Автореферат и диссертация по медицине (14.00.14) на тему:Локализация и свойстваа антигенов Bac.Megaterium H ,перекрестно реагирующих с антигенами опухолей

Важнейшей проблемой онкоиммунологии является разработка эффективных методов иммунотерапии злокачественных опухолей. Одним из таких методов является иммунотерапия опухолей, основанная на адъювантном действии микроорганизмов - представителей различных видов - Corynebacterium, Mycobacterium, Streptococcus и т. д. /4,75,103*, 124/. Показано, что они неспецифически активируют моно-цитарнр-макрофагальную систему /192/, усиливают Т-киллерную активность /253/. В то же время известно, что многие из микроорганизмов, использующиеся в данное время для неспецифической адъювант-ной терапии опухолей, обладают антигенной общностью с дифференци-ровочными антигенами нормальных тканей и, что особенно важно, с антигенами, входящими в состав опухолевых клеток /19,158,179,182/.

Известно также, что одним из принципов специфической активной иммунотерапии опухолей является использование различных вакцин или антигенов из опухолевой ткани /8/. В связи с этим изучение антигенов микроорганизмов, перекрестно реагирующих с антигенами опухолей, представляет несомненный интерес, так как открывает перспективы использования микробных ПРА не только для специфической иммунотерапии опухолей, но и для их иммунодиагностики. Однако изучение возможностей применения в этих целях микробных ПРА сдерживается отсутствием сведений об их антигенной специфичности, что является очень важным обстоятельством, так как современная иммунодиагностика опухолей основана на определении ассоциированных с опухолью моноклональных антигенов, антигенов трансформации, дифференцировочных антигенов /2/. Обнаружение подобных антигенов в микроорганизмах и изучение их антигенной специфичности может открыть возможность применения их для иммунотерапии и иммунодиагностики опухолей. В этом плане несомненный интерес представляет микробная культура Bac.megaterium Н, антигены которой перекрестно реагируют, с антигенами опухолей и способны индуцировать противоопухолевую резистентность /17,19,21/. Кроме того, заслуживают тщательного изучения причины иммунодепрессии, вызываемой этим микроорганизмом, особенно в связи с его способностью индуцировать образование опухолей /20/.

В связи с вышеизложенным целью нашей работы явилось изучение локализации в микробной клетке и антигенной специфичности ПРА Бас. megaterium Н.

Основные задачи исследования: определение стенотипических особенностей клеток опухолей, индуцированных Bac.megaterium Н; изучение ультраструктуры клеток Bac.megaterium Н, отработка методов дезинтеграции микробных клеток и выделения субклеточных компонентов из клеток Bac.megaterium Н; определение наличия ПРА в субклеточных компонентах; установление антигенной специфичности ПРА; исследование имрлуно-химических особенностей ПРА; изучение иммуногенности ПРА; определение иммунодепрессивной активности ПРА и субклеточных структур Bac.megaterium Н; изучение способности ПРА И субклеточных структур Bac.megaterium н к индукции противоопухолевой резистентности.

Основные положения, выносящиеся для зашиты

I. На поверхности клеток, протопластов и в растворимой фракции цитоплазмы /РФЦ/ Bac.megaterium Н расположены ПРА различной специфичности.

2. Антиген клеточных стенок Bac.megaterium Н перекрестно реагирует с мембранным ОАА индуцированных в-лимбом.

3. Антигены протопластов Bac.megaterium Н перекрестно реагируют с органоспецифическими антигенами В-лимроцитов и гепатоци-тов мышей.

4. ПРА клеточных стенок Bac.megaterium Н индуцирует образование цитотоксических противоопухолевых антител и Т-киллеров.

5. ПРА клеточных стенок Bac.megaterium н вызывает образование резистентности к индуцированным В-лим]зомам.

6. Рибосомы Bac.megaterium н обладают иммуносупрессивной активностью, а волютиновые включения Bac.megaterium н - иммуностимулирующей активностью.

Научная новизна "результатов исследований

В работе впервые установлены фенотипкческие особенности клеток опухолей, индуцированных Bac.megaterium Н. Показано, что их предшественниками являются В-лимфоциты, трансформация которых произошла на различных стадиях их дифференцировки и сопровождается появлением в опухолях новых антигенных специфичностей - ОАА. Впервые выявлено, что детерминанты поверхностного антигена клеток Bac.megaterium Н перекрестно реагируют с кросс-реактивными детерминантами ОАА индуцированных В-лимфом, а поверхностные антигены протопластов Bac.megaterium н - с органоспецифическими антигенами В-лим^оцитов и гепатоцитов мышей. Установлено, что поверхностный ПРА клеточных стенок является гликопротеидом, антигенная специфичность которого обусловлена белковой /термолабильной/ и углеводной /термостабильной/ детерминантами. Обнаружено также, что антитела против поверхностного ПРА. клеточных стенок перекрестно реагируют с детерминантами ОАА.

Установлено, что поверхностный ПРА клеточных стенок. Бас. negate rium н индуцирует образование гомологичных РОК, АОК, агглютинирующих антител и клеток-эффекторов ГЗТ, а также перекрестно реагирующих противоопухолевых цитотоксических. антител и Т-киллеров. Обнаружена положительная корреляция между интенсивностью образования гомологичных АОК, антител, клеток-эффекторов ГЗТ и интенсивностью образования противоопухолевых цитотоксических антител и накопления противоопухолевых Т-кшшеров. Развитие обеих форм иммунного ответа, индуцированного этим антигеном, генетически контролируется. Кроме межлинейных различий в интенсивности иммунного ответа, у некоторых линий мышей, наряду с интенсивной гуморальной реакцией, обнаружен низкий уровень РГЗТ к поверхностному ПРА, что коррелирует с низкой цитотоксической активностью Т-киллеров, индуцированных этим антигеном.

