Автореферат и диссертация по медицине (14.00.14) на тему:Характеристика тканеспецифического антигена, ассоциированного с аденокарциномой легкого человека

Р Г Б ОА 2 2 МАЙ

На правах рукописи ГОРБАЧЕВ Антон Викторович

ХАРАКТЕРИСТИКА ТКАНЕСПЕЦИФИЧЕСКОГО АНТИГЕНА, АССОЦИИРОВАННОГО С АДЕНОКАРЦИНОМОЙ ЛЕГКОГО

ЧЕЛОВЕКА.

14.00.14 - онкология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

МОСКВА -1995

Работа выполнена на кафедре клеточной физиологии и иммунологии Биологического факультета Московского Государственного Университета имени М.В.Ломоносова

Научные руководители: доктор биологических наук, профессор Гусев М.В.

кандидат биологических наук Егорова С.Г. Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Барышников А.Ю. кандидат биологических наук Черноусова JI.H.

Ведущая организация: Московский научно-исследовательский онкологический институт им. П.А.Герцена МЗ РФ

Защита состоится u-umlX 1995 г. в /5" часов на заседании специализированного Совета К.001.17.01 при Онкологическом Научном Центре им. Н.Н.Блохина РАМН (115478, Москва, Каширское шоссе, 24).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Онкологического

Научного Центра РАМН

Автореферат разослан "Л" их<иЛ 199-fr.

Ученый секретарь специализированного Совета

доктор медицинских наук, профессор /Турусов B.C./

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы

Существующие ныне традиционные методы диагностики злокачественных заболеваний не обеспечивают своевременной и точной постановки диагноза, что является основной причиной высокой смертности онкологических больных. Наиболее перспективными для уточнения диагностики рака признаны иммунологические методы, основанные на выявлении опухолей с помощью моноклональных антител, распознающих на поверхности опухолевых клеток специфичные для них антигены.

Следует отметить, что в настоящее время не обнаружены антигены, строго специфичные для опухолей, так как они экспрессируются и внекоторых нормальных тканях (Абелев Г.И., 1962, Urban J.L., Schraiber Н„ 1992).

Однако, поиск антигенов, ассоциированных с процессами малигнизации тканей, является полезным как для клиники, так и для изучения молекулярной природы рака. За последнее десятилетие изучено значительное количество антигенов, ассоциированных с различными опухолями. Антитела, распознающие опухолевые маркеры применяются в ранней диагностике злокачественных заболеваний и иммунотерапии (Zangemeister-Wittke U., et al., 1994). С помощью тканеспецифических антигенов становится возможным уточнение гистологического происхождения опухоли, что является важным фактором прогноза в клинике.

Ранее С.Г.Егоровой были получены моноклональные антитела, специфически реагирующие с клетками аденокарциномы легкого человека (Егорова С.Г., 1988) линии AKJ1. По предварительным данным антиген, распознаваемый на клетках линии АКЛ и условно названный A2F4, был обнаружен и в некоторых опухолях человека (Пугачев К.К., Егорова С.Г., 1989). Поскольку перевивные клеточные линии в некоторой степени утрачивают специфику исходной ткани, представлялось интересным изучить более подробно экспрессию антигена, распознаваемого на АКЛ, в различных нормальных и опухолевых тканях.

Цель исследования

Целью данной работы являлась характеристика антигена, распознаваемого на клетках аденокарциномы легкого человека и оценка возможностей его применения в диагностике опухолей.

Задачи исследования

1) Изучить клеточную локализацию антигена.

2) Изучить распределение антигена в различных нормальных и опухолевых тканях.

3) Определить молекулярную массу антигена и его физико-химические характеристики.

4) Выяснить, содержится ли данный антиген в сывортках крови онкологических больных.

5) Сравнить изучаемый антиген с уже известными в литературе опухолевыми антигенными маркерами.

Научная новизна исследования

Иммунохимическими и иммуногистологическими методами изучена клеточная локализация, распределение в тканях и физико-химические свойства антигена, выявленного на клетках аденокарциномы легкого. Показано, что данный антиген является маркером железистого эпителия легкого, желудка и молочной железы и сохраняется при малигнизации молочной железы в 60% случаев, а в опухолях легкого и желудка - в 3033% случаев. При раке легкого антиген экспрессируется преимущественно железистыми опухолями (53% случаев) и не обнаруживается в других наиболее распространенных гистологических типах рака легкого (мелкоклеточном и плоскоклеточном). Антиген обнаружен также в метастазах первичных опухолей легкого и молочной железы. Полученные данные о физико-химических свойствах антигена и его распределении в тканях позволяют сделать вывод о том, что его специфическая детерминанта, распознаваемая нашими моноклональными антителами, является новой, не известной в литературе.

