Автореферат и диссертация по медицине (14.03.03) на тему:Механизмы и закономерности нарушений состава жирных кислот в периферической крови беременных, плаценте и крови пуповины при обострении герпес-вирусной инфекции

На правах рукописи

ИШУТИНА Наталия Александровна

МЕХАНИЗМЫ И ЗАКОНОМЕРНОСТИ НАРУШЕНИИ СОСТАВА ЖИРНЫХ КИСЛОТ В ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ БЕРЕМЕННЫХ, ПЛАЦЕНТЕ И КРОВИ ПУПОВИНЫ ПРИ ОБОСТРЕНИИ ГЕРПЕС-ВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ

14.03.03 - патологическая физиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

2 8 НОЯ 2013

005540697

005540697

Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении «Дальневосточный научный центр физиологии и патологии дыхания» Сибирского отделения Российской академии медицинских наук

Научные консультанты:

академик РАМН Луценко Михаил Тимофеевич

доктор биологических наук Андриевская Ирина Анатольевна

Официальные оппоненты:

Власов Борис Яковлевич, доктор медицинских наук, профессор, Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Иркутская государственная сельскохозяйственная академия», профессор кафедры неорганической, органической и биологической химии; Корытов Леонид Иннокентьевич, доктор медицинских наук, профессор, Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Иркутский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации, профессор кафедры нормальной физиологии;

Дубровина Валентина Ивановна, доктор биологических наук, Федеральное казенное учреждение здравоохранения «Иркутский научно-исследовательский противочумный институт Сибири и Дальнего Востока» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, заведующая лабораторией патофизиологии.

Ведущая организация: Федеральное государственное бюджетное учреждение Научно-исследовательский институт фармакологии Сибирского отделения Российской академии медицинских наук, 634050, г.Томск, пр. Ленина, 3.

Защита состоится » декабря 2013 г. в 10 часов на заседании

диссертационного совета Д 001.038.02 при Федеральном государственном бюджетном учреждении «Научный центр проблем здоровья семьи и репродукции человека» Сибирского отделения Российской академии медицинских наук по адресу: 664003, г. Иркутск, ул. Тимирязева, 16.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Федерального государственного бюджетного учреждения «Научный центр проблем здоровья семьи и репродукции человека» СО РАМН.

Автореферат разослан ноября 2013 года.

Ученый секретарь диссертационного совета,

доктор медицинских наук, профессор Шолохов Леонид Федорович

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы

Приоритетность и значимость проблем, связанных с ГВИ, определяется высокой частотой (до 50-75%) рецидивов заболевания в период беременности (Кунгуров Н.В. и соавт., 2010; Новикова C.B., 2011; Климова P.P. и соавт., 2012), которые приводят к осложнениям гестационного периода в виде ранних токсикозов (Буштырева И.О., и соавт., 2010), органических изменений в плаценте (Луценко М.Т., Андриевская И.А., 2008; 2009; 2010), развитии фетоплацентарной недостаточности (Вареница А.Н. и соавт., 2006), спонтанных абортов, преждевременных родов, внутриутробного инфицирования плода (Адиева A.A., 2010; Мазанкова Л.Н., Горбунов С.Г., 2012), нарушений эмбриогенеза и врожденной патологии новорожденных, вплоть до летального исхода (Бабаченко И.В. и соавт, 2010; Халецкая О.В., 2010; Tourneur Е., Chassin С., 2013).

Среди беременных, серопозитивных в отношении ВПГ-1,2, угроза прерывания беременности возникает в 5, а многоводие - в 10 раз чаще, чем у серонегативных беременных. Инфицирование беременных ВПГ-1,2 в I триместре приводит к развитию у плода микро-, гидроцефалии, пороков сердца, желудочно-кишечного тракта, мочеполовой системы, скелета, катаракты, глухоты (Барановская Е.А., 2004; Боковой А.Г., 2010). Инфицирование во II и III триместрах вызывает у плода гепатоспленомегалию, анемию, гипотрофию, пневмонию, менингоэнцефалит, сепсис. Большинство случаев (90%) неонатального герпеса обусловлено асимптомным течением ГВИ у беременных, причем до 85% инфицированных ВПГ новорожденных ^ заражаются интранатально, проходя через инфицированные родовые пути матери (Исаков В.А. и соавт., 2006; Буданов П.В., Стрижанов А.Н., 2010; Дурасова H.A., 2010).

Значимость проблемы определяется и тем, что активация ГВИ способствует развитию функциональной дезинтеграции целого ряда обменных процессов, в том числе, липидного обмена, осуществляемого между матерью и плодом. Вполне очевидно, что определяющее значение в механизмах нарушений липидного обмена имеет перестройка липидного компонента (холестерол, фосфолипиды, жирные кислоты) в структуре клеточных мембран (Владимиров В.Ю., 2000; Гольдберг В.Е. и соавт., 2003; Еременко Ю.Р. и соавт., 2010), которая вызвана интенсификацией ПОЛ, накоплением свободно-радикальных продуктов, подавлением антиоксидантной защиты (Бутусова В.Н., 2007; Доброхотова Ю.Э. и соавт., 2008; Колесников С.И., Колесникова Л.И., Долгих В.В., 2008; Колесникова Л.И. и соавт., 2012). Следует отметить, что продукты избыточной пероксидации поддерживают гиперпродукцию эйкозаноидов, что приводит к неблагоприятным воздействиям на формирующиеся звенья фетоплацентарной системы (ткани плаценты, пуповина, маточно-плацентарное кровообращение). Нарушение какого-либо из звеньев вызывает существенные отклонения в состоянии плода и обуславливает фетоплацентарную недостаточность, которая угрожает его жизни и сопровождается гипоксией с отставанием развития, вызывает изменение

3

компенсаторно-приспособительных реакций в анте- и интранатальном периоде (Вареница А.Н. и соавт., 2006). В связи с эти, решение вопросов, связанных с изучением механизмов и закономерностей липидного состава в системе «мать-плацента-плод» актуально, и имеет важное социальное значение.

Вместе с тем, несмотря на освещенность проблемы патогенеза дислипидемии у беременных при различного рода осложнений гестационного периода, остаются не выясненными вопросы влияния ГВИ и степени ее выраженности на состояние липидных компонентов (фосфолипиды, жирные кислоты), определяющих микровязкостные и диффузионные свойства мембранного комплекса клеток (эритроциты, фетоплацентарный барьер). Не изучены факторы, вызывающие нарушения липидного состава у беременных с ГВИ. Не установлены причинно-следственные связи между активностью ВПГ-1 и состоянием жирно-кислотного состава в периферической крови беременных, плаценте и крови пуповины. Отсутствуют данные о степени выраженности эндогенной неферментативной антиокислительной активности, в частности, олеиновой кислоты, в подавлении свободно-радикальных продуктов и сохранения нативных свойств эритроцитов, что необходимо для выполнения ими газотранспортной функции. Недостаточно изучены вопросы трансплацентарной передачи жирных кислот в кровь плода при ГВИ. Поэтому оценка характера взаимоотношений активности ВПГ-1 в период гестации, состояние жирно-кислотного состава в периферической крови беременных и особенности трансплацентарной передачи данных веществ в патогенезе формирующегося синдрома задержки роста плода и гипотрофии новорожденного представляет одну из актуальных проблем патологической физиологии.

Цель исследования:

Установить механизмы и закономерности нарушений состава жирных кислот липидов в периферической крови беременных, плаценте и особенности их трансплацентарной передачи в кровь плода при обострении ГВИ.

Задачи исследования:

1. Определить патогенетическую значимость ВПГ-1, серотонина, ТЫ Ра, 1Ь-1, 1Шу в нарушении жирно-кислотного обмена, осуществляемого между матерью и плодом.

2.Оценить состояние процессов ПОЛ и антиоксидантной защиты в периферической крови беременных при обострении ГВИ: ТБК-активные продукты, активность неферментативных экзогенных (а-токоферол) и эндогенных (олеиновая кислота) биоантиоксидантов.

3. Установить общие закономерности и особенности структурной перестройки мембран эритроцитов периферической крови беременных при обострении ГВИ: состояние липид-белкового комплекса, вязкостно-эластические свойства мембран, активность ферментов, участвующих в липидном обмене (фосфолипаза А2).

4. Выявить особенности липидного спектра (общие липиды, триглицериды, ОХС, ХС-ЛПВП, ХС-ЛПНП) в периферической крови беременных при обострении ГВИ.

5.Раскрыть характер нарушений состава насыщенных (миристиновая, пентадекановая, маргариновая, пальмитиновая, стеариновая) и ненасыщенных (пальмитолеиновая, олеиновая, линолевая, а-линоленовая, арахидоновая, эйкозапентаеновая, докозагексаеновая) жирных кислот в плаценте при обострении ГВИ в период гестации.

6.Установить закономерности трансплацентарной передачи жирных кислот в кровь плода, ее жирно-кислотный состав и влияние выявленных изменений на формирование и развитие синдрома задержки роста плода и гипотрофии новорожденного при обострении ГВИ в период гестации.

Научная новизна исследования

Впервые установлена патогенетическая значимость ВПГ-1, нейрогормональных и иммунных факторов в нарушении жирно-кислотного состава липидов в периферической крови беременных, плаценте и крови пуповины. Разработана концептуальная модель, раскрывающая патогенез нарушений липидного обмена в системе «мать-плацента-плод», обусловленных увеличением антигенной нагрузки ВПГ, усиливающей циркуляцию периферического серотонина, ТЫРа, 1Ь-1, ГОТу, которые выступали индукторами процессов ПОЛ, дисфункции антиокислительной активности периферической крови (снижение концентрации а-токоферола и олеиновой кислоты) и низкой активности липид-переносящего белка, что приводило к недостаточному поступлению высокоэнергетических продуктов в кровь плода и являлось фактором развития синдрома задержки роста плода и гипотрофии новорожденного.

Доказана роль иммуномодулирующих факторов (антигены ВПГ-1, серотонин) в нарушении иммунного ответа и гиперпродукции макрофагами ЮТа, вызывающего изменения композиции фосфолипидного слоя мембран за счет деструкции ненасыщенных жирных кислот, что положено в основу способов оценки структурно-функционального состояния мембран эритроцитов периферической крови при обострении ГВИ.

Установлена ключевая роль олеиновой кислоты как эндогенного биологического антиоксиданта у беременных при обострении ГВИ.

Впервые по основным показателям состава жирных кислот, активности процессов ПОЛ и антиоксидантной защиты в периферической крови у беременных с ГВИ установлено, что группа «риска» по развитию синдрома задержки роста плода и гипотрофии новорожденного ребенка формируется при титре антител к ВПГ-1 1:12800 и является основанием для проведения патогенетически обоснованной терапии.

Теоретическая и практическая значимость работы

Получены теоретические и практические знания о закономерностях развития нарушений жирно-кислотного состава в морфофункциональной

5

системе «мать-плацента-плод», структурно-функционального состояния эритроцитов периферической крови беременных и крови пуповины при обострении ГВИ, позволяющие прогнозировать развитие синдрома задержки роста плода и гипотрофию новорожденного.

Полученные данные о закономерностях жирно-кислотного состава плаценты позволяют спрогнозировать не только течение беременности, рост и развитие плода, но и сформировать представление о первых годах жизни ребенка.

Разработаны оригинальные способы оценки структурно-функционального состояния мембран эритроцитов периферической крови у беременных (патент РФ № 2389021, 10.05.2010; патент РФ № 2458348, 10.08.2012; патент РФ № 2455647, 10.07.2012; патент РФ № 2467334,

20.11.2012); способ оценки повреждающего действия избыточного количества арахидоновой кислоты на эндотелий кровеносных сосудов пуповины при ГВИ (патент РФ № 2405155, 27.11.2010; патент РФ № 2485521, 20.06.2013); способ оценки подавляющего действия ГВИ на перенос липидов через фетоплацентарный барьер к развивающемуся плоду (патент РФ № 2485520,

20.06.2013).

Разработаны практические рекомендации диагностики и коррекции нарушений липидного состава у беременных с ГВИ с целью профилактики развития синдрома задержки роста плода и гипотрофии новорожденного.

Внедрение в практику

Разработанные способы оценки нарушений структурно-функциональных свойств эритроцитов периферической крови беременных (патент РФ № 2389021, 10.05.2010, патент РФ № 2458348, 10.08.2012, патент РФ № 2455647, 10.07.2012, патент РФ № 2467334, 20.11.2012); способ оценки повреждающего действия избыточного количества арахидоновой кислоты на эндотелий кровеносных сосудов пуповины при ГВИ (патент РФ № 2405155, 27.11.2010; патент РФ № 2485521, 20.06.2013); способ оценки подавляющего действия ГВИ на перенос липидов через фетоплацентарный барьер к развивающемуся плоду (патент РФ № 2485520, 20.06.2013) внедрены в научно-исследовательскую и клиническую практику отделения акушерской патологии беременности ФГБУ «Дальневосточный научный центр физиологии и патологии дыхания» СО РАМН (г. Благовещенск) и Хабаровского филиала ФГБУ «Дальневосточный научный центр физиологии и патологии дыхания» СО РАМН - НИИ охраны материнства и детства (г. Хабаровск); способ диагностики и коррекции нарушений липидного состава у беременных с ГВИ с целью профилактики развития синдрома задержки роста плода и гипотрофии новорожденного внедрен в практическую работу Амурского областного перинатального центра г. Благовещенска и педагогический процесс лечебного факультета кафедры акушерства и гинекологии ГБОУ ВПО «Амурская государственная медицинская академия» Минздрава России.

Материалы исследований рекомендуется внедрять в практическую работу научно-исследовательских лабораторий, использовать в учебно-

6

методических материалах для обучения студентов медицинских ВУЗов и профильных кафедр.

Положения, выносимые на защиту

1.При высокой антигенной нагрузке ВПГ-1 в период беременности развивается нейрогормональная и иммунная дисфункция, заключающаяся в увеличении в периферической крови концентрации серотонина, ТОТа, 1Ь-1, ЮТу, нарушающая жирно-кислотный обмен между матерью и плодом.

2. Обострение ГВИ у беременных нарушает состояние липид-белкового комплекса, вязкостно-эластические свойства мембран, изменяет активность ферментов, определяющих метаболизм жирных кислот (фосфолипаза А2), способствует структурно-функциональной перестройке эритроцитов периферической крови и развитию микроциркуляционных расстройств.

3.Высокая антигенная нагрузка ВПГ-1 в период гестации вызывает деструкцию фетоплацентарного барьера за счет усиления процессов ПОЛ в наружной мембране синцитиотрофобласта, способствует индукции фосфолипазы А2, нарушает состав насыщенных (миристиновой, пентадекановой, пальмитиновой, маргариновой, стеариновой) и ненасыщенных (пальмолеиновой, олеиновой, линолевой, а-линоленовой, арахидоновой, эйкозапентаеновой, докозагексаеновой) жирных кислот.

4.При обострении ГВИ в период беременности нарушаются механизмы трансплацентарной передачи жирных кислот в кровь плода в результате низкой концентрации липид-переносящего белка, что приводит к увеличению поступления в кровь плода насыщенных жирных кислот и предшественников провоспалительных эйкозаноидов: линолевой, арахидоновой кислот семейства ш-6, снижению эссенциальных а-линоленовой, эйкозапентаеновой и докозагексаеновой со-З кислот и является критерием формирования и развития, синдрома задержки роста плода и гипотрофии новорожденного ребенка.

