких плода; рассмотреть некоторые аспекты ядерного метаболизма и работы ДНП-комплекса в симпласте плаценты при герпесной инфекции; изучить на гистохимическом уровне нейрогормональные реакции хориального симпласта.

Цель и задачи исследования. Целью данной работы явилось изучение характера морфофункциональных изменений фетоплацентарного барьера и патофизиологических механизмов нейрогормонального регулирования системы мать-плацента-плод при герпес-вирусной инфекции.

Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:

1. Выявить морфофункциональные изменения симпласта хориона, надпочечников и легких плода, возникающие при герпес-вирусной инфекции.

2. Определить особенности нарушений ядерного метаболизма и степени выраженности обменных процессов, возникающих в симпласте хориона при герпесной инфекции.

3. Дать характеристику нейрогормонального статуса системы мать-плацента-плод при герпес-вирусной инфекции.

4. Провести корреляцию между содержанием биогенных аминов и активностью инактивирующих систем в фетоплацентарном комплексе при герпесной инфекции.

Научная новизна исследования. В настоящей работе дается комплексная оценка состояния нейрогормонов в системе мать-плацента-плод при герпес-вирусной инфекции. Выявлены особенности их функционирования, проведена корреляция между показателями отдельных нейрогормонов и степенью тяжести заболевания.

В работе представлена морфологическая, ультрастуктурная, гистохимическая и биохимическая характеристика состояния фетоплацентарного барьера на фоне герпесной инфекции.

Впервые изучены патофизиологические аспекты действия вируса герпеса на мембрану, протоплазму и процессы ядерного метаболизма в симпласте хориона.

Изучена морфология надпочечников и легких плода, погибшего в силу высокой герпесной интоксикации у беременной.

Подробно дана биохимическая и гистохимическая оценка содержания серотонина, катехоламинов, их предшественников и метаболитов в симпласте. Исследованы процессы метаболизма данных веществ в тканях плаценты.

Проведена диагностика гормональной функции фетоплацентарной системы у беременных с герпесной инфекцией.

Практическая значимость. Комплексный подход к оценке этиопатогенеза герпесной инфекции позволяет судить о состоянии системы мать-плацента-плод в условиях активации вируса герпеса. Результаты исследований с одной стороны, дают возможность судить о нейрогормональных перестройках, происходящих в организме беременных, инфицированных вирусом герпеса, и с другой - отражают характер морфофункциональных изменений фетоплацентарного барьера. Этот факт является прогностическим критерием патологического течения беременности и коррелируется с тяжестью клинического проявления заболевания.

Полученные результаты позволяют, говорить о целесообразности включения данных диагностического комплекса в схему обследования, и могут быть использованы для диагностики осложнения беременности, протекающей при герпес-вирусной инфекции.

Результаты работы внедрены в практическую деятельность клинических подразделений ГУ ДНЦ ФПД СО РАМН. Получен положительный отзыв на Ученом Совете ГУ ДНЦ ФПД СО РАМН от 30.05.04 г.

Положения, выносимые на защиту

1. В инфицированных вирусом герпеса плаценте, надпочечниках, легких плода наблюдаются различной степени выраженности нарушения дифференцировки тканевых структур.

2. У беременных, инфицированных вирусом герпеса, отмечается нарушение нейрогормональной регуляции системы мать-плацента-плод, которое выражается в накоплении в периферической крови и тканях плаценты серотонина, гистамина, катехоламинов, их предшественников и ослаблении процессов инактивации моно- и диаминов.

3. Развитие гормональной дисфункции фетоплацентарного барьера на фоне герпес-вирусной инфекции происходит при нарушении серотонинового метаболизма, активации окислительных процессов, повышении реакции на NO-синтазу, гуанилатциклазу и снижении аденилатциклазной активности в симпласте хориона.

4. Структурно-функциональные изменения ядерного аппарата при герпесной инфекции характеризуются усилением процессов метилирования ДНП-комплекса, подавлением активности механизмов трансаминирования, приводящие к снижению синтеза ДНК, РНК, а также уменьшению содержания белков с SH- и ЫНг-группами, как в ядрах, так и в цитоплазме симпласта хориона.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на заседаниях Ученого Совета ГУ ДНЦ ФПД СО РАМН (2003, 2004 г.); на итоговой научной конференции в ГУ ДНЦ ФПД СО РАМН совместно с департаментом Здравоохранения Амурской области «Фетоплацентарная система при герпесной инфекции» (Благовещенск, 18-19 сентября 2003 г.); на научной конференции ГУ ДНЦ ФПД СО РАМН «Молодые ученые - науке» (Благовещенск, 8 февраля 2003 г.); на научной конференции ГУ ДНЦ ФПД СО РАМН совместно с АмурКНИИ ДВО РАН «Молодые ученые - науке» (Благовещенск, 10 февраля 2004 г.); на пятой региональной межвузовской научно-практической конференции «Молодежь XXI века: Шаг в будущее» (Благовещенск, 12-13 мая 2004 г.).

Публикация результатов исследования. По теме диссертации в центральной печати опубликовано 6 печатных работ.

11

2. Результаты исследования позволили разработать и внедрить в практику ГУ ДНЦ ФПД СО РАМН морфофункциональные критерии оценки влияния серотонина, гистамина и катехоламинов на состояние фетоплацентарного барьера и других структурных компонентов фетоплацентарной системы при реактивации вируса герпеса в организме беременной.

3. Рекомендуется включать разработанный нами диагностический комплекс в схему обследования и динамического наблюдения беременных, инфицированных вирусом герпеса, что имеет существенное значение в выборе адекватной терапии, оценки ее эффективности и прогнозирования течения данного заболевания.