Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Механизмы патологических и приспособительных процессов при заболеваниях слюнных желез

РГ6 од

- 5 НЮН 1935

ДЕНИСОВ Аркадий Борисович

МЕХАНИЗМЫ ПАТОЛОГИЧЕСКИХ И ПРИСПОСОБИТЕЛЬНЫХ ПРОЦЕССОВ ПРИ ЗАБОЛЕВАНИЯХ СЛЮННЫХ ЖЕЛЕЗ

(Экспериментальное исследование)

14.00.16 — патологическая физиология

АВТОРЕФЕРАТ

ДИССЕРТАЦИИ НА СОИСКАНИЕ УЧЕНОЙ СТЕПЕНИ ДОКТОРА МЕДИЦИНСКИХ НАУК

На правах рукописи

Москва —

1995

Работа выполнена на кафедре патофизиологии с курсом имм; нологии стоматологического факультета Московского медицина« го стоматологического института.

Научный консультант — доктор медицинских наук, профессс

А. И. воложин

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор И. А. ВАЛЫДЕВА;

заслуженный деятель науки РФ, доктор медицинских нау профессор В. К. ЛЕОНТЬЕВ;

доктор медицинских паук, профессор Ю. С. СВЕРДЛОВ

Ведущая организация — Московская Медицинская Академ1 им. И. М. Сеченова.

Защита диссертации состоится « » 1995 roj

в часов на заседании диссертационного совета Д 053.22J

при Российском университете дружбы народов по адресу (1171S Москва, ул. Миклухо-Маклая, д. 8).

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиоте Российского университета дружбы народов (117198, Москва, \ Миклухо-Маклая, д. 6).

Автореферат разослан « » 1995 г.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук, профессор

Г. А. ДРОЗДО

Зак. 429

Подп. к псча.ти 12.05.95 г. Тираж 100 Псч. л

Типография ВИЛ

АКТУАЛЬНОСТЬ ИССЛЕДОВАНИЯ механизмов патологических процессов в слюнных железах (СЖ) вызвана несколькими причинами.Во-первых, существует практическая потребность в изучении этиологии и патогенеза ряда заболеваний СЖ, количество которых неуклонно увеличивается (В.В.Афанасьев,1993). Вместе с тем диагностика и особенности лечения этой патологии не претерпели существенного прогресса, что обусловлено почти полным отсутствием функциональных исследований. Практически, в патогенезе всех видов патологии СЖ, особенно редких, существуют неизученные звенья. Например, до сих пор неизвестна этиология синдрома Съегрена - тяжелейшего системного заболевания. Многообразие клинических проявлений при одном и том же заболевании приводит к значительным затруднениям в их диагностике. Есть потребность в разработке новых способов диагностики и лечения на основе подробного изучения заболеваний. А это в свою очередь требует наличие адекватных экспериментальных моделей заболеваний, на которых возможно изучение вышеизложенных вопросов. Потребность в изучении этиологии и патогенеза заболеваний СЖ, вызвала интерес у многих исследователей (В.В.Афанасьев, 1993:Э-Ф.А. Бичкене, 1989; Д.Ш.Дедвариани,1988: Т.А.Губерс-кая,1991; В.С.Колесов 1987: 0.В.Рыбалов,1987: Г.И.Ронь,1992; О.И.Сенчилов,1991: и другие). Экспериментальные исследования в этом направлении проводятся в основном с использованием моделей воспалительных заболеваний, в то время как невоспалительные болезни СЖ не менее часты.Поэтому актуальной проблемой патофизиологии является разработка моделей всех заболеваний СЖ,максимально адекватным заболеваниям человека в клинической практике.

Вторым аспектом этой проблемы является развитие синдромов, при которых нарушается участие СЖ в гомеопатических функциями организма.По'традиции идущей от академика И.П.Павлова с начала века, все исследования по физиологии и патологии СЖ связывают только с функционированием желудочно-кишечного тракта (ЖКТ). Вместе с тем, исследованиями многих авторов показано, что СЖ не только участвуют в пищеварении, но обладают и другими важными функциями. В частности защитно-трофической для тканей полости рта.Слюна также является основным источником буферных систем в полости рта и защищает твердые ткани зубов от деминерализации во время приема пищи.В случае приема ксенобиотиков /лекарств.пищевых добавок и др./ СЖ могут выполнять экскреторную функцию. При развитии патологии почек, СЖ начинают частично,выполнять выдели-

- г -

. тельную функцию. Поэтому представляются очень спорными рекомендации ряда клиницистов, в случаях безуспешного консервативного лечения сиаладенитов в СЖ, их удаление /Г.И .Ронь.1985; В.В.Неуст-роев, 1986; R.Schultz. J. Wood. 1983; M.Arrigu. E.Myers,1990/. Ряд хирургов предлагают в дополнении с экстирпацией патологически измененных СЖ проводить денервацию ушно-височного нерва /А.М.Солнцев и др.1987; Е.Benedek-Spok.T.Szekely,1985/. или облучить рентгеновскими лучами /В.С.Колесов.1987/. К такому же результату приводит перевязка протока СЖ /Л.Сазама, 1971: С.Г.Безруков.1991/ или введение в проток затвердевающего клея /R. Zaskawi' et а1.1988/.

В-третьих, есть необходимость в более детальном изучении фундаментальных механизмов адаптации СЖ к экстремальным воздействиям. т.к. существующие сведения о них противоречат общей концепции развития компенсаторных и адаптивных процессов в организме.Существует мнение, что в ответ на травму почти не развивается викарная гипертрофии (ВГ)СЖ /А.Г.Бабаева.1965; 1987/.

Все вышесказанное свидетельствуют о необходимости проведениг направленного исследования этих вопросов, что позволило бы расширить представление о патогенезе неопухолевых заболеваний СЖ. Разработка адекватных моделей патологии СЖ позволит проводить доклинический скрининг новых, патогенетически обоснованных, методо! лечения.

ЦЕЛИ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Основной целью исследования является изучение приспособитель' "ных (регенерация) и патологических (воспаление, дистрофия, khcti образование)процессов в СЖ в модельных экспериментах и доклини ческое испытлнне на этих моделях новых лекарственных средств.

Для достижения поставленных целей были сформулированы следу ющис задачи:

а) в теоретической области: разработать адекватные количест венные показан?пи (морфологические и функциональные) СЖ.разрабо тап- новые количественные модели для изучения факторов запуск Ii ГР и ВГ. изучить роль лимфоидной ткани в запуске ПТР и ВГ. изу чить роль отдельных звеньев вегетативной нервной системы (ВНС) в процессе ПТР и ВГ.

б) в экспериментальной области: оценить эффективность применяемых в практике методов на развитие ПТР и ВГ с использование млтемлтйчеч-кого моделирования, провести доклинические испытани нокмх фармПргплр,! гог. М-холиномикетика КГ-6.? и антиоксиданта ди-

буната натрия с использованием методов математического моделирования на разработанных моделях сиаладенита и сиалоза.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА И ПРАКТИЧЕСКАЯ ЦЕННОСТЬ.

На основе методов одно- и многомерного математического анализа данных, разработаны количественные биометрические показатели морфофункционального состояния больших СЖ. Это позволило впервые показать, что механизмы адаптации больших СЖ к травме /сиалото-мии/ являютя типовым патологическим процессом: развивается посттравматическая регенерация (ПТР) травмированной железы и одновременно возникает ВГ парной железы.

Разработаны новые модели патологии СЖ: - острого гнойного сиаладенита. - термосиалоза, - кистофиброза. - математическая модель ПТР и ВГ, и программа для ее обсчета на микрокалькуляторе МК-52, - модель для поиска гуморальных факторов запуска ПТР и ВГ.

Материалы работа используются при чтении лекций и проведении практических занятий на кафедре патофизиологии ММСИ.По материалам диссертации выпущено методическое пособие.

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ.

1.Для исследования патологии в СЖ разработаны новые, адекватные для каждого случая.экспериментальные модели.

2.Модель для изучения ПТР позволила выяснить,что парные СЖ способны к адаптации в случае повреждения одной из них:большая часть утраченной железистой ткани восстанавливается в поврежденном органе.Функция невосстановленных клеток компенсируется викарной гипертрофией.Тем самым показано,что СЖ по своей способности к ПТР не являются исключением из общей закономерности регенерации органов у млекопитающих.

3.В запуске ПРТ принимает участие регионарная лимфоидная ткань.Воздействия на нее ( ускорение'лимфооттока или замедление его) существенно изменяет течение ПТР.

4.Доказано.что широко используемые в теоретических исследованиях модели гипертрофии СМ . с помощью снижения резцового прикуса или введения адреномиметикоз не являются физиологической гипертрофией, а есть один их видов патологии СЖ - сиалоз.

5.Запуск ПТР СЖ является типовой адаптивной реакцией,поэтому попытки стимулировать ее путем какого либо воздействия .как правило, безуспешны.

6.Разработанные модели позволили изучить воздействие различных факторов на механизмы развития патологических процессов в СЖ и тем самым успешно решать задачи практической стоматологии.Так обнаружено, что перегревание твердых тканей зубов при их одонтоп-

реларировании вызывает термоси&поз.Иньекции М-холиноблокаторов с целью торможения•слюноотделения при свищах, способны вызвать образование кист в последних.На моделях сиаладенитов изучена противовоспалительная эффективность двух новых препаратов:КГ-62 и ди-буната натрия.

АПРОБАЦИЯ ДИССЕРТАЦИИ.

Результаты исследований доложены на секции морфологии Московского общества испытателей природы (МОИП)в 1982 и 1989 г.;на 7-ой Всесоюзной конференции по регенерации (1985);на IY Всесоюзной конференции по физиологии биохимии медиаторных процессов (1985);на научных конференциях по регенерации в BMA (Ленинград, 1986, 1990): на IY Всесоюзном съезде патофизиологов (Кишинев, 1989); на международной конференции "Раны и раневая инфекция" (Москва, 1993).

Диссертационная работа обсуждена на совместном заседании сотрудников кафедр нормальной физиологии.патофизиологии,патанато-мии,терапевтической стоматологии,хирургической стоматологии,нервных болезней.Московского медицинского стоматологического института (Москва,1994).

ПУБЛИКАЦИИ ПО МАТЕРИАЛАМ ДИССЕРТАЦИИ.

По материалам диссертации опубликовано 37 работ.

ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ.

Работа выполнена по плану НИР ММСИ и является фрагментом программы "Общая патофизиология систем и органов (03.01)" Научного Совета РАН и РАМН, No ГР 01930010693 по фундаментальным проблемам медицины. Диссертация изложена на 296 страницах.Состоит из введения, обзора литературы, трех глав собственных исследований, заключения, выводов,практических рекомендаций, списка литературы .который содержит 340 источников (187 отечественных,153 иностранных): иллюстрирована 21 таблицей и 51 рисунком.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ.

Материал и методы исследования.Работа проведена на нелинейны:: белых крысах и кроликах породы Шиншилла. Кролики были использованы для получения антисыворотки против тканей СЖ.В первом разделе исследований были использованы крысы разных возрастных групп, от новорожденных крысят до животных старческого возраста. Во всех остальных разделах исследования использовались крысы пубертатного (116-175Г.) и репродуктивного возраста (176-255Г.). За исключением отдельных серий опытов, все эксперименты были выполнены на самсах. так существует андрогенная регуляция продук-

цни эпидермального фактора роста в CR (Wingler et al.,1989; Za-rebska. 1989).Постановку экспериментов осуществляли с учетом "Правил проведения работ с использованием экспериментальных животных", утвержденных приказом МЗ СССР от 12 августа 1977 г.

Основным объектом исследования были большие слюнные железы: околоушная слюнная железа /ОУСЖ/, подчелюстная слюнная железа /ПЧСЖ / и подъязычная слюнная железа /ПЯСЖ/.У крысы ПЯСЯ и ПЧСЙ лежат в общей капсуле.что именуется как субмандибулярная железа (СМЖ). В работе оценивалось морфо-функциональное состояние больших СЯ при моделировании различных видов патологии в них.Патология моделировалась следующим образом:

Таблица Но 1.

Общее количество животных использованных для исследования.

С '■■ ' ■■" ------- ------------ ■ 1 "Г I раздел исследования 1 1 количество I ---1 кол-во I

серий опытов! крыс |

|1.Биометрические и функциональные |

I критерии оценки гомеостаза сл'зн- | 13 I 1071 |

| ных желез |

|2.Модели патологии слюнных желез | 18 I 721 I

|3.Механизмы обычной и патологической!

I регенерации слюнных желез I 30 | 1287 |

I4.Испытание биологических свойств |

I новых Форм препаратов на моделях | 11 1 275 I

I патологии слюнных «елез I

1 ВСЕГО | > • 72 I < 3354 | |

а/острый гнойный сиаладенит-у крыс под гексеналовым наркозом (50 мг/кг) производили срединный разрез на шее. Затем, тупым путем выделяли обе субмандибулярные железы, и с помощью тонкой иглы под капсулу обеих ПЧСЖ вводили 0,05 мл 50% раствора живичного скипидара в вазелиновом масле;

б/односторонняя сиалотомия или модель посттравматической регенерации ( ПТР )-У крыс под наркозом и дополнительной ннфильтра-тивной анестезией 2% р-ром новокаина на шее делали разрез, и выделяли правую ПЧСЖ. Резецировали нижнюю 1/3 железы. Марлевым тампоном останавливали кровотечение и ушивали рану;

в/постампутационный сиалоз -у крыс трехкратно скусываются

нижнечелюстные резцы до десневого края. Скусывание проводили через два дня на третий.(Wells et al. 1959). После выведения животных из эксперимента у них оценивались величины: массы слюнных желез (СЖ), плотность.сорбционная способность. слюноотделительная функция с последующей качественной и количественной оценки слюны, морфология и гистохимия СЖ.

