Автореферат и диссертация по медицине (14.00.14) на тему:Морфо-функциональная характеристика бластных клеток при гемобластозах

/АКАДЕМИЯ МЕДИЦИНСКИХ НАУК СССР ВСЗСОШПЫЙ ОНКОШИДПШЖИЯ НАУЧНЫЙ ЦЕНТР

•и II и. I ■ - . ....................... .., I -. и

На правах рукописи УДК 616.155.392-018-091.8

ФРЕНКЕЛЬ Марина Абрановна

НОРИНЕУНКЦИОНАЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ВЛАСТНЫХ КЛЕТОК ШИ ГЕШБЛАСХОЗАХ

(14,00.14 - онкология)

Авто;в$врат

диссертации па соискание ученой отопего доктора кздвцшокпх паук

Москва - 1989 г.

Работа выполнена во Всесоюзном онкологическом научном центр АМН СССР.

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Ыахонова Л, А., доктор медицинских наук, профеооор Поддубная И .В., доктор медицинских наук, профессор Владимирская Е.Б.

Ведущее предприятие - ВоессгавнВ тематололпеовк! научный центр Ю СССР в А1Ш СССР.

часов ва васеданпи специализированного оовета Д.001.17.01 по ы датам докторских диссертаций при Всесоюзном онколопгюсксм науч вом центре АМН СССР (Москва, 115478, Каширское шоссе, 24).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Все сошного онхояоплоского научного центра ЛИН СССР.

Автореферат разослан

УченыЛ секретарь спедиалиькрованного совета

профессор А.А.Клименков

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблеаш

За'последние года достигнуты значительнее уоиехи в научении ологии опухолевых клеток кроветворной п лш|>агической систекы. от прогресс стал возможным благодаря применению, наряду о ялас-ческими шрфдаитохимнческпми, таких методов исследования,как лунодиагностика, цитогенетнка и клонирование в полуотдннх сро-с.

Ба основании морфоцстохтпгсескпх данных были выделены и оха-иеризованы типы бластов и разработаны классификации острых Ьтозов (Ю.И.Лорие, 1974; А.И.Воробьев, И.Л.Чертков, М.Д.Бриллл-I, 1976; ФАБ-класогфнкация, 1976 г.) и гематосаркои (Н.А.Проба-ш, 1982; классификация ВОЗ, 1976 г.). Применение пх в практп-жой гематологии способствовало значительному повышении оффек-шостд лечения больных.

Однако рутинные методы пэ всегда позволяли охарактеризовать холевый субстрат. В части случаев клетки оставались нецдектп-лрованнымп. Кроме того не были решены вопросы, связанные о доф-ешшальной диагностикой лейкозов п гематосаркоу в стадия лэй-пзацви. Разработка современных программ терапии требует четкой актериотшш бластных элементов,как. для диагностики, гак и для гаоза заболевания.

Использование новых подходов к оценке особенностей спухолгво-оуботрата при гемоблаотозах способствовало существенному рао-эншэ современных диагаостпческпх Еозкогноотей. Применение ологичеоютс «этодов позволило определить ггсстогонетическуи пригодность и степень зрелости бластов в болшанство случаев готе то зов, выявило фенотиплчсскую гетерогенность клеток опухо-эй популяции (А.Ю.Барнппиков, 1984; ¿апоза! , 1981). На

)вапли патогенетических данных были установлены аакономерноо-ггменеюм карнотита лейкоотых клеток в сависикостя от варнап-темобластоза и типа бластов (Е.В.Флойпзтан, 1975; В1ооиГв1(3, ). Иоу1еу , 1980).

Культивирование в полузядкпх средах позволило выявить разлп-в клопогонной способности бластов шголошшого П ЛГО^ЮЕДКОГО юхоздения (Б.В.Афэнаоьев, 1583; Мегса^ , 1974; !*ооге ).

Однако,в настоящее время комплексное изучение опухолевых ад центов проводится, как правило, при каком-либо одной из геиобла товов. Практически но встречаются работы, в которых бы ооуществ ся сравнительный анализ особенностей бдастяых элементов одновре но при острых лиыфобластных и нелтфэбластных лейкозах (ОМ и О хроническом ыаелолейкове в период бластного криза (БК ХИЛ) п ле инзации гаштосаркош (ГСА). В то ые врем, проведение подобных следованна позволило бы подучить целостное представление об оос иоотях клеток при неопласгическоы поражения геиопоетической тка и установить, какие из выявленных закономерностей являются общи для всех гемобластозов, а какие характерны только для одного из вариантов заболевания.

Сопоставление результатов исследораяия функциональных покаг толей бластных адементов с их ыорфоцитохншческой характернстш представляет значительный интерес, т.к. способствует расширешя вогькдаюстей диагностики и дифференциальной диагностшси геыоблг тозов, позволяет выявить отличительные особенности бластов, охс них по иорфологоческим показателям.

Осуществление подобной работы является актуальным, посколы в современной онкогематологии подходы к терапии больных решающ образом зависят от характера опухолевого поранения.

Диссертационная работа была проведена в соответствии с плш НИР НИИ клинической онкологии В01Щ АМН СССР "Ыорфо-функционалы и иммунологические особенности бласъчшх меток при гемобластозг J5 Гос.регистрации 01.85.0.078777.

Цельи исследования явилось изучение гистогенетической прцр< и уровня дкН^ренцирозни бластшас клоюк больных различными i*e: бластозаш для определения обцюг закономерностей, характерных ; всех вариантов заболевания, а особенностей, специфичных только лейкозов или гоматосар^ом с л&йкецдьацией.

Основные задачи исследования:

1. Разработать унифицированные иорфоцитохзшзческие критери для оценки особенностей бластных клеток и с их помощью ввделит типы бластов при различных геыобластозах.

2. Определить ишунологичеокие, кудьтуралшке и цитогенети кпе свойства различных типов бластных элементов.

3. Охарактеризовать различчя в патогенетической природе в

пени зрелости клеток опухолевых субстратов при острых лейкозах, гронического ииелолейкоза г лейкемизации ГСА.

4. Установить прогностическое значение выделенных типов блао-при отдельных вариантах гемобластозов.

5. Разработать рабочую классификационную схему типов опухоло-элеглэнтов, общую для острых лейкозов, БК ХМЛ я КА в стадии

шдизацнп на основании морфо-функцпоналышх особенностей блаотметок.

Основные положения, выдвигаемые па защиту;

1. Диагностика гемобластозов долава осуществляться на основа-уивфшщюванной коютлексной характеристики свойств бластинх лентов, вютзчапцей морфоцитохикическив, шцунологачеокие, цито-этичеокие и культуральные данные.

2. Наиболее ранними миелондными элементами при всех гемоблас-зх являются галодафференцировашше шелоблаоты, характеризую-зя шипгсмм диффузно расположенного ШЖ-полоаителыюго вещзст-фенотппсу градулоцятов и гранулоцитов-иакрофагов и отсутотвп-гсталышх признаков уиелоидной принадлежности (зернистости, жсцдазы, хлорацотат остеразы, неспецифичеокой остеразы, спо-юсти к патологическогду росту в культуре).

3. В бластхшх клетках гранулоцитарного ряда определяется га-гкзстъ мезду степенью их морфологической зрвлооти и онзишш гусом, фенотипом, кариотипом и поведением в культуре. По поре гения признаков дпффэренцпровки активность специфических фзр-ров нарастает, экспрессия антигенов слагается, способность к гу в агаре повидается. Функциональные особенности ионобластов ¡вязаны о этапач их даффзр енцпровки.

4. Лтфобласты при ОЛЛ и лимфоиднои БК ХМЛ, как правило, гмо-[юпоит ранних В-продпествешшюв, а при лейкеиизацип ЛСА -щих В-форл. Т-лш.5$областы разпой степени зрелости определяют-

одинаковой частотой при ОЛЛ и деОкемизации ЛСА.

5. Сиетанный фонотип бластннх клеток обнаруживается при всех н$лэстозах, паиболее часто при БК ХЫД.

в. При ОМЛ прогноз заболевания коррелирует с субтппсц бяас-, Наличие в клетках признаков созревания , патологического в культуре, повышение числа гранулоцитов в костной га зге !е 6% являются благоприятными прогностическими признака!,я те-1Я болезни.

7, Наличие зернистости в лии|юбластах является наблагоприят-нш прогаостичесгаш признаком в при ОМ,и при лейкамизащш ЛСА.

Научная новизна

В работе впервые на большой материале дроведено сравнительно комплексное исследование цорфофункционялыпгк особенностей властных клеток при различных геыобластозах: остром лейкоз9, БК ХШ и ГОА в стадии лейкеыизацил.

Показано, что уровень до$фэренцировкн опухолевых клагок существенно различается при лейкозах в гетто саркомах. Наиболее р£ нее поражение определяется при БК ШЛ.

Установлены закономерные изменения ыорфоцитохимическнх, нмвд нологнчеоких, цитогенетических и кулътуралышх параметров клвто! в зависимости от степени их диффереццлровки, специфичные для Гд. дого варианта гемобластоза.

Охарактеризованы тины ранних лейкозных клеток: бластов со смешанным фенотипом и шлодЕфференцировашшх шелобласхов, обнаруженные при всех геыобластозах.

Определены особенности лнш$областов с зернистостью а показано их неблагопра гное значение для прогноза при лимфоблаотных п ыобластозах (0Л1 и ЛСА.).

Научно-практичьское значение. Изучение биологических свойс бдаотных адзментов расширяет вшае понимание патогенетических ос нов Гбшбластозов, выявляет зависимости медду гистогенетической природой клетки, степень» ее дайюревцирогки, строением гвнещ-чеокого аппарата и клшшческтш проявлениями заболевания. Сравв шо особенностей клеток опухолевых субстратов пра различных ген бластозах дозволяет, с одной стороны, выявить специфичность отдельных показателей блаотов для кагдого варианта заболевания и, о другой, установить признаки, общие для разных неопластичоскпх поражений оисгеш геыедооза.

Разработанная рабочая клаосв$ше>цнонная охема имеет большое практическое значение для уточнения субварнантов острых лейкозе БК ХМЛ а ГСА в стадии лейкемизации. Она позволяет прогнозировав особенности клинического течения а результаты терапии этих вабс ванкй.

Унифшогроваший подход к оценке бластных клеток дает возмш нооть проводить дифференциальную диагностику различных гешх$ла<

юв со сходными морфологическши особенностями опухолевого оуб-ита.

Полученные дашшо необходимы для разработки и применения по: адекватных программ лечения болышх гемобластозама.

Представленная рабочая схема типов бластных клеток и вариан-

> гемобластозов может быть использована в практической деятель-¡ти гематологичеоктс лабораторий в специализированных онкологп-жпх стационарах практического здравоохранения.

Внедрение в практику

Метод комплексного исследования бластных клеток, базпрухщпЯ-на морфоцитохпмической характеристике элементов о использова-:н иммунологического, патогенетического и культурального подхо-I, внедрен в практику клипико-дпагаостичеспоЯ лаборатории и гомологического отделения НИИ клинической онкологии ВОЩ АШ СССР.