Теоретическая и практическая значимость работы

Полученные результаты позволяют предположить, что изученный антиген окажется полезным в решении проблем дифференцировочной диагностики различных форм рака легкого. Дальнейшее изучение распреде ределения этого антигена в опухолях молочной железы и желудочно-кишечного тракта, возможно, позволит использовать его в диагностике злокачественных заболеваний этих органов.

Апробация

По материалам диссертации опубликовано 5 работ. Диссертация апробирована на научном семинаре кафедры клеточной физиологии и

У

иммунологии Биологического факультета МГУ (16 ноября 1994 г.) и на научном семинаре лаборатории иммунохимии опухолей НИИ канцерогенеза ОНЦ РАМН (20 января 1995 г.). Материалы диссертации были доложены на 1 Съезде иммунологов России (23-25 июля 1992 г., Новосибирск, Россия) и Международном Европейском иммунологическом конгрессе (14-17 июня 1994 г., Барселона, Испания).

Структура и объем работы

Материалы диссертации, изложенные на 94 страницах машинописного текста, содержат 6 таблиц и 14 рисунков, состоят из разделов "Введение", "Обзор литературы", "Материалы и методы", "Результаты", "Обсуждение результатов", "Выводы" (в числе 5), "Список цитированной литературы" (содержит 104 источника).

СОДЕРЖАНИЕ ДИССЕРТАЦИИ Материалы и методы

Материалы

Иммуногистологические исследования проводились на срезах нормальных тканей и опухолей, фиксированных в забуференном формалине и заключенных в парафин. Срезы были любезно предоставлены сотрудниками МНИОИ им. П.А. Герцена К.К. Пугачевым и И.Д. Кохановой. Эмбриональные ткани плодов человека получали из гинекологических клиник. Клетки различных злокачественных опухолей, выделенные из операционного материала, были получены из лаборатории МНИОИ им. П.А.Герцена. Сыворотки крови онкологических больных получали из клинической больницы N40 г. Москвы.

В работе были использованы: перевивная клеточная линия аденокарциномы легкого человека (AKJ1), полученная из МНИОИ им. П.А.Герцена, линия меланомы кожи MEWO, предоставленная В.А. Матвеевой из ВОНЦ РАМН, лимфобластоидная линия DAUD1, а также клеточные линии рака гортани НЕР-2 и рака шейки матки HeLa, полученные из Института вирусологии им. Д.И.Ивановского.

Моноклональные антитела к клеткам АКЛ были предоставлены сотрудником кафедры клеточной физиологии и иммунологии Биологического факультета МГУ С.Г. Егоровой. Остальные испоьзованные в работе реактивы были получены от фирм "Sigma" (США), "Serva" (ФРГ). "Calbiochem" (США), "Toyo-Soda" (Япония) и "Reanal" (Венгрия).

4

Методы

Изучение клеточной локализации антигена.

Клеточную локализацию антигена A2F4 и его экспрессию на клетках различных линий изучали непрямым иммунофлуоресцентным методом (Coons А., 1971) с использованием конъюгата антител к иммуноглобулинам мыши с флуоресцеинизотиоцианатом.

Иммуногистохимическое изучение срезов нормальных тканей и опухолей человека.

Иммуногистологические исследования срезов проводились непрямым иммунопероксидазным методом (Heyderman Е., 1979). Срезы предварительно депарафинизировали последовательной обработкой ортоксилолом, абсолютным спиртом и 70%-ным этиловым спиртом.

Поиск антигена A2F4 в сыворотках крови онкологических больных.

Сыворотки крови больных раком молочной железы и раком желудка были исследованы методом точечного иммуноблоттинга (Михайлов А.Т., Симирский В.Н., 1991). Сыворотки наносили на нитроцеллюлозу в разведении 1:10, 1:100, 1:1000. В качестве отрицательного контроля использовали сыворотки здоровых доноров, в качестве положительного контроля - экстракт клеток АКЛ.

Экстракция антигена из клеток АКЛ и фетальных тканей человека.

Антиген A2F4 экстрагировали из клеток АКЛ методом солюбилизации в неионном детергенте Nonidet Р-40 (Fucui Sh„ et al, 1991).

