Автореферат и диссертация по медицине (14.00.14) на тему:Иммунофенотипическая характеристика гемобластозов человека и её клиническое значение

г; 5 3 2

РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ ЮМШНСКИХ НАУК СЖОЛОГИЧЕСКИЙ НАУЧНЫЙ ЦЕНТР

На правах рукописи УДК 616-006. 446-09/

ТУПИИЫН Николай Николаевич

РММУНОФЕНОТИПИЧЕйчАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ГЕМС-оЛАСТОЗОВ ЧЕЛОВЕКА И ЕЕ КЛИНИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ

14.00.14 - Онкология

Автореферат Диссертации на соискание у^-еноя степей

доктора медшз-оих наук

Москва. 1932 г

/

Работа выполнена в клинжо-рашюиммунологической лаборатории (руководитель - доктор меш111инских наук, профессор 3. Г. Када-гидзе) Научно-исследовательского института клинической онкологии (директор - доктор медицинских наук, профессор В. Н.Герасименко) Отологического научного центра РАМН (директор -академик РАМН, профессор К Н. Трапезников)

Научный консультант - доктор медицинских наук.

профессор 3. Г. Кадагидзе

Официальные оппоненты: Член-корреспондент РАЬИ, доктор медицинских наук, грофессор

Член-корреспондент АЕН РФ. доктор медицинских наук, профессор

Доктор медицинских наук, профессор

Н. С. Кисляк

А. А. Ярилин И. В. Поддубная

Ведущее уч=Е)кден»с - Гематологический научный центр РАМН

Зашита состоится Л^ЛЛ._1992 г. в "_"

часов на заседании специализированного совета по защите док торских диссертаций (Д. 001.17.01) при Онкологическом научи» центре РАМ-1 (Москва 115478. Каширское шоссе 24).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Онколог ческого научного центра РАЖ.

Автореферат разослан "Ш: 1992 г.

Ученья секретарь специализированного совета, кандидат медицинских наук

Ю. В. Шишкин

; ОБШЛЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ " ' ^Актуальность темы исследована.

Широкое внедрение современных молекулярно-биологических ме-оАив исследования в гематологию позволило значительно расширить уществующие представления о природе, происхождении и стадиях ифф^ренцироски клеток при опухолевых заболеваниях системы крови L. Nadlor et al. ,1985; S. .1. Korsmoyer,1987; W. Knapp ot al. .1989]. собое значение в анализе лейкозных клонов приобретают методы ибридомной биотехнологии, генной инженерии, иммунофенотипическо-

0 и цитогенетпческого а^лиза [Г. И. Абелев, 1982; Л. Ю. Барьгсшиков соавт. , 1990; Н. G. Drexler ot al. ,1988; Т. Hon 1о et al. , 1989).

Основным методом диагностики и установления вариантов острых ейкозов и гематосарком в настоящее время является морфо-цит-.хими-еский анализ [ Л. И. Воробьев, Ii Д. Бриллиант, 1976; И. С. Петерсон, 986; IL А. Пробатова, 1982]. Разработка FAB-классификации [Bennett t al., 1976] способствовала повышению точности и воспроизводкчо-ти морфоцитохимической диагностики вариантов острого лимфобласт-ого (ОЛЛ) и острых нелимфобластньгх лейкозов (ОШГО на основе :етких .критериев, предложенных Франко-американо-британской группой кспертов. При гематосаркомах выделение вариантов опухоли произво-¡ится на основе классификации ВОЗ, рабочей формулировки (WorkIn? 'ormulation), а тагаге модифицированной классификации ВОЗ [ILA. 1робато^а, 1982]. Еыбор тактики лечения больного осуществляется

1 соответствии с вариантами острого лейкоза и гематосаркомы, вы-(еляемши, согласно этим классификациям [ДА. Махонова и соавт. , 986; II А. Волкова и соавт. , 19Е"3; Г. Е Круглова и др. , 1985].

Лейкозныя клон клеток, имеющих однородные морфоцигохимиче-:кие характеристики, является весьма гетерогенным по антигенной :труктуре бластных элементов. Это служит основой выделения Т-I В-клеточных подвариантов, а также установления стадий диффе->енцирсвки злокачественных лимфобдастов [Н.С. Кисляк, Р. а Пенсия. 1978; A. iQ Взрывников, 1984; Ii F. Greaves et al. . 19861. Особенно широкие возможности длч проведения работ в этом направлении зткрывает использование высокоспецифических моноклональных антител (МКА) в гематологии. Уровень и глубина иммунодиагностики определяется тем, насколько широко используются шноклональные ан-гитела [ Г. И. Абелев. 1982].

ионоклснэлькые антитела позволяет определять специфические 1нтигенные детерминанты, присущие различным линиям и росткам •роветворных клеток, а также дискретным стадиям их дифференцирован [V. Knapp, 1989]. Получены серии МКА к антигенам миелоидных, зритроидных, мегакариоиитарных. а тага лимФсидных 'Г- и В-клеток.

Их использование в онкогематологии позволяет детально охарактеризовать лейкозный клон и установить линейную принадлежим ть бластных элементов в сложных для морфоцитохимического определения случаях tN. Imamura et al., 1989]. Это одно из наиболее перспективных направлений совершенствования диагностики и дифференциальной диагностики вариантов острого .,.>йкоза и гематосарком [К. Civin et. al. ,19901.

Ряд современных классификаций острых лейкозов г. гематосарком учитывают данные иммунофенотипирования бластных клеток при установлении варианта гемобластоза. В числе этих классификаций "интегрированная" классификация острых лейкозов [F.G. J. Hayhoo.

1988], MIC (морфо-иммуно-цитогечетическая) классификация, а также модифицированная классификация FAB - MFAB [S.S.Kaplan et al. .

1989]. Диагностика латентных зритробластных лейкозов основана на применении МКА к гликофорину A t М. F. Greaves et al.. 1983].

Важность использования иммунодиагностических методов в онкогематологии подтверждается сутествованием определенной связи экспрессии иммунологических маркеров с прогнозом заболевания. Такие работы проведены при острых лимфобластных лейкозах, властном кризе хронического миелолейкоза, острых нелимфобластных лейкозах и бластных вариантах гемат.осаркомы L А. XX Барышников и соавт.. I960; G. R. Pllkington et al., 1989; Н.-J. Schuurman et al. , 1988].

Современные иммунологические методи исследования бластных клеток при гемо0ласто„ах человека позволяют глубже понять биологическую основу происхождения лейкоза, открыть новые подходы к совершенствованию лечения этих заболеваний. Для решения этих вопросов необходимо углубленное изу^ние на молекулярно-биологическом уровне лейкозного клона с использованием комплексного подхода к оценке маркерного набора лимфоидных, миелоидных, зритроид-ных и мегакариоцитарных антигенов на бластных клетках у больных острыми лейкозами и лимфосаркомой. Внедрение современных методов иммунодиагностики субвариантов гемобластозов, обоснование опреде ления дифференцировочных антигенов на бластных клетках невозможн без проведения подробного сопоставления иммунологической и морфо цитохимической классификаций, оценки степени их корреляции при установлении уровня зрелости и линейной принадлежности бластных клеток. Кроме того, необходимо изучить возможности выделения гру больных острым лейкозом и лимфосаркомой, различающихся по прогнс заболевания, на основе типов экспрессии дифференцировочных антигенов на бластных клетках.

Осуществление подобного исследования является актуальной муноонкогематологической работой. Ее проведение н получение от-тов на поставленные вопросы открывает перспективы для совер-нствования диагностического и лечебного процесса у больных ¿юбластозами. Это позволило бы злее индивидуально подходить выбору программ химиотерапии у больных, отбору контингента бон тс. у которых могут быть применены принципиально новые под-ды к лечению, включая миелотрансплантаци».

Диссертационная работа проведена в соответствии с планом Р НИИ Клинической онкологии ВОНЦ АМН СССР "Морфо-функцкональ-э и иммунологические особенности властных клеток при геыобда-эзах" N Гос. регистрации 01.65.0.078777.

Цель и задачи работы "

Работа проведена с целью изучения экспрессии комплекса диф-зенцировочных антигенов клетками острого лейкоза, определения основе этих маркеров линейной принадлежности и стадии диффе-щировки злокачественных Оластных элементов, оценки диагности-жой и прогностической значимости ишунофенотипирования клеток •рого лимфобластного лейкоза, острого млелобластного лейкоза, •акта властных вариантов гематосаркомы.

Задачи исследования:

1. Изучить структуру лейкозного клона лимфобластов при имму-ноподвариантах ОЛЛ, выделяешх как на основе лнмфоидних маркерсз дифференцировки клеток, так и с учетом экспрессии миелоидных и зритроидных антигенов при ОЛЛ.

2. Оценить взаимосвязь иехду иммунологической.и Ь'-рфоцитохи-мической классификацией ОЛЛ.

3. Изучить прогноз при ОЛЛ в группах больных, различающихся по экспрессии комплекса диффэренцировочных антигенов на лимфо-бластах, включая ыиелоидные и эритроиднш антигены, а такие при иммуноподвариантах заболевания.

4. Дать подробную иммунологическую характеристику морфоцитохимических вариантов острого келимфобластного лейкоза,установить степень соответствия между морфоцитохиыичеекими и

и иммунологическими признаками дифференцировки злокачественных млелобластов.

5. Установить связь иммунофенотипа бластных клеток ОНЛЛ с прогнозом заболевания.

6. Изучить структуру и дать подробную иммунологическую характеристику субвариантов лимфобластного варианта лимфосаркош

Научная новизна.

В работе впервые на большом материале (исследование ^роведело на клетках от 690 больных гемобластозаш) с использованием широкого комплекса моноклональных антител и применением современных молекулярно-биологических методов изучены дифференцировочные антигены мембраны бластных клетс ; при острых лейкозах и властных вариантах гематосаркомы у детей и больных взрослого возраста.

Установлена биологическая основа иммуноподварй .нтов острого лимфобластного лейкоза (ОМ): про-В-клетки, пре-пре-В-клетки. пре-В-клетки, В-клетки, пред-Т-клетки, Т-клетки. Детально изучена динамика иммунологических изменений мембраны бластных клеток по мере их дифференцировки от npo-В-клеток к зрелым В-клеткам, а также при Т-клеточных гемобластозах. Впервые обоснована необходимость полной иммунологической характеристики лейкознто клона, включающей установление родоначальной стволовой клетки-мишени лейкозной пролиферации и спектр более диффрренцированных клеточных типов вплоть до терминальных стадий зрелости, на которых остановлено дальнейшее созревание бластных клеток. Охарактеризованы взаимозависимости между клетками различных линий гемопоеза, включая дискретные стадии дифференцировки, распознаваемые по экспрессии иммунологических маркеров мембраны бластов.

Впервые на больших группах больных продемонстрирована диагностическая значимость использования моноклональных антител к антигенам нелимфоидной серии (миелоидным. зритроидным) для установления соответствующие вариантов лейкоза. Показана возможность выявления антигенов CDllb. CD15, гликофорина А на лейкозных клетка; лимфоидного типа

Проведена параллель между иммунологическими характеристикам! бластных клеток и их морфоцитохимическими субтипами, выделяемыми по FAB-классификации. Боль мнство дифференцировочных антигенов Ти В-клеток определяется на различных типах лимфобластов OJUI, выделяемых в соответствии с FAB-классификацией.

Установлены закономерные количественные и качественные изменения антигенного состава мембраны бластных клеток по мере их созревания в гранулоцитарном ряду дифференцировки, а также при монобластных, миеломонобластных, зритробластных и мегакариобласт ных вариантах лейкоза Пэказана возможность иммунологического подтверждения нелимфобластной природы лейкоза с помощью МКА к гл кофорину,CD15, CDllb. Впервые представлена детальная иммунофенот пическая характеристика острых нелимфобластных лейкозов с экспрессией Т-клеточных и В-клеточных антигенов на бластах.

/

/

/

Изучены особенности властных вариантов лимфосаркочы у детей л лейкемизированных вариантов гематосаркомы у взрослых. При лимфо-5ластном варианте лимфосаркомы у детей преобладающим ишуноподва-зирнтом является В-клеточный тип, отмечено существование связи /е.гду иммунологичеасой и морфоцитохимической классификациями. При пимфобластной лимфосаркоме с лейкемизацией у больных взрослого зозраста наиболее часто встречаются Т-клеточные иммуноподварианты. 1ричем достоверной корреляции с морфоцитохимической классификацией ie обнаружено. Показано, что применение комплекса современных им-¿унодиагнс .тических метод в на основе моноклональных антител по->воляет практически во всех случаях лимфосаркомы установить линию стадию дифференцировки лимфобластов, относившиеся ранее к "ну-1евому" подварианту.

Научно-практическое значение.

Лечение больных с различными вариантами острых лейкозов и •ематосарком проводится на основе определения линейной принад-южности и степени дифференцировки злокачественных бластных кле-•ок, устанавливаемой, как правило, морфоцитохимическими кетодаш. 1рименение комплекса современных иммунодиагностических методов на юнове 1.JKA позволяет более точно решать эту задачу. Кроме того. :тановится возможным установление гетерогенности злокачественного иона лейкозных клеток по степени их иммунологической дифференци-ювки. Г :тановление иммунологическими методами острых смеоанно-мнейных и латентных нелимфобластных лейкозов способствует более тлубленному пониманию патогенеза этих форм лейкоза Знание соста-ia субклонов лейкозных клеток открывает возможности для оценки их [увствительности к проводимому лечению, наблюдению за «х динамикой I ходе прогрессирования заболевания и при рецидивах.

В работе показан взаимодополняющий характер иммунологической [ морфоцитохимической (FAB) классификаций гемобластозов человека, современное использование этих методов существенно повышает точ-:ость диагностики вариантов лейкоза и лимфосаркомы.

Важное практическое значение имеют установленные в работе рогностические критерии при обнаружении экспрессии на мембране властных клеток ряда лимфоидных, линией не ограниченных миелоид-ых и зритроидных антигенов. Эти критерии позволят выделить груп-ы больных, имеющих худшие показатели по результатам проведения имиотерапии (меньшая частота полных ремиссий, меньшая длитель-ость безрецидивного течения, более короткая продолжительность аболевания). На основе данных иммунофенотипирования бластных леток у больных гемобластозаыи становится возможным проведение

индивидуализированного лечения, отбора больных для миелотрансп-лантации и ряда других современных методов лечения, направленных на зрадикацию лейкозного процесса.

Доказана практическая необходимость применения иммунофеноти-пического анализа и установления имыуноподварианта гемобластоза как обязательного элемента диагь этического процесса у больных.

Внедрение результатов работы.

1. Автор принимал активное участие в создании пг.;ели отечественных моноклональных антител серии ИКО. которые широко используются в гематологических институтах и клиниках страны, таких как Институт педиатрии АМН СССР, кафедра факультетской терапии N2 2-го Московского медицинского института, НИИ детской гематологии. Авторские свидетельства на изобретения NN 1369283, 1413948, 1407061.1127828, 1576551.

2. Усовершенствованы отдельные методические аспекты проведен иммунодиагностики у больных в виде рационализаторских пре ложений "Устройство для получения цитопрепаратов клеток" (РП N866 от 13.06.86), "Микрометод постановки непрямой ре акции иммунофлуоресценции" (РП N 867 от 13. 06. 86), "Спосо иммунодиагностики подвариантов лейкоза на основе цитопла-зматических маркеров клеток" (РП N 948 от 9.01.87), а также конкретные предложения по иммунопрогнозированию пр! остром нелимфобластном лейкозе и лимфосаркоме у детей

(рац. предложения NN 1131, 1132, авторское свидетельство на изобретение N 1625207).

3. Разработанная автором иммуноклассификация гемобластозов человека внедрена в клиническую практику гематологически: отделений ОНЦ РАЖ и используется при выборе метода лече ния у больных гемоблзстозами.

Апробация работы

Диссертационная работа апробирована на совместной конферен ции лабораторий клинико-диагностической, клинико-радиоиммунологической, трансплантации костного мозга, отделения гематологии НИИ клинической онкологии ВОНЦ АМН СССР, отдела гематологии и лг боратории гемоцитологии детского возраста НИИ детской онкологии ВОНЦ АМН СССР, кафедры онкологии Центрального института Усовершенствования врачей 29 ноября 1991 г. Материалы диссертацю докладывались на; I Бэлорусской иммунологической конференции, Витебск 1982; Республиканской конференции "Ветеринарные проблемы индустриального животноводства", Тарту 1983; Всесоюзном симпози

уме "Актуальные вопросы диагностики и лечения злокачественных новообразований кроветворной и лимфатической тканей у детей,Москва 1983: конференции "Новые достижения в диагностике и лечении нелимфоцитарннх лейкозов",Рига 1983; Всесоюзной конференции "Иммунология и иммунотерапия лейкозо! человека и животных", Таикент 1984; Всесоюзной конференции "Роль иммунной системы в патогенезе лимОпролиферативных заболеваний", Новосибирск 1984; сессии Ш1 Гематологии Грузинской ССР "Современные проблемы клинической гематологии и трансфузиологии", Тбилиси 1985; iii Всесоюзном съезде врачей-лаборантов. Таллинн 1985; ii Всесоюзном съезде гематологов и трансфузиологов, Льеов 1985; iv симпозиуме по применению математических методов и ЭВМ в медико-биологических исследованиях,Гагры 1985; научной конференции "Профилактика, ранняя диагностика и лечение злокачественных заболеваний", Рига 1985; v Всесоюзном биохимическом съезде, Москва 1986; совещании "Новые подходы к вопросам иммунологии рака", Кемерово 1986; iv съезде онкологов, Ленинград 1986; Всесоюзном симпозиуме "Первично-локализованные опухоли кроветворной ткани приматов и пути генерализации", Сухуми 1986; 2-м Всероссийском съезде гематологов и трансфузиологов, Челябинск 1986; конференции гематологов РСФСР "Принципы организации гематологической помощи", Саратов 1987; Всесоюзной конференции "Диагностика злокачественных новообразований". Шсква 1988; II Всесоюзной конференции по детской онкологии, Душанбе 1988; международном симпозиуме "Новые аспекты лейкозов у детей", Веймар 1989; общесоюзной конференции "Актуальные вопросы в биохимической и иммунологической диагностике злокачественных новообразований". Шсква 1989; Всесоюзном симпозиуме "Соверпенствование диагностики и программ лечения онкогематологических заболеваний у детей", Шсква 1990; Республиканской научной конференции "Механизмы кан-церо- и лейкемогенеза". Киев 1990; 21-м (Прага 1989) и 23-м (Греция 1991) съездах международного общества педиатров-онкологов.

Структура и обьем работы

Диссертация изложена на 420 страницах машинописного текста, содержит 95 таблиц и состоит из общей характеристики работы, литературного обзора, описания материалов и методов исследования, 3 глав собственных исследований, обсуждения и выводов. Библиография включает ссылки на 428 отечественных и зарубегаых источников.

По теме диссертации опубликована 96 работ в отечественной и зарубежной печати, включая 1 монографию, получено 6 авторских свидетельств на изобретения, 6 рационализаторски предложений.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДСЗАНИЯ.

Результаты базируются на данных изучения иммунологического фенотипа злокачественных бластных клеток у 690 больных гемобласто-зами, проходившими лечение во Всесоюзном онкологическом научном центре АМН СССР (директор - академик АМН СССР Е Н. Трапезников) за период с 1980 по 1990 гг. Детей Лило 449, взрослых - 241.

Среди пациентов детского гематологического отделения (рук. -профессор JL А. Махонова) острый лимфобластный лейкоз (uJUl) был диагностирован у 242, острый нелимфобластный лейкоз (ОНЛЛ) - у 102, ге-матосаркома (ГСА) - у 105. У взрослых больных (рук. отделения гема тологии - профессор Г. Е Круглова) диагноз ОЛЛ установлен у 62 боль ных, ОНЛЛ - у 123, бластные варианты ГСА в стадии лейкемизации- -у 56 (Таблица 1).