> применение дает возмолеость разрабатывать и изучать оффзктив-¡ть различных программ терапии больных гемобластозшя в зависите от характеристики опухолевых элементов.

Разработан метод морфологического исследования (фиксирования жраекп) препаратов агаровых культур клеток крови п костного ira, позволяпцлй оценить морфологический состав гранулоцитар-: ::олстй! и кластеров и количество макрофагоз. Получено удосто-гаиие на рационализаторское предлогешю Л 519 от 24 мая 1982г. >т метод внедрен в практику в ВОЩ АШ СССР,в ГОИ гематологии гереливанля крови г.Лешшграда, НИИ гематологии и переливания 1вп г.Кирова, Всесоюзного гематологического цептра г.Моопви, Ш леЗкозологяи г.Рпгп, НИК криобиологии г.Харысова.

Модифицирован перокспдасо-йптлпероясгказпыЗ метод (ПАП) спро-есния иммунологического фенотипа клеток па газгах крови и костю мозга (Удостоверение о рационализаторском предложения Î62 от 19 пхая 1986 г.). Этот метод внедрен в практику в ВСНЦ [ СССР, НИН пздгатрии АШ СССР г.Москвы.

Материалы били апробированы на: Пленуме правления Всесовзно-паучного общества врачей-лаборантов в г.Ленпнградо в 1972 г.,

I Всесоюзном сьездо врачей-лаборангов в г.Харысовз в 1973 г., заседаниях Московского общества врачей-гематологов в 1973,

II п 1982 г.г., на ХШ Научной конференции Груз.НШ гематоло-i и переливания крова з г.Тбилиои в 1975 г., на П Воесогоноц

съезде врачей-лаборантов в Ворошиловграда в 1979 г., на Вове ной научной конференции "Распознавание х меры борьбы о лейке шх человека и животных" в г.Белой церкви в 1982 г., на сишс ые "Новые достижения в диагностике и лечении нелимфоцитарнш лейкозов" в г.Риге в 1983 г., на сессии Груз. НИИ гематологе переливания крови, посвященной 50-летию институтов г.Тбилжс 1985 г., на симпозиуме "Проблемы клинической энзимологии" в Ужгороде в 1989 г.

По теме диссертации опубликовано 52 работы.

Обгем и структура диссертацииf Диссертация представлена 260 стр. машинописи, оостоит из введения, обзора литераryj 4 глав собственного материала, заключения, выводов х списка пользованной литературы, включающей 62 отечественных в 276 8 бешшх работ.

В работе 72 таблицы, 8 рисунков и 14 микрофотографий.

Работа выполнена в клинико-диагностической лаборатории В клинической онкологии ВОНЦ АМН СССР.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы

Изучение ыорфо-функционалышх особенностей бластных клет было проведено у 434 больных геыобластозами, госнитализирова в гематологическое отделение НИИ клинической онкологии ВОНЦ СССР (зав. - проф. Г.В.Круглова) с 1972 по 1987 г.г.

Среди пациентов острый нелимфобластный лейкоз (OHM) был диагностирован у 183, острый лимфо&пастный лейкоз (ОМ) у 88 бластный криз хронического миелолейкоза (БК ЖИ) у 81, гемат кома (ГСА) в стадии лейкемизации у 82 пациентов. Распределен больных чо поду и возрасту представлено в таблице I.

Как видно из таблицы, при лейкозах (OHM, ОЛЛ и Ш ХШ) ло мужчин и женщин среди исследованных больных было близким, лейкеажзации ГСА преобладали мужчины. Больные существенно не личались по возрасту, все были старше 16 лет.

Бее пациенты с острым лейкозом обследовались в начале за ваняя.при БК ЖЕ большинству (72 чел.) ранее проводилось спе фическое лечение в период хронической фазы. У 33 из 82 больн

Таблица I

Распределение дольных гсю&ластозака по поду в возрасту

Вариант гелоблаотоза Число больных Поя Возраст (Ме, гг)

и я

ОНИ 183 91 92 39,7

ОЛЛ 88 42 46 30,6

БК ХЦЛ 81 40 41 38,9

ПЗА 82 65 17 36,0

с лейкеиизацией опухоль была выявлена в долейкеиическиИ перл-диагноз установлен на основании гистологического исследования шеиных тканей, они получали цитостатическую терапию до равви-лейкецизацин.

При изучении корфо-функциопалышх особенностей блаотных юго-костного коэга в крови больных в работе использовалиоь методы «логического, цитохимического,тздунологпческого, цитогеноти-ого исследования, а таете показатели клонирования го«эпоэти-пх клеток в агаровой культуре (таблица 2). В ряда случаев иор-тохшшческпе исследования в клонирование в агаре проводили орно ох 2 до 6 раз.

Таблица 2

Количество исследований блаотных клеток различными ыетодаш больпыг геаобластозаля

кант 0- с то- Всего больных МорфОЦИТОХЕЯ-ческие иетода Иэдуно-логп-ческие цетода Культивирование в агаре Цитогенетические методы

первич. повтор. первич. повтор.

га 183 183 34 57 59 32 42

II 88 88 34 56 34 24 20

хил 81 81 31 26 31 18 81

1 82 82 28 43 21 8 13

¡орфодогическов изучение кдоток включало подочет бластограм-1 100 бластных элементов о оценкой размера и формы клеток и их , ядерво-цнтоплагматнческого отиоаения, окраски цитоплазлы, шя иди отсутствия зернистости, вакуолизации. Проводилооь це-

тометрическое исследование диаметров лимфоблаотов с поающыэ ову-дяр-микрометра. Определялся пролв$еративкый потенциал клеток о подсчетом мятотического индекса на 1000 властных элементов. Цигс химические методы включали определение псроксидазы, хлорацетат i терааы, неспецЕфических астераз с двумя субстратами (с< нафтилаг татоы и бутвратом) .двойной эстеразы, кислой и щелочной фосфатаз ШИК-полооттельного вещества.

Иммунологический фенотип изучался в лаборатории клинической радиоиммунологии (зав. - проф. З.Г.Кадагидзе) гл.н.сотр. А.Ю.Ба-ршппковым и ст.н.о. Н.Н.Тупицыным. Была использована панель moi кловальных антител, подученных в группе гл.н.с. А.Ю.Барышшкова, В непрямой реакции флюоресценции определяли экспрессию 1а-подоб] го (ИКО-1) и "общего" антигенов, антигена недифференцированных ¿даотов (Ж0-02), антигена ЕК-клегок (ИКО-11), Т-антпгена (ШШ-j антигена кортикальных тшаоцитов (ОКТ-6), зрелых Т-клеток (ОКТ-3; пан-Т антигене, мвелоидных антигенов (ИКО Ш-I и ИКО Г-2), aparj цдных антигенов (нАЕ-3 и НАЕ-9). Стандартными методами определи, поверхностные и цитоплазматические шцуноглобузшны п Е-розетки.

Культивиров£"ие клеток костного мозга и крови осуществлялся: в отделении переливания крови (вав. - к.м.н. Л.Н.Б-уачидзе), ст.] С.И.Шерешковым и н.с. Л.А.Харламовой. Клонирование проводилось : методу Pike и Robinson в двуслойной агаровой среде в тече: 4,7,10,13 и 20 дней. При оценке результатов подсчитывалось числ колоний (более 40 клеток), болылих кластеров (20-40 клеток) и м лих кластеров (3-20 клеток). Во всех случаях проводилось морфол гаческое исследование состава культур. Препараты готовились по Salmon н Buick , окрашивались но специально разработанно методике. Оценка результатов проводилась на основании подсчета цитограш колоний и кластеров. Всего было проанализировано 738 препаратов. Для определения нормальных показателей клонирования клеток было проведено изучение способности к росту в агаровой культуре клеток костного мозга и крови 25 онкологических больш с нормальными гематологическими показателями.

Цитогенетлческое исследование выполнялось в лаборатории щп генетики НИИ канцерогенеза ВОНЦ АМН СССР (зав. - д.б.н. БЛ.Кои нин) вед.н.с. Е.В.Флейшман и ст.н.с. Е.Л.Пригожиной. После куда вирования клеток в течение 24 или 48 часов готовили препараты, торце окрашивали на G-полосы. Кариг-лпированяе проводили по к]

риям ХБСН .

У всех пациентов проводчл"зя анализ костного ыозга и крови в чале заболевания и в динахгае развития болезни с подсчетом ияо-гракц и геиограга. У 9 больных БК ХИЛ параллельно изучался иор-яогический состав селозвнкп по отпечаткам, полученный поело иенэктомии.

Все полученные данные были обработаны статистически в лабора-?ии ив$ор!тцнонно-снстеиного анализа п гадяцсшской кибернетики Щ АМН СССР. Для установления прогностического значения отдвль-I факторов методом цногофакторного анализа были определены пока-гелн средней продолжительности аизни п ремиссий в различных гшюх больных гемоблаотозамь. Вычисление этих показателей прово-гось с пшодьл ЭШ типа ЕС-1022 по методу Каплан-1!айер (1958) .В с группах, где обнарузнвалнсь значите различия, выполнялся до-шительный анализ прогностических показателей о пшощыз •нетодп-, основанной на составлении таблиц дозития (" ыге-1аЪ1е 779). Сопоставление кривых выливаемостп осуществлялось «кетодакд .сохоп и Сох .

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

На основании морфоцптохпмических данных была установлена тно-,енетическая принадлежность опухолевых клеток болышх теяоблао-1ама: ¡сиелоидная (гранулоцитарная, моноцптарпая пли орятрецз-)ная) и лл^оядная. Властные элементы были подразделены о уче-I 3АБ-кла с с пфпкации острых лейкозов на следуицие подтипы: :одпфферевцнроватше мяелобласты (МО), миелобластн без созревает), 1шелобласти с созреванзец (М2), леЙкозшя иромзелоциты ), шгеломонобласты (М4), монобласты без созрэвзпия (Ш5а), ко-ласты о созреванием (М5б), эрнтроблаоты (ПГ), лз^Еюбласты (Л,

ЛЗ) и нодайерепцируемые клетки.

Анализ !лорфоцдтохгмическнх особенностей» 'потакателей фенотипа, иотипа и поведения в культуре представлен отдельно для каадой ип бластов.

Гранулодктарщ!е гетлоблзстозн

Властные клетки при граяулоцетарных темобластозах была пред-влены четырьмя субтилами: кааоди^форвнцировапныгш миелобдаста-(РЮ), ьяелобластаи! без созревания (?Д) л с созреванием (112),

лейка зныш промиелоцктами (ИЗ).. Выделение субтипов клеток Ш, и п УЗ проводилось в соответствии с принципами, рекомендованными ; йАБ-классвфикации острых лейкозов. Характеристика субтипа Ж) миелобластов предложена автором работы.

Лейкозиые предшественники х-ранулоцитарного ряда могут с оста дять опухолевый субстрат при всех гемобластозах. Ыалодифференци рованные циалобласты определяется преимущественно при БК ХЬШ, миелобласты Щ и Ы2 как при лейкозах, так и при лейкемизации ГС. дейкозше промиелоциты только при остром лейкозе (таблица 3).