Экстракты фетальных тканей готовили путем их гомогенизации в фосфатном буфере с последующим фильтрованием, центрифугированием гомогената и обработкой детергентом Nonidet Р-40 по методике Fucui Sh.. Полученный супернатант использовали для дальнейших исследований.

Определение молекулярной массы антигена.

Молекулярную массу антигена в нативных условиях определяли методом градиентного электрофореза и иммуноблоттинга (Hedrick J.L., et al, 1968; Towbin H., Gordon J„ 1979) и методом гель-фильтрации на сорбенте Toyopearl HW-65 (Fujita Т.. et al, 1980). Методом гель-фильтрации была достигнута частичная очистка антигена. Молекулярную массу очищенного антигена в денатурирующих условиях определяли электрофорезом по методу Лэммли (Laemmly U.K., 1971).

Изучение физико-химических свойств антигена.

Физико-химические свойства антигена и природу специфической детерминанты изучали методами ферментной деградации, термической обработки, обработки ионными детергентами и периодатом натрия. Антиген инкубировали с протеолитическими ферментами пепсином, трипсином и проназой Е в соотношении фермент:субстрат = 1:50, с нейраминидазой и гиалоуронидазой в соотношении 1:20 в течение 4 часов при температуре 37 °С. После инкубации антиген наносили на

нитроцеллюлозный фильтр и проверяли сохранение антигеном специфической активности проверяли методом точечного иммуноблоттинга (иммунодота) (Михайлов А.Т., Симирский В.Н., 1991).

Аналогичным образом проводили обработку антигена 1%-ным раствором периодата натрия и додецилсульфатом натрия в концентрации 0.1-1%. Антиген также подвергали нагреванию до 100 °С в течение 5-10 минут с последующей проверкой сохранения антигенной активности.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.

Клеточная локализация антигена А2Г4.

Методом непрямой иммунофлуоресцентной реакции было показано, что исследуемый антиген локализован преимущественно на мембране клеток и в небольшом количестве в цитоплазме.

Распределение антигена в нормальных тканях и опухолях.

Методом непрямой иммунопероксидазной реакции были исследованы 62 образца нормальных человеческих тканей и 173 случая различных злокачественных опухолей. Результаты, характеризующие распределение антигена А2И4 в различных нормальных тканях и опухолях представлены в таблице 1. Было показано, что исследуемый антиген экспрессируется в тканях нормального легкого, желудка и молочной железы. Антиген экспрессируется исключительно в клетках железистого эпителия, выстилающего трахеи, бронхи, бронхиальные железы легкого, ацинусы и протоки молочной железы, железы желудка во всех его отделах. Клеточная локализация антигена наблюдалась преимущественно на мембране апикальной части клеток и в незначительной степени в цитоплазме. В окружающих неэпителиальных тканях антиген отсутствовал. В нормальных тканях других органов (кишки, почки, матки, слюнных желез и др.) антиген не был обнаружен.

При нммуногистохимическом изучении опухолей антиген А2Р4 был обнаружен в 60% случаев рака молочной железы, 53% случаев аденокарциномы легкого и 30% случаев рака желудка. Кроме того, антиген был обнаружен в некоторых исследованных образцах рака шейки матки и толстой кишки (таблица 1). Более подробно было изучено распределение антигена в опухолях легкого различного гистогенеза. Было установлено, что антиген экспрессируется преимущественно в железистом (аденокарцинома) и железисто-плоскокяеточном (диморфном) раке легкого, в то время как в мелкоклеточном и плоскоклеточном типах антиген не обнаружен (таблица 2).

Таким образом, антиген А2И4 может бьггь охарактеризован как тканеспецифический маркер железистого эпителия легкого, желудка и молочной железы, сохраняющийся при его злокачественной трансформации. Большой интерес представляет обнаружение антигена в некоторых случаях рака толстой кишки, так как в нормальных тканях этого органа данный маркер не обнаружен, т.е. имеет место его эктопическая экспрессия. Заслуживает внимания и тот факт, что антиген сохраняет активность при стандартной фиксации тканевых срезов

Таблица I.

Распределение антигена А2Р4 в различных нормальных тканях и опухолях.