Для изучения функциональной связи между СЖ и другими органами (участия СЖ в гомеостазе организма) моделировались процессы регенерации: I/ слизистой желудка после развития острой язвы(по Okabe, 1971); 2/печени после гепатотомии / Ю.И.Ломаченко. 1990/;: 3/ кожи после нанесения полнослойной раны / Е.А.Ефимов. 1975/. В процессе работы были разработаны новые модели патологии СЖ. К ним относятся: 1/ модель функциональной зависимости слюнных желез; 2/ модель количественной оценки течения ПТР; 3/ модель для поиска гуморальных митогенов / факторов запуска пролиферации клеток /; 4/ модель кнстофиброза СЖ; 5/ модель термосиалоза.

Для биометрической оценки величины массы СЖ были использованы: абсолютные и безразмерные показатели / индексы /.Для морфологических исследований изготавливали гистологические препараты, которые окрашивали гематоксилин-эозином. Тотальные препараты из роговиц изготавливали по оригинальной методике / А.Б.Денисов. 1973/.В работе были использованы гистохимические методы для выявления, сукцннатдегндрогеназы ( СДГ ). глутаматдегидрогеназы (ГДГ).лактатдегидрогеназы /ЛДГ/.НАДН и НАДФН2 по Гессу и Нахласу (Пирс.1962).

Для оценки функции СЖ была использована методика определения стимулированного слюноотделения в собственной модификации по следующим параметрам: 1)определение времени латентного периода ; 2)скорость слюноотделения в мл/час/кг: 3) индивидуальный график валового слюноотделения с интервалом сбора слюны через 4 минуты^) в слюне и в крови определяли содержание ионов / На, К. Са и Р /. а также содержание белка, холестерина.аланинаминотрансферазы (АЛТ) н затем рассчитывали степень перехода этих веществ из крови в слону по коэффициенту проницаемости / КЛ / гематосаливарного 6api pa по формуле:КП -содержание в слюне /содержание в крови х 100Х.

Изучение сорбционной способности железистой ткани проводили с помощью красителя нейтральный красный (Н.А. Исан'ин, 1975: С. Н. Рома-

нов и др., 1975).Величину экстинкции пересчитывали на 100 мг сухого вещества.Для этого ПЧСЖ высушивали 24 часа до постоянного веса при температуре 1100 С.

Доклиническое испытание фармакологических свойств препаратов КГ-62 и дибунат натрия проведено согласно "Правилам доклинической оценки безопасности фармакологических средств"( РД .61-126-91 . М. 1992).составленным на основе существующих правил доклинических испытаний безопасности потенциальных лекарственных препаратов США - Good Laboratory Practice ,1979. Работа с препаратами проведена в три этапа:1)Проверка фармакологической эффективности;2) проверка токсичности и 3) проверка фармакологической эффективности на моделях патологии СЖ.Для достижения поставленных целей было использовано 17 наиболее распространенных лабораторно-клинических метода для анализа крови.слюны и ткани СЖ.Все исследования проводились по методикам утвержденным приказом МЗ СССР "Об унификации клинических лабораторных исследований".

Изучение антигенного состава Сй проводили с помощью полученной антисыворотки против тканей СЖ с помощью реакции преципитации по Оухтерлони. Определение содержания, катехоламинов в СЖ проводили по В.В.Меньшикову (1974).

Статистическую обработку результатов проводили на микрокалькуляторе "Электроника МК-52" с блоком расширения памяти "Электроника БРП - 3".В работе были использованы программы для : планирования .статистической обработки и оценки статистической значимости результатов(В.П.Дьяконов. 1985;В. А. Епанечников и А.Н.Славин, 1988:Ю.М.Кваноз и 0.Н.Погорелюк, 1990; А. Е,Шелест, 1938).

ОСНОВНЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

РАЗРАБОТКА КРИТЕРИЕВ ОЦЕНКИ ГОМЕОСТАЗА СЛЮННЫХ ЖЕЛЕЗ И .

МОДЕЛИРОВАНИЕ НЕКОТОРЫХ ПАТОЛОГИЧЕСКИХ ПРОЦЕССОВ В НИХ. а)Экспертная оценка выбора объекта и параметров его описания.

. На основании сформулированных целей и задач работы, мы решили изучить биометрические показатели СЖ.так как оказалось, в доступной литературе нет описания биометрических или каких либо других критериев, с помощью которых можно было бы получить информацию о морфо-функциональном состоянии СЖ. Сразу же возникает вопрос .сколько показателей (параметров)нужно определять?Наиболь-шее распространение получили методы одномерной статистики:описывается максимальное количество параметров.А затем с помощью кри-

териев проверки гипотез (t-критерий Стьюдента или F- критерий Фишера) они попарно сравниваются в контроле и опыте.В этом случае какие то показатели, отчасти дублируют друг друга, кроме того не выявляются множественные связи, как внутри изучаемого объекта, так и вне его.

Мы,в нашей работе .использовали иной путь.путь снижения размерности анализируемого пространства и отбор наиболее информативных признаков.Это позволяет: упростить счет и интерпретации данных; существенно сжать объем хранимой информации, без видимых потерь в ее информативности.

В прикладной статистике создано несколько методов снижения размерности :метод главных компонент, факторный анализ и т.д.Мы использовали В работе МЕТОД ОТБОРА НАИБОЛЕЕ ИНФОРМАТИВНЫХ ПЕРЕМЕННЫХ В МОДЕЛЯХ РЕГРЕССИИ (С.А.Айвазян и соавт.,1985):

Для этого мы провели несколько серий исследований. На первом этапе исследования мы изучили изменение величины влажной массы субмандибудярной железы у крыс различного возраста(альтернативный анализ).Возраст животных определяли по массе тела. С точки зрения математического моделирования данный процесс представляет собой описание функциональной зависимости, т.е. является детерминированной моделью с непрерывным пространством и временем /Е.В.Губ-лер.1990/. Было установлено, что используя различные показатели массы СМХ, массы тела и поверхности тела крысы, как абсолютные, так и безразмерные показатели, можно вычислить влажную массу CMS. т.к. между исследуемыми величинами существует достоверная корреляционная связь средней силы /г ■ 0.4 - 0,7/.

На втором этапе.при проведении вариационного анализа данных, нами обнаружена высокая вариабельность главной измеряемой величины - массы СМЖ. У животных одной массы она может отличаться в два раза. Более того, нами обнаружено, что парные СМЖ не являются е прямом смысле симметричными, в отдельных случаях различия межзд СМХ достигают 30%. Эта асимметрия не является билатеральной /правой или левой/: в равной степени наблюдаются отклонения в обе стороны. Такой вид асимметрии носит название ненаправленной флуктуирующей асимметрии (В.М.Захаров.1987). Мы провели оценку величины флуктуирующей асимметрии у крыс различных возрастаю rpynn(no В.Н. Махинько и В.Н.Никитину. 1975/и установили, что величина Флуктуирующей асимметрии влажной кассы СМЖ, статистичесш значима у крыс в трех возрастных группах из четырех, особенно i

репродуктивный период жизни крысы. Из приведенных результатов статистического исследования, вытекает важный методический вывод. Нельзя в качестве контроля использовать контралатеральную железу, т.к. исходно ее масса может быть существенно иной, чем у парной железы, как в сторону увеличения, так и в сторону атрофии. Дальнейший вариационный анализ данных и построение типа его распределения показало.что наиболее точным и параметрическим показателем является сухой вес СМЖ.

На третьем этапе исследования мы провели корреляционный и регрессионный анализ связей между различными СЖ,массой тела и массой бедренной кости.Результаты биометрического исследования позволили прийти к выводу, что из трех исследованных величин сухой массы ПЧСЖ. ПЯСЖ и ОУСЖ наиболее высокую точность ( по величине коэффициента корреляции) даст вычисление величины сухой массы ПЧСЖ (таблица По 2 .уравнение Но 1).

Из результатов отбора наиболее информативного показателя в моделях регрессии, представленных в таблице Но 2.можно заключить следующее. У крысы СЖ растут в течение всего онтогенеза, как и масса тела. В процессе онтогенеза возможно отклонение генетической программы роста отдельных телзз, в результате чего возникает флуктуирующая асимметрия парных желез,поэтому парные (интактные) железы не могут служить контролем опыта.Показано, что коэффициент корреляции -характеристика степени тесноты связи показателя (сухая масса ПЧСЖ ) .по сравнению с другими показателями .является наиболее информативным с точки зрения описания поведения показателей У.т.к.значение меры информации из этого набора показателей достигает максимума. Использование методов альтернативного, вариационного. корреляционного и регрессионного анализов, позволило получить формулы, с помощью которых можно определить масс любой БСЖ. не проводя забой животных. •

Поскольку в процессе работы нами будет изучаться травма СЖ / сиалотомия /. то в этих условиях возможно ее косвенное влияние на состояние целостного организма, в том числе и на массу тела, т.е. показателя используемого как базисного.

Поэтому мы провели специальное исследование изменения величины массы тела крысы в условиях вивария(клиника экспериментальных животных ММСИ).Установлено, что в условиях нашего вивария за нерпую недолю исследования прирост массы составил 13%. а во вторую неделю 10%. В условиях опыта на животных закономерность нару-

Таблица Мо 2

Корреляционный. и линейный регрессионный анализ биометрической связи между слюнными железами, массой тела и массой бедренной кости у крысы.

Г ; 1 зависимая 1 переменная 1 У 1 1 независимая| переменная I X 1 1 п 1 г 1 Уравнение линей- | ной.регресии: | у « ах + Ъ' |

1 11.Сухая маска. ПЧСЖ.мг 1 1 сасса | крысы в г | 1 58 I 0,918 у=0.15Х+3.0 I

1 12.Сухая маска ОУСЖ.мг 1 1 1 1 ЗЭ 1 0.211« у=0.17Х+28.52 |

1 13.Сухая маска ПЯСЖ,мг 1 1 1 I 27 I 0.897 у=0.03х+1.68 |

] |4.Масса 1 бедренной 1 КОСТИ, мг (ДО) 1 1 1 1 I 72 I 0.889 у=0.673х-54 I

1 15.Длина 1 бедренной |кости.мм (и | 1 1 1 34 I 0.441» у=0.012Х+28.045 I

1 16. Сухая 1масса 1ПЧСЖ.иг ■ 1 Множествен-I ная корреля| ция (V1.1) 1 ■ 34 |УЬ 0.441 ЦП. 0.481 |УИ 0.558 а у=1.461>0.03И-29.831

Сокращения в таблице: ПЧСЖ - подчелюстная слюнная железа: ОУСЯ - околоушная слюнная железа;ПЯСЖ - под'язычная слюнная железа:п - число измерений;г - коэффициент корреляции: • Р<0.05:остальные результаты Р <0.01.

шае: я. Как показали наши эксперименты, после сиалотомии правой ПЧСЖ возможно развитие 3-х вариантов ответной реакции: нормальная - рост животных продолжается, реакция торможения - крысы не прибавляют в весе и гипертормозная - крысы теряют в весе. По-

путно мы обнаружили» что эта ответная реакция имеет сезонную закономерность.

Обобщая результаты этой серии опытов можно заключить следующее. С помощью одного из методов многомерной статистики- метода отбора наиболее информативных переменных в моделях регрессии (С.А.Айвазян и соавт..1985)было обосновано использование в качестве основного критерия показатель величины сухой массы ПЧСЖ .имеющий минимальную вариабельность, максимальную величину и распределяющийся по нормальному закону , что разрешает применение обычных (параметрических) методов статистики. Этот показатель является "морфологическим эквивалентом функции" (А.И.Струков и соавт.,

1983). косвенным показателем гомеостаза органа.Подобные мас-со-ростовые соотношения применяются в клинической медицине (В.Г.Музыченко, 1984), токсикологии (В.Н.Тихонов и соавт.,

1984).Описана корреляционные связи некоторых СЗ у человека (Pell, Rother.1984),но данные по СЖ крысы нами описаны впервые, и для исследования процессов регенерации и гипертрофии не использовались. Еще раз хочется повторить,что показатель величины сухой массы ПЧСЖ был выбран,ках наиболее адекватный, из 16 показателей СЯ. Конечно для современного исслед ¡¿лтеля этот критерий может показаться слишком примитивным и архаичным.Тем не менее .используя этот критерий .мы обнаружили не известные исследователям системные связи CS.На основе этих изученных связей совершенно по иному трактуется, патогенез.пироко используемых в экспериментах моделей "гипертрофии'СЯ (В.И.Донцов. 1990:4. Я.Нсанбаев,1993).уточнен механизм развитая регенерации СЯ.