Показано, что поверхностный ПРА Bac.megaterium Н не обладает иммунодепрессивной активностью и индуцирует развитие специфической противоопухолевой резистентности, опосредуемой Т-киллерами, рецепторы которых комплементарны к ОАА индуцированных В-лимфом. Развитие обеих форм противоопухолевого иммунитета и противоопухолевой резистентности, индуцированной поверхностным ПРА Bac.megaterium н, подавляется рибосомами этого микроорганизма. Впервые установлено, что изолированные рибосомы Bac.megaterium Н обладают иммунодепрессивной активностью, проявление которой дозозависи-мо, распространяется по отношению к различным антигенам и не зависит от генотипа животного. Кроме этого, обнаружено, что рибосомы этого микроорганизма стимулируют развитие опухолей различного гистогенеза, что связано с индукцией ими Т-супрессоров.

Впервые обнаружено, что волютиновые включения Вас. megateri-um н обладают иммуностимулирующей активностью, проявление которой дозозависимо, не зависит от генотипа и носит адъювантный характер при совместном введенщ с поверхностным ПРА Бас. megaterium н. Изолированные волютиновые включения усиливают противоопухолевую резистентность к. опухолям различного гистогенеза, стимулируя активность естественных киллеров.

Научно-практическое значение "работы

Обнаруженное нами сходство поверхностного антигена Вас.megaterium н и мембранного ОАА В-лим|>ом, индуцированных этим микроорганизмом, имеет важное научное значение для онкологии, так как позволяет рассматривать микроорганизмы, как один из возможных факторов канцерогенеза. Кроме этого, выявление в клетках Вас.megaterium н ПРА, общих с органоспецифическим антигеном гепатоцитов /ге-терооргалным антигеном, экспрессированным при трансформации/, В-лизуфоцитов и ОАА трансформации, по ряду обстоятельств имеет большое научное и практическое значение для онкоиммунологии.

Во-первых, выявление в микроорганизмах антигенов подобных типов открывает возможность использования в иммунодиагностике опухолей, что согласуется с современными принципами иммунодиагностики, заключающимися в иммунологической идентификации опухолей на основе определения маркеров или антигенов различной специфичности, ассоциированных с опухолевой клеткой /2/. В этом плане возможно использование моноспецифических сывороток или моноклональных антител против микробных ПРА с целью иммунологической идентификации опухолей и метастазов, а также для контроля экспрессии ОАА в процессе терапии опухолей. Кроме того, в диагностических целях возможно использование очищенных микробных ПРА как. тест-антигенов для определения противоопухолевого ответа организма на ОАА.

Во-вторых, микробные антигены, перекрестно реагирующие с антигенами опухолей, представляют несомненную ценность для специфической активной иммунотерапии опухолей.

В-третьих, обнаружение иммунодепрессивной и опухолестимули-ругощей активности рибосом Bac.megaterium Н имеет важное значение для неспецифической адъювантной терапии опухолей, так как возможно, что эти внутриклеточные органеллы микроорганизмов являются одной из причин стимуляции опухолевого процесса, часто наблюдающегося при коррекции иммунного статуса организма, пораженного опухолью, микроорганизмами-модуляторами /3,137,153/.

Важное значение имеет также обнаруженная наш способность во-лютиновых включений Bac.megaterium Н повышать противоопухолевую резистентность инбредных и беспородных животных, что представляет несомненный интерес для неспецифической противоопухолевой терапии, поскольку это свойство волютиновых включений, по-видимому-, связано с активацией ими противоопухолевой активности естественных киллеров - лимфоидных клеток, являющихся, по современным представлениям, первым рубежом на пути распространения опухолевых клеток.

ПЕРЕКРЕСТНО РЕАГИРУЮЩИЕ АНТИГЕНЫ МИКРО- И МАКРООРГАНИЗМОВ

Наличие общих антигенов у микроорганизмов различных видов и тканей млекопитающих - широко распространенное явление. К настоящему времени накоплен; большой фактический материал, свидетельствующий о существовании в микроорганизмах антигенов, сходных с большинством известных типов клеточных агентов, определяющих фенотип нормальных дефинитивных, эмбриональных и опухолевых клеток. К настоящему времени в клетках нормальных тканей макроорганизмов выявлены различные типы клеточных антигенов, представленных в основном видо-, изо-, органо-, ткане-, эмбриоспецифическими антигенами /65/. Бурное развитие исследований антигенов и маркеров лимфоцитов привело к выявлению целой серии дифференцировочных антигенов, свойственных различным субпопуляциям Т- и В-лимфоцитов /172,211,237/.

Кроме; перечисленных, в клетках нормальных тканей обнаружена еще одна многочисленная группа антигенов, общих для разных видов животных. Характерной особенностью этих антигенов, получивших название гетерогенных, является присутствие их в тканях, выполняющих различные функции. Эта группа объединяет таксономические гетероан-тигены близкородственных видов, родов, семейств, функционально сходные гетероантигены /ферменты, гормоны/ и ПРА макро- и микроорганизмов /14/. Сочетание всех перечисленных типов клеточных антигенов детерминировано в онтогенезе, остается стабильным на протяжении многих клеточных поколений и является стойким фенотипическим признаком определенного клона клеток /65/.