Нормальные ткани Опухоли

общее количество общее количество

. Органы количество положитель- количество положитель-

обследованных ных реакций обследованных ных реакций

Легкое 11 5 55 10* 16 10

Молочная 12 6 59 36

железа 21" 21

Желудок 8 5 15 5

Кишка 10 0 16 4

Матка 2 0 5 2

Другие органы*** 2-3 0 - -

Саркомы • - 5 0

Лимфомы - - 1 0

* Метастазы аденокаршшомы легкого в лимфоузлы ** Метастазы рака молочной железы в лимфоузлы

*** Другие органы: слюнная и щетовндаая железы, почка, яичник, печень, сосуды, мьшшы, сердце.

Таблица 2.

Распределение антигена А2Р4 в опухолях легкого различного гистологического типа

Количество Количество

Тип опухоли исследованных антигенпозитивных

больных опухолей

Аденокарцинома 25 13

Железисто-плоскоклеточный 2 2

рак

Плоскоклеточный рак 14 0

Мелкоклеточный рак 9 0

Крупноклеточный рак 2 0

Недифференцированный рак 1 0

Карционид 4 0

формалином и заключении их в парафин, т.е. может быть использован в иммуногистологических диагностических тестах.

При иммуногистохимическом изучении метастазов опухолей молочной железы и легкого было показано, что антиген сохраняется во всех случаях метастазирования первичных очагов опухолей, экспрессирующих этот маркер (таблица 1). Таким образом, изученный антиген может оказаться полезным в качестве маркера для уточняющей иммунодиагностики микрометастазов рака молочной железы и аденокарциномы легкого. Кроме того, антитела к антигену А2И4 дают хорошие результаты при комбинированном выявлении АКЛ совместно с антителами к РЭА (Пугачев К.К., и др., 1990). Следовательно, они могут быть использованы в шггодифференцировке различных форм рака легкого. Как известно, определение гистологического типа опухоли является важным прогностическим фактором в клинике (Франк Г.А., и др., 1992).

Изучение экспрессии антипена А2Б4 на клетках различных линий и клетках, выделенных из операционного материала.

Методом непрямой иммунофлуоресцентной реакции было показано, что антиген А2Р4 не экспрессируется на клетках крови (эритроцитах, лимфоцитах, нейтрофилах, гранулоцитах и гистиоцитах), а также на клетках лимфобластоидной линии ЭАи01 (таблица 3). Антиген не был обнаружен также на клетках опухолевых линий рака гортани НЕР-2, рака шейки матки НеЬа, меланомы кожи MEWO и РМ55. При изучении клеток опухолей легкого различного гистогенеза, выделенных из операционного материала, антиген был выявлен только на клетках высокодифференцированной аденокарциномы легкого (таблица 4). Полученные данные согласуются с результатами иммуногистохимического изучения распределения антигена в тканях и опухолях и свидетельствуют о том, что его экспрессия ограничена эпителиальными тканями.

Поиск антигена в сыворотках крови онкологических больных.

Поскольку антиген А2Р4 может оказаться полезным в иммунодиагностике опухолей, были проверены сыворотки крови пациентов онкологических клиник на содержание данного маркера для того чтобы оценить возможности его применения в ранней диагностике опухолей. Методом точечного иммуноблоггинга были исследованы сывортки 5 больных раком молочной железы и 3 больных раком желудка. Ни в одном из исследованных случаев антиген обнаружен не был.

Экстракция антигена из клеток АКЛ и фетальных тканей.

Проверка экстрактов клеток АКЛ и фетального легкого методом точечного иммуноблоттинга показала, что антиген А2И4 содержится в них и, следовательно, экстрагируется из клеток и тканей детергентом Ыотс1е1-Р40. Экстракты, содержащие антиген были использованы в дальнейших исследованиях.

Таблица 3.

Распределение антигена А2Р4 на поверхности клеток различных клеточных структур и клеточных суспензий.

Клетки Реакция

Первнчная линия рака гортани человека Нер-2 -

Первичная линия рака шейки матки человека НеЬа -

Меланома кожи (линия МЕ\УО) -

Клетки линии ОЛий! -

Фибробласты эмбрионов человека -

Эритроциты -

Лимфоциты -

Нейтрофилы -

Клетки плоского эпителия -

Гранулоциты и гистиоциты -

Таблица 4.

Распределение антигена А2Р4 на поверхности клеток рака легкого различного гистогенеза."

Диагноз Количество обследованных больных Количество положительных реакций

Парагаиглиома 1 0

Плоскоклеточный рак 11 0

Плоскоклеточный ороговевающий 3 0

Мелкоклеточнын 1 0

Высокодифференцированный карционид 4 0

Железисто-плоскоклеточный 2 0

Высокодифференцированная аденокаршшома 5 5

* С} спетого! клеток был» получены из операционного материала

Определение молекулярной массы антигена.