Таблица 3

Частота выявления различных субтипов клеток при грацулоцн-тарных гемобластозах, случ. (?)

Субтип клеток Вариант геыобластоза

ОГЛ ш хил ЧСА

МО 4(3) 28(48) 0

т. 33(27) 9(15) 3

М2 63(53) 23(37) I

из 21(17) 0 0

Малодафференцированные миелобласты представляли собой влаыв] ты среднего иди большого размера с умеренным ядерно-цитонлаеыат) чееккм отношением, с ядрами правильных очертаний. В отдельных клетках присутствовала веяная азурофилъная зернистость. Пероксн; за и хлорацетат зстераза отсутствовали. Активность изоанзимов н< специфических встераз, нечувствительных к фториду натрия, была слабой в большинстве клеток. Диффузное расположение ШИК-пологп-тельного вещества выявлялось в б ластах во всех таблвдениях. В о; ной случае (БК ХМЛ) ШИК-положителышй материал обнаруживался та] го в форме гранул.

Миелобласты без созревания (МТ). Миелобласты этого субтипа по своей морфологической характеристике не отличались от блаото: ДО. Только в отдельных наблцдениях определились единичные клегга (менее 1050, содержащие либо палочки Аувра (три случая при ОНШГ либо скудную зернистость базофильного или смешанного базофильно-возинофлльного типа (5 случаев при БК ХМЛ). Дифференциальная диагностика между клетками ДО и Щ основывалась на наличии в поел!

ас ферментов гранулоцптов (перокспдазы и хлорацетат зстеразн). ю&нзгыы неопецифзческой эмкразы, не чувствительные к фториду ирия, и даффузно распологснное ШИК-полоантельное вещество опре-(лштось в болылинотве клеток субтипа Ж, В лейкозных миелоблао-х при БК ИД в двух наблюдениях,наряду о диффузной,наблвдалась кае храцулярная форта отлозекил ШИК-позитивпого вещества.

Миелоблаоты с созреванием (М2). Отличительной особенностью слойластов М2 было наличие отчетливых включений в цитоплазму лее, чем в 10% лейкозных олементов. В большинстве случаев опро-аялась отчетливая азурэфильная зернистость и/или палочки Ауэрэ. JXBJX случаях ОНЯД и одном БК Ш1 включения носили базофильный рактер, в пяти наблюдениях при БК ХМЛ определялась сиепапная зйтрофильпо-базоф.1льная шш нейтрофильно-оозинофильпая) зернио-ïTb.

Во всех случаях, sa исключение« базофнлькых, клетки били юксидэз- л хлорацетат зстераз позитивны. Следа изоэнзшлов но-¡цифзчсскоЗ осторазы а даффузно расположенное ШИК-полозлтельноо ¡ество присутствовали в большинстве наблюдений. В отдельных ио-довадиях при БК X1U были обнаружены тагсе п гранулы ШК-поло-ольиого натерзалэ.

Лейкозные проииелоциты (МЗ). Эти бластнно клетки выявлялись ько при ОНЛЛ и составляли опухолевый субстрат острого проже-итарного лейкоза. Во всех случаях про;лиелоциты шелл спецификой порфсЕогпческяЗ признак: своеобразную двудоль^атую, ло-гпуа фор-^tf ядер. Очортаппя плеток часто били непразплшк.я, о гатага. Окрзска цитоплазм базофильпая. Число клеток с зер-гостьп п палочкагз! Аусра колебалось от 3% до 100$. Агр^луллр-варнант лойкоза (бласты по содержали Еклотеннй) был конста-звая в трех случаях.

Перог.сздаза и хлорацетат остераза в значительном количестве шияшстве клеток обнаруживались во всех наблюдениях. Содер-[о пзоэнзп.;оз песпецифических остераз и ШИК-полсаптелъного !Стез было близким к показателя?,1 шелобластоз ПО, !Я и L!2. Сравнительный анализ выявил, что по мера созревания в лей-ых бластах усиливается активность гранулоцптаряых феруептов. гсанио перокспдазы (141,3 ед.) в г.яелсбластах U2 достоверно (р< 0,01), чем в ?Я (74,8 ед.) при ОНЛЛ, а в лейкозных

цромиелоцитах (226,2 ед.) вше (р< 0,01), чем в <3ластах Ш при ОНЛЛ. Однако морфологаческие признаки зрелости не всегда коррелировали о активностью гранулоцитарных ферментов. Так в 1455 наблюдений при СШШ и во всех при ВС ХМЛ в бластной популяции клеток М2 преобладали (более 50%) энзигнегатнвные формы. Вероятно, дв^ференцировка клеток при гемобластозах в части случаев сопровождается нарушением синтеза ферментов. Подобное упрощение знзи-матического статуса свидетельствует о неполноценности созревшш лейкозных клеток, что особенно отчетливо выявляется при НС ХШ. Изменения активности изоэнзнмов неспецв$ичеокой встеразы в миел< бластах с разным уровнем зрелости отмечено не было.

Шмунолотаческая характеристика бластов была установлена у 54 больных гранулоцитарными гемобластозами. Миелоидный фенотип определялся при взаимодействии лейкозных олементов с ША.Т ИКО-Г] специфичными для клеток гранулоцитарно-макрофагального ряда, и ИК0-Г2, для гранулоцатов. В норые эти антигены выявляются на вс этапах дифференцировки гранулоддтов вплоть до зрелых форы. При гемобластозах экспрессия специфических антигенов была выявлена : Т1% исследованных случаев.

Лейкемические миелобласты МО слабо реагировали с обоими 1ЖА число позитивных клеток не превышало 5%. Миелобласты М1 зкспрес сировали оба миелоидных антигена, ИКО-Ш-1 в 32^, ИКО Г-2 в ГЛ% клеток. При миелобластном лейкозе с созреванием число клеток, реагируицих о МКАТ ИКО ГМ-1 снижалось до 2$, а с ИКО Г-2 остава лось таким се как н при миалоблаотном лейг.озе без созревания. Прд ВС ХМЛ бласты 112 активно реагировали с обоими МКАГ. На лейкозных прог-шелсцигах экспрессия обот. специфических антигенов с ла слабой (1-4%).

Таким образом, при ОНЛЛ экспрессия антигенов на миелоидных клетках сншалась по черо вх созревания. В первую очередь утра' вались г^инулоцитарно-шкрофагальше, а затем гранулоцитарные антигены. Поскольку в норда миеловддша клетки сохраняют акспрех сию антигенов вплоть до последних этапов дифференцировки, то можно предположить, что наблюдаемое изменение фенотипа лейкозн: клеток связано с нарушениями в регуляции их дифференцировки.

Иамунологичеекая характеристика лойкозных маелобластов о созреванием при БК ХМ1 была близкой к фенотипу миелобластов бе созревания при ОНЛЛ, так как клетки взаимодействовали о обоими

ЖАТ. Вероятно, по иммунологическим признакам эта бластные эле-ганты являются клетками менее дифференцированными, чей по морфо-гогаческнм.

В трех случаях при OHM (один ЛИ и два М2) на миелобластах, саряду о миелоидными, бит обнаружены эритроидныа антигены, опре-[еляемне по взаимодействию с МКАТ НАЕ-3 и НАЕ-9. Смешанная экс-:рессия антигенов миеловдного и эритроидног© ростков может сви-.етельствовать либо о близости ранних предшественников этих ли-ий гемопоэза я о возмсаноотп оуществования общей родоначальной летки, либо о разрепрессированпа аберрантных генов в процессе пухолевой прогрессии бластных элементов.

В ряде случаев ииелобласты имели одновременно пмадунологичео-яе признаки ниолоидных и лимфоидных клеток.

Экспрессия антигенов ранних В-предшеотвенников (la-подобного "общего") была констатирована на клетках МО и MI субтипов при Ш (в 3 из 27), при лейкешзации МСА (в I из 3) и при Ш ИМ а II из 18 случаев). Эти миелобласты была расценены как клетки гибридным фенотипом.

Т-клеточные антигены обнаруживались в одном случае на клет-IX субтша Щ и в трех на М2 при ОНЖ. Эти бластные элементы ха-иггеризовались высокой степенью цитохимической днфференцпровки. >ацулоцитарщ»е ферменты в них выявлялись в 80-100$ клеток. Ис-)льзуемые МКАТ к Т-антигенам относились к кластеру дкЬференцнров-t CD—7 и обладали способностью реагировать не только с Т-клот-тз, по и с ранними миелоддкшп предшественниками.

Представленные данные свидетельствуют о значительной иммуно-тачеокой гетерогенности бластов при хранулоцятарных гемобласто-IX. Мпелоидная природа клеток подтверждена в 11% случаев. При [2Щ и МСА в стадии лейкемизацин уоиленио признаков морфоцптохп-ческой двффэренцировкн сопроводдалось сниаением экспрессии спа-фическпх антигенов. Гибридный фенотип определялся па клетках ннпх этапов созревания.

йлсщологаческая характеристика мзолобластов при БК ЗЗШ не висела от горфоцятохш.тачесгдх особенностей клеток. Одяовремен-я экспрессия миелоидных и В-лшдфоидных антигенов обнаружилась на миелобластах, относящихся к разным стадиям длфференци-вкп, фенотип клеток при Ш ХМЛ бил менее зрелым, чем прз ОНИ нейкемизации МСА.

Культивирование клеток костного козга и крови в подуашдкоа агаре било проведено у 32 больных ОГЛ, 26 - БК ШЛ и у трех МСА в стадии лейкеыизации. Рост в культуре гранулоцитарных предшественников в 23 случаях носил нормальный характер, в 12 исследованиях колонии и кластеры не образовывались. В 26 наблюдениях был констатирован лейкемический характер роста, при этой определялось повышение способности к колонне- и кластарообразованию (132 - 4320 х I05 клеток при норме 73х105 клеток), нарушение соотношения колоний и кластеров.

Результаты культивирования существенно зависели от степени зрелости бластов. Лейкемический характер роста определялся чаще при вариантах 112 и МЗ (57$ случаев), чем при МО и Ш (2С# наблюдений). Миелобласты с созреванием ооладали способностью к образованию в агаровой культуре колоний, лейкемическиа промиелоциты-кластероЕ.

Как при нормальном, так в лейкемическом росте в культуре определялись преимущественно (60-90$) нейтрофильные клеточные агрегаты. Число эозивофальных колоний и кластеров не превышало, как и в норме,40^. Созревание гранулоцитов в культуре в большинстве исследований не отличалось от контрольной группы. В цктограышх преобладали палочкоядерные формы (80£), число молодых гранулоцитов колебалось от 15% до 2С#, сегмантоядерных - от 0,5% до

В двух случаях (один ОГЛ, второй - БК ХМЛ) при субварианте Ы2 в препаратах культур обнаруживались кластеры, состоящие из миелобластов. Они располагались на фоне клеточных агрегатов И8 согревающих гранулоцитов. Вероятно,, в этих наблюдениях бластные элементы обладали способностью к пролиферации, но не дифференциации в культуре.

Количество макрофагов на I мм^ во всех изученных случаях ва-риировало в нормальных пределах (0,2-2,6 на I мм^).