Антигенная структура опухолевых клеток значительно отличается от антигенной структуры нормальных клеток, из которых возникла опухоль. В процессе малигнизации в опухолевых клетках появляется новая антигенная композиция, определяющая уже фенотип опухолевых клеток. При этом происходят значительные количественные и качественные изменения антигенной дифференциации, присущей исходным нормальным клеткам.

Одним из характерных признаков опухолевых клеток является появление в них ОАА, не присущих организму, в котором возникла опухоль, и способных вызывать противоопухолевую иммунологическую реакцию /116/. В настоящее время различают следующие группы этих антигенов /1,2/.

Антигены вирусиндуцированных опухолей, синтез которых детерминирован вирусным геномом. Отличительной чертой этих антигенов является их общность у животных разных видов, когда опухоль индуцируется одним и тем же вирусом /144/. К этим антигенам относятся структурные антигены ретровирусов, экспрессируемые на клеточных мембранах /150/, гибридные полипептиды, включающие фрагмент груп-поспецифического антигена ретровирусов и клеточного белка /150/, и антигены, контролируемые геномом ДНК-содержащих вирусов /159/.

Антигены опухолей, индуцированных химическими канцерогенами. Их характеризует индивидуальная антигенная специфичность /141/, хотя довольно часто встречаются перекрестные реакции /152/.

Антигены опухолей, представленные аллоантигенами трансплантационного типа, не характерные для организма, у которого развилась опухоль /167/.

Опухолевоэмбриональные антигены, синтез которых свойствен опухолям, индуцированным онковирусами и химическими канцерогенами /102/.

Моноклональные антигены, классическим примером которых являются ig /МОН/ и их легкие цепи, секретируются плазмоцитомами, а в В-клеточных лимфомах локализованы в клеточных мембранах /201/.

Дифференцировочные антигены, присущие гомологичной ткани, из которой возникла опухоль /оргадоспецифические антигены печени,молочной железы, стадиеспецифические антигены клеток лимфо-, миело-и эритропоэза/ /28,92/.

Из приведенных данных видно, что антигенная структура нормальных клеток сложна и многообразна. Такое же, если не большее многообразие антигенной структуры, наблюдается в опухолевых клетках, в которых кроме антигенов, присущих нормальным клеткам, появляются антигены, присущие другим органам или видам, или вовсе не встречающиеся в нормальных тканях.

Но несмотря на исключительную антигенную сложность тканей макроорганизмов, антигены, сходные с тканевыми, были обнаружены и в микроорганизмах, филогенетически далеко отстоящих от млекопитающих. Это привело к тому, что в рамках экспериментальной и клинической иммунологии выделилось направление, изучающее антигенное сходство микроорганизмов с нормальными и опухолевыми тканями, а также роль микробных ПРА в патогенезе некоторых инфекционных заболеваний и механизмах канцеро- и антиканцерогенеза. Хотя причины появления общих антигенных детерминант в различных по своим уровням структурной организации тканевых и микробных клетках полностью не выяснены, анализ, литературных данных показывает, что антигенная общность микро- и макроорганизмов - широко распространенное явление.

ВЫВОДЫ

1. Показано, что предшественниками асцитных опухолей 0H-I, ОН-2, ОН-З, ОП-3, индуцированных Bac.megaterium Н у мышей линий A/Sn и Balb/c, являются В-лимфоциты, злокачественная трансформация которых произошла на различных стадиях их дифференцировки.

Установлено, что ОАА индуцированных опухолей содержат общие детерминанты и детерминанты, специфичные для кавдой опухоли.

2. Впервые показано, что антигены Bac.megaterium н, перекрестно реагирующие с антигенами опухолей, обладают различной антигенной специфичностью: антиген клеточных стенок Bac.megaterium н перекрестно реагирует с ОАА индуцированных опухолей; антигены цитоплазменной мембраны Bac.megaterium Н перекрестно реагируют с органоспецифическими антигенами В-лимфоцитов и гепа-тоцитов мышей A/Sn; антиген растворимой фракции цитоплазмы Bac.megaterium н перекрестно реагирует с внутриклеточным ОАА клеток индуцированных опухолей.

3. Перекрестная антигенная активность ПРА клеточных стенок Bac.megaterium н опосредуется термолабильной /белковой/ и термостабильной /углеводной/ детерминантой.

4. ПРА клеточных стенок Bac.megaterium н индуцирует образование РОК, АОК, РГЗТ, а также противоопухолевых цитотоксических антител и Т-киллеров.

5. ПРА клеточных стенок индуцирует образование противоопухолевой резистентности, клетками-эффекторами которой являются Т-киллеры.

6. Рибосомы Bac.megaterium н индуцируют образование неспецифических Т-супрессоров, подавляют развитие Т- и В-клеточного иммунного ответа, индуцированного клеточными стенками Bac.megaterium н и ЭБ, и стимулирует развитие трансплантированных опухолей.

7. Волютиновые включения Bac.megaterium н обладают иммуностимулирующей активностью и повышают противоопухолевую резистентность к различным экспериментальным опухолям.

включения

A/Sn 15

Balb/c 15

Рибосомы A/Sn 15 Интактные мыши

A/Sn 15 Balb/c 15 трансплантированных опухолевых клеток /лимфома ОН-2 или ОП-3/ составляло 1,5.10 , а переносимых живых спленоцитов и опухолевых клеток - 94-98$. Данные опытов приведены в табл.36.