б)Функциональные критерии гомеостаза гомеостаза слюнных %елез. Как уже отмечалось, для оценки репаратнвной регенерации, предполагается использовать не только морфологические, но и Функциональные критерии. В частности,- для Сй важней функцией является выработка и выделение слюны.Изучение слюноотделительной функции можно проводить двумя принципиально различными методами. Первый метод - изучение естественного / на пищевые а другие стимулы / слюноотделения с помощью фис'гулы протока слюнной железы ( А.М.Уголез, 1953). Второй метод - сбор искусственно стимулированной слюны ( Benarde и соавт.. 1956) .При этом важно помнить, что состав н объем слюны зависит от типа активированных рецепторов. Стимуляция М-холино- иJ-адренорецепторов приводит к выделении большого объема слюны с определенный электролитным составом. В

тоже время, через стимуляцию si-адренорецепторов,можно получить небольшое количество слюны с неустойчивым электролитным составом. В начале мы изучили слюноотделение у крыс в бодрствующем и наркотизированном состоянии.Было установлено, что наркоз не влияет,на характер слюноотделения. Обращает на себя внимание высокая вариабельность скорости слюноотделения - коэффициент вариации 45Ж Построенный повременной график валового слюноотделения хорошо согласуется с данными о фазах секреторного цикла железистых клеток (В.Я.Бродский.1966). После сбора слюны мы провели анализ ее ионного состава , в оценку которого внесли .усовершенствования: построили калибровочные кривые для определения содержания ионов и белка в зависимости от скорости слюноотделения. Установлено, что наиболее высокая достоверность выявляется при описании наших данных с помощью уравнений гиперболической регрессии, кроме белка. В этом случае более пригодна формула обратной гиперболической регрессии.Было подтверждено, что абсолютное количество выделенного со слюной иона, прямо зависит от скорости слюноотделения . Из полученных уравнений следует, что при скорости слюноотделения не равной нулю,свободный член уравнения всегда имеет некоторое значение.Поэтому.для того чтобы можно было сравнивать результаты отдельных серий опытов, мы сочли удобным отнормировать величины концентрации ионов на условную скорость - 10 мл/час.на кг массы тела (таблица Но 3).

В таблице N 3 видно, что средняя величина пересчета данных ■на условную скорость практически совпадает с той, которая получается путем расчета с помощью регрессионных уравнений, кроме ионг кальция.

Таким образом, нами впервые одновременно с описанием биометрических показателей СЖ оценивались функции желез:слюноотделительная и экскреторная.Полученные данные (повременная кривая слюноотделения) хорошо согласуется с данными В.Я.Бродского (1966) с Фазах секреторного цикла в ацинарных клетках СЖ. Для оценки экскреторной ' функции СЖ нами были построены и математически описаш калибровочные кривые содержания четырех ионов и белка. Эти данньи является оригинальными,т.к. в литературе подобные исследованш выполнены только для ц-АМФ у человека (Mornstad.van Dijken.1985),

Таблица N0 3

Содержание ионов и белка в стимулированной слюне крысы в пересчете на условную скорость 10 /мл/час/кг.

1 .......I 1 N0 | натрий --1 калий | кальций 1 1 I фосфор I ..белок |

I концентра- | |ция в слю- I I не в ммоль/| |час/кг | 9.5+0.8 57.0+5.01 2.76+0.33 11.69+0.41 | 3.14+0.611

1 СУ | 24 24 I 31 1 60 I 59 I

|абсолютное | I кол-во в | |мг/час/кг I 2.5+0.5 22.0+4.01 611+153 * I 0.52+0.071 0.23+0.031

1 СУ | 1......... . 1 53 49 I 66 1 31 I 1 1 45 |

» - мкг/час/кг. СУ - коэффициент вариации данных в % .

в) построение модели посттравматической регенерации и программы для ее статистической обработки.

Мы развили в нашей работе логико-математический способ анализа регенерацииШ.Н.Мотлох, 1985). В предыдущем разделе нашего исследования мы показали,что во-первых, используя величину массы крысы.можно с высокой вероятностью вычислить величину сухой массы СЖ крысы: во-вторых, у крысы величина массы тела постоянно растет: в-третьих, в условиях •посттравматической регенерации, процесс роста крысы может изменяться.

Вычисленное в предыдущем разделе уравнение линейной регрессии - у = 0,15 х + 3,00 позволяет учитывать изменение темпов роста животного в процессе регенерации /при допущении, что степень корреляции исследуемых величин, при этом не изменяется/. Возьмем следующие величины: - масса крысы исходная - РИ /I/.

- 14 -

- масса крысы при забое - РК /2/.

- масса удаленной ткани ПЧСЖ при операции - МУ /3/.

- масса регенерировавшей железы- МРЖ /4/;

По величине исходного веса /РИ/ вычислим массу ПЧСЖ исходную теоретическую - /МИТ/:

- МИТ - 0.15 РИ + 3 /5/.

по массе крысы при забое /РК/вычислим массу ПЧСЖ конечную те< ретическую:

- МКТ - 0.15 РК + 3 /6/;

Теперь, зная этл две величины можно вычислить поправку на естественный прирост массы- МП : МП « МКТ - МИТ /7/. на основании величины МИТ. вычисляем массу оставшейся железы /МО/ после сиалотомии:

- МО - МИТ - МУ /8/. это позволяет установить объем регенерировавшей массы железы / РМ/:

- РМ - МРЖ - МО /9/, и. внеся, поправку на прирост /МП/ вычислить "истинную" регенерацию железы /ИРЖ/:

- ИРЖ» РМ - МП /10/. Удобнее вычислить не абсолютную величину ИРЖ. а прирост регенерации в процентах / ЖИРЖ/. В этом случае можно сравнивать между собой результаты различных серий опытов

- X ИРЖ - РМ - МП х 10035 /МКТ /11/ Теперь в это уравнение подставляем все условия (1 - 10) и получаем, пропуская промежуточные результаты, уравнение для оценки процента посттравматической регенерации ПЧСЖ:

< МРЖ - [(0.15 РИ + 3) - МИ]} - 0.15( РК - РИ )

¡Ир*. --- х юо%

МКТ

Аналогично можно оценить состояние контралатеральной железы: гипер- или гипотрофию по формуле: X ГКЖ « МКЖ х 100% /МКТ. где МКЖ масса контралатеральной железы. Для вычисления разработанных показателей мы разработали программу статистической обработки на программируемом микрокалькуляторе МК-52. Программа имеет 55 шагов. Время вычисления 15 секунд.Таким образом, мы создали модель, которая позволяет определить процент регенерации ПЧСЖ после ее сиалотомии.

разработав критерий оценки морфо-фунхционального состояния С1 с его помощью мы создали логико-математическую модель посттравматической регенерации. Способ "сжатого"изложения процесса регене-

•ации ухе привлек внимание исследователей.И. В. Комолевым (1990) оздана формула увеличения во времени массы печени после частич-гой гепатэктомин.Нами за основу был взят метод ковариационного дализа, с помощью которого устраняется влияние неконтролируемых хловий , сопровождающих эксперимент (Д. Сепетлиев,1968).Разрабо-■аннкй нами алгоритм эксперимента шслючает в себя регистрации [вух параметров ( масса крысы и масса ПЧСЗХ) до и после опыта, что юзволяет внести поправку на действие неконтролируемых факто-юв.т.к.нами установлено неодинаковое изменение роста крыс после :иалотомии. Таким образом,нами решена вторая поставленная задача: юздана формула посттравматнческой регенерации и алгоритм для ее ¡ычисления.

г)моделирование сиалоза путем ампутации нижнечелгостных резчов у животных с постоянным их ростом.

Как было отмечено одним из патологических состояний СЖ,катится СИАЛ03Ы - реактивно - дистрофические процессы в ней. Нами !ыло проведено исследование с целью разработки модели сиалоза.За >снову была взята модель гипертрофи; Сй, возникающая после ампутации резцов крьх /Wells et al,195 '.Несмотря на то, что феноме-юлогня этой гипертрофии подробно изучена: у каких животных, с сакой частотой скусывать резцы и какие /А.Г.Бабаева и Е.Е.Шубни-:ова, 1979/, не известен механизм ее развития. А некоторые авторы [Inmenkanip. 1969;Nicolau, Ferreira, 1989)считают этот вид экспе-¡иментальной гипертрофии СЯ сиалозом.

Поскольку практически во всех исследованиях этой гипертрофии !ыли использованы морфологические методы исследования,то мы реши-ш изучить функциональное состояние CS.Для этого была оценена ¡пособность оеток к сегрегации прижизненных красителей. Этот метод оценки сорбционной активности ткани нашел применение в изуче-!ии регенерации. Дело в том,- что процессу гиперплазии клеток, федшествует ряд неспецифических реакций, в том числе, повышение фоницаемостн мембран клеток /И.А.Исанин. 1975;И.И.Марахова. 1991/.

В исследовании было обнаружено, что уже через 1.5 часа после :нигения прикуса происходит достоверное усиление сорбции железистыми клетками красителя нейтрально красный на 18% /Р<0,01/. Затем Функциональная активность СЖ постепенно ослабляется и к концу 1ервых суток не отличается от контроля. Поскольку достоверное >азвнтие гипертрофии возникает позднее /2-3 сутки), можно предположить. что раннее и кратковременное изменение сорбционной ак-

тивности СЖ связано с активацией ВНС. развившейся вслед за ампутацией резцов. .

Для доказательства этого,мы провели прямое определение концентрации катехоламинов / адреналина и норадреналина / в железистой , ткани после трехкратного скусывания резцов на нижней челюсти до десневого края.й обнаружили достоверное, на 51%.возрастание содержания адреналина. Напротив, другой медиатор - норадреналин усиленно утилизируется CS и поэтому его содержание снижено на 26%. Таким образом,действительно снижение прикуса и следующая за этим гипертрофия СЯ сопровождается активацией симпатического звена ВНС, о чем свидетельствует увеличенная концентрация адреналина в СЖ.

Затем мы оценили слюноотделительную функцию гипертрофированных желез и установили.что они обладают сниженной функциональной активностью :средний латентный период слюноотделения увеличен на 33%.скорость слюноотделения снижена в два раза .Биохимический анализ слюны показал качественное ее изменение .На 55% увеличено содержание иона натрия . а содержание калия наоборот существенно ( на 47% ) снижено.. Таким образом, структурная гипертрофия ПЧСЖ и ОУСЖ, развивающаяся при снижении резцового прикуса, сопровождается снижением слюноотделительной функции и нарушением качественного состава слюны. Налицо противоречие между увеличением массы железы и одновременным ослаблением и нарушением функции ее.Следовательно, гипертрофия СЖ развивающая при ампутации резцов является моделью сиалоза.

д) моделирование сиалоза путем нагревания нижнечелюстных резцов - термосиалоз.

Изучая пути развития гипертрофии после ампутации резцов было установлено, что повреждение только слизистой оболочки полости рта не оказывает влияние на вес СЖ /Wells et al., 1959/. -г этиология этого феномена связана с воздействием на пульпу зуба, i частности показано, что активация пролиферации в пульпе зуба прс исходит уже через б часов после укорочения резцов / Nicolau, Ferreira. 1981/. Нами был исследован еще один фактор - тепловой нагрен зуба, постоянно встречающийся в практической ортопедической стоматологии.

В качестве действующего фактора были применены: 1 - одон-топрепарирование - обработка нижнечелюстных резцбв с помощью турбины с охлаждением или без него;2 - нагревание резцов с помощь»

термоанализатора ТА -1/температура щупа 60 / в течение 0.5 или 1 минуты;и скусывание резцов ( в качестве сравнения).

Установлено.что через 48 часов после снижения прикуса, масса ПЧСЯ увеличивается на 22 +- ЮЖ. Обтачивание резцов без применения охлаждения твердых тканей зуба, также вызвало увеличение массы ПЧСЯ на 10 -+55?. Если зубы обрабатывались с охлаждением, то гипертрофия не развивалась(таблица N0 4).

Таблица Но 4

Влияние обтачивания или скусываиия ниянечелюстных резцов на биометрические показатели ПЧСЯ / Х+БЕ /

i—--------г 1 но | скусывание обтачивание без охлаждения I обтачивание с| охлаждением I

|масса крыс | 1 г | 144.0+8.0 /9/ 111.0 + 5.0 /11/ 108.0 + 7.0 | /И/ 1

|влажная мас-| |са ПЧСЯ фак-| |тическая, мг | 131.0+7.2 /18/ 99.0 + 4.0 /20/ 91.5 + 5.0 I /20/ I

I сухая масса | |ПЧСН факта- | |ческая. мг | 29.0+1.5 /17/ 23.1 + 0.9 /20/ 20.2 + 1.1 | /20/ |

|% сухого ос-1 Iтатка ПЧСЯ | 22.0+0.3 23.4+0.3 22.6+0.3 1

Iмасса ПЧСЯ | I расчетная | 1 мг | 23.8+1.5 /9/ 20.9+0.6 /И/ 20.5+0.8 | /11/ 1

|опыт/конт- | |роль в % i 122.0+10.0 110.0+5.0 98.0+6.0 |

1 р 1 1_ .... 1 <0.05 -0.05 >0.05 | •

Примечание. В скобках указано число нзмере!гаД - п.

Следовательно, не только снижение высоты прикуса, но и нагрев твердых тканей зубов вызывает изменение морфо-функционального состояния ПЧСЖ. Вычисление процента сухого остатка по отношению сухой и влажной масс ПЧСЖ, показало, что феномен гипертрофии не связан с отеком железы, т.к. процент воды в СЖ достоверно не изменился. В дальнейших экспериментах установлено, что гипертрофия во.шикающая при нагреве нижнечелюстных резцов зависит от силы и длительности нагрева последних. В основе ее развития лежит резкая активация симпато-адреналовой системы.Косвенным доказательством этого является достоверная стрессовая атрофия тимуса.

В. процессе исследования с помощью разработанных критериев было показано,что экспериментальная гипертрофия слюнных желез .развивающаяся после многократного скусывания резцов.является одним из видов патологии СЖ -сиалозом. Аналогичный феномен развивается при нагревании резцов.Результаты исследования имеют выход в клинику: т. к. они прямо показывают отрицательное влияние снижения высоты прикуса или перегрева зубных тканей на функции СЖ.а .как известно, вырабатываемая последними слюна играет активную роль в минерализации эмали зубов.