Цито:енетическое исследование бластных элементов костного мозга и крови било проведено у 22 больных Of.Ul, из них у 4 была обнаружена транслокация t (9;22), в II транслокация t (8;21) в 6 другие, различные хромосомные аномалии, у 3 ка; ютип был нормальным.

Филадельфийская хромосома была обнаружена в миелоидных клеэ ках субтипов 140 и Ш. Миелоиласты Ш отличались низкой степевы диффереьцировки. Активность згранулоцитарных ферментов у них бш

¡лабой, число пероксидаз- и хлорацетат остераз - позитивных кле-:ок не превышало В двух шмунологическп обследованных случаи миелобласты (1.(1) реагировали с МКАТ ЖО Ш-1 и ИКО Г-2 (17% и 11% позитивных плеток соответственно). В одном наблюдении была сонстатирована такяе экспрессия "общего" антигена, специфичного ия В-ранних предшественников (7% позитивных клеток).

При клонировании клеток субтппа М1 одного больного Рь'-позп-:ив!шм лейкозом наблюдалась лейкешгческая пролиферация в культуре с увеличение?! числа кластеров (120x10® клеток) п спиленном ко-шчества колоний (12х105) (при порте 32 и 41х105 соответственно).

Таким образом, РЬ'-пояптгознне клетки отличалпсь от остальных шелобластов низкой морфоцзтохшгачесной дпфференцпровкой, гетерогенностью фенотипа п способностью к леШсемической пролкферацш в культуре.

Транслокация * (8;21) была выявлена в карзотхшз члиэлоблас-сов о созреванием у II из 19 больных ОМ. СравнптелЕноэ ■язучзшо -•орфофушщпональных особенностей бластов в законности от налз-шя шш отсутствия этой хрс:.:осо.'.иой аноюлни но выявило у ггах зущзствешшх различий. Так, члсло пакроформ, содержание зернис-гоотп, активность пероксцдазы, способность к патологическому рос-гу в культуре были близки в обеих исследованных группах большее. Гаккм образом, наши данные но подтвердили точку зрения э^гзку (19В4) о наличии какнх-лкбо специфических признаков "у гяелоблас-гов с подобной громооошой аног■аллей.

Транслокацпя t (15;17) была обнаружена во всех 9-случаях ЭПЛ, подвергнутых патогенетическому исследованию. У '0 болвяыз бластные элементы лмолд типичную характеристику лейкознкх щго-:.!лолоцптов, з одном случае в клетках отсутствовала зорнпстссто.. Наличле спсцпфпческого цптогснотпческого паркера позволздо подтвердить корфсщггохш.ачесхи1й диагноз а гранулярного варианта ОШГ. Высокая частота выявлешм (90$) транслокацил г (15;17) в клетках субтЕпа ИЗ делает применение этого критерия достаточно па-дешпел.

Прз цитогонетическсм исследовании бластных одемоптоз больных шедобластным БК ШЛ в большинство случаев определялась фзладель-фйская хро1мсо!1а (56 пз 60 наблюдений). Кро:га того, была выявлены такхе дополнительные хрспосс.'гзнэ аберрация. Наиболее часто встречались изменения 17 хрсгюсомы: наяпчгэ 1 (17) плж трисоетя

17, иногда в сочетании с другими хромосомными аномалиями, чаще всего с трисомней 8. Перестройка 17 хромосомы определялась дост верно реже (х2 = 6,7) в кариотше бластов МО (в 11%) по сравнен о миелобласташ оубтша Ы1 и М2 (в А1%).

Таким образом,результаты онтогенетических исследований позв ляют заключить, что изменения кариотипа ьш ел об ластов законоыерн для разных этапов даффорешщювки. Так, в ранних миелоидных пре, шественниках выявляется №'-хромосома, в миелобластах о созрев идем транслокация г (8;21), в лейкозных промиелоцитах-транслок ция t (15;17). При БК ШЛ по мере созревания миелобластов увели чивается частота аномалий 17 хромосомы. Показатели цитогенетиче кого исследования имеют несомненную практическую ценность, так как их использование способствует уточнению варианта гемобласто в трудных случаях.

Представленные данные указывают на наличие определенной вза 1лосвязи мегду морфологическим уровнем дифференцировки и функцио калъными особенностями бластов граяулоцитарной линии при гемо-бластозах. При остром лейкозе и ША с лейкемизацией по мере ооз. вания бластов врастает активность ферментов, способность к пат логическому росту в культуре и снижается экспрессия специфическ антигенов. При БК ХМЛ степень двйеренцировки клеток низкая, оц холевый субстрат представлен, в основном, либо малодифференциро ванными миелобластами, либо миелобластами с низкой пероксидазно активностью и гибридным фенотипом. Показатели клеток не различа ются существенно в зависимости от их морфологических особенност

Факторы прогноза. При миелобласгном БК ХМЛ и ОНЛЛ клетки с слабой дифферинцировкой оказались менее чувствительны к цитоста тичзскЕМ препаратам, чем более зрелые элементы. Эффективность л чения больных БК ШЛ была низкой во всех случаях, Ме длительное тв БК составила 4,0 мес.

Цри ОНДЛ лечение бальных МО и !Д субвариантом с гибридным ф нотипом бластов и/или о -хромосомой (5 наблюдений) также бы безрезультатным. Длительность жизни колебалась от 3 до 6 месяце

Анализ выживаемости пациентов методом Каплаи-Майера в завис иости от Ш, Ы2 и МЗ субтипа бластов выявил достоверно болШую выживаемость при М2 субварианте (р < 0,001). Медиана длительное ти жизни ооставила соответственно 4,8; 7,8 и 3,7 мес. Это разлн чие определялось тем, что при М2 суоварианте ремиссии достигали

!товерно чаще {33%, 46% и 1С# соответственно).

Среда башых М2 субвариелтон, подучавиих одинаковую герепаи шваемость была выае при наличии патологического роста в куль-ре клеток и увеличении числа гранулоцитов в костном козге более , Активность пероксидазы и наличие транолокации * (8;21) пе нг-ш роли в определении прогноза заболевания.

Монобластный и миеломонобласгный гемобластозы

Лейкемическиа ионобласты без созревания (М5а) и с созреванием 5в) били выявлены в 40, ниеломонобластн (1Л4) в 29 случаях гемо-астозов. Как видно из данных таблицы 4, при OHM обнаруживались scth всех трех субтипов, при БК ХМЛ п ГСА о лейкемизацией толь-ионобдасты без созревания и шеломонобласты.

Таблица 4

Частота выявления монобластов без созревания (И5а), о созреванием (Н5в) и миеломонобластов (М4) при гемобластозах (случ., %).

убтип клеток Число ОНИ БК ХМЛ ГСА

1Л5а 30 21(70) 5(17.) 4(13)

М5в 10 10(100) 0 <0

Ы4 29 25(91) 20WS)

Ионобласты без созревания (М5а). Морфологически '.спи 'представай собой лейкозные элементы большого размера гс 'Низким ядерно-гтоплазматическим отношением, с ядрами правильной округлой формы, •руктура хроматина отличалась нежносетчатым строением, в ядрах [ределялись крупные нуклеолы. Окраска цитоплазмы тзариировала от 13обильной до серо-голубой. В отдельных случаях !в ^клетках присут-зовала легкая азурофильная зернистость. Прв .цитохимическом иссле->ванип была выявлена высокая активность -изферментов неспецифичес-зй эстеразы (о<-нафтилацетат 208 ед. бутират 150 ед.эстераз), хгибируемых фторидом натрия,и минимальные количества пероксидазы хлорацетат эстеразы (0,6 ед.) в-единичных элементах. ШИК-пози-юное весество в диффузной форме в умеренном количестве обнаруживалась слабая зернистость. Активность изоэнзимов неспецифической гтеразы была высокой (202 н 167 ед.) и практически не отличалась г содержания ферментов в монобластах без созревания. В то ае вре-

мя количество пероксидазы и хлорацетат эстеразы (13,5 ед.) в клетках М5в было достоверно больше, чем в М5а (р< 0,01). Умер< ное содержание диффузно расположенного ШИК-положительного вещее ва определялось в клетках во всех случаях.

Бласты при миеломонобластном гемобластозе (М4). Как правиле в блаотной популяции присутствовали два субклона клеток: миело-бласты и монобласты (27 из 29 наблюдений). Соотношение блаотные элементов этих двух типов широко вариировало: в 19 случаях преобладали миелобласты (более 50? клеток в лейкозкой популяции) ] в 8 монобласты. Степень диф^еренцировки миелобластов также был: неодинаковой. Наиболее часто (20 наблюдений) определялись миел< бласты с созреванием. Лейкозные монобласты были в основном пре; ставлены Ы5а формами. Однако в отдельных наблюдениях (9) в мон< бластах в крови появлялись признаки созревания: ядра прнобрета; лопастную форму, цитоплазма становилась более светлой. Такш* ( разом, в крови,в отличие от костного мозга,в части случаев мон< бласты можно было расценить как клетки с д^ференцировкой. Ферс ты гранулоцитов (пероксидаза и хлорацетат эстараза) выявлялись клетках, морфологически расцененных как ынелобласты, изоанзшы неспецвфической ¿стеразы в ыоноблаотах. Показатели результатов цитохимических исследований в среднем по группе зависели от со« ношения миелоблаотов и монобластов в костном мозге больных.

В двух случаях ОЩЛ бластные элементы имели особую характеристику. Морфологически они были расценены как миелобласты с созреванием. Цитохимически во всех клетках была обнаружена акт: нооть не только гранулоцитарных ферментов, но и моноцитарных. Двойная реакция на клетках одновременно на хлорацетат и бутира эстеразы была положительной во всех лейкозных элементах. В то : время в остальных наблюдениях число позитивных миеломонобласто: в этой реакции не превышало Л.И.Яворковский назвал подобн клетки "мозаичными", и мы их обозначили как бласты М4н.

Фенотипирование бластов было проведено у 26 больных ОНДЛ, 3 БК ХШ1 и одного ГОЛ в стадии лейкемизации. Взаимодействие кл ток с МКАТ ИКО Ш-1 было выявлено во всех случаях ОНИ и ГСА и одной БК ХМЛ. Число позитивных клеток колебалось от 20? до 70? Антиген гранулоцитов (ИКО Г-2) был выражен слабо при ОНДЛ (не лее 20? позитивных клеток) к отсутствовал при БК ХМЯ.

В 2 случаях (0ШЛ и БК ВШ) на монобластах без созревания

ределялся "общий" антиген, в одном (К!А) 1а-подобный. Клетки згировали о МКАТ, специфичными для Т-лтфэвднцх элементов

) в одном наблюдении ОММЛ, аналогично тому, как это наслоюсь при ОМЛ.

При цитогенетическом исследовании в одном из 2 случаев ОМнЛ гарухивалась перестройка длинного плеча II хромосомы ( 11 q-). здного из 8 обследованных больных ОКАЛ в каряотипе бластов была ютатирована транслокация X. (8;21), специфичная для миелоблас-з с созреванием, а у другого - инверсия 16 хромосомы. У осталь-с больных острым лейкозом были выявлены либо различные неспецп-геские хромосомные аномалии (4 чел.), либо установлен нормальный зиотил (3 чел.).