Из них видно, что клетками-эффекторами, опосредующими противоопухолевую резистентность у мышей, иммунизированных клеточными стенками, являются Т-киллеры. На это указывает 100% прививаемость опухолей у мышей обеих линий и достоверное снижение СЖ у мышей, получивших спленоциты с удаленными Т-клетками, по сравнению с мышами, получившими исходные спленоциты /Р < 0,01; 0,05/ или спленоциты без ig+ клеток и макрофагов /Р < 0,01/. Более того, введение спленоцитов с удаленными ig+ клетками или макрофагами приводило к достоверному увеличению СМ /линия Balb/c / по сравнению с СЖ мышей, получивших исходные спленоциты /Р <0,05/. Это, по-видимому, можно объяснить увеличением количества Т-киллеров в спле-ноцитах, лишенных ig+ клеток и макрофагов.

Спленоциты мышей, иммунизированных волютиновыми включениями, проявили высокую противоопухолевую активность во всех вариантах переноса. Это свидетельствует о том, что клетки-эффекторы противоопухолевой резистентности не являются Thy l+, lg+ клетками или макрофагами, так как удаление их вызывало лишь достоверное увеличение СПЖ мышей по сравнению с СЖ мышей, получивших исходные спленоциты /Р < 0,05; 0,01/. Это происходило за счет увеличения клеток-эффекторов, не чувствительных к Thy 1,2 и ig антителам и являющихся естественными киллерами, пролиферация которых произошла под влиянием волютиновых включений.

Перенос спленоцитов мышей, иммунизированных рибосомами,почти во всех вариантах не повышал противоопухолевой устойчивости /100%/, а более того, способствовал стимуляции опухолевого роста, выражавшуюся в достоверном по сравнению с контролем снижении СЖ / ?< 0,05/. Стимуляции опухолевого роста не наблюдалось лишь тогда, когда переносили спленоциты, лишенные Т-клеток. В этом случае показатели СЖ не отличались от показателей СЖ мышей, получивших аналогичные спленоциты от интактных мышей /Р> 0,05/. Это может свидетельствовать о преимущественном накоплении в селезенке шшей,иммунизированных рибосомами, Т-клеток, обладающих супрессорной активностью /Т-супрессоров/.Такая же ситуация наблюдалась и при исследовании противоопухолевой активности спленоцитов мышей, иммунизированных клетками Bac.megaterium Н. Лишь при использовании спленоцитов с удаленными Т-клетками наблюдалось увеличение СПЖ мышей по сравнению с СПЖ мышей, получивших аналогичные спленоциты от ин-тактных /Р <" 0,05/, или нефракционированные спленоциты мышей, иммунизированных клетками /Р< 0,05/. В других вариантах переноса . наблюдалась тенденция к уменьшению СПЖ, наиболее достоверно проявляющаяся в варианте с использованием спленоцитов, лишенных lg+ клеток /Р < 0,05 по сравнению с СПЖ мышей, получивших аналогичные спленоциты от интактных или нефракционированные спленоциты иммунизированных клетками мышей/. Это дает основание полагать, что иммунизация клетками Bac.megaterium Н также вызывает накопление Т-клеток, обладающих супрессорной активностью.

Таким образом, приведенные в этой главе данные позволяют сделать следующие выводы.

1. Антигенами, индуцирующими развитие противоопухолевой резистентности, являются поверхностные, перекрестно реагирующие с ОАА, антигены клеточных стенок Bac.megaterium Н.

2. Клетками-эффекторами противоопухолевой резистентности, индуцированной ПА клеточных стенок, являются Т-киллеры.

3. Развитие противоопухолевой резистентности, индуцированной ПА, подавляется рибосомами и стимулируется волютиновыми включениями, что связано в первом случае с накоплением Т-супрессоров, а во втором - естественных киллеров.

4. Модулирующая активность рибосом и волютиновых включений дозозависима и распространяется по отношению к различным опухолям.

ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ ДАННЫХ

В последнее время в онкологии уделяется большое внимание разработке различных методов стимуляции функциональной активности иммунной системы организма, пораженного опухолью. В качестве иммуностимуляторов широко используются различные микроорганизмы. К настоящему времени в этом качестве с различным успехом испробовано большинство представителей известных таксономических разновидностей микроорганизмов: E.coli /245,246/, Streptococcus /124/, Pseudomonas /ЮЗ/, Mycobacterium /111,252,257/ И т.д. Показано, что они неспецифически активируют моноцитарно-макрофагальную систему /4,177,186,192/, усиливают Т-киллерную активность /161,253/, способствуют выработке секреции иммунокомпетентными клетками биологически активных веществ, выполняющих медиаторную и эффекторную функции /82,164/. Однако, кроме неспецифической активации иммуно-компетентных клеток, микроорганизмы способны индуцировать и специфическую противоопухолевую иммунную реакцию. Таким свойством обладают микроорганизмы, имеющие антигены, сходные с ОАА. Подобные антигены обнаружены в клетках bcg и в различных штаммах Stг.pyogenes /168,182,222/. Показано, что клетки bcg или их клеточные стенки индуцируют специфическую противоопухолевую резистентность по отношению к определенным штаммам гепатом /179/. Антигенный комплекс ОК-432, выделенный из клеток str.pyogenes A3, также проявляет специфическое профилактическое и терапевтическое противоопухолевое действие /73,123/.

Приведенные данные показывают, что микробные антигены, перекрестно реагирующие с ОАА, могут использоваться в иммунотерапии опухолей.