е) моделирование экспериментального гнойного сиаладенита.

Частым видом патологии СЖ является сиаладениты. Используя разработанные информативные биометрические показатели СЖ и унифицированные показатели слюноотделения и состава слюны, мы применили эти результаты для моделирования экспериментального гнойного сиаладенита (ЭГС). который получили следующим образом. Крысам с помощью тонкой иглы под капсулу обеих ПЧСЖ вводили 0.05 мл 50% раствора живичного скипидара в вазелиновом масле.В качестве критериев воспаления было использовано два показателя: количество лейкоцитов в крови и скорость оседания эритроцитов /СОЭ/. В результате введения скипидара, оба этих показателя уже на вторые сутки опыта достоверно увелйчиваются. Количество лейкоцитов увеличивается с 5.4 + 0.2 до 13,7+ 2.0 тысяч в мм/, а СОЭ вырастает с 3.0 ♦ 0.5 до 10,8 ♦ 1,8 им/час. На 3-й сутки лейкоцитоз еще более пыражен. а СОЭ несколько снижается. Таким образом выбранные показатели свидетельствуют о развитии воспалительного процесса у крысы под влиянием подкапсульного введения скипидара.

Нд 2 и 3 сутки опыта была проведена оценка слюноотделительной функции у этих животных . Обнаружено, что 'латентный период слюноотделения достоверно не изменился. Зато скорость слюноотде-

ления уменьшилась на 31% /Р<0.01/. В этот же срок исследования в слюне снижено содержание белка на 39% /Р<0,01/. На 3-й сутки опыта концентрация белка в слюне ниже нормы на 13% /Р<0,05/, а остальные показатели достоверно от контроля не отличаются.

Помимо функциональных проб нами проведено изучение кислородного режима железистой ткани методом полярографии с использованием игольчатого электрода, который для исследования вводили в задний полюс железы на глубину 1,5 см. Исследование р02 осуществлялось до создания очага воспаления / исходный контроль/, на 1, 3 и 14-е сутки после воспроизведения ЭГС. Сроки исследования были выбраны на основании развития отдельных фаз экспериментального калового сиаладенита /A.B.Розенблатс, 1987/. Результаты исследования показали, что в первые сутки развития ЭГС отмечается резкое повышение уровней р02: исходный уровень 51,1+2,3 максимальный уровень 5,9*2,8 На третьи сутки течения воспалительного процесса прослеживалось резкое снижение уровней р02 , что может свидетельствовать о значительном нарушении транспортной функции микроцир-куляторного русла (исходный уровень 18,6+1,8¡максимальный уровень 19,5+1,9). На 14-е сутки показатели кислородного режима достигали исходного уровня, регистрироваь.юго до развития воспалительного процесса. Обобщая представленные результаты можно заключить, что разработана модель серозно-гнойного воспаления СЖ - сиаладенита. Эта модель может быть использована для оценки действия противовоспалительных средств.

д) моделирование кистоФиброза слюнных желез.

В обзоре литературы мы отмечали, что среди прочих видов патологии в СЖ встречается заболевание муковисцидоз или кистофиброз. Фундаментальному изучению развития и лечения данной патологии мешает отсутствие подходящей модели на животных. Изучая эффективность многократных инъекций М-холинолитических препаратов на течение ПТР мы обнаружили на капсуле желез мелкие образования.При микроскопическом исследовании их оказалось,что ПТР на фоне введения М-холинолитиков сопровождается образованием тонкостенных кист. В железах также отмечается междольковый отек. Видно расширение междольковых и других протоков. Таким образом, при многократных инъекциях М-холинолитиков /блокаде слюноотделения/ желез с воспалением в них, приводит к накоплению в них секрета /видимое как "гипертрофия" желез/. Результатом этого является задержка выделения секрета и развитие кист. ,

- 20 -

з) разработка модели для выявления роли митогенов . в регуляции репаративной регенерации.

Известно, что локальная травма СЖ, приводит к усилению в ней пролиферации в 3-5 раз,причем не только в области прилежащей к поврежденной ткани, а па всей массе железы .Затем, на 5-7 сутки после операции, пролиферация в ацинарной ткани снижается до нормы /Т.П.Порадовская, 1973:П.П.Гусак,1980/. Для объяснения посттравматического усиления пролиферации была использована теория "раневых гормонов", которые выделить в чистом виде не удалось.

Мы разработали новую модель для поиска и . количественной оценки только надклеточных регуляторов пролиферации с использованием сведений из теории информации /Н.Д.Девятков и соавт.,1982: В. А.Конышев, 1980/. Важно отметить, что все известные надклеточ-ные регуляторы пролиферации, не являются моноспецифическими /А.Балаж, И.Блажек, 1982/. Поэтому, мы выбрали в качестве приемника информации /тест-объекта/ эпителий роговицы /ЭР/, в котором хорошо изучены все показатели пролиферации, и изменения ее позволяют надежно свидетельствовать о появлении в крови /канале связи/ гуморальных регуляторов пролиферации.Сделано предположение .что если после сиалотомии в крови появляются митогены, то через вpeмí соответствующее длительности митотического цикла в клетках ЭР. величина пролиферации увеличивается.

В повторных идентичных опытах это предположение полностьк подтвердилось.Действительно, под влиянием сиалотомии, пролиферация в ЭР достоверно увеличилась на 55 -140%, сила влияния этоР операции составила от 46 до 63% от всех учтенных факторов, и эт£ величина во вгех случаях также достоверна.Затем определили динамику изменения величины МИ в различные сроки после этой опёрацм Было установлено что. в первые сутки после сиалотомии, в кров1 преобладают ингибиторы пролиферации, поэтому МИ снижен. Затем нг 2-е, 3-е и особенно на 4-е сутки эксперимента, в ответ на появление в крови митогенов из СЖ, развивается выраженная активацш пролиферации. К концу 1-ой недели, пролиферация в ЭР наоборот ос-лаОевает.а затем вновь к 11-м суткам незначительно усиливается. Черпз две недели эксперимента пролиферативная реакция клеток ЭР I ответ на травму отсутствует. Иначе говоря, полученные нами результаты (рис.1), представляют собой кривую затухающего колебательного процесса, т. е. состояние гуморальной-регуляции процес-

НИ я опыте в У. к собственному контролю

рис.1.

Динамика изменения пролиферации в эпителии роговицы после правосторонней сиалотомии.

са регенерации в крови / ннформационом канале связи/ представляет собой процесс.саморегулирующийся при помощи ритмических колебаний.

При изучении механизмов регенерации нами установлено.что в ответ на травму СЖ возникает неспецифическое усиление пролиферации дистантно (через кровь) в совершенно другой ткани -эпителии роговицы.Этот феномен, что является очень важным.не только воспроизводится в повторных опытах, но и получаемые результаты близки между собой. Мы обнаружили.что активация пролиферации после травмы носит колебательный характер и ее : :<д представляет собой кривую

. затухающего колебательного процесса. Полученные сведения совпадают с результатами исследований Д.С.Саркисова (1977) о колебаниях репаративных процессов вне зависимости от характера патогенного агента. СЖ.Подобной точке зрения придерживаются М.Д.Рехтер и А.А.Миронов (1990). Такое состояние регуляции, по аналогии из информатики, указывает на то.что изучаемое явление ( в данном случае митогенная активность крови во время посттравматической регенерации СЖ ) является саморегулирующимся процессом.Что дает представление о самоорганизации при регенерации?Оно формально разрешает описывать явление регенерации с помощью математического аппарата химической кинетики.что открывает возможности моделирования и прогнозирования течения регенерации и ее исхода (Г. Р.Иваницкий и соавт..1984).

РОЛЬ НЕЙРО-ЭНДОКРИННОЙ И ГУМОРАЛЬНОЙ РЕГУЛЯЦИИ РЕПАРАТИВ-НОЙ РЕГЕНЕРАЦИИ В УСЛОВИЯХ НОРМЫ И ПАТОЛОГИИ, а) динамика регенерации слюнных желез по биометрическим И Функциональным показателям.

Для изучения причин запуска и механизмов развития ПТР, ми использовали общепринятую методику повреждения органа - удаление части органа механическим путем.но результаты анализировали методом многомерного анализа.Он включил в себя:1)определение адекватных биометрических показателей регенерации и гипер- или гипотрофии контралатеральной железы ;2)определение функционального состояния железистой ткани ;3) оценку функции регенерирующего органа по слюноотделению ;4)определение повреждения железистых клеток по биохимическим критериям состава крови и слюны;5)оценка обмена углеводов в связи с патологией СЖ; 6)кроме того проводилось гистологическое исследование СЖ по ходу течения регенерации.

В качестве одного из интегральных показателей функционального состояния ткани мы использовали оценку ее сорбционной способности и обнаружили, что в первые сутки после сиалотомии резко усиливается сорбция красителя тканями СЖ- 340 ♦ 37X. Затем, этот процесс постепенно ослабляется и на 4-е сутки уже не отличается от нормы. Синхронно изменяется сорбция в контралатеральной железе, прор°сс отличается только в величине сорбции - 150 ♦ 26S5 (1-е сутки). Таким образом процесс запуска ПТР после односторонней сиалотомии. начинается с резкого усиления функциональной активности клеток обеих ПЧСХ.Более сильно это выражено в травмированной же-

лезе. По времени , процесс функциональной гиперактивности железистой ткани предшествует другому адаптивному процессу -пролиферации, пик которой в СЯ приходится на 5 сутки /П.П.Гусак, 1980/.

Данные биометрического исследования представлены на рис.За.Установлено, что после односторонней сиалотомии в начале идет интенсивная регенерация и к 7-м сут восстанавливается 57% удаленной массы железы. На 2-ой неделе исследования /10 и 14 сут /, регенерация прекращается и масса ПЧСЖ даже снижается до 21 + 7%..В процесс адаптации железистой ткани вовлекается и интактная контрала-теральная железа(рис.36),уже в 1-е сутки после травмы развивается увеличение массы неповрежденной железы. Наибольшая гипертрофия отмечается на 3-й сутки исследования. Затем, этот процесс несколько ослабевает, но сохраняется до конца срока исследования (14-е сутки). Процесс ПТР может быть описан с помощью уравнения гиперболы 1-го порядка:

у - 96.18/Х + 17,97 г - 0.672; Р <0,01

где х - время после операции в сут , у - величина ИРЯ в %. 96,18 и 17,97 - коэффициенты ур ¡¿нения.Процесс развития ВГ конт-ралатеральной железы мояет быть описан следующим уравнением с очень высокой величиной корреляции.

у - X/ 0.0081X - 0.0016 Г - 0,999 Р < 0.001

обозначения те же, что и к предыдущему уравнению.

Одновременно с биометрической сцснксй массы ПЧСЯ ( на тех же животных) была исследована секреторная функция и установлено на 3-й сут значительное снижение (на 6855) скорости слюноотделения, которое сопровождается увеличением латентного периода на 66%. Изменился также и качественный состав слюны: на 10% снизилась концентрация иона натрия, а количество иона калия в слюне, напротив, увеличилось на 2655. Больше на 10% стало белка. На 7-е сут опыта Функция СЯ еще не полностью нормализуется:скорость слюноотделения составляет примерно 80% от нормы.Концентрация электролитов также отличается от контрольных цифр. Полное восстановление слюноотделительной функции происходит к концу второй недели после односторонней сиалотомии.

X рютсрации

Рис. Zл. Динамика регенерации ПЧСЖ после сналотоммн.

X пгагтофаи

Рис2б. Динамика викарной гппертгофии ПЧСЖ лосле сиалотомнн.

После сбора слюны у крыс проводили забор крови из хвостовой вены для биохимических исследований. Исследование показало существенное /на 260*/ увеличение активности АЛТ,что. связана с явлением повреждения ткани СЖ, т.к. по данным литературы /Ф И.Ко-

маров и др.. 1976/ . увеличение концентрации этого фермента в крови возникает при патологии многих органов . Эти данные можно будет применять для диагностики некрозов в СЖ.Активность щелочной фосфатазы - маркера мембранных фрагментов .при регенерации не изменилась.

В качестве еще одного показателя функционального состояния СЖ был использован коэффициент проницаемости гемато-саливарного барьера для ионов Na± и К±.Установлено увеличение проницаемости этого барьера в ранний период ПТР.В частности. КП для натрия, увеличивается с 0,04 до 0.06 /т.е. на 5055/, а дла ионов калия с 5,96 до 8,15/ увеличение на 37%/. Сопоставление этих результатов с составом слюны, свидетельствуют о том,что увеличения в слюне ионов калия связано с более высокой проницаемостью гемато-саливарного барьера для него.а снижение концентрации натрия в слюне, по-видимому, обусловлено накоплением его в поврежденных клетках. Поскольку СЖ участвуют в депонировании и инкрсции гормона инсулина, то по уровню сахара в крови можно оценить состояние углеводного обмена во-вреия регенерации.Было обнаружено.что повреждение ( сиалотомия) и последующая ПТР СЖ сопровождается увеличением уровня сахара в крови на 77% .

Таким образом,многоплановое изучение запуска и течения ПТР позволило констатировать следующее.Во-первых, ткань СЖ способна к ПТР.Большая часть удаленной железистой ткани восстанавливается в травмированной железе.а функция невосстановленных клеток компенсируется викарной гипертрофией.Запуск ПТР сопровождается образованием продуктов распада ( в крови в три раза увеличивается активность AJ1T) .Одновременно нарушается функция гемато-саливарного барьера и ослабевает участие в гомеостазе (углеводном обмене) . Восстановление основной,слюноотделительной функции СЖ происходит через две недели после травмы.