При Ш ХШ во всех 7 случаях определялась -хромосома, в гх - перестройка 17 хромосомы (М5а и М4).

Клонирование гачопоэтических клеток костного мозга было провею у 23 больных ОНЛЛ, 2 ЕК ХМЛ и 4 ГСА в стадии лейкемпзацнн. Во >х случаях было установлено резкое увеличение числа макрофагов

100 при норме 2,4 на I мм2), в том числе и в двух наблюдениях I культивировании "мозаичных" миеломонобластов. Рост грапулоци->ных предшественников был сниженным во всех случаях, кроме одно-01ИШ, где обнаруживалось наличие лейкемических колоний и клао-юв.

Таким образом, проведенные исследования позволили констатиро-'ь три тша клеток при монобластных гемобластозах: мопобластн I созревания, с созреванием и "мозаичные" миеломонобдвсты.

Морфоцитохимическая, иммунологическая характеристика, а такта юобность к макрофагалъному росту в культуре у мопобластов 1!5а 5в существенно не различались.

Факторы прогноза

Выживаемость больных с мопобластным лейкозом без созревания и озреванием была близкой (медиана длительности лизни соотавила | и 3,7 мес. соответственно). При ОШЛ медпапа длительности ни такде существенно не отличалась (3,8 мес.). Однако у обоих шшх с "позалчными" бластама М4м были получены ремиссии про-лительностью 14 и 86 мес., в то время как у остальных пацлеп-I 0.'гЩ длительность ремиссий по превшала 5 месяцев. Вероятно, |заичные" бласты близки мизлобластам с созреванием не только по га/ морфологическим особенностям, во к по чувствительности к

цитостатккаы.

При ЕС ХМЛ длительность заболевания при М4 субварианте была несколько выше (Не 99 нес.),чем при субварианте М5 (Ме 72,7 мес. за счет большей продолжительности хронической фазы, однако эта разница не была существенной (р>0,05). Период БК был одинаково короток (Ме 4,5 мес.) у пациентов с разным субтипом бластов. Терапия во всех случаях была неэффективной.

Эритробластные гемобласто8ы

Группу эритробластных гемобластозов составили, в основном,* пациенты с эритромиелозом (9 человек), а такая одна больная с. БК ХМЯ.

Лейкозные 'еритробласты (116) по своим морфологическим особенн тям были неоднородны. В трех наблвдениях бластные элементы хара теризовались округлой формой, умеренным ядерно-цитоплазматцческ отношением и'правильными очертаниями ядер, структура хроматина, торых отличалась пааносетчатьш. строением. Определить природу эт клеток на осцовашг морфодоиле сеех признаков было затруднител! Лишь выраженная базофилия цитоплазмы давала основание предположить эритрощщое происхождение. клеток. В. остальных 7 случаях в блаотах определялись признаки элементов краоного ряда; пикнотнч ное располоаение хроматина, выросты цитоплазмы в виде утаек, ба; филия цитоплазмы. Цвтохимпческц в врптробластах определялось у! ренное содержание о<-нафтилацетат эстеразы, нечувствительной I фториду натрия, и практически полное отсутствие бутират астера: Подобное соотношение изоэнзимов неспецифичеокпх эстераз являет« характерным для элементов красного рада всех степеней зрелости (Лебедева Н.Б., Френкель М.А., 1986). В эрктробластах с созрев кием были выявлены сидерофильные гранулы.

У пяти больных в говуляции бластных клеток наряду с вритро ¿ластами сзредедялвсь также миелобласты: субтипа М1 в трех, су типа М2 в двух сдучаях. Эритробластл в этих наблюдениях морфол гическя были более дифференцированы, характеризовались более в раженной сддерофшшей. Миелобласты содержали пероксидазу и хло ацетат астеразу, а также ПЖ-положительное вещество.

Таким образом, морфоцитохнмячески в пяти случаях была уста лена моноклоновая вритробласткая популяция, в других пята ~ новая еритро-миелобластная. Среда эритробластов можно было вад лить клетки со слабыми морфологическими признаками созревания

бласты с отчетливой дифференцировкой.

Определение фенотипа бластов проводилось у 5 большее (4 эрнг-ромаелозои и I Ш ХМЛ). Во всех наблюдениях на клетках экспресси-ровались антигены, специфичные для элементов красного ряда, реага-руетие с 1ШТ НАЕ-3 (в средней 35? клеток), и антигены ранних оратроядных предшественников, реагирующих с ИКАТ НАЕ-9 (в средней 5??).

Наличие антигенов, специфичных для гранулоцитарной и грануло-цятарно-макрофагалыюй лщпш, было установлено во всех трех случаях при смешанной эрдтромделондной пролиферации, а такта в двух сз трзх случаев с морфологически однородными эритробластамн. Число позитивных клеток, реагирующих с ЖАТ ИКО ПН в двух послед-пзз исследованиях составляет 34? и ИКО Г-2 48? в среднем. Поскольку количество гранулоцитов в костном мозге больных не превышало 10£, мозно заключить, что эти лейкозные клеткц, экспрессируют иие-лоадиые ацтягены наряду с оритроидными.,

Тавдм образом, имгдунологические данные, позволили подтвердить артрсцоду? природу фщ^ов во всех ©зеледовадпых случаях, и, в частности, в тег, Где го^одогиче сулд ^агностика была затрудпо-ка.

Культивирование в агаровой среде гемопоэтических клеток было проведено у четырех больных эритромиелозом и у одной БК ШЯ. Нор-1:длыше показатели, клошрованш определялись в одном псследовапил, отсутствие колоний и кластеров в двух. Патологаческпй характер роста с увеличением числа кластеров бил установлен в 2 наблюдениях (150,0 п^310х105). В обоих этих случаях лейкозная популяция в костном мозга была представлена морфологически однородными эрпт-робластамп. Данные клонирования коррелируют с результатам иммунологического исследования и свидетельствуют о том, что лейкемичес-пио зритробласты обладают признаками элементов гранулоцнтаряого ряда: экспрессией специфических гранулоцитарных антигенов и способностью к росту в агаровой культуре.

Состав гранулоцитарных колоний при подсчета программ не отличался от нормы. Число макрофагов вариировадо в цоргалышх пределах (1,2-1,8 на I мм2).

Результаты проведанного исследования лейкозннх эритробластов позволяют установить определенные раэлцчкя признаков клеток в зависимости от степени ъх зрелости.

К наименее дифференцированным элементам, видимо, следует отнести эритробласты, морфоцитохимически отличающиеся ба'зофилией цитоплазмы и высокой активностью сх-нафтилацетат эстеразы, нечувствительной к фториду натрия. Установить точный гистогенез стих клеток возмогло только на основании иммунологических данных.

В тех случаях, когда в костном мозге определяется созревание эритроидных элементов до более зрелых форм, бластные элементы имеют морфологические признаки эритробластов и содержат значительное количество сидерофильных гранул.

Факторы прогноза

Лечение больных ОЭМ в большинстве случаев было неэффективным. Медиана длительности жизни составила 3 месяца. Ремиссия была подучена только у одного пациента сроком два месяца.

Лтфобластные гемобластозы

Лкмфоидные бластные клетки па основании морфоцитохимических особенностей с учетом ФАБ-классификации острых лейкозов были подразделены на субтипы: Ж, Л2 (с зернистостью и без зернистости), ЛЗ и недафференцируемые формы. Частота обнаружения бластов различных субтипов при ОВД, лтфоиднои БК ШД и лейкемззации ЛСА представлены в таблице 5. Как видно лим$областы субтипа Ж обнаруживались только при (Ш, Л2 при всех гемобластозах, ЛЗ преимущественно при ЛСА с лейкемизацией, недифференцируемые формы лишь при ЛСА.

Таблица 5

.Субтипы лльфобластов при разных гемобластозах (случ.)

Вариант гемоблао- тоза Число больных Частота выявления субтипов

Л 12 бе 8 зернисти Л2 с вер нистост. ЛЗ недвф-ферен.

ОМ 88 26 45 14 3 0

БК ХМЛ 13 0 12 X 0 0

ЛСА 72 0 34 16 18 4

Субтдд Д. Морфологические признаки лим$областов субтипа Л1 были разнообразны. Как правило, клетки имели округлую форму, но в 4 случаях наблюдались элементы о неправильными вытянутыми очертаниями. Ядра характеризовались либо правильной, либо складчатой

формой, структура хроматина отличалась грубоватым строением. Нук-леолы определялись редко. Цитоплазма имела светлогодубой цвет. В 3 случаях » 5^-10^ клеток определялась зернистость. Диаметр клеток в среднем по группе составил 10,2+0,3 ык.

Митотический индекс клеток равнялся 1,9+0,03&

В болыаинстве случаев (86$) было, выявлено ШК-подоаительпое вещество и ферменты: кислая фосфатаза (в 54$) а изоэнзтш неспе-цсфзческой зстеразы, нечувствительные к фториду натрия (в &8%).

Лнифоидный тип бластов сохранялся неизменный во всех случаях при повторном исследовании (15 наблюдений).

Субтнп Л2. Клетки этого субтипа обпарузивалась при всех гемо-бластозах. Среди лим$областов было выделено две формы: не содор-аэдие зернистости и с зернистостью. Анализ их особенностей проводился раздельно.

Лю-ф^исты оез зернистости, характеризовались, как правило, округлой формой, высоким ядерно-цигоплазматнческЕМ отношением. Очертания ядер были различны: округлые, неправильные, складчатые. В 4 случаях ОМ и ЛСА в стадии лейкемизацпи ядра имели расщелину в 5-10$ клеток. Структура хроматина была нелносетчатой, обнаруживались нуклеолы. Окраска цитоплазмы имела светлогодубой цвет. Величина клеток вариировала значительно. В части случаев ОЛЯ (10£) и ЛСА (I7J5) макроформы составляли более 2С# лейкозных элементов в популяции. Величша диаметров лкл$областов в среднем составила 13,2 мк и достоверно не различалась при различных геио-бластозах (р>0,05).

Проли^еративный потенциал клеток при ОЛЛ был достоверно ниже (р< 0,01), чам при ЛСА с лейкемизацией. Митотический индекс равнялся соответственно 1,3&и 1,6&>соответственно.

Гранулы ШИК-положительного вещества обнаруживались несколько чаще при 0ЛЛ (71;?), чем при ЛСА (52$). Ферменты выявлялись в половине наблюдений, с одинаковой частотой при различных генобласто-зах. Принадлежность к лим|юиднону ряду оставалась постоянной в клетках при повторных исследованиях (24 пабдюдения).

Лимфобласты о зернистостью отличались неправильными вытянутыми очертаниями, умеренным }щерно-цитоплазматически11 отношением п наличием нехной, пылевидной зернистости в 5-I5Î лгалфобластов (в среднем 9£). Ядра были либо округлой, либо складчатой формы. Структура хроматина была несколько сглаженной. Цитоплазма окра-

пшвалась в светлоголубой цвет.