Морфоцитохимическая диагностика острого лейкоза и ГСА проводи лась в клинико-диагностической лаборатории ст. н. с. д. м. н. М. А. Фреи кель (рук. лаборатории - профессор Е. А. Соловьева) и в лаборатории детской гемоцитологии в. н. с. А. К. Протасовой и проф. И. С. Пегерсон. Таблица 1. Распределение больных гемобластозами по полу и возрасту

Вариант Число Пол Возраст

гемобластоза больных м . х (Медиана, разброс)

Дети:

ОЛЛ 242 117 125 б; 2 мес - 14 лет

ОНЛЛ 102 60 42 8: 1 msc - 15 лет

ГСА 105 72 23 8: 1 год - 15 лет

Взрослые: '

ОЛЛ 62 30 СО 33: 15 - 79 лет

ОНЛЛ 123 60 62 • 38; 15 - 72 лет

ГСА 56 41 16 31; 14 - 61 лет

Диагноз острого лейкоза основывался на морфологической идент фикации бластных клеток в мазках костного мозга и периферической крови, окрашенных по РоманоЕскому-Гимза. Установление морфоцитохи мических вариантов острого лейкоза осуществлялось в соответствии критериями международной франко-амершсано-бритакской (FAB) класси фикации [Bennett et al., 1976]. Цитохимические методы включали определение миелопероксидазы, хлорацетат эстеразы, неспецифичесга; эстераз с двумя субстратами ( -нафтилацетатом и бутирагом), кислс и щелочной фосфатаз и ШИК-положительного вещества Диагностика ГС базировалась на морфологическом изучении клеток биопсированной

шухоли (д. м. н. Е А. ПроОатова); кошлекс морфоцитохкмичсг..его )бследования при ГСА в стадии лейнемизации был таким г?.. :сак пр?; остром лейкозе. Все пациенты с острым лейкозом ооследогалнсь з на-!а пе заболевания; в предлейкешческон периоде ГСА в стад:ш яойгз-«изации больные получали цитостат.лескую терапия.

Диагностика иммуноподвариачтов острых лейкозов и глкс.тссаркса юн^вывалась на определении широкого комплекса диффзреи1":ровота;г{ штигеиов на мембране злокачественных бдастных клеток с по\:о:у^ ?-г юклональных антител (МКА). Перечень использованных 1ЖЛ г.ак г тсЗ-шце 2. Пгмимо ША для определения СОЮ антигена и Т-кготочя!Л ;зл-:игенов использовали антисыворотки [ А. К1 Барыиннков. ^.Г?"1.. Таблица 2. Специфичность использованных монокзоиаяьных "

Специфичное :ь •ли CD Наименование антител Источник получения

ю1а L404 L. Вои.чтзоПЛлр::.-'.

IDlb 0249 - •• -

:dic L161 - ' -

IDlc ' иш-44 А. iü Еарнякккоз, DO-L

!d2 xii L. Воипве 11, Парнг.

юз ОКТЗ Ortho Dl aijnosi s, СГ*

:d3 ико-90 А. Ю. Барышников. В0Н1 X

юз Leu-4 Becton Dickinson.с; .vi

:d4 0КТ4 Ortho Diagnosis,С."

®4 ико-86 А. Ю. Faрьикикоз. ВС::.

:d4 Leu-За Becton Dickinscr . V; ,-r

:d5 лт-1 А. Е Платов.¡ш-т !.' •уИ.

:d5 АЕО L. Bcumsoll. ГТарпг.

:d7 лт-7 А. Е Салатов. т VT/TSi

:d7 Leu9 Becton Dickinson. L'i

id7 йно-87 А. Ю. Барнгнккоз. ЕО: Щ

:d7 1210 L. Bouinse 11. Пари:-

:ds 0КТ8 Ortho Diagnosis, G:l

:ds Lo33 L. Bcumsell. Парил:

:d8 Leu-2а Boctcn Dickinson, ; ' vT1

id10 К-503 L. Eounsell. Па pun

;dio anti-CALLA Becton Dickinson. '?Г

cdu a ИКОИ A. E Еаркпп;ков. Л

1Ж0-ГН1 - » -

- 10 -

Таблица 2 (продолжение)

CD13 My Т. Trlschrann, США

CD14 Leu-M3 Becton Dickinson,ФРГ

CD15 ИКОГ2 А. Ю. Барышников, ВОНИ

CD15 Му1 Т. Trischmann, США

CD19 HD37 a Maldenhauer, ФРГ

CD19 Leu-12 Becton Dickinson. ФРГ

CD20 Leu-16 _ и в

CD22 HD6. HD39 а Maldenhauer. ФРГ

CD23 HD50 • " —

CD33 Mv Т. Trischmann. США

CD34 MvlO _ _

CD37 HD28 й Moldenhauer. ФРГ

CD45 H-Lel Becton Dickinson, ФРГ

СС'59 ИКО-15 А. Ю. Барышников, ЮНЦ

CD76 HD65 G. («toldenhauer, ФРГ

HLA-DR ИКО-1 А. Ю. Барышников, ЮНЦ

Thy-1 ИКО-Ю А. Ю. Барышников, ЮНЦ

RFB-1 ИК0-40 А. 1й Барышников, ЮНЦ

В-клетки ИП0-10 С. Е Сидоренко, ИПО АН УССР

В-активированные ипо-з — ** —

Гликофорин А НАЕ-3 Е. Б. Мечетнер. ВОНЦ

Антиген эритробластов НАЕ-9 • 1 _

Реакцию с моноклональными антителами считали положительной при наличии в лейкозной популяции н^ менее-, чем указанный процент антигенположительньи клеток: Ш>02 - 27. (в норме антигенположи-тельные клетки отсутствуют в крови и костномозговом пунктате), ИКО-11 (CDlla) - 15%, ИКО-1 (HLA-DR) - 15%. Т-клеточные маркеры (CD1, CD2, CD4, CD5, CD7, CD8) - 207., К-503 (CD10) - 207., ИКО-Ю (Thy-1) - 207.; НАЕ-3, НАЕ-9 - 107.; ИКО-ГМ1 (CDllb), ИКОГ2 (CD15) - 15%. Реакцию с антисывороткой против "общего" антигена считали положительной при наличии не менеее 57. антигенположительньи клеток, с анти-Т-клеточной сывороткой - 15%. Наименование иммунопод-вариантов, их частота при ОЛЛ и критерии выделения, предложенные A. KL Барышниковым (1984) и использованные нами в работе, суммированы в таблице 3.

- 11 -

блица 3. Иммунофэнотишгческая характеристика и частота встречаемости иммуноподвариантов ОЛЛ, абс. (%).

Возрастная группа

двариант Иимунофенотип Лети Взрослые

ЩЦ,1 Т- CD10+ 1а+ cylgr- slg- 87 ( 36) 16 (25,8)

Т+ CD10+ 1а+/- cylg- sle- 30 (12,4) 8 (12,9)

Т+ CD10- 1а+/- cyle- sle- 26 (10,7) 13 (21,8)

е-В Т- CD10+/- cylg+ slg- 21 (8,7) 3 (4,8)

Т- CD10+/- 1а+ cylg- sle+ 2 (0,8) 3 (4,8)

левой Т- CD10- 1а- cyigr- sie- 32 (13,2) 4 (6,5)

í- CD10- 1а+ cyl?- slg- 44 (18,2) 15 (^.2)

его: 242 (100,0) 62 (100,0)

Постановку реакции Е-розеткообразования осуогствляли по стан-ртному методу CJondall, 1972]. Смесь 50 мкл клеток (6x10 кл/мл), i мкл IX взвеси эритроцитов барана и 25 мкл абсорбированной и ин-тивированной телячьей эмбриональной сьшоротки (НИИЭН иы. Е Ф. Га-лен, Москга) инкубировали 15 мин при 37°С. Центрифугировали при Ог (800 об/ми) 5 мин при 20°С. Инкубировали при 4° С в течение |чи. Осадок осторожно ресуспендировали, и осуществляли подсчет ро-ткообразукдих клеток на 200 ядросодержапих клеток в камере Го-:ева При постановке реакции Ен-розеткообразования использовали мтроциты барана, обработанные предварительно нейраминидазой

ед/мл) в течение 30 мин при 37°С. Дальнейшие этапы постановки. iK при определении Е-розеткообразуших клеток. При постановке тода розеткообразования с эритроцитами шши (Ем)., использовали ; взвесь эритроцитов. Смесь равных объемов (по 50 мкл) клеток 1X10 кл/мл), взвеси эритроцитов и телячьей эмбриональной сыво-1тки, абсорбированной эритроцитами мыши, центрифугировали 5 мин >и 800 об/мин, инкубировали в течение 1 часа при 4° С, осторожно ¡суспендировали и подсчитывай! количество розеток на 200 клеток в 1мере Горяева.

Определение мембранных иммуноглобулинов клеток проводили по •андартной методике CJanossy, 19813. Для элюции неспецифически (язанных за счет F^,- и FCj-рецепторов шшуноглобулинов клетют »летали на 10 мин при 37"С в ацетатный буфер (рН 5,5), дважды отвали и инкубировали в течении 2 час при 37еС в среде 199 с до-шлением телячьей эмбриональной сыворотки. После двукратной от-

мнвки к осадку, содержащему 2 х 1.0й глоток, добавляли полнспециФические и консспгаифяческиз антясиворотки к тяжелгд и легким полипе птиднш цепям ¡ш^юглоЗудхков (<, $ ,X.. Ъ )• Инкубировали 30 мин при 43С, отмывали а раза средой 199. Клетки перекосили на предметное стекло на 20 млн, после чего удаляли избыток среди, консервировали 50Х-ни. глицерином и учитывали реакцию на лшикисценгном микроскопе.

Определение цитоплазматкческих иммуноглобулинов г лимфобла-стах проводили по методу Verier (1978). Каэтки распластывали на стекле для приготовления цитоцентрифужных препаратов с помощью разработанной нами приставки к центрифуге К-70 (Рацпредложение N856 от 13.06.86г. , выданное МНР АНН СССР) при 800 об/мин в течение 10 ник. Фиксацию осуществляли при -20" С в 96' зтаноле 20 шш. Клетки инкубировали с FlTC-меченнымн полиспецифичной и моно~пеци-Фичшва! антисыворотками к тялйлым и легким цепям иммуноглобулинов человек 30 мин при комнатной температуре. Отмызку осуществляли двукратно по 15 мин ка шуттеле в среде 199 или растворе Хенкса. Клетки консервировали 501-кьы глицерином и учитывай* реакцию на лга-кписцентнем микроскопе.

При определении экспрессии диффзренцировочных антигенов клеток с гюмоцьс коноклокэлькых антител в реакции непрямой иммунофлу-оресценшш втержя антителами служили F(at>4-фрагменты, приготовленные из кроличьих анткенвороток против иммуноглобулинов мили по методу jancisy (1985). К аликвотам (по i мл) антисыворотки до-бавля.-и по 2 мг пепсина (Se-rva, 15 шллиансон/мг). Доводили рН до 4.0 помоиыо О.ЗМ соляной кислоты, и инкубировали смесь 16 ч при £7V. После центрифугирования при 10000 об/мин 20 мин преципитат удаляли. Диализ супернатанта осуществляли в течение ночи против 0,С5М фосфатного буфера, рК 7,4. Центрифугировали при 10000 об/мин 20 кик, осадок удалялг Использовали супешатант как F(ab)^ фрагментн актксыворотки. При необходимости проводили дополнительну абсорбцию печеночным порошаэм.

Реакция непрямой мембранной иммунофлуоресценции проводили в 2 типах постановки: ка предметных стеклах, обработанных поли-L-лизином ГА. Е Барышников, 193-U и в пробирках. Первый тип реакции учитывали на лвьлшисцентном микроскопе Leitz Orthoplan (ФРГ), второй - на проточном цатсметре FACSCAN (Becton Dickinson, ФРГ). В качестве отрицательного контроля в реакции непрямой имыунофлуоресцеи ции использовали вместо МКА культуральную жидкость миеломы NL-1.

Пои постановке непрямой, реакции поверхностной икмунофлуорес-цакции к осадку клеток в пробирке, содержащему 2 млн клеток, доба!

ляли 50 мкл моноклональных антител. Ресуспендировали осадок и инкубировали 30 мин при комнатной температуре. Клетки трижды отмывали средой 199. Добавляли F(ab¿-фрагменты люминисцирующей сыворотки против иммуноглобулинов мышей к осадку клеток. Ресуспендировали клетки и инкубировали 30 мин при ..омнатной температуре. После отмывки от несвязавшейся сыворотки (3 раза) клетки помещали на предмет ое стекло на 20 мин. удаляли избыток жидкости, консервировали ' 50%-ным глицерином, накрывали покровным стеклом. Учет процента ан-тигенположительных клеток проводили на лшинисцентном микроскопе .при увеличении объектива х40 - xlOO, окуляра - х10. В препарате оценивали 200 клеток.

Разновидностью постановки пробирочной непрямой иммунофлуорес-ценции является предложенный нами микрометод (Рац. предложение N 867 от 13.0й. 86г. . выданное БОНД АМН СССР). В этом случае клетки помещали в V-образные планшеты для иммунологических реакций. Отмывки осуществляли с помощью специальных подвесок для установки микропланшет на бакетном роторе к центрифуге ОС-бЯ. По окончании реакции осадок клеток ресуспендировали в 17. формалине и переносили в пластиковые пробирки для учета реакции на приборе Facscan.

Шстановка непрямой реакции иммунофлуоресценции на клетках, прикрепленных к стеклу с помощью поли-L-лизина. На обезжиренное стекло приклеивали над пламенем спиртовки Parafilm М с вырезанными в нем 12 отверстиями-лунками. Вносили в лунки по 50 мкл по-ли-L-лизина (Sigma) в концентрации 100 мкг/мл. Помещали стекло в термостат на 30 мин при 37еС. Удаляли избыток раствора полилизина, и помещали стекло в среду 199 на 1 мин для отмывки от несвя-завшегося полилизина. Помещали в каждую лунку по 50 икт исследуемых клеток (концентрация 4 млн/мл) и инкубировали в течение 45 мин при 37°С. Удаляли среду из лунок и добавляли по 50 мкл моноклональных антител на 30 мин. Отмывали клетки в гистологических стаканчиках 5 раз по 1 мин в среде 199 или растворе Хенкса. Наносили на клетки по 50 мкл F(ab)^- фрагментов лшинисциругацих антисывороток на 30 мин. при 4° С. Отмывали клетки 5 раз по 1 мин в среде 199. Клетки консервир зали в глицерине, накрывали покровным стеклом, и учитывали реакцию на люминисцентном микроскопе.

Цитоплазматическую локализацию антигенов устанавливали на цитоцентрифужных препаратах после их фиксации холодным этанолом по предложенной нами методике (Рац. предложение N948 от 16.01.87г, выданное ВОНЦ АМН СССР).

Подтверждение коэкспрессии двух антигенов на уровне единичной клетки проводили в экспериментах по двойному флуоресцентному мече-

нию. В этих опытах были использованы коммерческие ыКА фирмы Becton Dickinson, напрямую меченные флуоресцеином или фикоэритрином. Другим способом выявления коэкспрессии антигенов явилось использование антиизотипических сывороток против мышиных иммуноглобулинов, меченных фикоэритрином (предоставлены автору Г. Trischmann, США). Контролем в реакциях по двойному флус есценгному мечению служила смесь неиммунных мышиных иммуноглобулинов подклассов IgGl и IgS3, меченных флуоресцеином и фикоэритрином.

ГЬлучение отечественных биотинилированных МКА для проведения экспериментов по двойной флуоресцентной метке проведено при участи лаборатории моноклональных антител (L. Вошгсзе11, Париж) для следующих антигенов (CD): CD7(MKO-87), CD4(HKO-86), CD8(MKO-31), CD 45 (ИК0-46), CD3 (ИКО-90), Thy-1 (ШМО). МКА выделяли осаждением полунасыщенным сульфатом аммония. Дважды отмывали преципитат тем же раствором при 14 ООО об/мин. Растворяли осадок и переводили диализом в раствор карбонатного буфера (рН 8,8). Концентрацию белка доводили до 1 мг/мл с последующ;., добавлением активированного N.N-диметилформамидом (Sigma) Сиотина (1BF Biotechnics) на 15 мин Останавливали реакцию 1М хлористым аммонием рН 6,0. Несвязавшийся биотин удаляли диализом. Контроль эффективности биотинилирования проводили методом проточной цитофяуориметрии на приборе FACSTAR, клетки-мишени последовательно обрабатывали биотинилированными MKi и авидином, меченным флуорохромом. Изучение эпитопной специфиино-сти биотинилированных МКА по отношению к гтандартным CD проводют методом перекрестного б..окярования с использованием линий тимоци-и коммерческих МКА с установленной специфичностью; оценка резуль-тов измерения на приборе FACSTAR по сдвигу канала медианы пика флуоресценции.

При разработке панели отечественных МКА (А.Ю. Барышников, 199 пригодных для иммунодиагностики гемобластозов, их стандартизацию проводили по общепринятым критериям с определением молекулярной массы, функциональной роли и тканевого распределения антигенов. В клинико-радиоиммунологической лаборатории (рук. - проф. 3. Г. Кадагидзе) были получены при непосредственном участии автора 7 новых штаммов гибридных клеток-продуцентов моноклональных антител, которые были защищены авторскими свидетельствами на изобретения. Среди них - продуценты моноклональных антител ИКО-35 к "обшему" (CD10) антигену острого лимфобластного лейкоза (авторское свидетельство N1638160), ИКО-15 к лиганду Е-рецептора 058 (авторское свидетельство N1427828), ЙКО-Ю к антигену Thy-1 чел века (авторское свидетельство N1413948), ИКО-20 к антигену CD38

(авторское свидетельство N1407061), ИКО-63 к антигену мгелоидных клеток, перекрестно-реагирующее с нейробластомой (авторское свидетельство N1632038), ИК0-44 к антигену CDlc (авторское свидетельство N1576561), ИКО-13 к антигену тимоцитов человека (авторское свидетельство N1369283).

Перекрестную реактивность МКА с опухолями негемопоетиче-ской ..рироды изучили на криостатных срезах аденокарцинош и плоскоклеточного рака легкого (60 больных), аденокарцинош желудка (59 больных), при раке молочной железы (65 больных), нейробластомэ (25 больных^ саркомах мягких тканей (16 больных). Наличие перекрестной реактивности заключалось в том, что антиген Thy-1 (МКА ИК'МО) был типичен для клеток нейробластомы [Д. 3. Зикиряходжаев и др. , 1985], экспрессия HLA-DR (МКА ИКО-1) и Х-гаптена (МКА ИК0-Г2) опред лялась при различных аденокарциномах CZ. G. Kadagidze et al. ,1990; Е Н. Тупицын и др., 1990.,. Иммуноморфологические исследования тканей и опухолей проводили в иммунофлуоресцентным или иммуноферментным методами на криостатных срезах толщиной 5-7 мкм, фиксированных в холодном ацетоне по стандартной методике (В. A. Bourne, 1985) субстратом служил диаминобензидин. Эффективность ингибирования эндогенной пероксидазы оценивали при 1рименении тг|уноферментного окрашивания с внутренним флуоресцетно-зым контролем по предложенной нами методике (рац. предложение, per. 11160 В0Шт АМН СССР от 28. XI. 88).

Клинический анализ данных проведен совместно с д. м. н. 1.1 А. Ьлковой и к. м. н. Д. UL Османовым (отделение гематологии - рук. проф. \ Е Круглова). Клинический анализ у детей, больных гемобластозами, [роведен совместно с д. м. н. С. А. Майковой и ст. н. с. А. Е Киселевым рук. отдела - профессор Л. А. Махонова).

Все полученные данные были обработаны статистически в лабора-ории информационно-системного анализа и медицинской кибернетики ЮНЦ АМН СССР совместно с А. К АртемъеЕым. Вычисление показателей родолжительности жизни и ремиссии проводилось по методу Каплан-¡айер (1958); сопоставление кривых выживаемости осуиествлялось етодами Wilcoxon и Сох на ЭВМ ЕС-1045.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

i. острый лимфобластныя лейкоз.

Иммунологическое изучение клеток острого лимфобластного лейкоза ОЛЛ) проведено у 304 больных, преобладали дети, соотношение лиц ужского и женского пола было примерно равным (Таблица 1). В соот-этствки с этапами дифференцировки лимфоцитов выделяли Т- и не-Т-яеточные иммуноподварианты ОЛЛ с идентификацией в пределах Т-ОЛЛ

пред-Т-клеточной и Т-клеточной форм лейкоза. а ъ Не-Т-клеточной группе "нулевого". 1а, "общего", пре-В и В-клеточного подвариантов [ А. Ю. Барышников и соавг. . 1991: .1. М1по\гас)а. 1985; К. Рооп и И. Г. Тсх1с1. 1986].