Наиболее детальные исследования, направленные на изучение возможностей использования микробных ПРА в онкоиммунологии, были проведены Д.Г.Затулой с микробной культурой Bac.megaterium Н /18, 19/. Была показана способность Bac.megaterium Н индуцировать резистентность к ряду экспериментальных опухолей, которая опосредовалась цитотоксическими лимфоцитами /39/, установлена целесообразность использования кяеток этого микроорганизма для контроля противоопухолевого иммунитета /18,22/. Кроме этого, была обнаружена также и иммунодепрессивная активность клеток этой культуры, которая, по-видимому, тесно связана с индукцией опухолей у мышей /20/, повышением частоты и сокращением латентного периода выхода спонтанных опухолей у некоторых линий мышей под влиянием цитоплазмы Вас. megaterium Н /23/.

Определенную роль в развитии этих явлений могли играть ПРА Bac.megaterium н, что и явилось причиной исследования их локализации в микробной клетке и антигенной специфичности. Поскольку нас в первую очередь интересовало наличие в клетках этого микроорганизма антигена, перекрестно реагирующего с ОАА, немаловажным являлся выбор опухолей, клетки которых мы использовали как тест-мишени для определения специфичности иммунного ответа, индуцированного ПРА, и как иммуногены для получения специфических антител к ОАА. Наиболее подходящими для этих целей являются опухоли, индуцированные и перевиваемые в сингенной системе, в которой несовместимость опухоли с организмом обусловлена опухолеассоциированным антигеном, новой для организма антигенной специфичностью, экспрессированной в опухолевых клетках. Учитывая это, в своих опытах мы использовали асцитные опухоли 0H-I, ОН-2, ОН-З, ОП-3, индуцированные Bac.megaterium н у мышей A/Sn и Balb/c. Конкретность выбора указанных опухолей обусловливалась оригинальностью биологического происхождения и свойств индуктора опухолей - микробной культуры, обладающей антигенным свойством с клетками опухолей.

Изучение фенотипических особенностей клеток индуцированных опухолей показало, что хотя основная масса их представлена ig позитивными клетками, между ними наблюдаются некоторые фенотипичес-кие различия. Они проявляются в отсутствии в Ig+ клетках опухоли 0H-I мембранных ig, Fc и СЗ рецепторов, что может указывать на их плазмоклеточное происхождение. Основная масса опухолей ОН-2, ОН-3, ОП-3 представлена sig позитивными клетками, 25-30$ которых обладают Fc и СЗ рецепторами. Все ig позитивные клетки /с рецепторами или без них/ обладают онкогенностью, что указывает на В-кле-точное происхождение опухолей, индуцированных Bac.megaterium Н. Необходимо отметить, что низкая плотность Fc и СЗ рецепторов в опухолях ОН-2, ОН-3, ОП-3 свидетельствует о том, что трансформация В-лимфоцитов произошла на стадии поздней антигеннезависимой диффе-ренцировки /126/. В связи с этим интересно отметить, что при хроническом лимфолейкозе, являющимся, как правило, В-лимфопролифера-тивным процессом /57/, очень часто обнаруживаются Fc и СЗ позитивные опухолевые клетки /126/, что может косвенно свидетельствовать об участии микроорганизмов в блокировке дифференцировочного процесса В-клеток.

Индуцированные В-лимфомы вызывают в сингенной системе иммунный ответ, выражающийся в появлении антител, реагирующих с клетками опухолей и спленоцитов. Абсорбция сывороток опухоленосителей сингенными и аллогенными спленоцитами показала, что эти антитела реагируют по меньшей мере с двумя различными антигенами, один из которых ассоциирован с мембраной опухолевых клеток. Так как антитела к этому антигену не нейтрализовались аллогенными спленоцитами, можно предположить, что иммунологическая несовместимость индуцированных опухолей с организмом, по-видимому, не обусловлена экспрессией в них трансплантационных антигенов иных гаплотипов Н-2. Однако учитывая высокую вариабельность экспрессии антигенов Н-2 в опухолях /166/, полученные нами данные не являются окончательными и нуждаются в дальнейшем уточнении.

Исследование в реакции агглютинации перекрестной серологической активности поверхностных антигенов клеток и протопластов Бас. megaterium Н с помощью поливалентных противоопухолевых и противо-органных сывороток, а также моноспецифических противоопухолевых и противоорганных сывороток показало, что на поверхности клеток Вас. megaterium н находится антиген, перекрестно реагирующий с опухо-леассоциированными мембранными антигенами индуцированных В-лимфом, а на поверхности протопластов - антигены, перекрестно реагирующие с органоспецифическими антигенами В-лимфоцитов и гепатоцитов мышей. Перекрестная абсорбция моноспецифических противоопухолевых сывороток клетками лимфом 0H-I, ОН-2, ОН-З показала, что эти антитела реагируют с двумя различными детерминантами, одна из которых специфична для каждой опухоли, а вторая является общей для индуцированных лимфом и перекрестно реагирует с детерминантой поверхностного антигена клеток Bac.megaterium Н.

Таким образом, несмотря на различия в иммунологическом фенотипе индуцированных лимфом, кросс-реактивная детерминанта их ОАА является общей. Возможно, это свидетельствует о том, что синтез этой детерминанты, а также органоспецифического антигена гепатоцитов в трансформированных В-лимфоцитах кодируется участком хромосомной или плазмидной ДНК Bac.megaterium Н интеграция которого в геном В-лимфоцитов произошла на различных стадиях их дифференци-ровки.