Размер клеток варивровал, содержание макробластов более 2(# в популяции обнаруживалось только при ЛСА. Диаметр лимробластов о зернистостью в среднем по группе был 14,4 мк и не различался достоверно при различных гемобластозах.

Ыитотический индекс лимробластов с зернистостью при ОМ составил 1%о, что было достоверно меньше, чем при ЛСА (1,5&) (р< 0,05).

Положительный результат ШИК-реакции наблюдался в 72^ случаев (Ш и ЛСА. ШИК-положительный материал, в отличив от остальных димфоидных клеток, в ликфзбластах о зернистостью располагался в виде многочисленных мелких гранул. Содержание ШИК- и фермент-позитивных клеток при субтипах Л2 без зернистости и с зернистостью достоверно не различалось (р>0,05).

При повторных исследованиях было установлено изменение хв$фе-ренцировки бластов в 5 из 17 наблюдаемых случаев. У двух больных ОМ было констатировано появление клеток с моноцитонднымя ядрами s о высокой активностыо неспецифпчоской эстеразы, чувствительной к фториду натрия. Клетки были расценены как ыонобласты с созреванием. У двух пациентов ОЛЛ и одного ЛСА с лейкемизацней в бластах изменился характер отложения ШИК-положительного вещества: вместо гранул определялось диффузное расположение продукта реакции. Клетки были отнесены к маподифференцированным миелобластам,

Субтип ЛЗ. Морфологически клетки характеризовались однородностью признаков. Очертания лимфобластов в большинстве случаев были правильными.. Ядра имели округлую форцу. Структура хроматина была нежной, часто выявлялась одна большая нуклеола. дерно-цито-плазматическое отношение в мезофорыах было высоким, в макроформах - низким ' или умеренным.

Размер клеток в среднем составил 14 мк, достоверных различий в величине клеток при ОЛЛ и ЛСА не определялось (р>0,05).

Митотический индекс равнялся 2,2£о.

ШИК-положигедьное вещество и ферменты в бластах при ОЛЛ не обнаруживались, при ЛСА - присутствовали в половине наблюдений.

Результаты повторных исследований лимфобластов ЛЗ свидетельствовали о стабильности норфоцитохимпческих признаков клеток этого субтнпа.

Субтип недифференцируемых бластов определяйся только при ЛСА. [айкозные элементы морфологически существенно отличались от оо-■альйых лимфобластов своим размером и выраженной анаплазией. В 1ластной популяции во всех случаях преобладали макроформы, в редкец они составили Величина диаметра клеток равнялась 8 цк п была достоверно больше аналогичного показателя остальных ластов при гемобластозах (р<0,01). Ядерно-цитопдазиатическое тпошение было низким, Ядра клеток имели лапчатые монструозные чертания. Цитоплазма окрашивалась в светлоголубой цвет. В двух аблвдениях было констатировано явление фагоцитоза.

Митотический индекс равнялся 1,0$о.

Цитохимически было выявлено наличие ШИК-позптивных гранул в рох случаях (32% позитивных клеток в среднем), слабой активноо-и кислой фосфатазы в одном наблюдении, Отсутствие изоанзимов не-оецифической эстеразы.

Повторное исследование одного случая не выявило существенных змопений показателей клеток.

Таким образом, при лейкозах (ОМ и лимфоидиом БК ХИН) по равнению о лейкеиизацией ЛСА увеличение числа макроформ бластов злее 20%, были более редким, уровень пролиферативного потенциа-1 бластов был достоверно ниже, а наличие ШИК-позитивного вещаст-1 обнаруживалось чаще. Сыеиа лнифондного типа бластов ва миело-щый был констатирован и при ОМ, и при ЛСА в лиыфобластах Л2 с фнястостью.

Иммунологическое исследование лш$областов было проведено у ) большее.

В-лимфоидный фенотип был установлен в 24 случаях ОМ, 3 БК Ш и 15 ЛСА в стадии лейкеыдзаЦии. Ранние В-предпественникн, ;спрессирунцие 1а-подобиый и "общий" антигены или содержащие [■гошшэматкческне шасуноглобулины, определялись преимущественно а ОМ (22 пациента) и БК ХМД (3 пациента). Зрелые формы В-блас-■в с наличием поверхностных тиуноглобулинов были обнаружены стовзрно чаще (х2 = 29,5) при лейкемизации ЛСА (12 из 15 боль-х},чем при ОМ (2 из 24 бо&ышх).

Т-лиыфоядный фенотип бластов был установлен у 13 больных ОМ 12 ЛСА в стадии лейкемизации. Т-лнмфобласты о разнш уровнем фференцировки (Т-1 костномозговые предаоотаенники, Т-2 ранние лоциты и Т-3 клетки тшдуса) встречались с одинаковой частотой

при обоях геыобластозах.

Лейкозные элементы о О-фенотипом были обнаружены Ь 5 случая: ОЛЛ и 10 лейкемизации ЛСА.

В 4 набладениях (2 - ОЛЛ и 2 - ЛСА) бласты ищувологачеоки характеризовались как миелоидные элементы. Клетки отнооилиоь к субтипу Л2 без зернистости, не содержали ШК-положительного ве-цоства, экспресопровали антигены грацулоцитов-макрофагов (в сре, нем в 25$ клеток) и гранулоцитов (в среднем 15$).

При ОЛЛ у 4 больных бласты имели признаки смешанной ыиелоид но-лиафоидной дифференцировкн. Морфологически клетки относились либо к субтицу Ж. (2 случая), либо к Л2 без зернистости (2 случая), ШК-полояительное вещество определялось в 3 иэ 4 наблюдений.' Ишупологпческп у одного больного на клетках обнаруживалис 1а-подо<5ный (20$ клеток) и 1ранулодитарпо-какрофагальный и гран лоцитарный (15$) антигены. У трех пациентов была выявлена окспр сия эритроидных (25$) и димфоидных антигенов: 1а-подобного (55$ "общего" (15$) или Т-антигенов зрелых тиыоцитов (27$).

Иммунологические дшшые позволили установить лк.фопдаую при падлешюсть бластов у 77$, определить 0-фенотнп - у 11$, ыиелоя ный фенотип - у 4$, гибридный - у 8$ больных ОЛЛ. При БК ХШ у воех 3 обследованных больных ллм$обдасты имели фонотпп ранних В-предшественников. У пациентов с лейкемкзадней ЛСА липфоидноя природа опухолевых клеток была подтверждена в 69$ случаев. В от личие от ОЛЛ фенотип В-бластов был более зрелым, а клетки с 0-3 нотппом определялись чаще (25$). В единичных наблюдениях бласть имелп миелопдный фенотип (6$).

Цдтогенетическое исследование было проведено в 20 случаях ОЛЛ, из них в 5 была установлена трапслокация * (9;22). Р1г' -пс зитивные лимфобласты не имели каких-либо особых иорфоцитохшличе клх отличительных признаков и характеризовалпсь фенотипом ранш В-предше ствешшков.

Клонирование клеток костного мозга й крййй 'проводилось у 3' больных ОЛЛ, 3 Дшфовдным БК ХМЛ и 21 ЛСА в стадии лейкемизацш Как правило, (48 из 58 исследований) соотношение колоний и кла< торов в культуре бЯло ; нормальным, но Число клеточных агрегатов сниженным. В 4 наблюдениях рост в 'культуре отсутствовал, в 3 -показатели клонирования быШ нормальны (В-ЛСА). Лейкемически1 характер роста "был -определен во всех 3 исследованиях ин -пози-

иного лейкоза а в одной наблюдении ОЛД о миелоидным фенотипом

шстов.

Факторы прогноза

При ОМ была установлена корреляция ¡лезду выживаемостью боль-ас к отдельными параметрами бластов. Прогностически благоприятна оказался субтип Л1 лшфобластов и экспрессия на ншс "общего" 1тигена. Длительность лизни (Не 27 мес.) при Ж субварианте была эстоверно больше (р<0,01), чем при остальных субваряаптах (Не ,0-11,0 мес.). Наименее благоприятным для больных ОМ оказался Гбтип бластов о зернистостью и наличие рь* -хромосомы в карзо-ше клеток. Во всех этих случаях лечение больных было нооффек-хввш.

У больных хронический миелодейкозои длительность лизни при шфоидном НС Х?Д была 98,6 нес., что было достоверно болнпе, чей ри миелоядноы (Це 49,0) (р<0,01). Это различие было обусловле-э большей продолжительностью хронической фазы. Длительность соб-гвенно бластного криза при лнифоидном и циелоиднои субварпантах ила одинаковой (Ме 4,0 мес.).

Для пациентов с ДСА прогностически благоприятным оказалось аличие Д2 субтица бластов бьз зернистости. Ме длительности жаз-а составила 18,0 мес., в то время как при остальных оубвариап-ах ДСА она колебалась от 9,0 до II мес», различие было достоверна (р<0,05). Наличие О-фенотшш бластов коррелировало о боль-ей выживаемостью пациентов (Мэ 21 цес.) за счет более продолаи-ельной стадии вне лейкемизации, чем при Т- (Ме II цес.) или -1СА (Ме 8,5 мес,). Длительность периода лейкемизации существен-о не различалась при различных морфологических шш иммунолога-еских субвариантах ЛСА.

Таким образец, результаты проведенного исследования позволяет заключить, что при всех гемобластозах особенности бластных леток закономерно связаны с их гиотогенетической принадлежностью : уровнем двфференцировки. Вариант гемобластозов, клщшческоэ те-ениа заболевания и его прогноз определяются биолоуячеекгаш ¡войствами клеток опухолевого оубстрата.

выводы

1. Клетки опухолевого субстрата при гемоблаотозах характеризуются значительной гетерогенностью морфо-функциональных свойств обусловленных различиями в гистогенетической пршшдлжености и уровне зрелости бластов. Особенности опухолевых клеток в значительной степени определяют вариант заболевания, особенности клинического течения и эффективность лечения болышх. Необходимым условием современной диагностики является комплексная оценка данных морфоцитохимических, иммунологических, цитогенетических и культуральных исследований.

2. Неопластнчеокое поражение любого гемопоэтического ростка может быть обнаружено при всех гемоблаотозах. Опухолевая трансформация клеток миелондной линии чаще обнаруживается при острых лейкозах в хроническом миелолейкозе (70%), лимфоидной - при ГСА о лейкемизацией (85^). Уровень поражения при Ш ВШ выше, чем при остальных гемоблаотозах.

3. Наиболее ранними лейкозными миелоидными злементами является малодафференцированные миелобласты (МО). Они характеризуются наличием ШИК-положительного вещества, расположенного двффузно, и вкспреосией•гранулоцитарных и гранулоцитарно-макрофагалышх антигенов. Остальные признаки миелоидкой дифференцировки: специфическая зернистость, палочки Ауэра, ферменты гранудоцитов и моноцитов, способность к росту в агаровой культуре в клетках отсутствует. ЫалодЕфферевдированные миелобласты встречаются преимущественно при Ш хронического миелолейкоза (38%) и в отдельных случаях при 0НЛ1 (250 н лейкемизации ГСА (2,5%).