Как показали наши исследования, в детском возрасте и у взрослых наиболее частым был "обпшй г ¡муноподвариант ОЛЛ (Таблица 3), что соответствует результатам более ранних исследований [ А. Ю. Барышников, 1984]. Сравнение экспрессии дифференцировочных антигенов показало, что на властных клетках ОЛЛ у детей чаще выявлялся антиген СБЮ, средние уровни СТ)10+ клеток в властной популяции были достоверно более высокими. У больных ОЛЛ взрослого возраста значительно чаще были зкспрессированы Т-клетс шые маркеры СО? (Таблица 4). Различий по частоте выявления других антигенов на бла-стных клетках не наблюдали. Корреляционным анализом установлено существование ряда общих закономерностей в экспрессии дифферен-цировочных антигенов при ОЛЛ у детей и у взрослых. Положительной корреляционной связью характеризовались дифференцировочные маркеры в-клеток: Ю-0!? и СБЮ (у детей г=+0,23; п=206: р=0,0009; у взрослых г=+0,29; п=62; р=0,00186), НЬА-ОЙ и ИПО-Ю (У детей г= +0.51; п=44; р=0,0004; у взрослых г=+0.71; п-15; р=0,0029). Напротив, экспрессия НЬА-ОИ и Т-клеточных маркеров находилась в обратной корреляционной зависимости (г—0,2; п=455; р=0,0113). Отмечена высокая положительная корреляционная связь линией не ограниченных антигенов С038 и СБИа (у дете:": г=+0.57; п=62;р=0,000; у взрослых г=+0,59; п=£3; р=0,0009), миелоантигенов СОНЬ и СБ15 (у детей г=+0,66; п=147; р-0,0000; у взрослых г=+0.92; п=46; р= 0.0000), эр.итроидных антигенов, выявляемых МКА НАЕ-3 и НАЕ-9 (г= +0.39; п=141; р=0,0000). Эти данные свидетельствуют о существовании, наряду с различиями в частоте вовлечения в лейкозный процесс популяций СБ10+ и Т-клеток, "аке и ряда общих взаимозависимостей экспрессии антигенов в лейкозном клоне.

Г-КЖГОЧНЫЕ ИММУНОЮДВАРИАНТЫ ОЛЛ

Представления о частоте и способах выявления Т-ОЛЛ претерпели существенные изменения. Частота Т-ОЛЛ в реакциях Е-розеткообразова-ния равнялась 10 -20%, а с применением анти-Т-клеточных сывороток возрасла до 30 - 40% С А. Ю. Барышников, 1984].

Экспрессия Е-рецептора установлена у 16.3% детей, больных ОЛЛ и у 30% пациентов взрослого возраста. Т-клеточные антигены, выявля емые антисыворотками, были зкспрессированы на лимфобластах ^ЛЛ у 28.3% детей и у 41,2% взрослых. МКА наиболее часто выявляли пан-Т-клеточньй антиген СО? (14,7% у детей и 32,3% у взрослых).

- 17 -

Таблица 4. Частота обнаружения отдельных антигенов на бластных клетках ОЛЛ, абс. (%).

Иммунологи- Возрастная группа

ческий маркер Дети Взросль©

HLA 153/220 (69.5) 40/61 (65,6)

СОЮ 124/233 (53,2) 24/61 (39,3)

ТЬу-1 17/197 (8,6) 10/58 (17.2)

.1^71-1 53/188 '28,2) 15/52 (28,8)

СБИЬ 10/160 (6.3) 5/52 (9,6)

0)15 7/152 (5,3) 5/48 (10,4)

Гликофорин А 4/153 (2.6) 3/50 (6)

АГ-ЭБ (НАЕ-?) 8/153 (5,2) 3/53 (5,7)

22/137 (16,1) 5/37 (13,5)

2/239 (0,8) 2/59 (3,4)

ипо-з 3/63 (4,8) 5/22 (22,7)

ИП0-10 19/47 (40,4) 7/14 (50)

ЯГВ-1 (ИКО-40) 21/43 (48,8) 5/15 (33,3)

ИК0-02' 25/136 (18,4) 11/45 (24.4)

Т-антигены 26/92 (28,3) 7/17 (41,2)

С01 7/50 (14,0) 5/16 (31,3)

СБ2 20/123 (16,3) 6/20 (30;

С05 11/90 (12,2) 6/30 (20)

СО? 17/91 (18,7) 10/31 (32.3)

СБ38 26/101 (25,7) 11/33 (33,3)

Иммуноподварианты ОЛЛ с экспрессией на лимфобластах маркеров Т-клеток диагностированы у 56 детей (23,1% случаев) и у 21 больного взрослого возраста (34,7%).

Пред-Т-клеточный (Т1) ОЛЛ диагностирован у 30 детей (12,4% по группе ОЛЛ, 53,4% в пределах Т-ОЛЛ) и у 8 больных взрослого возраста (12,9% по группе ОЛЛ, 38,1% в пределах Т-ОЛЛ). В детском возрасте при установлении дань го подварианта в 13 случаях использованы МКА (СОЗ, С04, С05, С07), в 13 - анти-Т-клеточная о:: кротка и в 4 - Е-розеткообразование; у 6 взрослых применили МКА к С07, у 2 - анти-Т-клеточкую сыворотку.

Различные методы диагностики Т1-0ЛЛ, 1сак наименее ди(йеренци-рованного подварианта в группе Т-клеточных лейкозов, отражают последовательность появления антигенов в ходе дифференцировки Т-лимфоцитов. Т-клеточньй антиген СВ7 присутствовал в 100% случаев при

иммуноподвариакте TI у детей и у взрослых. Т-клеточные антигены, выявляемые ксеногенной сывороткой, обнаружены в 81,3% случав, CD5 - в 50%. E-рецептор и антиген CD3 - в 45% и 41%, соответственно. Уровень CD7+ клеток при Т1-ОЛЛ был достоверно более высоким, чем уровень CD5+ клеток (44,2+/-3,9% и 19,5<-/-3,7%,р<0,05).

Экспрессия антигена CD10 при пред-Т-клеточном лейкозе происходит на наименее зрелых CD7+CD3- Т-лимфобластах, входящих в состав лейкозного клона и не связана с присутствием в лейкоз.,ой популяции пре-пре-В клеток. Этот факт был установлен в опытах с двойной флуоресцентной меткой (Рисунок 1). В части случаев клетки этого подва-рианта зкспрессируют антиген CD34. Пред-Т-клеточный иммуноподвариант ОЛЛ был очень полиморфен в ант'тенном отношении, причем частота выявления различных не-Т-клеточных маркеров варьировала от 0% (ци-топлазматические и мембранные Ig, CD15, CD23, CD13, CD33, :ликофо-рин А) до 85,7% (антиген RFB-1). Нехарактерными для этого лейкоза были экспрессия Thy-1 (5%), антигена, выявляемого МКА НАЕ-9, (7%), а также антигена CDllb (12,5%). С умеренной и высокой частотой обнаруживались антиген недифференцированных бластов ИКО-02 (29%), CD1 (38%), CD38 (46%), HLA-DR (54%), CD58 (63%). Пред-Т-клеточный иммуноподвариант ОЛЛ следует дифференцировать с пре-пре-В-ОЛЛ.т. к. ' в случае коэкспрессии CD7 предпочтение отдается маркерам В-клеток. В этих редких случаях выявлялись маркеры CD19, ИПОЗ (по 1 наблюдению) ; CD22, ИПО-10 (по 2 наблюдения). Таким образом, субклассификация Т-ОЛЛ основана на определении линейной принадлежности лим-фобластов и выявления в лейкозком клоне наименее дифференцированно* фракции CD7+CD10+ пред-Т-клеток.

Г-клетрчяый тыуноподвариант ОЛЛ установлен у 39 больных (26 детей /10,7%/ и 13 взрослых /21,8%/). Отсутствовала экспрессия антигена CD10 при наличии Т-клеточных маркеров CD7, CD5, CD3, антигена. выявляемого анти-Т-клег;очной сывороткой, E-рецептора, частота выявления которых варьировала в диапазоне от 50% до 100%.

Т-клеточный ОЛЛ характеризовался меньшим антигенным полиморфизмом, чем пред-Т-ОЛЛ. Отсутствовала экспрессия на лимфобластах мембранных и цитоплазматических иммуноглобулинов, гликофэрина А, маркеров CD1, CD15, CD22, CD23, CD13, CD33, CD34, реакция с МКА НАЕ-9. Более низкой в сравнении с пред-Т-клеточным ОЛЛ была частот; выявления HLA-DR, CD58, RFB-1, Thy-1, CDlla, CD38, антигена недифференцированных бластов ИК0-02. Линейное несовпадение с экспрессией В-клеточных маркеров (CD19, ИП0-10) или CDllb было крайне редким (по 1 наблюдению). Эти данные находятся в соответствии с результатами изучения дифференцировки Т-клеток и субклассифика-

Рис. I. Коэкспрессия маркеров СйЮ и С27 при пред-Т-клеточном остром лимфобластном лейкозе.

А - Контрольный образец окрашивания бластных клеток больного Н .

Б - клетки того же Сольного окрашены нкл Leu-'l-PE (CD3) и МКА анти-CALLA-FITC (CD10). Популяции клеток, находящиеся в различных секторах: 1 - CD3+CDÍO- (16Z); г - CD3>CD1CH (ЧУ.)-, 3 -CD3-CDIO- (18,9/.); 4 - CD3-CD10» (61/.).

В - Клетки того же больного окрашены НКА акти-CALLA-FITC (CD10) и Сиотинилированными НКА ИК0-67 (CD7) с последующим проявлением реакции комплексом стрептавипин-РЕ. Популяции клеток, находящиеся п различных секторах: 1 - CD7+CD10- (51,6/;); Z -CD7+CD10* (Ч1,е/,)| 3 - CD7-CDIÜ- {¿,Т/,)\ 4 -CD7-C 10* (3.9/1 .

ции Т-ОЛЛ [j.Minowada е. а. , 1985; Е. Reinherz et al. . 1986; R. Foon и К. Todd, 1986].

HE-T-КЛЕТОЧНЫЕ ИШУЮГЮДВАРШТЫ ОЛЛ Лейкозы, не имеющие маркеров принадлежности к Т-ряду, являются наиболее многочисленным типом ОЛЛ у детей (76,9%) и у взрослых (65,3%). Эта группа включает "нулевой", 1а, "общий", пре-В и В-клеточный иммуноподварианты ОЛЛ

Нулевой 1Ш1уиоподвариант ОЛЛ составляет в детскок. возрасте 13.2% (32 наблюдения), у взрослых - 6,5% (4 наблюдения). Ifo мере дополнения панели МКА с включением в нее пан-В-клеточных. пан-Т-клеточных. общемиелоидных и эритроидных маркеров частота данного подварианта сокращается. Клетк" нулевого типа не экспрессируют маркеров CD10, HLA-DR, Т-клеточных антигенов и рецепторов (CD1-5, CD7.CD8). Отсутствовали В-клеточные маркеры ИПО-3, ИПО-Ю, CD19, CD22, CD23, мембранные и цитоплазматические Ig. Не обнаружены антиген эритробластов (НАЕ-9) и CDllb. В 5% случаев нулевого подварианта у детей и у взрослых установлены латентные нелимфобластные лейкозы - С015-положительные миелоидные и гликофорин-А-положитель-ные зритроидные. С такой же частотой обнаружен антиген Thy-1. Клетки "нулевого" иммуноподварианта ОЛЛ бнли полиморфны по экспрессии линией не ограниченных антигенов CDlla (30%). RFB-1 (33%), ИКО-02 (26,7%). Наиболее часто обнаруживались антигены CD38 (55,6%) и CD58 (62,5%). Необходимо дальнейшее изучение "нулевого" ОЛЛ с использованием МКА к стволовоклеточным (CD34), общемиелоидным (CD13, CD33) и мегакариоцитарным антигенам.

I а-иммую по ¿вариант ОМ изучен у 44 детей и 15 больных взрослого возраста Наиболее часто (38% - 60% случаев) при этом иммуноподвариант.е отмечалась экспресса антигенов CDlla, CD38, RFB-l, CD58, CDlc. Антиген Thy-1 выявлен у. 9,8% больных, а ИШ-02 - у 22%.

Значительную пропорцию в пределах иммуноподварианта 1а (2/3 случаев) составляли про-В-клеточные лейкозы, что подтверждено экспрессией антигена CD19 (МКА HD37,Leu-12), CD22 (МКА HD6, HD39) И реакцией с МКА ИПО-Ю. В редких случаях (по 1 наблюдению) отмечена экспрессия антигенов CD23 и ИПО-3. Пан-В-клеточные антигены CD19 были мономорфно представлены на про-В-клетках, в ряде случаев в со четании-со стволовоклеточным антигеном CD34 (Рисунок 2).

С высокой частотой на клетках иммуноподварианта 1а ОЛЛ обнару жены миеломоноцитарные и зритроидные антигены: CDllb - 10%, GD15 -14,6%, гликофорин А - 10,3%, антиген эритробластов (НАЕ-9) - 10%. Экспрессия этих антигенов отмечена как в случаях про-В-ОЛЛ (линей-

4 .! г,=Р I I I *|°г I I I 5Нх

..4

Ч.-.—

I I I I

I

.л и.

... и, . Р^«

: .... г

;ла£вЙ(а»4- • - ' ь

«ясаилк^'у :• • г _________|

14 1 -т —»15 — --------------X

I ' ртв

Г . ь

I Г

—•. ч П.И.| ' Ц'И.ЦЦ-1. I I .. мЬ

■|В4 'ю- «О* 'ю*

г

,„ 1 I. ¡'У1?» I

3 I

4 ■ . 1

щЗ-^млЬ«',.':" . 1

п««"^ V . 1

[V • I

■■■ ■ •! Г

^ : •

Г • . • Г"

I • .'г' с

Ш'-Т" —------------с

Л- ' I

1 • • I Ь

Г I С

—I —I I 111 и.{—.. 11 .пп1—I . ....!. У: ¡а" 'ю1 '«а* ю» '«о*

Рис.2. Циторрямны иммуноФлуоресценции Оластмкх клеток при про-В-клеточной (1а) иммунополилри.штс ОЛЛ . А • двойная флуоресцентная метка НКА 1.еи-12-РЕ (С1М9) и анти-САЫ-А-ИТС (С»10). Популяции клеток в секторах: 1 - СВ19«С|>10-(ЙП,4Х): г - С019*С010+ (9,15Х); .1 - С1>19 С1)Ю-(1,'Г/.); П - С019-С010» (1,05/.). В - диоПм.щ Флуоресцентная нетка НКА Ну-10 (CDЗ'l) и Г.е«-9--Р1ТС (С07). Докраска НКА Ну-10 (иэотил 1вС1> антисыпороткой к мышиному 1, меченной РЕ.

Популяции клеток в секторах:! - С1>3'1«С1>7- (97.75Х):

г спз4+ср7* (о,9И): з - созъ-спг- п.зп; п -

ММЧ-СБТ* (0,05'/.).

ная разномаркерность), так и при отсутствии признаков лимфоидной дифференцировки (латентные нелимфобластные лейкозы). Эти данные находятся в соответствии с результатами обнаружения HLA-DR на стволовых кроветворных клетках, неоднородностью лейкозов из ранних ге-мопоетических предшественников, проявляющейся в линейно-разномар-керном иммунофенотипе С R. Winchester et al. ,1979; М. F. Greaves et al., 1986].

Таким образом, иммуноподвариант la гетерогенен, включает про-В-ОЛЛ, часть из которых относится к стволовоклеточным и острым смешанно-линейным лейкозам, латентные формы миелобластных и эритроб-ластных лейкозов, а также собственно подвариант 1а, при котором линейная принадлежность властных клеток неизвестна.

"Общий" ишуноподвариант ОМ диагностирован у 36% детей (87 из 242) и у 25,8% взрослых (16 из 62), больных ОЛЛ. Характерными для этого подварианта являются высокие уровни экспрессии антигена CD10, как правило, в сочетании с H1.A-DR, при отсутствии Т-клеточных маркеров, мембранных и цитоплазматических иммуноглобулинов.

Применение комплекса МКА к антигенам различных клеточных линий позволило установить лре-лре-В-клеточную природу "общего" иммуно-подварианта. Экспрессия пан-В-клеточнгт,о антигена CD19 была достаточно слабой и обнаруживалась на клетках в 84% случаев методом лю-минисцентной микроскопии и в 100% случаев методом проточной г гго-флуориметрии на приборе Facscan. В 57,1% отмечена положительная реакция с МКА ИП0-10. «Антигены более поздних этапов дифференцировки B-клеток были экспрессированы значительно реже: CD20 - 40%, CD22 - 18%, CD23 - 21%, ИПО-3 - 3%, CD76 на клетках отсутствовал. Пан-В-клеточные антигены (CD19, CD20) и антиген CD10 козкспрессиро-ваны на уровне единичного лимфобласта в состав лейкозного клона входят субклоны клеток CD19-CD10-, CD19+CD10-, CD19+CD10+ (Рисунок 3). В 17% случаев пре-при-В ОЛЛ имеет стволовоклеточное происхождение. Данный иммуноподвариант гетерогенен по экспрессии CD58 (62,1%), RFB-1 (38,9%), CD38 (14,6%), CDlla (27,5%), ИКО-02 (14%). Наблюдается наибольшая частота Thy-1+ лейкозов (10 из 75; 13,3%), что согласуется с данными о преимущественной экспрессии Thy-1 у человека на ранних предшественниках B-клеток [А. Е. Reif, М. Schlesinger, 1989; М. Ritter et al. ,1983]. Весьма характерной для "общего" ОЛЛ была линейная нестабильность с экспрессией миелоидных антигенов CDllb и CD15, а также антигена зритробластов. Данные проведенных исследований указывают на то, что "общий" иммуноподвариант ОЛЛ - это группа лейкозов, при которых блок дифференцировки лимфобластов произошел на уровне пре-пре-В-клеток. Небольшую

4 i i t I^P« i IАДР. . t^P» i iЦ^гi i i;

г "-.ттзщг.

I I

I

• • V '

'3,4

F

E

У

^TÍB

с h-

,яо-у "-r'i i'iiiit ~'i"rr;iiiti—» —

'ta* ID1 'ID' чв-

E I-

grao

IE

ID*

Рис -За- Цитограмма Флуоресценции клеток костного мозга больного А-н, окрашенных НКА анти-CALLA-FITC (CD10) и НКА Leu-12-PE (CPÍ9).Популяции клеток, находящиеся в различных секторах: 1 - CD19*CD10-(22,8X); 2 - CD19*CD10* (59,9'/.У, 3 - CD19-CD10-(16,7/); 4 - CD19-CD 1<Н (О.бИ).

Б - Клетки того асе больного, окрашенные НКА анти-CALLA-FITC (CD10) и биотинилированными НКА ИКО-07 (CD7) с последующим проявлением реакции комплексом стрептавидин-РЕ. Популяции клеток, находящиеся в различных секторах: 1 - CD7tCD10- (5,6Z)¡ CD7+CD10+ (2, ЧУ.); 3 - CD7-CD10- (39,9У.У, Ч -CD7-CD10+ (52.1/.).

фракцию в пределах данного подвариан-а составляют острые смешанно-линейные лейкозы с одновременной экспрессией на бластах нелипфо-идных антигенов. Родоначальными клетками пре-пре-В-иммуноподвари-анта являются стволовые (С034+).или про-В-клетки (CD19+CD10-1а+).

Пре-В-клеточный вариант ОМ диагностирован у 24 больных (21 ребенок и 3 взрослых) на основе обнаружения экспрессии внутрицито-плазматической мх>-цепи иммуноглобулинов при отсутствии легких цепей и s-IgM. Уровень клеток, содержащих иммуноглобулины, варьировал в широких пределах от 10% до 95%. Принадлежность клеток к В-ряду помимо ig-молекул подтверждали анти-В-клеточные антитела И1Ю-10. HD37 (CD19). HD6 и HD39(CD22). Характерной для этого подварианта лейкоза была экспрессия HLA-DR антигенов. В 33% случаев обнаружены антигены CD10. Большинство изученных маркеров полностью отсутствовали на мембране властных клеток. Это Т-клеточные антигены CD2. CD? CD4. CD5. CD7. CD8, а также Thv-1. ИКО-02. ИПО-3. CDllb. CD15, CD38. гликофорин А. антиген эритробластов. RFB-1, CD13. CD33. CD34. В качестве дополнительного маркера бластных клеток в 60% случаев присутствовал антиген CD58. С крайне низкой частотой выявлен CDlla (5.6%).

Отсутствие при пре-В-ОЛЛ реакции ^леток с МКА кластеров CD33 и CD34, распознающих антигены на стволовых клетках, позволяет думат о том. что неопластическая трансформация произошла на более поздню этапах дифференцировки гемопоетических клеток, коммитированных к созреЕанию по Б-клеточной линии.

Пре-В-ОЛЛ однороден по иммунологическим маркерам и не имеет признаков острых смешанно-линейных лейкозов, клетки находятся на различных этапах дифференцировки В-ряда, начиная с про-В-клеток,npi чем собственно пре-В-клетки отражают терминальную стадию дифференцировки лимфобластов.