Апробация работы

Основные положения диссертации и результаты исследований доложены и обсуждены на заседании Ученого Совета Федерального государственного бюджетного учреждения «Дальневосточный научный центр физиологии и патологии дыхания» Сибирского отделения РАМН (2012 г.); II съезде врачей-пульмонологов Сибири и Дальнего Востока, сателлитном симпозиуме «Фундаментальные аспекты оценки фетоплацентарной недостаточности при вирусных заболеваниях во время беременности» (Благовещенск, 25 октября 2007 г.); III Всероссийской научно-практической конференции «Здоровье девочки, девушки, женщины» (Томск, 11-12 ноября 2008 г.); Межрегиональной научно-практической конференции «Морфофункциональная характеристика фетоплацентарного барьера ворсинок плаценты беременных при вирусных повреждениях» (Благовещенск, 2-3 октября 2008 г.); VI Сибирском физиологическом съезде (Барнаул, 25-27 июня 2008 г.); Межведомственной научно-практической конференции с международным участием «Современные

проблемы исследований в биологии» (Благовещенск, 16 апреля 2009 г.); IV международной конференции «Системный анализ в медицине» (Благовещенск, 25-26 мая 2010 г.); VIII международной научно-практической конференции «Новейшие научные достижения» (София, Болгария, 17-25 марта 2012 г.); Дальневосточной научно-практической конференции с международным участием «Актуальные вопросы акушерства и гинекологии» (Благовещенск -Хэй-Хэ, 29 мая 2012 г.); научно-практической конференции «Вопросы сохранения и развития здоровья населения севера и Сибири» (Красноярск, 5-6 июня, 2012 г.); II съезде педиатров Дальнего Востока «Актуальные вопросы охраны материнства и детства на современном этапе» (Хабаровск, 21-22 июня 2012 г.); VIII международной научно-практической конференции «Динамика современной науки» (София, Болгария, 17-25 июля 2012 г.); VIII международной научно-практической конференции «Прикладные научные разработки» (Чехия, 27 июля - 5 августа 2012 г.).

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 57 научных работ, из них 31 статья в журналах, рекомендованных ВАК Минобразования и науки РФ,1 коллективная монография, 1 методическое пособие, 8 патентов РФ на изобретения.

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 248 страницах машинописного текста и имеет 28 таблиц и 5 рисунков. Собственно текст - 199 страниц. Работа состоит из введения, обзора литературы, 3 глав собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов и списка литературы, содержащего 325 отечественных и 118 зарубежных источников.

Весь материал, представленный в диссертации, получен, обработан и проанализирован лично автором.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Обследование беременных осуществлялось на базе научной лаборатории «Механизмов этиопатогенеза и восстановительных процессов дыхательной системы при неспецифических заболеваниях легких» совместно с отделением акушерской патологии беременности клиники Федерального государственного бюджетного учреждения «Дальневосточный научный центр физиологии и патологии дыхания» Сибирского отделения Российской академии медицинских наук и городским родильным домом г. Благовещенска.

Работа основана на результатах комплексного обследования с применением общеклинических, биохимических, морфологических и статистических методов исследования.

Все исследования были проведены с учетом требований Хельсинкской декларации Всемирной ассоциации «Этические принципы проведения научных медицинских исследований с участием человека» с поправками 2000 г. и

8

нормативных документов «Правила клинической практики в Российской Федерации», утвержденными Приказом № 266 от 19.06.03 Министерства здравоохранения и социального развития РФ.

Работа была одобрена комитетом по. биомедицинской этике Федерального государственного бюджетного учреждения «Дальневосточный научный центр физиологии и патологии дыхания» Сибирского отделения Российской академии медицинских наук, в соответствии с принципами конвенции о биомедицине и правах человека, а также общепризнанными нормами международного права. От всех здоровых и больных лиц было получено информированное согласие.

Было проведено динамическое обследование в I, во II и III триместрах 180 беременных, обратившихся в отделение акушерское патологии беременности с признаками ГВИ (средний возраст 30,0±4,5 лет). Все беременные были разделены на две группы: с активной формой хронической ГВИ с высокой антигенной нагрузкой (титр антител IgG к ВПГ-1 1:12800) (п=90) и латентной хронической ГВИ (титр антител IgG к ВПГ-1 1:3200) (п=90). Обязательным условием включения беременных в основные группы явилось наличие латентной или активной формы хронической ГВИ, вызванной ВПГ-1. Критерии исключения: острая форма первичной ГВИ, вызванная ВПГ-1, первичная и активная форма ВПГ-2, TORCH-инфекции в стадии обострения.

Клинический диагноз хроническая ГВИ был выставлен на основании клинико-лабораторного обследования с применением функциональных, иммуноферментных методов анализа, ПЦР. Результаты обследования беременных анализировали с позиции активности ГВИ по величине четырехкратного и более нарастания титра антител IgG к ВПГ-1, выявляемого по динамике через 10 дней в парных сыворотках, уровня авидности (более 65%) и наличия ДНК вируса ВПГ-1.

В контрольную группу вошли 90 практически здоровых беременных без признаков ГВИ, вызванной ВПГ-1 (средний возраст 31,1±4,9 лет), обследованных в динамике по триместрам.

Материалом для исследования служила периферическая кровь, которая забиралась из локтевой вены утром натощак, в сухую пробирку без консерванта. После отстаивания и центрифугирования полученная сыворотка использовалась для дальнейшего анализа. Для изучения исследуемых показателей в мембранах эритроцитов в качестве коагулянта использовали гепарин. Мембраны эритроцитов трижды отмывали физиологическим раствором и осаждали центрифугированием в течение 15 мин при 3000 g.

Одновременно проводилось гистохимическое и биохимическое исследование тканей зрелых плацент при родах в срок, полученных от тех же беременных (п=30). В контрольную группу вошли плаценты от практически здоровых беременных (п=30).

Для получения гомогената плодовая часть плаценты (ворсинчатый хорион) срезалась скальпелем небольшими кусочками площадью до 2-3 см и толщиной 1 мм. Кусочки ткани помещали в химические стаканы, содержащие 200 мл физиологического раствора, отмывали от клеток крови, перемешивая на

9

магнитной мешалке в течение 15 мин, и подсушивали на фильтровальной бумаге. Ткань растирали и гомогенизировали до однородной массы. Гомогенат замораживали при температуре 20°С в течение суток. Затем размораживали и использовали для дальнейшего анализа.

Для оценки липидного статуса периферической крови беременных и гомогената плаценты, крови пуповины использовали следующие биохимические методы исследования: а) спектрофотометрический метод: концентрацию ТБК-активных продуктов определяли общепринятым методом с применением тиобарбитуровой кислоты (ТБК) по методу В.Б. Гаврилова и соавт. (1987 г.); липиды экстрагировали по методу Фолча (1957 г.). Готовые экстракты разделяли на индивидуальные фракции фосфолипидов на пластинках с тонким слоем силикагеля (Woelm, Германия). Двухмерную тонкослойную хроматографию и идентификацию индивидуальных фракций фосфолипидов осуществляли по методу Ю. Кирхнера (1981 г.); общие липиды выявляли с помощью сульфофосфованильного реактива; общий холестерол плазмы и триглицериды с помощью коммерческих наборов «Новохол» ЗАО «Вектор-Бест» (Новосибирск); холестерол липопротеидов высокой плотности посредством коммерческих наборов «ЛВП-Холестерин-Ново» ЗАО «Вектор-Бест» (Новосибирск); холестерол липопротеидов низкой плотности находили расчетным методом по общепринятой формуле: ХС-ЛПНП = ОХС - (ХС-ЛПВП +ТГ/2,2); жирные кислоты, входящие в состав липидов, после их метилирования, определяли методом газожидкостной хроматографии на хроматографе «Кристалл 2000м» (Россия) с пламенно-ионизационным детектором, капиллярной колонкой HP-FFAP (5ммх0,32мм><50м). Температура колонки 220°С, температура испарителя 240°С, температура детектора 260°С. Газ-носитель — азот. Анализ и идентификацию пиков выполняли с помощью программно-аппаратного комплекса «Хроматэк Аналитик 2,5» по временам удерживания с использованием стандартов фирмы «Supelco» (США). Количественный расчет хроматограмм проводили методом внутренней нормализации путем определения площадей пиков анализируемых компонентов и их доли (в относительных %) в общей сумме площадей пиков метилированых продуктов высших жирных кислот;

б) флюорометрический: содержание а-токоферола определяли по прописи L.G. Hansen et Warwich W.I. (1966 г.); уровень серотонина в периферической крови оценивали по Л.Я. Прошиной (1981 г.); измерение микровязкости мембран эритроцитов проводили методом латеральной диффузии гидрофобного флуоресцентного зонда пирена. Определение микровязкости основано на образовании эксимеров (активных димеров) пирена в липидном окружении. Флуоресценцию пирена измеряли на спектрофлюориметре «Hitachi» (Япония). Оценка микровязкости основывается на вычислении коэффициента эксимеризации пирена (K3KC=F47o/F395), который равен отношению интенсивности флуоресценции эксимеров к интенсивности флуоресценции мономеров. Коэффициент эксимеризации находится в обратной зависимости от микровязкости;

в) иммуноферментный метод анализа: выявление типоспецифических антител к ВПГ-1 проводили в парных сыворотках с помощью наборов ЗАО «Вектор-Бест» (Новосибирск); - уровень TNFa в сыворотке крови оценивали, используя наборы реактивов ООО «Цитокин» (Санкт-Петербург); - содержание INFy в сыворотке крови оценивали с помощью наборов реактивов ООО «Протеиновый контур» (Санкт-Петербург); - уровень IL-1 в сыворотке крови определяли с использованием наборов ЗАО «Вектор-Бест» (Новосибирск); -активность фосфолипазы А2 определяли с помощью наборов реактивов фирмы «Cayman chemical» (США); - измерение содержания липид-переносящего белка проводили с помощью наборов «Hbt human H-FABP ELISA» (США);

г) электрофоретический: исследование белкового спектра мембран эритроцитов проводили с помощью вертикального одномерного диск-электрофореза в градиентном (7,5-10%) полиакриламидном геле в присутствии 0,1% раствора додецилсульфата натрия по модифицированной методике U. Laemmli. Полипептидные зоны окрашивали в 0,1% растворе Кумасси R-250, 50% растворе спирта и 7% растворе уксусной кислоты. Идентификацию электорофореграмм проводили при длине волны 590-600 нм с помощью установки «BioDocAnalize», (Германия). Ориентировку фрагментов оценивали в соответствие с рекомендациями Т. Steck (1974 г.). Использовали маркеры: catalase (bovine) MW 240 kDa, aldolase (rabbit muscle) MW 240 kDa, albumin (bovine serum) MW 67 kDa, albumin (egg) MW 45 kDa, cytochrome С MW 12,4 kDa фирмы «Serva» (Германия).

Гистологические методы исследования Перекиси жирных кислот выявляли по методу Винклера-Шульца с использованием в качестве субстрата п-амино->},М-диметилфенилендиамин на парафиновых срезах после фиксации 4% раствором параформальдегида на фосфатном буфере (pH 7,4).

Статистические методы исследования

Статистическая обработка и анализ данных осуществлялась с использованием стандартного пакета прикладных программ STATISTICA 6.1 Stat-Soñ Inc, США. Тестирование параметров распределения проводилось с помощью критерия Колмогорова-Смирнова. Анализируемые в работе данные имели нормальное распределение, поэтому рассчитывалось достоверность различий значений по Стьюденту (вычисление средней арифметической (М), средней ошибки (т)) и различия дисперсий по Фишеру на уровне 95% вероятности.

Для оценки тесноты связи признаков применяли корреляционный анализ с расчетом коэффициентов парной корреляции Пирсона (г). Линейный коэффициент корреляции вычислялся по формуле и применялся для измерения меры зависимости (г=1 — зависимость очень сильная; г>0,7 — хорошая мера зависимости; г>(0,4-0,7) - средняя мера зависимости; г>(0,05-0,4) - низкая мера зависимости; г<0,05 - зависимость отсутствует).

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

Закономерности липидного состава в периферической крови беременных на разных сроках гестации при обострении ГВИ

Проблема ГВИ в последние годы становится все более значимой в связи с ростом частоты заболеваний данной патологии. Многочисленные наблюдения свидетельствуют, что частота возникновения ГВИ и тяжесть заболевания выше у иммунокомпрометированных лиц, в том числе у беременных и новорожденных ввиду незрелости их иммунной системы (Бейманова Е.В., 2006; Бабаченко И.В. и соавт., 2010). Учитывая прогрессирующую инфицированность беременных ВПГ, инфекция представляет серьезную проблему в акушерстве и гинекологии (Дурасова H.A., 2010; Исаков В.А.и соавт., 2010). Прежде всего, это обусловлено ролью герпеса в инфицировании плода и новорожденного (Байбарина E.H. и соавт., 2009). Заболевание у новорожденных на фоне физиологического иммунодефицитного состояния может приобретать крайне тяжелые формы, приводя к летальным исходам и инвалидизации ребенка (Вареница А.Н. и соавт., 2006; Буданов Н.И., 2010).

Высокий риск осложнений беременности и развитий патологии плода определяется особенностью биологической аффинности ВПГ к нервным и иммунокомпетентным клеткам. Диссеминация возбудителя в сенсорные ганглии, при инфицировании беременных приводит к стимуляции в периферической крови серотонина, оказывающего тормозное действие на иммунные реакции (Вельков А.Ю., 2000). Следует отметить, и о непосредственном влиянии ВПГ на лимфоциты и макрофаги, в строме и цитоплазме которых наблюдается экспрессия вируса в виде элементарных телец, что неизбежно ведет к продукции ими провоспалительных цитокинов (TNFa, INFy), обладающих цитолитическим и цитотоксическим действием на клеточные структуры (Луценко М.Т., Соловьева A.C., 2009; 2010; Кравченко Л.В. и соавт., 2012).

Следовательно, взаимообусловленное влияние ВПГ-1 и серотонина на иммунные реакции организма женщин в период беременности является патогенетически обусловленным фактором, способным изменять характер внутри- и межклеточных обменных процессов в системе «мать-плацента-плод», в том числе, и липидный метаболизм.

Исследования, проведенные у беременных с обострением ГВИ (титр антител IgG к ВПГ-1 1:12800), показали, что активация вируса в нервных ганглиях стимулировала выработку в периферической крови серотонина на протяжении всего периода гестации (табл. 1).

Возможно, повышение секреции моноамина усиливало действие антигена ВПГ-1 на лимфоидные органы, что изменяло иммунный ответ беременных и приводило к повышению продукции макрафагальными клетками TNFa. Действительно, в периферической крови беременных, перенесших обострение ГВИ в различные сроки гестации, регистрировался достаточно высокий уровень TNFa, причем, более выраженное повышение наблюдалось при титре антител IgG к ВПГ-1 1:12800.

12

Кроме того, в периферической крови беременных с ГВИ наблюдалось увеличение уровня 1Ь-1, участвующего, совместно с ТОТа, в дифференцировке лимфоцитов в сторону формирования плазматических клеток. Параллельно отмечалось и увеличение в крови беременных с обострением ГВИ ЮТу на протяжении всего срока гестации с максимальными значениями при титре антител ДО к ВПГ-1 1:12800 (табл. 1).

Таблица 1

Показатели серотонина, Т1\Га, 1Ь-1, /АТ-у в периферической крови

Показатели Контроль Титр антител IgG к ВПГ-1

1:3200 1:12800

I триместр Серотонин, мкмоль/л 0,42±0,03 0,69±0,02* 1,16±0,01*

TNFa, пг/мл 15,22±0,17 27,50±1,80* 51,50±1,90*

IL-1, пг/мл 18,60±1,20 22,20±2,01 50,00±5,70*

INFy, пг/мл 124,40±2,50 242,69±10,0* 450,0±12,0*

II триместр Серотонин, мкмоль/л 0,47±0,09 0,73±0,06* 1,20±0,04*

TNFa, пг/мл 17,81±0,19 44,12±1,20* 81,30±1,50*

IL-1, пг/мл 20,70±1,35 38,60±3,05* 80,0±4,90*

INFy, пг/мл 130,20±2,10 273,20±6,50* 465,30±8,20*

III триместр Серотонин, мкмоль/л 0,53±0,07 0,81±0,05* 1,40±0,05*

TNFa, пг/мл 25,0±1,02 52,30±2,02* 98,40±2,8*

IL-1, пг/мл 25,80±2,20 41,10±2,60* 93,30±3,40*

INFy, пг/мл 138,90±2,40 312,10±4,80* 480,50±20,03*

Примечание: * — различия статистически значимы при p(t)<0,05, p(F)<0,05.