Методом электрофореза в градиенте ПААГ и иммуноблотгинга экстрактов клеток АКЛ и фетального легкого человека определяли молекулярную массу антигена в нативных условиях. В иммуноблотах была выявлена специфически окрашенная полоса, общая для экстрактов опухолевых клеток и фетального легкого и соответствующая молекулярной массе примерно 400 кДа. Кроме того, в иммуноблотах экстрактов фетального легкого наблюдалось специфическое окрашивание в области 330 кДа (рисунок 1).

Следует отметить, что метод градиентного электрофореза в неденатурирующих условиях не считается точным для белков с молекулярной массой более 200 кДа, поэтому для уточнения результатов, а также в целях получения очищенного антигена была проведена гель-хроматография экстракта фетального легкого. Была получена электрофоретически чистая хроматографическая фракция, содержащая антиген А2Р4 (рисунок 2). Молекулярная масса антигена, определенная по калибровочному графику составила 370 кДа (рисунок 3). В целях более подробной характеристики антигена был проведен электрофорез очищенной фракции в денатурирующих условиях по методу Лэммли и последующий иммуноблоттинг. При электрофорезе образцов в присутствии додецилсульфата натрия и меркаптоэтанола, восстанавливающего дисульфидные связи, была выявлена одна полоса в области 70 кДа. В иммуноблоте цельного экстракта АКЛ и очищенного антигена специфическая окраска наблюдалась в области 80 кДа (рисунок 4).

Полученные данные позволяют судить о сложном строении антигена А2Р4. В нативных условиях он, по-видимому, входит в состав высокомолекулярного комплекса массой около 400 кДа. состоящего' из нескольких белковых субъединиц. Субъединицы имеют массу 70 и 80 кДа, причем иммунологическую активность в денатурирующих условиях сохраняет субъединица массой 80 кДа. Отсутствие этой субъединицы в виде четко различимой полосы на электрофореграммах объясняется, по-видимому тем. что она является минорным компонентом комплекса и чувствительность метода окраски Кумасси недостаточно для идентификации этой субъеднницы.

Физико-химические свойства антигена.

Антиген А2Р4 является термолабильным, так как прогревание его при 90-100 °С в течение 5-10 минут полностью инактивирует специфические детерминанты. Инактивация антигена наблюдалась также при обработке его додецилсульфатом натрия в концентрации 0.5% и выше, а также протеолитическими ферментами проназой, пепсином и трипсином. В то же время, инкубация антигена с нейраминидазой. гиалуронидазой и периодатом натрия не оказывала существенного влияния на его активность. Эти данные позволяют сделать вывод о белковой природе

Электрофорез в градиенте паат и иммуноблотгинг экстрактов фетального легкого и клеток аленокарииномы легкого (в нативных условиях).

иммуноблоттинг и электрофорез экстрактов Фетального легкого

Электрофорез:

1-маркеры (ферритин-440 кДа, каталаза-240 кДа, амилаза -200 кДа, БСА - 66 кДа;

2- экстракт фетального легкого;

, 4- экстракт клеток аденокарциномы легкого

Иммуноблот

3 - экстракт фетального легкого; 5 - экстракт аденокарциномы легкого

Профиль элюиши экстракта фетального легкого

оптическая оптическая

1 -6- номера хроматографических пиков

— элюция белков с колонки (оптическая плотность измерена на спектрофотометре при дайне волны 280 им - 0280нм)

— антигенная активность (интенсивность иммуноферментной реакции, измерена при длине волны 492 нм - 0492нм)

Калибровочный график зависимости хроматографической подвижности белков от их молекулярной массы.

400 М\У(кДа)

фракция N1

амилаза(200 кДа)

БСА(66 кДа)

цитохром С(12.4 кДа)

1.0

2.0

3.0

4.0

5.0 У(еУУ(о)

У(е)/У(о) - отношение объема элюнрования белка к свободному объему колонки

Электрофорез и иммуноблоттинг антигена А2Р4 в ленатурируюших условиях.

8066 45

29

1 -г. .

*>-»} 1 1

\. .

йь!