В-клеточный ОМ относится к разряду очень редких форм острого лимфобластного лейкоза. Мы наблюдали 5 случаев В-ОЛЛ (2 - у детей и 3 - у взрослых). В 4 случаях обнаружены моноклональные мембранны иммуноглобулины, в 1 - цитоплазмагическая локализация иммуноглобул новых молекул. CDlO-антиген отсутствовал. Средний уровень экспрессии 1а-подобных антигенов равнялся 37,3% +/- 7.8%. На клетках определялись Т-клеточные антигены Е-рецептор, CD3. CDS. CD7, Thv-1 Отмечено практически полное отсутствие на бластнах LFA-1 антигена (1,0 +/- 0.2%). Содержание С038-антигенположительных клеток ( 1 наблюдение) равнялось 14.2%. Не выявлены антигены CD15. гликофорга А. антиген эритробластов, RFB-1, CD58, CD1.

Представило интерес сопоставление подвариантов ОЛЛ по экспрес

сии дополнительных маркеров, которые не учитываются при установлении иммуноподвариантов. К числу этих антигенов относятся Thv-1 (МКА ИКО-10), CDU а (МКА ИКО-11), CD38 (МКА ИК0-20), антиген недифференцированных бластов (МКА ИКО-02), миеломоноцитарные антигены CDllb и CD15, эритроирчые антигены гликофорин А и антиген эритробластов, маркеры CD58, RFB-1, CD1. Помимо CD38 все эти антигены имели независимым от используемой иммуноклассификации тип распределения на властных клетках при ОЛЛ у детей. Сравнение частоты встречаемости и средних уровней антигенположительных клеток не выявило статистически значимых I хзличий (р > 0,05). Частота встречаемости антигена CD38 была максимальной при "нулевом" ОЛЛ - 55,6%. В пределах В-к. зточного ряда по мере дифференцировки клеток частота обнаружения CD38 последовательно уменьшалась: иммуноподвариант 1а - 41,2% "общий" - 14,6%, пре-В - 0%. В - 0%. Аналогичная тенденция отмечена и ь Т-клеточном ряду дифференцировки: иммуноподвариант пред-Т - 45.5%. Т - 28,6%. Различия статистически значимы, р = 0.04. Выраженная экспрессия антигена CD3S при лейкозах из незрелых клеточных типов и достоверно более низкая частота встречаемости при подвариантах ОЛЛ из дифференцированных Т- и B-клеток позволяют рассматривать CD38 как дополнительный маркер стадии зрелости лейкозных лимфобластов.

Помимо классификации ОЛЛ на Т- и не-Т-клеточные типы с установлением стадий зрелости лимфобластов возможна идентификация ряда особых ф^рм острого лимфобластного лейкоза. В числе этих форм -ОЛЛ с экспрессией миеломоноцитарных антигенов на бластных клетках, а также ОЛЛ с экспрессией эритроидных антигенов на бластных клетках.

ОМ С ЭКСПРЕССИЕЙ ШЕЛОИДНЫХ АНТИГЕНОВ.

Вопрос о происхождении вариантов ОЛЛ, при которых на бластных клетках экспрессированы миелоидные антигены, в настоящее время еще далек от окончательного разрешения. Сам факт обнаружения этих антигенов хорошо документирован в целом ряде работ. Однако высказываются различные точки зрения относительно возможности установления миелобластного варианта лейкоза на основании обнаружения этих антигенов CS. Kaplan et al. 1989; Pui et al. 1989].

Положительную реакцию с ¡Ш к CDllb к CD15 наблюдали у 15 из 166 обследованных детей с ОЛЛ (9%): CDllb - 6.3% (10 наблюдений). CD15 - 5,3% (8), что соответствует данным других авторов [Pui et al. 1989]. При ОЛЛ у детей миелоидномоноцитарные антигены наиболее часто присутствовали при "общем" (8 из 65; 12,3%), и Т1 иммуноподвариантах (2 из 16; 12,5%), реже - при 1а (3 из 32; 9,4%), Т (1 из 16; 6,3%), нулевом (1 из 20; 5%), отсутствовали при пре-В и В-ОЛЛ. Экспрессия антигена CDllb обнаружена на лимфобластах 10

детей с ОЛЛ. Морфологически эти случаи были весью разнородны: у 4 больных был вариант LI, у 2 - L1/L2, у 1 - L2/L1, у 3 - L2. Экспрессия антигена отыечена при иммуноподвариантах "общем" (5 случаев), 1а (2). Г1 (2), Т (1). Практически во всех изученных случаях (8 из 9) на бластных клетках присутствовали la-подобные антигены. Преобладала B-клеточная направленность дицл{еренцироЕки лимфобластов. У 3 больных были коэкспрессированы гранулоцитарные антигены CD15, у 2 - антиген зритробластов. Частота обнаружения CD10 составила 70%. CDlla - 50%. Отсутствовали маркеры ИГО-З, CD5, гликофорин А. редко (по 1 наблюдению) выявлялись CD38 и CD58.

Значительно более гомогенную группу в сравнении с CDllb+ ОЛЛ у детей представили CD15+ ОЛЛ (8 наблюдений, в 3 из них CDllb и CD15 антигены были коэкспрессированы). В 4 случаях подобный иммуно-фенотип был представлен при "общем" иммуноподЕарианте. в 3 - лри 1а и в 1 - у больного с нулевым ОЛЛ. то есть экспрессия CD15 отмечена главным образом при ОЛЛ на достаточно узком ггапе дифференци-ровки про-В- и пре-пре-В-клеток. Применение МКА кластеров CD22, CD23, а также ИП0-10 подтвердило это положение, исключение составил лишь 1 случай с отсутствием ИП0-10 при ^экспрессии CDllb и CD15. На лимфобластах отсутствовали гликофорик А, мембранные и цитоплазма тические иммуноглобулины, Т-клеточные маркеры (CD5, CD7, CD8, Е-розеткообразование, реакция с анти-Т-клеточной сывороткой), а т^кже антиген ИБО-З. Экспрессия HLA-DR, CDlla. ИКСн02, Thy-1, CDllb, CD10 CD38, CD58 и антигена зритробластов при CDlb+ про-В-клеточных и пре-пре-В-клеточных ОЛЛ была гетерогенной.

Особенностями ОЛЛ с экспрессией миелоантигенов были частое обн ружение антигена зритробластов (35,7%; р = 0,00034), а также редкое выявление CD58 (12,5%; р = 0,01). Отмечены более высокие уровни НАЕ 9+ клеток (19,4%+/-3,5% и 3,8%+/-0,9%, р<0,005). и Thy-1+ клеток (12,5%+/-3,4% и 4,6%+/-0,9%, р=0,029). По остальным антигенам разли чия не были статистически значимы.

Во взрослом возрасте экспрессией миелоантигенов установлена у 7 больных ОЛЛ. в большинстве случаев антигены CDllb и CD15 были представлены на клетках одновременно. Отмечена коэкспрессия эри-троидных антигенов гликофорина А (1 наблюдение) и антигена зритробластов (1 наблюдение). У 4 больных был иммуноподвариант 1а, у 2 -"общий", у 1 - Т-клеточный. Во всех случаях, за исключением T-OJUI, на бластных клетках были экспрессировакы 1а-антигены. Подтверждение про-В- и пре-пре-В-клеточной природы бластов было подучено с помощью МКА кластеров CD19, CD22, ИПО-3 и ШЮ-10 в 5 случаях при 1а и "общем" подвариантах. У больной с Ph+ ОЛЛ лейкозная популяция бы-

ла практически мономорфна по экспрессии антигенов HLA-HR и ИП0-10 (более 90% антигенположительных клеток), миелоантигены определялись на 40% бластов. Это позволяет говорить о коэкспрессии маркеров Щ>10 и CDllb/CD15 на уровне одной клетки даже при отсутствии опытов с двойной флуоресцентной меткой. У этих больных достоверно чаще были экспрессированы Thy-1-антигены (р = 0,046), ИК0-02 (р = 0,013), CD1 (р = 0,025).

Таким образом, экспрессия миелоидных антигенов при ОЛЛ наиболее часто наблюдается при острых смешанно-линейных про-В и пре-пре-В клеточных '.ейкозах, реже - при латентных нелимфобластных лейкозах.

ОЛЛ С ЭКСПРЕССИЕЙ ЭРИТРОШНЫХ АНТИГЕНОВ.

Эритроидные антигены обнаружены на клетках 10 детей, больных ОЛЛ. С наибольшей частотой МКА НАЕ-3 и НАЕ-9 давали положите~ьную реакцию при 1а-иммуноподварианте (4 из 32; 12:5%), реже - при "об-.эм"* (4 из 65; 6,2%), пред-Т-клеточном (1 из 17; 5,9%) и нулевом ОЛЛ (1 из 18; 5,6%).

Гликофорин А обнаружен на бластных ¡тетках ОЛЛ у детей в 2,6% случаев (4 из 153 обследованных). Отсутствовали маркеры зрелых Т- и 3-клеток, подварианты - нулевой (1), 1а (2), "общий" (1). Применение МКА B-клеточной серии показало существование латентных эритроблас.лых лейкозов (подварианты нулевой, 1а) и острых, смешанно-линейных ле;.козов (подвариант пре-пре-В). Властные клетки больных, у ■ оторых отмечена экспрессия гликофорина А, не имели на мембране молекул CDlla, Thy-1, Т-клеточных антигенов (CD1. CD2, CD5, CD7, реакции с анти-Т-клеточной сывороткой), цитоплазматических и мембранных Ig. миелоантигенов спиь и CD15, были гетерогенны по экспрессии антигена недифференцированных бластов (ИК0-О2), CD38, CD58, HLA-DR И RFB-1.

Экспрессия гликофорина А на бластных клетках у больных ОЛЛ взрослого возраста отмечена значительно чаще, чем в детском возрасте (10%; 5 из 50 больных). У 3 больных только экспрессия гликофорина А свидетельствовала об эритроидной природе бластных клеток. У 2 больных гликофорин А и антиген эритробластов были представлены одновременно. Как и у детей, гликофорин А обнаружен при подвариантах нулевом (1), 1а (2), "общем" (1), а также в 1 случае Т-ОЛЛ В 4 случаях гликофорин-А-положительные бластные клетки выяв-^ лялись только в периферической крови больных ОЛЛ и отсутствовали в бластной популяции клеток костномозгового пунктата. При про-В-клеточном подварианте ОЛЛ лимфобласты зкспрессировали молекулы CD19, HI А-DR, CD38, CD15, положительно реагировали с МКА ИКО-02. Отсутствие реакции с МКА МуЮ к антигену CD34 позволило исключить стволовокле-

точную природу лейкоза

Таким образом, экспрессия гликофорина А на клетках octj. jro лим-фобластного лейкоза встречается с невысокой частотой - 4,4% (9 из 203 обследованных), причем частота этой формы ОЛЛ у взрослых примерно £ 4 раза выше, чем у детей (10% и 2,6%). Типичным является обнаружение маркера на бластных ыетках периферической крови при нулевом, про-В- и пре-пре-В-клеточном ОЛЛ.

В отличие от гликофорина А, появляющегося на поздних стадиях дифференцировки, отсутствующего на коимитированных эритроидных предшественниках (БОЕ-Е и КОЕ-Е) и на части проэритробластов. антиген, выявляемый МКА НАЕ-9, присутствует практически на всех ядросодержащих клетках эритроиднсо ряда за исключением БОЕ-Е. ■

Положительная реакция с МКА НАЕ-9 отмечена в 8 из 153 случаев ОЛЛ у детей (5,2%) при иммуноподвариантах "общем" - 4, 1а - 3, Т1 (CD7+CD5-) - 1. Иммуноподварианты "общий" и 1а при ОЛЛ с экспрессией антигена НАЕ-9 соответствовали пре-пре-В и про-В-клеточным лейкозам. Гетерогенно были экспрессированы антигены CDlla, Thy-1, ИК0-02, CD38, RFB-1, CD58 и миелоидные антигены. Отсутствовали мембранные и цитоплазматические Ig. Ito иммунофенотипической харктеристике клеток эта группа ОЛЛ у детей была весьма разнородной.

У больных взрослого возраста экспрессия антигена эритробластов отмечена в 3 случаях из 53 обследованных (5,7%). Лишь у 1 из этих больных клетки не содержали гликофорина А.

Характеризуя в целом группу ОЛЛ с экспрессией антигена эритробластов, следует отметить, что чаще эта форма лейкоза встречается при ОЛЛ из ранних предшественников В-клеток. Т-клеточные иммунофе-нотипы являются редкими и могут соответствовать линейно-разномар-керным предшественникам. Возможно становление линейной определенности в рецидиве заболевания у больных.

Наличие на бластных клеч ах ОЛЛ эритроантигенов ассоциировало с экспрессией миеломоноцитарных антигенов (р = 0,00034) и антигена CD1 (р = 0,031).

Иммуноморфологический анализ проведен у 234 детей, больных ОЛЛ, и 61 больного взрослого возраста Структура FAB-вариактов у детей была такова LI - 83 ( 35,5%), L1/L2 - 60 (25,6%), L2/L1 -33 (14,1%), L2 - 58 (24,8%). У взрослых преобладал вариант L2 -43 больных (70,5%), реже встречались типы LI - 13 (21,2%) и L3 -5 (8,3%).

Частота пре-В-клеточного ОЛЛ в детском возрасте возрастает по мере увеличения числа клеток более крупного размера LI - 4,8%, L1/L2 - 6,7%, L2/L1 - 12,1%, L2 - 12,1%. Для остальных иммунопод-

ариантов связи с FAB-классификацией не отмечено. Из числа иммуно-югических маркеров только Thy-1 и су-Ig коррелировали с морфоцито-:имическим вариантом лейкоза. Thy-1 антиген обнаружен только при ;ачичии в лейкозной популяции фракции крупных (L2) клеток: L1 -1/67 (07.). L1/L2 - 9/52 (17,37.), L2/L1 - 1/31 (3,27.), L2 - 5/41 12,2%), р = 0,047. Среднее содержание Thy-1+ клеток в лейкозной юп^иции бластов типа L1 составило 1,9%+/-0,44%, при типе L2 -4%+/-2,8%, р = 0,038.

У взрослых больных ОЛЛ экспрессия иммунологических маркеров, i тага® чг "тота иммунопог^ариантов не имели связи с морфоцитохими-юским (LI, L2, L3) вариантом лейкоза

Клинико-иммунологическое изучение результатов лечения ОЛЛ в (ависимости от иммунологического фенотипа бластных клеток основано ¡а оценке ч.лтоты полных ремиссий (ПР), их длительности, а также . уживаемости у 242 детей. Современные схемы интенсивной поллхи-шотерапии позволяют получить ПР при ОЛЛ у детей в более, чем 90%-)5% случаев. По нашим данным частота ПР была максимальной при "об-цем" (96,6%) и пре-В-клеточном (95,6%) иммуноподвариантах, отличия )т частоты ПР при других подвариантах не являются статистически значимыми (р>0,05). Не получено различий в частоте ПР в группах, зыделяемых на основе экспрессии дифференцировочных антигенов на шмфобластах (сценен 21 маркер). Наиболее близки к достоверным различия ме:эду CDlOt и CD10- группами, р=0,1. Т-клеточные лейкозы в тоеледние годы уже не относятся к разряду прогностически неблагоприятных, частота ПР при Т-ОЛЛ, диагностированном на осноЕе экспрессии CD1, CD3, CD4, CD5, CD7, равнялась 100%. Из числа изученных деуэкеров (1а, ИКО-02, Thy-1, су-le, CDlla, CD10, Т-клет~чные антигены,. миелоидные антигены, эритроидные антигены) только антиген 2010 влиял на обшуто выживаемость у детей, больных ОЛЛ. Различия между группами высоко достоверны (Не 78 мес и 26 мес. , р=0,0007). Важно отметить, что в CD10+ группу помимо "общего" подварианта входит пред-Г-клеточный ОЛЛ и часть случаев пре-В-ОЛЛ. При сравнении выживаемости при подвариантах ОМ различия были достоверны [ р=0,0067), наибольшей продс.-штельностью жизни больных характеризовались "общий" и пред-Т-клеточный иммуноподварианты. С учетом высокой частоты ПР у детей особенно важное значение в настоящее время придается оценке длительности безрецидивкого периода при ОЛЛ. Три иммунологических маркера имели связь с этим показателем. Экспрессия су-Ig была прогностически неблагоприятной, так как продолжительность ПР у больных в cy-Ig+ группе достоверно более короткая (Не 34 мес),в cy-Ig- группе медиана длительности ПР не

достигалась. Прогностически благоприятной по продолжительности ПР была экспрессия антигенов CD10 (р=0,0012) и HLA-DR (Ые Г1 мес и 32 мес., р = 0,03). Таким образом, оценка экспрессии дифферен-цировочных антигенов на бластных клетках ОЛЛ у детей позволяет идентифицировать группы больных, различающихся по прогнозу.

Сравнение выживаемости прожгли у 33 взрослых больных ОЛЛ в группах, различающихся по экспрессии следующих антигенов: 1а, Thy-1, антиген недифференцированных бластов (ИКО-02), CDlla, миеломоноцитарные антигены (CDllb, CD15), эритроидные антигены (МКА НАЕ-3 и НАЕ-9), Т-клеточные антигены, CD10, мембранные и цитоплазматические иммуноглобулины клеток. Достоверные различия в выживаемости между сравниваемым!' группами (ио методу Мантел-Кокс р-0,0339) получены при сравнении пре-В- и В-клеточных иммунопод-вариантов с подвариантами, при которых бластные клетки ОЛЛ не экспрессируют мембранных и цитоплазматических иммуноглобулинов. Прогноз в группах пре-В и В-ОЛЛ был значительно хуже, чем при прочих подвариантах (te 1 мес. и 9 мес., р = 0,034), что согласуется с мнением о неблагоприятном прогнозе зрело-В-клеточных вариантов ОЛЛ у взрослых и необходимости совершенствования терапии этой формы лейкоза [А. А. Перилов, 1987].

ii. аимфобластный вариант лимфосаркомы.

11 а. лимфобластная лимфосаркома детского возраста.

Исследование иммунологического фенотипа бластных клеток лим-бфобластного варианта лимфосаркомы проведено у 105 детей (Таблица 1). Иммунофенотип лимфосаркомы охарактеризован в таблице 5.

Таблица 5. Иммунофенотип клеток лимфосаркомы у детей.

Иммунологический Число Число Частота Содержание

маркер .больных обследо- экспрес- антигенполо-

с положи- ванных сии анти- жительных Z

тельной гена. Z клеток (Wf/-m)

реакцией

HLA-DR 55 95 57.9 36.0+/-2.5

ИКО-02 5 55 8,9 1.7+/-0.6

Thy-'l 7 80 8,8 5.7+/-1.6

LFA-1 25 77 32,5 21.0+/-3.5

CR3bi 5 63 7.9 14.7+/-2.3

CD15 0 53 0 11.3+/-Í..1

Гликофорин А 0 58 0 2.3+/-1.1

АГ-ЭБ 10 59 16,9 8.3+/-2.2

CD3P

сто isr

Т-аотигены CD7

Е-розетки ИП9-3

ипо-ю

14 9 12 6 12 И 14 40

- 28- - - --Таблица 5 (продолжение5

4о 29.2 1Ь,2+/-2.8

34 26.5 19.1+/-2.4

43 27.9 17.8+/-3.2

?\ 28.6 15,4+/-5.0

17 70.6 19.7+/-4.9

31 35,5 20.4+/-4.8

91 15.4 8.5+/-1,5

96 41,7 21.3+/-2.1

Иммунологические подварианты лимфосаркомы общий, Т1,Т,пре-В, В-клеточный, 1а и нулевой определяли тагае, как при О JUL Пре-В-клеточный им! тюподвариант отсутствовал. Пэдвариант Т1 отмечен лишь у 3 (2.9%). К числу редких иммуноподвариантов при лимфосарко-ме у детей относились "общий" (5 наблюдений; 4,8%) и 1а (9 наблюдений; 8,5%). Наиболее частыми были В-клеточный подвариант (38 больных; 36,2%), а также Т-клеточная димфосаркома (29 больных; 27,6%). У 21 ребенка установлен "нулевой" иммуноподвариант (20%).

В группу В-клеточной лпмфооаркот вогли 52 больных, иммуно-подварианты - В (38). "общий" (5) и 1а (9). При подварианто /а лимфосаркомы у детей отсутствовала экспрессия на клетках молекул Thy-1, антигена недифференцированных бластов, Т-клеточных Киркоров (CD3, CD5, CD7, Е-розеткообразование, реакция с анти Т-клеточной сывороткой), антигена CD10, мембранных и цитоплазматических Ig, эритроидных маркеров гликофорина А и антигена зритробластов (МКА НАЕ-9), миеломоноцитарного антигена CD15. У 2 больных отмечена экспрессия CDlla и CDllb. Среднее содержание CD38+ клеток было низким (5%).