4. Среди блаотов гранулоцитарного ряда определяются три субтипа клеток: миелобласты без созревания (М1), миелобласты о созреванием (М2) и лейкозныа цромиелоцнты (МЗ). Они оодержат специфические ферменты, экспрессируют антигены гранулопдтов и грануло-цитов-макрофагов, обладают способностью к патологическому росту

в культуре с образованием гранулоцитарных колоний и кластеров. В части случаев на мне лоб ластах могут выявляться дополнительно вритроидные (18%) или Т-антигенн (€#).

По мере усиления морфологаческкх признаков дифференцировки в

йлао-лшх клетках грануловдт?и?ш?о уяда цри ОНИ и ГСА в стадии лойх'.омцзадш! повышается акдацость ферментов, сшпаатся окспрео-спя специфических антигенов ц цдрас^ает способность к росту в культуре. При БК Х}.Ш в бд&свдд в доловпда случаев (46$) подобная корреляция отсутствует.

При ОНДЛ определяются воа тшщ ^ролудоцдтарных блаотшл кдо-ток: IG (182), 112 (34$) ц Щ (12$), при БК ХШ1 только илелоблао-ти Ш п 112 (8$ и 28$ соответственно).« Дейкоаизация ГСА по мизло-бластноцу типу (!Д ц !.!2) обиарузиваетсд в едшщчпых наблюдениях (5%),

5. Дейказцад цоноблаотц (без созревания П5а ц о созреванием 15в) содержат фаруенты полоцзтов, экопрессцрурт антигены i^anyxo-щпарных я грацулощтарно-вдирофагальных зле-мнтов, обладают способностью к росту в культуре по иакрофагальцоцу типу. Активнооть онзпиов, пиказателп фенотппа и поведение в агаре монобластов не различается в зависимости от их морфологической зрелости.

Монобласты без созревания обнаруживаются при всех гемобласто-sах. в 12$ случаев ОНИ, в 6$ при БК хронического миелолейкоза, в 5% при лейкемизации IÜA. Цонобласты о созреванием выявляются только при ОШШ (.5%).

6. При миеломонобластном гемобластозе (М4) блаотпая популяция могет быть представлена либо двумя типами клеток: маелобластает

и ыонобластамы с резной степенью дш|фзрэнцировкп, либо однин типом "мозаичными" миеломонобластаьд. В последнем случае клетки имеют одновременно признаки обоих субтипов. Она морфологически характеризуются как шелобласты с созреванием, содержат ферменты гранулоцито!/и моноцитов, экспрзссируют аптагоны грапулоцитов и храцулоцитов-шкрофагов, способны к ткрофагальному росту при клонировании в агаре.

Шюломонобластный вариант определяется при всех гемобластозах: чаще при ОНЛЛ (13$), peza при Щ хропического миелолейкоза (2$) и лейкемизации ГСА (2,5$). "Мозаичные*1 ндоломонобласты обнаруживаются "только при остром лейкозе (1,5$).

7. К лэйкознкм зритробластам (Мб) относятся клетки двух типов: олементы, не имеющие морфологических признаков дифферонцдровки, п бгасты, морфологически ддоатк&ащруе'^ые как зритробласты. Во всех

случаях клетки експресснрутгг эритроидные антигены. В часта из них эритробласты имеют смешанный эритроидно-миелоидный фенотип и обладают способностью к лейкемическому граяулоцитарному росту в культуре. Эритромиелоз составил случаев ОНИ, вритробластный вариант ЕК ХМЛ - 2% наблюдений.

8. Лейхозные ляифобласты разделяются на субтипы Л1, Д2 (о наличием или отсутствием зернистости), 13 и недифференцируемые формы. Лимфобластн Л1 и Л2 имеют различный фенотип (ранних В-пред-шеотвенников, Т- либо 0-бластов), клетки оубтида ЛЗ - фенотип зрелых В-бдастов. Лимфобласты не обладают способностью к патологическому росту в агаровой культуре.

Ранние В-предаественншш выявляются'преимущественно при ОЛЛ (52$) и лшфзпдпоы БК хронического мнелолейкоза (I00Í), В-бласты - при лейкемизациз ЛСА (42$). Т-лимфобдасты с разным уровнем доф-ференцировки определяются с равной частотой при ОЛЛ (31%) в лаЁ-кемззацкп ЛСА (32%).

9. Элементы о признаками двойной (цаедовдной п дш£опдной) дифференцировки, так называемые габрвдные клетки,составляют особый оубтип блаотов. Они во всех случаях окспрессируют антигены мяедопдных и В-дем£оедных клеток, в части наблюдений содержат форментц гранулошггов л моноцитов п обладают способностью к гра-пудоцитарпому росту в агаровой культуре.

10. Норфо-фушашонашше особенности бластов дмеют существен-то сшченпэ для определения прогноза при острых лейкозах.

При ОМЛ прогноз заболевания зависит от степени зрелости бласт-шх слемептов. Пра мЕалобластнои лейкозе без созревания вызтае-ыооть больных достоверно нению (4,8 кос.), чем пра ыпедобласгном лейкозе о созреванием (7,8 ыес.). Уведпчешхз содержания гранудоцитов в костном мозге более 6% п наличие патологического роста в агаровой культуре прп клонирования клеток являются благоприятными факторами прогноза при М2 варианте и на тают значения при остальных вариантах острого лейкоза.

При ОЛЛ более высокая выживаемость больных наблюдается при Л1 оубварианто (Но 27,0 мео.), чем при Л2 и ЛЗ субвариангах (Ме 4,0 и 11,0 мес. соответственно). Наибольшее число ремиссий определяется при экспрессии на клетках "общего" антигена (75/0.

Нейдагоприятшгя! факторами прогноза является наличие зернистости, гибридного фенотипа и РЬ' -хромосомы в лицфобластах.

11. Длительность лизни больных хронический мпелолейкозом достоверно выше (р < 0,01) при лиифоидноц тшзо ЕК по сравнению о мзелоиднкм (11е соответственно 98,6 и 49,0 цео.). Это отличие обусловлено разницей в продолжительности хронической фаэы. Из собственно ЕК при всех вариантах близка и составляет 4,0 мео.

12. Выживаемость больных ДСА выше при лейкеыизацпи лпз^облао-гаш 12 субварианта без зернистости (Из 18 цео.), чей Д2 о зор-шотостьа и ЛЗ (На 11,0 и 8,0 цес. соответственно). О-фенотпп Алпатов является прогноотячески более благоприятный по сравнению

з Т- и В-фенотипом.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО TBIE ДИССЕРТАЦИИ:

1. Изучение хлорацетат-эотеразы » бластных клетках при острой лейкозе. - Цат. I Всес.съезда врачей-лаборантов. Харьков, 1973, о. 106-108.

2. О клинических особенностях в лечении острых лейкозов. -Сб. "Новое в гематологии", M., 1974, с. 50-79 (соавт. Лорае С.И. Поддубная И.В., Мансуров А.Н.).

3. Клинико-иорфалогические варианты острого лимфобдастного лейкоза. - Пробл.гемат. и перелив.крови, 1975, * 2, с. 35-42 (соавт. Хватова Н.В., Соловьева Е.А., Лорие Ю.И.).

4. Исход миеломной болезни в оотрую шшзио клеточную лейкемию, - Пробл. гшт. в перелив,крови, 1976, JS II, с. 50-52 (соавт. Лорие Ю.И., Рейаингер U.A., Пробатова Н.А., РахиыЗекова Б.С.).

5. К вопросу о гиперплазии вритропоэтической ткани у больных острым лейкозом. - Пробл.гемат. и перелив.крови, 1977, fi 5,

о. 16-18 (ооавт. Соловьева Б.А.).

6. О сочетании лейкозов о лимфогранулематозом. - Торап.архив, 1977, J5 8, с. 47-52 (соавт. Волкова U.A., Червонобаб Ю.В., Покровская Н.Н.).

7. Случай 5-лэтней полной ремиссии у больного острым модо-бластным лейкозом. - Сов.медицина, 1978, В 8, о. 135-140 (ооавт. Хватова Н.В., Круглова Г.В.).

8. Сравнительная характеристика кроветворения при лейкемиза-ции лиы$областноЙ лиыфосаркомы п лшфобластного лейкоза. -Пробл.гемат., 1978, JS II, с. 15-20 (соавт. Соловьева Е.А., Круг-лова Г.В., Протасова А.К.).

9ф Chromosome abnormalitiea end cllnical and morphology manifestations of chronic myeloid leukemla. - Human.Genet., 1978, К 41, p. 143-156 ( ed. Prigogina E.L., Pleiochman E.W., Volkova M.A.).

10. Закономерность хромосомных изменений при хроничеоксц :пелолейкозе и их сопоставление о клинино-морфологическими проявлениями болезни. - Пробл.гемат. и первллв.кровн, 1978, ö 9,

з. 7-13 (соавт. Пригояина Е.Л., Флойшан Е.В., Волкова U.A., Брз-гана Э.Г., Полоцкая T.U.).

11. Властные клетки при хроническом мделолейкозв. - Тез.докл. I Всесоязн.съезда врачей-лаборантов 20-23 ноября 1979 г., г.Воро-пловград, с. 140-142

12. Морфологические а цптохйлческла особенности блаотннх слеток в динамике острого лейкоза. - Лаб.дело, 1979, Ji 10, 0.595->99.

13. Сравнительный анализ морфологического состава селезенка

[ костного мозга при хроническом миелолейкозо. - Тер.архив, 1979, i 9, о. 75-78 (соавт. Захарченко H.A., Казанова Л.И., Волкова U.A.)

14. Необычная морфологическая картина бластного криза хропп-еского миелолейкоза. - Пробл.гемат., 1980, й 2, о. 58-60 (соавт. Олкова U.A., Агафонов В.А., Соловьева Б.А., Пробатова H.A.).

15. Клшшко-гематологаческие и цитогвветическио параллели при роппческом шелолейкозе. - Тер.архив, 1981, ß 9, с. 20-25 (соавт. олкова U.A., Флейпкан Е.В., Пригсшша Е.Л., Соловьева Е.А.).

16. Лейкозы у больных лзшфогранулематозами и другой злока-ественнши новообразования!®. - Сов.медицина, 1981, ß 4, с. 83-89 соавт. Всищрва U.A., Червонобаб Ю.В.).

17. Correlations between the clinical course, characteriatics

' blast cells and karyotype patterns in chronic myeloid leukemia. Human.Genet., 1981, N 58, p. 265-293 ( ed. Pleischman Ь'.Я., Pri-jgina E.L., Volkova H.A., Zakhartchenko N.A., Konatantinova L.N., ichkova G.P., Balakirev S.A.).

18. Особенности роста гранулоцитарных колоний в полужидком rape при хроническом миелолейкозе. - Мат.Всес.научн.кокф. "Рас-эзнавание и мер и борьбы с лейкозами человека и животных", Белая зрковь, септ. 1982, о. 38-39 (соавт. Харламова Л.А., Шерегшсз .И., Волкова Ы.А.).