б)роль лнмфоидной ткани в процессе посттравматической регенерации.

Одной из аксиом учения о регенерации является утверждение: причиной запуска ПТР. являются продукты повреждения ткани,что нами подтверждено. Многие исследователи пытались ответить на вопрос. какие вещества образуются в зоне регенерации.При этом вторая часть этого вопроса.как эти вещества поступают в кровь практически не исследовалась. В связи с этим нами была поставлена цель

изучить пути перехода веществ из области травмы /места резекции ПЧСЖ/ в кровь.

Одним из путей элиминации продуктов распада СЖ может быть поступление.переработка и выход их в общий- кровоток через лимфатическую систему . поэтому нами проведено макро- и микрокорфологи-чоскоо исследование ПЧСЖ и прилежащих к ней лимфатических, узлов.

^Выяснено, что. через 1 час после травмы заметна артериальная гипе-^'Ч^йшя. ближайшего'к травмированной железе, лимфоузла. Гистологическое исследование этого лимфоузла через 1 сутки после травмы, показывает полнокровие сосудов, явления отека.

Затем было проведено сравнительное биохимическое изучение ПЧСЖ , прилежащих лимфоузлов и крови. В качестве маркера, способного переходить из поврежденной железы в кровь и лимфу, мы выбрани фермент ЛДГ, который, является одним из немногих ферментов, селективно транспортируемых лимфой /Undena.Trautschold. 1983/. Мы установили .что вскоре после травмы происходит достоверное увеличение количества ЛДГ в крови. Можно считать доказанным, что продукты распада из ПЧСЖ уже через 30 минут после ее повреждения поступают в кровоток. Изучении изоферментного спектра ЛДГ в кропи, травмированной и контралатеральиых железах, и в регионарных лимфатических узлах.показало, что использованный маркер динамически изменяется вначале в железе.затем в лимфоузлах и наконец в крови. Это изменение носит зеркально симметричный характер: снижение фракции ЛДГ! в железе сопровождается ее увеличением в лимфатических узлах и наоборот, увеличение уровня активности фракции в железах и его снижение в лимфоузле. Установлено,

что переход продуктов распада из железы в кровоток, осуществляется через регионарный лимфатический узел. Процессы миграции лейкоцитов в зону травмы и макрофагоцитоз, развиваются медленнее,т.е. ибра.ювлше моно- и лимфокинов более позднее. На основании этого ми полагаем, что запуск посттравматической гиперплазии в СЖ, осуществляется пропуктами распада железистой ткани.

Выяснив участие регионаримх лимфоузлов в элиминации продуктов распада, образующихся в ПЧСЖ после ее сиалотомии.мы решили изучить течение регенерации после воздействия на лимфоидиую ткань. Выло выбрано два противоположны:; метода изучения:первый- выключение, путем удаления лимфоузлов.второй-усиление, путем ускорения движением'лнмфы. Установлено следующее. При удалении одного или обоих лимфатических узлов ( со стороны операции) процесс ПТР су-

щественно замедляется /на 58-6135. Р<0.01/. по сравнению с обычной регенерацией /рис.4/. Таким образом, повреждение лимфооттока от травмированной железы, существенно влияет на развитие ПТР: темп ее снижается в 2 раза. Одновременно' с этим установлено, что на другой процесс, развитие ВГ. нарушение лимфооттока практически

не оказало влияния.

После этого были проведены эксперименты с усилением оттока лимфы от СЖ с помощью осмотического диуретика маннитола. который ускоряет движение лимфы /Ю.Н.Левин и соавт..1979/. в результате проведенного эксперимента /рис.4/ установлено. Что ускорение лимфооттока, во-первых, не влияет на запуск и ПТР: во -вторых, регенерация травмированной железы в этих условиях осуществляется с обычной скоростью. В то же время, существенно увеличилась /на 31%/ ВГ интактной парной железы.

г , .1 — уда/мят

' '2 яммфоуа^о!

ПДУН- м«,£«нм«

Гипэртросрия

Рис.3.

Течение посттравматнческой регенерации и развитие викарной гипертрофии ПЧСЯ при изменении регионального лимфооттока.

- 28 -

Обозначения:1- контроль (сиалотомня);2-удапение одного лимфоузла;3- удаление двух лимфоузлов;4- введение маннитола.

Обобщая полученные данные, можно заключить,что регионарная лимфоидная ткань участвует в процессах посттравматической гиперплазии и гипертрофии. Более выражено ее участие в процессе развития викарной гипертрофии / 35% от всех действующих факторов/. Замедление роста травмированной железы наблюдается после экстирпации одноименных лимфоузлов, хотя доля участия лимфоидаой ткани в этом незначительна - 9% от всех учтенных факторов.

в)участие медиаторов ВНС в процессе репаративной пролиферации,.

Используя созданную модель для поиска гуморальных факторов факторов регенерации ( см.стр.20 ) мы изучили образование их /по тест-объекту/с одновременным выключением отдельных звеньев ВНС и установили, что при тотальном выключении норадренэргических нейронов и хромафинных клеток /продуцентов катехоламинов/ дифтерийным токсином МИкх- число профаз и блокированных колхицином ме-тафаз в клетках ЭР при такой постановке опыта не изменилась. Последнее свидетельствует, что травма ПЧСЖ на фоне ее химической де-симпатизацин приводит, по-видимому, к снижению образования мито-генов. Можно допустить и другую возможность - уменьшение эффекта действия митогенов на фоне угнетения активности симпато-адренало-

вой СИСТРЧЫ.

При блокаде парасимпатических нейронов ПЧСЯ вызывали ботули-ническим токсином типа А мы констатировали,что предварительное выключение парасимпатического звена ВНС снимает гуморальный мито-генный эффект сналотомии. Анализируя полученные данные, следует отметить, что использованные нейротропные яды не вызывал» достоверного изменения пролиферации в тест-системе.т. е. использованные препараты не оказали прямого цитопатогеиного действия на клетки тест-системы. Обоащает на себя внимание тот факт, что взаимодействие сиалотомии депарасимпатизацией. является антагонистичным, а с десимпатизацией - синергичным. Можно предположить, что в процессе запуска пролиферации, адренорецепторы играют более важную

е

роль, чем холинорецепторы.

Выяснив необходимость медиаторного обеспечения ВНС запуска ПТР мы изучили затем ход регенерации в условиях выключения отдельных звеньев ВНС фармпрепаратами и обнаружили.что многократная блокада ]Ь -адренорецепторов обзиданом вызывают усиление регенерации на 49%, на 15% увеличивается ВГ .

Напротив блокада М-холинорецепторов метацином затормозила течение регенерации на 39%.Контралатеральная железа тоже реагирует на отсутствие ацетилхолина: вместо гипертрофии ее возникает некоторая атрофия (%ГКЖ - контроль 128 + 6% ,п-33;опыт 93 + 8%,п « 10).Таким образом,блокада рецепторов для медиаторов ВНС показывает важность их правильного функционирования не только для запуска .но и для нормального течения регенерации.

Проведенное нами исследование позволяет заключить, что в процессах адаптации СЯ к сиалотомии . важное место принадлежит ВНС. При выключении отдельных звеньев ее тормозятся процессы и гиперплазии, и гипертрофии. Кроме того, установлено, что адрено-рецепция более важна для регуляции гиперплазии, а парасимпатические рецепторы контролируют процессы гипертрофии клеток. Обращает на себя внимание тот факт, что взаимодействие сиалотомии с депа-расимпатизацией является антагонистичным, а с десимпатизацией -сйнергичным. Можно предположить, что в процессе приспособительной пролиферации, адренорецепторы играют более важную роль, чем холинорецепторы. Это не противоречит данным других исследований. Даже на уровне одного ацинуса, парасимпатическая нервная система влияет. главным образом,на центральные ацинарные клетки, а симпатическая нервная система оказызает влияние на клетки полулуний (Ка-1г е1 а1.,1984:Ва11,1975). Таким образом, было выяснено, что симпатические и парасимпатические звенья ВНС участвуют в процессах адаптации и их действия не носят реципрокного характера.

г)реакция слюнных желез на отдаленные репаративные процессы

(раны кожи.повреждения желудка.резекцию части печени). Одним из главных свойств целостного организма, является поддержание гомеостаза. В том случае, если происходит повреждение какого либо органа или ткани и нарушается его гомеостаз. в процесс компенсации вовлекаются другие органы и системы. СЯ, есть часть ЯНТ и. следовательно, они должны как то участвовать в компенсации нарушенного функционирования ЕСТ при патологам,т.е.компенсация по типу замещения /К.К.Колпаев, В.Н.Шаталов.1986/. Сравнительно не-

давно установлена эндокринная функция СЖ. В частности, они вырабатывают два важнейших фактора роста: эпидермальный фактор роста /ЭФР/ и фактор роста нейронов /ФРН/.Разработанные биометрические критерии позволили изучить участие С» в регенерации: избыточная выработка ростовых гормонов должна сопровождаться "рабочей" гипертрофией желез.

Для проверки этой гипотезы были проведены биометрические исследования ПЧСЖ во время регенерации следующих органов и тканей: кожи, слизистой оболочке желудка и печени. Установлено, что во все сроки регенерации кожи биометрический показатель ПЧСЖ достоверно выше той. которая должна быть у крыс с данной массой тела. особенно это выражено на 14-е сутки - 126 + 635.

Аналогично этот показатель увеличен при заживлении слизистой оболочки желудка, развившейся в результате экспериментальной язвы по ОкаЬе /1971/,на 14-е сутки - 119 ♦ ЗЖ. Обращает на себя внимание тот факт, что к моменту окончания заживления слизистой оболочки желудка гипертрофия ПЧСЖ сохраняется.

Изучение биометрии СЖ на модели регенерации печени представлено на рис.5.

Видно, что.как и работах других авторов, травма запускает процесс посттравматической гиперплазии в печени. Максимум ее отмечается через 28 часов после травмы /рис. 5а/. Затем темпы пролиферации снижаются. Одновременно с этим увеличивается сухая масса ПЧСЖ /р>г.5б/. Наибольшая ее величина определяется через 24 часа от начала регенерации - 112%. Также видно, что изменение величины МН и сухой массы ПЧСЖ - есть взаимосвязанный процесс. Во время увеличения первого показателя, второй снижается и наоборот. Данный вид регуляции процессов носит название функциональной зеркальной симметрии /А.П.Дубров,1987/.Сразу после травмы печени увеличивается масса ПЧСЖ. где синтезируются гормоны роста (ЭФР и ФРН) и только после этого возникает резкое усиление пролиферации в гепатоцитах.Р" время этого'пролиферативного взрыва" масса ПЧСЖ возвращается к норме,а после снижения пролиферативной активности в печени ПЧСЖ вновь гипертрофируются.Мы считаем, что второй пик синтетических процессов в СЖ ( по-видимому синтез гормонов) необходим уже для гипертрофии клеток печени.Эта функциональная связь между массой ПЧСЖ и пролиферативной актавностью в гепатоцитах может быть описана следующим уравнением регресии:

% изменения массы ПЧСЖ 120

20 24 28 32

МИ а гепатоцитах в промилле

25

20

13 10

5 О

Рис.5-.

Зеркальная асимметрия мезду пролиферацией в печени и изменением массы ПЧСЯ после гепатотсмии.

0.0087Х + 0.004

где:у - масса ПЧСЖ в % к собственному контроля:х - величина пролиферации печени в промилле:0.0087 и 0.004 коэффициента уравнения : Г- 0.997.

Таким образом, изучение функционального состояния ПЧСЖ при развитии в организме процесса ПТР показало, что масса СЖ во всех изученных случаях достоверно увеличивается. Более выражено э^о при травме кожи и слизистой оболочки желудка, менее при травме печени, т.е. тест биометрической оценки ПЧСЖ показал гипертрофию последних, что подтверждает нашу гипотезу об участии гормонов СЖ в процессах регенерации. Следовательно, СЖ выполняют регулирующую роль с процессах посттравматической регенерации (ПТР).

На трех различных моделях регенерации: регенерации кожи спины, заживление слизистой оболочки желудка и регенерации печени были получены одинаковые результаты- процесс посттравматической регенерации сопровождается развитием достоверной гипертрофии ПЧСЖ,что подтверждает существование функциональных связей СЖ с другими органами и системами.

д/ эффективность некоторых методов коррекции патологии СЖ в динамике репаративных процессов.

На разработанных нами моделях для изучения факторов запуска и течения ПТР СЖ мы провели экспертную оценку действия ряда факторов . Целью этих исследований было сопоставление полученных экспертных оценок о возникновении посттравматических митогенов и ходе реализации программы ПТР с широко применяемыми в практической медицине манипуляциями.

Было изучено образование посттравматических митогенов ( на модели с тест-объектом ЭР)в случае изменения вида анестезии животных, при экспериментальной кровопотере.а также при введении "противомикробных препаратов.

Установлено.что кровопотеря возникающая в результате сиалотомии не влияет на образование неспецифических митогенов .в том числе и эритропоэтнна.Введение противомикробных препаратов для профилактики гнойных осложнений короткого (белый стрептоцид)или пролонгированного действия (бициллин-l).тормозит образование митогенов в средним на 33-60%. Единственным ,из исследованных, факторов способствующих запуску ПТР оказалась замена гексеналового (общего) наркоза на местную анестезию новокаином.В этом случае усиление пролиферации в ЭР максимальное -240 +_36% .