Следовательно, антигены вируса герпеса, циркулирующие в организме беременной, приводят к накоплению в периферической крови нейрогенных (серотонин) и иммунных провоспалительных (TNFа, IL-1, INFy) факторов, что обуславливало интенсификацию перекисного окисления липидов (ПОЛ).

При анализе состояния процессов ПОЛ было установлено, что у женщин с высокой антигенной нагрузкой (титр антител IgG к ВПГ-1 1:12800) концентрация ТБК-активных продуктов в мембранах эритроцитов периферической крови повышалась. Однако, при низкой антигенной нагрузке (титр антител IgG к ВПГ-1 1:3200) активность процессов ПОЛ не достигала значимых изменений в I и во II триместрах гестации (табл. 2).

Необходимо отметить, что параллельно изменению интенсивности ПОЛ при активации ГВИ отмечалось угнетение активности системы защиты организма от продуктов пероксидации липидов, что выражалось снижением содержания а-токоферола в плазме периферической крови беременных на протяжении всего периода гестации. Причем, более выраженная динамика изменений концентрации а-токоферола в плазме крови беременных с ГВИ

определялась в период, когда титр антител IgG к ВПГ-1 составлял 1:12800, тогда как при низкой антигенной нагрузке (титр антител IgG к ВПГ-1 1:3200) данный показатель статистически значимо не изменялся в I и в III триместрах (табл. 2).

Таблица 2

Содержание ТБК-активных продуктов (ммоль/л) в мембранах эритроцитов и а-токоферола (мкг/мл) в плазме периферической крови беременных с

обострением ГВИ (М±т)

Показатели Контроль Титр антител IgG к ВПГ-1

1:3200 1:12800

I триместр ТБК-АП а-токоферол 7,90±0,60 1,63±0,12 9,20±0,70 1,54±0,09 15,10±0,60* 1,35±0,0б*

II триместр ТБК-АП а-токоферол 9,50±0,65 1,86±0,02 11,40±0,65 1,71±0,03* 17,20±0,40* 1,54±0,01*

III триместр ТБК-АП а-токоферол 10,80±0,72 1,93±0,07 13,0±0,50* 1,85±0,06 20,0±0,55* 1,59±0,04*

Примечание: * - различия статистически значимы при p(t)<0,05, p(F)<0,05.

Следовательно, в периферической крови беременных при обострении ГВИ, формируются условия, снижающие антиокислительную активность крови, что приводило к индукции ПОЛ, накоплению ТБК-активных продуктов.

Вместе с тем, необходимо отметить, что антиоксидантная защита клетки определяется не только уровнем токоферолов, но и количеством эндогенно синтезируемой олеиновой кислоты.

Активация ГВИ в период беременности приводила к снижению концентрации олеиновой кислоты в плазме и мембранах эритроцитов в течение всего периода гестации и находилась в зависимости от титра антител к ВПГ-1 (табл. 3).

Таким образом, у беременных с ГВИ напряженность окислительного стресса, регистрируемая по динамике уровня а-токоферола, концентрации ТБК-активных продуктов, прогрессивно возрастает пропорционально степени выраженности воспалительного процесса. Однако, содержание антиоксиданта а-токоферола недостаточно для поддержания гомеостаза организма, что может приводить к истощению антиоксидантной защиты и будет способствовать росту процессов радикалообразования с формированием конечных продуктов. При всем этом, а-токоферол является антиоксидантом, который не образуется в клетках и должен поступать извне, в отличие от олеиновой кислоты, синтезируемой в организме.

Возможно, недостаточность функционирования антиоксидантной системы в организме беременных с высокой антигенной нагрузкой (титр

антител к ВПГ-1 1:12800), включает дополнительное использование олеиновой кислоты, для ингибирования токсинов, находящихся в кровяном русле, а, следовательно, более лабильное в регуляторном отношении.

Таблица 3

Содержание олеиновой кислоты в периферической крови беременных с

обострением ГВИ (% от суммы) (М±т)

Группа Плазма Мембраны

Титр антител Ig G к ВПГ-1 I триместр контроль 1:3200 1:12800 16,45±0,41 15,26±0,29* 14,06±0,35* 18,38±0,60 17,51±0,56 16,12±0,74*

II триместр контроль 1:3200 1:12800 17,10±0,36 16,30±0,30 15,64±0,21* 19,24±0,52 18,30±0,70 17,40±0,63*

III триместр контроль 1:3200 1:12800 16,87±0,24 15,0±0,32* 13,44±0,26* 19,86±0,68 18,73±0,48 16,51±0,57*

Примечание: * - различия статистически значимы при р(0<0,05, р(Р)<0,05.

Поэтому, можно предположить, что обмен олеиновой кислоты, характеризующийся снижением содержания данного соединения в периферической крови беременных с обострением ГВИ, являлся компенсаторным механизмом, направленным на уменьшение повреждающего действия токсических радикалов, образующихся в результате активации процессов ПОЛ. Олеиновая кислота является эндогенным антиоксидантом и захватчиком АФК.

Одним из важнейших показателей, отражающих обмен в организме беременной, является количественный и качественный состав фосфолипидов в плазме периферической крови и клеточных мембранах.

Активация ГВИ в период беременности сопровождалась перераспределением плазменных и мембранных фосфолипидов. Так, содержание фосфатидилэтаноламина в плазме крови беременных с высокой антигенной нагрузкой (титр антител к ВПГ-1 1:12800) достоверно

снижалось на протяжении всего периода гестации (табл. 4). Возможно, уменьшение содержания фосфатидилэтаноламина в плазме периферической крови беременных с обострением ГВИ, характеризующимся высоким содержанием ПНЖК, обусловлено их активным включением в реакции свободно-радикального окисления, которые в условиях ГВИ находятся на достаточно высоком уровне.

Таблица 4

Показатели состава фосфолипидов плазмы крови у беременных с

_обострением ГВИ (% от суммы) (М±т) _

Группа Фосфатидил-этаноламин Фосфатидил-холин Сфинго-миелин Лизофосфа-тидилхолин

I триместр

Контроль 1:3200 1:12800 21,2±1,80 19,4±1,20 18,0±1,0* 48,1±2,3 42,3±1,6* 40,2±1,8* 26,2±1,1 29,3±1,2 35,0±2,0* 4,5±0,40 6,3±0,60* 6,8±0,70*

II триместр

Контроль 1:3200 1:12800 27,0±2,0 24,3±1,8 20,1±1,5* 47,4±2,7 43,2±1,8 40,1±1,7* 24,7±1,8 28,2±1,6 34,0±1,4* 4,2±0,30 4,3±0,50 5,8±0,50*

III триместр

Контроль 1:3200 1:12800 25,2±1,6 21,3±1,4 19,4±1,2* 48,5±1,7 45,1±1,7 43,0±1,6* 24,1±1,2 28,7±1,1* 32,2±1,3* 3,80±0,20 4,9±0,40* 7,4±0,60*

Примечание: * - различия статистически значимы при р(Х)<0,05, р(Р)<0,05.

Снижение содержания фосфатидилэтаноламина в плазме крови беременных с высокой антигенной нагрузкой (титр антител ^С к ВПГ-1 1:12800) приводило к уменьшению концентрации фосфатидилхолина, который может образовываться по дополнительному пути синтеза - метилированием фосфатидилэтаноламина. Однако, вероятно, что в условиях обострения ГВИ происходит блокировка данного пути образования фосфолипида. Действительно, в плазме периферической крови беременных, перенесших в период гестации обострение ГВИ с высокой антигенной нагрузкой (титр антител к ВПГ-1 1:12800) наблюдалось снижение содержания

фосфатидилхолина (табл. 4).

Наряду с этим, в плазме крови беременных с ГВИ выявлялось увеличение содержания сфингомиелина (табл. 4).

Необходимо отметить, что в плазме периферической крови беременных с обострением ГВИ возрастало содержание лизофосфатидилхолина (табл. 4), обладающего хаотропным действием на протяжении всего периода гестации. Увеличение содержания лизофосфатидилхолина в плазме периферической крови у беременных с обострением ГВИ, может быть результатом активации двух систем. Во-первых, нарастание концентрации моноацильного лизопроизводного фосфатидилхолина в плазме периферической крови беременных в условиях ГВИ является непосредственным результатом усиленного гидролиза фосфатидилхолина в органах и тканях, откуда данный

гидрофильный метаболит может легко поступать в кровь. Во-вторых, лизофосфатидилхолин может синтезироваться по альтернативному пути с участием лецитин-холестерол-ацилтрасферазы.

Таким образом, в плазме периферической крови беременных отмечались изменения фосфолипидного состава; которые находились в зависимости от степени выраженности ГВИ.

Выявленные изменения фосфолипидного спектра плазмы периферической крови беременных при обострении ГВИ отражались на составе фосфолипидов мембран эритроцитов. В условиях ГВИ в периферической крови беременной накапливались токсические продукты, способствующие распаду клеточных структур, в том числе, самих эритроцитов.

Отражением дестабилизации мембран эритроцитов у беременных с ГВИ являлось снижение содержания фосфатидилэтаноламина (табл. 5).

Таблица 5

Состав мембранных фосфолипидов у беременных с обострением ГВИ

(% от суммы) (М±т)

Группа I триместр II триместр III триместр

Фосфатидилэтаноламин

Контроль 24,1±1,0 20,6±0,6 23,4±0,6

1:3200 22,7±0,9 19,3±0,7 22,7±0,9

1:12800 20,3±0,8* 16,5±0,7* 21,8±0,5*

Фосфатидилхолин

Контроль 30,9±0,80 32,2±1,3 33,1±2,2

1:3200 27,8±0,82* 29,4±1,0 30,2±1,8

1:12800 26,6±0,57* 28,7±0,9* 27,6±1,3*

Сфингомиелин

Контроль 20,2±0,80 20,6±0,6 22,5±1,2

1:3200 21,4±0,78 22,2±0,8* 24,3±1,2 '

1:12800 23,8±0,93* 23,4±0,45* 25,3±1,3 '

Лизофосфатидилхолин

Контроль 4,0±0,70 5,3±0,60 7,2±1,20

1:3200 5,9±0,63* 6,2±0,70 8,1±0,80

1:12800 6,3±0,94* 7,5±0,39* 9,9±0,58

Фосфатидилсерин

Контроль 7,8±0,65 9,0±0,80 4,0±0,20

1:3200 9,7±0,90 11,3±0,63* б,2±0,40*

1:12800 11,0±1,0* 12,9±0,57* 7,4±0,90*

Фосфатидилинозитол

Контроль 12,8±0,50 12,3±0,40 9,8±0,30

1:3200 12,5±0,61 11,6±0,55 8,5±0,40*

1:12800 12,0±0,60 11,0±0,63 8,0±0,80*

Также при активации ГВИ в период гестации снижалось содержание фосфатидилхолина в мембранах эритроцитов (табл. 5). Обеднение эритроцитов фосфатидилхолином, формирующим внешнюю оболочку липидного матрикса клетки свидетельствует о дезинтеграции мембранных структур, завершающихся их деструкцией. Повышение антигенной нагрузки (титр антител к ВПГ-1 до 1:12800) способствовало увеличению содержания сфингомиелина в мембранах эритроцитов беременных с ГВИ (табл. 5).

Изучая содержание фосфатидилсерина в мембранах эритроцитов женщин, беременность которых осложнялась обострением ГВИ, выявили повышение данного липида при титре антител к ВПГ-1 1:12800 (табл. 5).

Нарушение нормального количественного соотношения отдельных фракций фосфолипидов приводит к дестабилизации липидных структур клеточных мембран. Доказательством этого процесса являлось накопление специфического маркера мембранодеструкции лизофосфатидилхолина. В эритроцитах периферической крови при ГВИ содержание лизофосфатидилхолина увеличивалось в течение всего периода гестации при высокой антигенной нагрузке (титр антител к ВПГ-1 1:12800), тогда как при низкой антигенной нагрузке (титр антител к ВПГ-1 1:3200)

статистически значимо не изменялось. Увеличение лизофосфатидилхолина, обладающего мембранотоксическим действием, способствует разрыхлению гидрофобной области липидного слоя мембран эритроцитов.

На изменение физических свойств мембран эритроцитов (наряду с уменьшением фосфатидилэтаноламина и фосфатидилхолина, увеличением сфингомиелина) указывало снижение содержания фосфатидилинозитола в эритроцитарных мембранах беременных с ГВИ (табл. 5).

Следует отметить, что процесс высвобождения лизофосфатидилхолина и арахидоновой кислоты катализируется различными липолитическими системами. Высвобождение арахидоната из фосфолипидов мембран клеток происходит, главным образом, путем активации фосфолипазы А2 с последующим гидролизом сложноэфирной связи в 8п-2 позиции фосфолипидов. Поэтому, в условиях обострения ГВИ (повышенного содержания медиаторов воспаления — серотонин, Т№а, 1Ь-1, ШРу) отмечалось увеличение содержания фосфолипазы А2 в периферической крови беременных при высокой антигенной нагрузке (титр антител ^С к ВПГ-1 1:12800) (табл. 6).

Таблица б

Содержание фосфолипазы Аг в периферической крови беременных III

триместра с обострением ГВИ (нг/мл) (М±т)

Группа Фосфолипаза А2

Контроль 1:3200 1:12800 0,45±0,08 0,53±0,08 0,70±0,0б*

Следовательно, активация ПОЛ, обнаруженная по накоплению ТБК-активных продуктов в периферической крови беременных при обострении ГВИ, снижение уровня липидных антиоксидантов (а-токоферол, олеиновая кислота), вызывает активацию фосфолипазы А2, что усиливает гидролиз фосфолипидов и деструкцию ненасыщенных жирных кислот, способствуя, тем самым, структурной дезорганизации и трансформации эритроцитов.

Выявленная модификация фосфолипидного бислоя может явиться существенным фактором нарушения процессов, связанных с явлениями деструкции мембран эритроцитов, их барьерных функций, проницаемости, процессов активного переноса веществ, трансмембранных градиентов. Выраженность и динамика нарушений состава липидов в цитоплазматической мембране: перераспределение фосфолипидных фракций в системе лизофосфатидилхолин-фосфатидилхолин, снижение фосфатидилэтаноламина, находились в прямой зависимости от титра антител к ВПГ-1.

Важная роль отводится белкам как транспортным, ферментативным и рецепторным системам, осуществляющим структурную связь цитоскелета с внеклеточным матриксом, определяя, тем самым, морфологические и механические свойства клеток красной крови. Особое значение, в этом отношении, приобретают белки цитоскелета (спектрин, анкирин, белок полосы 4.1), определяющие способность эритроцитарной мембраны к обратимой деформации, белки - регуляторы газового и энергетического обменов (белок полосы 3), и белки, обладающие антигенпрезентирующими свойствами (гликофорины). При изучении относительного содержания белков цитоскелета мембран эритроцитов у беременных с ГВИ было установлено достоверное снижение уровней а, р-спектрина и анкирина, а также белка полосы 4.1 при одновременном увеличении доли актина, соответствующее степени тяжести заболевания (табл. 7).