При "общэм" ишуноподвариаяте у 1 больного помимо CD10 и HLA-DR антигенов выявлены CDlla, CD38, CD53. Во всех остальных случаях какие-либо дополнительные маркеры отсутствовали.

В-клеточный иммуноподвархант явился самым частым при лимфо-саркоме у детей, диагностирован у 38 больных (36,2% случаев). В 34 случаях диагностика основ'далась на обнаружении моноклональ-ных мембранных или цитоплазматических иммуноглобулинов лимфобла-стов; у 4 больных - на обнаружении экспрессии пал-В-клеточных антигенов CD19, CD22, ИПО-Ю (в 3 из этих случаев не было четкой экспрессии slg, в 1 - определение иммуноглобулинов не проводили). В сравнении с 1а и "общим" подвариантами В-лимфосаркома выглядит значительно более полиморфной в антигенном отношении. Положительная реакция имела место практически со всеми типами использованных МКА. С наибольшей частотой на клетках В-субварианта лимфосаркомы

определялись имыуноглобулиновые мпекулы (91,9%; 34 из 37 случаев), в среднем 44% клеток. Доминирующим изотипом Ig был Ig!,., реже -IgG или IgM+IgG. При оценке моноклональности иммуноглобулинов по типу легких цепей выявлялась монотипная реакция, заключающаяся в экспрессии только каппа или только лямбда цепей. Экспрессия la-подобных антигенов отмечена з 82,9% В-ЛСА. У всех больных с В-клеточной лимфосаркомой обнаружен В-клеточный антиген ИП0-10, в среднем на 50% клеток, часть случаев с мономорфной реакцией. С умеренной частотой отмечена экспрессия антигена недифференцированных бластов (15,8%), Thy-1-антигена (13,3%), CDlla (28,6%), антигена эритробластов (24,1%), а также CDlO-антигена (17,1%), 1 случай был CDllb+. На клетках с гсутствовали CD15 и гликофорин А.

Таким образом, группа В-клеточной лимфосаркомы является доминирующим иммунологическим типом в детском возрасте и наблюдается у 49% больных (52 из 105). К этому типу опухолей относятся ваг ' рианты с экспрессией моноклональнчх мембранных или цитоплазматц-ческих иммуноглобулинов, а при отсутствии экспрессии Ig - случаи,, подтвержденные реакциями с пан-В-клеточными МКА CD19. С022,.Щ10-10.

Г-клеточный иммунологический подварианг является; вторым- по частоте встречаемости после В-клеточного подварианта при- лимфоеар-коме у детей. Мы наблюдали данный подвариант у 32 детей, что состаг вляет 30,5% от всех случаев лимфосаркомы детского возраста

Пред-Т-клеточный итуноподвариант лимфосаркомы диагностирован у 3 детей, уровни CD10+ клеток - 42% - о2%. Непостоянно выявлялись HLA-DR и Thy-1-антигены.

Г-кдаточязя лнмфосаркот диагностирована у 29 детей. Антиген CD7 присутствовал в 90% случаев в среднем на 57% клеток, ан-ти-Т-кдеточная сыворотка реагировал- у 82% больных (в среднем с 41% клеток). Е-рецептор при Т-клеточной лимфосаркоме выявлен у 69% больных (содержание клеток 35%+/-8%). Часто выявлялись CDlla (45,5% случаев) и HLA-DR (40,7% случаев). Частота других маркеров, дававших положительную реакцию при Т-клеточной лимфосаркоме (антиген недифференцированных бластов, Thy-1, CDUb, антиген зрвдробда-стов), не превышала 10%. Отсутствовали на Т-лимфобластах молекулы CD15, CD10, Ig, гликофорина А, а также ИГЮ-3.

Нулевой ишуно подвариант лимфосаркомы у детей.

Этот иммунологический подвариант является, no-существу-, собирательной группой, в которую включены больные с неуточненной по т( или иным причинам иммунологической природой бластных клеток. С внедрением современных методов иммунодиагностики, основанных на прим( нении специфических моноклональных антител и постоянном расширени

их набора, используемого для иммунодиагностики, доля "нулевого " иммунологического субварианта неуклонно сокращается.

Обращает внимание тот факт, что на бластных клетках "нулевого"

иммуноподварианта лимфосаркомы отсутствуют не только диагностичес-

о

кие иммунологические маркеры, но .. антигены, используемые в качестве дополнительных признаков для более подробной характеристики зло. ачественных лимфобластов. Средние уровни содержания антигенпо-ложительных клеток для большинства маркеров не превышают 5%. Положительная реакция отмечена лишь с антитела»® ИКО-11 (С011а), НАЕ--9, ИК0-20 (С038). Фракц'-т лимфобластов, выявляемых по экспрессии антигенов СБПа и НАЕ-9, у отдельных больных была доминирующей в злокачественном клоне. То есть, по экспрессии СБИа и антигена, выявляемого ЫА НАЕ-9, лимфобласты были практически мономорф"ы.

Ищу но1 у реологические сопоставления при лимфобластной лим-^саркоме проведены у 90 детей, ва. ианты по РАВ-классификашш: и - 22 ( 24.4%). 12 - 44(48,9%), ЬЗ - 20 (22.2%); у 4 больных (4,4%) установлен иммунобластный (1) вариант лимфосаркомы. Взаимосвязь между морфологической и иммунологической классификациями лимфосзркомы носила достоверный характер и заключалась в том, что варианты 13 и иммунобластный были представлены В-клеточными, а вариант Ь1 - клеточными иммуноподвариантами (Таблица 6). Таблица 6 . Им)-уноморфологические типы лимфосаркомы у детей.

Иммуноподвариант Морфологический вариант лимфосаркомы

лимфосаркош и 1-2 1.3 I

Обдгй 4л 2 0 0

18.2& 4.5 0 0

Т1 1 1 0 0

4.5 2,3 0 0

1 11 11 1 0

50.0 25,0 5 0

Т&зевсй 4 10 2 0

18.2 22,7 10 0

ттре-В 0 0 0 0

0 0 0 0

В . 3 18 И 4

13,6 40,9 55 100

1а 0 2 6 0

0 4,5 30 0

Примечание: различия достоверны Хи-"вадрат = 38,38; d. f. =15;р=0,023 * - количество больных;

& - частота (в процентах) в пределах указанного FAB-варианта I - иммунобластный вариант.

Ряд иммунологических маркеров также имели связь с морфологическим типами лимфосаркомы, оценка частоты выявления при различных морфологических типах показала зависимый характер распределения: HLA-DR р=0,043; ИК0-02 р=0,045; CD7 р=0,042; Т-клеточный антиген, выявляемый антисывороткой, р=0,02; мембранные Ig р=0,01. Эта связь проявлялась в большей частоте Т-клеточных маркеров при варианте L1, а В-клеточных - при L3 и иммунобластном. Уровни HLA-DR+ клеток были максимальными при вариантах ; ммунобластном и L3 (средние - 777. и 55%), что достоверно выше, чем при L1 (среднее - 23%), р=0,0009. Аналогичные данные получены для клеток, зкспрессируюших мембранные иммуноглобулины.

Клиническое значение выделения иммуноподвгриантов лимфосаркомы у детей заключается в том, что существует связь между прогнозом заболевания и маркерными характеристиками опухоли. "Установлена взаимозависимость между иммунологическим подвариантом и стадией, ча которой диагностирована лимфосаркома у ребенка (Таблица 7).

Таблица 7. Состав иммуноподвариантов при I-1V клинических стадиях лимфосаркомы у детей.

Иммунологический Клиническая стадия

подвариант JICA I II III IV

Нулевой 1*) 3 2 15

16,7**) 25,0 8,7 23,8

В-клеточный 2 7 10 19

33,3 58,3 43,5 30,2

"Общий" 1 1 0 3

16.7 8,3 0 4,8

1а 2 0 5 2

33,3 0 21,7 3,2

Т-клеточный 0 1 6 21

0 8,3 26,1 33,3

пред-Т 0 0 0 3

0 0 0 4,8

*) - количество больных; **) - частота в пределах стадии;

- 32 -

X =25,9; d. f. -15; p = 0.038.

Из 14 случаев лимфосаркомы I—11 стадий Т- и B-типов в 13 был В-прцвариант (1а - 2, "общий" -.2, В - 9) и лишь в 1 - Т-субтип. По нашим данн™ Т-клеточная лимфосаркома наиболее редко диагностируется на ранних стадиях: I стадия - 0%, II - 3,2%, III - 19,9%, IV - «'б,9%. В B-клеточной группе (подварианты 1а, "общий", В) частота I и II стадий составила 25%: I - 9,6%, II - 15,4%, III -28,8%, IV - 46,2%.

Учитыг я тот факт, чп группы Т- и B-клеточной лимфосаркомы у детей являются весьма разнородными по клиническим стадиям, оценку BI шваемости у больных, ее связи с иммуноподвариантом провели в группах с диссеминированными (III-IV) стадиями опухоли. Оценили выживаемость при В- и не-В-клеточном типах опухоли (Таблица 8). Т..5лица 8. Клинико-морфоцитохимические характеристики у детей, больных В-клеточной и не-В-клеточной лимфосаркомой.

Клинико-морфо- Иммуноподвариант лимфосаркомы, кол-во (%%)

цитохимические В-клеточный не-В-клеточный

показатели (п - 27) (п - 30)

Локализация:

Брюшная юлость 8 (29,6)* 2 (6,7)*

Средостение 4 (14.8) 15 (50)

Глоточное кольцо 4 (14,8) 6 (20)

Периферические ЛУ 5 (18,5) 7 (23,3)

Кости 3 (11.1) 2 (6,7)

Мягкие ткани 4 (18,4) 2 (6,7)

Печень 1 (3,7) 0 (0) ;

Почки 1 (3,7) 0 (0)

Пол: Мужской 19 (70,4) 23 (76,7)

женский 8 (29,6) 7 (23,3)

Стадия: 111 12 (44.4) 6 (20)

IV 15 (55,6) 24 (80)

FAß-вариант: LI 3 (11,1) 12 (40)

L2 12 (44,4) 13 (43,3)

L3 11 (40,7) 0 (0)

не уточнен 1 (3,7) 5 (16,7)

Частота ремиссий 13 (48,1) 20 (66,7)

*) Суша превышает 100%, так как у ряда больных было поражение

нескольких локализаций.

Медиана выживаемости у больных В-клеточной лимфосаркомой равнялась 6 мес. . а при не-В-клеточной лимфосаркоме - 26 мес., различия статистически значимы, р= 0,038. В В-клеточной группе отмечена меньшая частота полных ремиссий (48% и 67%), меньшая длительность безрецидивного течения, однако различия по этим признакам меаду группами не были достоверными. Следовательно, при диссеминирован-ных стадиях лимфосаркомы у детей худшие результаты в ле'^нии получены при В-клеточном иммунологическом подварианте.

ii б. лимфобластная лимфосаркома в стадии лейкемиза11ии у больных взрослого возраста.

Иммунологическое исследование бластных клеток при лейкемичеекой трансформации лимфосаркомы проведено у 50 больных взрослого возраста. Соотношение иммунологических подвариантов было следующим- пред-Т-клеточный - 3 (6%), Т-клеточный -20 ( 40%), нулевой - 11 (22%), "общий" - 2 (4%), В-клеточный - 14 (28%). Подварианты 1а и пре-В отсутствовали. Эти результаты согласуются с данными других авторов [А. Е Барышников, 1984; М. А. Френкель, 19901 о преобладании зрело-В-клет'очных иммуноподвариантов при лимфосаркоме с лейкемизацией в сравнении с О JUL Наиболее часто (32% - 41%) на бластных клетках ■ были зкспрессированы HLA-DR антигены, CDlla и CD38. Частота обнаружения других маркеров (ИКО-02, Thy-1, CD10, антиген, выявляемый МКА НАЕ-9, CDllb, CD15) колебалась от б% до 10%.

Т-клеточные ишуиоподварианты (пред-Т и Т) были преобладающими у взрослых больных лимфосаркомой в стадии лейкемизации (23 случая, 46%). Из них пред-Т-клеточный иммуноподвариант установлен лишь у 3 больных (6%) на основании коэкспрессии CD5+CD7 (2 наблюдения) или Т-клеточного антигена (реакция с аятиеьшгчоткэй)+CD2 (1 наблюдение) с "общим" (CD10) антигеном. В числе дополнительных маркеров в 1 случае отмечена коэкспрессии ИГО-3 и RFB-1 и в 1 - CDllc. На клетках отсутствовали антиген недифференцированных бластов, молекулы HLA-DR, CDlla, CDllb, гликофорин А. антиген, выявляемый МКА НАЕ-9, CD1, ИЖЫЗ, CD38, Thy-1, CD15. То есть пред-Т-клеточный подвариант лимфобластной лимфосаркомы в стадии лейкемизации не отличался по иммунологическому фенотипу от соответствующего варианта ОЛЛ, однако встречался с меньшей частотой.

Т-клеточный вариант изучен у 20 больных (40%). Диагностирован на основании экспрессии Т-клеточкых маркеров, выявляемых МКА к CD1, 3. 4, 5, 7, 8. антисывороткой или Е-розеткообразованием. НаиОолее часто (92%) выявлялся антиген CD7, далее следовали - реакция с антисывороткой (85%). экспрессия CD4 (75%), CD8 (71%), CD2 (66%),

CD3.CD1 (507.), CD5 (33%). Отсутствовала экспрессия В-клеточных маркеров (CD19, CD22, ИПОЗ), а также CD10 и мембранных иммуноглобулинов. в 1 из 2 случаев отмечена реакция с МКА ИШ-10. Во всех изученных случаях присутствовали антигены CD53, CD58, RFB-1. HLA-I. Реакция на дополнительные маркеры иыла гетерогенной: HLA-DR - 25%, ИК0-02 - 9%, Thy-1 - 15%, CDlla - 44%, CD38 - 30%. Нелимфоидные антигены обнаруживались крайне редко: CDllb, CD15 - 1 наблюдение, антиген, выявляемый МКА НАЕ-9, - 2. Стволовоклеточное происхождение Т-клеточного подварианта исключено по отсутствию реакции на антиген CD34 U- случая).

"Нулевой' тмунолодвариант был диагностирован у 11 больных л.;мфобластной лимфосаркомой в стадии лейкемизации (22%) преимущественно в более ранние сроки наблюдения до широкого внедрения анти-пан-Т-клеточных и анти-пан-В-клеточных МКА. Лишь у 1 больного были применены МКА к CD7 и к CJ5 и у 1 - к CD3 (МКА В-клеточной серии у этих больных не использовали); во всех остальных случаях определение Т- и В-клеток проводилось с использованием антисывороток или розеткообразования. Применение антиэритроид-ных МКА (6 случаев) не привело к уточнению природы клеток. При использовани МКА к миеломоноцитарным антигенам отмечена положительная реакция на CDllb у 1 из 5 больных. Отсутствовали антигены ИКО-02 ь Thy-1; CDlla обнаружен в 3 из 8 наблюдений.

"Ос мТ' тыуиоподвартнт с коэкспрессией молекул CD10 и HLA-DR имел место у 2 больных (4%). На мембране лимфобластов отсутствовали антигены Thy-1, CDllb, CD15, гликофорин A, CD2, CDS, CD58, Is, реакция с МКА ИКО-13, Т-клеточной еыворткой. В 1 случае отмечалась реакция с МКА НАЕ-9, экспрессия -лтиге-нов CDlla. CD38.

В-клеточный ишуиоподвариант лшфзсаркош явился вторым по частоте после Т-клеточного (14 наблюдений, 28%). Диагноз в 12 случаях установлен на основании моноклональных мембранных Ig, в 2 - по реакции с антителами ИПО-3 и ИП0-10. Отмечен высокий полиморфизм антигенного состава. Были экспрессированы практически все изученные антигены, в 10и% случаев - 1а и ИПО-Ю. Отмечена положительная реакция с МКА к CD19, CD23, CD76. Отсутствовали Т-клеточные маркеры (реакция с антисывороткой, CD1,2,3,4,5,7,8), эритроидные и миелоиднке маркеры, экспрессия антигена ИК0-02. Гетерогенно были представлены на клетках CD10, CD38, CDlla,Thy-1.

Проведение тшуно-юрфоцитохттескхх сопоставлений не выявило существования достоверных различий в частоте встречаемости иммуноподвариантов или экспрессии отдельных антигенов между ва-

риантами 12 и L3 лимфобластов, выявляемых в соответствии с критериями FAB-классификации.

ш. Острые недимфобластнье лейкозы

Классификация острых нелимфобластных лейкозов базируется на типичных морфологических и цитохимических признаках бластных клеток. Согласно рекомендациям FAu-группы выделяют варианты Ш - Ш острого нелимфобластного лейкоза. При вариантах Ю - МЗ субстратом опухоли являются клетки гранулоцитарной линии диффер^нцировки: Ш-малодифференцированные миелобласты, Ml - миелобласты без созревания, М2 - миелобласты с созреванием, К!3 - лейкозные промиелоцита Вариант Ы4 соответствует острому миеломонобластному лейкозу. М5 - острый монобластный лейкоз. Мб - -ритробластный вариант лейкоза. • Ш -острый мегакариобластный лейкоз.

Иммунологическое исследование ОНЛЛ проведено у 225 Сольных. Под наблюдением было 102 ребенка и 123 пациента взрослого возраста. Варианты по FAB-классификации у детей распределитесь следующим образом: Ю - 7 больных (6.9%), Ml - 18 (17,77.), М2 - 39 (38,27.), МЗ -9 (8,87.), М4 - 19 (18,6%), W5 - 8 (7,87.), ИЗ - 2 (2.0Z). У больных взрослого возраста: Ш - 7 (5,7Т.), «1 - 16 (13,0%),M2 - 35 ( 28,52), МЗ - 18 (14,5%), М4 - 21 (17,7%), М5 - 20 (16,2%), Мб - 5 (4.1%),' Ш - 1 (0,8%).

Иммунологическая маркерная характеристика острого нелимфобластного лейкоза представлена в таблице 9. С наибольшей частотой на лейкозных клетках обнаружены линией не ограниченные антигены HLA-D1 (МКА ИКО-1) - 54.7%, UD53-антиген (МКА ИК0-15) -73,1%, а также антиген RFB-1 (МКА ИКО-40) - 46,2%. Вторыми по частоте обнаружения на клетках ОНЛЛ были миедомоноцитарные антигены. Использование комплекса МКА к CDllb и CD15, проверенное у 166 больных, позволило подтвердить миелоидную природу лейкоза в 74 случаях (44,6%). Индивидуальные маркеры CDU о и CD15 были обнаружены в одной трети случаев ОНЛЛ. С такой же частотой выявлялись линией не ограничении антигены CDlla и CD38 (35%). Маркер гликофорин А соответствовал по частоте выявления варианту Ш в анализируемой группе больных ОНЛЛ (4,5% и 3,8%). Антиген эритробластов (МКА НАЕ-9) обнаруживался на клетках значительно чаще (11,4%). Экспрессия маркеров Т- и В-лимфоцитов отмечена у 15% больных ОНЛЛ. Достаточно редкими были случг CD10-положительного ОНЛЛ (7%), а также лейкозы с выраженной фракцией клеток с мембранным Thy-1 антигеном (4,2%).

Гетерогенность иммунологического фенотипа ОНЛЛ создает болыш сложности в разработке иммуноклассификации этого заболевания на основе обнаружения мембранных и цитоплазматических дифференцирово1

Таблица 9. Иммунологическая характеристика острого нелчмфобластного

лейкоза.

И^-мунолологический Число Число Частота Число анти-

маркер больных обследо- экспрес- генполоки-

с положи- ванных сии анти- тельных

тельной гена, X клеток, 7.