Затем была изучена регенерация СЖ при изменении условий ее запуска и развития. В результате проведенных экспериментов с се-

лективным с воздействием на рецепторы тучных клеток показано, что изменение условий запуска ПТР. возникающей после односторонней сиалотомии ПЧСЖ, путем однократного введения экзогенного гистами-на или блокады гистаминовых (Н1 )рецепторов, однозначно тормозит развитие регенерации.в случае применения блокатора Н2 рецепторов не развивается и викарная гипертрофия.

Нами предпринята попытка использовать для этой цели нетрадиционный метод воздействия, а именно, было изучено течение ПТР ПЧСЖ при стимуляции 5 акупунктурных точек (АТ) кожи применяемые для лечения болезней СЖ у человека,симметрично (С1. E36.F2.PN25.PH60).Для анализа данных был применен метод кластерного анализа (X.Арене,Ю.Лейтер, 1985).Выяснено.что прижигание некоторых участков кожи ( точки акупунктуры) вызвало усиление регенерации, но только у 13% крыс. Причем отмечается изменение механизма регенерации:усиление регенерации в травмированной железе на 23%,сопровождается снижением викарной гипертрофии на 26%.

Помимо факторов общего воздействия на регенерацию мы изучили местное применение коллагеновой губки, содержащая гидроксиапатит /препарат "Ко-папол"/. т. к. в литературе показано, что препараты, содержащие коллаген и гидроксиапатит. оказывают стимулирующее действие на регенерацию (В.В.Серов. А.Б.Шехтер. 1981;№еип5 е1 а!..1986). Препарат "Гидроксиапол" разрешен для применения в стоматологической практике решением Фармкомитета от 23.12.1993. (Протокол N 23).

Микроскопическое исследование СЖ показало следующее.Губка "Колапол"вызывает умеренное асептическое воспаление в окружающей ткани ( отек,нейтрофильная инфильтрация,какрофагальная реакция). 1С 14 суткам большая часть губки рассасывается,а частицы гидроксиа-патита фагоцитируются макрофагами.Под влиянием губки усиливается образование железистой ткани атипичного строения, в основном состоящей из мелких внутридольковых протоков, между которыми располагаются тяжи фибробластов. немногочисленные нейтрофилы и молодые-сосуды. Среди эпителиальных клеток протоков видны клетки с митозами, в их цитоплазме отмечается повышенное содержание РНК .. При обычном течении регенерации отрастание новой атипичной тка-• от края резекции происходит в значительно меньшем объме.

Мы использовали разработанные модели для экспертной оценки ряда манипуляций применяемых в клинической медицине.Под эксперт-

ной оценкой нами понималась оценка факторов запуска и результатов постттравматической регенерации, по сравнению с обычным течением регенерации .т.к. эти результаты не поддаются непосредственному измерению.Обобщая полученные результаты можно сказать, что запуск программы ПТР доведен в эволюции во всех своих деталях до совершенства (Д.С.Саркисов.1987). а различные воздействия на нее (введение антибиотиков.антигистаминных препаратов, общий наркоз) вызывают нарушение ее хода.а не стимуляцию процесса.Более эффективные результаты были получены при изменении местных условий во время регенерации :введение ГАП содержащей коЛлагеновой губки в место резекции СБ для закрытия паренхиматозного кровотечения.вызвало регенерацию железистой ткани от края раны.

ДОКЛИНИЧЕСКОЕ ИСПЫТАНИЕ НОВЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ НА МОДЕЛЯХ ПАТОЛОГИИ СЛЮННЫХ ЖЕЛЕЗ, а)синтетический М -холинолитическнй препарат КГ-62. В последние годы были выявлены отдельные подтипы мускарниовых холинорецепторов - Ml - М4 . /В.Б.Долго-Сабуров. Ю.А.Шоро-хов.1989/. В связи с вышесказанным, представляет интерес разработка новых препаратов с более селективным действием . В ИНЭОС им. А.Н.Несмеянова РАН. синтезирован эфир фенил - альфа гидрохси-циклогексил - фосфиновой кислоты /Р.И.Волкова к др.,1982/, который обладает достаточно высокой М-холинолитической активностью in vitro .условное название препарат КГ - 62.

Обладая количественной модель» для оценки функции секреторных клеток (на СЖ находятся М-холинорецепторы "келезистого" подтипа -М^ ) мы изучили свойства препарата КГ - 62 в сравнении с фармакопейным препаратом метацин. Обнаружено, что доза метацина. необходимая для блокады пилокарпина /1 мг/кг/, составляет 1,5 -2,0 мг/кг. Аналогичное исследование с КГ - 62 показало, что необ-

Рнс.5.Формула КГ-62.

ходимо большее количество вещества - 3-5 мг/кг. Таким образом, препарат КГ - 62 оказывает М- холинолитическое действие. Скорость блокады М-ХР при данном способе введения не отличается от действия метацина, но по своей эффективности он-примерно в два раза слабее метацина.

Затем было изучена возможность кумуляции КГ-62. т. к. метацин обладает данным свойством.После введения препаратов в течении 5 -10 дней (5 мг/кг. дважды в день, подкожно).была обнаружена их кумуляция: слюноотделение возникло при введении значительно больших доз М-холиномиметика. При этом использованная модель позволила выявить различие между препаратами.Во-первых стимуляция М-ХР пилокарпином. вызвала у крыс, получавших метацин, более слабое слюноотделение. чем у получавших препарат КГ-62. До некоторой степени эта разница сохраняется в течении 5-и сут после прекращения инъекций препаратов.Во-вторых,при изучении повременной динамики слюноотделения .отчетливо видно, что в одном случае /метацин/ количество образующейся и вытекающей слюны быстро нарастает,* достигая максимума через 10-15 минут (рис.6а). Тогда как,в другом случае /КГ-62/. слюноотделение начинает возрастать после латентного периода /5 минут/, который особенно выражен на 10- сутки опыта (рис.бб).

■ На втором этапе исследования была оценена токсичность испытуемого препарата (срок до 10 суток) и выяснено,что он малотоксичен: не обладает каким либо побочным действием на систему крови. ЖКТ и почки. Можно лишь отметить уменьшение концентрации холестерина в крови,что характерно для М-холиноблокаторов (И.Н.Се-мененя,1988).Одновремено с зтим было обнаружено органотрОпное влияние М-холинолитикбв: многократные инъекции препаратов, обладают антистрессовым действием, которое более выражено у метацина.

На третьем этапе была изучена фармакологическая (противовоспалительная и ранозаживлягащая )эффективность КГ-62 на разработанных моделях.В результате установлено следующее. Применение периферических М-холиноблокатов, при хронизации воспаления (образовании очагов некроза и свищах), с одной стороны, снижает воспаление и нормализует электролитный и белковый состав слюны, а с другой стороны, торможение секреторных процессов приводит к ослаблению экскреции слюны и кистозному перерождению ацинарной ткани.М-холи-нолитики неблагоприятно влияют на течение ПТР ПЧСЖ.Тормозится регенерация ткани в зоне дефекта, нарушаются процессы слюноот-

о.з

ДОТАЦИИ

Ч.* •

ал ■

1 10 '. 20 Г7з(

■""иг

Рис. в*

Влияние хронического «ведения М-холинолитиков на пило каолиновое слюноотделение (5-6 сутки опит»). Обозначения:

по оси абсцисс - время сбора слюны после введения пилокарпина,

по оси ординат - количество слюны в мл.

деления и биосинтеза белка в СХ. Эти исследования показали, что одновременная оценка морфологии н функции С2 при экспериментальной терапии позволяет дать более полнее представление о фармэф-фектах М-холинолитиков.

б)синтетический водорастворимый антиоксидант дибунат-натрий.

Участникам очень большого числа химических реакций, протекающих в живой клетке являются свободные радикалы, среди которые наиболее известным является перекисное окисление липидов- /ПОЛ/. Нарушение регуляции ПОЛ и истощение собственных антиоксидантньи систем (АОС) организма являются важным звеном в патогенезе многш заболеваний, т.к. при этом происходит накопление токсических продуктов. Одним из наиболее изученных синтетических АО, являете! препарат ДИБУНОЛ.Недостатком его является нерастворимость в во-

о.з ■

кг 62

1 !Б ' 20 30 ' 40

Рис.6 б

Обозначения тв же, что и на рис. 6 «

де.Ц лаборатории фосфоорганических соединений института ИНЭОС им. А. II Несмеянова РАН синтезирован водорастворимый аналог дибунола пол условным названием ДПБУНАТ-НАТРИЙ (ДБН).

В модельных экспериментах iv vitro установлено, что ДБН по своей антиоксидантной активности занимает место между дибу-нолом / 1,07 10- М*-1/ и естественными растительными антиоксидан-тами / 10* - 10* M"'/.

При изучении токсичности препарата ДБН,в сравнении с фармакопейным препаратом ДИБУНОЛ установлено отсутствие негативного влияния на гемопоэз.Отмечается только увеличение заряда мембран эритроцитров.Многократные иньекции препаратов вызвали ионный дисбаланс. что характерно для антиоксидантов (АО).Они также вызвали снижение в крови активности трансаминаз и щелочной фосфатазы на

Фармэффективность ДБН проверялась in vivo на моделях патологии СЖ,т.к. во-первых в слюне есть свободные радикалы, которые образуются в процессах антибактериальной защиты и ферментным. путем в перексидазных реакциях /И.А.Переслегина.1989/;во-вторых, АО ферменты слюны участвуют в процессах -проницаемости гистогемати-ческих барьеров /Guy et al.,1989/;в-третьих, переход различных веществ и органических и неорганических из крови в СЖ и наоборот через гематосаливарный барьер,является важным физиологическим барьером в системе органов пищеварения /Л.Г.Комарова.1988/.а ди-бунол оказывает воздействие на электролитный баланс организма.

На модели с ЭГС установлено.что дибунат-натрия. оказывает вает воздействие на течение этого патологического процесса. С од-нон стороны нормализуются общие показатели воспаления: СОЭ и количество лейкоцитов,увеличивается масса СЖ. С другой стороны, не восстанавливается слюноотделительная функция (рис.9),наблюдается дисбаланс электролитного состава крови и слюны.

H—г СН-С

CHj I

Рис.7.Формула дибуната-натрия.

50Т

шике/кг

РИС.8.

Влияние дибуиата-натрия на скорость слюноотделение у крыс с экспериментальный гнойным сиаладенитон.

На модели ПТР СК у животных с общим облучением.что является прототипом комбинированного лечения опухолей СТ. у человека, (из вестно.что АО дабунол эффективен при лучевой болезни)установлен лечебное действие ДБН на многочисленные гнойно-воспалительные ос локнения. возникающие после сиалотомии у облученных животных. Од новременно с этим, препараты тормозят процессы роста: и регенера ция и викарная .ипертрофия .либо не развиваются, либо тормозятся Угнетающее действие АО на процессы роста не могло не отразитьс на. функциях СЖ: значительно снижается слюноотделительная функция В группе крыс, получавших ннъекции ДБН, она составила 67% о контроля. Одновременно с этим ДБН оказал благотворное влияние н состояние проницаемости гематосаливарного барьера для одновал&нт ного иона калия,двухвалентного нона кальция и холестерина Таки образом,применение АО ДБН для коррекции регенерации осложнение

эблучением эффективно .Исчезают гнойники, нормализуется . до ка-■сой то степени, электролитный состав слюны.

Таким образом, разработанные модели были успешно использованы цля доклинической оценки фармакологических свойств двух новых препаратов. Показано ,что только одновременное функциональное и ■юрфологическое исследование позволяет сделать правильный вывод эб эффективности препаратов. В частности выяснено.что М-холиноли-гические препараты могут привести к образованию кист при сиаладе-нитах.Следовательно,разработанные модели воспаления и регенерации СЯ позволяют объективно оценить фармакологические эффекты препаратов .которые используются или потенциально могут быть используемы для лечения этих видов патологии .

ВЫВОДЫ.

1.Основные приспособительные и патологические процессы в слюнных железах могут быть смоделированы в эксперименте.что позволяет исследовать эффективность лекарственной стимуляции или коррекции этих процессов.

2.С помощью морфометрического показателя величины сухой массы ПЧСЖ разработана логико-математическая модель посттравматической регенерации слюнных желез.ее формула и программа для количественной оценю!.Созданная модель посттравматической регенерации позволила выяснить механизм развития адаптации слюнных желез

в ответ на травму. Независимо от объема удаленной ткани .большая ге часть восстанавливается в травмированной железе, а функция не восстановленной железистой кассы компенсируется викарной гипер-грофией парной железы.

3.В запуске и развитии посттравматической регенерации принимают участие гуморальные митогены из очага воспаления.Этот процесс регулируется с помощью медиаторов вегетативной нервной системы.

4.Выделение гуморальных регуляторов посттравматической регенерации (митогенов и их ингибиторов) из поврежденной ткани проползается более недели и представляет собой саморегулирующейся троцесс в виде затухающего колебания.

5.Между функциональным состоянием региональных лимфатических /злов и количеством регенерирующей ткани слюнных желез существует толожительная корреляция.Экзогенные воздействия на региональную

лимфоидную ткань существенно изменяют течение посттравматической регенерации.

6.Гипертрофия слюнных желез.развивающаяся после снижения резцового прикуса, не является адаптивной (физиологической), а представляет собой модель одного из видов патологии слюнных желез- сиалоза.

7.Получена новая модель сиалоза - термосиалоз,который возникает при перегреве твердых тканей резцов у крыс, что отражает существенную роль процедуры препарирования зубов в стоматологической клинике.