На изменение функциональных свойств мембран эритроцитов беременных женщин указывали достоверно низкие значения белка полосы 3. В отношении показателей фракций белков полос 4.2, 4.5, 4.9 и 6 статистически достоверных изменений выявлено не было. Среднестатистические значения белка полосы 7 были повышены. Необходимо отметить и об увеличении фракции гликофорина, достигающее максимальных значений при титре антител к ВПГ-1 1:12800, что указывало на рост антигенной нагрузки на эритроцит (табл. 7).

Очевидно, что установленные закономерности нарушения состава фосфолипидов, основных белков мембраны и цитоскелета и их взаимодействий при ГВИ во время беременности являлись следствием низкой устойчивости эритроцитов периферической крови беременных к действию повреждающих факторов (антигены ВПГ-1, серотонин, ТЫБа, 1Ь-1, ЮТу), запускающих каскад мембранодестабилизирующих и мембранодеструктивных процессов (липопероксидация, протеолиз). В результате эритроциты утрачивают эластичность, теряют способность к изменению формы, необходимой для

прохождения по микрососудам, что приводит к усиленному их разрушению в сосудистом русле, создавая, тем самым, условия для развития гипоксии.

Таблица 7

Процентное содержание белков мембран эритроцитов в периферической _крови у беременных при обострении ГВИ (М±т)_

Показатели Титр антител к ВПГ-1 Контроль

1:3200 1:12800

а-спектрин 7,62±0,43 6,93±0,18* 7,89±0,24

Р-спектрин 8,47±0,31 7,65±0,12* 8,74±0,33

анкирин 3,40±0,44 2,55±0,15* 4,02±0,09

полоса 3 17,35±0,18* 15,78±0,29* 18,34±0,19

полоса 4.1 4,01±0,23 3,47±0,12* 4,38±0,18

полоса 4.2 7,74±0,54 8,15±0,41 7,25±0,12

полоса 4.5 10,16±0,32 10,60±0,33 10,34±0,12

полоса 4.9 9,17±0,27 9,60±0,18 9,19±0,10

актин 9,00±0,26 9,60±0,21* 8,87±0,24

полоса 6 8,53±0,19 8,93±0,16 8,34±0,18

полоса 7 7,64±0,11 8,44±0,13* 7,02±0,14

гликофорин 6,91±0,21* 7,62±0,38* 5,64±0,10

Примечание: * — различия статистически значимы при р(Т)<0,05, р(Б)<0,05.

Поэтому, учитывая важную роль структурных свойств мембран клеток в определении их функционального статуса, было проведено флюоресцентное зондирование эритроцитов. Степень эксимеризации неполярного зонда пирена, диффундирующего в гидрофобном компартменте мембраны, характеризует подвижность углеводородных цепей липидов, что позволяет использовать данный параметр для исследования вязкостных свойств липидной мембраны (Добрецов Г.Е., 1989). Поэтому нарушения фосфолипидного и белкового состава мембран эритроцитов являлись причиной снижения текучести и увеличения микровязкостных свойств клеток в условиях ГВИ. Данный факт подтверждался достоверно низкими значениями флюоресценции липотропного зонда пирен в липидном бислое (табл. 8).

Наряду с этим, выявлялось снижение параметров интенсивности флюоресценции пирена белок-липидной фазы (Рэ/Рм), отражавшее вовлечение в патологический процесс белкового компонента, что могло быть связано с нарушением белок-белковых взаимодействий, усилением диффузии белковых молекул в липидном бислое, вызванных усилением протеолитических процессов. Наиболее выраженное снижение средних значений степени эксимеризации пирена в мембранах эритроцитов беременных с ГВИ отмечалось при высокой антигенной нагрузке (титр антител к ВПГ-1 1:12800) (табл. 8).

Таблица 8

Показатели микровязкости мембран эритроцитов периферической крови _у беременных с обострением ГВИ (М±т)_

Группа Гэ/Рм, отн. ед.

Липидный бислой Липид-белковые контакты

I триместр

Контроль 0,98±0,09 1,0±0,07

1:3200 0,74±0,04 0,86±0,08

1:12800 0,56±0,05* 0,79±0,06*

II триместр

Контроль 0,68±0,05 1,29±0,05

1:3200 0,55±0,06 0,89±0,07*

1:12800 0,47±0,08* 0,67±0,07*

III триместр

Контроль 0,82±0,07 1,13±0,04

1:3200 0,69±0,06 1,05±0,07

1:12800 0,60±0,05* 0,86±0,08*

Примечание: * — различия статистически значимы при р(1;)<0,05, р(Р)<0,05.

Представленные данные свидетельствуют о том, что у беременных с обострением ГВИ имеет место изменение микровязкости мембраны эритроцитов, причем, наиболее выраженное при титре антител к ВПГ-1 1:12800. Тем самым, можно предположить, что изменения структуры мембраны при ГВИ в период беременности заключаются в повышении плотности липидного бислоя и увеличении полярности фосфолипидов в области локализации зонда. При этом гидрофильность молекул фосфолипидов, то есть, сродство их к воде повышается.

Из выше изложенного следует, что активация ГВИ в период беременности приводит к изменению состава белковых и фосфолипидных компонентов мембран и их структурной реорганизации, что отражается на относительной микровязкости. Увеличение микровязкости мембран эритроцитов сопровождается нарушением функционирования их транспортных и ферментных систем и изменением метаболического состояния всей клетки. Стойкие нарушения структурно-метаболического статуса и функциональной активности эритроцитов, активация ПОЛ, возникающие при обострении ГВИ, способствуют проявлению тканевой гипоксии, могут явиться причиной развития гемолитических анемий и нарушения окислительно-восстановительных процессов в организме беременной, развивающегося плода.

Изменения в составе липидов и системах его регуляции на протяжении периода гестации важны для понимания возникающих при патологии

отклонений, поскольку роль данных соединений заключается в участии их в построении клеточных мембран, обеспечении организма энергией и пластическим материалом, синтезе биологически активных веществ.

Если в период гестации происходило обострение ГВИ, то характер липидного состава в периферической крови беременных изменялся. Так были выявлены статистически достоверные изменения содержания общих липидов: их концентрация уменьшалась при высокой антигенной нагрузке (титр антител ДО к ВПГ-1 1:12800) (табл. 9).

Таблица 9

Содержание общих липидов, триглицеридов, ОХС, ХС-ЛПВП, ХС-ЛПНП в

периферической крови беременных с обострением ГВИ (г/л) (М±т)

Показатели Контроль Титр антител к ВПГ-1

1:3200 1:12800

Общие липиды, г/л 5,63±0,07 5,10±0,09* 4,18±0,09*

& о Триглицериды, ммоль/л 1,61±0,10 1,78±0,11 1,91±0,07*

и & ОХС, ммоль/л 5,53±0,12 5,34±0,13 5,10±0,10*

ХС-ЛПВП, ммоль/л 1,61±0,10 1,68±0,11 1,87±0,07*

ХС-ЛПНП, ммоль/л 3,11±0,13 2,73±0,14 2,32±0,07*

& о Общие липиды, г/л 6,48±0,10 5,86±0,10* 5,13±0,08*

Триглицериды, ммоль/л 1,69±0,09 1,82±0,06 1,98±0,10*

ОХС, ммоль/л 6,68±0,12 6,52±0,10* 5,78±0,13*

& ХС-ЛПВП, ммоль/л 1,69±0,09 1,82±0,10 1,98±0,10*

1—1 ХС-ЛПНП, ммоль/л 3,91±0,08 3,58±0,07* 2,65±0,10*

Общие липиды, г/л 7,25±0,09 7,14±0,06 6,24±0,11 *

& и Триглицериды, ммоль/л 1,97±0,07 2,13±0,09 2,39±0,13*

<и & ОХС, ммоль/л 7,40±0,19 6,90±0,13* 6,10±0,11*

ХС-ЛПВП, ммоль/л 1,97±0,07 1,99±0,09 2,29±0,13*

я ХС-ЛПНП, ммоль/л 4,03±0,14 3,79±0,05 3,21±0,09*

Примечание: * — различия статистически значимы при р(1)<0,05, р(Р)<0,05.

Следует отметить, что в плазме периферической крови беременных с обострением ГВИ наблюдалось изменение содержания триглицеридов, характеризующееся повышением их концентрации при высокой антигенной нагрузке (титр антител ДО! к ВПГ-1 1:12800) (табл. 9). Причиной гипертриглицеридемии у беременных с высоким титром антител к ВПГ-1, по-видимому, является усиленный тканевой липолиз и мобилизация жирных кислот из жировых депо, в результате чего триглицериды поступают в кровь.

Одновременно было выявлено достоверное уменьшение концентрации общего холестерола (ОХС) в плазме периферической крови беременных при обострении ГВИ. Более выраженное снижение уровня ОХС происходило при титре антител ^О к ВПГ-1 1:12800 (табл. 9). Снижение количества ОХС при беременности, осложненной обострением ГВИ, вызвано нарушением его

синтеза. Низкий уровень ОХС у беременных может нанести существенный вред здоровью плода, так как является строительным материалом для мембран, гормонов, желчных кислот. Из-за пониженного его содержания не будет достаточного субстрата для нормального роста и развития плода.

Содержание ХС-ЛПВП в организме беременных изменялось по мере прогрессирования беременности при ГВИ. Было установлено нарушение содержания ХС-ЛПВП при обострении ГВИ, приводящее к накоплению его в плазме периферической крови при титре антител IgG к ВПГ-1 1:12800 (табл. 9).

ЛПВП обладают антиатерогенным действием, что определяется наличием в них двух важнейших антиоксидантных ферментов: параоксоназы и ФАТ-ацилгидролазы, которые способны ферментативно метаболизировать гидроперекиси липидов в JII1H1I и, таким образом, защищать их от пероксидации (Navab М. et al., 1996; Val Lenten B.J. et al., 2001). Поэтому можно было бы предположить, что увеличение концентрации ХС-ЛПВП в плазме периферической крови беременных с обострением ГВИ, является компенсаторной реакцией, направленной на снижение токсических радикалов, присутствующих в организме. Однако, активность данных ферментов резко угнетается под действием цитокинов TNFa и ИЛ-1. В результате этого ЛПВП теряют противовоспалительные и антиатерогенные свойства (Cockerill G.W., et al., 1995, Ashby D.T. et al.,1998).

Следует отметить, что при беременности, осложненной обострением ГВИ, наблюдалось снижение ХС-ЛПНП в плазме периферической крови беременных. Причем, наиболее выраженные изменения происходили при титре антител IgG к ВПГ-1 1:12800 (табл. 9).

Снижение содержания ЛПНП обычно связывают с увеличением их окисляемости вследствие изменений в составе насыщенных жирных кислот. Так, согласно общепринятым данным, при беременности ЛПНП являются одним из поставщиков холестерола в фетоплацентарную систему, то снижение их количества при обострении ГВИ будет неблагоприятным фактором, ухудшающим прогноз осложнений гестационного периода, так как данные соединения не будут способны в достаточной мере обеспечивать транспорт холестерола.

Таким образом, осложнение беременности ГВИ приводило к изменению липидного спектра в фетоплацентарной системе, которое проявлялось в увеличении количества триглицеридов, ХС-ЛПВП, при снижении общего количества липидов, ОХС, ХС-ЛПНП. Данные нарушения находились в прямой зависимости от выраженности ГВИ и возрастают при высокой антигенной нагрузке (титр антител IgG к ВПГ-1 1:12800), что уменьшает поступление к плоду высокоэнергетических продуктов.

Следовательно, изменения липидного спектра периферической крови беременных с обострением ГВИ будут способствовать нарушению состава жирных кислот в организме матери и его транспорту через фетоплацентарный барьер в развивающийся плод.

У беременных с обострением ГВИ изменения жирно-кислотного состава плазмы крови в I триместре характеризовались увеличением концентраций

23

насыщенных жирных кислот и моноенового аналога пальмитата -пальмолеиновой кислоты. В мембранах эритроцитов концентрация пальмолеиновой кислоты, наоборот, снижалась. При этом следует отметить, чем выше был титр антител IgG к ВПГ-1, тем сильнее изменялись показатели жирных кислот (табл. 10, 11).

Второй триместр является наиболее критическим периодом гестации поскольку, именно, в эти сроки наблюдается максимальное напряжение механизмов биохимической адаптации, обусловленное интенсивным ростом плода и быстрым увеличением размеров матки. Возникающие различного рода осложнения в данный период приводят к разбалансировке физиологических взаимоотношений, как общего липидного метаболизма, так и их жирно-кислотного состава. Поэтому обострение ГВИ во II триместре гестации приводило также к изменению содержания данной группы жирных кислот.

В III триместре происходило дальнейшее увеличение доли насыщенных и моноеновой пальмолеиновой жирных кислот относительно показателей группы контроля в плазме крови и достоверное снижение пальмолеината в мембранах эритроцитов. Наиболее выраженные сдвиги данной группы кислот приходились на период, когда в периферической крови отмечался титр антител IgG к ВПГ-1 1:12800.

Таким образом, можно предположить, что избыточное увеличение концентрации насыщенных жирных кислот, выявленное в периферической крови беременных с обострением ГВИ, происходило в результате активации липолиза и гидролиза триглицеридов, являющихся основным источником насыщенных жирных кислот.

Как известно, в III триместре гестации организм переходит на новый уровень работы, начинается подготовка к родам. Образование жировых запасов в организме здоровой беременной отмечается в течение первых 30 недель, затем прекращается или продолжается, но происходит уже медленнее. Обострение же ГВИ в данный период с высокой антигенной нагрузкой (титр антител IgG к ВПГ-1 1:12800), способствует, по нашему мнению, нарушению этого процесса, в результате чего насыщенные жирные кислоты продолжают накапливаться в мембранах эритроцитов и плазме периферической крови беременных.

С одной стороны, накопление насыщенных жирных кислот в периферической крови беременных с ГВИ могло быть одним из положительных факторов, способствующих адекватному поступлению к плоду высокоэнергетических продуктов и оптимальной его трофики. С другой же стороны, чрезмерное накопление насыщенных жирных кислот в мембранах эритроцитов способствует уплотнению липидного бислоя, что отражается на увеличении относительной микровязкости и снижении текучести клеточных мембран. В результате чего будет нарушен транспорт газов к тканям организма женщины и плода, следовательно, ребенок может родиться с признаками гипоксического состояния.

Таблица 10 Состав жирных кислот плазмы периферической крови у беременных с обострением герпес-вирусной инфекции ____ (% от суммы) (М±т)_ ___

Группа Миристиновая Пентадекановая Пальмитиновая Пальмолеиновая Маргариновая Стеариновая

I триместр

контроль 1,52±0,12 0,54±0,06 23,80±1,40 2,40±0,Ю 0,78±0,08 11,5±1,20

1:3200 1,84±0,10 0,71±0,04* 25,0±1,20 2,70±0,]2 0,85±0,06 13,60±1,0

1:12800 2,0±0,10* 0,8б±0,05* 27,10±1,20 2,93±0,14* 1,05±0,0б* 14,2±0,90*

II триместр

контроль 1,78±0,10 0,72±0,07 25,20±1,20 2,53±0,09 0,84±0,06 13,30±1,0

1:3200 1,93±0,13 0,80±0,05 26,90±1,40 2,81±0,07* 0,98±0,05 14,20*0,86

1:12800 2,34±0,11* 1,20±0,06* 28,70±1,0* 3,1010,10* 1,20±0,04* 15,90±0,70*

III триместр

контроль 1,80±0,20 0,79±0,06 25,9±0,90 2,8б±0,08 0,94±0,07 13,80±1,0

1:3200 2,0±0,18 0,94±0,05 28,10±1,20 2,94±0,07 1,10±0,05 15,0±0,70

1:12800 2,52±0,15* 1,2б±0,04* 29,0±1,0* 3,24±0,08* 1,38±0,08* 17,3 ±0,90*

Примечание: * - различия статистически значимы при p(t)<0,05, p(F)<0,05.