Щ'

♦ ,<И' '

2 3 4 5

>400

•80

»66 •45

.29

1 - маркеры: трансферрин(80 кДа), л БСА(66 к Да), овальбумин(45 кДа) карбоангидраза(29 кДа) 2,3 - электрофорез очищенного антигена в системе Лэммли без мер-каптоэтанола(2) и с меркаптоэта-нолом(З)

4,5 - электрофорез хроматографиче-ской фракции N2

1 - иммуноблоттинг антигена в нативных условиях иммуноблоттинг после электрофореза в системе Лэммли:

2 - очищенный антиген без мер-каптоэтанола

3 - то же с меркаптоэтанолом

4 - экстракт АКЛ без меркап-тоэтанола

5 - то же с меркаптоэтанолом

специфической антигенной детерминанты и отсутствии в ее составе углеводных компонентов. Для ответа на вопрос входят ли углеводы в состав антигена и является ли он гликопротеином необходимы дополнительные исследования.

Сравнение изученного антигена с другими опухолеассоциированными антигенами.

Большинство описанных в литературе антигенных маркеров опухолей легкого, молочной железы и желудочно-кишечного тракта отличается от изученного антигена по своим физико-химическим характеристикам и распределению в опухолях и нормальных тканях. Наиболее существенным отличием антигена А2Р4 является его высокая тканевая и органная специфичность. По ряду физико-химических характеристик, таких как молекулярная масса, хроматографическая подвижность, склонность к агрегированию в растворах, изученный антиген имеет большое сходство с муцинами, которые также являются маркерами железистого эпителия (КепешапБ Р., 1992, Вага I., 1993). Это сложные молекулы, имеющие большое количество различных антигенных детерминант как белковой, так и углеводной природы. Весьма вероятно, что антиген А2Р4 также относится к классу муцинов, однако изученная нами специфическая детерминанта антигена не имеет аналогов в известных нам литературных источниках.

ВЫВОДЫ

1. Методами нммунофлуоресценции и иммуногистохимии изучена клеточная локализация антигена А2Р4 и его распределение в нормальных тканях и опухолях человека. Показано, что антиген локализован на мембране клеток, преимущественно в ее апикальной части и частично в цитоплазме.

2. В нормальных тканях антиген экспрессируется клетками железистого эпителия легкого, желудка и молочной железы и сохраняется в значительном проценте злокачественных опухолей этих органов. В неэпителиальных тканях антиген не обнаружен и, следовательно, является тканеспецифическим маркером железистого эпителия.

3. Антиген А2Р4 экспрессируется в более чем 50% случаев аденокарциномы легкого и сохраняется при ее метастазировашш в лимфоузлы, но не обнаружен в опухолях легкого других гистологическихтипов. Таким образом, изученный антиген является маркером аденокарциномы легкого и может быть использован во вспомогательной иммуногистологической диагностике для уточнения происхождения метастазов и выявлении первичного очага опухоли.

Антиген устойчив к стандартной обработке тканевых срезов парафином, что позволяет использовать его в иммунопатологических тестах.

4. Методами градиентного электрофореза, иммуноблоттиига и гель-фильтрации показано, что изученный антиген в нативных условиях входит в состав высокомолекулярного агрегата, масса которого составляет около 400 кДа. В денатурирующих условиях молекулярная масса антигена составляет 80 кДа.

5. Антиген инактивируется предварительной обработкой протеолитическими ферментами и не инактивируется обработкой нейраминидазой, гиалуронидазой и периодатом натрия. Таким образом, его специфическая детерминанта имеет белковую природу.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ.

1. С.Г.Егорова, И.Д.Коханова. К.К.Пугачев, А.В.Горбачев. Иммуногистохимическое изучение специфичности моноклональных антител к аденокарциноме легкого. //Тезисы, 1-й Съезд иммунологов России (23-25 июля, 1992), С.151.

2. С.Г.Егорова, А.В.Горбачев. Характеристика тканеспецифического антигена, ассоциированного с аденокарциномой легкого человека. //Вестник МГУ. 1993. вып.З, С. 51-53.

3. И.Д.Коханова, С.Г.Егорова, А.В.Горбачев. Прогностическое значение клеточной локализации антигена, ассоциированного с аденокарциномой легкого человека. //Факторы прогноза в онкологии, 1994, С.59-63.

4. А.В.Горбачев, С.Г.Егорова, А.В.Мягков. Биохимическое изучение антигена A2F4, ассоциированного с аденокарциномой легкого. //Биохимия, 1994, Т.59, N9, С. 1401-1406.

5. S.G.Egorova, A.V.Gorbachev, I.D.Kokchanova. Study of antigen associated with human lung adenocarcinoma.//Abstract at 12th European Imm. Meeting (Barcelona, 14-17 June), 1994, W.53/54, P.493.