8.Многократное введение М-холиноблокаторов в сочетании с травмой желез приводит к образованию кист в ацинарной ткани.что может быть использовано в качестве модели.

9.Посттравматическая регенерация в различных по локализации и структуре тканях организма сопровождается типертрофией больших слюнных желез,что отражает взаимосвязь между внутренними органами и слюнными железами.

10. На математической модели посттравматической регенерации показано,что многие манипуляции, применяемые во время операции на слюнных железах, являются отрицательными факторами по отношению к запуску и ходу регенерации.

11.На разработанных моделях патологии слюнных желез проведено доклиническое изучение фармакологических свойств нового М- хо-линолитического препарата КГ-62 и рекомендовано его клиническое испытание.Доклиническое испытание нового водорастворимого антиоксиданта дибунат натрия показало его эффективность при лече нин сналаденита осложненного общим облучением.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ.

1.Вычислены уравнения регрессии,с помощью которых можно, без забоя животных . по массе крысы установить величину любой из больших слюнных желез(ПЧСЖ.ПЯСЖ.ОУСЖ).

2. Построены калибровочные кривые для определения концентрации ионов натрия,калия.кальция, фосфора и белка по скорости слюноотделения .При сравнительной оценке секреции ионов и белка, результаты в различных экспериментах необходимо нормировать на единую скорость слюноотделения (10 мл/час/ кг).

3.Нагрев тканей зуба до 60 градусов и выше, при одонтопрепа рирование зубов без охлаждения,приводит к развитию патологическо

гипертрофии слюнных желез (сиалозу) в результате постстрессового сиалоза.

4.Введение М-холиноблокаторов с цель» торможения слюноотделения после травм СЖ пириводит к образованию кист в них.

5.Введение антибиотиков или сульфаниламидных препаратов, с целью предупреждения гнойных осложнений во время операции на железистой ткани, тормозит процесс регенерации.

6.В клинической практике рекомендуется, по возможности, не применять антигистаминные препараты и общий наркоз,т.к. эти факторы тормозят запуск посттравматической регенерации.

СПИСОК РАБОТ.ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ.

1.0 формировании регенерационного стимула после травмы подчелюстной слюнной железы и печени при тотальном угнетении симпатической нервной системы.// Бюлл. экспер.биол.н мед. 1901.-Т.91.Но.3.-С.364 -365 (соавт.В.В.Михайлов) .

2.0 роли иннервационного аппарата в механизме развития сиала-денкта при бактериальных интоксикациях //Актуальные проблемы современной патофизиологии (тез. докл.). Киев.1981.-С.239-240 (соавт. В. В. Михайлов .Е.Н.Померанцева и др.).

3. Нейродистрофический процесс в механизме нарушения функций слюнных желез.// Повреждения и регуляторные процессы организма. Тезисы докл. III Всесоюзного съезда патофизиологов.Тбнли-см.1982.-С.65-66 (соавт.В. В.Михайлов,Н.А.Чикнна, А.Г.Русанова и

дМ.

4.0 роли парасимпатической нервной системы в пролиферации клеток эпителия роговицы у крыс после травмы подчелюстной слюнной железы.//Бюлл.экспер.биол.н мед.1982.-Т.ЭЗ.-Ко.4.- С.13-15 (соавт. В. В. Михайлов ).

5.Анализ сыворотки крови после травмы подчелмстиой слюнной железы у крыс.//Там же.1982.Т.94.-No.8.-С.108-110 (соавт.A.A.Бело-польский ,E.H.Померанцева).

6.Митотический индекс в эпителии при альтерации тканей с различной пролифератавной активностью.//Там же. 1983.Т. 95.-Но.3.-С.66-67.

7.Влияние изменения численности стада на пролиферацию эпителия роговицы. //Пат.физиол.1984.-Но.1.-С.66-67.

8.Биометрические аспекты регенерации слхмных желез у крыс.//Сравнительные аспекты изучения регенерации и клеточной

пролиферации ( Тезисы 7-ой Всесоюзной конференции по вопросам регенерации) . М. 1985. ч.I.-С.83-84.

9.Влияние апоферментных форм витамина В12 и фолиевой кислоты на содержание катехоламинов в железистой ткани при многократном скусывании нижнечелюстных резцов .//Рук.деп.ред.журн.Фарм.и ток-сикол.реф.14280 в ВИНИТИ НО.7054-В.Деп.4.10.1985.11.С. (со-авт.В.В.Михайлов.Н.А.Чикина.В.И.Авахумов).

10.К механизму посттравматической гиперплазии в слюнной железе. //Экпер.анализ функций биол.систем.(Докл.МОИП за (1982 Г.)М.1985.-С.128-130.

И.Роль медиаторов вегетативной нервной системы в адаптации клеток к различным экстремальным факторам.//Физиология и биохимия медиаторных процессов .(Тезисы докл.1У Всесоюзной конф.)М.1985.-ч.I.-С.101-101.

12.Колебательный характер развития компенсаторной пролиферации в начальный период после острой травмы.//Гистогенез и регенерация (Тез.конф.)Л.ВМА.1986.-С.94-94.

13. Реакция больших слюнных желез крысы на некоторые фармакологические воздействия в условиях патологии.//Тезисы докл.1У зональной конф.по регенерации органов и тканей животных и ее стимуляция. Ереван.1986.С.7-8 (соавт.Р.А.Дружинина.Л.А.Зотова.Е.Н.Померанцева ).

14.Роль эндогенных регуляторов в компенсаторном процессе при резекции слюнной железы.//Билл.экпер.биол.1987.-Т. 103.-N0.4.-С.473-47ь (соавт.Е.Н.Померанцева, Л.А.Зотова).

15.Роль вегетативной нервной системы в развитии экспериментальной гипертрофии субмандибулярных желез у крыс .//В сб.:Морфология компенсаторных процессов.Иваново. 1987.-С.34-36 (соавт. Г. К. Цой, С. С. Качкачева).

16.Дисперсионный анализ морфофункциональной компенсации больших слюнных желез под'воздействием травмы.//В сб.: Биометрические аспекты изучения целостности организма.И.МГУ. 1987.-С.41-57.

17.Нейрогумо^альноз воздействие одонтопрепарирования на возникновение гипертрофии больших слюнных желез у крыс .//В сб. долевые и вегетативные синдромы и заболевания лица и полости рта.М.ММСИ.1987.-С.26-27 (соавт.Г.В.Большаков ).

18.Экспериментальное обоснование применения М-холинолитикоз при сиаладенитах и резекции слюнных желез.//В сб.:Диагностика и лечение воспалительных и дистрофических заболеваний челюстно-ли-

цевой области.Ред.Л.Г.Шаргородский. Смоленск.1988.-С.64-67(соавт. А.И.Волохин,H.A.Карданов,H.H.Годовиков и др.).

19. Особенности течения воспаления и посттравматической регенерации подчелюстной слюнной железы у крыс под влиянием М-холинолй-тиксв .//Нарушение механизмов регуляции и их коррекция. (Тез. докл. IY Всесоюзного съезда патофизиологов) . М. 1989.Т.II.-С.439-439(соавт. Н.А. Карданов,Н.Н.Годовиков. Р.А.Дружинина,Померанцева E.H.). '

20. Количественные подходы к изучению регенерации больших слюнных желез у крысы.//Реактивность и регенерация тканей. Тез.докл.конф.Л.BMA.1990. С. 23-23.

21.Влияние температурного фактора на структурное состояние эмали зубов крыс.//Стоматология. 1920. Т.69. -Но.3.-С.16-18(соавт. Г.В.Большаков ,Л.А.Дмитриева.А.И. Воложин, Н. И. Ершова).

22.Влияние фосфорорганического М-холннолитика КГ-62 в эксперименте на сердечно-сосудистую и другие системы организма.Отчет о НИР заключительный.Московский мед.стом.пн-т.(ММСИ).Руководитель А.И.Еоложин- ГР Но. 018700855425.89.09.27.-191 С.//ВНТИ-центр.Сб. рефератов НИР и ОКР.Серия 8.1990.-Ко.3.Реф.02890059923

23.Реактивная гипертрофия слюнных желез после одонтопрепариро-вания.//Рукопись деп.журн." Стоматология".-05.02.91.-N0.574-B91.9 с. (соавт.Г.В.Большаков.Л.В.Дубова).

24.Применение нового М-холинолитического препарата КГ-62 для коррекции течения экспериментальной язвы хелудха.//Билл, экс-пер.бнол. 1991. -Т.112.-Но.7.-С.27-30 (соавт. Л. С.Куликов.Н.А.Карда-ков .H.H.Годовиков)

25. Некоторые аспекты регенерации болызих слюнных желез у крыс.//В сб.:Проблемы адаптации биологических систем -к экстремальным факторам.(Докл.МОНП.сер.Общая биол.за 1989 г.). 11991.-С. 54-57.

26. Влияние М-холинолитиков на заживление ран кожи в эксперименте. //Там же.С.67-69(соавт.Н.А. Карданов.P.A. Дружинина А.И.Воложин.E.H.Померанцева ).

27. Регуляция репаративных процессов в стоматологической прак-гике.//В сб. .-Тезисы докл.научно-практ.кснф.посвящ.70-летию fMCH.-?i. 1992.-С.87-89(соавт. А.И.Воложин .Р.А.Дружинина .Е.Н.По-(еранцсва ).

28.Ультраструктура подчелюстной слюнной железы крысы после ам-|утации резцов.//В сб.:Актуальные вопросы стоматоло-

гии.(Тез.докл.XII обл.научно-практ.конф.стоматологов).Тверь.1992. С.6-6(соавт.С.П.Бойкова).

29. Влияние нового антиоксиданта дибуната натрия на течение си-аладенитов и регенерацию кожи в эксперименте.//Там же.С.7-7 (соавт. А. И. Воложин. Р. А. Дружинина ,H.A.Карданов ).

30.Типовые формы патологии слюнных желез.(методическое пособие) .М. ММСИ. 1992.72 с.

31.Использование моделей патологии слюнных желез для скрининга новых лекарственных препаратов.//Мат.юбилейной конф.НШ] ММСИ.М.1993.-С.73-73.

32. Ранозаживляккцие гемостатические свойства гидроксиапатитсо-держащей губки коллапол.//Раны и раневая инфекция.Тезисы докл. международной конф.М.1993.С.235-236 (соавт.А.И.Воложин.Р.А.Дружинина .E.H.Померанцева и др.).

33. Слюноотделительная функция при экспериментальном сиаладени-те у крыс и ее коррекция новым антиоксидантом дибунатом натрия. //В сб.: Актуальные проблемы стоматологии (Мат.научно-практ. конф. детских стоматологов.посвящ.10-летию кафедрь

стоматологии детского возраста.Уфа.1993.-С. 64-65(соавт.Р. А.Дружинина .Е.Н.Померанцева).

34.Участие тучных клеток в запуске посттравматической регенерации подчелюстной слюнной железы у крысы .//Материалы конгресс* ассоциации морфологов (АГЭ).Тюмень.1994.Морфология.-1993.-Т.105,í 9-10.-С. 71-71.

35. Типовые формы патологии слюнных желез (учебное и справочно« пособие со 100 контрольными вопросами)«.ММСИ.1993.122 с.

36.Роль гистамина в запуске посттравматической регенерацш подчелюстной слюнной железы крысы.//Бюлл.экспер. биол. 1994.-Т.117.-NO.3.-307-309.

37.Гипертрофия слюнных желез .механизмы развития и методы моделирования (обзор).//Стоматология.-1994.-No 3.-С.86-92.

- 45 -ДЕНИСОВ А. Б.

Механизмы патологических н приспособительных процессов при заболеваниях слюнных желез ( экспериментальное исследование)

С помощью многомерного статистического анализа разработаны новые, адекватные для каждого вида патологии слюнных желез (СЖ), модели. Это позволило выяснить .что- СЖ способны к адаптации: большая часть поврежденной ткани регенерирует, а функция не восстановленных клеток компенсируется викарной гипертрофией контрала-теральной железы.В процессе посттравматической регенерации СЖ принимает активное участие регионарная лимфоидная ткань.при воздействии на которую можно существенно изменить ее ход. Обнаружено, что нагревание поверхности зубов, при их обтачивании,вызывает гипертрофию СЖ.Гипертрофия СЖ, возникающая после скусывания резцов у грызунов,является одним из видов патологии СЖ - сиало-зом. Разработанные модели позволяют проводить скрининг новых противовоспалительных средств.

Denisiv А.В.

The mechanisms of the pathologic and adaptalilitied processes during the salivary gland diseases (the experimental investigation)

New models,corresponding to the each Kind of the pathology of the saliviry glands (SG) have been worked out by using multidi-mentional statistic analysis.It gives a chance to discover that SG are able to the adaptation :most 6f the damaged tissue regenerated andt the function or the unreconstructed cells is compensated by vicarions hypertrophy of the ipsilaterale gland. The regi-onaly lymph nodes take an active part in the process of posttraumatic regeneration and the process can efficiently changes under the acting on this tissue. The following fact has been discoved-red: the warning of the tooth surface during their treatment causes the SG hypertrophy.The hypertophy of the SG arised under the rat incisar amputations is one of the kind of pathology SG the sialosis. The new models give us a possibility to lead scrining of the new antiinflammatory agents.