Таблица 11 > Состав жирных кислот липидов в мембранах эритроцитов периферической крови у беременных с обострением герпес-вирусной инфекции (% от суммы) (М±т)

Группа Миристиновая Пентадекановая Пальмитиновая Пальмолеиновая Маргариновая Стеариновая

I триместр

контроль 1,6б±0,15 0,60±0,04 20,80±1,20 3,52±0,16 1,20±0,08 9,8б±1,10

1:3200 1,93±0,10 0,71±0,05 22,10±1,10 3,20±0,12 1,31±0,05 9,92±0,82

1:12800 2,48±0,11* 0,92±0,03* 24,50±1,15* 2,86±0,19* 1,4б±0,0б* 10,3*0,93

II триместр

контроль 1,81±0,19 0,69±0,05 22,0±1,10 3,71±0,24 1,28±0,05 10,2±0,90

1:3200 2,34±0,12* 0,76±0,04 23,40±1,10 3,58±0,1б 1,53±0,08* 11,3±0,85

1:12800 2,93*0,21 * 0,87±0,03* 26,6±1,12* 3,14±0,18 1,77±0,07* 12,9±0,70*

III триместр

контроль 1,72±0,13 0,94±0,0б 24,30±1,0 2,93±0,22 1,49±0,05 9,32±0,54

1:3200 2,1б±0,11* Мб±0,05* 2б,80±1,14 2,77±0,19 1,8240,08* 11,20±0,60*

1:12800 2,б1±0,10* 1,30±0,05* 28,0±1,12* 2,34±0,16* 2,10±0,06* 14,4±0,81*

Примечание: * - различия статистически значимы при p(t)<Q,05, p(F)<0,05.

Важную роль в течение беременности и формировании практически всех органов и систем плода играют ПНЖК. Они не могут быть выработаны организмом, поэтому их называют незаменимыми или эссенциальными. К ним относят: линолеваую, линоленовую, арахидоновую, эйкозапентаеновую и докозагексаеновую ПНЖК. Причем, линолевую и арахидоновую кислоты относят к со-6 семейству, а линоленовую, эйкозапентаеновую и докозагексаеновую к ©-3 семейству.

При обострении ГВИ в период гестации состав ПНЖК нарушался (табл.

12).

Таблица 12

Содержание са-3 и со-6 ПНЖК в периферической крови женщин с

обострением ГВИ (% от общей суммы) (М±т)

Группа ©-6 со-3

Лиинолевая Арахидо-новая а-лино-леновая Эйкозапен-таеновая Докозагек-саеновая

Мембраны э] эитроцитов

I триместр Контроль 1:3200 1:12800 4,81±0,16 5,10±0,14 5,43±0,22* 2,94±0,10 3,0±0,10 3,26±0,12* 0,22±0,02 0,19±0,04 0,13±0,04* 1,19±0,08 1,17±0,06 1,10±0,05 8,54±0,27 7,32±0,13* 6,10±0,18*

II триместр Контроль 1:3200 1:12800 4,60±0,22 5,32±0,18* 5,91±0,34* 4,0±0,86 4,23±0,40 4,59±0,72 0,28±0,03 0,21±0,05 0,12±0,02* 1,17±0,07 1,04±0,06 0,96±0,06* 7,92±0,18 7,20±0,20* 6,74±0,2*

III триместр Контроль 1:3200 1:12800 5,31±0,18 5,80±0,20 6,12±0,24* 3,81±0,41 4,26±0,30 5,12±0,61* 0,31±0,05 0,26±0,03 0,18±0,02* 1,24±0,08 1,10±0,06 1,01 ±0,04* 8,31±0,29 7,54±0,18* 6,02±0,21*

Плазма

I триместр Контроль 1:3200 1:12800 6,18±0,20 6,44±0,18 7,52±0,20* 3,74±0,12 4,0±0,10 4,40±0,13* 0,31±0,04 0,29±0,06 0,12±0,05* 1,32±0,07 1,25±0,05 1,03±0,05* 8,83±0,20 7,30±0,18* 6,19±0,16*

II триместр Контроль 1:3200 1:12800 6,83±0,18 7,10±0,15 7,74±0,15* 3,81±0,18 4,28±0,14* 5,64±0,12* 0,53±0,06 0,45±0,04 0,31±0,06* 1,24±0,06 1,10±0,04 0,82±0,06* 8,40±0,18 7,52±0,16* 6,50±0,18*

III триместр Контроль 1:3200 1:12800 7,10±0,22 7,68±0,18 8,30±0,17* 4,20±0,15 5,0±0,16* 6,31 ±0,22* 0,62±0,06 0,48±0,04. 0,40±0,04* 1,40±0,07 1,27±0,04 0,96±0,06* 8,90±0,21 7,81±0,14* 6,34±0,16*

Наиболее существенные изменения в профиле ПНЖК фиксировались у беременных с титром антител к ВПГ-1 1:12800. При индивидуальном анализе в спектре ПНЖК было выявлено увеличение концентрации со-6 линолевой и арахидоновой кислот, как в плазме, так и мембранах эритроцитов в течение всего периода гестации (табл. 12). Изменение концентрации арахидоновой кислоты у беременных с ГВИ может являться прогностическим фактором в оценке степени деструктивных изменений мембранного аппарата клеток, в том числе эритроцитов.

При изучении ПНЖК семейства ©-3 были выявлены отклонения в спектре отдельных кислот прямо противоположные соединениям (0-6 семейства. Наблюдалось снижение концентраций а-линоленовой, эйкозапентаеновой и докозагексаеновой ПНЖК в периферической крови беременных с обострением ГВИ на протяжении всего периода гестации. Причем, более выраженные изменения происходили при высокой антигенной нагрузке (титр антител к ВПГ-1 1:12800).

При этом следует отметить, что докозагексаеновая кислота трансформируется в эйкозаноиды медленнее, чем эйкозапентаеновая. Однако она является важным компонентом мембран клеток центральной нервной системы, накапливаясь в синапсах и фоторецепторах.

Поэтому достаточное содержание в периферической крови и адекватное поступление данного соединения с пищей является необходимым условием благоприятного течения беременности и развития плода. Оценивая состав докозагексаеновой кислоты в крови беременных с ГВИ, следует отметить достаточно высокий уровень снижения ее содержания как при титре антител ^ к ВПГ-1 1:12800, так и при титре антител к ВПГ-1 1:3200. Эту динамику изменений можно объяснить тем, что при ГВИ интенсифицируются процессы ПОЛ и АФК, образующиеся в ходе свободно-радикальных реакций, атакуя мембрану, разрушают ненасыщенные жирные кислоты с наибольшим числом двойных связей, тем самым способствуя элиминации их из мембран.

Выявленная динамика нарушений со-3 и со-6 ПНЖК в периферической крови беременных с обострением ГВИ позволяет сделать вывод о зависимости изменений от выраженности патологического процесса. При титре антител к ВПГ-1 1:3200 изменения не отличались от контроля (исключение составлял уровень докозагексаеновой кислоты), при титре антител ^С к ВПГ-1 1:12800 состав данных соединений изменялся более существенно.

Таким образом, активация ГВИ в период беременности приводит к изменению баланса ПНЖК в сторону увеличения провоспалительных со-6 линолевой, арахидоновой кислот, на фоне снижения концентраций ю-3 а-линоленовой, эйкозапентаеновой, докозагексаеновой кислот с противоположным по воздействию эффектом.

Следует отметить, что беременность, протекающая на фоне ГВИ, сопровождалась изменением эйкозеновых кислот ряда С2о (табл. 13). Отмечалось повышение концентрации арахиновой, эйкозамоноеновой, эйкозадиеновой, эйкозатриеновой жирных кислот при высокой антигенной нагрузке (табл. 13).

Таблица 13

Состав эйкозеновых кислот в периферической крови у беременных с _обострением ГВИ (% от суммы) (М±т) _

Группа Арахиновая Эйкоза-моноеновая Эйкоза-диеновая Эйкоза-триеновая

Мембраны эритроцитов

I триместр Контроль 1:3200 1:12800 0,42±0,03 0,48±0,04 0,59±0,08* 0,13±0,04 0,22±0,04 0,28±0,03* 0,18±0,04 0,26±0,05 0,36±0,03* 0,62±0,09 0,73±0,05 0,89±0,06*

II триместр Контроль 1:3200 1:12800 0,36±0,04 0,44±0,06 0,57±0,05* 0,15±0,06 0,26±0,04 0,34±0,06* 0,19±0,08 0,29±0,08 0,41±0,07* 0,77±0,05 0,84±0,07 0,91±0,04*

III триместр Контроль 1:3200 1:12800 0,48±0,09 0,48±0,07 0,52±0,06 0,12±0,05 0,20±0,07 0,39±0,07* 0,22±0,06 0,27±0,05 0,31±0,05 0,70±0,05 0,75±0,06 0,87±0,03*

Плазма

I триместр Контроль 1:3200 1:12800 0,46±0,04 0,51±0,03 0,60±0,08* 0,15±0,03 0,19±0,04 0,28±0,06* 0,21 ±0,05 0,31±0,05 0,39±0,04* 0,67±0,06 0,81±0,05 0,93±0,04*

II триместр Контроль 1:3200 1:12800 0,44±0,04 0,49±0,06 0,56±0,04 0,17±0,04 0,22±0,06 0,33±0,03* 0,20±0,03 0,27±0,04 0,46±0,06* 0,79±0,05 0,86±0,04 0,97±0,05*

III триместр Контроль 1:3200 1:12800 0,49±0,09 0,53±0,07 0,67±0,06* 0,15±0,05 0,30±0,07 0,37±0,04* 0,18±0,05 0,32±0,06 0,49±0,05 0,73±0,04 0,79±0,03 0,88±0,05*

Примечание: * - различия статистически значимы при p(t)<0,05, p(F)<0,05.

Выявленные изменения содержания эйкозеновых кислот ряда С2о в периферической крови беременных свидетельствовали о влиянии ГВИ на состав эйкозаноидов. Избыточное накопление в организме беременных в условиях ГВИ предшественников эйкозаноидов может неоднозначно воздействовать на патогенетические звенья развития нарушений гестационного периода, способствуя гиперпродукции провоспалительных эйкозаноидов типа лейкториен В4 детерминирующего процессы воспаления и тромбоксана А2> который, в свою очередь, отвечают за вазоконстрикцию, тромбообразование, развитие эндотелиальной дисфункции.

Следует отметить, что установленные закономерности нарушений жирно-кислотного состава мембран и плазмы периферической крови

беременных при обострении ГВИ явились следствием изменений активности липид-переносящих белков.

Липид-переносящие белки — это растворимые внутриклеточные белки, способные переносить липиды и обменивать их между мембранами. Они участвуют в биогенезе и обновлении мембран, перенося липиды от мест их биосинтеза к местам сборки мембраны, а также играют определенную роль в регуляции липидного состава клеточных мембран. Быстрому обмену подвергаются липиды, содержащие полярные группы - свободные жирные кислоты, моноацилфосфолипиды и неэтерефицированный холестерол.

В периферической крови беременных с обострением ГВИ происходило уменьшение содержания липид-переносящего белка, причем, наиболее выраженное снижение наблюдалось в период повышенной антигенной нагрузки (титр антител к ВПГ-1 1:12800) (табл. 14).

Таблица 14

Содержание липид-переносящего белка в периферической крови беременных

III триместра с обострением ГВИ (нг/мл) (М±т)

Группа Липид-переносящий белок

Контроль 1:3200 1:12800 23,94±1,90 21,43±1,80 18,51±1,56*

Примечание: * - различия статистически значимы при р(0<0,05, р(Б)<0,05.

Установленное снижение уровня липид-переносящего белка в периферической крови беременных с обострением ГВИ, может явиться фактором, способствующим недостаточному транспорту жирных кислот в кровь пуповины.

На основании полученных результатов исследования можно заключить, что обострение ГВИ в период гестации приводит к дезадаптации регуляторных механизмов в организме беременных, вызванных гиперпродукцией сенсорного нейрогормона (серотонин) и провоспалительных цитокинов (ТОТа, 1Ь-1, ШРу), что усиливает деструктивные процессы и трансформацию эритроцитарных клеток, вследствие нарушения динамического равновесия в системе «перекисное окисление липидов-антиоксидантная защита» (накопление свободно-радикальных ТБК-активных продуктов, снижение экзогенной (а-токоферол) и эндогенной (олеиновая кислота) антиокислительной активности), повышение метаболической активности фосфолипазы А2, нарушения состояния липид-белкового комплекса (снижение уровня каркасных белков цитоскелета (спектрин, анкирин, белок полосы 4.1), увеличения фракции лизофосфатидилхолина и насыщенности жирно-кислотных остатков фосфолипидов), изменения вязкостно-эластических свойств мембран (увеличение относительной микровязкости).

К причинам, усиливающим дезадаптационную направленность структурно-функциональной перестройки мембранного комплекса можно отнести нарушение липидного и жирно-кислотного состава в периферической

крови беременных. Подтверждением явилось выявленное на протяжении всего периода гестации увеличение концентрации триглицеридов, ХС-ЛПВП, насыщенных кислот при одновременном снижении содержания общих липидов, ОХС, ХС-ЛПНП, ненасыщенных соединений, дисбаланс соотношения ш-б/ю-З кислот с преобладанием предшественников провоспалительных соединений семейства ю-6 линолевой и арахидоновой кислот, недостаточным содержанием незаменимых со-3 а-линоленовой, эйкозапентаеновой, докозагексаеновой кислот; сниженным содержанием липид-переносящего белка, что будет способствовать нарушению трансплацентарной передаче высокоэнергетических продуктов в кровь пуповины.

Особенности состава жирных кислот в плаценте при обострении ГВИ

При активации ГВИ в период беременности в тканях плаценты наблюдаются различного рода изменения от компенсаторно-

приспособительных реакций до деструктивных процессов, что оказывает существенное влияние на снижение функциональной активности плаценты, обеспечивающей развитие и жизнеспособность плода. В таких условиях развивающийся организм может быть ограничен в поступлении высокоэнергетических продуктов из материнской крови, результатом чего является развитие патологических отклонений в жизнедеятельности плода, а, в последующем, и новорожденного ребенка.

Следует указать на то, что при непосредственном контакте поверхности ворсин с материнской кровью, перегруженной патогенными факторами (антигены ВПГ-1, серотонин, ТЫ Ра, 1Ь-1, ЮТу), повышалось содержание фосфолипазы А2, инициирующей процессы пероксидации липидов и образование в синцитиотрофобласте перекисей жирных кислот (табл. 15).

Таблица 15

Содержание фосфолипазы А2 в гомогенате плаценты при обострении ГВИ

(нг/мл)

Группа Фосфолипаза А2

Контроль 1:3200 1:12800 0,35±0,06 0,49±0,09 0,80±0,08*

Примечание: * - различия статистически значимы при р(0<0,05, р(Р)<0,05

Исследование содержания фосфолипазы А2 в гомогенате плаценты при обострении ГВИ показало повышение концентрации данного энзима при высокой антигенной нагрузке (титр антител к ВПГ-1 1:12800 (табл. 15).