Необходимо отметить, что наличие на поверхности протопластов Bac.megaterium Н органоспецифических антигенов, к которым выражена толерантность /66/, может способствовать их длительной персис-тенции в организме и вызывать хроническое антигенное раздражение, ведущее к лимфопролиферативным реакциям иммунокомпетентых клеток

196/, активации в них эндогенных ретровирусов и малигнизации клеток иммунной системы /76/. Так, например, малигнизация лимфоидных клеток часто наблюдается при хроническом течении РТПХ, возникающей при персистенции родительских лимфоцитов у Fj гибридов /89/.

Наличие на поверхности клеток Bac.megaterium Н антигена,перекрестно реагирующего с ОАА индуцированных лимфом, подтвердилось при изучении его локализации методом непрямой иммунофлуоресценции. При этом мы окончательно установили, что перекрестные реакции поверхностного антигена Bac.megaterium Н обусловлены наличием в нем кросс-реактивной детерминанты, а не связаны с наличием белков, обладающих Fc-рецепторной активностью, обнаруженных у некоторых штаммов стафилококков /225/. В связи с тем, что перекрестная серологическая активность поверхностного антигена клеток Bac.megaterium н была обнаружена с помощью ксеногенных противоопухолевых сывороток, не исключалась возможность того, что перекрестно реагирующие антитела в них были направлены против дифференцировочных: антигенов индуцированных опухолей. Известно, что дифференцировоч-ные антигены лимфом относятся к ОАА и являются маркерами, определяющими происхождение опухоли /28/. Однако способность вызывать иммунный ответ в сингенной системе наиболее проявляется у другой группы ОАА - антигенов трансформации, наиболее изученных в вирус-ивдуцированных опухолях /2,152/.

Исходя из этого, мы исследовали перекрестную активность антигенов клеток и протопластов Bac.megaterium Н с помощью сывороток мышей, носителей лимфом ОН-2 и ОП-3. В этих сыворотках обнаруживались антитела, реагирующие с ОАА и антигенами не трансформированных лимфоцитов. Эти опыты показали, что сыворотки мышей с лимфома-ми ОН-2 и ОП-3 реагируют с поверхностными антигенами клеток и протопластов Bac.megaterium н. Способностью нейтрализовать антитела к поверхностным антигенам клеток Вас.megaterium н обладали только опухолевые клетки, причем перекрестная абсорбция ими сывороток опухоленосителей не вызывала полной нейтрализации антител, реагирующих с аутологичными опухолевыми клетками, а вызывала лишь нейтрализацию антител, реагирующих только с ПА клеток Вас. megaterium н. Следовательно, данные о перекрестной активности антигенов клеток Вас.megaterium Н, полученные с помощью сингенных антител против ОАА, подтвердили данные, полученные с помощью ксеногенных противоопухолевых антител, показавших, что поверхностный антиген Вас.megaterium Н перекрестно реагирует с одной детерминантой, общей для ОАА В-лимфом. Это позволяет утверздать, что перекрестная активность поверхностного антигена Вас.megaterium Н с клетками опухолей обусловлена его сходством с антигеном трансформации, обнаруживаемом в сингенной системе.

Определение ПРА во внутриклеточных компонентах Вас.megaterium Е показало, что ПРА обнаруживаются только в растворимой фракции цитоплазмы. В этом комплексе растворимых бактериальных антигенов обнаруживаются два ПРА. Один из них перекрестно реагирует с внутриклеточным ОАА лимфомы ОН-2, а второй - с внутриклеточным антигеном клеток спленоцитов. Возможно, что перекрестные реакции антигенов РФЦ обусловлены наличием в ней растворимых предшественников поверхностных ПРА.

Таким образом, изучение перекрестной антигенной активности корпускулярных и растворимых антигенов Вас.megaterium Н с помощью ксеногенных и сингенных противоопухолевых антител показало, что на поверхности клеток, протопластов и в РФЦ локализованы ПРА с различной антигенной специфичностью. Из всех обнаруженных ПРА способностью индуцировать специфические антитела к мембранным опу-холеассоциированным антигенам обладали только антигены клеточных стенок. Реакции этих антител с опухолевыми клетками не обусловлены связыванием антител Fc -рецепторами опухолевых клеток, а происходили за счет взаимодействия их с детерминантой ОАА, которые экс-прессировались у подавляющего большинства опухолевых клеток на всем протяжении развития опухоли. В связи с этим необходимо отметить, что способность ксеногенных сывороток против ПА. Bac.megaterium н реагировать с ОАА В-лимфом, открывает возможность использования сывороток против микробных ПРА для иммунологической идентификации опухолей, что согласуется с современными принципами иммунодиагностики опухолей /2/.

Полученные данные показали, что наибольший интерес представляет поверхностный антиген Bac.megaterium Н, перекрестно реагирующий с мембранными ОАА лимфом. Изучение его иммунохимических свойств показало, что он инактивируется протеазами, додецилсульфа-том На, но устойчив к действию ЭДТА и нагревания. Выделенный препаративным электрофорезом в агаре поверхностный ПРА при изоэлектрофокусировке располагался в зоне кислой рН /3,2/ и окрашивался кумасси-голубым и Шифф-реактивом, что свидетельствовало о его гли-копротеидной природе. Антигенная активность поверхностного ПРА опосредуется термолабильной, белковой и термостабильной, углеводной детерминантами. Обнаружение в составе поверхностного ПРА двух, различных по химической природе антигенных детерминант представляет несомненный интерес, так как свидетельствует о том, что антигенная активность мембранного ОАА индуцированных В-лимфом опосредуется тремя различными детерминантами, две из которых являются кросс-реактивными. Следует отметить, что трансформация клеток вирусами или химическими канцерогенами также вызывает экспрессию ОАА, имеющих общие и частные /уникальные для каждой опухоли/ антигенные детерминанты /150,152,159/.