АКТУАЛЬНОСТЬ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Актуальность исследования механизмов патологических процессов в СЖ вызвана несколькими причинами. Во-первых, существует практическая потребность в изучении этиологии и патогенеза ряда заболеваний СЖ, количество которых неуклонно увеличивается. Вместе с тем диагностика и особенности лечения этой патологии не претерпели существенного прогресса, что обусловлено почти полным отсутствием функциональных исследований. По данным Seifert и соавторов (1987), заболевания СЖ имеют следующий состав / 9883 наблюдения за 1965 - 84 годы /: 60% опухолевые заболевания, 30% - воспалительные заболевания - сиаладенит, 10% прочие болезни. Этой патологии подвержен не только человек, но и домашние животные /0,3% от всей патологии собак и кошек, причем у собак в 2 раза чаще/. При гистологическом исследовании обнаружены пять категорий заболеваний: 30% - злокачественные опухоли, 26% - сиаладениты, 9% - кисты СЖ, 9% -инфаркт, остальные 20% включают в себя сиалозы, сиало-литиаз, доброкачественные опухоли, вторичные поражения СЖ при общей или шейной лимфосаркоме или при фибросаркоме (Spongier, Culberton,1991).

Вторым аспектом этой проблемы является развитие синдромов, для которых характерно нарушение связи СЖ с гомеостатическими функциями организма. В-третьих, есть необходимость в более детальном изучении фундаментальных механизмов адаптации СЖ к экстремальным воздействиям, т.к. существующие сведения о них противоречат общей концепции развития компенсаторных и адаптивных процессов в организме.

Практически, в патогенезе всех видов патологии, особенно редких, существуют неизученные звенья. Например, до сих пор неизвестна этиология синдрома Съегрена - тяжелейшего системного заболевания. Многообразие клинических проявлений при одном и том же заболевании приводит к значительным затруднениям в их диагностике. Есть потребность в разработке новых способов диагностики и лечения на основе подробного изучения заболеваний.

А это в свою очередь требует наличие адекватных экспериментальных моделей заболеваний, на которых возможно изучение вышеизложенных вопросов. Потребность в изучении этиологии и патогенеза заболеваний СЖ, вызвала интерес у многих исследователей (В.В.Афанасьев,1993;Э-Ф.А. Бичкене,1989; Д.Ш.Дедвариани,1988; Т.А.Губерская,1991; В.С. Колесов 1987; Н.Н.Михайленко,1986; И.М.Рабинович,1985; О.В.Рыбалов,1987; Г.И.Ронь,1992;О.И.Сенчилов,1991; и другие).

Экспериментальные исследования в этом направлении проводятся в основном с использованием моделей воспалительных заболеваний, в то время как не воспалительные болезни СЖ не менее часты. Поэтому актуальной проблемой патофизиологии является разработка моделей всех заболеваний

СЖ, максимально адекватным заболеваниям человека в клинической практике.

Четвертая группа нерешенных вопросов патологии СЖ связана с более широким (скорее биологическим, чем клиническим) кругом вопросов. По традиции идущей от академика И.П. Павлова с начала века, все исследования по физиологии и патологии СЖ связывают с функционирова-нием ЖКТ. Вместе с тем, исследованиями многих авторов показано, что СЖ не только участвуют в пищеварении, но обладают и другими важными функциями. В частности защитно-трофической для тканей полости рта. Слюна также является основным источником буферных систем в полости рта и защищает твердые ткани зубов от деминерализации во время приема пищи. В случае приема ксенобиотиков /лекарств, пищевых добавок и др./ СЖ могут выполнять экскреторную функцию. При развитии патологии почек, СЖ начинают, частично, выполнять выделительную функцию.

В последние 20 лет получила подтверждение гипотеза о инкреторной функции СЖ, что ставит их в ряд органов не только с исполнительной, но и с регуляторной функцией. Установлено, что большие СЖ синтезируют и ин-кретируют биологически активные вещества, имеющие общее строение: длинные полипептидные цепи, сходные с проинсулином. Обнаружено уже 11 факторов. Наиболее детально изученным из них является фактор роста нервов (ФРН).В 1986 году Р. Леви - Монтальчини /Италия/ и Стэнли Коэн

США/ за открытие и описание ФРН получили Нобелевскую премию в области физиологии и медицины.

Одновременно с этим, исследователи, главным образом клиницисты, обнаружили и описали функциональные взаимосвязи СЖ с другими органами и системами (Л.Сазама.1971; И.Ф. Ромачева и др., 1987). И только в одной работе утверждается, что патология СЖ не имеет корреляционной связи с состоянием организма (Д. Урбутене, 1980).

Поэтому представляются очень спорными рекомендации ряда клиницистов, в случаях безуспешного консервативного лечения сиаладенитов в СЖ, их удаление (Г.И.Ронь,1985; В.В. Неустроев,1986; R.Schultz, J. Wood,1983; M.Arrigu, E.Myers,1990). Ряд хирургов предлагают в дополнении с экстирпацией патологически измененных СЖ проводить денервацию ушно-височного нерва (А.М. Солнцев и др.1987; E.Benedek-Spok,T.Szekely,1985), или облучить рентгеновскими лучами (В.С. Колесов, 1987). К такому же результату приводит перевязка протока СЖ /Л. Са-зама, 1971; С.Г.Безруков,1991/ или введение в проток затвердевающего клея (R.Zaskawi et al,1988).

Как уже отмечалось выше, ответная реакция /компенсаторная/ СЖ на патогенные воздействия противоречат общебиологической логике. Дело в том, что вот уже много лет утверждается, что в ответ на травму почти не развивается ПТР СЖ и нет их викарной гипертрофии /А.Г.Бабаева,1987/. Все вышесказанное свидетельствуют о необходимости проведения направленного исследования этих вопросов, позволило бы расширить представление о патогенезе неопухолевых заболеваний СЖ. Разработка адекватных моделей патологии СЖ позволит проводить доклинический скрининг новых, патогенетически обоснованных, методов лечения.

ЦЕЛИ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ

Основной целью исследования является изучение приспособительных (регенерация) и патологических (воспаление, дистрофия, кистообразование) процессов в слюнных железах в модельных экспериментах и доклиническое испытание действия новых лекарственных средств на этих моделях.

Для достижения поставленных целей были сформулированы следующие задачи: а) в теоретической области:

- разработать адекватные количественные показатели (морфологические и функциональные) СЖ,

- разработать новые количественные модели для изучения факторов запуска ПТР и ВГ,

- изучить роль лимфоидной ткани в запуске ПТР и ВГ,

- изучить роль отдельных звеньев ВНС в процессе ПТР и ВГ, б) в экспериментальной области:

- оценить эффективность применяемых в практике методов на развитие ПТР и ВГ с использованием математического моделирования,

- провести доклинические испытания новых: М - холиномилитика КГ-62 и антиоксиданта - дибуната натрия с использованием методов математического моделирования на разработанных моделях воспаления (сиаладенит) и дистрофии (сиалоз) СЖ.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА И ПРАКТИЧЕСКАЯ ЦЕННОСТЬ

На основе методов одно - и многомерного математического анализа данных, разработаны количественные показатели БСЖ. Это позволило впервые показать, что механизмы адаптации БСЖ к травме /сиалотомии/ не противоречат типовому патологическому процессу: развивается ПТР травмированной железы и одновременно возникает ВГ парной железы.

Разработаны новые модели патологии СЖ:

- острого гнойного сиалоаденита,

- термосиалоза,

- кистофиброза,

- математическая модель ПТР и ВГ, и программа для ее обсчета на программированном микрокалькуляторе МК-52,

- модель для поиска гуморальных факторов запуска ПТР и ВГ.

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ

1. Для исследования патологии в СЖ разработаны новые, адекватные для каждого случая, экспериментальные модели.

2.Модель для изучения ПТР позволила выяснить, что парные СЖ способны к полноценной адаптапции в случае повреждения одной из них: большая часть утраченной железистой ткани восстанавливается в поврежденном органе, а полноценность функции слюноотделения компенсируется парной неповрежденной железой. Тем самым показано, что СЖ по своей способности к ПТР не являются исключением из общей закономерности регенерации органов у млекопитающих.

3.В запуске ПРТ принимает участие регионарная лимфоидная ткань. Воздействия на нее (ускорение лимфооттока или замедление его) существенно изменяет течение ПТР.

4. Доказано, что широко используемые в теоретических исследованиях модели гипертрофии СЖ , с помощью снижения резцового прикуса или введения адреномиметиков не являются физиологической гипертрофией, а есть один их видов патологии СЖ - сиалоз.

5.Запуск ПТР СЖ является типовой адаптивной реакцией, закрепленной эволюцией в генотипе, поэтому попытки стимулировать ее путем какого либо воздействия ,как правило, безуспешны.

6.Разработанные модели позволили изучить воздействие различных факторов на механизмы развития патологических процессов в СЖ и тем самым успешно решать задачи практической стоматологии. Так обнаружено, что перегревание твердых тканей зубов при их одонтопрепарировании вызывает термосиалоз. Иньекции М - холинблокаторов с целью торможения слюноотделения при свищах, способны вызвать образование кист в последних. На моделях сиаладенитов изучена противовоспалительная эффективность двух новых препаратов.

АПРОБАЦИЯ ДИССЕРТАЦИИ

Результаты исследований доложены на секции морфологии Московского общества испытателей природы (МОИП)в 1982 и 1989 г. ; на 7-ой Всесоюзной конференции по регенерации (1985);на 1У Всесоюзной конференции по физиологии биохимии медиаторных процессов (1985);на научных конференциях по регенерации в ВМА (Ленинград, 1986,1990);на 1У Всесоюзном съезде патофизиологов (Кишинев, 1989);на международной конференции "Раны и раневая инфекция"(Москва,1993).

ПУБЛИКАЦИИ ПО МАТЕРИАЛАМ ДИССЕРТАЦИИ

По материалам диссертации опубликовано 37 работ.

ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ

Диссертация изложена на 335 страницах. Состоит из введения, обзора литературы, трех глав собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций, списка литературы ,который содержит 340 источников (187 отечественных,153 иностранных); иллюстрирована 21 таблицей и 51 рисунком.

ВЫВОДЫ

1.Основные приспособительные и патологические процессы в слюнных железах могут быть смоделированы в эксперименте, что позволяет раскрыть механизмы их развития и исследовать эффективность лекарственной стимуляции или коррекции этих изменений.

2.С помощью морфометрического показателя величины сухой массы ПЧСЖ разработана логико-математическая модель посттравматической регенерации слюнных желез, ее формула и программа для количественной оценки. Созданная модель посттравматической регенерации позволила выяснить механизм развития адаптации слюнных желез в ответ на травму. Независимо от объема удаленной ткани, большая ее часть восстанавливается в травмированной железе, а функция не восстановленной железистой массы компенсируется викарной гипертрофией парной железы.

3.В запуске и развитии посттравматической регенерации принимают участие гуморальные митогены из очага воспаления. Этот процесс регулируется с помощью медиаторов вегетативной нервной системы.

4.Выделение гуморальных регуляторов посттравматической регенерации (митогенов и их ингибиторов) из поврежденной ткани продолжается более недели и представляет собой саморегулирующейся процесс в виде затухающего колебания.

5.Между функциональным состоянием региональных лимфатических узлов и количеством регенерирующей ткани слюнных желез существует положительная корреляция. Экзогенные воздействия на региональную лимфоидную ткань существенно изменяют течение посттравматической регенерации.

6.Гипертрофия слюнных желез, развивающаяся после снижения резцового прикуса, не является адаптивной (физиологической), а представляет собой модель одного из видов патологии слюнных желез - сиалоза.

7. Новой моделью сиалоза является термосиалоз, который возникает при перегреве твердых тканей резцов у крыс, что отражает существенную роль процедуры препарирования зубов в стоматологической клинике.

8. Многократное введение М - холиноблокаторов в сочетании с травмой желез приводит к образованию кист в ацинарной ткани, что может быть использовано в качестве модели кистофиброза.

9.Посттравматическая регенерация в различных по локализации и структуре тканях организма сопровождается гипертрофией больших слюнных желез, что отражает взаимосвязь между внутренними органами и слюнными железами.

10. На математической модели посттравматической регенерации показано, что многие манипуляции, применяемые во время операции на слюнных железах, являются отрицательными факторами по отношению к запуску и ходу регенерации.

11. На разработанных моделях патологии слюнных желез проведено доклиническое изучение фармакологических свойств нового М - холинолитиче-ского препарата КГ-62 и рекомендовано его клиническое испытание. Доклиническое испытание нового водо-растворимого антиоксиданта дибунат натрия, показало его эффективность при лечении сиаладенита осложненного общим облучением.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ.

1.Вычислены уравнения регрессии, с помощью которых можно, без забоя животных, по массе крысы установить величину любой из больших слюнных желез (ПЧСЖ, ПЯСЖ, ОУСЖ).

2. Построены калибровочные кривые для определения концентрации ионов натрия, калия, кальция, фосфора и белка по скорости слюноотделения. При сравнительной оценке секреции ионов и белка, результаты в различных экспериментах необходимо нормировать на единую скорость слюноотделения (10 мл/час/ кг).

3.Нагрев тканей зуба до 60 градусов и выше, при одонтопрепарировании зубов без охлаждения, приводит к развитию патологической гипертрофии слюнных желез (сиалозу) в результате пост стрессового сиалоза.

4.Введение М -холиноблокаторов с целью торможения слюноотделения после травм СЖ приводит к образованию кист в них.

5.Введение антибиотиков или сульфаниламидных препаратов с целью предупреждения гнойных осложнений во время операции на железистой ткани, тормозит процесс регенерации.

6. В клинической практике рекомендуется, по возможности, не применять антигистаминные препараты и общий наркоз, т. к. эти факторы тормозят запуск посттравматической регенерации.