19. Клиническое значенжз хромосомных изменений при острых лейкозах. - Пробл.гемат. к перелив, крови, 1982, А II, о. 10-17 (ооавт. Пригожина Е.Л., Флейшан Е.В., Пучкова Г.П., Волкова U.A., Петерсон И.О., Ильинская Г.В.).

20. Клиника и лечение рецидивов острого лейкоза. - Тер.архив, 1982, * 8, с, 18-21 (ооавт. Османов Д.Ш., Волкова М.А.).

21. Ыорфологичеокал характеристика колоний в агаровых культурах гемопоэтических клеток при хроническом миелолейкозе. - Тер. архив, 1982, Л 8, о. II6-I20 (ооавт. Харламова Л.А., Шерешков С.И. Волкова М.А.).

22. Общий антиген "нулевого" острого лимфобластного лейкоза ж "лю4>оидного" варианта бластного криза хронического миелолейкова. - Пробл.гемат. и перелив.крови, 1982, Л 9, с. 20-23 (ооавт. Барыи-виков A.D., Морозова Л.Ф., Волкова U.A., Фривовская И.В., Блохива Н.Г., Ыаякова С.А., Агафонов В.А., Тумян Б.Г., Эдельштейн О.В., Белянчикова Н.И., Туркина А.Г., Хан Г.Ы., Морозова Т.Н., Гаврило-ва И.Е., Османов Д.Ш.).

23. Chromosomal rearrangement 6{p23) in 5 patient with myelo» Elastic leukemia. - Human Genet., 1983, N 64, p. 254-256 (ed. Fleiachman E.W., Prigogina E.L., Illyinskaja G.H., Puchkova G.Î., Konatantinova L.H., Volkova U.A., Balakirev S.A.).

24. Хромосомный маркер I? px в терминальной стадии хронического киелолейкова. - В кв. "Новые достижения г диагностике и лечении нелимфоцитарных лейкозов", Рига, 29-30 ноября I9C3 г.,

о. 37-38. (соавт. Константинова Л.Н., Флейшан Е.В., Волкова U.A., Ильинская Г.В.).

25. Цитогенетическая характеристика хронического киелолейкова. - В кн.:иНовые достижения в диагностике и лечении недимфоци-тарных лейсоаов", Рига, 29-30 ноября 1983 г., о. 64-66 (соавт. Флейшан Е.В., Првгожина Е.Л., Волкова U.A., Цаякова С.А., Константинова Л.Н., Пучкова Г.П., Ильинская Г.В., Захарченко H.A.).

26. Культивирование в агаровой среде клеток костного мозга и крови больных острым лейкозом. - Тер.архив, 1983, Я 8, с.133-136 (соавт. Харламова I.A., Шерешков С.И., Волкова U.A.).

27. Иммунологический фенотип бдастных клеток у больных хронический изеловдввд лейкозом и его клиническое значение. - Тер.архив, 1984, JS 6, с. 50-53. (ооавт. Барышников A.D., Морозова Л.Ф., Фриновская И.В., Волкова U.A., Кан T.U., Городкина А.Г., Тупнцын H.H., Дроздова Т.О., Туркина А.Г.).

28. К вопросу o<J изменении варианта оотрого лейкоза. - Тер. архив, 1984, Л 6, о. 43-46 (соавт. Волкова U.A., Османов Д.Ш., Пробатова H.A., Павловская А.И.).

29. Оотрый базофильный лейкоз. - Тер;архив, 1985, й 5, о. 146-150 (соавт. Перилов АЛ., Волкова U.A.).

30. К вопросу использования ФАБ-кдассв$якацип острых нелпз$о-бластннх лейкозов. - Лаб.дело, 1985, й 6, о. 338-342 (ооавт. Протасова А.К., Соловьева S.A.).

31. Иммунологический фенотип бластинх клеток в диагностика острых миелоидных лейкозов. - Тер.архпв, 1985, й 5, о. 98-101 (соавт. Барыпников А.Ю., Волкова U.A., Тупнцын H.H., йорозова Л.Ф., Крыканов U.A., Перилов A.A.).

32. Цонокдоналыше антитела ИКО П5-1 н их использование в диагностике острых нелшфоидных лейкозов. - Совр.проблемы клин, гематол. и транофуз. 1!ат. сессии НИИ гематологии Груз.ССР, Тбилиси, 1985, с. I79-I8I (соавт. Кршянов U.A., Барышников A.D., Тупнцын H.H., Соколова A.B., Трубчанннова Л.И., Заботина Т.Н., Савельева Е.Ву Кадагпдзе З.Г.).

33. Клиническое - значение агаровых культур при остром лейкозе. - В сб.: "Стволовые клетки и опухолевый рост", Киев, Наукова думка, 1985, с. 143-147 (соавт. Волкова U.A., Харламова Л.А., Шереш-ков С.И.).

• 34. Получение и характеристика моноклоналышх антител ИКО rii-I. - Бпдл.експер.биологии^и медицины, 1985, й 6, с. 721-723 (ооавт. Крыжанов Ы.А., Барышников A.D., Блохина Н.Г., Тупнцын H.H., Трубчанннова Л.И., Соколов A.B., Харламова Л.А., Заботина Т.Н., Савельева Е.В., Кадагидзе З.Г.).

35. Диагностические возможности моноклональных антител МО Ш-1 в ИКО Г-2. - В кн.: "Профилактика, ранняя диагностика и лечение злокачественных новообразований", Рига, 1985, с. 144-145 (ооавт, Крьшанов U.A., Барышников A.D., Тупицын H.H., Трубчашшо-ва Л.П., Савельева Е.В., Харламова I.A., Кадагндзе З.Г.).

36. Блокада ЕК клеточной активности моноклональными антитела-га ИКО-11. - Эксп.онкология, 1985, т. 7, й 3, с. 34-36 (соавт. Барышников A.D., Трубчанинова Л.И., Савельева Е.В., Тупицын H.H., Крыганов U.A., Ыорозова Т.Н., Заботина Т.Н., Еяохина Н.Г., Када-гидзр З.Г.).

37. Редкие формы острых лейкозов. - Мат.сессии, посвящ. 50-дотив Института гемат. и перолпв.крови юл.акад. Г.М.Мухадзе, Тбилиси, 1985, с. 257-259 (соавт. Соловьева Е.А., Перплов A.A., Дру-iya Е.К., Тупидын H.H.).

38. Клшшко-морфологпческая характеристика Евдунологачзсппх вариантов властного криза хронического мкелолойноза. - Геыатол.

п трансфуз., 1985, й II, с. 12-16. (соавт. Барышников A.D., Иоро-зова Л.Ф., Волкова U.A., Фринозская И.В., Кан Т.М.).

39. Результаты применения современных преград терашш оотрах лейкозов взрослых. - Вестник Академии медицинских наук СССР,1986, й 5, о. 18-22 (соавт. Перплов A.A., Волкова U.A.).

40. Цорфофункциопалышз особенности бластных клеток при остром шолоуопобластнои лойкозс. - Зксп.онкодогия, 1986, т.8, ß I, о. 22-24 (соавт. Барышников A.D., Харламова Л.А., Соловьева ЕД.)

41. Острый плазцобласгный лейкоз при миоломной болезни. -Тер.архив, 1986, й 9, о. 36-40 (соавт. Соловьева Е.А., Круглова Г.В., Друтуп Е.К.).

42. Цитохимическая активность эстераз клеток коотного мозга в крови в норые в при лейкозе. - Лаб.дело, 1986, й 9, с.535-539 (соавт. Лебедева Н.Б.).

43. Соотав в морфоцитохиыиче окие особенности клеток колоний в агаровых культурах коотного мозга больных. - Гематология и транофузяология, 1986, й 2, о.43-47 (соавт. Харламова Л.А., Ше-

«агив С.И., Агафонов В.А., Соловьева Е.А., Еуачядзо Л.Н.).

44. Chromosomes in acute honlymphocytic leukemia. - Human.Ge-et., 1906, 73, И 2, p.137-146 (ed. Prigogina B.L., Pleiaohman . •W., Puchkova G.P., Uajakova З.Л., Volkova Ы.А., Protasova A.K.),

45. Критерии дсффвргнцпрованпах подходов к торопил оотрше пгфоблаотпых лейкозов взрослых. - Тер.архав, 1987, Л 6,0.27-31 соавт. Порилов А.А., Волкова U.A., Туппцш Н.Н., ФлаПгтгш Е.В.).

46. Морфофункциопальная характеристика блаотоп при оотрсм имфоблаотнем лейкозе п дЕзфойсастпоЗ лг^юсаркомэ. - Тер.архив, 987, И 6, о. 31-35 (ссавт. Тутшщш U.H., Соловьева Е.А.).

47. Мскохлонадышэ антитела к антигену еиолошшх плоток. -гш.зкоп.онкол. л иод., 1287, Й 7, с. 75-77 (соавт. Крнзаноз М.А., аршплков A.D., Тупицнз Н.П., Соколов А.В., Волкова Н.А., Баттгл-эв С.А,, Перзлов А.А., Иваненко П.А., Протасова А.К., Дубшшш .В., Кадагпдзе З.Г.).

48. Фенотип бластных клеток прп сотрем лкгфобластном лейкозо.

Эксп.онкология, 1987, т.9, й 3, с. 33-35 (соавт. Барышников A.D.,

упицын Н.Н., Харламова Л.А.).

49. A new specific chromosomal rearrangement t (11{20)

p15; q11) in myeloblaatic leukemia with maturation. « Leukemia, . 986, v.2, N 7, 430-432 (ed. Uitelraan P., Prlgogina E.L., Pleiaoh-an E.W., Qprwicz 3., Helm 3., Illyinskaja Q.VI., Kriatoff erson 0., andahl H., Volkova M.A.).

50. Современная диагностика остриг лейкозов. - Сб. Дпапюстп-а злокачественных новообразований, Москва, 1988, с. 60-63. соавт. Морозова Л.Ф., Лебедева Н.Б., Соловьева Е.А., Зубряхина .Н.).

51. Особенности лойкемиаащш гематосарксм о первичные порагс-ием кози. - Тер.архив, 1988, JS 5, с. 53-56 (соавт.' Сипдаиа М.Я., руглова Г.В., Пробатова Н.А., Соловьева Е.А.).

52. Ph1 -позитивный острый лейкоз. - Гсматод. п тргнефузиол.,

1989, ß I, о. 15-18 (соавг. Волкова U.A., Тушщып H.H., Пнрого-ва К.А.). »

53. Вошишоотн вимунодвагаостики врнтролойкозов. - Тор.архив, 1989, М 4, о. 127-129 (ооавт. Тушщып H.H., Волкова U.A., Барыпликов A.D., Мечотнор Е.Б., Роаннова Э.Н.).

54. Отдаленные результаты торапкп острых гронулоцитарных ле козов взроолых, - Тер.архив, 1989, й 7, о. 8-II (ооавт. Перилов A.A., Волкова U.A.).

_УЧАСТОК МНОЖИТЕЛЬНОЙ ТЕХНИКИ ВОНЦ fUH СССР

ПОДП. К ПЕЧАТИ 1т8УЛ-.«ЭЗб ,ДКД.б54 ТИРАжТоО