Таким образом, изучение антигенных свойств поверхностного ПРА Bac.megaterium Н показало, что он проявляет высокую степень антигенного сходства с мембранными ОАА Б-лимфом, обусловленную наличием в нем двух сходных детерминант, возможно, являющихся продуктом функционирования участка бактериальной хромосомной или плазмидной ДНК, интегрированного в геноме В-лимфоцитов. Третья детерминанта ОАА В-лимфом, общая для этих опухолей, по-видимому, появляется в результате дерепрессии определенных участков клеточного генома.

Поверхностный ПРА Bac.megaterium Н обладает не только способностью реагировать с антителами против ОАА, но и способен индуцировать образование перекрестно реагирующих противоопухолевых ци-тотоксических антител и лимфоцитов, антигенреактивные центры которых обладают выраженной комплементарностью к ОАА В-лимфом. Особенно важно, что индуцированные поверхностные ПРА цитотоксические лимфоциты являются Т-киллерами - одними из основных клеток-эффекторов противоопухолевой защиты /217/. Способность к индукции перекрестно реагирующих цитотоксических антител и лимфоцитов коррелирует со способностью поверхностного ПРА индуцировать образование агглютинирующих антител и клеток-эффекторов РГЗТ к собственным антигенным детерминантам. Эта особенность поверхностного ПРА по некоторым причинам заслуживает особого внимания. Во-первых, обнаруженная нами корреляция между интенсивностью образования гомологичных антител и клеток-эффекторов РГЗТ с интенсивностью образования перекрестно реагирующих цитотоксических антител и Т-киллеров открывает возможность предварительной оценки функциональной активности специфического противоопухолевого иммунитета организма по активности антител и клеток-эффекторов РГЗТ, индуцированных ПА Bac.megaterium Н. Во-вторых, обнаруженная нами оппозитность в продукции перекрестно реагирующих цитотоксических антител и Т-киллеров затрагивает особенности генетического контроля иммуногенности микробных ПРА. Предполагается, что способность иммунной системы отвечать или не отвечать на микробный ПРА зависит от их антигенного сходства с антигенами тканей, к которым выражена толерантность /158/. В данном случае поверхностный антиген Bac.megaterium Н перекрестно реагирует сОАА, т.е. с антигеном, детерминанты которого не экспрессируются в норме. Возможно, это является причиной индукции поверхностным ПРА специфических противоопухолевых антител и лимфоцитов у высоко-отвечающих линий мышей / A/Sn /. Низкая продукция цитотоксических противоопухолевых Т-киллеров / Ва1Ъ/с / возможно связана со способностью ПА Bac.megaterium Н индуцировать образование супрес-сорных клеток, подавляющих развитие иммунного ответа к этому антигену. В связи с этим необходимо отметить, что детерминанты ОАА различных опухолей могут индуцировать образование не только кил-лерных клеток, но и клеток-супрессоров, подавляющих их развитие /215,216/. Возможно, что у слабоотвечающих линий мышей поверхностный ПРА индуцирует образование специфических клеток-супрессоров, подавляющих развитие иммунного ответа по Т-Т или Т-В типу /178, 214,235/. В пользу развития специфической супрессии, индуцированной поверхностным ПРА, свидетельствует отсутствие супрессии этим антигеном иммунного ответа к ЭБ. Возможность индукции микробными антигенами, перекрестно реагирующими с ОАА клеток-супрессоров, подавляющих развитие иммунного ответа к ОАА, является актуальным вопросом для современной онкоиммунологии, так как открывает возможности использования микробных ПРА подобного типа не только для оценки функционального состояния эффекторного звена противоопухолевого иммунитета, но и для оценки активности клеточных систем, подавляющих его активность.

Кроме генетических факторов, влияющих на иммуногенность поверхностного ПРА, было обнаружено также, что иммуногенность этого антигена значительно ослабляется при введении его в составе интактных клеток Bac.megaterium н. Снижение иммуногенности ряда протективных антигенов патогенных микроорганизмов при введении их в составе клеток - факт, известный в иммунологии /62/. Однако выявление подобного свойства у микроорганизма, ПА. которого перекрестно реагирует с ОАА В-лимром, индуцированных этим микроорганизмом, побудило нас более детально исследовать причины подавляемости иммунного ответа на этот бактериальный антиген. В связи с этим мы обратили особое внимание на изучение иммунодепрессивных свойств внутриклеточных компонентов Вас.megaterium Н, поскольку цитоплазма этого микроорганизма ускоряет развитие спонтанных опухолей /23/. Изучение иммунодепрессивной активности внутриклеточных компонентов по отношению к поверхностному ПРА при их совместном введении с ПРА показало, что таким свойством обладают рибосомы. По-видимому, подавление рибосомами иммунного ответа к поверхностному ПРА при их совместном введении не вызвано конкурентным влиянием антигенов рибосом, так как такие сложные антигенные комплексы, как цитоплаз-менные мембраны, волютиновые включения и РФЦ, не проявляют супрессивной активности. Кроме того, для проявления конкурирующего действия антигенов необходимо их введение перед референс-антигеном, что было установлено для различных тимус-зависимых антигенов. При совместном введении конкуренция антигенов не проявляется /31/.Можно предположить, что иммунодепрессивная активность рибосом вызвана контаминацией рибосом цитоплазменными растворимыми предшественниками поверхностных ПРА, специфически подавляющих развитие иммунного ответа, индуцированного ПРА клеточных стенок. Но поскольку иммунодепрессивная активность рибосом Вас.megaterium н проявляется и по отношению к иммунному ответу, индуцированному ЭБ,можно утверждать, что она является неспецифичной.