реакцией

HLA-DR V."1 214 54,7 30.5+/-1.7

CD10-антиген 15 213 7.0 7.3+/-1.2

МШ-02 21 150 14,0 1.7+/-0.5

Thy-1-антиген 8 191 4.2 3,2' '-0.6

CDlla-антшен 59 166 35,5 16,0+/-1,8

2D38-антиген 27 79 34,2 22.2+/-3.0

RFB-1-антиген 18 39 46.2 23.4+/-4.4

С053-антиген 38 52 73.1 39.2+/-4.3

Т-клеточные антигены 32 210 15.2

CD1 8 34 23,5 10,9+/-3,8

CD2 ' 4 75 5.3 7,8+/-1,6

CD3 4 26 15,4 8.0+/-2.0

CD4 3 16 18,8 12.5+/-7.1

CD5 5 79 6.3 11,2+/-2,4

CD7 15 103 14,6 12.1+/-1.7

CD8 1 20 5,0 8.8+/-4.3

Т-АС 9 68 13,2 12.0+/-2.2

Б-клеточные антигены

CD19 1 44 2,3 7,9+/-2,4

CD22 3 38 7,9 6.9+/-1.6

ИПО-3 4 47 8,5 7.6+/-3,1

ИП0-10 9 31 29,0 23,7+/-5,2

Шелоидные антигены 74 166 44,6

CDllb 51 159 32,1 25,1+/-1,9

CD15 53 158 33.5 23.2+/-1.8

Эритроидные антигены 18 167 10,8

Гликофорин А 7 153 4,6 2.2+/-0.6

АГ-ЭВ (НАЕ-9) 16 162 9,9 7.5+/-1.2

Сокращения: Т-АС - реакция с анти-Т-клеточной сывороткой;

АГ-ЭБ - антиген эритробластов. ных антигенов опухолевых клеток. Для выявления взаимозависимости

между важнейшими иммунологическими маркерами, характеризующими ОНЛЛ, нами проведен корреляционный анализ уровней содержаниг субпопуляций клеток, выявляемых моноклональными антителами. Положительная корреляционная связь отмечена для линией не ограниченных антигенов (HLA-DR, CD38, CDlla, RFB-1), миелоыоноцитарных антигенов (CDllb и CD15), эритроидных антигенов (гликофорин А и антиген эрит-робластов), Т-клеточных маркеров (CD7, CD5, CD2), В-клеточных антигенов (CD19 и CD22).

Острые грануаонитарные лейкозы

Острый мало дифференцированный лейкоз диагностирован у 15 больных (7 детей, 8 взрослых). При варианте Ш практически во всех случаях на бластных клетках у бо-ъных детско1'о возраста отмечена козкспрессия лимфоидных и миелоидных или эритроидных антигенов. Из числа миелоидных маркеров в этой группе наиболее частым бы антиген CD15. Экспрессия гликофорика А обнаружена в 1 наблюдении на ' мембране бластных клеток периферической крови при отсутствии маркера на малодифференцированных миелобластах костномозгового пунк-тата.

Особенно большие сложности в установлении природы клеток мало-дифференцированного лейкоза отмечены у больных взрослого возраста. ' Ни в одном из 8 изученных случаев стандартный набор МКА к лимфоид-ным, миелоидным, эритроидным антигенам не был достаточным для установления природы лейкоза. Характерно, что на мембране бластных клеток у всех больных был экспрессирован Ia-.юдобный (HLA-DR) антиген. Параллельное изучение бластных клеток периферической крови и костномозгового пунктата, цитоплазматических маркеров, а также расширение панели используемых МКА включением в нее анти-С013 и акти-СОЗЗ позволило установить лимфои^ную (Т-клеточную) природу лейкоза, миелоидную, стволовоклеточную с миелоидной дифференциров-кой, зритроидную и смешанную эритроидно-миелоидную (по 1 наблюдению). В остальных случаях линейная принадлежность клеток не была установлена (на бластах обнаруживался только 1а-антиген). Случай острого мегакариобластного лейкоза также был морфоцитохимически труднодифференцируемым с вариантом МО и был подтвержден иммуноло-гически.

Следовательно, вариант Ю - это наиболее гетерогенная группа лейкозов, установить линейную принадлежность которых для применения адекватной химиотерапии возможно лишь с помощью современных иммунологических методов исследования бластных клеток.

Острый мяелобластний лейкоз без созревания (Ш) изучен у 34

больных: 18 детей и 16 взрос "ых. Иммунофенотипинески вариант М1 острого миелобластного лейкоза характеризуется высокими уровнями экспрессии миелоидных и линией не ограниченных антигенов. Вс18% случаев при этом варианте на властных клетках определяются Т-клеточные антигены (только (Х>7 или СБ7 в сочетании с другими маркерами Т-клеток). Антигены В-клеток и эритроидных клеток отсутствуй. С точки зрения иммунофенотипа клеток вариант Ш выглядит как более однородная в сравнении с МО группа лейкозов гранулоцитарного ряда, находящаяся на более поздней стадии созревания.

Имму алогическая характеристика острого миелобластного лей-юза с созреванием (М2) проведена у 74 больных: 39 детей, 35 взрослых.

Характепной чертой миелобластов с созреванием явилось обнаружение на мембране этих клеток пан-В-клеточного антигена, выяв;лемого МКА ИГО-10. Этот антиген присутствует на всех этапах дифференциров-.от В-клеток. представлен на некоторых клетках железистого эпителия и соответствует по характеру тканевого распределения обще-В-клеточному кластеру дифференцировки С072. Подробных работ по изучению маркера при миелоидных лейкозах не проводилось. В половине случаев ОМЛ с созреванием (7 больных) содержание в лейкозном клоне бластов, экслрессирующих антиген ИП0-10, превышало 20%. Средние уровни составили 37,3 +/- 9,2%. У всех больных этой группы отмечена сильная экспрессия на властных клетках НЬА-Э1?-антигенов. "Общий" антиген и Т-кле^очные антигены отсутствовали,экспрессия миелоидных маркеров была крайне слабой.

Т-клеточные маркеры обнаруживались на миелобластах с созреванием в 15,9% (11 наблюдений), "то практически совпадало с частотой при варианте Ы1. Наиболее типичными из числа Т-клеточнЫХ маркеров при 0Ш1 с созреванием являются С07, С01, СЮ2 и реакция с анти-Т-клеточной сывороткой. Остальные маркеры обнаруживаются в единичных наблюдениях. Каких-либо особенностей иммунофенотипа этой группы лейкозов мы не наблюдали.

С крайне низкой частотой при ОШ1 с созреванием обнаруживались эритроидные антигены (5,8%), из них - специфический зритроидный маркер гликофорин А выявлен на клетках только у одного больного; П1у-1-антиген - 4,7%; СОЮ-антиген - 4,3%. Экспрессия "общего" антигена была нетипичной для ОМЛ с созреванием и выявлялась вдвое реже, чем при варианте Ш. (9,6%'и 4,5%), вдвое более низкими были и уровни антигенположительных клеток при варианте М2 (8,8% и 4,3%). Экспрессия СОЮ отмечена при отсутствии пан-В-клеточных и пан-Т-клеточных антигенов, то есть признаков острого смешанно-линейного лейкоза в данном случае не было.

При М2-0Ш1 возрастают в сравнении с вариантом М1 частота и урс вни экспрессии миелоидных антигенов CDllb и CD15, что соотвыствуе! большей выраженности морфоцитохимических признаков гранулоцитарной дифференцировки. Линией не ограниченные антигены (HLA-DR, CD38, CDU CD53) оставались на том же уровне, что и при варианте Ml, а экспрессия RFB-1 повысилась с 9% до 30/.. Подгруппа лейкозов, имеющих Т-клеточные маркеры, существенно не изменилась. Пропорция С07-поло котельных лейкозов сократилась с 38,5% до 9,4%. Вдвое снизилась частота CD10-положительных случаев. Все это, вместе взятое, свидетельствует о большей стабильности миелоидного фенотипа при ОМЛ с созреванием. Кроме того, особенностью данной группы лейкозов явилас экспрессия В-клеточного антигена '1ПО-Ю.

Иммунологическая характеристика острого промиежтитарного лейкоза (ЫЗ) проведена у 27 больных: 9 детей и 18 взрослых.

Отмечено иммунофенотипическое упрощение мембранных маркеров злокачественных промиелоцитов в сравнении с миелобластами вариантов МО, Ml, М2. Возрасло число антигенов отсутствующих или определяющихся с крайне низкой частотой при остром промиелоцитарном лейкозе. Только по одному наблюдению положительной реакции у больных отмечено для МКА кластеров CD10, CDlla. CD1, CD5, CD7, CD22, а также для МКА к гликофорину А, антигену эритробластов, МКА ИКО-02 и анти-Т-клеточной сыворотки. Полностью отсутствовали на бластны:: клетках антигены Thy-1, CD38, CD2, CD3, CD4, CD8, CD19, ИПО-З, ИПО-10. Многие из этих антигенов были в числе доминирующих признаков при вариантах лейкоза Ш. (CDlla, CD38) и М2 (CDlla. CD38, ИГО-10). При промиелоцитарном варианте сохранялась высокая частота RFB-1+ и CD53+ лейкозов. Вместе с тем лейкозы с экспрессией RFB-1 отмечены вдвое реже, чем при варианте М2 (33% и 50%). Значительно более низкими были и уровни антигенположительных-клеток (13% и 30%). Резко уменьшилось число лейкозов с миелоидными антигенами на мембране клеток. Подтверждение миелоидной природы лейкоза с помощью МКА к CDllb и CD15 получено лишь у 26% больных (вариант М2 - 43%).

Особенно резкое уменьшение уровней экспрессии на властных клет ках отмечено для молекул HLA-DR при остром прокгаелоцитарном лейкозе Имело место более, чем двухкратное снижение частоты этих антигенов и уровней 1а+ клеток в лейкозном клоне.

Иммунологическая характеристика острых гранулоцитарных лейкозо указывает на существование связи со степенью дифференцировки миело-бластов, определяемой морфоцитохимическими методами. Для вариантов МО - Ы2 характерно прогредиентное возрастание уровней миелоидных антигенов. Сначала происходит снижение, а затем - стабили-

зация экспрессии линией не ограниченных антигенов, присущих ранним этапам дифференцировки миелобластов. Особенностью варианта МО является высокий уровень коэкспрессии лимфоидных антигенов, устанавливаемых с помощью МКА. Специфической чертой ОМ с созреванием является экспрессия антигена ИПО-хО. При варианте МЗ происходит качественное изменение иммунофенотипа бластных клеток: резкое сни,«ание уровней экспрессии HLA-DR и уменьшение доли лейкозов с миелоантигенами. Утрата экспрессии 1а-антигенов свидетельствует о большей степени миелоидной дифференцировки промиелоцитов в сравнении с леЛкоэными (.мело'' тастами. однако маркеры зрелых грануло-цитарных клеток отсутствуют.

Иммунологическая характеристика монобластного и миелоюнобла-стного вариантов острого лейкоза проведена у 68 больных: лёГкеми-ческие моносласты без созревания (М5а) и с созреванием (М5б) изучены

28 больных, лейкозные миеломоноиласты (М4) охарактеризованы у 40 больных.

Отмечена выраженная экспрессия на клетках HLA-DR антигенов (частота при М4 - 73,7%, при М5 - 63%). По этому показателю варианты лейкозов М4 и М5 были сходны с незрелыми гранулоцитарными лейкозами (МО и Hi) и резко отличались от острого промиелоцитарного лейкоза. В популяции лейкемических бластов содержалось около 40% 1а-положительных клеток (среднее для варианта М4 - 39,8%, для варианта 1.6 -37,2%). 3 сравнении с острыми гранулоцитарными лейкозами резко воз-расла экспрессия миеломоноцитарных антигенов при варианте М4 до 57,7%, при М5 - до 69,6%. Вариант М4 по этому признаку 'занимал промежуточное положение между гпанулоцитарныш! и монобластными лейкозами. С максимальной частотой из числа миелоантигjhob при миеломонобластном варианте лейкоза обнаруживался антиген CD15.

Качественным иммунологическим различием между миеломонобласт-ным и монобластным вариантами острого лейкоза явилась экспрессия антигена CD38. Этот антиген выявлялся при варианте М4 значительно чаще (47,1%), чем при вариантах острых гранулоцитарных лейкозов. Молекула CD38 не была обнаружена при остром монсбластном лейкозе. Различия в средних уровнях С^38-положительных клеток между вариантами М4 и КБ были статистически значимы (31,5% и 8,0%; р < 0,05). Отсутствие экспрессии антигена CD38, таким образом, характерно не ^ только для наиболее морфоцитохимически зрелых гранулоцитарных лейкозов (промиелоцитарный вариант), но и для острого монобластного лейкоза

Экспрессия специфического эритроидного маркера - гликофорина А при меломоиобластных и монобластных вариантах острого лейюэза

отсутствовала Антиген эритробластов (ША НАЕ-9) определялся чаще при варианте Ы5 (15%), чем при варианте М (3,4%).

Таким образом, для миеломокобластных и монобластных лейкозо! характерна экспрессия миелоидных антигенов CDllb и CD15, а также шлекул HLA-DR. По другим иммунологическим признакам эти варианть весьма полиморфны. Экспрессия air: :1гека CD38 наблюдается с высоко! частотой при варианте М4, но полностью отсутствует при остром ш! бластноы лейкозе.

Иммунологическая характеристика острого эритромиелоза (Мб) проведена у 7 больных.

Экспрессия HLA-DR антигенов не является типичной для морфол< гически распознаваемых клеток эритроидного рьда. Вместе с тем, Э' антиген был обнаружен при остром эритромиелозе с достаточно высо1 частотой - 57,1% (4 из 7 случаев). На бластных клетках отсу^ство] экспрессия молекул CD38 и антигена, выявляемого ША ИК0-02.

Специфической характеристикой острых зритробластных лейкозо: является высокий уроЕень экспрессии гликофорина А и антигена эри бластов. Во всех изученных случаях при проведении иммунофенотипи вания бластных клеток костного мозга с помощью МКА НАЕ-3 и НАЕ-9 была подтверждена эритроидная природа лейкоза.

Экспрессия Г-клеточных антигенов,при остром эритромиелозе установлена у 2 больных. В обоих случаях на мембране 30% бластов определялся антиген CD7.

Таким образом, специфической иммунологической характеристик острого эритробластного лейкоза является экспрессия на злокачест венных зритробластах зритроидных антигенов гликофорина А и. антиг эритробластов. С высокой частотой на клетках обнаружены антигены HLA-DR, кроме того, может наблюдаться экспрессия антигенов CD7 и CD15.

Острый мегакариобластный лейкоз (вариант №) является очен! редкой формой 0HJUL Под нашим наблюдением был один больной с вариантом М7. Ыорфоцитохимически в этом случае было сложно разграничить варианты Ю, Ш и М7. Подтверждение мегакариоцитарной npj роды клеток получено при изучении их иммунологического фенотипа: HLA-DRe CD38+ CD4- CD8- CD7e CD22- су-If- CDllb- CD15- CD33-CD10- CD34- CD71- CD41+. Таким образом данный пример иллюстрируе возможности иммунологической диагностики варианта Ы7, а также необходимость использования MRA к CD41 при вариантах М5 и W.

Оценка связи иммунофенотипа бластных клеток OHM с прогьоз( заболевания изучена наш у 69 детей и 50 больных взрослого возраста В качестве показателей эффективности терапии у больньс

использовали следующие: частоту достижения полных ремиссий, длительность безрецидивного течения и ооиую продолжительность заболевания от момента постановки диагноза.

У 69 детей, больных острым нелимфобластным лейкозом (варианты МО - М5 по FAB-классификации) 'изу*. :ли связь с частотой ПР и выживаемостью экспрессии иммунологических маркеров: HLA-DR, антиген недиффе-рень ;рованных бластов (МКА ИК0-02). Thy-1 антиген, альфа-цепи LFA-1 (CDUа, МКА ИК0-11), CR3bi-рецептора (CDUb), Х-гаптена (CD15), Т-клеточных антигенов, антигена CD10, антигена эритробластов. Полученные результаты указывают на то, что результаты лечения связаны с экспрессией миеломоноцитарных (CDllb, CD15) и Т-клеточных антигенов на бластах. У больных с выявлением на бластных клетках миелоидных антигенов частота ПР была низкой (31% - 33%), а при отсутствии на мембране клеток антигена CDllb - достигала 85,7%. Различия в частоте ремиссий высокодостоверш , р - 0,00057. В изучаемой группе больных экспрессия антигена CD15 наблюдалась только при наличии на клетках антигена CDllb. Следовательно, судить о значении экспрессии CD15 не представляется возможным. Данные убедительно доказывают неэффективность противолейкозной терапии у больных, на Эластнах клетках которых отмечена экспрессия CR3bi-peuenTopa. Медиана выживаемости у детей, больных ОНЛЛ, в CDllb- группе составила 19 мес. , а в CDllb+ группе - 4 мес. , р=0,01.

Противоположные данные получены при анализе связи экспрессии на бластных клетках ОНЛЛ маркеров Т-лимфоцитов с частотой достижения ремиссий у больных. При наличии Т-клеточных антигенов на бластах ^ротиволейкозная терапия была достаточно результативной (90,9% ПР, 10 из 11), что достоверно выше, чем в антигеннегативног> группе (45%, 13 из 51), р=0,015. Медиана выживаемости у больных, у которых обна-эужены Т-клеточные антигены на миелобластах, составила 26 мес. , а з антигеннегативной группе - 8 мес. , р = 0,002. То есть, наши наблюдения указывают на существование связи между иммунологическим ¡эенотипом бластных клеток у детей, больных ОНЛЛ, и эффективностью герапии индукции ремиссии.

Достоверные различия в , ;ительности безрецидивного периода толучены для 2 маркеров - антигенов CD10 и CDlla В обоих случаях экспрессия антигенов обуславливала большую продолжительность полной земиссии. Следовательно, обнаружение "общего" антигена на бластных слетках детей с ОНЛЛ имеет, как и при ОЛЛ, благоприятное значение, эднако численность этой группы больных при ОНЛЛ значительно меньшая. Чго касается антигена CDlla, то связь обнаружения этого антигена с большей длительностью безрецидивного периода у детей, боль-

- 43 -

ных ОНЛЛ, нуждается в дальнейшем изучении.

Следовательно, при наличии иммунологического подтвержден™ не-лимфоидной природы лейкоза с помощью МКА к CDllb прогноз заболевания неблагоприятен. Резко уменьшена частота полных ремиссий и продолжительность жизни больных. Напротив, при обнаружении признаков лимфоидности (Т-клеточные анти. эны, CD10) резко повышается эффективность терапии (частота полных ремиссий - 90,9%) и общая продолжительность заболевания.

Исходя из прогностической значимости экспрессии CDllb и Т-клеточных маркеров, можно рекомендовать выделять по меньшей мере 3 иммунологических подварианта ОНЛЛ у детей:

1). Т-клеточный ОНЛЛ (прогноз благоприятен).

2). ОНЛЛ с экспрессией миелоантигенов CDllb (прогноз неблагоприятен) .

3). Больные, у которых не отмечается экспрессии Т-клеточных или миелоидных антигенов (группа промежуточного прогноза).

Важно отметить, что в анализируемой группе больных экспрессия Т-клеточных и миелоидных антигенов (CDllb) была практически взаимоисключающей . Коэкспрессия CD7 и CDllb отмечена лишь в 1 случае, при котором была получена длительная клинико-гематологическая ремиссия.

Анализ связи между иммунологическими характеристиками властный клеток и выживаемостью проведен у 50 больных взрослого возраста. -Оценили влияние на прогноз экспрессии следующих иммунологических маркеров: HLA-Dr, ИКО-02, Thy-1, CDlla, миелоидных антигенов, зри-троидных антигенов, Т-клеточных антигенов и "общего" антигена.

Для большинства антигенов, несмотря на существование выраженных различий в медианах выживаемости между группами, эти различия не были статистически значимыми (р > 0,05). Благоприятной была экй прессия HLA-DR (р = 0,055). Гр"ппы существенно различались по 25% и 50%-ной выживаемости (27 мес и 10 мес; 10 мес и 1 мес).

Достоверные различия в продолжительности заболевания у больмй получены для групп, различающихся по экспрессии на мембране властных клеток антигена CDlla (р = 0,0272). По клинико-морфологическиМ признакам группа больных ОНЛЛ с ИКО-11+ иммунофэнотипом бластньй клеток не была более благоприятной. Лучшая выживаемость в ИКО груП пе 0Ш1 обусловлена большей чувствительностью клеток этих больных к проводимой полихимиотерапии, в связи с чем, они чаще выходят в ремиссии - первые и повторные, а также имеют большую продолжительность жизни в условиях проведения химиотерапии, не приводящей к ремиссии.

ВЫВОДЫ:

1. Субстратом ОЛЛ являются в абсолютном большинстве случаев Т и В-лимфобласты различных стадий дифференцировки, лишь в редких случая £ "нулевого" и 1а иммуноподвариантов подтвердить лимфоидную природу властных клеток с использованием всего комплекса МКА не представляется возможным.

2. В-клеточная линия дифференцировки при ОЛЛ включает про-В-клеточный лейкоз (большинство случаев подварианта 1а), пре-пре-В-клеточный лейкоз (практически все случаи "общего" иммулолодвариа-нта), пре-Е ОЛЛ (экспресс! -цепей 1к) и В-ОЛЛ (экспрессия моно-клональных мембранных 1в).