Выявленное увеличение содержания фосфолипазы А2 в гомогенате плаценты способствовало усилению гидролитических процессов в липидном бислое, что приводило к накоплению перекисей жирных кислот. При гистохимическом исследовании синцитиотрофобласта ворсинок плаценты при обострении ГВИ выявлена высокоактивная реакция на перекиси жирных

кислот, локализованная, преимущественно, на наружном листке плазматической мембраны. В контроле реакция на всем протяжении синцитиотрофобласта ворсинок плаценты слабо выраженная. Данный факт свидетельствовал о том, что, поврежденный перекисями жирных кислот фетоплацентарный барьер, избирательно передает высокоэнергетические продукты обмена из крови матери в кровь плода.

Таким образом, повышение антигенной нагрузки ВПГ-1, серотонина, ТЫ Ра, №N7, 1Ь-1, при обострении ГВИ, приводит к усилению активности фосфолипазы А2, а, следовательно, активации процессов ПОЛ с избыточным накоплением перекисей жирных кислот в синцитиотрофобласте. Данные деструктивные процессы в синцитиотрофобласте оказывают существенное влияние на снижение функциональной активности плаценты, нарушая жирно-кислотный состав.

Анализ результатов исследования жирно-кислотного спектра липидов гомогената плаценты при обострении ГВИ показал наличие изменений в количественном составе наиболее значимых для липидной структуры соединений (табл. 16).

Таблица 16

Состав жирных кислот липидов гомогената плаценты беременных с

обострением ГВИ (% от общей суммы) (М ± т)

Кислота Контроль Титр антител к ВПГ-1

1:3200 1:12800

Миристиновая 0,82±0,06 1,10±0,06* 1,36±0,05*

Пентадекановая 0,53±0,04 0,66±0,03 0,71±0,06*

Пальмитиновая 30,1±2,2 30,90±2,0 32,3±1,80

Пальмолеиновая 2,58±0,12 2,20±0,14 1,93±0,10*

Маргариновая 1,43±0,09 1,64±0,08 1,81±0,10 *

Стеариновая 12,1±0,96 13,80±0,72 16,2±0,83*

Олеиновая 10,3±0,87 11,20±0,63 13,9±0,80 *

Линолевая 3,82±0,41 3,30±0,29 2,21±0,37 *

а-Линоленовая 0,28±0,06 0,21±0,03 0,16±0,04

Арахиновая 0,36±0,08 0,43±0,06 0,51±0,07

Эйкозамоноеновая 0,10±0,04 0,14±0,02 0,18±0,03

Эйкозадиеновая 0,16±0,05 0,21±0,06 0,27±0,04

Эйкозатриеновая 0,69±0,08 0,74±0,06 0,82±0,07

Арахидоновая 4,66±0,30 5,28±0,20 5,96±0,42*

Эйкозапентаеновая 1,63±0,09 1,40±0,08 1,31±0,08 *

Докозагексаеновая 6,44±0,82 5,46±0,54 4,20±0,63*

Насыщенные 45,34±1,40 48,53±1,52 52,89±1,76*

Ненасыщенные 30,66±0,82 24,68±0,75* 29,14±0,94

Коэффициент насыщенности 1,48±0,07 1,24±0,08* 1,82±0,10*

Наблюдалось увеличение общего количества насыщенных соединений, преимущественно, за счет повышения концентрации миристиновой, пентадекановой, маргариновой жирных кислот, на фоне снижения содержания пальмолеиновой, полиненасыщенных кислот семейства ю-3: а-линоленовой, эйкозапентаеновой, докозагексаеновой и со-6 линолевой. При этом концентрация ю-9 олеиновой и <и-6 арахидоновой жирных кислот достоверно увеличивалась. Следует отметить, что более выраженные нарушения жирно-кислотного состава гомогената плаценты выявлялись при высокой антигенной нагрузке (титр антител IgG к ВПГ-1 1:12800) (табл. 16).

Возможно, увеличение концентрации олеиновой кислоты в гомогенате плаценты при обострении ГВИ в период гестации, явилось компенсаторным механизмом, направленным на уменьшение повреждающего действия токсических радикалов, образующихся в результате процессов ПОЛ. С другой стороны, установленные закономерности явились следствием возможного повышения селективного транспорта полиеновых соединений липид-переносящим белком, который, в первую очередь, переносит докозагексаеновую, затем арахидоновую, после линолевую и а-линоленовую жирные кислоты. Олеиновая кислота является помощником селективного поглощения полиненасыщенных соединений в смеси жирных кислот, поступающих в синцитиотрофобласт. Помимо этого, возможен более активный синтез ю-9 олеиновой кислоты в тканях плаценты в связи недостаточностью содержания кислот семейства ю-6 линолевой и ю-3 а-линоленовой, о чем свидетельствовал рост ее предшественника пальмитиновой кислоты.

В условиях ГВИ, по-видимому, не происходит блокировка образования арахидоновой кислоты из линолевой в связи с низким содержанием последней в липидах гомогената плаценты. С другой стороны, возможно, здесь срабатывает механизм компенсации, так как арахидоновая кислота субстрат синтеза циркулирующих вазоактивных факторов: простагландина и тромбоксана А2, которые модулируют сосудистый тонус и активацию тромбоцитов, вовлекаются в механизм инициирования сокращения миометрия во время родов (Павлович C.B., 1998; Серов В.Н., Сидельникова В.М., 2008). Но избыточное накопление арахидоновой кислоты в тканях плаценты будет способствовать продукции провоспалительных эйкозаноидов.

Снижение концентрации эйкозапентаеновой и доказагексаеновой кислот в тканях плаценты при обострении ГВИ, может быть обусловлено, во-первых, тем, что в условиях патологии в связи с развивающимся окислительным стрессом, основной мишенью для действия АФК являются жирные кислоты семейства ю-3, содержащие наибольшее количество двойных связей, а во-вторых, низким уровнем предшественника их синтеза - а-линоленовой кислоты. Поэтому при низком уровне концентрации ш-3 ПНЖК в тканях плаценты при обострении ГВИ, будет нарушен процесс ингибирования продукции провоспалительных биологически активных веществ.

Из выше изложенного, можно заключить, что при беременности, сочетание жирных кислот, доставляемых плоду, определяется их профилем в

32

материнской крови и синтезом в плаценте. Плацента способна избирательно передавать плоду жирные кислоты с помощью липид-переносящих белков, что обеспечивает адекватное поступление высокоэнергетических продуктов, необходимых для метаболических процессов, развивающегося плода. И это действительно так, поскольку при активации ГВИ в период гестации с высокой антигенной нагрузкой (титр антител ^О к ВПГ-1 1:12800), нарушается перенос липидов из периферической крови матери через фетоплацентарный барьер, вследствие сниженного содержания липид-переносящего белка, что будет являться причиной уменьшенной доставки липидов в кровь плода (табл. 17).

Таблица 17

Содержание липид-переносящего белка в гомогенате плаценты при

обострении ГВИ (нг/мл) (М±т)

Группа Липид-переносящий белок

Контроль 1:3200 1:12800 29,11±1,70 25,20±1,82 23,93±1,70*

Примечание: * - различия статистически значимы при р(0<0,05, р(Р)<0,05.

Таким образом, при обострении ГВИ в гомогенате плаценты происходит увеличение содержания насыщенных соединений, преимущественно за счет высокой концентрации миристиновой, пентадекановой, маргариновой и стеариновой кислот, при одновременном снижении ненасыщенных пальмолеиновой, линолевой кислот, <в-3 ПНЖК эйкозапентаеновой и докозагексаеновой кислот, на фоне повышения содержания со-6 предшественника провоспалительных эйкозаноидов - арахидоновой кислоты.

Выявленные нарушения липидного обмена свидетельствует об изменениях жирно-кислотного состава плаценты в условиях высокоактивной ГВИ (увеличение встраивания в мембрану насыщенных жирных кислот, снижение концентрации незаменимых соединений са-3 семейства, повышение провоспалительных о>6 кислот); увеличение содержания фосфолипазы А2 с образованием в синцитиотрофобласте перекисей жирных кислот, снижение уровня липид-переносящего белка затрудняет функционирование липидного слоя плаценты, что в совокупности с нарушением состава жирных кислот в периферической крови беременной, а также сниженным содержанием липид-переносящего белка способствует нарушению транспорта высокоэнергетических продуктов в кровь плода.

Особенности переноса жирных кислот в кровь плода и основные факторы его определяющие

Для выяснения зависимости липидного состава развивающегося плода от такового в организме матери, влияния токсических продуктов, циркулирующих в крови беременной, нарушений морфофункционального состояния фетоплацентарного барьера в условиях ГВИ, был изучен жирно-кислотный состав крови пуповины (табл. 18, 19).

Таблица 18

Жирно-кислотный состав плазмы крови пуповины при обострении ГВИ _(% от суммы) (М±т)_

Кислота Контроль Титр антител к ВПГ-1

1:3200 1:12800

Миристи новая 1,10±0,05 1,36±0,04* 1,48±0,06*

Пентадекановая 0,26±0,04 0,40±0,06 0,49±0,04*

Пальмитиновая 18,5±1,10 20,9±0,80 24,0±0,86*

Пальмолеиновая 2,34±0,12 2,0±0,10 1,82±0,10*

Маргариновая 1,3±0,10 1,46±0,12 1,67±0,12*

Стеариновая 11,0±0,90 12,3±0,62 15,1±0,83*

Олеиновая 9,1±0,70 8,6±0,54 7,4±0,60

Линолевая 5,6±0,42 6,4±0,40 7,3±0,51*

а-Линоленовая 0,43±0,04 0,36±0,06 0,29±0,05*

Эйкозатриеновая 0,67±0,05 0,76±0,08 0,81±0,08*

Арахидоновая 5,24±0,21 5,72±0,38* . 6,63±0,34*

Эйкозапентаеновая 1,36±0,12 1,0±0,08* 0,83±0,06*

Докозагексаеновая 3,82±0,35 3,24±0,28 2,37±0,30*

Примечание: * - различия статистически значимы при р(1)<0,05, р(Р)<0,05.

В крови пуповины при обострении ГВИ было выявлено повышение содержания насыщенных жирных кислот, как в плазме, так и в мембранах эритроцитов при титре антител к ВПГ-1 1:12800 (табл. 18, 19).

Таблица 19

Жирно-кислотный состав липидов мембран эритроцитов крови пуповины

при обострении ГВИ (% от суммы) (М±т)

Кислота Контроль Титр антител к ВПГ-1

1:3200 1 1:12800

Миристиновая 1,22±0,06 1,38±0,07 1,50±0,06*

Пентадекановая 0,38±0,03 0,52±0,05* 0,68±0,06*

Пальмитиновая 20,0± 1,10 21,70±1,0 24,3±1,20*

Пальмолеиновая 2,76±0,15 2,31±0,19 2,20±0,1б*

Маргариновая 1,0±0,12 1,50±0,10* 1,82±0,14*

Стеариновая 8,30±0,50 8,60±0,48 10,2±0,46*

Олеиновая 10,0±0,82 9,50±0,70 8,30±0,74

Линолевая 4,30±0,36 5,20±0,40 6,50±0,33*

а-Линоленовая 0,20±0,07 0,16±0,06 0,12±0,05

Эйкозатриеновая 0,51±0,04 0,72±0,05* 0,80±0,07*

Арахидоновая 5,60±0,35 6,94±0,41 7,30±0,38*

Эйкозапентаеновая 1,24±0,15 1,10±0,14 0,82±0,12*

Докозагексаеновая 5,25±0,40 4,60±0,42 3,80±0,39*

Данное увеличение характерно для всех жирных кислот этой группы. Увеличение концентрации насыщенных жирных кислот, по-видимому, являлось результатом избыточного накопления данных соединений в периферической крови беременной и плаценте, а, следовательно, активного плацентарного переноса, что могло быть фактором оптимального использования данных соединений в качестве источников энергии, но избыточное их накопление в мембранах эритроцитов является причиной увеличения микровязкости.

При этом уровень пальмолеиновой и олеиновой жирных кислот крови пуповины при ГВИ, был ниже аналогичных показателей группы контроля. Динамику изменений олеината в крови пуповины можно объяснить недостаточным ее транспортом из материнской крови, вследствие низкого содержания липид-переносящего белка, а также тем, что она является антиоксидантом и в условиях влияния ГВИ защищает клетки от повреждающего действия продуктов липидной пероксидации.

При анализе взаимосвязи соотношения содержания олеиновой кислоты в мембранах эритроцитов периферической крови матери с концентрацией в крови пуповины при обострении ГВИ (титр антител IgG к ВПГ-1 1:12800) отмечалась прямая связь между данными показателями (г=0,76 р<0,001), что указывает на зависимость обмена олеиновой кислоты между кровью матери и плодом и недостаточное трансплацентарное поступление в условиях дефицита данного соединения во время беременности, осложненной ГВИ.

При обострении ГВИ в крови пуповины отмечалось снижение кислот семейства со-3 (а-линоленовой, эйкозапентаеновой, докозагексаеновой) на фоне повышения концентрации ю-6 кислот.

Следует отметить, что изменения состава жирных кислот в крови пуповины при ГВИ происходили на фоне деструктивных процессов синцитиотрофобласта (Луценко М.Т. и др., 2003 ; 2010; Андриевская И.А., 2011), возрастания концентрации серотонина, провоспалительных цитокинов типа TNF а, IL-1, INFy, активации ПОЛ, снижения противорадикальной защиты, концентрации липид-переносящего белка, увеличенной активности фосфолипазы А2 в материнском организме, что способствовало гидролизу мембранных фосфолипидов с накоплением продуктов липидной пероксидации. Доказательством этого служило выявленное в крови пуповины возрастание концентрации арахидоновой кислоты, которая имела прямую коррелятивную зависимость с содержанием данного соединения в периферической крови матери (г=0,89 р<0,001). Выявленная закономерность позволяет сделать предположение об избыточном поступлении из крови матери через фетоплацентарный барьер предшественника провоспалительных эйкозаноидов — арахидоновой кислоты в условиях ГВИ.

Особое внимание уделяется метаболизму арахидоновой кислоты в тромбоцитах и эндотелии сосудов, в которых под воздействием циклооксигеназы образуются циклические эндоперекиси. Для подтверждения данного факта была проведена реакция на выявление перекисей жирных кислот в эндотелии сосудов пуповины. В условиях обострения ГВИ отмечалась

35

интенсивная реакция на перекиси жирных кислот, которая прогрессивно увеличивалась в период, когда в периферической крови матери регистрировался титр антител к ВПГ-1 1:12800.

Увеличение концентрации арахидоновой кислоты в крови пуповины при обострении ГВИ явилось следствием повышенного содержания фосфолипазы А2, активации процессов ПОЛ с накоплением ТБК-активных продуктов, которые при титре антител к ВПГ-1 1:12800 выявлялась в значительном количестве при снижении концентрации а-токоферола (табл. 20).

Таблица 20

Содержание фосфолипазы А2, ТБК-АП, а-токоферола, липид-

переносящего белка в крови пуповины при обострении ГВИ (М±т)

Показатель Контроль Титр антител к ВПГ-1

1:3200 1:12800

Фосфолипаза А2, нг/мл 0,20±0,02 0,24±0,01 0,29±0,02*

ТБК-АП, ммоль/л 11,40±0,45 15,20±0,52 23,60±0,60*

а-токоферол, ммоль/л липид-переносящий белок, нг/мл 1,84±0,04 2,80±0,15 1,68±0,07* 2,73±0,13 1,59±0,03* 2,40±0,12*

Примечание: * - различия статистически значимы при р(0<0,05, р(Р)<0,05.

Следовательно, увеличение содержания арахидоновой кислоты в крови плода становится сильным повреждающим фактором, особенно, для эндотелия сосудов, поскольку происходит формирование перекисей жирных кислот, повреждающих стенку кровеносных сосудов.