Исходя из вышеизложенного, мы полагаем, что в развитии имму-нодепрессии, вызываемой клетками Вас.megaterium Н, супрессивная активность рибосом является доминирующей, так как было обнаружено, что внутриклеточные волютиновые включения обладают выраженным иммуностимулирующим действием. Иммуномодулирующая активность их проявляется только по отношению к антителогенезу, индуцированному поверхностными ПРА и ЭБ. Изолированные волютиновые включения не стимулируют антителогенез, что позволяет оценить их антителостиму-лирующую активность как адъювантную. Волютиновые включения не влияют на активность клеток-эффекторов РГЗТ и Т-киллеров, индуцированных поверхностным ПРА, но в изолированном виде стимулируют ци-тотоксическую активность клеток-киллеров, не чувствительных к ан-ти-тьу 1,2 антителам и абсорбирующихся на монослое клеток-мишеней /индуцированных В-лим|юод/, что позволяет отнести эти клетки к популяции естественных клеток-киллеров /120,121/. Как известно, эта популяция цитотоксических лимфоцитов обладает цитолитической активностью по отношению к очень широкой панели опухолевых клеток /113,114/ и может активироваться различными микроорганизмами либо их антигенами /123-203/. Таким образом, характер иммуномодуляции, вызванной волютиновыми включениями, свидетельствует о том, что они стимулировали развитие лимфоцитов, обладающих различными функциями. Это может быть обусловлено комплексной химической природой во-лютиновых включений /250/.

Противоопухолевый иммунный ответ, индуцированный поверхностным ПРА Bac.megaterium н, задерживает приживляемо с ть и развитие опухолей, что свидетельствует о возможности применения микробных ПРА в специфической иммунопрофилактике и иммунотерапии опухолей. Необходимо отметить, что основным фактором, сдерживающим опухолевый рост, являются Т-киллеры, индуцированные поверхностным ПРА. Это четко проявляется у мышей линии Ва1Ъ/с, дефицитных по клеточному реагированию на этот антиген. Вместе с тем, нельзя отрицать и эффекторной роли других клеточных и гуморальных факторов противоопухолевого иммунитета, индуцированного ПА. у мышей /К-клеток, комплемент зависимых цитотоксических антител/.

Характер модулирующего влияния рибосом и. волютиновых включений на формирование противоопухолевой активности антител и лимфоцитов, вызванной поверхностным ПРА, полностью совпадал с характером их влияния на становление противоопухолевой резистентности,индуцированной этим антигеном. Здесь необходимо отметить, что рибосомы не только угнетали индуцированную ПА противоопухолевую резистентность, но и вызывали ускорение роста опухолей, трансплантированных животным, предварительно иммунизированным рибосомами. Это свойство рибосом вызвано индукцией ими Т-супрессоров и проявлялось по отношению к опухолям, перевиваемым на инбредных и беспородных мышах. Исходя из этого, мы полагаем, что рибосомы Bac.megaterium Н индуцируют образование неспецифических Т-супрессоров, подавляющих иммунный ответ, индуцированный не только антигенами опухолей, но и антигенами иного происхождения и специфичности /ЭБ, ПА Bac.megaterium Н/. Это очень важный факт, так как дает основание для утверждения о том, что возникающие при иммунизации клетками Вас. megaterium н Т-супрессоры также индуцируются рибосомами этого микроорганизма, играющими, по-видимому, важную роль в реализации он-когенных свойств Bac.megaterium н.

Кроме этого известно, что возникающие при антигенной стимуляции Т-супрессоры или супрессоры-макрофаги являются регуляторами иммунного ответа /7,69/. Действие их часто неспецифично /214,239/. Однако при иммунизации микроорганизмами, использующимися в качестве стимуляторов иммунных реакций, индукция подобных супрессоров может подавлять развитие противоопухолевых клеточных реакций. Возможно, что одной из причин угнетения противоопухолевых реакций и ускорения роста опухолей, часто наблюдающихся при коррекции иммунного статуса опухоленосителей микроорганизмами-модуляторами / BCG, Corynebacterium parvum /3,77,85,226,252/, может явиться стимуляция их рибосомами клеток-супрессоров, обладающих неспецифической активностью. Б пользу этого предположения свидетельствуют ранее полученные данные, показывающие, что клетки BCG, Coryaebacterium parvum стимулируют пролиферацию супрессоров макрофагального происхождения, подавляющих ответ, стимулированный аллоантигенами и Т-митогенами /142,149/.

Не менее важным фактом, обнаруженным нами, является иммуностимулирующая активность волютиновых включений Bac.megaterium Н, заключающаяся в способности их повышать активность естественных киллеров, цитолитических лимфоцитов, с широким спектром противоопухолевого действия /114,117,120/. Особенно важной является способность волютиновых включений активировать противоопухолевую активность естественных киллеров у мышей A/Sn и Balb/с, обладающих исходно низкой активностью этих клеток /121,213/. Механизмы активации волютиновыми включениями активности естественных киллеров нуждаются в дальнейшей конкретизации, особенно в плане изучения их активного начала, так как открывают возможность получения иммуностимулятора, активность которого проявляется у мышей с исходно низким уровнем естественных киллеров.