3. В ряду последовательных стадий дифференцировки лимфобластов ОЛЛ В-линии (от про-В до В) наблюдается характерная динамика изменения иммунофенотипа клеток. Про-В-ОЛЛ характеризуется мономорф-нс Л'ью экспрессии НЬА-ОР, С019, часю имеет стволовоглеточное происхождение, документируемое по экспрессии С034. Пре-пре-В-ОЛЛ и пре-В-ОЛЛ диагностируются по наиболее зрелой фракции лимфобластов при этих подвариантах, могут иметь про-В-клеточное (С019+С010-) или стьоловоклеточнсе происхождение (С034+). В-клеточный ОЛЛ является редкой формой, представлен зрелыми В-лимфобластами, содержание которы.-: колеблется в широком диапазоне, но не достигает 100%. Характерной черий В-линейных ОЛЛ является обеднение маркерного фенотипа по мере возрастания уровня зрелости клеток практически

по всем изученным линией не ограниченным антигенам (СМ1а, ТЬу-1, С058, СЮ38, Я^В-П.

4. В ряду Т-кле,точного ОЛЛ подтверждено существование пред-Т-клеточного (С010+) и Т-клеточного острого лейкоза. Покаьано в опытах с двойной флуоресцентной меткой, что на этапе пред-Т-клеток ко-экспрессия СйЮ и СЕ)7 происходит на уровне одной и той же клетки: более зрелая фракция СБЗ+ лимфобластов является СБЮ-негативной.

Т-клетки в сравнении с пред-Т-клетками характеризуются более низкими уровнями экспрессии и частотой выявления большинства маркеров, свойственных ранним этапам Т-лимфошггопоеза.

5. Частота обнаружения лейкозов с миелоидным кммунофенотипом из группы ОЛЛ на основе экспрессии СОНЬ и С015 не превышает Юл. Лейкозы этой группы имеют ряд фенотипических особенностей, достоверно отличающих их от мкелоидноантигеннегативного ОЛЛ. Выделены 2 типа ОЛЛ с экспрессией миелоидных антигенов: острые смешанно-линейные лейкозы (экспрессия миелоидных антигенов при про-В и пре-пре-В-кле точных иммуноподвариантах) и латентные острые нелимфобластнке лейкозы, при которых лимфоидную природу клеток не удается подтвердить с использованием всего арсенала МКА к антигенам Т- и В-клеток.

6. аагпрэееия акциФичзекаго зрияреиднбге антигена - глоюфзрина

А отмечена при ОЛЛ в 4,4% (9 из 20?'. Типичным явилостьобнаружение маркера при "нулевом", про-В и пре-пре-В-ОЛЛ. Наряду со омешан-но-линейными лейкозами имели место критические зритробластные лейкозы без признаков лимфоидной дифференцировки.

7. Взаимосвязь иммунологической и морфо-цитохимической классификаций ОЛЛ заключается в том, v.го у детей частота пре-В-ОЛЛ возра стает последовательно в ряду вариантов L1-L1/L2-L2/L1-L2, а также в отсутствии экспрессии Thy-1 антигена при Ll-ОЛЛ. Дли других маркеров, включая ыиелоидно-моноцитарные и эритроидные,. связи с вариантом FAB-классификации не отмечено. Экспрессия иммунологически) маркеров при ОЛЛ у взрослых не зависела от варианта лейкоза (Ll.Li L3) по FAB-классификации.

8. Иммуноклассификация ОЛЛ, основанная на обнаружении экспрессии стадиеспецифических лимфоидных антигенов, имеет связь с прогнозом заболевания. Наибольшее прогностическое значение имеет экспрессия в детском возрасте антигена CD10 (большаз частота и продолжительность ремиссий, а также выживаемость). Достоверно более короткий безрецидивный период отмечен в группах детей, больных ОЛЛ, с экспрессией су- Ig и отсутствием на мембране лимфобластов молеку. HLA-DR. Неблагоприятная экспрессия бл^стами иммуноглобулинов (пре-и В-подварианты) отмечена и во взрослом возрасте. Обнаружение Т-клеточных, миелоидномоноцитарных и эритроидных антигенов не гчияе: на прогноз у больных ОЛЛ.

9. При иммунологическом изучении лимфобластной лимфосаркомы в стадии лейкемизации у оольных взрослого возраста установлено прео< лапание Т-клеточных иммуноподвариантов (46%), В-клеточные типы встречались- реже (28%); при лимфосаркоме у детей, напротив, чаше отмечен В-клеточный подвариант - 49,if"",, Т-клеточный - 30,5%. Частота "нулевого" подварианта была одинаковой у детей и у взрослых,

10. Иммуноклассификация лимфосаркомы у детей, а также экспресси; отдельных антигенов имеют связь с морфоцитохимическо классификацией, что проявляется в большей частоте В-клеточных по, вариантов при типах L3 и иммунобластном, преобладании Т-клеточно лимфосаркомы при варианте L1. У взрослых больных лимфобластно лимфосаркомой в стадии лейкемизации не отмечено иммунологических различий между вариантами L2 и L3.

11. В пределах лимфосаркомы детского гозраста, диагностированн на ранних стадиях (I и II), с установленной Т- или В-клеточно природой более 90% случаев составляет В-тип, доля Т-клеточного по варианта составляет 7%.

12. В группе лимфосаркомы III-IV стадий у детей неблагоприятным

прогнозом отличается В-клеточный п-двариант. при котсг )>: пгбдадзгт-ся более ксрткая выживаемость в сравнении с не-З-клеточными иодиа-риактамя лимфобластной лимфосаркомы у детей (Не б шс. и 26 :юс. , р о 0.038).

13. Наиболт'Яие слолгасти с точки зрения установления хтаойпой принадлежности властных элементов представляет мглоди^рэреппнро-ванный вариант острого нелимФобластного лейкоза (вариант Ш). Ин-мунологлчески этот вариант крайне разнороден и включает типичнее формы лимфоидннх лейкозов (пре-пре-В-клеточнке и Т-клеточш:е), острие ¿-анно-линейные лейкозы, зритромиелозы. незрел« фор;"-' острых гранулоцитарных лейкозов, а такте стводовоклеточкыз лейкозы I, миелоидной направленность» дифференцировки. Установить природу клеток этого варианта возможно только иммунологическиш методами.

14. Динамика 1ммуиологических изменений в группе остр:.?:: грануло-иитарных лейкозов по мере возрастания уровня морфощггохцмпч 'С^й дифФеренцировки клеток заключается в следующем, фи рариантов Ю-Ш характерно прогредиентное возрастание уровней м'телоидных антигенов. Вначале происходит снижение, а затем - стабилизация экспрессии линией не ограниченных антигенов, присущих ракш;:.; этапам дифференцирован миелобластов. Специфической чертой ОМЛ с созреванием является экспрессия В-клеточного антигена ИГО-10.-

15. Острый промиелоцигарный лейкоз (вариант МЗ) характеризуется качестве лным изменением иммунофэнотипа властных ¡меток, заклпчг»-иимея в резком снижении экспрессии молекул НЬА-ОН и миелспдньп: антигенов СЭИЬ и С015. Утрата экспрессии 1а-антигенов свидетельствует о большей степени миелоидной дифферонцировки промнелоциюв, однако маркеры зрел}« гранулоцитарных клеток отсутствуют.

16. Для миеломонобластных и монсбластных острых лейкозов характерна экспрессия миеломоноцитарных антигенов СОНЬ и С015, а также молекулы НЬА-О!?. Иммунологическим различием медду этими вариантами является экспрессия молекулы С038, наблодаюязяся только при варианте М. По другим иммунологическим признакам эти варианты весьма полиморфны.

17. Использование антиэритроидных (НАЕ-3 и НАЕ-9) и антимэгака-риоцитарных (У1Р-Ь1) антител имеет важное значение в диагностике соответствующих вариантов острого нелимфобластного лейкоза, особен-' нов случаях отсутствия надежных морфоштохимических критериев для установления природы клеток. Эти варианты практически не имеют дополнительных иммунологических маркеров на мембране властных гаегс.с, возможна коэкспрессия НЬА-ОЯ и С07.

18. Предложена иммунологическая субклассификагщ остроге ноли»фоб-

ластного лейкоза, основанная на прогностической роли экспрессии антигенов бластных клеток. В детском возрасте целесообразно идентифицировать Т-клеточный подвариант (благоприятный прогноз), миелоид-ный (CDllb+) подвариант (неблагоприятный прогноз) и группу промежуточного прогноза без экспрессии этих антигенов. У больных ОНЯЛ взрослого возраста группа более благоприятного прогноза идентифицируется на основе экспрессии CDlla и HLA-DR.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ:

1. Иммунологическая характеристика лейкогного (лимфосарко-матозного) клеточного субстрата должна Сыть максимально подробной и устанавливать наименее дифференцированный клеточный тип в злокачественном клоне (возможную мишень опухолевой трансформации), а также терминальный этап дифференцировки, на котором остановлено дальнейшее согревание лимфобластов. Доминирующим в лейкозноы клоне' может быть один из этих клеточных типов либо бластные формы, находящиеся на промежуточной стадии дифференцировки. Для этих целей необходимо использовать комплекс ЫКА к антигенам CD10, CD19, CD22, CD34.CD7, CD5, CD3, HLA-DR, гликофорину А, антигену эритробластов, миелоидномоноцитарным антигенам CDllb и CD15 с обязательной идеи* тификацией мембранных и цитоплазматических иммуноглобулинов, а также комплекса линией не ограниченных антигенов (CDlla, Thy-1, CD38, CD58, RFB-1, ИКО-02).

2. Как показали наши исследования 1.\я идентификации этих антигенов при проведении иммунофенотипирования властных клеток острого лейкоза и лимфосаркомы могут быть применены отечественные МКА: •

- Серия ИКО (получена в лаборатории клинической иммунологии ОНИ РАМН) к антигенам HLA-DR. недифференцированных блас-тов, Thy-1. CDlla, CDllb, CD15, CD4, CD5, CD7, CD8, CD38;

- Серия ЛГ (получена в институте Иммунологии) к антигенам Т-клеток (ЛГ1, ЛГ7);

- Серия ИГО (получена в Институте проблем Онкологии Украины] к антигенам В-клеток (ИПОЗ, ИГО-10);

- Серия НАЕ (получена в лаборатории иммунохимии НИИ Канцерогенеза ОНЦ РАМН) к эритроидным антигенам (НАЕ-З.НАЕ-9).

СПИСОК РАБОТ. ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ.

1. Иммунологические подварианты "нулевого" острого лимфобласт-ого лейкоза в детском возрасте. - Чат. 1 Белорусской иммунологиче-кой конференции. Витебск, 1982, с. 157 (соавт. А. КЗ, Барышников,

С. 1етерсон, С. А. Маякова и др.).

2. Возможности ранней диагностики лейкозов по иммунологическим эркерам. - Мат. конф. "Теоретические и практические вопросы етеринарич".' Тарту. 1983, т. 3. с. 8-10 (соавт. А. Ю. Барышников,

Г. Кадагидзе, Л. А. Махонова и др.).

3. Иммунологическая неоднородность острого лимфобластного лей-аза у детей, выявляемая ксеногенными антисыворотками. - Терап. .рхив, 1983 N11, с. 81-86 (соавт. - А. К1 Барышников. Л.Ф. Нэро-ова, К Г. Тумян и др.).

4. Особенности острой фазы (властного криза) хронического иелолейкоза у детей. - Шт. конф." Актуальные вопросы диагностики [ лечения злокачественных новообразований кроветворной и лимфати-:еской тканей у детей". Цэсква, 1983, с. С4 - 65 (соавт. - Т.е. [роздова, Ю. К Шишкин).

5. Клинико-цитологическая и иммунологическая характеристика тифоидного бл?стного криза хронического миелолейкоза и острого [имфобластного лейкоза с РИ-хромосомой у детей. - конф. Новые достижения в диагностике и лечении нелимфоцитарных лейко-юв". Рига, 1983, с. 47 - 49 (соавт. С. А. Маякова, И. С. Петерсон).

6. Ксеногенные антисыворотки и моноклональные антитела в диаг-гастике. лейкоза и лимфосаркомы человека. - Тез. докл. всесоюзной юнференции "Иммунология и иммунотерапия лейкозов человека и ¡каютных". Ташкент, 1984, с. 83 - 84 (соавт. А. Ю. Барышников, Н. Г. ¡лохина, 3. Г. Кадагидзе и др.).

7. Клиническая характеристика иммунологических подвариачтов ютрого лимфобластного лейкоза в детском возрасте. - Тез. докл. Зсесоюзной конференции "Иммунология и иммунотерапия лейкозов юловека и животных". Ташкен , 1984, с. 83 - 84 (соавт. С. А. (аякова, А. ю. Барышников и др.).

8. Обнаружение двух стадий дифференцировки лейкозных кхеток 1ри В-клеточном хроническом миелолейкоэе. - Тез. докл. Всесоюз-гой конференции "Роль иммунной системы в патогенезе лимфопроли-?еративных заболеваний". Новосибирск, 1984. с. 10 - 12 (соавт.

¡¡. а Кузнецова, Е Т. Морозова, А. К1 Барышников).

9. Диагностика и дифференциальная диагностика гемобластозов у 1етей с помощью иммунологических маркеров . - Тезю Докл. Всесоюз-юй конференции "Роль иммунной системы в патогенезе лимфопроли-

фэратявных заболеваний". Новосибирск, 1984, с. 10 - 12 (соавт. Л. А. Иахонова, А. Я Барышников, С. А. Маякова и др.).

10. 1!ммунологичоский фенотип властных клеток у больных хроническим ммелолейкозом и его клиническое значение. - Терапевт, архив, 1984, Мб, с. 50 - 52 (соавт. А. Ю. Барышников, Л. Ф. Морозова, II В. «риновская и др.).

11. Шноклональные антитела ИКСЫ против константной части 1а-подобных антигенов. - Эксперим. онкология, 1984, ''4, с. 44 -46 (соавт. А. Ю. Барышников, Е Г. Блохина, 3. Г. Кадагидзе и др.).

12. Случай острого лейкоза с лиыфо- и миелобластной характеристикой бластных клеток. - Гематология и грансфузиология, 1984, N8, с. 49 - 54 (соаьт. А. К1 Барышников, Л. А. 1£ахонова, И. С. Петерсон.

и др. ).

13. Цэноклональкые антитела ИК0-ГМ1 и их использование * диагностике острых иелимфоидных лейкозов. - Совр. проблемы клин. -гекатол. и трансфуз. Мат. сессии НИИ гематологии Груз. ССР, Тбилиси, 1985, с. 179 - 181 (соавт. № А. Крыланов, А. Е Барышников,

И А. Френкель и др.).

14. Блокада ЕК-клеточной активности даноклональныш антителами ИКО-11. - Эксперим. онкология, 1985,т. 7, КЗ, с. 34 - 36 (соавт.

А. Ю. Барышников, Л П. Трубченкнова, Е. В. Савельева и др.).

15. Т-клеточные гемобластозы у детей. - Совр. проблемы клин, гематол. и трансфузиол. Мат. сессии НИИ гематологии Груз. ССР. Тбилиси, 1985, с. 253 - 254 (соавт. С. А. ¡.дякова, Е.С.Ермаков,

К С. Петерсон и др.).

16. Редкие фэрш острых лейкозов. - Совр. проблемы клин, гематол. ■ и трансфузиол. Кат. сессии НИИ гематологии Груз. ССР, Тбилиси, 1985, с. 257 - 258 (соавт. М. А. «ренкель, Е.А.Соловьева, А. А. Перилов и др.).

17. Иммунологический фенстип бластных клеток в диагностике острых (¿иелоидных лейкозов. - Терап. архив, 1985, N5, с. 98 -1СЮ (соавт. А. Ю. Барышников, Ы. А. Волкова, Ы. А. Френкель и др.).

18. Получение и характеристика моноклональных антител ИКО-ГМ1. Билл. зкспер. биол. мэд. 1985, N6, с. 721 - 723 (соавт. 11 А. Крыланов, А. ¡0. Барышников, Е Г. Блохина и др.).

19. Панель моноклональных антител и антисывороток для диагностики гемобластозов человека. - Докл. АН СССР, 1985, т. 282, N3, с. 753 - 759 (соазт. А. Ю. Барышников, НА. Крьианов, ЕГ. Блохина и др.).

20. Иммунологические маркеры лейкемичэских клеток при В-кле-точном хроническом лимфолейкозе. Выявление двух стадий

дифференцировки. - Тез. докл. III Всесоюзного съезда врачей-лаборантов. Таллинн, 1985, с. 59 - 61 (соавт. Е. R Кузнецова, A. JQ. Барышников).

£1. Подходы к иммунологической классификации острого лигфо-бластного лейкоза с помощью ксено;еннмх антисывороток и моноклона-льных антител. - Тезисы докладов 11 Всесоюзного съезда гематологов и т^ансфузиологов. Москва-Львов, 1985, с. 318 - 319 (ссзвт. А. П, Барышников, Л. А. Махонова, С. А. Маякова и др.).

22. Иммунологические маркеры лимфобластов в дифференциальной

. диагност э лейкозов и лимфосаркомы. - Тез. докл. II Всесоюзного съезда гематологов и трансфузиологов. Москва-Львов, 1985, с.255 'соавт. Е. С. Ермаков, И. С. Петерсон).

23. Анализ на ЭВМ структуры связей дифференцировочных иммуюло-гических маркеров на клетках крови и костного мозга больных острым тамфобластным лейкозом. - Тезисы докладов IV симпозиума по применению математических методов и ЭВМ в медико-биологических исследованиях. Москва-Гагры, 1985, с. 146 - 148 (соавт. 3. А. Кузнецов, А. Ю. Барышников, С. А. Майкова).

24. Моноклональные антитела ИКО-ГМ1 в диагностике острых нелим-фоблас^ных лейкозов. - Вопросы онкологии, 1985, т. 31, Н7, с. 79 -83 (соавт. М. А. Крыжанов, Е. В. Савельева, Ю. В. Шишкин и др.).

25. Дифференциально-диагностические критерии раннего выявления лимфосаркомы у детей. - Педиатрия, 1985, N7, с. 33 - 36 (соавт. И. С. Петерсон, Л. А. Махонова, Е. С. Ермаков и др.).

26. Иммунодиагностика Т-клеточных гемобластозов у детей. -Советская медицина, 1985, N11, с. 33 - 37 (соавт. А. Ю. Барышников, Л. А. Махонова, С. А. Маякова и др.).

27. Иммунодиагностика гемобластозов человека. - Методические рекомендации. Москва, 1985, 17 стр. (соавт. - 3. Г. Кадагидзе,

А. Ю. Барышников, 0. В. Короткова и др.).

28. Диагностические возможности моноклональных антител ИКО-ГМ1

и ИНО-Г2. - Мат. научной конференции "Профилактика, ранняя диагностика и лечение злокачественных заболеваний". Рига, 1985, часть 1, с. 144 - 145 (соавт. М. А. Кр^канов, А. Ю. Барышников, М. А. Френкель и др.).

29. Коллекция моноклональных антител ИКО, распознающих дифферен- ■ цировочные антигены мембраны иммунокомпетентных клеток человека. -Тез. докл. V Всесоюзного биохимического съезда. Москва. Наука, 1936, т.З, с. 3-4 (соавт. А. Ю. Барышников, 3. Г. Кадагидзе, R Г. Блохина и др.).

30. Иорфофункциональные особенности бластных клеток при остром

миеломонобластном лейкозе. - Экспериментальная онкология, 1986, т. 8, N1. с. 22 - 24 (соавт. Ы. А. Френкель, Л. А. Харламова, Е. А. Соловьева) .

31. Реакция моноклональных антител ИКО-И с лимфоидными клетками периферической крови при миелодиспластическом синдроме. - Гематология и трансфузиология, 1986, ; 5. с. 6-9 (соавт. Т. И. Иванова,

А. К1 Барышников, Л. И.Дербенева и др.).

32. Моноклональные антитела против антигенов, э репрессированных нз различных типах клеток крови человека - Мат. совещания "Новые подходы к вопросам иммунологии рака". Кемерово, 1986, с. 30 - 32 (соавт. 3. Г. Кадагидзе, А. Ю. Барышников).

33. Иммунологический фенотип л^йкозных клеток детей, больных хроническим миелолейкозом. - Педиатрия, 1986, N8, с. 25 - 27 (соавт. Т.С.Дроздова, А. Ю. Барышников, Л. А. Махонова).

34. Морфологическая и цитохимическая характеристика лимфосарко-мы у детей при различных иммунологических подвэоиантах заболевали?

- Экспериментальная онкология, 1986, т. 8, N4, с. 45 - 49 (соавт. И. С. Петерсон, А. Ю. Барышников, Л. А. Махонова и др.).