Сниженное содержание ю-3 эйкозапентаеновой и докозагексаеновой ПНЖК в крови пуповины явилось результатом уменьшенного их поступления из периферической крови матери на фоне низкой концентрации липид-переносящего белка и следствием нарушения состава данных соединений в плаценте (табл. 20). Поэтому в крови пуповины при ГВИ снижены запасы со-З ПНЖК, а, следовательно, уменьшена выработка противовоспалительных эйкозаноидов для обеспечения защиты от повреждающего действия герпесных агентов. Выявленные нарушения жирно-кислотного состава в крови пуповины при ГВИ были более выражены при титре антител к ВПГ-1 1:12800.

Следовательно, при беременности сочетание жирных кислот, доставляемых плоду, определяется их составом в материнской крови и синтезом в плаценте. Плацента способна избирательно передавать плоду жирные кислоты с помощью липид-переносящих белков, что обеспечивает адекватное поступление высокоэнергетических продуктов, необходимых для метаболических процессов развивающегося плода. Тогда как обострение ГВИ в период гестации с высокой антигенной нагрузкой (титр антител к ВПГ-1 1:12800), способствует подавлению переноса липидов из периферической крови матери через фетоплацентарный барьер, вследствие снижения активности липид-переносящего белка, что будет является причиной уменьшенной доставки липидов в кровь плода.

Анализ взаимосвязи соотношения содержания липид-переносящего белка в плазме периферической крови матери с концентрацией в крови пуповины показал прямую зависимость, при этом коэффициент корреляции г между исследуемыми параметрами при титре антител ^С к ВПГ-1 1:12800 составил 0,98; р<0,001. Подобная закономерность позволяет сделать предположение либо о недостаточном проникновении липид-переносящего белка из организма матери в развивающийся плод, либо о нарушении его синтеза в условиях обострения ГВИ.

Выявленная динамика липидного обмена системы «мать-плацента-плод» свидетельствует о нарушении его состава в периферической крови матери, жирно-кислотном составе плаценты при обострении ГВИ (активация процессов ПОЛ, повышение уровня фосфолипазы А2, увеличение встраивания в мембрану насыщенных жирных кислот, снижение концентрации незаменимых противовоспалительных соединений ш-3 семейства, повышение провоспалительных со-6 кислот и лизосоединений, снижение содержания липид-переносящих белков), затрудняет функционирование липидного слоя плаценты. Вследствие этого, наружная мембрана синцитиотрофобласта оказывается поврежденной, а внутренняя мембрана начинает пропускать токсические продукты, в результате чего в крови пуповины накапливаются арахидоновая кислота и ТБК-активные продукты, способствующие развитию воспалительного процесса с повреждением стенок кровеносных сосудов, что является причиной развития синдрома задержки роста плода и гипотрофии новорожденного ребенка.

Проведенные исследования показали, что обострение ГВИ в период гестации приводит к нарушению состава жирных кислот в периферической крови беременной, способствует недостаточной плацентарной передачи высокоэнергетических соединений в развивающейся плод и может быть причиной развития задержки роста плода и гипотрофии новорожденного. Для подтверждения данного предположения был проведен анализ состояния здоровья новорожденных от матерей с обострением ГВИ. Было установлено, что наиболее неблагоприятное течение беременности и состояние новорожденных у женщин с титром антител к ВПГ-1 1:12800. В данной группе хроническая плацентарная недостаточность была диагностирована в 72,2% случаев, в группе женщин с титром антител к ВПГ-1 1:3200 в 46% случаев (р<0,001). Клиническими признаками хронической плацентарной недостаточности были: хроническая внутриутробная гипоксия и задержка роста плода.

У женщин с титром антител ^С к ВПГ-1 1:12800 чаще происходили преждевременные роды 6,9% (р<0,01) и рождались недоношенные дети. Дети в состоянии асфиксии различной степени тяжести рождались чаще (р<0,05), чем у женщин контрольной группы.

У женщин с обострением ГВИ родилось 90 новорожденных, все дети живые. В группе с титром антител к ВПГ-1 1:12800 доношенных детей было 97,8%, недоношенных — 2,2%. В группе новорожденных от матерей с титром антител 1:3200 все дети родились доношенными.

37

У новорожденных от матерей с ГВИ имелись различия в оценке по шкале Апгар. В группе детей от матерей с титром антител к ВПГ-1 1:12800, рожденных с оценкой 7-10 баллов, было значительно меньше - 76 (84%), чем в группе с титром антител ДО к ВПГ-1 1:3200 - 85 (94%) (р<0,05). В группе с титром антител ^О к ВПГ-1 1:12800 в состоянии асфиксии средней тяжести (оценка 6-4 баллов) родилось - 14 (16%) детей, в группе с титром антител ^О к ВПГ-1 1:3200 - 5 (6%) (р<0,05). В состоянии тяжелой асфиксии в обеих группах новорожденных не выявлялось.

Средняя масса тела доношенных новорожденных от матерей с титром антител ДО к ВПГ-1 1:12800 составила 3389,4±32,4 грамм и не отличалась от новорожденных от матерей с титром антител ^С к ВПГ-1 1:3200 и контрольной группы (р>0,05). В группе новорожденных от матерей с титром антител ДО к ВПГ-1 1:12800 масса тела менее 2000,0 грамм была у 2 новорожденных детей, 8 новорожденных (2 недоношенных, 6 доношенных детей) имели массу в пределах 2000-2500 грамм.

Из выше изложенного можно заключить, что обострение ГВИ в период гестации с высокой антигенной нагрузкой (титр антител к ВПГ-1 1:12800) приводит к нарушению состава жирных кислот в периферической крови матери, плаценте, способствует недостаточному поступлению высокоэнергетических продуктов в кровь пуповины и является фактором развития синдрома задержки роста плода и гипотрофии новорожденного.

Обобщая полученные результаты исследования, представленные в концептуальной схеме (рис.), можно заключить, что нарушения жирно-кислотного состава у беременных при обострении ГВИ, являются мощным фактором, вызывающим включение компенсаторно-приспособительных механизмов, направленных на сохранение гомеостаза, который позволил бы адекватно функционировать системе «мать-плацента-плод» в создавшейся стрессовой ситуации.

Необходимо указать и на то, что при обострении ГВИ во время гестации важное значение приобретают метаболические перестройки на уровне клеточных мембран (эритроциты периферической крови, плацента), в частности, липидного состава, обусловленным напряжением компенсаторных механизмов. Насколько глубоки будут эти нарушения в организме беременной, настолько выражены будут проявления механизмов дезадаптации в плаценте и у плода.

В первую очередь, дисфункция возникала на уровне структуры мембранного комплекса, как эритроцитов периферической крови беременных, так и плаценты. Стрессорное воздействие осуществлялось в условиях повышенной антигенной нагрузки ВПГ-1, усиливающей циркуляцию иммуномодулирующего серотонина и провоспалительных факторов макрофагальной природы (ЮТа, 1Ь-1, ЮТу), которые обладают цитотоксической активностью, что приводило к индукции ПОЛ, накоплению ТБК-активных продуктов, нарушению структурно-функционального состояния эритроцитов периферической крови беременных.

ВПГ-1

Серотояин TNFa.IL-l.rNFY

Периферическая кровь матери •Активация процессов ПОЛ с образованием ТБК-активных продуктов;

•Снижение антиоксидантной защиты (отокоферол, олеиновая кислота);

•Повышение содержания фосфолипазы Аг; •Гидролиз фосфолипидов с образованием лизосоединений (лизофосфагидилхолин); •Нарушение фосфолшшдного, белкового состава мембран эритроцитов, увеличение их мюсровязкости; •Увеличение количества трйглиаеридов, ХС-ЛПВП при снижении общих липидов, общего холестерола, ХС-ЛПНП;

•Избыточное встраивание в мембрану НЖК на фоне сниженного содержания ННЖК; ■Дисбаланс соотношения оз-б/ю-3 ПНЖК с преобладанием арахидоновой кислоты; •Снижение содержания липид-переносящего белка Нарушение липидного состава в периферической крови Матери, хроническая плацентарная недостаточность, хроническая внутриутробная гипоксия плода, угрожающий аборт, преждевременные роды

Плацента •Повышение содержания фосфолипазы Аг; •Накопление перекисей жирных кислот; •Избыточное встраивание в мембрану НЖК на фоне сниженного содержания ННЖК;

•Дисбаланс соотношения ш-6/м-З ПНЖК с преобладанием, арахидоновой кислоты; •Снижение содержания • липид-переносящего белка

Нарушение транспорта липидов а кровь плода

Кровь пуповины •Увеличение концентрации НЖК; •Снижение содержания ННЖК; •Повышение содержания

фосфолипазы Аг;

•Недостаточное содержание ш-3 ЭЙкозапентаеновоЙ докозагексаеновой кислот, •Дисбаланс соотношения а-6/ш-З ПНЖК с преобладанием провоспалительных ш-6

эйкозаноидов (арахидоновая

кислота и ее метаболиты); ♦Накопление перекисей жирных кислот в крови и эндотелии сосудов пуповины;

•Снижение содержания: лшщд-переносящего белка Повреждение эндотелия сосудов пуповины; асфиксия средней гяжссти, асфиксия легкой тяжести, синдром задержка роста плода в гипотрофия пааорощпешюю

Концептуальная схема механизмов нарушения липидного обмена в системе «мать-плацента-плод» при герпес-вирусной инфекции

Повреждающее действие продуктов пероксидации липидов на структуру мембран эритроцитов усиливалось снижением экзогенного (а-токоферол) и эндогенной (олеиновая кислота) антиокислительной активности.

Результатом такого взаимообусловленного влияния будет являться окислительная модификация белков цитоскелета (спектрина, анкирина, белка полосы 4.1), деструкция фосфолипидного слоя и жирно-кислотных остатков, вызванное высоким уровнем фосфолипазы А2, что приводило к повышению микровязкости мембран эритроцитов клетки, нарушению микроциркуляции в маточно-плацентарной зоне.

Оценивая энергетические и пластические свойства липидов в организме беременных при обострении ГВИ, было установлено снижение в плазме крови общих липидов, ОХС, ХС-ЛПНП, повышение ХС-ЛПВП, триглицеридов, увеличение насыщенности жирных кислот, преобладание ш-6 арахидоновой кислоты и дефицит кислот ш-3 семейства (а-линоленовой, эйкозапентаеновой, докозагескаеновой). Выявлен низкий уровень липид-переносящего белка.

Безусловно, что в условиях несостоятельности механизмов компенсации липидного состава в организме беременных при обострении ГВИ, которые проявлялись на клеточном и тканевом уровнях, нарушались обменные процессы и в тканях плаценты, что обуславливало индукцию перекисного окисления липидов, накопление гидроперекисей, преимущественно, в наружном листке плазматической мембраны синцитиотрофобласта, повышение активности фосфолипазы А2, нарушение соотношения ш-6 и со-3 жирных кислот, снижение уровня липид-переносящего белка. Такого рода нарушения приводят к изменению проницаемости гидрофобного барьера не только синцитиотрофобласта, но и эндотелия сосудов, что является критерием структурно-функциональной несостоятельности плаценты, ограничивающей ее липидтранспортную функцию. В результате в крови плода снижается содержание полиненасыщенных ©-3 а-линоленовой, эйкозапентаеновой, докозагексаеновой кислот и повышается уровень провоспалительного предшественника эйкозаноидов - арахидоновой кислоты, что способствует развитию синдрома задержки роста плода и гипотрофии новорожденного.

Таким образом, на основании выше изложенного можно утверждать, что обострение ГВИ в период беременности, приводит к нарушению трансплацентарной передачи жирных кислот липидов и их состава в крови плода, является причиной развития синдрома задержки роста плода и гипотрофии новорожденного, в которой первостепенная роль принадлежит нарушению липидного метаболизма на сосудистом (кровь), клеточном и органном уровнях.

ВЫВОДЫ

1. В периферической крови беременных при обострении ГВИ увеличивается содержание серотонина в 2,7 раз, усиливающего продукцию макрофагами провоспалительных ТЫРа в 3,6 раз, 1Ь-1 в 3,1 раза, ЮТу в 3,5 раза, что вызывает интенсификацию процессов ПОЛ и дисбаланс в структуре основных классов жирных кислот.

2. Обострение ГВИ на протяжении всего периода гестации снижает функциональную активность неферментативного звена антиоксидантной защиты, как в плазме периферической крови беременных, так и в мембранах эритроцитов, что проявляется в уменьшении содержания сывороточного а-токоферола в 1,2 раза и мембранассоциированной олеиновой кислоты в 1,3 раза, приводит к индукции ПОЛ, накоплению ТБК-активных продуктов, усиливающих активность ферментов, участвующих в липидном метаболизме (фосфолипаза А2).

3. При обострении ГВИ у беременных на протяжении всего срока гестации усиливается структурная дезорганизация мембран эритроцитов периферической крови, которая проявляется окислительной модификацией основных мембранных белков и цитоскелета (снижение содержания спектрина в 1,1 раз, анкирина в 1,6 раз, белков полос 3 и 4.1 в 1,3 раза), деструкции фосфолипидного слоя (повышение уровня лизофосфатидилхолина в 1,8 раз и арахидоновой кислоты в 1,3 раза), что приводит к увеличению микровязкости мембран, трансформации эритроцитов, нарушению микроциркуляции в маточно-плацентарной зоне.

4. Высокая антигенная нагрузка ВПГ-1 в период гестации способствует нарушению энергетических и пластических свойств липидов, что выражается в уменьшении в 1,2 раза уровня общих липидов, ОХС, ХС-ЛПНП, увеличении количества триглицеридов и ХС-ЛПВП, повышении насыщенности липидов за счет возрастания концентрации миристиновой в 1,4 раза, пентадекановой в 1,6 раз, пальмитиновой в 1,1 раз, маргариновой в 1,5 раз, стеариновой в 1,8 раз, дисбаланса соотношения ©-6 линолевой, арахидоновой и ш-3 а-линоленовой, эйкозапентаеновой, докозагексаеновой кислот и низкой активности липид-переносящего белка, нарушает липидный обмен между кровью матери и плода.

5. Действие на фетоплацентарный барьер патогенных факторов (ВПГ-1, ТОТ а) способствует повышению активности фосфолипазы А2 и накоплению продуктов ПОЛ, что приводит к увеличению количества насыщенных соединений, дисбалансу соотношения со-З/со-6 кислот с преобладанием предшественников эйкозаноидов ю-6 семейства - линолевой и арахидоновой кислот на фоне уменьшения количества эссенциальных ю-3 а-линоленовой на 1,8 раз, эйкозапентаеновой на 1,2 раза и в 1,5 раз докозагексаеновой кислот.

6. Обострение ГВИ в период гестации приводит к нарушению механизмов трансплацентарной передачи жирных кислот, вызванное низким уровнем липид-переносящего белка в плаценте, что изменяет жирно-кислотный состав липидов крови пуповины, вследствие увеличения поступления насыщенных кислот (миристиновой на 35%, пентадекановой на 88%, пальмитиновой на 30%, маргариновой на 28%, стеариновой на 37%), провоспалительных предшественников эйкозаноидов: ш-6 линолевой на 30% и арахидоновой кислот на 27%; снижения моноеновой олеиновой на 19%, ш-3 а-линоленовой на 32%, эйкозапентаеновой и докозагексаеновой кислот на 38%.

7. Нарушение состава и механизмов трансплацентарной передачи жирных кислот при обострении ГВИ в период гестации с высокой антигенной нагрузкой (титр антител ^О к ВПГ-1 1:12800) является патогенетически

41

значимым фактором формирования и развития синдрома задержки роста плода и гипотрофии новорожденного.

Список работ, опубликованных по теме диссертации Статьи в рецензируемых журналах и изданиях, рекомендованных ВАК РФ

1. Изменение микровязкости мембран эритроцитов у беременных, инфицированных вирусом герпеса / H.A. Ишутина, H.H. Дорофиенко, И.А. Андриевская [и др.] // Бюллетень ФПД СО РАМН. - 2006. - Вып. 23. - С. 16-17.

2. Андриевская И.А., Ишутина H.A. Диагностика степени повреждаемости мембран эритроцитов у женщин, перенесших во время беременности обострение герпес-вирусной инфекции // Информатика и системы управления. - 2008 - № 2 (16). - С. 111-112.

3. Ишутина H.A. Влияние процессов перекисного окисления липидов на структурно-функциональные свойства мембран эритроцитов у рожениц при герпесной патологии // Сибирский медицинский журнал (Томск). - 2008. - Т. 23, № 4 (1) . - С. 52-54.

4. Луценко М.Т., Андриевская И.А., Ишутина H.A. Содержание стабильных метаболитов NO в плаценте беременных, перенесших в третьем триместре обострение герпес-вирусной инфекции // Бюллетень СО РАМН. -2009. - №5 (139). - С. 128-132.

5. Луценко М.Т., Андриевская И.А., Ишутина H.A. Изменение микровязкости мембран эритроцитов периферической крови при обострении герпес-вирусной инфекции у беременных // Информатика и системы управления. - 2010. - № 2 (24). - С. 98-100.

6. Ишутина H.A. Взаимосвязь изменения ю-3 и ш-6 полиненасыщенных жирных кислот при беременности, осложненной герпес-вирусной инфекцией //Фундаментальные исследования. - 2010,- № 10. - С. 55-62.

7. Ишутина H.A. Изменение содержания фосфатидилэтаноламина и арахидоновой кислоты в мембранах эритроцитов беременных с обострением герпес-вирусной инфекцией в 3 триместре беременности в зависимости от титра антител // Бюллетень ФПД СО РАМН. - 2010. - Вып. 38. - С. 58-60.

8. Ишутина H.A. Характеристика насыщенных жирных кислот тканей плаценты при ГВИ // Бюллетень ФПД СО РАМН. - 2011. - Вып. 41.- С. 42-44.

9. Ишутина H.A. Эйкозеновые кислоты ряда С2о - предшественники синтеза эйкозаноидов и их обмен у беременных с герпес-вирусной инфекцией // Бюллетень ФПД СО РАМН. - 2011. - Вып. 41. - С. 35-38.

10. Ишутина H.A. со-3 ПНЖК в гомогенате плацент женщин, перенесших во время гестации обострение герпес-вирусной инфекции // Бюллетень ФПД СО РАМН. - 2011. - Вып. 42. - С. 64-66.

11. Ишутина H.A. Перекисное окисление липидов и микровязкость мембран эритроцитов у женщин с обострением герпес-вирусной инфекции // Дальневосточный медицинский журнал. - 2012. - № 1. - С. 59-61

12. Ишутина H.A. Жирные кислоты как источники энергии при беременности и их метаболизм в условиях герпес-вирусной инфекции // Фундаментальные исследования. - 2012. - № 4 (2). - С. 278-282.

42

13. Ишутина H.А. Лизофосфатидилхолин и арахидоновая кислота -маркеры мембранодеструкции и их метаболизм в условиях герпес-вирусной инфекции // Бюллетень ФПД СО РАМН. - 2012. - Вып. 43. - С. 93-95.

14. Ишутина Н.А. Характеристика обмена пальмитиновой кислоты в периферической крови беременных с герпес-вирусной инфекцией // Бюллетень ФПД СО РАМН. - 2012. - Вып. 43. - С. 96-98.

15. Ишутина Н.А. Эйкозеновые кислоты в плаценте при герпес-вирусной инфекции // Бюллетень ФПД СО РАМН. - 2012. - Вып. 44. - С. 75-78.

16. Ишутина Н.А. Особенности метаболизма а-линоленовой кислоты при беременности, осложненной герпес-вирусной инфекцией // Бюллетень ФПД СО РАМН. - 2012. - Вып. 44. - С. 66-68.

17. Ишутина Н.А. Жирно-кислотный состав липидов плаценты у женщин, перенесших во время беременности обострение герпес-вирусной инфекции // Фундаментальные исследования. - 2012. - № 7 (2). - С. 334-337.

18. Луценко М.Т., Андриевская И. А., Ишутина Н.А. Кислородтранспортная функция крови у беременных, перенесших обострение герпес-вирусной инфекции // Вестник РАМН. - 2012. - № 6. - С. 66-72.

19. Луценко М.Т., Андриевская И. А., Ишутина Н.А. Морфофункциональная характеристика мембран эритроцитов у беременных, перенесших обострение герпес-вирусной инфекции // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2012. - Т. 154, № 7. - С. 126-129.

20. Lutsenko М.Т., Andrievskaja I.A., Ishutina N.A. Morphology and Functions of Erythrocyte Membranes in Pregnant Women after Exacerbation of Herpesvirus Infection // Bulletin of Expérimental Biology and Medicine. - 2012. -Vol. 154, № 7. -P. 126-129.

21. Lutsenko M.T., Andrievskaja I.A., Ishutina N.A. Lipid Transport through the Fetoplacental Barrier by the Fatty Acid-Binding Proteins in Pregnant Women with Herpes Virus Infection in third Trimester // International Journal of BioMedicine. - 2012. - Vol. 2, № 4.- P. 298-301.

22. Ишутина Н.А. Антиокислительная активность олеиновой кислоты у беременных с герпес-вирусной инфекцией // Бюллетень ВСНЦ СО РАМН. -2013.-№ 1,- С. 25-28.

23. Ишутина Н.А. Влияние серотонина и цитокинов на жирно-кислотный состав периферической крови беременных с герпес-вирусной инфекцией // Сибирский медицинский журнал (Иркутск). - 2013. - Т. 117, 2. - С. 50-52.

24. Ишутина Н.А. Насыщенные жирные кислоты в крови пуповины при герпес-вирусной инфекции //Якутский медицинский журнал. - 2013. - № 2. - С. 95-96.

25. Ишутина Н.А, Андриевская И.А. Состояние процессов перекисного окисления липидов и антиоксидантной защиты в периферической крови у беременных с герпес-вирусной инфекцией // Сибирский медицинский журнал (Иркутск). - 2013. - Т.118, № 3.- С. 33-36.

26. Ишутина Н.А. Активность фосфолипазы А2 и состояние процессов перекисного окисления липидов в периферической крови у беременных с ГВИ //Успехи современного естествознания. - 2013. - № 2,- С. 12-14.

43

27. Ишутина H.A. Состав жирных кислот фосфатидилхолина и лизофосфатидилхолина мембран эритроцитов у беременных с обострением ГВИ в III триместре // Якутский медицинский журнал. - 2013. - № 2. - С. 9-12.

28. Ишутина H.A. Способ диагностики нарушений устойчивости мембран эритроцитов у беременных с герпес-вирусной инфекцией // Информатика и системы управления - 2013,- № 2. - С. 166-168.

29. Ишутина H.A. Состав полиненасыщенных жирных кислот в крови пуповины при герпес-вирусной инфекции // Дальневосточный медицинский журнал. - 2013. - № 2. - С. 49-51.

30. Ишутина H.A. Влияние состава полиненасыщенных жирных кислот на микровязкость мембраны эритроцитов пуповинной крови при герпетической инфекции// Бюллетень сибирской медицины. - 2013.- Т. 12, № 3 - С. 37-40.

31. Луценко М.Т., Довжикова И.В., Андриевская И.А., Ишутина H.A., Бабенко О.П. Транспорт липидов через фетоплацентарный барьер с помощью липид-переносящих белков H-FABP у беременных с обострением в III триместре гестации цитомегаловирусной инфекции // Бюллетень ФПД СО РАМН. - 2013. - Вып. 47. - С. 62-71.

Публикации в иных изданиях

1. Дорофиенко H.H., Ишутина H.A. Изменение состава липидного спектра сыворотки крови у женщин во время беременности при поражении организма ГВИ // Бюллетень ФПД СО РАМН. - 2008. - Вып. 28. - С. 29-32.

2. Ишутина H.A. Зависимость микровязкости мембран эритроцитов от фосфолипидного состава при беременности, осложненной герпес-вирусной инфекцией // Бюллетень ФПД СО РАМН. - 2008. - Вып. 28. - С. 25-28.

3. Ишутина H.A. Структурно-функциональные изменения мембран эритроцитов рожениц при герпес-вирусной инфекции // IV сибирский физиологический съезд. Тезисы докладов (Барнаул, 25-27 июня 2008). -Барнаул: Принтэкспресс, 2008. - Т. II. - С. 25-26.

4. Ишутина H.A. Мембранные липиды при беременности, осложненной герпес-вирусной инфекцией // Бюллетень ФПД СО РАМН. - 2008. - Вып. 30. -С. 41-45.

5. Ишутина H.A. Липидный состав пуповинной крови от матерей с патологическим течением беременности // Бюллетень ФПД СО РАМН. - 2008. -Вып. 30. - С. 56-58.

6. Ишутина H.A. Содержание некоторых насыщенных жирных кислот в мембранах эритроцитов у женщин с обострением герпес-вирусной инфекцией // Бюллетень ФПД СО РАМН. - 2010. - Вып. 35,- С. 30-32.

7. Ишутина H.A. Линолевая и линоленовая жирные кислоты и их роль в функционировании мембран эритроцитов при обострении герпесной инфекции в период гестации // Проблемы и перспективы современной науки. - 2011. - Т. 3, № 1. - С. 50-51.

8. Ишутина H.A. Динамика показателей фосфолипидов сыворотки крови и мембран эритроцитов при обострении герпес-вирусной инфекции в период беременности // Современный мир, природа и человек. - 2011. - Т. 2, № 1. - С. 68.

9. Ишутина H.A. Линолевая и арахидоновая ю-6 ПНЖК липидов плаценты при ГВИ // Естествознание и гуманизм. - 2011. - Т. 7, № .1 - С. 33-35.

10. Ишутина H.A. Докозагексаеновая кислота у беременных с обострением герпес-вирусной инфекции // Актуальные проблемы современной науки. - 2012. -Т. 1, № 1.-С. 29-31.

11. Ишутина H.A. Эйкозапентаеновая кислота в сыворотке крови беременных III триместра с обострением герпес-вирусной инфекции // Материалы VIII международной научно-практической конференции «Новейшие научные достижения», 2012. - Т. 26. Лекарство. - София «Бял ГРАД-БГ» ООД. - С. 3-6.

12. Ишутина H.A. Метаболизм жирных кислот у беременных с герпес-вирусной инфекцией // «Актуальные вопросы акушерства и гинекологии»: материалы Дальневосточной научно-практической конференции с международным участием. - Благовещенск, 2012. - С. 73-77.

13. Ишутина H.A. Некоторые показатели липидного обмена у беременных с герпес-вирусной инфекцией // «Вопросы сохранения и развития здоровья Севера и Сибири»: мат. научно-практической конференции, Вып. 11/ под ред. В .Т. Манчука, C.B. Смирновой. - Красноярск, 2012. - С. 126-127.

14. Ишутина H.A. Некоторые показатели липидного обмена у новорожденных от матерей с обострением герпес-вирусной инфекции // «Актуальные вопросы охраны материнства и детства на современном этапе»: материалы II съезда педиатров Дальнего Востока. - Хабаровск, 2012. - С. 80-82.

15. Ишутина H.A. Особенности структурно-функциональных нарушений мембран эритроцитов периферической крови беременных III триместра при герпес-вирусной инфекции // Материалы VIII международной научно-практической конференции «Динамика современной науки», 2012. - Т. 10. Лекарство. Биология. - София «Бял ГРАД-БГ» ООД. - С. 11-13.

16. Ишутина H.A. Перекисное окисление липидов и антиоксидантная защита в периферической крови беременных III триместра при герпес-вирусной инфекции //Materialy VIII mezinarodni vedecko-praktika conference «Aplikovane vedecke novinky-2012».-Dil. 10. Lekarstvi. Biologicke vedy. Chemie a chemicka technologie: Praha. Publishing Hause «Education and Science». - P. 3-5.

17. Луценко M.T., Быстрицкая T.C., Андриевская И.А., Ишутина H.A. Метод диагностики нарушений липидного метаболизма у беременных с герпесной патологией: пособие для врачей. — Благовещенск: ФГБУ «ДНЦ ФПД» СО РАМН, 2013. - 24 с.

Патенты

1. Луценко М.Т., Ишутина H.A. Способ определения содержания в периферической крови беременных арахидоновой кислоты при обострении герпес-вирусной инфекции // Патент РФ № 2405155,27.11.2010.

2. Луценко М.Т., Андриевская И.А., Ишутина H.A. Способ оценки структурно-функционального состояния мембран эритроцитов периферической крови у беременных при обострении герпес-вирусной инфекции // Патент РФ №2389021, 10.05.2010.

3. Луценко М.Т., Ишутина H.A. Способ выявления снижения фосфатидилэтаноламина в мембранах эритроцитов беременной при обострении герпес-вирусной инфекции на фоне увеличения в периферической крови TNFa //Патент РФ №2455647, 10.07.2012.

4. Луценко М.Т., Андриевская И.А., Ишутина H.A. Способ оценки структуры мембран эритроцитов периферической крови беременных при обострении герпес-вирусной инфекции // Патент РФ № 2458348, 10.08.2012.

5. Луценко М.Т., Ишутина H.A. Способ оценки микровязкости мембран эритроцитов путем вычисления коэффициента эксимеризации пирена Кэкс у беременных, перенесших обострение герпес-вирусной инфекции в третьем триместре гестации, с учетом определения процентного содержания олеиновой кислоты в мембранах эритроцитов // Патент РФ № 2467334,20.11.2012.

6. Луценко М.Т., Андриевская И.А., Ишутина H.A. Способ определения подавления переноса липидов с помощью липид-переносящих белков H-FABP через фетоплацентраный барьер у беременных, перенесших в третьем триместре гестации герпес-вирусную инфекцию // Патент РФ № 2485520, 20.06.2013.

7. Луценко М.Т., Ишутина H.A. Способ оценки влияния герпес-вирусной инфекции беременной на проникновение повышенного количества арахидоновой кислоты в пуповинную кровь новорожденного // Патент РФ №2485521,20.06.2013.

8. Луценко М.Т., Андриевская И.А., Ишутина H.A. Способ определения фетоплацентарной недостаточности у беременных, перенесших в III триместре гестации обострение цитомегаловирусной инфекции // Патент РФ № 2492815, 20.09.2013.

Монография

1. Луценко М.Т., Андриевская И.А., Довжикова И.В., Ишутина H.A. Морфофункциональные закономерности нарушения дыхательной функции плаценты при беременности, осложненной герпес-вирусной инфекцией. -Владивосток: Дальнаука, 2012. - 143 с.

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ АФК - активные формы кислорода ВПГ-1 - вирус простого герпеса 1типа ГВИ - герпес-вирусная инфекция ОХС - общий холестерол ПНЖК - полиненасыщенные жирные кислоты ПОЛ - перекисное окисление липидов ПЦР - полимеразная цепная реакция ТБК - тиобарбитуровая кислота ТБК-АП - ТБК-активные продукты

ХС-ЛПВП - холестерол липопротеидов высокой плотности ХС-ЛПНП - холестерол липопротеидов низкой плотности TNFa - фактор некроза опухоли а INFy - интерферон у IL-1 - интерлейкин 1

Отпечатано в ЦОП «ШБО-РИШТ» ИП Кубышкиной Г.М. г. Благовещенск,

ул. Ломоносова, 225, тел. 53-40-44, свидетельство 20431РП, ИНН

280100224933, ОГРНИП 304280134400018. Заказ № 001432 от 12.11.2013. Тираж 100 шт.