35. Новые данные о природе гетерогенности иммунологического фенотипа лейкозных клеток при В-клеточном хроническом лимфолейкозе.

- Иммунология, 1986, N3, с. 63 - 66 (соавт. Е. К Кузнецова, А. Ю. Барышников, Т.Г.Николаева и др.).

36. Моноклональные антитела против миеломоноцитарных антигенов и их использование в диагностике гемобла^тозов. - Мат. IV съезда онкологов. Ленинград, ^986, с. 370 (соавт. А. К Соколов, М. А. Крыланов , А. Ю. Барышников).

37. Иммунологическая диагностика лимфосаркомы с использованием моноклональных антител. - Мат. IV съезда онкологов. Ленинград, 1986, с. 375 (соавт. Е. Н. Шолохова, Е А. Пробатова).

38. Моноклональные антитеи в диагностике лимфосаркомы человека

- Мат. Всесоюзного симпозиума "Первично-локализованные опухоли кроветворной ткани приматов и пути генерализации". Сухуми, 1986, с. 87 - 89 (соавт. А. Ю. Барышников, 3. Г. Кадагидзе, Е А. Пробатова и др.).

39. Иммунологический фенотип бластных клеток при Т-клеточных гемобластозах. - Мат. 2 Всероссийского съезда гематологов и транс фузиологов. Челябинск, 1986, с. 250 -251 (соавт. А. Ю. Барышников, 3. Г. Кадагидзе).

40. Иммуноморфологические подварианты лимфосаркомы у детей. -Гематология и трансфузиология, 1987, N2, с. 31 - 35 (соавт. И. С. Петерсон, А. Ю. Барышников).

- 5241. Диагностическая и прогностическая значимость иммунологических маркеров при гемобластозах у детей. - В кн. "Иммунологические аспекты лимфопролиферативных заболеваний". Ред. - В. П. Лозовой,

Г. 3. Кубинский. Новосибирск. Наука, 1987, с. 105 - 113 (соавт. о

А. 10. Барышников, Л. А. Махонова, С. А. Маякова и др.).

42. Сравнительная характеристика лимфоидного бластного криза хрс.;ического миелолейкоза и острого лимфобластного лейкоза с Ph-хромосомой у детей. - Гематология и трансфузиология, 1987, т. 32, N6, с. 13 - 17 (соавт. Л. А. Махонова, С. А. Маякова, Т. С. Дроздова

. и др.).

43. Клинико-иммуноцитологические критерии дифференциальной диагностики острого лимфобластного лейкоза и лимфосаркомы у детей. -Гематология и трансфузиология, 1987, N2, с. 14 - 19 (соавт. ТА. Махонова, У. С. Петерсон, А.К1 Барышников и др.).

44. Определение зритроидных вариантов лейкоза чесловека с помощью моноклональных антител. - Экспериментальная онкология, 1987, т. 9, N4, с. 30 -34 (соавт. Е. Б. Мечетнер, А. КХ Барышников, Э. Е Ро-зинова).

45. Моноклональные антитела к антигену миелоидных клеток. -Бюлл. ёксперим. биол. мед., 1987, N7, с. 75 - 77 (соавт. М. А. Кры-зканов, А. Ю. Барышников, А. В. Соколов и др.).

46. Морфофунгциональная характеристика бластов при остром лим-фобласт"ом лейкозе и лимфосаркоме. - Терап. архив, 1987, т. 59, N6, с. 31-34 (М. А. «Хренкель, Е. А.Соловьева).

47. Фенотип бластных клеток при остром лимфобластном лейкозе. - Экспериментальная онкология, 1987,т.9, N3, с. 33 - 36 (соавт. М. А. Френкель, А. Ю. Барышников, Л. А. Харламова).

48. Стандартизация моноклональных антител ИКО-l против мономорф-ных la-подобных (Dr) антигенов. - Экспериментальная онкология, 1987, т. 9, N6, с. 45 - 48 (соавт. А. Ю. Барышников. Е Г. Блохина.

3. Г. Кадагидзе и др.).

49. Кинетика пролиферации бластных клеток и обмен кобаламинов при иммунологических подвариантах острого лимфобластного лейкоза детей. - Гематология и трансфузиология, 1987, N6, с. 17 -21 (соавт. Е В. Мясищева, О. Д. Голенко, О. М. Павлова и др.).

50. Мэноклональные антитела против человеческого лимфоцитарного функционально-ассоциированного антигена - Иммунология, 1987,N6, с. 17 - 21 (соавт. А. Ю. Барышников, КЕДубинкин, Е. В. Савельева

и др.).

51. Особенности иммунологических субвариантов острого лимфобластного лейкоза у детей. - Гематология и трансфузиология, 1987,

т. 32. N2, с. 26 - 31 (соавт. А. » Барышников, Р. Е Ленская, К. Л. Кондратчик и др.).

52. Ыоноклональные антитела ИКО-15 к лиганду Е-рецептора. - Иммунология, 198?, N4, с. 75 - 78 (соавт. 3. Г. Кадагидзе, И. Е Дубин-кин, А. Ю. Барышников и др.).

53. Критерии дифференцировавлых подходов к терапии острых лимфо бластных лейкозов у взрослых. - Терап. архив, 1987, N6, с. 27-31 (соавт. А. А. Перилов, М. А. Волкова, М. А. Френкель и др.).

54. Диагностика ранних рецидивов множественной миеломы на основании идентификации моноклональных В-лимфоцитов-предшественников опухоли. Мат. конф. гематологов РСФСР "Принципы организации гематологической помощи". Ленинград, 1987, с. 171 - 172 (соавт. А. К. Голенков, А. Р. Златкина, А. Б. Грищенко и др.).

55. Морфоиммунологическое изучение бластных клеток при остром нелимфобластном лейкозе у детей. Мат. конф. гематологов РОХСР "Принципы организации гематологической помощи. Ленинград, 1987, с. 148 - 149 ( соавт. А. К. Протасова, Т.С.Дроздова).

56. Клиническое значение иммунодиагностики острых нелимфобласт-ных лейкозов у детей. - Мат. конф. "Диагностика злокачественных новообразований. Москва, 1988, с. 161 - 163 (соавт. Л. А. Махонова,

С. А-Ыаякова, Т.С.Дроздова и др.). ,

57. Ыоноклональные антитела против А-цепи человеческого л..мфо-цитарного функционально-ассоциированного антигена (и"А-1). Бюлл. экспер. биол. мед.. 1988, N1, с. 55 - 58 (соавт. А. Ю. Барышников, И.ЕДубинкин, Е.ЕСавельева и др.).

58. Эритроидные антигены при гемобластозах у детей. - Советская медицина, 1988, N7. с. 29 - 32 (соавт. Т.С.Дроздова, А. К. Протасова, А. Е Киселев и др.).

59. Ыоноклональные антитела ИКО-13 к дифференцировочному антигену гемопоетических клеток человека. - Бюлл. зксперим. биол. ме; 1988, N8, с. 207 - 209 (соавт. 0. Е Короткова, А. 1й Барышников, ИЛ Дубинкин и др.).

60. Оценка иммунологических закономерностей экспрессии 1а-по-добных (НЬА-Бг) и некоторых других антигенов при подвариантах острого лимфобластного лейкоза у детей. - Сб. научных трудов "Клиническая иммунология и иммуногенетика". Ред. Е И. Коненков. Новосибирск, 1988, с. 94 -102 (соавт. А. К. Артемьев, Ы.Л.Мириана-швили, А. КХ Барышников).

61. Моноклональные антитела в дифференциальной диагностике солидных опухолей и гемобластозов у детей.- Мат. II Всесоюзной конференции по детской онкологии "Злокачественные новообразованш

стного лейкоза - Зксперш^ ояколо: га. 1989, т. 11, N5, с. 52 - 53 (соавт. А. Я Бзркпшков, -0. Е Короткова, 3. Г. Кадагидзе и др.).

72. й.мунология CD4-негативных коязшх гематосаркоы. - Еостнкк дерматологии и венерологии. 1989,N1, с. 20 - 26 (соавт. Е. Е Шолохова, Е А. Пробатова, LI Я. Сигидина и др.).

73. Priprava hibrldntch secen.ajici monoclonall protilatky sa specifitami proti epitopum 11mfосуtarnich bunik. - Cs, flslol^gie, 1989, v. 38, p. 427 (coauthors - K. Koubek, A. Yu. Baryshnlkov).

74. Моноклональиые антитела в изучении кокных злокачественных лимфой. - Вестник дерматологии и венеролопт, 1989, N8, с. 9 -14 (соавт. И. Б. Трофимова, Е. Е Шолохова, 3. Г. Кадагидзе и др.).

75. Сравнительная оценка пролиферации бластных клеток и эффективности комбинированной х тяготе рапии у детей с различныш имцуно-логическими субвариантами острого лимфобластного и нелимфооластного лейкоза - Проблемы гематологии и трансфузиологии, 1989, N9, с.

24 - 28 (соавт. О. Д. Голенко, А. К. Протасова. С. А. Балакирев и др.).

76. Возможности применения ПАП-метода для фенотипированил клеток на мазках костного мозга и крови. - Лаб. дело, 1989, N5, с. 15 -19 (соавт. Л. Ф. Морозова, 1.1 А. Френкель, А. В.Соколов и др.).

77. Иммунодиагностика острого нелим'* областного лейкоза у детей.

- Гематология и трансфузиологии, 1989, N9, с. 17 - 20 (соавт. A. EGL Барышников, 3. Г. Кадагидзе, С. А. Наякова и др.).

78. Ph-позитивный острый лейкоз. - Гематология и трансфузиоло-гия, 1989, N1, с. 15 - 18 (соавт. Я А. Френкель, Н. А. Волкова, ЕА. Пирогова).

79. Возможности иммунодиагностики эритролейкозов. - Терап. архив, 1989, N4, с. 127 - 129 (соавт. И. А. Френкель. М. А. Волкова, A. Ml Барышников и др.).

80. Диффэренцировочныз антигены клеток крови человека и их прогностическое значение. - Гез. докл. Всесоюзного симпозиума "Совершенствование диагностики и программ лечения онкогематологи-ческих заболеваний у детей". Москва, 1990, с. 5 - 6 (соавт. А.Ю. Барышников).

81. Ликфобластная лимфосаркома беркиттоподобного типа (цито-иммунологическая характеристика). - Тез. докл. Всесоюзного симпозиума "Совершенствование диагностики и программ лечения онкогема-тологических заболеваний у детей". Москва, 1990, с. 92 - 94 (соавт. И. С. Петерсон).

82. Гистиоцитарные пролиферативные заболевания у детей. - Тез. докл. Всесоюзного симпозиума "Совершенствование диагностики и программ лечения онкогеиатологических заболеваний у детей". Москва,

у детей". Душанбе, 1988, с. 254 - 255 (соавт. X П. Кадров, Е. Н. Шолохова, Е Ы. Блинов и др.).

62. Stages of blast cell differentiation determined with the u?;e of monoclonal antibodies and prognosis of childhood acute leukemias and lymphosarcoma. - Abstracts of international symposium "New aspects in childhood leukemia". Weimar, 1989, p. 1 -2 (coauthors - A. Baryshnikov, Z. Kadagidze, L. Makhonova et al.)

63. Моноклональные антитела ИКО-10 к антигену Thy-1. - Экспериы. энкология, 1989, т.11. N2. с. 33 - 35 (соавт. О. Е Короткова,

Л. Ю. Барыш: яков и др.).

64. Панель моноклональных антител к антигену CD38. - Билл, жсперим. биол. мед., 1989, N1, с. 74 - 77 (соавт. А.Ю.Барышников, И. ЕДубинкин, О. Е Короткова и др.).

65. Subcl^sifloat ion of leukemia cells from patients with arious forms of T-lymphoprollferative disorders by monoclonal mtlbodies. - Medical and pediatric oncology , 1989, v. 17, N4, j.342 (coauthors - K. Koubek, J. Stary, 0. Hrodek et al.).

66. Two different antierytroid monoclonal antibodies in immuno-iiagnosis of human leukemias: a comparative study. International lournal of cancer, 1989, v. 44, pp. 589 - 592 (coauthors -

B. btecheti.er, A. Yu. Baryshnikov, T.S. Drozdova et al.).

67. Экспрессы антигенов, выявляемых моноклональными антителами :ерии И"0, на поверхности клеток, образующих гранулоцитарные и (акрофагальные колонии в полужидком агаре. - Эксперим. онкология, 989, т.11, N1, с. 46 - 48 (соавт. Е. Е Савельева. JL А. Харламова,

I. Ю. Барышников и др.).

68. Мэрфоиммунологическое изучение бластных клеток при остром елимфобластном лейкозе у детей. - Научно-темат. сборник "Органи-ация гематологической помощи". Изд-во Саратовского Университета, 989, с. 69 - 74 (соавт. А. К. Протасова. Т.С.Дроздова).

69. Моноклональные антитела против общелейкоцитарного антигена D45. Тез. общесоюзной кон^ции "Актуальные вопросы в биохимической

иммунологической диагностике злокачественных новообразований", осква, 1989, с. 35 - 36 (соавт. И. А. Карпов. А. Ю. Барышников. О. Е ороткова и др.).

70. Моноклональные антитела ИКО-63 к дифференцировочному нтигену гемопоетических клеток, пригодные для иммунофенотипирова-ия солидных опухолей человека - Эксперим. онкология, 1989, т.11, 4, с. 41 - 44 (соавт. А. Ю. Барышников, X П. Кадыров. 3. Г. Кадагидзе

др.).

71. Моноклональные антитела ИКО-35 к антигену острого лимфобла-

990,. сЛШ - Ш (coaer. Л. А. Махонова, И. С. Петерсон, ЕИ.Зем-ятава и да К

83. Мегакаряойгаэтша варааот властного криза хронического дадолейшэа. - Терт архив» 1990, N?, с.127 - 129 (соавт. М.А. Волкова, ii А.<5ренкель, СХЕ-Лгшзь.

84. Моноклональиые антитела ИКОН в опенке прогноза острю не-яикмэбластных лейкозов, - Гематология и трансфузиология. 1990, 49, с. 7 - 9 (соавт. U. А. Волкова, А. А. Перилов, А. к. Артемьев).

85. Острые смешанно-линейные лейкозы человека. - Гематология я трансфуг чология, 1990, N9, с. 18 -20.

86. Стадйеспешгфяческне «лркерн в оценке прогноза острого лей-'оза. - Тез. докл. Республиканской научной конф-ции "Механизмы кан-церо- и лейкемогенеза". Киев, 1990, с. 34 - 35 (соавт. Ы. А. Волкова)

87. К вопросу о патогенезе гибридных острых лейкозов. - Тез. ~окл. Республиканской научной конфетою "Мшшзмы канцеро- и лейке нюгенеза". Киев, 1Ш, с, 52 (соавт* 11 А. Френкель. М. А. Волкова).

88. Иммунопрогнозирование при гемобхаетоэах у детей. - Вопросы онкологии, 1990, т. 36,N6, с. 689 - 693 (соавт. - 3. Г. Кадагидзе,

ft. Я Барышников. Л. А. Оахонова и др).

89. К-20 ind IC0-10 monoclonal antibody (кр120/200; Thy-1): Irrmunophenotypjne of human soltd tuners, - British journal of cancer, 1990, v. 61, pp. 215 - 21? (coauthors Z. Kada?idze, Kh. Kady-rov, A. Baryshnlkov et al.),

90. Clinical significance of standard CD assessement in acute leukemia. - Neoplasm, 1990, v.37, N4, pp. 431 - 438 (coauthors - 0. Babusikova. A. Baryshnlkov, P. Ujhazy et al.).

91. Моноклональные антит&ла ИКО-12 против В-клеточного антигена CD22. - Иммунология, 1990, N3, с. 37 - 38 (соавт. A. Ю. Барышников, 3. Г. Кадагидзе).

92. Иммунологические фактори прогноза лимфосаркомы у детей. -Деп. ВНИИШ, 1990, Д-18781, Ос. (соавт. A. R Киселев, О. Е Морозова. Л. А. Махонова и др.).

93. Иммунологический фзноти! лейкозной клетки. Монография. Москва, Медицина, 1990, 240 с. (соавт. А. 1й Барышников, 3. Г. Кадагидзе, Д. А. Иахонова).

94. Клиническое течение и прогноз Т-клеточных лимфобластных опухолей у детей. - Гематология и трансфузиология, 1990, Ml,

с. 10 - 14 (соавт. Л. А. Махонова, С. А. Маякова, А. Ю. Барышников и дг )

95. Реакция моноклональных антител ИКСЫ0 с клетками различных опухолей человека. - Вестник ВОВД АМН СССР, 1991, N2, С.

(соавт. О. Бабушикова, А. Ю. Барышнике з, 3. Г. Кадагидзе).

96. Clinic-cytologocal parallels in acute myeloid leukem.a in children. - Ktedlcal and pediatric oncology, 1991, v. 19, N5, p. 410 (et S. A. Mayakova, A. K. Protasova, L. A. Makhonova). АВТОРСКИЕ СВИДЕТЕЛЬСТВА, ПОЛУЧЕННЫЕ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ.

1. Штамм гибридных культивируемых клеток мыши (Ais i.iusculus, используемый для получения моноклональкых антител к антигену тимс цитов человека. Авт.свид. N 1369283 от 22 сентября 1987 г. (соавт. 0. Е Короткова, А. Ю. Барышников, А. В. Соколов и др.).

2. Штамм гибридных культивируемых клеток животных Mus Musculus, используемый для получения моноклональных антител к Thy-1 антигену. Авт. свид. N 1413948 от 1 апреля 1988 г. (Соавт. A. JQ Барышников,

О. Е Короткова и др.).

3. Штамм гибридных культивируемых клеток животных Шз Musculus, импользуемый для получения моноклональных антител к антигену тимоцитов человека молекулярной мгпсы 40 килодальтон. /шт. свид.

N 1407061 от 1 марта 1988 г. (соавт. А. Ю. Барышников, О. В. Короткова, И. Е Дубинкин и др.).

4. üiraMM гибридных культивируемых клеток животных Mus Musculus, используемый для получения моиоклонагъных антител к лиганду Е-рецептора гемопоетических клеток человека. Авт.свид. N 1427828 от 1 июня 1988 г. (соавт. А. Ю. Барышников, 0. Е Короткова, Е. Е Савельева и др.).

5. UtraMM гибридных культивируемых клеток животных Mus Musculus

- продуцент моноклональных антител к антигену кортикальных тимоцитов человека. Авт. свид. N 1576561 от 8 марта 1990 г. (соавт. А. Ю. Барышников, О. Е Короткова).

6. Способ прогнозирования течения i строго 'лимфобластного лейкоза у детей. Авт.свид. N1625207 от 1 октября 1990 г. (соавт.

С. А. Маякова, Л. А. Махонова, А. К. Протасова и др.). РАЦИОНАЛИЗАТОРСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ, СДЕЛАННЫЕ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ.

1. Устройство для получения цитопрепаратов клеток. РП N866, принятое ВОНЦ АМН СССР, от 13.06.1986 г. (соавт.-А. Ю. Барышников).

2. Микрометод постановки непрямой реакции иммунофлуоресценции (поверхностной). РП N867, принятое БОНД АМН СССР, от 13.06.1986г. (соавт. - А. Ю. Барышников, Т. А. Рославцева).

3. Способ иммунодиагностики лейкоза на основе цигоплазматиче-ских маркеров клеток. РП N948, принятое ВОНЦ АМН СССР от 16.1.87г.

4. Способ диагностики ранних рецидивов множественной (.шеломы на основе идентификации В-лимфоцитов-предшественников опухоли методом иммунофлуоресценции. РП отраслевого значения N 0-3175, при-

нятое министерством здравоохранения РСФСР, от 29 апреля 1988 г. (соавт. - А. К. Голенков. А. Р. Златкина, А. Е Гриценко и др.).

5. Способ иммунодиагностики прогностически благоприятного под-варианта лимфосаркомы у детей по 1а-подобному антигену. РП N1132, принятое в БОНН АМН СССР 15 июня 1988 г. (соавт. Е. Н. Шолохова,

А. Е Киселев, Г. А. Гордина и др.

6. Способ иммунодиагностики прогностически неблагоприятного варианта лимфосаркомы у детей. РП N 1131, принятое в БОНД АМН СССР 15 июня 1988 г. (соавт. Е. Н. ПЬлохова. А. Е Киселев, Г. А. Гордина

и др.).

УЧАСТОК МНОЖИТЕЛЬНОЙ ТЕХНИКИ ВОКЦ АМН СССР ПОДП. ■ К ПЕЧАТИ ЗАКАЗ тиран 100 а<».